Universidad de Costa Rica Laboratorio de Fundamentos de Qumica Inorgnica

Kristel Prada Lpez A84932

INFORME # 2 EXTRACCION DE CLOROFILA

Introduccin La clorofila es un pigmento que se encuentra presente en las plantas. Este pigmento les proporciona a las plantas su caracterstico color verde. La clorofila absorbe la luz necesaria para la fotosntesis, proceso fundamental para fabricar materia orgnica. Este compuesto absorbe principalmente luz violeta roja y azul y refleja luz verde. La abundancia de clorofila en hojas y su ocasional presencia en otros tejidos vegetales como los tallos, es la causa de que esas partes de las plantas aparezcan verdes. (Vjar, 2005) Los pigmentos vegetales, pueden dividirse en dos grandes grupos, en base a su solubilidad: a) Solubles en agua: antocianinas y antoxantinas, que se encuentran en el jugo vacuolar. b) Solubles en solventes orgnicos: clorofilas "a" y "b" y carotenoides (rojo, naranja y amarillo), que se encuentran en las granas y tilacoides de los cloroplastos. Son los responsables de la captacin de la energa luminosa en el proceso de la fotosntesis. (Vjar, 2005) Las clorofilas poseen unas estructura porfirnica, formada por cuatro anillos pirrlicos con un tomo de magnesio en su centro, un anillo de ciclopentanona y un ster de fitol unido a uno de los anillos de pirrol que provee a la molcula de una cola lipfila. (McMurry, J;2008)

Figura 1.Estructura Molecular de la Clorofila

Para la obtencin de clorofila, se puede usar el mtodo de extraccin, el cual es el mtodo ms comn y antiguo de separar un producto orgnico de una mezcla de reaccin o un

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producto natural de una planta. El resultado de separacin, idealmente, es la del soluto de inters disuelto en la fase orgnica y una disolucin no deseable. Puede definirse como la separacin de un componente de una mezcla por medio de un disolvente. En la prctica es muy utilizada para separar compuestos orgnicos de las soluciones o suspensiones acuosas en las que se encuentran. El procedimiento consiste en agitarlas con un disolvente orgnico inmiscible con el agua y dejar separar ambas capas. Los distintos solutos presentes se distribuyen entre las fases no deseada (la mayora de veces acuosa) y orgnica, de acuerdo con sus solubilidades relativas. Otro mtodo a utilizar es la cromatografa, la cual es una tcnica que permite la separacin de los componentes de una mezcla debido a la influencia de dos efectos contrapuestos. a) Retencin. Efecto producido sobre los componentes de la mezcla por una fase estacionaria, que puede ser un slido o un lquido anclado a un soporte slido. b) Desplazamiento. Efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por una fase mvil, que puede ser un lquido o un gas. El fenmeno de migracin de los componentes de una mezcla a lo largo de la fase estacionaria, impulsados por la fase mvil, recibe el nombre de elucin. La mezcla a separar se deposita sobre la fase estacionara, mientras que la mvil atraviesa el sistema desplazando a los componentes de la mezcla a distinta velocidad, dependiendo de la magnitud de sus interacciones relativas con ambas fases. Las dos fases se eligen de forma que los componentes de la muestra se distribuyan de modo distinto entre la fase mvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase mvil; por el contrario los componentes que se unen dbilmente a la fase estacionaria, se muevencon rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente. (McMurry, J; 2008) En esta prctica se implement tcnicas de separacin como la extraccin (con un embudo separador) y la cromatografa; para la obtencin de la clorofila tipo a de la espinaca Parte experimental Se sigui el procedimiento tomado del Manual de laboratorio Fundamentos de Qumica Inorgnica I semestre 2013. Observaciones Cuando se utiliz el bao mara, para concentrar el filtrado, este se dificult y no se pudo llevar a 5 mL por tiempo, y por la probabilidad de destruir el compuesto.

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Para controlar aun mejor la temperatura del bao mara, se utiliz un termmetro. En donde la temperatura marcada no coincidi con la que marcaba la plantilla. La fase orgnica o la de inters (la clorofila) se encuentra en la parte de abajo del embudo separador. En la cromatografa, no se observ lo esperado. Pues la clorofila no corri lo suficiente. Por lo cual al final del laboratorio todava se quedaron en la disolucin reveladora para observar si se presentaba algn cambio. Sin embargo la asistente no nos lo inform.

