ESCUELA POLITCNICA NACIONAL

FACULTAD DE INGENIERA QUMICA Y AGROINDUSTRIA

CARRERA DE INGENIERA QUIMICA

PLAN DEL PROYECTO DE TITULACIN

PROPUESTO POR:
Doris Mara Carbo Snchez
REA DE INVESTIGACIN:
Tecnologa Industrial
LNEA DE INVESTIGACIN:
Ingeniera de Procesos
AUSPICIADO POR:
Luis Mndez (Msc.)
Proyecto PIS1228
FECHA:
14 de mayo de 2012

1. Ttulo del Proyecto
Escalado del tamao de pellet obtenido en la fermentacin sumergida de sacarosa con
Aspergillus niger, desde un reactor de 2 L hasta uno de 14 L, con el coeficiente

de
transferencia de masa constante.
2. Objetivos de la Investigacin

a) Objetivo General
Escalar el tamao de pellet obtenido en la fermentacin sumergida de sacarosa
con Aspergillus niger, desde un reactor de 2 L hasta uno de 14 L, con el
coeficiente

de transferencia de masa constante

b) Objetivos Especficos
Determinar el mejor medio de cultivo para el crecimiento del pellet.
Determinar las constantes cinticas para el crecimiento del flculo.
Encontrar la influencia de la agitacin en la transferencia de masa y tamao
del flculo.
Determinar la relacin entre la velocidad de crecimiento del pellet y la
concentracin de oxgeno disuelto en la masa del medio de cultivo.
Formular un modelo matemtico que permita representar la relacin general

entre el coeficiente

de transferencia de masa de la fermentacin, la

aireacin y la velocidad de agitacin en los 2 reactores.
Verificar la idoneidad de los parmetros de escalado obtenidos del modelo
matemtico para el crecimiento del flculo en los dos reactores.
3. Alcance
El proceso de fermentacin, es un proceso en el cual los microorganismos consumen
carbohidratos y generan biomasa y/o un compuesto orgnico. En este caso la fuente de
carbohidrato ser sacarosa y se generar biomasa, mediante la fermentacin sumergida
con el hongo Aspergillus niger que se dispone en el laboratorio de Bioprocesos. Este
microorganismo es empleado, como una referencia, ya que un Aspergillus niger productor
de cido ctrico, permitira la obtencin de dicho compuesto bajo condiciones similares a
las que se busca obtener en este trabajo.

Con el fin de obtener un mximo crecimiento del microorganismo, se prepararn tres
medios de cultivo diferentes entre s, con criterios basados en referencias bibliogrficas.
El primer medio (Medio 1) constar de la siguiente composicin bsica: 15 % en peso de
sacarosa; 2,5 % NH
4
NO
3
y 1 % g/L KH
2
PO
4
; se analizar el efecto de la concentracin de
sacarosa en dos medios adicionales con la siguiente composicin: (Medio 2) 12 %
sacarosa y (Medio 3) con 18 % de sacarosa. Adems se probar en el mejor medio
obtenido, la adicin de 0,3 % de MgSO
4
*7H
2
O (Cadavid et al., 2006, p. 33, Prescott,
1960, p. 562)

Para evitar que el microorganismo se adhiera a las paredes del reactor, ser necesario
contar con un medio de preparacin para la espora, donde se formar el flculo o pellet.
Este proceso se llevar a cabo en erlenmeyers de 500 mL con 150 mL del mejor medio
determinado para el crecimiento del microorganismo. Se realizar un diseo factorial 32
con pruebas a 160 rpm y 27 C, donde las variables sern: la concentracin de inculo
con valores de 2,0 %, 2,5 % y 3,0 %, determinadas en pruebas preliminares, y valores de
pH en el medio de 6,0 y 6,5. Las variables de respuesta sern el tamao de pellet, la
cantidad de biomasa y el nmero de pellets.

