CINETICA ENZIMATICA INHIBIDORES SUICIDAS

VII Programa de Titulacin Profesional Extraordinaria - URP 2011 Dr. Emilio Guija Poma

ENZIMAS
Las enzimas son protenas que tienen la propiedad

de acelerar la velocidad de las reacciones qumicas sin modificar la constante de equilibrio del sistema. La estructura tridimensional de las enzimas les confiere una de las propiedades ms importantes: su elevada especificidad.

ENZIMAS: Importancia
Sus niveles en muestras biolgicas se requieren para diagnosticar algunas enfermedades. El conocimiento de su estructura es imprescindible para el diseo de nuevos medicamentos, pesticidas, etc. Permite una apropiada comprensin de los procesos bioqumicos a nivel celular. Posibilita la descripcin de diversas patologas a nivel molecular.

ENZIMAS: Caractersticas
Son invariablemente de naturaleza proteica. No modifican el cambio de energa libre de la

reaccin. Catalizan las reacciones sin modificar la Keq. No se consumen ni se producen durante la reaccin. Son altamente especficas. Son activas en un estrecho rango de pH y temperatura.

ENZIMAS
HOLOENZIMA
COFACTOR APOENZIMA

IONES METALICOS

COENZIMA

GRUPO PROSTETICO
Dr. Emilio Guija Poma

COSUSTRATO

Dr. Emilio Guija Poma

Dr. Emilio Guija Poma

Dr. Emilio Guija Poma

COENZIMAS
Coenzimas: ATP CoA FAD PAL GTP NAD+ CoQ Acido lipoico UTP NADP+ FMN Biotina

Dr. Emilio Guija Poma

COENZIMAS
Varias vitaminas del complejo b ejercen su accin biolgica transformndose en coenzimas: Clorhidrato de tiamina Pirofosfato de tiamina Riboflavina FAD, FMN Niacina NAD, NADP Vitamina B6 PAL

Dr. Emilio Guija Poma

TIAMINA

Dr. Emilio Guija Poma

RIBOFLAVINA

Dr. Emilio Guija Poma

NIACINA

Dr. Emilio Guija Poma

Dr. Emilio Guija Poma

ENZIMAS
Sitio activo:
Lugar que le permite a la enzima ligarse al sustrato. Su conformacin es complementaria o se torna complementaria al sustrato. Solamente cuando el sustrato se liga a este sitio es transformado en producto. Tiene una disposicin tridimensional cuyos grupos R de los aminocidos interactan con el sustrato.
Dr. Emilio Guija Poma

ENZIMAS
Especificidad enzimtica: Es la principal caracterstica de las enzimas. Est determinada por: a.- Grupos funcionales de la enzima. b.- Grupos funcionales del sustrato. c.- Cofactores para las enzimas que lo requieran. d.- Proximidad fsica de estos grupos funcionales.
Dr. Emilio Guija Poma

Dr. Emilio Guija Poma

ENZIMAS
Especificidad enzimtica:
Permite que se conciba un metabolismo ordenado. Presenta diversos grados. a.- Un gran nmero de enzimas son altamente especficas (enteroquinasa, glucoquinasa). b.- Otras, son especficas para un sustrato pero inespecficas para el otro (alcohol deshidrogenasa). c.- Tambin hay enzimas que actan sobre una amplia variedad de sustratos (fosfatasa alcalina). d.- Las enzimas no solamente son qumicamente especficas, sino tambin estereospecficas.
Dr. Emilio Guija Poma

Mecanismo de actuacin enzimtica:

1) Se forma un complejo: enzimasubstrato o substratos.

2) Se une la coenzima a este complejo. 3) Los restos de los aminocidos que configuran el centro activo catalizan el proceso. Para ello debilitan los enlaces necesarios para que la reaccin qumica se lleve a cabo a baja temperatura y no se necesite una elevada energa de activacin. 4) Los productos de la reaccin se separan del centro activo y la enzima se recupera intacta para nuevas catlisis. 5) Las coenzimas colaboran en el proceso; bien aportando energa (ATP), electrones (NADH/NADPH) o en otras funciones relacionadas con la catlisis enzimtica

E + A

[EA

EPQ]

EQ + P

E + Q

Sustrato [A]

Enzima [E] Enzima inactiva Sitio activo

Mecanismo de actuacin enzimtica:

1) Se forma un complejo: enzimasubstrato o substratos.

