MORELIA,

Noviembre 2013

INSTITUTO TECNOLGICO DE MORELIA


JOS MARA MORELOS Y PAVN

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SISTEMA NACIONAL DE EDUCACIN SECRETARIA DE EDUCACIN
PBLICA.

MICHOACN

INSTITUTO TECNOLGICO DE MORELIA
JOS MARA MORELOS Y PAVN
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DEPARTAMENTO DE
INGENIERA INDUSTRIAL

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INSTITUTO TECNOLGICO
DE MORELIA
SISTEMA NACIONAL DE EDUCACIN
SUPERIOR TECNOLGICA.
MICHOACN
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JOS MARA MORELOS Y PAVN
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INSTITUTO TECNOLGICO
INGENIERA INDUSTRIAL

Contenido
INTRODUCCIN .................................................................................................... 4
GLOSARIO .............................................................................................................. 5
JUSTIFICACIN ..................................................................................................... 6
OBJETIVOS ............................................................................................................ 7
Objetivo General .................................................................................................. 7
Objetivos particulares ........................................................................................... 7
HIPTESIS ............................................................................................................. 8
ANTECEDENTES ................................................................................................... 9
Materias Primas Para Elaboracin Del Gel Antibacterial. .................................. 11
Alcohol etlico .................................................................................................. 11
Carbopol ......................................................................................................... 12
Trietanolamina (TEA) ...................................................................................... 13
La glicerina ..................................................................................................... 14
Escherichia Coli ................................................................................................. 15
CAPITULO 2 MTODOS ...................................................................................... 16
Mtodo Antibiograma de Difusin de Microdiscos (KIRBY-BAUER). ................ 16
Taguchi L9 ......................................................................................................... 17
Diseo De Experimentos ................................................................................... 22
Preparacin de muestras de gel antibacterial. ................................................ 22
Medio de cultivo .............................................................................................. 22
Preparacin de sensidisco .............................................................................. 22
Inculo ............................................................................................................ 22
Mediciones: ........................................................................................................ 23
Medicin de efectividad .................................................................................. 23
Medicin de pH ............................................................................................... 23
CAPITULO 3 RESULTADOS Y DISCUSIN ........................................................ 25
Evidencia de actividad antibacterial ................................................................... 25
Resultados de Efectividad .............................................................................. 26
Resultado de pH ............................................................................................. 28
Conclusiones y Recomendaciones. ................................................................... 30
FUENTES DE INFORMACIN ............................................................................. 31


INTRODUCCIN

Las enfermedades se propagan de muchas maneras, como tosiendo,
estornudando, por contacto directo de piel a piel y tocando un objeto o superficie
que contiene grmenes. Los grmenes causantes de infeccin pueden estar
presente en los desechos humanos (orina, excremento) y los fluidos corporales
(saliva, mocos, supuracin de lesiones o heridas, supuracin de los ojos, vmito y
sangre). En este caso experimental llevamos a cabo la realizacin de un gel
antibacterial, capaz de eliminar Escherichia Coli. con mayor eficacia que un gel
comercial.
El gel con el que se realiz la comparacin de resultados, ha sido nuestro gel
casero, comparado con un gel de industria qumica farmacutica. Este producto es
un desinfectante, que elimina grmenes cuando es colocado en las manos y es
frotado contra ellas.
En el presente trabajo se documenta el proceso de elaboracin de un gel
antibacterial para la desinfeccin de manos, permitiendo la correcta utilizacin de
las materias primas, el seguimiento de una frmula y mezcla, cumpliendo con una
buena prctica de elaboracin del producto. Para ello se utilizo Alcohol,
Trietanolamina (TEA), Carbopol, Glicerina. Esto con el fin de encontrar las
concentraciones optimas para inhibir el crecimiento de E. Coli.
Para esto se utiliza DOE con el mtodo propuesto por Taguchi utilizando el arreglo
L9 por ser el que se ajusta al nmero de factores estudiados. De este modo se
pretende estudiar el nivel de pH, asi como la Efectividad contra E.coli.



GLOSARIO

Shigella:Bacteria de la familia Enterobacteriaceae, son bastones Gram negativos,
de 0.3 a 1 m de dimetro y de 1 a 6 m de longitud, que pueden estar solos, en
cadenas o de a pares. Es causa de infeccin intestinal aguda en nios pequeos.
Salmonella: La salmonella es una bacteria que causa una enfermedad llamada
salmonelosis. Esta enfermedad afecta el estmago y los intestinos. Se incluye en
la familia Enterobacteriaceae, integrada por bacilos Gram negativos anaerobios
facultativos.
Escherechia:Bacteria que integra parte de la flora intestinal del hombre y de los
animales. La mayora de las E. coli. son inofensivas. Sin embargo, algunas
pueden producir enfermedades
Vibrio: Bacteria que comprende varias especies de importancia mdica,
relacionadas muchas de ellas con enfermedad gastrointestinal y en particular con
enfermedades trasmitidas por alimentos de origen marino.
Campylobacter:Agrupan bacilos Gram negativos curvos, espirilados o en forma
de S que presenta un flagelo nico en uno o ambos extremos. En cultivos de
varios das (ms de tres) degeneran en formas esfricas u ovoides que han
perdido su viabilidad.