Con las mejores condiciones para la formacin del pellet se proceder a realizar los
ensayos siguientes: El pellet obtenido de los erlenmeyers se inocular en el
microfermentador de 2 L, en donde se llevar a cabo la fermentacin durante 8 das, que
es el tiempo requerido para que se d la mxima produccin de biomasa. En esta etapa
sern determinas las constantes cinticas para el crecimiento del flculo, que son

importantes en el proceso de fermentacin y de escalado de un bioreactor. Ser
necesario evaluar la cantidad de biomasa producida, mediante un proceso que incluye un
filtrado y secado de las muestras; se determinar la variacin del dimetro del pellet, con
un calibrador digital y tambin se evaluar la concentracin de oxgeno disuelto, mediante
el mtodo dinmico de Taguchi y Humprey con un electrodo de oxgeno disuelto
(Stanbury, 1995, p. 249)

Adems, se realizar el anlisis de azcares reductores y iniciales y finales del sustrato
mediante el mtodo espectrofotomtrico DNS (Dinitrosalicilco), con el fin de conocer la
influencia de las variables del proceso en el rendimiento (Miller, 1959, p. 426)

Se estudiar en el proceso de escalado el efecto que tiene la aireacin y la agitacin en
la transferencia de masa y en el tamao del flculo obtenido. Para ello, se realizarn
pruebas en los reactores de 2 y 14 L, en las cuales se realizarn cuatro variaciones de la
velocidad de agitacin en un rango de 100 rpm hasta 200 rpm, con cuidado de no destruir
el pellet formado con anterioridad.

En todos los casos se determinar el coeficiente de transferencia de masa K
L
a mediante
el mtodo dinmico de Taguchi y Humprey con un electrodo de oxgeno disuelto y se
determinar la cantidad de biomasa del modo descrito anteriormente. Estos valores
permitirn determinar las constantes cinticas para el crecimiento del flculo y la relacin
entre la velocidad de crecimiento del pellet y la concentracin de oxgeno disuelto en la
masa del medio de cultivo.

Para representar la relacin general entre el coeficiente K
L
a de transferencia de masa de
la fermentacin, la aireacin y la velocidad de agitacin en los 2 reactores, se realizar
una modelizacin matemtica y simulacin digital mediante un programa en Visual Basic
Applications de EXCEL, donde se determinarn los mejores valores de los parmetros de
escalado para asegurar que el tamao de flculo en los reactores sea el mismo.

Con el fin de verificar la idoneidad de los parmetros obtenidos en la simulacin, se
realizarn fermentaciones en el reactor de 14 L, donde se determinar el tamao del
flculo obtenido en la fermentacin mediante el proceso descrito anteriormente, para
verificar que el dimetro del pellet en los reactores sea el mismo. En caso de no lograr
cumplir dicha condicin, se retroalimentarn los datos en el sistema y se realizarn las
modificaciones correspondientes, hasta obtener un mximo del 20 % de error.

4. Justificacin del Proyecto

La fermentacin ctrica mediante Aspergillus niger en medio sumergido es una de las
fermentaciones ms importantes, ya que cubre el 80 % de la demanda mundial de cido
ctrico que es de 2 millones de toneladas anuales (Marquez, 2010)

Aunque se han desarrollado metodologas que permiten obtener mayores rendimientos
de cido ctrico con Aspergillus niger en medio sumergido, existen muy pocos datos
sobre la influencia que presenta la transferencia de oxgeno en el crecimiento del flculo,
que es donde se produce dicho cido (Kirimura et al., 1999, p. 421)

La falta de publicaciones al respecto se debe a las complicaciones generadas por la
formacin del pellet con un incremento respectivo de la viscosidad del medio y, por lo
tanto, un cambio en las propiedades reolgicas del mismo, que afecta directamente a la
transferencia de masa, que debe ser mantenida durante el crecimiento del flculo y ms
an en un proceso de escalado (Tought y Prosser, 1996, p. 639)

