UNIVERSIDAD POLITCNICA SALESIANA

ING. BIOTECNOLOGA DE LOS RRNN

BIOTECNOLOGA VEGETAL

Nombre: Christian Santiago Jcome Ortiz

PREPARACION Y MANEJO DE SOLUCIONES STOCK
Se denomina solucin madre o stock a composiciones concentradas de nutrientes las cuales
estn formuladas por sales minerales que se emplean en un medio particular. Debido al
elevado nmero de compuestos que incluye y a que algunos de ellos se emplean a muy baja
concentracin, resulta ms prctico preparar soluciones madre o "stocks" concentrados. Esto
hace ms rpida la futura preparacin de medios y minimiza los errores, ya que La
composicin de una solucin se debe medir en trminos de volumen y masa, por lo tanto es
indispensable conocer la cantidad de soluto disuelto por unidad de volumen o masa de
disolvente, es decir su concentracin.
La elaboracin de soluciones stocks ms concentrados, agrupando los compuestos en varias
soluciones stock, por ejemplo:
Stock 1: Macros (x10)
Stock 2: Sales de Calcio (x 10)
Stock 3: Micronutrientes (x 100)
Stock 4: Solucin de hierro
Stock 5: Vitaminas (x 100)
Stock 6: Reguladores (cada uno individualmente)(x 200)







ELABORACIN DE SOLUCIONES MADRE DEL MEDIO DE CULTIVO MURASHIGE Y SKOOG
Todas las soluciones se preparan sobre un 70% de agua del volumen final deseado, y sobre
ella se van aadiendo uno por uno todos los componentes hasta su completa disolucin.
Posteriormente se ajusta el volumen final con agua y se almacenan.


Usar 100 ml de la solucin stock de Ca para preparar 1 L de medio de cultivo MS.


Usar 10 ml de la solucin stock de micronutrientes para preparar 1 L de medio de cultivo MS

Stock de Fe-EDTA( x100)
El hierro se puede aadir quelado como producto comercial (por ejemplo, Secuestrene) o
preparando el siguiente stock:
1. Disolver 3,72 g de EDTA disdico en 900 mL de agua destilada. Se obtendr una solucin
clara a los 15 min a temperatura ambiente (25 - 27C).
2. Aadir 2,78 g de sulfato ferroso heptahidratado. Se obtendr inmediatamente una solucin
de color amarillo claro.
3. Enrrasar a 1 L y almacenar la solucin de hierro quelado en una botella mbar para
protegerla de la exposicin a la luz.
4. Usar 10 ml de la solucin stock de hierro quelado para preparar 1 L de medio de cultivo MS.

Usar 10 ml de la solucin stock de vitaminas para preparar 1 L de medio de cultivo MS.








Stock de reguladores de crecimiento.
El stock de reguladores de crecimiento se puede hacer a una concentracin de
1 mg/
Solucines de IAA de 1mg/ml
Solucin de Kn de 1 mg/ml
Solucin de GA3 de 1 mg/l
Solucin de BAP de 1mg/l
Las auxinas de pueden disolver primeramente en una pequea cantidad de etanol al 95%, KOH
o NaOH 1 M. Una vez disueltas, se aade agua destilada suavemente, procurando que las
auxinas no precipiten, hasta alcanzar el volumen deseado.
De la misma forma. el cido abcsico se puede disolver previamente en NaOH 1 N y las
giberelinas en el etanol al 95%.
Las citoquininas se disuelven previamente en una pequea cantidad de HCl 0,5 N. Se puede
calentar suavemente para favorecer la disolucin y posteriormente se enrasa al volumen
deseado.

OTROS MEDIOS DE CULTIVO.

1.- Murashige y Skoog 1962 2.- Shenk y Hildebrandt 1972;
3.- Gamborg, Miller y Ojima 1968; 4.- White 1963.

* El hierro se puede suministrar en forma de quelato: 0.2 g/L de Sequestrene (Ciba Geigy)


SALES INORGNICAS MS






BIBLIOGRAFA
MURASHIGE, T. ; SKOOG, F. 1962. A revised medium for rapid growth and bioassays with
tobacco tissue cultures. Physiol. Plant, 15: 473-497.