Fase analtica. Interferencias analticas. Control de calidad interno y externo.

Shaila Rubio Arias FIR 2 Anlisis Clnicos

Establecimiento del proceso analtico

Cuando hablamos de proceso analtico nos referimos a procedimientos, instrucciones, materiales y equipamiento necesario para dar los resultados analticos. En este proceso hay dos partes:
Procedimientos de medida Procedimientos de control

 En general, para cualquier magnitud biolgica que queramos establecer en el laboratorio hay que determinar las necesidades mdicas y seleccionar un test que nos de informacin. Si existe un test de rutina, debemos evaluarlo y asegurar que su rendimiento analtico es adecuado y as poder proporcionar resultados tiles. Debemos participar en programas externos e internos de controles de calidad. Actualizar nuestro conocimiento.

Cost-Effective Quality Control: Managing the Quality and Productivity of Analytical Processes. James O. Westgard

Conocer la necesidad mdica

Reevaluar las necesidades

Seleccionar y evaluar los tests diagnsticos Redisear proceso Establecer los requisitos de calidad analtica Seleccionar y evaluar el procedimiento de medicin Redisear proceso

NO

NO
Resultados

Modificar proceso

Estimacin de los errores Satisfaccin de los usuarios

SI NO
Determinacin de errores de medicin

NO SI
Resultados control Implementar el proceso de anlisis Ejecutar el proceso analtico de rutina Ejecucin Analtica es correcta?

Seleccionar procedimiento de control

SI

 Tipos de procesos analticos

Proceso por lotes
Ej.: mtodos manuales, analizadores de un canal.

Procesos simultneos de lotes

Ej.: analizadores multicanal

Procesos de acceso aleatorio.

Ej.: analizadores automticos

 La calidad del proceso analtico puede ser descrito por su tasa de errores y la proporcin de resultados que son errores clnicamente importantes. La productividad del proceso analtico puede ser descrito por el rendimiento de la prueba, la proporcin de las mediciones y los resultados correctos.

Validacin de mtodos
Recomendaciones de la AACC/TDM:
Precisin Exactitud Linealidad Sensibilidad Interferencias Comparacin de mtodos

C. E. Pippenger, Dave Berry. TDM Roundtable Recommendations: Generic TDM Assay Validation Guidance http://www.aacc.org/resourcecenters/leadership/DivisAdmin/TDM/Documents/Final_Generic.pdf

 Exactitud: Acuerdo entre el estimado de una cantidad y su verdadero valor. Una cantidad conocida de frmaco puro es aadida y se valora el porcentaje de recuperacin. Precisin(1): Grado de concordancia entre los resultados obtenidos al aplicar el proceso experimental repetidas veces, bajo las condiciones establecidas. Deben evaluarse al menos tres concentraciones que abarquen el rango de ensayo.
(1) NCCLS EP05-A

 Interferencia: Es el efecto que produce un componente en la exactitud de la medicin del analito. Los efectos de los interferentes potenciales deben ser estudiados y observar si afecta al rendimiento del anlisis. Comparacin de mtodos: Si no es posible compararlo con el mtodo de referencia, realizarlo con el mtodo disponible en nuestro laboratorio.

INTERFERENCIAS ANALTICAS
Definicin: Es el error sistemtico producido por una sustancia distinta de la que se pretende medir en un procedimiento analtico. La cuanta de la interferencia depende de la concentracin de la sustancia interferente y del mtodo utilizado. Los usuarios slo deberan realizar estudios de interferencias en aquellos casos en que introdujeran modificaciones apreciables en un procedimiento de medida, o cuando se considerase que la informacin del fabricante sea insuficiente.

 Posibles fuentes de interferencias:

Anticoagulantes y conservantes Componentes endgenos:
Bilirrubina: Falsos positivos de acetaminofeno con hiperbilirrubinemia.(1) Fibrina: Genera resultados incorrectos al precipitar en muestras que han estado refrigeradas mucho tiempo o han sufrido ciclos de congelacindescongelacin.

(1) False-Positive Acetaminophen Results in a Hyperbilirubinemic Patient Clinical Chemistry 49:4 695698 (2003)

 Determinaciones interferidas por frmacos:

Ginseng contiene componentes que tienen una estructura muy similar a la digoxina.(1) Antiepilpticos deben evaluarse con sus metabolitos.

(1) Ashwagandha and Digoxin AssayDasgupta et al. Arch Pathol Lab Med Vol 131, August 2007

 Reacciones cruzadas con anticuerpos:

Paraproteina IgM: Su presencia nos puede dar resultados falsamente bajos en la determinacin de acetaminofeno.(1) Anticuerpos heterfilos: Su presencia nos puede dar resultados falsamente altos en la determinacin de digoxina.(2)

(1) An IgM Paraprotein Causing a Falsely Low Result in an Enzymatic Assay for Acetaminophen. Clinical Chemistry 45, No. 1, 1999 (2) Therapeutic Drug Monitoring of Digoxin. Toxicol Rev 2006;25 (4); 273-281

CONTROL INTERNO
Definicin Tcnicas de CC para resultados cuantitativos Grficos de Levey-Jennings Reglas Westgard Six sigma

 Definicin:
El C.C interno asegura la precisin y la reproducibilidad de los resultados del laboratorio. Los C.C. son sensibles a errores aleatorios y sistemticos.
Error aleatorio: la incapacidad de obtener el mismo resultado cuando se analizan muestras idnticas.

