ACIZI NUCLEICI

2. Funcii - Replicarea - Sinteza proteinelor

ACIZI NUCLEICI
ADN, perechi de baze azotate: A=T, CG
H O T N O H H H N N A N N N R R N N N N G O N H H H N N O C N R H

N R

Dogma Central a geneticii moleculare

ADN
Transcriere

ARN

proteine
Traducere

Transcrierea / Transcripia = transferul informaiei genetice de la ADN la ARN (sintez de ARN pe matri de ADN) Traducerea / Translaia = transferul informaiei genetice de la ARN la proteinele functionale, a cror secven de aminoacizi este codificat n structura ADN-ului. Replicarea = transferul informaiei genetice de la celula mam la celulele-fiice prin copierea ADN-ului parental cu formarea a dou molecule de ADN cu structur identic ADN-ului parental

Dogma Central a geneticii moleculare

Recombinarea= rearanjarea materialului genetic Mutaii/Reparare = lezarea ADN cu alterarea informaiei genetice/ corectarea leziunilor ADN Revers- transcrierea = transferul informaiei genetice de la ARN la ADN

REPLICAREA ADN
REPLICAREA = Dublarea ntregii cantiti de ADN, naintea diviziunii celulare, n scopul transmiterii fidele a informaiei genetice (materialului genetic) din generaie n generaie. Monomerul replicrii : Nucleotidul (nucleozid trifosfatul) Nucleozid trifosfatul este activ din punct de vedere chimic, datorit sarcinilor negative ale celor 3 grupri fosfat. Prin legarea la catena ADN n formare, nucleotidul pierde dou grupri fosfat (pirofosfat). Hidroliza pirofosfatului n dou molecule de fosfat anorganic genereaz energia necesar legrii nucleotidului la catena ADN n formare. Nucleozid tri-P

Pirofosfat Fosfat anorganic

P P P i

1.

Fiecare molecul de ADN dublu catenar se deruleaz i se separ n dou catene independente (se rup punile de hidrogen intercatenare A=T i CG), care vor servi ca matrice pentru sinteza a dou catene noi de ADN (se refac puni de hidrogen intercatenare A=T i CG, ntre o caten veche i una nou format). Astfel din 2 catene ADN obinem 4 catene. Fiecare molecul-fiic va conine o caten din molecula-mam i o caten nou sintetizat. Moleculele de ADN nou formate se nfoar la rndul lor n dublu helix . Din acest motiv, replicarea este semiconservativ.

REPLICAREA ADN

2. Nucleozidele trifosfat (nucleotidele), deja sintetizate i prezente n nucleu, se apropie de extremitile 3 ale catenelor de ADN n formare. Nucleotidele vor fi incorporate n noua caten prin fomare de legturi: - fosfodiester, cu ultimul nucleotid 3 de pe aceeai caten - de hidrogen (A=T i CG), prin complementaritate cu nucleotidele de pe cealalt caten (matrice).

3. Enzima (complex enzimatic) resposabil de biosinteza ADN este o ADN polimeraz ADN-dependent. Aceasta elibereaz pirofosfatul fiecrui nucleotid nou adugat, utiliznd energia rezultat pentru polimerizarea nucleotidelor ntre ele prin formare de legturi fosfodiester. Punile de hidrogen intercatenare se formeaz spontan (necatalitic), prin complementaritate. 4. Polimerizarea (extinderea catenelor nou formate) se realizeaz ntotdeauna n sensul 5 ctre 3. Enzima se va deplasa deci, pe fiecare caten veche (matrice), n sensul 3 ctre 5, iar catenele noi se vor extinde 5 ctre 3. Complementaritatea i antiparalelismul se respect i pentru moleculele nou formate. 5. Datorit faptului c un singur complex de polimerizare lucreaz simultan pe ambele catene matrice, i c acestea sunt antiparalele, pe una din catene sinteza va fi continu, iar pe cealalt discontinu.