Aeromonas:Pueden ocasionar infecciones en las personas, como septicemia,
infecciones de heridas e infecciones del aparato respiratorio
Sistema coloidal:Un sistema heterogneo, formado por una fase continua en la
cual se dispersa otra fase en forma de entidades o partculas.
Reologa:Es la ciencia de la deformacin y el flujo de la materia. Lleva implcita
una serie de preguntas fundamentales sobre el por qu, el cmo, la medida y el
objeto material del fenmeno a estudiar.Un ejemplo claro podran ser los alimentos
los cuales ingresan a nuestra boca.
Halos de inhibicin: zona alrededor de un disco de antibitico en un
antibiograma en el que no se produce crecimiento bacteriano en una placa de agar
inoculada con el germen.
Patgeno:Organismo que tiene la capacidad de causar enfermedad.
JUSTIFICACIN

Las enfermedades gastrointestinales son uno de los principales problemas de
salud pblica en Mxico. Se transmiten, ya sea por va fecal-oral, o bien por el
consumo de agua y alimentos contaminados. Afectan principalmente a la
poblacin infantil. Los agentes patgenos involucrados son virus, parsitos y
bacterias. La bsqueda e identificacin de estos, en los laboratorios clnicos, se
encuentra principalmente en patgenos clsicos como: Salmonella, Shigella,
Escherechia, Vibrio, Campylobacter y Yersinisa. Existen otros generos
involucrados en estas enfermedades, como Aeromonas, que en otros pases se
han documentado como agente etiolgico de enfermedades gastrointestinales.

Estas enfermedades son una de las primeras causas de consulta y tambin una
de las primeras causas de muerte en Mxico y en el mundo. Por ello se considera
un problema de salud pblica en el nivel mundial que afecta a personas de
cualquier edad y condicin social, aunque los grupos ms vulnerables son los
nios y los ancianos. (Len Ramrez S, 2002)

En el mercado nacional, los productos con fines antibacteriales se comercializan
en diferentes presentaciones, como geles, y todas cumplen el mismo propsito:
librarte de agentes dainos (PROFECO, 2010).


OBJETIVOS

Objetivo General
Desarrollar un Gel Antibacterial capaz de inhibir el crecimiento de la
bacteria E. Coli.
Objetivos particulares
Determinar la combinacin de los niveles de cada uno de los factores con
un mejor resultado en su efectividad.
Determinar los factores que influyen en la elaboracin del gel para obtener
un pH. Neutro.


HIPTESIS

Por lo menos una de las combinaciones propuestas del gel inhibir el crecimiento
de E. Coli en un ambiente controlado para ser utilizado.

ANTECEDENTES

En la industria de la limpieza, hay muchos malentendidos sobre desinfectantes y
sanitizantes. Los trminos son frecuentemente intercambiados en discusiones, y
mucha gente cree que significan lo mismo. A pesar de que son similares, hay
diferencias entre sanitizar y desinfectar.
Un desinfectante es un qumico que destruye completamente todos los
organismos listados en su etiqueta. Los organismos que matan son bacterias que
causan enfermedades y patgenos, y podran no matar virus y hongos. Desde un
punto de vista legal (segn la EPA), los desinfectantes deben reducir el nivel de
bacterias patgenas en un 99.999 por ciento durante un lapso de tiempo superior
a 5 minutos pero que no exceda a 10 minutos.
Un sanitizante es un qumico que reduce el nmero de microorganismos a un nivel
seguro. No necesita eliminar el 100 por ciento de todos los organismos para ser
efectivo. Los sanitizantes no matan virus y hongos, en una situacin de
preparacin de alimentos, el sanitizante debe reducir la cuenta de bacterias en un
99.999 por ciento. Los sanitizantes requieren matar el 99.999 por ciento de los
organismos presentes en 30 segundos. (Steve Hanson, 2005)
Un gel (del latn gelu - fro, helado o gelatus - congelado, inmvil) es un sistema
coloidal donde la fase continua es slida y la dispersa es lquida. Los geles
presentan una densidad similar a los lquidos, sin embargo su estructura se
asemeja ms a la de un slido(Aker, 2000)

El gel pertenece al grupo de los semislidos. En un gel el movimiento del medio de
dispersin est restringido por partculas solvatadas entrelazadas o por
macromolculas de la fase dispersada. El estado semislido es debido al aumento
de viscosidad causado por entrelazamiento y por la consecuente alta friccin
interna. Las sustancias gelificantes absorben agua y se hinchan.