Adems, los gradientes de consumo de sustrato y concentracin de producto varan
segn el crecimiento del pellet, que presenta una fisiologa heterognea, que complica un
anlisis cuantitativo de la cintica de crecimiento de la biomasa, puesto que es necesario
mantener pellets compactos durante la fermentacin (Tought y Prosser, 1996, p. 250)

Para controlar el proceso de fermentacin es necesario mantener la morfologa del pellet,
que ayuda a la prediccin de las propiedades reolgicas y del rendimiento del producto.
Este factor puede ser controlado mediante el control de factores como la agitacin, la
composicin del medio de cultivo, la concentracin de inculo y la concentracin de
oxgeno disuelto (Ikram-ul-Haq. et al., 2003, p. 817; Chvez, M. et al., 2005, p. 683)

El 70 % del cido ctrico mundial es aplicado en la industria de alimentos y bebidas, el 20
% en productos farmacuticos y el 10 % en industrias cosmticas y de plsticos, entre
otras (Lpez et al., 2006, p. 39; Prescott et al., 2004, p. 1091)

Ecuador no es un pas productor de este cido, sino que lo importa, principalmente de
Alemania, Brasil, Colombia, China, Estados Unidos y Uruguay. Desde el ao 2008 hasta
el ao 2011, Ecuador import 11 641,87 t de cido ctrico, con un costo total de 13 422
608 dlares y solo entre el ao 2009 y 2010 se observ un incremento de 13,5 % de la
cantidad de toneladas importadas, con un aumento del 37,3 % en su costo (BANCO

CENTRAL DEL ECUADOR, 2012, p. 15)

En este trabajo se busca realizar un estudio que permita plantear el inicio de alternativas
tcnicas en Ecuador para producir cido ctrico. Para ello, este estudio plantea la
obtencin de las mejores condiciones para el crecimiento del pellet en los bioreactores de
2 L y 14 L, puesto que una de las mayores limitantes para la produccin de este cido en
medio sumergido es el crecimiento en flculo del microorganismo y el escalado de los
pellets.

Fabricar el cido ctrico en Ecuador puede ser una puerta para la creacin de nuevas
industrias. Para esto se requiere contar con procedimientos que permitan llevar de forma
rpida y directa el proceso obtenido en laboratorio a escala industrial.

5. Temas Afines Realizados
Carrillo, H. (1999). Escalado batch en la fermentacin para la obtencin de goma
xantn. (Proyecto de titulacin previo a la obtencin del ttulo de Ingeniero
Qumico no publicado). Escuela Politcnica Nacional, Quito, Ecuador.

De Argez, E. (1969). Fermentacin ctrica de melaza de caa. (Proyecto de
titulacin previo a la obtencin del ttulo de Ingeniero Qumico no
publicado). Escuela Politcnica Nacional, Quito, Ecuador.

Paez, M. (2011). Escalado de la produccin industrial de la levadura de
panificacin usando dos reactores modelo y un bioreactor prototipo.
(Proyecto de titulacin previo a la obtencin del ttulo de Ingeniero Qumico
no publicado). Escuela Politcnica Nacional, Quito, Ecuador.
6. Temario

RESUMEN

INTRODUCCIN

1. REVISIN BIBLIOGRFICA
1.1 Formacin de pellet en fermentacin sumergida
1.2 Fundamentos del proceso de escalado
1.3 Escalado para procesos biotecnolgicos


2. PARTE EXPERIMENTAL
2.1 Determinacin del mejor medio de cultivo para el crecimiento del pellet
2.2 Determinacin de las constantes cinticas para el crecimiento del flculo
2.3 Influencia de la agitacin en la transferencia de masa y tamao del flculo
2.4 Relacin entre la velocidad de crecimiento del pellet y la concentracin de
oxgeno disuelto en la masa del medio de cultivo
2.5 Formulacin del modelo matemtico para representar la relacin entre el
coeficiente K
L
a de transferencia de masa de la fermentacin, la aireacin y
la velocidad de agitacin en los 2 reactores
2.6 Verificacin de la idoneidad de los parmetros de escalado obtenidos del
modelo matemtico para el crecimiento del flculo en los dos reactores
mediante la fermentacin sumergida de sacarosa con Aspergillus niger