REPLICAREA ADN

EXPRESIA GENELOR
Genele (ADN) dicteaz caracteristicile fizice ale individului prin intermediul proteinelor. Gen = unitate din molecula de ADN (succesiune de nucleotide) care codific informaia pentru sinteza unei proteine (uniti funcionale ARN) Informaia genetic este codificat : CODUL GENETIC Transcripia : Sinteza ARN pornind de la ADN (enzima responsabil: ARN polimeraz ADN-dependent Translaia : traducerea informaiei ARN n protein (succesiunea de nucleotide devine succesiune de aminoacizi. Ordinea succesiunii aminoacizilor n molecula proteic (secvena proteinei) este dictat de ordinea succesiunii nucleotidelor n molecula ARN (secvena ADN). Modificarea secvenei ADN = Modificarea proteinei ??? Proteinele reprezint legtura dintre GENOTIP (gene) i FENOTIP (caractere aparente). Suntem reflecia proteinelor noastre, iar proteinele noastre sunt codificate n genele noastre.

EXPRESIA GENELOR
Sinteza proteinelor : Proces care const n polimerizarea aminoacizilor, n celule sau n vitro. Intr-o celul pot exista circa 10000 proteine care au rol esenial n funcionarea i reproducerea celulei i organismului. Biosinteza proteinelor se desfoar n urmtoarele momente. 1. n primul moment are loc transcripia, care const n sinteza mARN de ctre una dintre catenele de ADN dintr-o gen. 2. n al doilea momont are loc migrarea mARN n citoplasm i asocierea mARN cu ribozomii activi n sinteza proteic 3. n al treilea moment are loc activarea aminoacizilor 4. n al patrulea moment are loc translaia, polimerizarea sau asamblarea aminoacizilor.

EXPRESIA GENELOR
Transcripia Sinteza de ARN pornind de la ADN. (se trece, prin complementaritate, din limbajul nucleotidelor ADN n limbajul nucleotidelor ARN). Se pot sintetiza molecule de ARN mesager (ARNm), ARN de transfer (ARNt), ARN ribozomal (ARNr), etc Gen = unitate din molecula de ADN (succesiune de nucleotide) care codific informaia pentru sinteza unei proteine (uniti funcionale ARN) Traducerea Sinteza unui polipeptid (protein), pornind de la un ARNm. Se trece, prin codul genetic, de la limbajul nucleotidelor ARN la limbajul aminoacizilor n protein.

EXPRESIA GENELOR
Transcripia : analogii cu replicarea Denaturarea celor dou catene din molecula ADN Derularea unei mici poriuni din molecula ADN Utilizarea uneia din cele dou catene ADN ca matrice Incorporarea de nucleotide prin complementaritate Nucleotidele nou incorporate sunt unite prin legturi fosfodiester Secvena catenei nou sintetizate este complementar celei matrice. Polimerizarea are loc 5 ctre 3 Transcripia : diferene fa de replicare Molecula de ARN nou sintetizat nu rmne legat de catena ADN matrice Helixul ADN se reformeaz dup trecerea polimerazei, ntre catenele ADN. Moleculele ARN formate conin maxim cteva mii de nucleotide.

EXPRESIA GENELOR
ARN Polimeraza
Se deplaseaz de-a lungul moleculei de ADN (5 ctre 3 pe catena sens) Deruleaz molecula ADN Iniiaz transcripia la nivelul unui promotor Adaug nucleotide progresiv, prin complementaritate, copiind catena antisens Substraturi nucleotidice : ATP,CTP,UTP,GTP ARN format fiind eliberat foarte rapid, se poate ncepe sinteza unei noi molecule nainte de terminarea sintezei moleculei precedente. Viteza : 20 de nucleotide incorporate / secund ntr-o singur or, pornind de la o singur gen pot fi generai mai multe mii de transcripi (ARNm)

37

EXPRESIA GENELOR
ARN polimeraza
Ribonucleotide Nu necesit amors 1 eroare la fiecare 104 Erori cu consecine de mic importan Sistem de reparare rudimentar