Ciertos geles tienen la capacidad de pasar de un estado coloidal a otro, es decir,
cuando se agitan son fluidos y se solidifican cuando permanecen inmviles. Esta
caracterstica se denomina tixotropa. El proceso por el cual se forma un gel se
denomina gelacion.
El gel antibacterial es un agente qumico que destruye o inhibe el crecimiento de
organismos dainos.Los alcoholes que se usan pueden ser primarios, secundarios
o terciarios, en funcin del nmero de tomos de hidrogeno sustituido en el tomo
de carbono al que se encuentran enlazado el grupo hidroxilo. (Rodrguez C. R.,
2005)
Es un producto diseado para el control bacteriano sobre las manos de las
personas que manipulan bien sea alimentos, o las materias primas utilizadas en la
fabricacin de productos comestibles. Se puede utilizar frecuentemente sin riesgos
de irritacin a la piel y a pesar de tener una base en alcohol no deja olores
residuales des pues de unos pocos segundos de haberse utilizado. Se recomienda
su uso en las zonas de empaque de productos alimenticios, en restaurantes, y
puntos de venta de comidas rpidas. Su formulacin es diseada para la industria
de los alimentos en general.

Es un excelente compuesto desinfectante para las manos. Su formulacin
especialmente balanceada permite un alto grado de desinfeccin eliminando en
cuestin de segundos bacterias, hongos, esporas y otros microorganismos
peligrosos a la salud humana. Contiene agentes humectantes para evitar
resequedad de la piel.
Las Propiedades del gel antibacterial de acuerdo con Fenner son:
Se evapora rpidamente sin dejar residuos sobre la piel.
Deja una agradable sensacin de suavidad en las manos.
Contiene agentes antibacterianos para la desinfeccin.
Ayuda al medio ambiente ya que no necesita agua ni papel para usarlo.
(Fenner, F, D. White, 1993)

Rodrguez indica las caractersticas que debe reunir el gel antibacterial para
manos:
Debe ser soluble en agua, amplio espectro de actividad
Estable: tiempo prolongado de vida til.
No debe reaccionar con materia orgnica ni inactivarse en presencia de
ella.
Escasa o nula toxicidad para el ser humano, accin rpida.
Capacidad de penetracin.
Accin residual.
Compatible con todos los materiales.
Disponibilidad y buena relacin costo-riesgo-beneficio.
No debe afectar al medio ambiente.
(Rodrguez C.R, 2005)

Materias Primas Para Elaboracin Del Gel Antibacterial.

Para la elaboracin del gel se utilizan varias sustancias que sirven y actan de
forma diferente durante el proceso, la PROFECO en su portal de internet
recomienda los siguientes ingredientes para un aproximado de 90 ml de producto:
6 cucharadas de alcohol etlico (etanol al 72%)*
cdita de carbopol
cdita de glicerina pura
de cdita de trietanolamina
(PROFECO, 2010).

En este experimento se proponen la cantidad de ingredientes para cada uno de
los niveles del diseo Taguchi L9 de la siguiente forma:
Niveles en el diseo Taguchi L9
Niveles:
Alcohol
1. 97 %
2. 70 %
3. 46 %
Trietanolamina
1. 1.5 ml
2. 2 ml
3. 2.5 ml
Glicerina
1. N/A
2. 0.5 ml
3. 1 ml
Carbopol
1. 0.1 gr
2. 0.2 gr
3. 0.3 gr

Alcohol etlico

Es el principal ingrediente en esta mezcla, sirve para reducir los microorganismos
normales de la piel, destruye la flora bacteriana y transitoria potencialmente
patgena. (Rodrguez C. R., 2005)
El alcohol etlico es el compuesto de uso tpico ms conocido y aplicado
universalmente, a raz de su eficacia frente a ciertos virus y bacterias. En los
antibacteriales comerciales se encuentra en diferentes concentraciones, desde 60
hasta 90%. Una condicin particular del etanol es que si se usa en una solucin
pura al 100%, carece casi por completo de accin germicida, el alcohol debe estar
diluido para tener efecto.

Muchos de los geles antibacteriales que se comercializan en el mercado usan el
alcohol como ingrediente activo en los porcentajes recomendados. Tambin se
fabrican algunos geles antibacteriales que contienen alcohol del tipo isoproplico,
el cual es utilizado de igual forma para uso tpico (en piel), en concentraciones del
70%, con una efectividad equivalente a la del etanol. De igual forma, encontramos
en el mercado productos como toallitas o sprays que utilizan al alcohol como
ingrediente activo
(PROFECO, 2010).

Su formula qumica es: CH3CH2OH

Las bacterias son altamente susceptibles al alcohol, pues afecta a sus protenas,
rompiendo su membrana celular o daando su estructura, con lo que tiende a
producir su muerte. Los virus tambin son sensibles al alcohol, pero en ellos los
efectos son ms variables.