3. RESULTADOS Y DISCUSIN

4. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
4.1. CONCLUSIONES
4.2. RECOMENDACIONES

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

ANEXOS


7. Referencias Bibliogrficas

1. BANCO CENTRAL DEL ECUADOR. (2012). Base de datos estadsticos de
comercio exterior del Banco Central. Estadstica Econmica del Ecuador,
1(2), 15

2. Cadavid, L., Flores, A., y Vega, S. (2006). Caracterizacin de una cepa nativa de
Aspergillus niger y evaluacin de la produccin de cido ctrico. Revista
Universidad Eafit, 128(2), 33.


3. Chvez, M., Gonzlez, O., Snchez, G., Luz, M., Rodrguez G., Elezar, A. y Silva,
E. (2005). Mathematical description of bikaverin production in a fluidized
bed bioreactor. World Journal of Microbiology & Biotechnology, 21(5), 683.

4. Ikram-ul-Haq., Ali, S., Qadeer, M. y Iqbal, J. (2003). The kinetic basis of the role of
Ca
++
ions for higher yield of citric acid in a repeated-batch cultivation
system. World Journal of Microbiology & Biotechnology, 19(8), 817.

5. Kirimura, K., Yusa, S y Rugsaseel, S. (1999). Amylose-like polysaccharide
accumulation and hyphal cell-surface structure in relation to citric acid
production by Aspergillus niger in shake culture. Appl Microbiol Biotechnol,
52(3), 421.

6. Lpez, C., Zuluaga, A., Herrera, S. y Medina, I. (2006). Produccin de cido ctrico
con Aspergillus niger NRRL 2270 a partir de suero de leche. DYNA, 1(150),
39.

7. Marquez, M. (2010). Planta de cido ctrico en San Jos y un Centro de
reparacin naval en Fray Bentos. Recuperado de
http://www.sociedaduruguaya.org/2010/12/planta-de-acido-citrico-en-san-
jose-y-un-centro-de-reparacion-naval-en-fray-bentos.html (Mayo, 2012)

8. Miller, GL. (1959). Use of dinitrosalicylic acid reagent for dermination of reducing
sugar. Analytical Chem., 31(12), 426.

9. Prescott, L., Harley, J. y Klein, D. (2004). Microbiologa. (5ta. ed.). Madrid,
Espaa: McGraw-Hill-Interamericana.

10. Prescott, S. (1960). Microbiologa Industrial. (2da. ed.). Madrid, Espaa: Aguilar.

11. Stanbury, P. (1995). Principles of fermentation technology. (2da ed.). Inglaterra,
Gran Bretaa: Butterworth Heinemann.

12. Tought, A. y Prosser, J. (1996). Experimental verification of a mathematical model
for pelleted growth of Streptomyces coelicolor A3 (2) in submerged batch
culture. Microbiology, 142(3), 639 640.

8. Cronograma de Actividades

Actividad Mes 1 2 3 4 5 6
Revisin Bibliogrfica
Determinacin del mejor medio de cultivo para el crecimiento del
pellet

Determinacin de las constantes cinticas para el crecimiento del
flculo.

Determinacin de la influencia de la agitacin en la transferencia
de masa y tamao del flculo.

Determinacin de la relacin entre la velocidad de crecimiento del
pellet y la concentracin de oxgeno disuelto en la masa del medio
de cultivo.

Formulacin un modelo matemtico que permita representar la
relacin general entre el coeficiente

de transferencia de masa
de la fermentacin, la aireacin y la velocidad de agitacin en los 2
reactores.

Verificacin de la idoneidad de los parmetros de escalado
obtenidos del modelo matemtico para el crecimiento del flculo
en los dos reactores mediante la fermentacin sumergida de
sacarosa con Aspergillus niger.





Firma: Firma:


Ing. Luis Mndez Doris Carbo