ADN polimeraza
Dezoxiribonucleotide Necesit amors 1 eroare la fiecare 107 Erori cu consecine de maxim importan Sistem de reparare foarte complex

EXPRESIA GENELOR
Gena ce trebuie transcris: - Un promotor (amont, cteva zeci de nucleotide) : iniierea transcripiei - O regiune codant (matrice) - O regiune de terminare (aval) Etapele Transcripiei: Iniierea : ARN polimeraza ADN-dependent se leag la promotor. Cele dou catene sunt desfurate i ncepe ncorporarea de nucleotide. Elongarea : 5 ctre 3, antiparalel i complementar cu catena de ADN copiat. Polimeraza expune 10-20 de baze pe catena ADN copiat. Sunt recrutate i incorporate nucleotide, la fel ca n procesul replicrii, fabricndu-se de ast dat o molecul ARN. ADN-ul se renruleaz dup trecerea polimerazei. Terminarea : transcripia continu pn la captul regiunii terminale, dup care polimeraza i molecula de ARN sunt eliberate.

CODUL GENETIC
4. Codul genetic este degenerat: redundan a mai multor codoni pentru acelai aminoacid
Rolul redundanei Minimizeaz efectul mutaiilor: o substituie poate fi silenioas, dac modificarea la nivelul ADN nu implic o modificare la nivelul proteinei.

5. Codul genetic este universal = origini comune ! Excepii : mitocondrii, cloroplaste

SINTEZA PROTEINELOR
TRANSLAIA (TRADUCEREA) : Sinteza unei catene polipeptidice (succesiune de aminoacizi) pornind de la informaia coninut de o molecul de ARNm (succesiune de nucleotide), prin codul genetic. PARTICIPANI : - ARNm matur : succesiune codoni = succesiune aminoacizi - Aminoacizi (20) : prezeni n citoplasm - ARNt : transport (transfer) aminoacizii din citoplasm ctre ribozomi - Ribozomi : sediul sintezei proteice. Complexe ribonucleoproteice (ARNr + proteine) ETAPE : 1. Ribozomul se fixeaz pe ARNm. 2. ARNm este scanat pn la iddentificarea AUG iniiator. 3. Un ARNt aduce o metionin echivalent cu AUG. 4. ARNm traverseaz ribozomul, fiind citit codon cu codon. 5. De fiecare dat cnd un codon este citit, ARNt echivalent aduce aminoacidul echivalent pentru a fi legat prin legtur peptidic la proteina nascent. 6. Atunci cnd este citit un codon de terminare (UAA; UAG sau UGA), nu mai este incorporat nici un aminoacid i procesul ia sfrit 7. ARNm este citit 5 ctre 3, proteina sitetizat Nter ctre Cter

SINTEZA PROTEINELOR
ARN (acidul ribonucleic)
ARN-ul mesager este ARN-ul ce va servi ca tipar pentru sinteza proteinelor. Complexul enzimatic ARN polimeraz sintetizeaz iniial un ARN mesager precursor ce conine secvenele corespunztoare exonilor i intronilor genei. Prin procesul ulterior de maturare ARN-ul premesager este modificat pentru a duce la formarea ARN-ului mesager matur ARN-ul ribozomal este un constituient principal al ribozomilor, structuri celulare la nivelul crora se realizeaz sinteza proteinelor. ARN-ul ribozomal este sintetizat prin transcripia genelor corespunztoare situate n anumite regiuni ale cromozomilor numite organizatori nucleolari. ARN-ul de transport (notat ARNt) este un ARN scurt, de 75-100 nucleotide, cu o structur teriar n trefl (cu patru regiuni scurte dublu catenare i trei bucle) ce fixeaz un anumit aminoacid si care are o regiune specific de trei nucleotide numit anticodon. Acest ARN fixeaz un aminoacid pe care l transport i n poziioneaz n dreptul unui codon (prin complementaritatea codon (de pe molecula de ARNm) anticodon (de pe molecula de ARNt) n cursul procesului de translaie.