2) Se une la coenzima a este complejo. 3) Los restos de los aminocidos que configuran el centro activo catalizan el proceso. Para ello debilitan los enlaces necesarios para que la reaccin qumica se lleve a cabo a baja temperatura y no se necesite una elevada energa de activacin. 4) Los productos de la reaccin se separan del centro activo y la enzima se recupera intacta para nuevas catlisis. 5) Las coenzimas colaboran en el proceso; bien aportando energa (ATP), electrones (NADH/NADPH) o en otras funciones relacionadas con la catlisis enzimtica

E + A

[EA

EPQ]

EQ + P

E + Q

Complejo Enzima-sustrato [EA]

Enzima [E] Enzima inactiva Sitio activo

Mecanismo de actuacin enzimtica:

1) Se forma un complejo: enzimasubstrato o substratos.

2) Se une la coenzima a este complejo. 3) Los restos de los aminocidos que configuran el centro activo catalizan el proceso. Para ello debilitan los enlaces necesarios para que la reaccin qumica se lleve a cabo a baja temperatura y no se necesite una elevada energa de activacin. 4) Los productos de la reaccin se separan del centro activo y la enzima se recupera intacta para nuevas catlisis. 5) Las coenzimas colaboran en el proceso; bien aportando energa (ATP), electrones (NADH/NADPH) o en otras funciones relacionadas con la catlisis enzimtica

E + A

[EA

EPQ]

EQ + P

E + Q

Complejo [EPQ]

Enzima [E] Enzima inactiva Sitio activo

Mecanismo de actuacin enzimtica:

1) Se forma un complejo: enzimasubstrato o substratos.

2) Se une la coenzima a este complejo. 3) Los restos de los aminocidos que configuran el centro activo catalizan el proceso. Para ello debilitan los enlaces necesarios para que la reaccin qumica se lleve a cabo a baja temperatura y no se necesite una elevada energa de activacin. 4) Los productos de la reaccin se separan del sitio activo y la enzima se recupera intacta para nuevas catlisis. 5) Las coenzimas colaboran en el proceso; bien aportando energa (ATP), electrones (NADH/NADPH) o en otras funciones relacionadas con la catlisis enzimtica

E + A

[EA

EPQ]

EQ + P

E + Q

Complejo [EQ]

Enzima [E] Enzima inactiva Sitio activo

Producto

[P]

Mecanismo de actuacin enzimtica:

1) Se forma un complejo: enzimasubstrato o substratos.

2) Se une la coenzima a este complejo. 3) Los restos de los aminocidos que configuran el sitio activo catalizan el proceso. Para ello debilitan los enlaces necesarios para que la reaccin qumica se lleve a cabo a baja temperatura y no se necesite una elevada energa de activacin. 4) Los productos de la reaccin se separan del sitio activo y la enzima se recupera intacta para nuevas catlisis. 5) Las coenzimas colaboran en el proceso; bien aportando energa (ATP), electrones (NADH/NADPH) o en otras funciones relacionadas con la catlisis enzimtica

E + A

[EA

EPQ]

EQ + P

E + Q

Enzima [E] Enzima inactiva Sitio activo

Producto [P]

Producto [Q]

Mecanismo de actuacin enzimtica:

1) Se forma un complejo: enzimasubstrato o substratos.

2) Se une la coenzima a este complejo. 3) Los restos de los aminocidos que configuran el centro activo catalizan el proceso. Para ello debilitan los enlaces necesarios para que la reaccin qumica se lleve a cabo a baja temperatura y no se necesite una elevada energa de activacin. 4) Los productos de la reaccin se separan del centro activo y la enzima se recupera intacta para nuevas catlisis. 5) Las coenzimas colaboran en el proceso; bien aportando energa (ATP), electrones (NADH/NADPH) o en otras funciones relacionadas con la catlisis enzimtica

E + A

[EA

EPQ]

EQ + P
[EI]

E + Q

Complejo [EI]

Enzima [E] Enzima inactiva Sitio activo

Producto

[P]

ESTEREOESPECIFICIDAD
Si el sustrato tiene un carbono asimtrico, la enzima solamente acta sobre uno de los ismeros pticos. Esta especificidad parece ser absoluta. Cuando el sustrato es una molcula simtrica y el producto contiene un carbono asimtrico, siempre se produce un solo ismero ptico. LDH NADH + Piruvato L-lactato + NAD Acetil-L-triptofanamida (sustrato de la quimotripsina) Acetil-D-triptofanamida (inhibidor de la quimotripsina)
Dr. Emilio Guija Poma