Carbopol

Es una mezcla de resinas solubles en agua que tienen excelentes propiedades de
suspensin, espesamiento y formacin de geles. Es muy usada en la industria
cosmtica. Es blanco y su presentacin es en polvo. El alcohol polivinilico,
polmeros de xido de etileno y la polivinilpirrolidona son componentes del
carbopol, es un compuesto del petrleo es un polvo blanco fino incoloro, en agua
tiene excelentes propiedades de suspensin, espesamiento y formacin de geles.
(Snchez, F, 2000)
Cuando las partculas de carbopol se dispersan en el agua no slo se hinchan,
tambin producen un ligero nivel de viscosidad, es decir, adquieren consistencia
de gel, por loque se utilizan en la produccin de geles.Al neutralizar el carbopol
con una base soluble en agua, el nivel de hinchazn de sus partculas se
incrementa drsticamente, al mismo tiempo que su nivel de viscosidad.

Principales caractersticas del carbopol
El carbopol posee tres principales caractersticas, que son:
1. Hay una permanente suspensin de ingredientes solubles.
2. Su espesado es muy eficiente, ampliando el rango de sus caractersticas
reolgicas.
3. Existe estabilizacin en agua de emulsiones de aceite.
Formula: [-CH2-CH(COOH)-]n


Trietanolamina (TEA)
Es un alcalinizante que funciona para reducir el pH (medida de la acidez o
alcalinidad de una solucin) de las sustancias, bajando la acidez, es un lquido
incoloro o amarillo plido viscoso e giroscpico, con ligero olor amoniacal, en agua
y alcohol, cloroformo es altamente soluble, en ter o benceno es ligeramente
soluble.
La trietanolamina es una amina terciaria y un tri-alcohol. Es un lquido ligeramente
amarillo o slido (cuando posee impurezas), es higroscpico, voltil, de ligero olor
amoniacal, totalmente soluble en agua y miscible con la mayora de los solventes
orgnicos oxigenados.
La trietanolamina es utilizada en un gran nmero de procesos industriales, y en la
manufactura de diversos productos de consumo.
La TEA es utilizada como intermediario en la manufactura de surfactantes
aninicos y no inicos, es utilizado en la produccin de agentes emulsificantes y
dispersantes para detergentes y ceras de uso domstico, tambin se usa en la
fabricacin de lubricantes, tintes y agentes antiestticos para textiles, en
herbicidas, en aceites minerales y vegetales, parafinas y ceras, ungentos
farmacuticos, demulsificantes de petrleo. Es utilizada como solvente para
casena, laca y tintes.
La TEA es utilizada tambin como acelerador de vulcanizacin, como agente
ablandador en curtido de pieles, en la manufactura de resinas sintticas,
plastificantes, adehesivos y selladores. Gracias a sus propiedades quelantes, el
TEA es usado como inhibidor de la corrosin, en electroplatinado, limpieza de
metales y remosin de xido, y en fluidos lubricantes y de trabajo en metales. Este
compuesto es ampliamente utilizado en productos de cuidado personal como
cremas, lociones, limpiadores de piel, shampoo, productos para cabello,
desodorantes, fragancias, maquillaje, productos para uas y cutcula.
Monografas Farmacuticas, C.O.F. de Alicante (1998)

Formula: (HOCH2CH2)3N

La glicerina

Es un lquido espeso, neutro utilizado para disolver otras sustancias y suavizar las
manos.(Gennaro, A, 2003)
Es un lquido incoloro, con olor ligero. Su punto de fusin es igual a 20 C. Tiene
una densidad especfica igual a 1.2613 g/mLa 20C. Es soluble en agua y
acetona. Tiene una presin de vapor igual a 1.58x10-4 mm Hg a 25 C y una
constante de la ley de Henry igual a 1.73x10-8 atm m3/mol a 25 C.
El uso ms frecuente de la glicerina es la elaboracin de resinas alqudicas. Otras
aplicaciones son la fabricacin de medicinas y artculos de aseo, como pasta de
dientes; como agente plastificante para el celofn y como agente humidificante de
productos derivados del tabaco. Dado que existen otros productos ms baratos,
solamente el 5% de la produccin industrial de glicerina se destina a la fabricacin
de explosivos derivados de ella. Por su afinidad con el agua y su viscosidad, la
glicerina se utiliza para la tinta de los tampones de sellar. Tambin se usa para
lubricar la maquinaria que bombea los productos del petrleo, debido a su
resistencia a disolverse en los lquidos del petrleo. Por su alta viscosidad y
ausencia de toxicidad, la glicerina es un excelente lubricante para las mquinas
procesadoras de alimentos.
Las grasas y aceites simples son steres de cidos grasos y glicerina. Una vez
obtenida como producto secundario en la fabricacin del jabn despus de haber
tratado las grasas y aceites con lcali, la glicerina bruta se purifica por destilacin.
Su frmula qumica es:C3H8O3

