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INTEGRANTES DEL EQUIPO: Nez Espinoza Vctor Hugo Snchez Hernndez Alejandro Monsalvo Ziga Omar
GRUPO: 6 B
Una ventaja principal de la inmovilizacin de enzimas es que puede ser reusado ya que puede ser fcilmente separada de la solucin y ser fcilmente retenida en un reactor de flujo continuo. La utilizacin de enzimas inmovilizadas o no depender de una evaluacin econmica de las alternativas, donde se considerarn datos de cintica y estabilidad, costo, propiedades fisicoqumicas, eficiencia de inmovilizacin y carga del soporte. Las propiedades de las enzimas inmovilizadas estn gobernadas por las interacciones de las propiedades de la enzima y el material del soporte. Las enzimas normalmente se inmovilizan a travs de algn tipo de interaccin entre sus residuos aminoacdicos y el soporte. Esto puede producir prdidas considerables de actividad, al comprometer los aminocidos en l, o vecinos del, sitio activo. La inmovilizacin de enzimas tiene sus pros y contras PROS CONTRAS
Alta estabilidad y resistencia al esfuerzo Existencia de la resistencia a la cortante y a la contaminacin Fcil de desarrollar procesos continuos transferencia de masa Necesidad del proceso de inmovilizacin Rpidas tasas de reaccin Costos adicionales de reactivos para la inmovilizacin Fcil separacin de los productos Perdida de actividad durante la etapa de inmovilizacin Uso repetitivo del catalizador
Los mtodos ms comunes de inmovilizacin de enzimas: Heterogenizacin de enzimas solubles a travs del acoplamiento de un soporte
insoluble mediante: adsorcin o enlace covalente, por entrecruzamiento de la enzima o por atrapamiento en un enrejado o en micro cpsulas. Las tcnicas de inmovilizacin de enzimas se clasifican bsicamente en dos mtodos: el fsico y el qumico, el fsico es la formacin de un enlace covalente dependiente y el qumico es la formacin de un enlace no covalente de enlace dependiente.
La seleccin de los mtodos de inmovilizacin debern estar basados en los requerimientos tcnicos especficos y en el marco global de su aplicacin comercial. Mtodos de Inmovilizacin Mtodos de enlace a soportes Enlace covalente Adsorcin fsica Fuerzas electrostticas
Entrecruzamiento Atrapamiento
Entre los mtodos qumicos est el enlace covalente que est clasificado como los que se unen a soportes, el cual, es el ms adecuado para usar en las enzimas, la formacin de estos enlaces se da entre una enzima y un soporte de los que puede haber gran variedad para este tipo de mtodo como: naturales y/o sintticos. Los enlaces covalentes solo afectan a grupos funcionales del enzima que no intervengan en el proceso cataltico. Las etapas por las que se lleva a cabo por medio de las siguientes etapas: Activacin del soporte (creacin de grupos funcionales adecuados para su unin con los del enzima): activacin por bromuro deciangeno, carbodiimida, complejos de diazonio seguida de recubrimiento superficial con grupos funcionales orgnicos adecuados. En este mtodo se puede presentar perdida de actividad debida a la participacin del centro activo del enzima en el enlace covalente o por algunos impedimentos estricos. Mediante la formacin de un enlace covalente se han inmovilizado enzimas sobre vidrio de poro controlado, colorantes, enzimas, anticuerpos e incluso bacterias y algas. Es importante tener en cuenta que los grupos funcionales del reactivo responsables de la reaccin analtica no deben estar involucrados en la reaccin de inmovilizacin. La inmovilizacin covalente puede modificar drsticamente las caractersticas fsicas y qumicas del reactivo, por ello es necesario caracterizar el reactivo inmovilizado.
Otro mtodo qumico es el entrecruzamiento con reactivos multifuncionales que se define como, Formacin de enlaces covalentes entre las molculas de enzima, por medio de reactivos bi- o multifuncionales, formando agregados entrecruzados tridimensionales. Y su metodologa se da por medio de Adicin de una cantidad apropiada de agente entrecruzante a una solucin de enzima bajo condiciones que den un aumento en la formacin de enlaces covalentes mltiples. Los reactivos multifuncionales adems pueden ser usados para introducir grupos funcionales en polmeros insolubles en agua, que luego reaccionan covalentemente con enzimas solubles al agua. Puede usarse en combinacin con la adsorcin para prevenir prdida de catalizador. Y tiene la posibilidad de uso simultneo de varios enzimas. Tambin se pueden presentar inconvenientes como problemas difusionales que limiten el rendimiento, Prdida de enzima durante la preparacin. Problemas difusionales debidos a la membrana, Posible inactivacin de enzimas, sometidos a fuerzas de cizalla elevadas. En cuanto a los mtodos fsicos tenemos la: Adsorcin: en el que los biocatalizadores enlazan a los soportes por interacciones fsicas tales como interacciones hidrofbicas, fuerzas de van der Waals. Frecuentemente se usan soportes inorgnicos. Actualmente, estn disponibles varios materiales naturales que tienen fuertes capacidades de adsorcin. Es el mtodo ms sencillo para inmovilizar a las enzimas. Las enzimas pueden ser adsorbidos fsicamente en un adsorbente de superficie activa ponindose en contacto con una solucin acuosa de la enzima con un adsorbente. Los adsorbentes empleados comnmente son: alumina, carbonato de calcio, carbono, resinas de intercambio catinico, arcillas, celulosas, colgeno, coloide de litio, metal acondicionado, placas de vidrio, tierra de diatomeas e hidrixiapatita. Las ventajas tcnicas de la adsorcin son: El procedimiento de inmovilizacin es simple.
