DESNATURALIZACION DE PROTEINAS LABORATORIO DE BIOQUIMICA UNIVERSIDAD DEL QUINDIO ARMENIA- QUINDIO 2013 Autores: Pea, C. Gmez, S.

Carmona, J & Guapacha, S. RESUMEN En la prctica de laboratorio se realiz una desnaturalizacin de protenas como la ovoalbmina, albumina srica y casena; a estas se les realizaron un aserie de procedimientos como Reaccin de los aminocidos azufrados, reaccin de biuret, identificacin de aminocidos aromticos, Reaccin xantoproteica, adems de la desnaturalizacin de las protenas por factores fisicoqumicos; como resultados obtuvimos que las protenas fueron desnaturalizadas por factores qumicos en el procedimiento A, el color amarrillo indicaba la presencia de protenas en todos los casos este color fue tenue lo cual nos indica la casi total ausencia de protenas en las soluciones estudiadas; en el procedimiento B, en este paso se obtuvo como resultado la presencia de aminocidos aromticos en las soluciones; en el C el color violeta se debe a la presencia de enlaces peptdicos; y en el punto D se encontraron que en la casina no se encuentran enlaces sulfurados ya que es un aminocido con gran cantidad de fosforo. PALABRAS CLAVES: temperatura, aminocidos. INTRODUCCIN Muchas molculas proteicas slo retienen su actividad biolgica dentro de una fluctuacin muy limitada de temperatura y de pH, a temperaturas elevadas que consiste en el despegamiento de la estructura nativa, caracterstica de cada cadena polipeptdica de las molculas. La consecuencia ms significativa de la desnaturalizacin es que las protenas pierden su actividad enzimtica y un cambio conocido como desnaturalizacin, el efecto ms visible consiste en un descenso de la solubilidad, pues los grupos hidrofbicos ubicados en el interior de la molcula quedan expuesto al solvente acuoso puesto que en los enlaces qumicos covalentes del esqueleto peptdico de las protenas no se rompe pH, enlaces peptdicos, desnaturalizacin,

durante este tratamiento relativamente suave, se ha llegado a la conclusin que la estructura primaria permanece intacta. La mayor parte de las protenas globulares experimentan el proceso de desnaturalizacin cuando se calienta arriba de 60 y 70 C. (Marquez 1999).