Dr. Emilio Guija Poma

INHIBICION ENZIMATICA
Definicin.- Es un proceso caracterizado por una disminucin de la actividad enzimtica causado por un compuesto qumico. Importancia.- Permite explicar los procesos de regulacin metablica, disear nuevos medicamentos, descubrir nuevos plaguicidas, explicar mecanismos de interaccin de ligandos, etc.
Dr. Emilio Guija Poma

INHIBICION ENZIMATICA
La inhibicin puede ser reversible e irreversible. La inhibicin reversible es de 3 clases: a. Inhibicin competitiva. b. Inhibicin no competitiva. c. Inhibicin acompetitiva. Experimentalmente pueden diferenciarse mediante un grfico en doble recproca (1/v vs. 1/[S]), en funcin de [I].
Dr. Emilio Guija Poma

INHIBICION COMPETITIVA
El inhibidor se liga al sitio activo de la enzima y forma el complejo E-I. El inhibidor no se une al complejo E-S. En un grfico en doble recproca: a. No se modifica la velocidad mxima. b. El valor Km se incrementa.

Dr. Emilio Guija Poma

Dr. Emilio Guija Poma

Dr. Emilio Guija Poma

Inhibicin Competitiva

Dr. Emilio Guija Poma

ESTRUCTURAS: Coenzima y Frmaco

Estructura del cido flico, una coenzima (izquierda), con la estructura del metotrexato, un frmaco anticancergeno (derecha).

Inhibicin Competitiva
El Sulfametoxazol inhibe la enzima Dihidropteroato sintasa y en consecuencia la sntesis de Dihidrofolato bacteriano. La Lovastatina inhibe la HMGCo A reductasa, enzima clave para la sntesis de colesterol. El etilenglicol es un compuesto txico que es metabolizado por la alcohol deshidrogenasa, enzima que puede ser inhibida competitivamente por el alcohol etlico.

INHIBICION NO COMPETITIVA
El inhibidor puede ligarse a E, formando el complejo E-I, o al complejo E-S formando E-S-I. El inhibidor se une a un lugar distinto al sitio activo de la enzima. En un grfico en doble recproca: a. El valor Km no se modifica. b. La velocidad mxima disminuye.
Dr. Emilio Guija Poma

Dr. Emilio Guija Poma

Dr. Emilio Guija Poma

INHIBICION NO COMPETITIVA
Los grupos SH de enzimas con metales pesados: Pb, Hg, Ag, Cd.

Reaccin del cianuro con el grupo hemo de la citocromo oxidasa.

Inhibidores de la HIV transcriptasa

reversa: Fenetiltiazolilureas.

INHIBICION ACOMPETITIVA
El inhibidor solamente se liga al complejo E-S, formando el complejo E-S-I. En un grfico en doble recproca: a. Disminuye la velocidad mxima. b. Disminuye el valor Km.

Dr. Emilio Guija Poma

Dr. Emilio Guija Poma

Dr. Emilio Guija Poma

INHIBICION ACOMPETITIVA
Es poco frecuente una droga que muestre una inhibicin de esta naturaleza.
Inosina-5-fosfato + NAD + H20 Inosina-5-fosfato Deshidrogenasa (VX-148)

Xantosina-5-fosfato + NADH + H+

Dr. Emilio Guija Poma

Inhibidores anlogos del estado de transicin

Los inhibidores enzimticos con cierta frecuencia se disean de forma similar al sustrato en el estado de transicin. La Pentostatina un poderoso agente antineoplsico, es un frmaco que inhibe a la Adenosina desaminasa. El Oseltamivir es un frmaco antiviral anlogo al estado de transicin.

Inhibicin irreversible
El inhibidor reacciona covalentemente con la enzima conducindola prcticamente a una inactivacin definitiva. Los inhibidores de esta naturaleza son muy txicos para el organismo, debido a que son inespecficos. Ejm: Diisopropilfluorofosfato, Iodoacetamida.

Inhibicin irreversible
El

diisopropilfluorofosfato (DFP) inhibe irreversiblemente la acetilcolinesterasa liberando HF.

La acetilcolinesterasa se inhibe irreversiblemente,

lo que produce acumulacin de acetilcolina y bloquea el impulso nervioso colinrgico, que puede provocar la muerte por parlisis respiratoria.

Inhibicin por Diisopropilfluorofosfato

Inhibicin irreversible
La inhibicin irreversible podra ser de dos clases: 1.- Unin por afinidad. 2.- Activado por la enzima.