Escherichia Coli

El E. colies la abreviatura de Escherichiacoli, un tipo de bacteria que vive en el
intestino. La mayora de las E. coli son inofensivas. Sin embargo, algunos tipos
pueden producir enfermedades y causar diarrea. Es ms, una variedad de E. coli,
denominada 0157:H7 causa una diarrea hemorrgica, y a veces puede provocar
insuficiencia renal e incluso la muerte, especialmente en nios y en adultos con
sistemas inmunolgicos debilitados. En 1982 se identific el primer brote de E. coli
O157:H7 por comer carne de hamburguesas contaminadas con la bacteria. Desde
entonces, las epidemias de E. coli O157:H7 han sido asociadas con otros tipos de
alimentos, tales como espinacas, lechuga, repollo y, ahora, tambin pepino.
Se pueden adquirir infecciones por E. colial consumir alimentos que contienen la
bacteria. La higiene es la nica defensa para prevenir las infecciones
alimentarias.Lavar las manos con jabn bajo la llave con agua tibia despus de
usar el bao, cambiar algn paal de un beb y antes de preparar los
alimentos.Evitar el consumo de leche no pasteurizadasobre todo por parte de
nios y ancianos, y de carne poco hecha. Los nios deberan mantenerse lejos de
ambientes contaminados de heces de animales.No baarse en aguas dulcesy en
cuanto a verduras y frutas, tienen que ser lavadas con atencin. No es necesario
que sean eliminadas de las dietas, los pepinos incluso pueden ser ingeridos.
La bacteria no es resistente al calor, es decir, quecociendo bien los vegetaleso
cocinando bien la carne prevenimos la infeccin. Tambin lavndolos bien. Es
importante tener en cuenta que s resiste el fro y los ambientes cidos.
La bacteria de Escherichiacoli puede crecer bien entre pH 6 y pH 8, pero su pH
interno es siempre 7.6 o muy cercano a ese valor

CAPITULO 2 MTODOS
Fue necesario realizar este proyecto de factibilidad a travs de una metodologa
que permiti recabar informacin y datos relevantes sobre las caractersticas del
gel antibacterial. Para ello se utiliz mtodos, tcnicas e instrumentos:
Mtodo Antibiograma de Difusin de Microdiscos (KIRBY-
BAUER).

El principal objetivo de cualquier prueba de sensibilidad antimicrobiana es predecir
cul ser el resultado de un tratamiento. En muchas ocasiones los resultados se
expresan, para un patgeno aislado y analizado, de forma cualitativa: como
sensible (en cuyo caso se supone que un tratamiento estndar con aquel
compuesto producir la curacin), resistente (el antimicrobiano examinado no
ser eficaz en aquella patologa) o intermedio (la efectividad de aquel compuesto
depender de su localizacin o de la dosificacin utilizada).
Un segundo objetivo de las pruebas de sensibilidad antimicrobiana es la de
obtener series histricas que permiten predecir el comportamiento de un
tratamiento cuando ste se hace de forma emprica. (Pruebas de sensibilidad a
agentes antimicrobianos).

La prueba de difusin en disco se basa en la capacidad de muchos agentes
antimicrobianos de difundir en el agar creando un gradiente continuo de
concentracin. Si el disco que contiene el antibitico se deposita sobre una placa
recin inoculada, se producir la inhibicin del crecimiento del microorganismo
analizado en un punto del gradiente y dar como resultado un rea concntrica al
disco de inhibicin del crecimiento. Esta rea, al ser proporcional a la CMI
permitir la distincin de cepas sensibles, resistentes o intermedias. Esta prueba
est bien estandarizada y se acepta universalmente, si se realiza adecuadamente
con los controles necesarios

Discos de antibiticos: los discos deben mantenerse en el freezer o en el
refrigerador para mantener la actividad del antibitico. Deben ser sacados una o
dos horas antes de su uso.
Debemos fijarnos siempre en la fecha de vencimiento antes de usarlos.

Patrn de turbidez: para estandarizar la densidad del inculo se usa una
suspensin desulfato de bario como estndar de turbidez que corresponde a un
0,5 del nefelmetro de Mc Farland.

La densidad se corrobora con un espectrofotmetro. Luego de preparado el patrn
de turbidez se distribuye en tubos de ensayo (4 a 6 ml por cada tubo). Estos
deben ser guardados a temperatura ambiente y protegidos de la luz. (Aroco, V.
Seija, R. Vignoli, 2010)

El mtodo de Kirby-Bauer es probablemente el ms utilizado por su sencillez y, si
se realiza correctamente, presenta una correlacin muy buena con los mtodos
cuantitativos.
Algunos trabajan con mtodos semicuantitativos como el E-test. Estos sistemas
son una modificacin del mtodo de Kirby-Bauer, en los que en lugar de discos se
utilizan tiras de papel impregnadas con un gradiente del antibitico, lo que permite
una semi-cuantificacin. En el presente diseo de experimentos fue utilizado el
Kriby-Bauer.

