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I.- OBJETIVOS
II.- GENERALIDADES:
Los medios de cultivo, como ya se ha dicho, pueden ser sólidos o líquidos, y estar
contenidos en tubos, placas o frascos.
La técnica general de las siembras variará según el estado físico del material a
sembrar y del medio de cultivo.
Al inocular debe trabajarse siempre dentro del radio de un mechero Bunsen (30 cm.),
o, en el ambiente dentro de una campana de flujo laminar, ya que, la corriente
ascendente de aire que va por la llama, o la corriente de aire del flujo laminar arrastra
el polvo y otras partículas con el aire hacia arriba, o hacia afuera; impidiendo la
contaminación del medio de cultivo.
1. Siembra en placas:
Con el asa ya esterilizada, se toma una gota de líquido o de una emulsión del producto
patológico y se deposita en un costado del agar de una placa Petri, se estría a partir
de ese punto pasando suavemente el asa en zig-zag por la superficie del agar sin
rasparlo, rotar la placa en 1/3 y repetir el procedimiento 2 a 3 veces. A menudo se
reciben tórulas para cultivo y con ellas se practica la primera de las estrías,
procediendo después a diseminar con el asa o pipeta en la forma descrita.
El cuello del tubo debe ser flameado antes y después de ser sembrado. Con el asa
previamente esterilizada a la llama, se toma una pequeña cantidad de la muestra y se
lleva al fondo del tubo, luego se estría suavemente la superficie del medio en forma
ondulante.
Antes de introducir el tubo a la estufa de cultivo, debe dejarse suelto el tapón de goma
para evitar que los gases expulsen el tapón.
El inóculo es introducido con el asa recta o pipeta pasteur hasta el fondo del medio
con un solo movimiento y teniendo cuidado en hacer el mismo trayecto de entrada que
de salida. Debe flamearse la boca del tubo antes y después de la siembra. Antes de
introducir el tubo a la estufa de cultivo debe soltarse el tapón de goma para evitar que
los gases expulsen el tapón.
El inóculo es introducido con el asa recta o pipeta pasteur hasta el fondo del medio
con un solo movimiento y teniendo cuidado en hacer el mismo trayecto de entrada que
de salida, se retira hacia la superficie inclinada del agar haciendo suavemente una
estría ondulada. Debe flamearse la boca del tubo antes y después de la siembra.
Antes de introducir el tubo a la estufa de cultivo debe soltarse el tapón de goma para
evitar que los gases expulsen el tapón.
5. Siembra en profundidad:
6. INCUBACION:
Para anaerobiosis se colocan las placas y tubos dentro de una jarra Anaerobia y luego
ésta se coloca en estufa de cultivo a 35°C. Con un sobre productor de atmósfera
anaerobia. Para incubar en atmósfera de C02 se colocan las placas y tubos dentro de
la Jarra de C02 y ésta se coloca en la estufa de cultivo a 35°C con un sobre productor
de atmósfera microaerofila.
5 tubos de ensayo
1 gradilla ,para guardar los tubos
1 mechero para flamear
Alcohol, para esterilizar la zona de trabajo
1 asa de siembra
Muestras: flan, pan con hamburguesa, yogurt, aceite, etc.
IV. EXPERIMENTO
Siga cada uno de los pasos como lo indica su Profesor, Técnico o Instructor.
V.- RESULTADO
VI.- CONCLUSIONES
VII.- RECOMENDACIONES
No se puede meter las botellas en la jarra con las manos porque eso puede llevar
a que se contamine el caldo nutritivo.
Es obligatorio el uso del mandil en el laboratorio.
Se requiere que la puerta del laboratorio este cerrada y que el ingreso al
laboratorio sea restringido.
Esta prohibido fumar y comer en el laboratorio.
Lavarse las manos antes y después de realizar una experiencia en el laboratorio,
pues se requiere la mayor limpieza posible al manipular los materiales y caldos de
cultivos.
Limpiar con alcohol la mesa en que se va a trabajar.
Rotular los tubos de ensayo indicando las sustancias que contienen estos.
La mesa del laboratorio debe estar libre para poder llevar acabo la practica.
A la hora de vaciar el cultivo en los tubos de ensayo hay que hacerlo de una
manera rápida, minuciosa y la tapa enroscada de dicho tubo debe estar la boca
arriba sin contacto con el área de trabajo.
No debemos acercar nuestra boca con los tubos de ensayo, ya que hay que
recordar que hay que evitar todo contacto de contaminación.