INHIBICION IRREVERSIBLE

SUSTRATOS SUICIDAS
La penicilina inhibe la transpeptidasa que se

entrecruza con las cadenas de pptidoglucanos de la pared bacteriana, ltima etapa de la sntesis de la pared bacteriana. La penicilina tiene un anillo lactmico de 4 miembros que simula el estado de transicin del sustrato normal, cuando la penicilina se fija al sitio activo de la enzima, se abre el anillo lactmico y se forma un enlace covalente con un residuo de serina presente en su sitio activo.

Inhibicin irreversible: Unin por afinidad

Dr. Emilio Guija Poma

INHIBIDORES SINTETICOS SUICIDAS

El trifosfato de Aciclovir inhibe competitivamente

las polimerasas del ADN vral. Se incorpora en el ADN viral y acta como terminador de la sntesis de la cadena, inactivndola de esta manera. Este modo de accin corresponde ms propiamente a un inhibidor suicida. El trifosfato de Genciclovir acta de una manera semejante.

SUSTRATOS SUICIDAS
Los sustratos suicidas son compuestos qumicos

que son reconocidos como sustratos por la enzima, pero en la secuencia cataltica se forma un intermediario unido covalentemente al sitio activo de la enzima, que impide que sta contine con su ciclo cataltico. Esta caracterstica permite disear seudosustratos inhibidores, para cuyo propsito, se requiere tener un cabal conocimiento de la estructura tridimensional del sitio activo de la enzima.

SUSTRATOS SUICIDAS
El sustrato suicida tiene una estructura similar al

sustrato de la enzima. Se diferencia de un inhibidor competitivo, en que ste interacciona con el sitio activo de la enzima pero no se liga covalentemente a l, en tal sentido, tiene una Ki que corresponde a la disociacin del complejo E-I. Esta interaccin difiere considerablemente de la que ocurre en la inhibicin irreversible.

SUSTRATOS SUICIDAS
Diversos inhibidores se encuentran en el plasma

humano y tienen la propiedad de ligarse al sitio activo de algunas enzimas de manera covalente produciendo su inhibicin. Alrededor del 10% de las protenas plasmticas pertenecen a este grupo de enzimas, entre las que se encuentran la antitrombina III y la 1antitripsina.

SUSTRATOS SUICIDAS
El inhibidor 1-antitripsina reacciona con la

elastasa de los leucocitos, enzima que no solamente hidroliza elastina. La elastasa de los neutrfilos tiene la propiedad de hidrolizar las protenas de la membrana bacteriana. Durante la inflamacin los neutrfilos segregan grandes cantidades de elastasa.

SUSTRATOS SUICIDAS
La 1-antitripsina se comporta como sustrato

normal de la elastasa y se liga al sitio activo. Luego, se produce un punto de ruptura controlada, es decir, el enlace peptdico del inhibidor se escinde, formndose un intermediario acil-enzima. Este intermediario acil-enzima est unido a la elastasa de manera covalente.

SUSTRATOS SUICIDAS
El intermediario acil-enzima sufre un cambio

conformacional, lo que impide que una molcula de agua hidrolice dicho complejo. La proteasa no puede continuar con la secuencia cataltica y queda inhibida. La formacin del complejo acil-enzima por impedimento estrico no permite que una nueva molcula de sustrato se ligue al sitio activo de la elastasa.

1-antitripsina

SUSTRATOS SUICIDAS
Cuando existe un defecto hereditario del gen de la

1-antitripsina, se produce una excesiva actividad de la elastasa producindose una creciente destruccin de los tejidos especialmente heptico y pulmonar. El humo de los cigarros contiene componentes altamente oxidantes que convierten un residuo crtico de metionina de la 1-antitripsina en sulfxido de metionina, lo que impide que pueda actuar la elastasa.

Oxidacin de 1-antitripsina
1-antitripsina
CH2 CH2 S CH3 OXIDACION

1-antitripsina oxidada
CH2 CH2 S=O CH2

X ELASTASA

SUSTRATOS SUICIDAS
Antidepresivos:
Tranil cipromina, fenalzina Antiparkinsonianos: L-deprenil, selegilina

MAO MAO -lactamasa

Inhibidores de -lactamasa
Acido clavulnico Antiprotozoos

Eflornitina

Ornitina descarboxilasa

SUSTRATOS SUICIDAS
Antitumoral:
5-F-2-desoxiuridilato

Timidilo sintetasa Trimitidilo sintetasa GABA aminotransferasa Xantina oxidasa Tiroidea peroxidasa

Antiviral:
Trifluridina

Anticonvulsivo:
Vigabatrina

Antiuricmico:
Allopurinol

Antitiroidea:
Metimazol, metiltiouracilo

FIN