Resultados y Discusin En el laboratorio se extrajo clorofila de las espinacas el cual est presente en los cloroplastos. Sin embargo, en los cloroplastos realmente lo que hay es una mezcla de pigmentos representados principalmente por dos tipos de clorofila (clorofila a y clorofila b), por caroteno y por xantofila. Por lo que se utiliza la extraccin como mtodo de separacin de compuestos. (J. Azcn-Bieto, M. Taln, 2000) La clorofila consta de 4 anillos de pirrol unidos por medio de puentes de metilo lo que constituye una porfina. El anillo IV esta esterificado con un alcohol , el fitol, que representa una cadena de 20 tomos de carbono con un doble enlace, esta cola de fitol le da a la clorofila pura una naturaleza cerosa que explica la insolubilidad del pigmento en agua y su buena solubilidad en solventes orgnicos . Al respecto, la clorofila presenta un comportamiento doble, ya que la cola de fitol es insoluble en agua, hidrfoba y el ncleo de la porfiriana tiene carcter hidrfilo, es decir es afn al agua. (J. Azcn-Bieto, M. Taln,
2000)

La Clorofilas y carotenoides se encuentran en estrecha asociacin entre s y con protenas y lpidos de las membranas en los grana de los cloroplastos. Los pigmentos fotosintticos pueden extraerse de los tejidos gracias a su solubilidad en disolventes orgnicos como ter y benceno. (J. Azcn-Bieto, M. Taln, 2000) En el laboratorio se utiliz varias tcnicas para que la extraccin del compuesto, a la medida de lo posible, fuera completa. Por ejemplo, que la espinaca se cortar en pedazos pequeos, y en mi caso, se tritur con un polica. Adems, en vez de utilizar disolventes orgnicos como el ter o benceno, que son no polares; se utiliz el metanol que adems de disolver estos pigmentos, es soluble en agua, y esto es de suma importancia porque en la espinaca fresca todava en sus tejidos vegetales contienen agua. Una dificulta que se encontr en el laboratorio fue que luego de filtrar en caliente, no se logr del todo concentrar el producto a 5mL. (Ya sea por daos en el equipo, o un mal

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filtrado). Lo cual pudo a ver afectado los resultados del laboratorio, y no observar el corrimiento esperado en la cromatografa. Una vez que se concentr la disolucin (lo posible) se extrajo el pigmento con tres porciones de 15mL de ter de petrleo. Por qu se utiliz ter de petrleo? La clorofila se asocia con lpidos y protenas hidrofobicas de las membranas fotosintticas, la clorofila son compuestos insolubles en agua pero solubles en compuestos orgnicos tales como acetona, ter de petrleo, alcohol, cloroformo, etc. Estas sustancias extraen cualquier compuesto soluble en ellas como: resinas, ceras, pigmentos (como la clorofila), hormonas liposolubles, vitaminas liposolubles y otros lipidos, etc. Cuando las pruebas con ter de petrleo o cetona se le realizan a plantas fibrosas, casi todo lo extrado es clorofila. (McMurry, J; 2008) El problema con la cetona es que este compuesto es soluble en agua, y por tanto, si se usar cetona, existe la posibilidad que el producto extrado contenga otros compuestos no deseados. Dado la solubilidad del soluto en ambos disolvente, es muy comn encontrar que la capa no deseable contenga algn material orgnico disuelto. Por esta razn, la capa se extrae dos veces ms con disolvente fresco para aumentar el porcentaje de materia extrado. La clorofila, es soluble en ter de petrleo y acetona, por lo que se esperaba un corrimiento ascendente en la cromatografa. El cual, no fue tan claro, por lo que una causa pudo haber sido que la preparacin de la disolucin reveladora no se realizara correctamente. Por otro lado, si el concentrado tuviera otras sustancias que no fueran eliminadas en el bao mara, filtrado o extraccin. Lo ms posible es que estas sustancias presentaran un grado diferente de solubilidad y polarilidad lo cual se hubiera observado en la separacin, ya que las ms solubles se desplazarn a mayor velocidad, pues acompaarn fcilmente al disolvente a medida que ste va ascendiendo. Al no observar esto en cromatografa, se confirma que nicamente se tena un compuesto en el extracto. Para realizar la cromatografa se extrajo parte del extracto con un capilar, se coloc una gota del extracto en la parte inferior de la placa a 1 cm del borde inferior, se dej que se secar, para que no se difunda la gota. Luego se coloc la placa en el beacker y se tap con papel adhesivo para no perder la saturacin de la misma. Al ser los pigmentos cloroflicos insolubles en el solvente universal, no se puede usar el agua como solvente. Pero si son solubles en solventes orgnicos como por ejemplo el metanol y la cetona. A estos solventes que extraen simultneamente todos los pigmentos de la hoja se les suele llamar extractores. Existen otros solventes que presentan afinidad por

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algunos pigmentos y se les llama separadores, como por ejemplo el tetracloruro de carbono y el ter de petrleo (J. Azcn-Bieto, M. Taln, 2000) En el prrafo anterior se justifica, el porqu para la separacin de los compuestos en el embudo separador se utiliz ter de petrleo. Y para la cromatografa una dilucin reveladora de ter de petrleo- acetona. Y el por qu de la relacin 9:1.

Bibliografa J. Azcn-Bieto, M. Taln. Fundamentos de Fisiologa Vegetal. Madrid: McGrawHill/Interamericana. Edicions Universitat de Barcelona. 2000 McMurry, J. Qumica Orgnica. Sptima Edicin. Cenfage Learning Editores S.A. Mxico D.F. 2008. Vjar, E. Prcticas de Bioqumica Descriptiva. Universidad de Sonora. Editorial Unison. Mxico.2005 Universidad de Costa Rica. Manual del Laboratorio de Fundamentos de Qumica Inorgnica. San Pedro, Costa Rica. 2013.