Tinciones usadas en microbiologa Los mordientes, aunque no son colorantes, tienen gran importancia en algunas tcnicas de tincin.

Los mordientes intensifican la tincin porque aumentan la afinidad de la clula por el colorante. Tambin se pueden utilizar para producir un engrosamiento de ciertas estructuras celulares externas, como los flagelos, que debido a su delgadez no podran ser visualizados de otra forma.

Existen tres tipos de tcnicas de tincin: simples, diferenciales y especficas: Tinciones simples: En las tinciones simples se usa un nico colorante, que siempre es de tipo bsico. Se utilizan solamente para incrementar el contraste; todas las clulas absorbern el colorante y quedarn teidas del mismo color. Por tanto, la tincin simple mejora la observacin de la clula completa. Se fija el espcimen, se aade el colorante y se deja el tiempo adecuado para que se absorba, se retira el exceso de colorante y la preparacin ya est lista para ser observada. Si se utiliza un mordiente, hay que aadirlo justo antes del colorante. Tinciones diferenciales: Las tinciones diferenciales se utilizan para distinguir entre tipos de microorganismos. La tcnica de tincin diferencial consta de dos etapas: una tincin primaria (siguiendo el mismo mtodo que en una tincin simple) seguida de una tincin de contraste. En la tincin de contraste se utiliza otro colorante que tie (y por tanto, revela) las clulas no teidas por el primer colorante. Estas tinciones son muy utilizadas en microbiologa. Por ejemplo, la tincin de Gram y la tincin de cido-alcohol resistencia, ambas aplicadas a bacterias.

La tincin de Gram La tcnica de la tincin de Gram fue desarrollada por el bacterilogo dans Christian Gram en 1884. Esta tincin clasifica las bacterias en dos grupos: Gram positivas y Gram negativas La tcnica incluye tincin primaria, decoloracin y tincin de contraste: 1. Se tie el espcimen con el primer colorante, cristal violeta, que tie de violeta. 2. Se aade el mordiente, yodo. 3. Se aplica el agente decolorante, normalmente una solucin de acetona o etanol. En este momento, las bacterias Gram negativas pierden su tincin violeta, pero las Gram positivas retienen el colorante. 4. Como colorante de contraste se aade safranina, que tie de rosa las bacterias Gram negativas, previamente decoloradas; mientras que a las bacterias Gram positivas les proporciona un color violeta ms intenso. Una tincin cido-alcohol resistente se realiza segn los siguientes pasos: 1. Tincin primaria con fucsina bsica, que tie todas las clulas de rojo. 2. Calentamiento suave de la preparacin para facilitar la penetracin del colorante en el interior de la clula. 3. Decoloracin con una solucin de cido clorhdrico en etanol. Este decolorante elimina la fucsina de todas las clulas excepto de las micro bacterias, que la retienen debido a su superficie crea. 4. Coloracin de contraste con azul de metileno. Se tien de azul todas las clulas previamente decoloradas, lo que facilita la diferenciacin entre las clulas deMycobacterum, an teidas de rojo, v las clulas restantes del espcimen. Tinciones especficas Mientras las tnciones diferenciales permiten distinguir entre distintos tipos de microorganismos, las tinciones

especficas incrementan el contraste en las clulas microbianas y revelan estructuras particulares, entre las que se incluyen las en dos poras, los flagelos y las cpsulas.

Tinciones usadas en microbiologa

El uso de las tinciones en microbiologa se debe a que la mayora de organismos que estudiamos son tan pequeos que no los podemos observar a simple vista: protozoos, algas, hongos, bacterias, y virus. As pues se facilita observarlas al tratarlas con colorantes o tintes, hay diferentes tipos de tinciones: Tincin Simple: utiliza un solo colorante.

Tincin de Gram: Utiliza varios colorantes (cristal violeta 1m, Yodo 1m, lavado con alcohol, Safranina 30 seg)

Tincin cido Resistente: Una vez teidos, conservan su colorresistiendo al lavado con cido mineral reducido. En esta tincin las bacterias cido resistentes conservan el colorante

primario color rosa o rojo, los dems microorganismos son decolorados por el cido y toman el color azul.

Tincin de Giensa: El colorante se aplica a un frotis de sangre y se utiliza cuando se sospeche de protozoos en lasangre para observar materias ncleos de la clulas.

Tincin de Esporas: Se usa verde de malaquita en contraste con safranina.

Tincin de Cpsula: Colorante nigrosuna, aqu se observa microorganismos encapsulados creando resistencias.

Tincin de Flagelos: Se usa mordiente el cual aumenta el tamao del microorganismo.

Existe varios tipos de tinciones de las cuales estudiamos: Tincin de Gram Tincin simple Tincin de esporas Tincin de Gram: Dividida en gram positivo y gram negativo, en el caso de los gram (+) la muestra fue sarcina, puesto que una tonalidad violeta fijada en su estructura determina la presencia de la misma puesto que fij en su estructura el cristal violeta. Y en el gran (-) utilizamos salmonella identificada por la presencia de muchas estructura un poco triangulares de color rojo. En la muestra de la prctica anterior 3 eran gran positivo por su coloracin morada. Tincin Simple: Estudia levaduras, en este experimento se usa un solo colorante que fue azul de metileno, donde observamos que las levaduras tenan cocos. Estas clulas bacterianas

difieren desde el punto devista qumico de su medio exterior y por eso se tien contrastando con su alrededor. Tincin de Esporas: La bacteria es una estructura muy pequea, sin embargo, por medio de esta tincin pudimos observar la estructura interna de la clula bacteriana, particularmente las endosporas, en este experimento se utiliza una tincin simple debido a que la misma permite que se coloree toda la clula excepto la espora que se observa de un tamao bien aceptable.