DIAGRAMA DE FLUJO Serie 1

DESNATURALIZACIN DE PROTENAS

Tubo 1

Tubo 2

Tubo 3

2 mL de leche

2 mL de leche y 2 mL de agua destilada

2 mL de albumina srica

Agregar 5 gotas de cido actico y calentar

Observar la reaccin y tomar apuntes

Serie 2 REACCIN XANTOPROTEICA

Tubo 1

Tubo 2

Tubo 3

2 mL de leche
0.7 mL de cido ntrico concentrado y calentar

2 mL de leche y 2 mL de agua destilada

2 mL de albumina srica
0.7 mL de cido ntrico concentrado y calentar Enfriar

0.7 mL de cido ntrico concentrado y calentar Enfriar Enfriar

2 mL de leche + cido ntrico

2 mL de leche y 2 mL de agua destilada + acido ntrico

2 mL de albumina srica + cido ntrico

10 gotas de NaOH al 40 %

10 gotas de NaOH al 40 %

10 gotas de NaOH al 40 %

2 mL de leche+ cido ntrico + NAOH al 40 %

2 mL de leche y 2 mL de agua destilada + cido ntrico + NAOH al 40 %

2 mL de albumina srica+ cido ntrico + NAOH al 40 %

La presencia de aminocidos aromticos forma un precipitado de color naranja

Serie 3 REACCIN DE BIURET

Tubo 1

Tubo 2

Tubo 3

2 mL de leche

2 mL de leche y 2 mL de agua destilada

1.5 mL de NaOH al 20 %

2 mL de albumina srica
1.5 mL de NaOH al 20 %

1.5 mL de NaOH al 20 %

2 mL de leche + NaOH al 20%

2 mL de leche y 2 mL de agua destilada + NaOH al 20%

5 gotas de CuSO4 al 1%

2 mL de albumina srica + NaOH al 20%

5 gotas de CuSO4 al 1%

5 gotas de CuSO4 al 1%

2 mL de leche + NaOH al 20% + CuSO4 al 1%

2 mL de leche y 2 mL de agua destilada leche + NaOH al 20% + CuSO4 al 1%

2 mL de albumina srica + NaOH al 20% + CuSO4 al 1%

La reaccin positiva desarrolla una coloracin violeta

Serie 4 REACCIN DE LOS AMINOCIDOS AZUFRADOS

Tubo 1

Tubo 2

Tubo 3

2 mL de leche

2 mL de leche y 2 mL de agua destilada

1.5 mL de NaOH al 20 %

2 mL de albumina srica
1.5 mL de NaOH al 20 %

1.5 mL de NaOH al 20 %

2 mL de leche + NaOH al 20%

10 gotas de Pb(CH3COO)2 al 5%

2 mL de leche y 2 mL de agua destilada + NaOH al 20%

10 gotas de Pb(CH3COO)2 al 5%

2 mL de albumina srica + NaOH al 20%

10 gotas de Pb(CH3COO)2 al 5%

2 mL de leche + NaOH al 20% + Pb(CH3COO)2 al 5%

2 mL de leche y 2 mL de agua destilada + NaOH al 20% + Pb(CH3COO)2 al 5%

2 mL de albumina srica + NaOH al 20% + Pb(CH3COO)2 al 5%

Calentar

Si forma un precipitado color negruzco, determina la presencia de protenas que tienen en su composicin aminocidos con azufre

RESULTADOS Cuadro 1: Serie 1. Desnaturalizacin de las protenas (CH3COOH) Contenido del tubo de ensayo Tubo 1:Leche (2mL) Tubo 2: Huevo (2 mL) + agua destilada (2 mL) Tubo 3: Albumina srica (2 mL) Contenido del tubo de ensayo + 5 gotas de cido actico Se obtuvo un precipitado de color amarillo claro Se obtuvo una coloracin de amarillo muy claro Se obtuvo una coloracin de amarillo cristalino

Cuadro 2: Serie 2. Reaccin xantoproteica Contenido del tubo de ensayo Contenido del tubo de ensayo +0.7 mL de cido ntrico + 10 gotas de NaOH al 40 % Se obtuvo poca cantidad de precipitado de color anaranjado Se obtuvo gran cantidad de precipitado de color anaranjado Se obtuvo poca cantidad de precipitado de color anaranjado

Tubo 1: Leche (2mL) Tubo 2: Huevo (2 mL) + agua destilada (2 mL) Tubo 3: Albumina srica (2 mL)

Cuadro 3: Serie 3. Reaccin de biuret Contenido del tubo de ensayo Tubo 1:Leche (2mL) Tubo 2: Huevo (2 mL) + agua destilada (2 mL) Tubo 3: Albumina srica (2mL) Contenido del tubo de ensayo + 1.5 ml de NaOH al 20 % +5 gotas de CuSO4al 1% Se obtuvo un color violeta claro Se obtuvo un color violeta muy oscuro Se obtuvo un color violeta muy oscuro

Cuadro 4: Serie 4.Reaccin de los aminocidos azufrados Contenido del tubo de ensayo Contenido del tubo de ensayo + 1.5 ml de NaOH al 20 % + 10 gotas de Pb(CH3COO)2 al 5% Se obtuvo poca presencia de un color negruzco Se obtuvo la presencia muy alta de un color negruzco Se obtuvo la presencia de un color negruzco

Tubo 1:Leche (2mL) Tubo 2: Huevo (2 mL) + agua destilada (2 mL) Tubo 3: Albumina srica (2mL)