SINTEZA PROTEINELOR
ARN de transfer
Este produs prin transcripie i migreaz n citosol Aproximativ 80 nucleotide cu structur secundar complex Fiecare bucl joac un rol distinct Fiecare ARNt este specific unui anumit aminoacid, pe care l transport la ribozom. Odat eliberat, molecula de ARNt se leag de alt aminoacid. Aproximativ 45 tipuri de ARNt sunt suficiente Pentru 61 de codoni, datorit relaxrii regulilor De complementaritate A G n poziia 3, U se poate lega de A sau de G

n poziia 3, Inozina (baz neobinuit) se poate lega de A, U sau G

Dou roluri ale ARNt

a.a.
ENZIMA

1. Se leag la aminoacidul specific (anticodonului) Cu ajutorul enzimei: aminoacil- ARNt sintetaza i cu energie de la ATP. . 2. Transport aminoacidul la ribozom Datorit asocierii anticodonului cu codonul echivalent din ARNm (complementaritate !)
ARNt Eliberare AMP din ATP ARNt legat la aminoacidul specific

Aminoacid activat

SINTEZA PROTEINELOR
ARN de transfer

SINTEZA PROTEINELOR
Ribozomul
Dou subuniti ribonucleoproteice (1/3proteine + 2/3ARNr) ARNr produs prin transcripie, apoi maturat Asamblajul subunitilor se face n nucleu, apoi sunt exportate Asamblajul ribozomului se face pe o molecul ARNm

Polipeptid pe cale de a fi sintetizat

Ribozom procariot 70S Ribozom eucariot 80S

Subunitate mare 50S : 2 filamente ARNr i 31 proteine Subunitate mic 30S : 1 filament ARNr i 21 proteine Subunitate mare 60S : 3 filamente ARNr i 50 proteine Subunitate mic 40S : 1 filament ARNr i 33 proteine

3 filamente ARNr
Subunitate mare Subunitate mic

ARNm

S : constant de sedimentare, reflect masa ARNr

Rolurile ribozomului : 1. Aduce n apropiere (plaseaz n context conformaional ARNm i ARNt 2. Plaseaz urmtorul aminoacid n sensul corect: gruparea amino n proximitatea gruprii carboxil a catenei polipeptidice deja existente. 3. Catalizeaz legturile peptidice ce se vor forma ntre aminoacizii ce se adaug unii dup alii n polipeptid H H
H RX H RX H H H H I I I I I I I I H N C C N C C N C C N C C I II I II I II I II O RX O H O H O RX

SINTEZA PROTEINELOR

H H | | N C RX |

H H | | HN C RX
| C=O | O

Polipeptid 3
5

C=O | O
Site P

| | H N C RX | C=O | O

Site A

CCC

Site E

UUU AGC AAA UCG

AGC

10

SINTEZA PROTEINELOR
ARNm, ARNt i ARNr servesc de mai multe ori pn a fi degradate. ARNt i ribozomii sunt aproape identici la toate eucariotele. ARNm difer de la o specie la alta, i de la o gen la alta, permind producerea de proteine specifice. O molecul de ARNm este tradus simultan de mai muli ribozomi, genernd un poliribozom sau polizom, generator de mai multe proteine simultan. ARNm Ribozomi

SINTEZA PROTEINELOR
Proteine fabricate n ribozomii liberi din citosol Proteine fabricate n ribozomi legai la membrane Proteine care se dizolv n citosol, unde i ndeplinesc funciile, sau se dirijeaz ctre organite ce nu fac parte din reeaua intracelular de membrane: peroxizomi, cloroplaste, mitocondrii. Proteine aparinnd reelei intracelulare de membrane: membrana nuclear, RE, complex Golgi, lizozomi, vacuole, membrana celular, precum i proteine ce vor fi secretate n afara celulei.