Sin embargo, tambin tienen sus desventajas. La fuerza de unin es dbil. El estado de inmovilizacin es muy sensible al pH de la solucin, fuerza inica y la temperatura. La cantidad de enzimas cargado en una cantidad unitaria de apoyo es por lo general baja. El mtodo se basa en la adorcin fsica de las molculas de enzima en la superficie de una matriz slida, poniendo en contacto una solucin acuosa de enzima con el soporte.
El mtodo de atrapamiento inmovilizacin est basado en la localizacin de una enzima dentro de un enrejado de una matriz polimrica o membrana de tal forma que previene la liberacin de protena mientras permite la penetracin de substrato. Las enzimas pueden ser atrapados dentro de reticulado polmeros mediante la formacin de una red altamente reticulado de polmero en la presencia de una
enzima. Este mtodo tiene una gran ventaja en el hecho de que no hay modificacin qumica de la enzima, por lo tanto, las propiedades intrnsecas de una enzima no se alteran. Sin embargo, la enzima puede desactivarse durante la formacin de gel. El polmero reticulado ms comnmente empleado es el sistema de gel de poliacrilamida. Esto ha sido utilizado para inmovilizar la alcohol deshidrogenasa, glucosa oxidasa, aminocido oxidasa, glucosa isomerasa, la ureasa, y muchas otras enzimas. La enzima no se enlaza de ninguna forma a la matriz del gel o a la membrana. Mayoritariamente para clulas. Poco usado para enzimas (baja retencin). Inclusin del enzima en una matriz tridimensional, quedando atrapado. La matriz se forma en presencia del enzima. Se debe permitir la difusin de substrato/productos. Uso de polmeros sintticos o geles de origen natural.
Otro mtodo es la Microencapsulacin en el que las enzimas pueden ser inmovilizadas dentro de microcpsulas membrana semipermeable. Esto se puede hacer por la tcnica de polimerizacin interfacial. El disolvente orgnico que contiene un componente de co-polmero con un tensioactivo se agita en un recipiente y se introduce solucin de enzima acuosa. La membrana de polmero se forma en la interfase lquido-lquido mientras que la fase acuosa se dispersa en forma de pequeas gotas. Un ejemplo de este proceso es el sistema de poliamida
de nylon, en el que 1, 6-diaminohexano es la diamme soluble en agua y cloruro de 1,10-decanoil es el di-cido orgnico soluble en haluro. Procedimiento: - Formacin de emulsin en disolucin acuosa (lquido orgnico[monmero] + enzima). - Polimerizacin de la emulsin.
i.
ii.
- Proteccin frente a proteasas: iii. Unin de proteasas a soporte elimina capacidad proteoltica
- Evita la agregacin intermolecular: iv. Molculas de enzima retenidas en una determinada regin del espacio.
- Alteracin del micro-entorno: v. vi. vii. Disminucin concentracin oxgeno disuelto por incremento fuerza inica Efecto tamponador del soporte Hidrofilia del soporte
2.- Efectos estricos: una parte de las molculas de enzima estn inmovilizadas en una posicin en relacin con la superficie del soporte tal que el centro activo est poco accesible al sustrato. Conducen a la prdida parcial de la actividad cataltica.
Efectos conformacionales y estricos que afectan a la molcula de enzima Efectos micro-ambientales de particin y difusin
Modificaciones ms importantes Diferencia de pH en la proximidad de la enzima inmovilizada Alteraciones en la afinidad por el sustrato
Coeficiente de particin P= Cs/Cb Cs = concentracin en la superficie del polmero Cb = concentracin en la solucin Fenmenos de particin Prediccin de la concentracin de protones en la superficie pH
[H+]s = concentracin de protones en la superficie de la matriz [H+]b = concentracin de protones en la solucin e = carga electrnica = potencial electrnico k = constante de Boltzmann T = temperatura absoluta pH = 0,43 e / kT Fenmenos de particin Alteraciones en la afinidad por sustrato provocan cambios en la Km de la enzima inmovilizada 1. Tamao del sustrato y de los poros del soporte 2. Naturaleza hidrofbica o hidroflica del sustrato y del soporte: sustratos hidroflicos son atrados por el soporte hidroflico provocando un aumento en la concentracin local de sustrato. 3. Distribucin de cargas del sustrato y del soporte de sustratos con (+) son atrados hacia soportes con (carga -) y como consecuencia tenemos un aumento en la concentracin local del sustrato Km decrece Km enzima inmovilizado= Km/P P: Coeficiente de particin (P= Cs/Cb) Cs = Concentracin en la superficie del polmero Cb = Concentracin en la solucin
Donde:
Vd= Velocidad de Difusin De= Coeficiente de Difusin S= Superficie de Difusin S= [s] exterior-[s]interior r= Distancia de Difusin
Para una reaccin enzimtica que sigue la cintica de Michaelis-Menten el factor de efectividad es:
Se observa la inmovilizacin del complejo F1 sobre la bola. La estreptavidina protena que acopla la actina marcada con fluorescencia a la subunidad .
BIBLIOGRAFIAS Immobilization of Enzymes and Cells 2nd Edition, Jose M Guisan, Humana Press
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Fundamentals of Biochemical Engineering, Rajiv Dutta, Ane Books India- Springer https://www.google.com.mx/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=2&cad=rj a&ved=0CDQQFjAB&url=http%3A%2F%2Fiqtma.cps.unizar.es%2Findex.php%3F
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