DISCUSIN Segn Sevilla (2012) Las protenas globulares se desordenan con facilidad en un entorno ligeramente alterado (pH, T y salinidad) a esto se le denomina desnaturalizacin. Proceso que consiste en el desenrrollamiento de la estructura terciaria a su estructura primaria; ejemplos de estas protenas son las albuminas y la cistena. En los resultados de la practica se encontr que en la serie A (ver cuadro 1) al aadir acido actico concentrado se altera el pH del medio, el cual se torna cido, provocando un rompimiento entre los enlaces peptidicos de la protena, siendo esta una desnaturalizacin por factor qumico; que para Bohinski(1991) El rompimiento fsico es el uso de reactivos qum icos que actan de modo preferencial sobre determinados grupos R, de tal modo que tambin ocurre el rompimiento del enlace peptdico en esa posicin Posterior a esto se realiza una desnaturalizacin por factor fsico, aumentando la temperatura del medio. En la serie A (ver cuadro 1), la ovoalbumina presento una desnaturalizacin cuando fue sometida a cambios fsicos como la temperatura (100 C), para Villa 2012 la temperatura de desnaturalizacin de la ovoalbumina es de 78C perdiendo por ende su estructura plegada de albumina En la serie B (ver cuadro 2), se obtuvo en los tubos 1 y 30 poca cantidad de aminocidos aromticos, y en el tubo 2 una cantidad alta de aminocidos aromticos. Para Rivera (2005) la reaccin es debida a la nitracin del anillo bencnico con el cido ntrico concentrado, para dar productos de color amarillo, que se tornan al aadir anaranjados al aadir lcali, debido a la formacin de sales, entonces se dedujo que en el momento que se le aadi a las muestras 1, 2 y 3 se torn de color amarillo despus de calentar y cuando se aade NaOH al 40 % se obtuvo una coloracin anaranjado mayor para el tubo 3 en comparacin con los tubos 1y 3, esto se debe a la alta presencia de aminocidos aromticos en el tubo 2, y esta coloracin se da por la formacin de sales como ya lo dijo el autor citado anteriormente. Para la serie C (Cuadro 3), El color violeta se debe a un complejo que resulta al unirse el cobre con los tomos de nitrgeno de los enlaces peptidicos (Mancilla y Col 2009); en los resultados que se obtuvieron, los tubos 2 y 3 presentan una alta concentracin de protenas; pero la leche presente poca concentracin de protenas, segn Sevilla (2012) La leche est compuesta aproximadamente del 80 % total de casena, lo cual nos indica la poca presencia de muchas protenas. Para la serie D (Cuadro 4), en los tubos 2 y 3 se obtuvo la presencia de aminocidos azufrados, en la leche la presencia de aminocidos azufrados fue baja, segn Sevilla (2012) La casena es una protena fosforada que entra dentro de la definicin de globulinas y es soluble; adems la casena se divide por distintas fracciones, que se diferencias en peso molecular y la cantidad de grupos fosfatos que llevan unidos que pueden ser de 1 a 9; entonces del resultado que se obtuvo del tubo 1 se deduce que la poca presencia de aminocidos azufrados es debido a que la casena presenta ms grupos fosfatos que aminocidos con puentes disulfuro.

BIBLIOGRAFA 1. ALVAREZ, H. 2008. caracterizacin de la interaccin de la albmina srica humana con el cido acetil saliclico. Argentina. Consultado en: http://www.iflysib.unlp.edu.ar/drupal/sites/default/files/Trabajo%20de%20Diploma%20%20H%20Ariel%20Alvarez.pdf 2. BOHINSKI, R. 1991. Bioqumica. 5a Edi. Iberoamericana S.A. Estados Unidos de Amrica. Pag 129 3. MARUQEZ, M. Desnaturalizacin de protenas inducida por temperatura y desestabilizantes qumicos.1999. Consultado en: http://148.206.53.231/1361A781-6080-45F7-838F75C8ABF95612/FinalDownload/DownloadId8C08FCD5F7DC81CADE0F9EB27F87093F/1361A781-6080-45F7-838F75C8ABF95612/UAM5750.PDF. Pag 12 4. MANCILLA, C. G. E.; BLANCO, E. Z.; PREZ, S. L. J.; ROSAS, T. M. y CASTREJN, C. R. Propiedades qumicas y fsico qumicas de las protenas. 2009. Consultado en: http://es.scribd.com/doc/15958125/1-PROPIEDADESQUIMICAS-Y-FISICOQUIMICAS-DE-LAS-PROTEINAS. Pag 15 5. RIVERA, E. 2005.Practicas de bioqumica descriptivas. Mxico. Consultado en : http://books.google.com.co/books?id=xv8LNjwigGQC&pg=PA168&lpg=PA168&dq=reaccio n+xantoproteica+acido+nitrico&source=bl&ots=1kigNY3x1&sig=hdBunrhdkeQxxx7JyhJsXZ0MN40&hl=es&sa=X&ei=hGx4UZuGPig4AOu0oDgDg&ved=0CDcQ6AEwAg#v=onepage&q=reaccion%20xantoproteica%20ac ido%20nitrico&f=false 6. SEVILLA, J. M. Ampliacin de tecnologa de los alimentos. 2012. Departamento de ingeniera qumica. Consultado en: http://www.itescham.com/Syllabus/Doctos/r637.PDF Pg. 3-6.

Anexos 1. Cul es la parte de la clula en donde se sintetizan los aminocidos que forman las protenas? La parte donde se sintetizan las protenas a partir de aminocido es en el citosol 2. Menciona las principales funciones de las protenas para la clula y los organismos vivos? Estructural Hormonal Transportadora

Enzimtica Defensa Reserva

3. Por qu se utiliza la albmina como modelo para las determinaciones en esta prctica? Se utiliza ya que tiene una funcin que es transporte ya que su fuerte carga neta negativa, le provee la capacidad de transportar agua, calcio, sodio, cobre, y tambin sustancias no solubles en agua; como cidos biliares, AG, bilirrubina, fenoles, aminocidos aromticos y sus derivados.(lvarez 2008 )