Taguchi L9
El diseo de experimentos est relacionado con la bsqueda de las relaciones
causa-efecto, teniendo aplicacin en investigaciones orientadas a la biologa,
medicina, agronoma. Ciencias sociales, entre otras.
La esencia de la metodologa del Dr. Taguchi es la optimizacin de productos y
procesos mediante la robustez de los mismos, obteniendo alta calidad y bajo
costo.
El modelo funcionacon arreglos de las variables y sus niveles, de estos se
obtienen una serie de ecuaciones. El objetivo de las ecuaciones es encontrar la
ms robusta, frente a todos los tipos de ruido al menor costo posible. El
funcionamiento se basa en el anlisis de los efectos, que son obtenidos por las
interacciones de las variables de entrada, combinadas con cada nivel de las
mismas.
La metodologa cuenta con tres partes medulares para su implementacin, las
cuales son
a) Diseo del sistema
b) Diseo de parmetros:
a. Identificar factores que afectan las caractersticas de calidad en
cuanto a su magnitud y en cuanto a su variabilidad
b. Definir los niveles ptimos en que debe fijarse cada parmetro o
factor, a fin de optimizar la operacin del producto y hacer este ms
robusto
c. Identificar los factores que no afectan substancialmente la
caracterstica de calidad a fin de liberar el control de estos factores y
ahorrar costos de pruebas
c) Diseo de tolerancias
Para una anlisis de experimento, existen diferentes mtodos que se pueden
utilizar,un arreglo ortogonal oun diseo factorial fraccionado, el inconveniente es;
el factorial va creciendo cuando el nmero de factores aumenta, haciendo ms
difcil el anlisis al aumentar las interacciones, as como identificar las condiciones
ptimas especficas a experimentar. El arreglo ortogonal se puede comparar con
una replicacin factorial fraccionada, de manera que conserva el concepto de
ortogonalidad y contrastes. Un experimento factorial fraccionado es tambin un
arreglo ortogonal.
Taguchi desarroll una serie de arreglos particulares que denomin:


La (b)
C

Donde:
a = Representa el nmero de pruebas o condiciones experimentales que se
tomarn. Esto es el nmero de renglones o lneas en el arreglo.
b = Representa los diferentes niveles a los que se tomar cada factor.
c = Es el nmero de efectos independientes que se pueden analizar, esto es el
nmero de columnas.

Un arreglo ortogonal es una tabla de nmeros. Como ejemplo de un arreglo
ortogonal tenemos el siguiente:


De acuerdo con la notacin empleada por Taguchi al arreglo mostrado como
ejemplo, se le llama un arreglo L4, por tener cuatro renglones.

En general, para un arreglo a dos niveles, el nmero de columnas (efectos o
factores) que se pueden analizar, es igual al nmero de renglones menos 1.

Taguchi ha desarrollado una serie de arreglos para experimentos con factores a
dos niveles, los ms utilizados y difundidos segn el nmero de factores a analizar
son:

No. de factores a analizar Arreglo a utilizar No. de condiciones a probar
Entre 1 y 3 L4 4
F A C T O R E S (c)
No. (a) A B C Resultado
1 1 1 1 Y1
2 1 2 2 Y2
3 2 1 1 Y3
4 2 2 1 Y4
1 , 2 = Niveles de los Factores (b)
Tabla 1
Entre 4 y 7 L8 8
Entre 8 y 11 L12 12
Entre 12 y 15 L16 16
Entre 16 y 31 L32 32
Entre 32 y 63 L64 64


Para el estudio de los factores que afectan a un producto o proceso, Taguchi se
basa en un conjunto pequeo de matrices del diseo. Estas matrices definen
diseos ortogonales, es decir, sus columnas son ortogonales. Los diseos
factoriales 2
k
son ejemplo de diseos ortogonales. Taguchi utiliza los valores 1 y 2
para denotar los niveles bajo y alto, respectivamente en lugar de la notacin usual
, puesto que considera la posibilidad de ms de dos niveles en cada factor. En la
metodologa de Taguchi se consideran diseos ortogonales fraccionarios, es decir,
se reduce el nmero de filas de la matriz del diseo mediante identificacin de
factores principales y de factores de interaccin. Esto permite una mayor viabilidad
del estudio de tratamientos. Por ejemplo, para el diseo de 2
7
de 7 factores con
dos niveles, Taguchi considera la siguiente matriz de diseo:

1111111
1112222
1221122
1222211
2121212
2122121
2211221
2212112

Esta matriz es referida como matriz del diseo L
g
. Tiene siete columnas
ortogonales y ocho filas en contraste con los 2
7
=128 experimentos que
constituiran la matriz del diseo de un diseo factorial completo de siete factores
con dos niveles. Esta matriz L
g
puede ser utilizada tambin para el estudio de un
nmero inferior de factores, cuando no se asignan a algunas de las columnas
factores principales (segn se ha visto en el tema anterior). Con un conjunto
relativamente pequeo de diseos, Taguchi proporciona un catlogo reducido de
modelos que permiten abordar un nmero relativamente alto de experimentos en
ingeniera. Por ejemplo, Taguchi considera los siguientes diseos ortogonales
fraccionarios con dos niveles: L
4
, L
8
, L
12
, L
16
, L
32
y L
64
. El listado de diseos con
tres niveles incluye: L
9
, L
8
, L
12
, L
18
, L
27
y L
81
. En general, un diseo L
N
est
definido mediante una matriz del diseo con N filas y permite considerar hasta N-1
factores.
Intuitivamente, cuando se reduce el nmero de filas de la matriz del diseo
asociada, por ejemplo, a un diseo factorial de 2
k
se produce una prdida que se
refleja en:
La prdida de capacidad para estimar las interacciones entre factores
La prdida de capacidad para estimar algunos de los efectos principales
Taguchi proporciona reglas grficas para cada matriz del diseo utilizada en su
catlogo. Especficamente, en los grficos que propone, los nodos son asignados
a factores principales y los segmentos que unen dos nodos son asignados a los
factores de interaccin correspondientes.
Seleccin de un diseo ortogonal.
Para seleccionar un diseo ortogonal se utiliza el siguiente mtodo. Notemos
primero que un diseo L
N
tiene asociados N-1 grados de libertad. Entonces, un
diseo apropiado para el desarrollo de un estudio es el ms pequeo cuyos
grados de libertad estn justo por encima de los grados de libertad asociados con
todos los factores e interacciones. El proceso de seleccin se puede resumir en
los siguientes puntos:
1. Cada factor K niveles tiene K-1 grados de libertad
2. Los grados de libertad para un factor de interaccin doble son el producto
de los grados de libertad de los factores principales que lo definen
3. Los grados de libertad requeridos para todos los factores principales e
interacciones se suman para obtener el total de grados de libertad G.L.
TOTAL
requeridos en el desarrollo del experimento.
4. Se seleccionara el L
N
ms pequeo para el cual N-1G.L.
TOTAL
y que puede
acomodar a los factores e interacciones que intervienen en el experimento.
En algunos casos, el estudio requiere combinaciones de factores principales e
interacciones que impiden que el diseo seleccionado en el punto 4 sea apropiado
y, por tanto, se tenga que considerar el siguiente L
N
en magnitud. Por ejemplo,
este hecho se da cuando se incluye un nmero elevado de factores de interaccin
en el estudio. Para resolver este problema tambin se puede desarrollar un
anlisis preliminar de los factores de interacciones que son realmente
significativos.
La metodologa planteada por Taguchi ha ocasionado tambin bastante
controversia desde su introduccin en Estados Unidos. Las crticas esenciales se
formulan en relacin con aspectos estadsticos ms que con su metodologa de
medir la calidad en funcin de la perdida que un producto ocasiona a la sociedad y
de crear diseos robustos.
Una de las crticas se basa en la confusin de efectos que se produce en los
diseos ortogonales fraccionarios que utiliza. Debido al elevado nmero de
factores en relacin con el nmero de triadas, los tratamientos dados por las
diferentes combinaciones de factores no se pueden estudiar en profundidad.
Adems, los diseos que propone no son siempre ptimos, si bien existen otros
diseos del mismo tamao que permiten la estimacin delmismo nmero de
factores sin confundir efectos de factores principales con efectos defactores de
interaccin doble.
Otro inconveniente de esta metodologa es que las razones seal-ruido utilizadas
nosiempre proporcionan los resultados deseados. En algunos casos se puede
comprobar que no hacen eficiente el uso de datos experimentales.
A pesar de los inconvenientes sealados, la filosofa de Taguchi ha tenido una
fuerte influencia en el uso de la tcnica de diseo de experimentos en el mbito de
la teora de la calidad. Quizs una de las razones del seguimiento de esta
metodologa es queproporciona un `libro de recetas' donde se ofrece un conjunto
reducido de diseos, entrelos que se realiza la seleccin. El procedimiento de
seleccin se hace entonces bastante sencillo, as como la asignacin de factores a
columnas de la matriz del diseo elegida. Losgrafos que representan las
combinaciones de los factores principales y de los factores deinteraccin doble
son bastante simples, facilitndose la determinacin ptima de nivelesde los
factores. Aunque las herramientas o los elementos estadsticos utilizados en la
metodologa de Taguchi no son ptimos, suponen un gran avance en la mejora de
lacalidad y en la aplicacin de las tcnicas de diseo de experimentos en este
contexto.