 Error sistemtico: Da una desviacin de los resultados con respecto al valor verdadero.

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 Tcnicas de CC para resultados cuantitativos

Se debe establecer la media y la diferencia fija a partir:
de la media de los objetivos. como un mltiplo de la desviacin estndar de los resultados del material de control a lo largo del tiempo.

Tpicamente se utilizan 20 resultados de control en al menos 5 procesos diferentes para establecer la desviacin estndar. El valor de DE se usa para establecer los lmites de control fijos ( 3 DE a partir de la media del objetivo).

 Los resultados se representan en un histograma de frecuencias, se puede ver que la distribucin se asemeja a una distribucin gaussiana o normal.

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 Grficos de Levey-Jennings
Exponen datos del C.C. en el tiempo. En el eje de abscisas est el tiempo y en ordenadas las concentraciones de C.C (se centra en la media del objetivo con los lmites de control superior e inferior marcados para una mejor visualizacin). Nos permite ver los resultados durante semanas o meses. Nos identifica tendencias.

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 Mtodo CUSUM
Es el mtodo de la suma acumulativa. Se calcula la diferencia que aparece entre los resultados de CC y las medias. Los valores fluctuarn sobre cero o aumentarn lentamente a lo largo del tiempo. La magnitud de la fluctuacin es pequea. Sirve para identificar sesgos con mucha claridad. Pero no sirve en mtodos poco precisos porque mostrar grandes fluctuaciones.

 Reglas mltiples: Westgard:

Westgard vio que al usar los lmites simples de control superior e inferior careca de poder para identificar problemas analticos. Para poder mantener una tasa aceptable en la deteccin de errores los lmites de control deben ser estrechos y debe haber una frecuencia alta de anlisis. Utilizando reglas mltiples se puede incrementar las tasas de deteccin del error sin aumentar la tasa de rechazo falso.

 Nomenclatura:
Ab: A puede ser el nmero de resultados de control que se necesitan para poner en prctica la regla o bien un rango. b es el smbolo que describen la estadstica que se aplica a los resultados de control. Multirreglas de Westgard son:
12S (resultado superior a 2 DE a partir de la media) 13S (resultado superior a 3 DE a partir de la media)

 22S (2 ltimos resultados de control son mayores de 2DE) R4S (la diferencia entre resultados control sucesivos es 4 DE) 41S (ltimos 4 resultados control sucesivos superan x + 1DE o son menores de x 1DE) 10X (los ltimos resultados control sucesivos estn en el mismo lado que la media)

 Se aplican de forma secuencial. Pueden modificarse aadiendo o quitando reglas, cambiando los lmites que actan en una regla o cambiando el nmero de resultados control comprobados mediante las reglas. Cada modificacin altera la tasa de deteccin del error y la tasa de rechazo falso.

 Algoritmos de Westgard

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 Six sigma
El criterio SIX SIGMA puede ser considerado como el nivel de excelencia que deben alcanzar los laboratorios con un alto grado de automatizacin que incluya informtica y robtica. SIX SIGMA: Tiene el nivel ms elevado de exactitud equivalente a un nivel de seguridad de 99.9997% y representa un total de 3.4 errores por milln de unidades.

CONTROL EXTERNOS
Definicin Programas de evaluacin externa de la calidad
Controles establecidos por Sociedades Cientficas AEBM-AEFA SEQC Bio-Rad laboratories UK NEQAS

 Definicin: Es el procedimiento en el que

se utilizan los resultados de varios laboratorios que analizan los mismos especimenes. Un organizador compara los resultados obtenidos mediante diferentes mtodos para verificar si hay homogeneidad entre ellos.

 Son de frecuencia variable. Nos dan la medida de la trazabilidad horizontal. Permite comparar mtodos analticos para tomar decisiones. Verifican la imprecisin y la inexactitud de cada laboratorio y del conjunto de laboratorios, acreditando la calidad de los participantes.
Inexactitud se cuantifica como el porcentaje de desviacin con respecto al valor diana.

Programa de evaluacin externa de la calidad de bioqumica (suero) de la Sociedad Espaola de Bioqumica Clnica y Patologa Molecular.
Los laboratorios que desean participar deben inscribirse indicando su metodologa e instrumentacin para distribuirlos en grupos de laboratorios que operen en condiciones ms afines. La totalidad de los resultados mensuales se procesan al final del ao y se hace por medio de grfica de LeveyJenning. Se hace tambin un desglose semestral.

 Mensualmente:
Se analizan los viales que contienen un homogeneizado de suero humano o animal. Se envan los resultados y se introducen en el sistema informtico. Se convierten a unidades del Sistema Internacional. Con todos los datos se calcula el valor consenso y la desviacin estndar general.
Eliminando los valores situados fuera de 3 DE.

Luego se calculan por mtodos y por grupos.

 Se hace un calculo del grado de inexactitud para cada constituyente y cada laboratorio. Se expresa en % y en nmero de desviaciones estndar respecto de la media de su mtodo. (mnimo de 10 participantes)

MUCHAS GRACIAS