Diseo De Experimentos
Preparacin de muestras de gel antibacterial.
El gel usado en esta investigacin es realizado con los ingredientes
recomendados por la PROFECO adicionando 25 ml de agua corriente (los cuales
no son propuestos como una variable a controlar) al final para una mayor facilidad
de mezclado de todos los ingredientes. La mezcla fue realizada de la siguiente
manera.
En un recipiente de plstico se vertieron los ingredientes para hacer la
combinacin de los arreglos propuestos por el software Statistica descritos en el
punto anterior en el siguiente orden:
Alcohol,
Tretanolamina,
Glicerina (en los que lo requieren) y,
Carbopol
Se mezclaron con un abatelenguas hasta que la mezcla quedo sin grupos del
carbopol para obtener el gel.
Medio de cultivo
Primero se pesaron 11.75 gr de medio de cultivo en matraz erlenmeyer Agar para
mtodos estndares, enseguida se agregaron 500 ml de agua destilada al matraz
y se agitaron, se calent hasta el punto de ebullicin. Se esterilizo a 121C/15 lbf
por 15 min, se espero hasta que agar bajara su temperatura hasta 40 C y se
baceo en cajas de petri 15 ml, se refriger y almaceno por 48 hrs.
Preparacin de sensidisco
Se recortaron crculos de 0.6 cm de dimetro de papel filtro, se impregnaron los
discos con el agente activo del gel antibacterial (sin carbopol) hasta su mxima
absorbencia para despus colocarlos en la caja de Petri como se explica a
continuacin.
Inculo
Se tomo una asada del microorganismo (E. Coli) y se agito en caldo nutritivo, se
incubo 24 hrs a 37C hasta turbidez de 0.5 escala MC Farland.
Se colocaron las cajas de petri en el rea de trabajo. Se sumergi un hisopo hasta
impregnarlo del microorganismo para poder impregnarlo en toda la superficie del
medio de cultivo, se colocaron los sensidiscos en el centro de cada uno de los
cuatro cuadrantes en los que se divide la caja de petri que contiene el medio de
cultivo y el microorganismo impregnado. Se incubaron a 37C por 24 hrs.
Mediciones:
Medicin de efectividad
De acuerdo con la RAE efectividad es la capacidad de lograr el efecto deseado o
esperado.
En esta investigacin se espera que el agente activo del gel sea capaz de inhibir el
crecimiento de la bacteria E. coli y con ello contrarrestar el riesgo de contraerlo y
ser un peligro para la salud, para ello, adems de realizar las pruebas pertinentes
con nuestras muestras se compara contra un gel antibacterial comercial y sus
resultados se muestran en la tabla.
Para obtener la evidencia de la actividad antibacterial, despus de incubar por 24
hrs el microrganismo de E. coli en las cajas de Petri ya con los sensidiscos
colocados e impregnados con el agente activo del gel se midi con una regla los
halos de inhibicin que tena cada experimento y sus rplicas y, se obtuvieron los
resultados mostrados en la tabla en donde una distancia mayor significa una
mayor efectividad contra el microrganismo usado para esta investigacin.
Medicin de pH
El smbolo pH es utilizado mundialmente para hacer referencia a la frmula del
potencial de hidrgeno (H), es decir la cantidad de hidrgeno que existe en una
solucin. As, las diferentes sustancias con las que podemos entrar en contacto
poseen un nivel de pH diferenciado que los caracteriza y que los hace
especialmente tiles o beneficiosos para determinados casos. La escala del pH se
establece en torno a lo que se considera el nivel medio: el agua. Este recurso
natural posee una acidez y una alcalinidad nula, por lo cual se considera el punto
medio entre los dos extremos, el cido y el alcalino.

De 7 a 0, es decir, cuando se va al comienzo de la escala, estaremos hablando de
los elementos o sustancias ms cidos. El elemento con mayor nivel de acidez
conocido es el cido que se encuentra en las bateras, sustancia que posee un pH
de 0, colocndose entonces al tope de la escala. Cuando pasamos el punto del
agua hacia arriba, es decir de 7 a 14, encontramos los elementos o sustancias
ms alcalinas, las que poseen menor nivel de acidez.

La mayor parte de los elementos alcalinos son elementos que sirven mucho para
la limpieza o desinfeccin como por ejemplo limpiadores, blanqueadores, el
amonaco, el jabn. La escala del pH es sumamente importante para conocer las
caractersticas de diferentes elementos y ambientes ya que se considera que en
espacios sumamente alcalinos o sumamente cidos no es posible la existencia
devidapor la altsima o bajsima presencia de hidrgeno.

La piel del ser humano contiene agua adems de grasa, y ella no tiene una
medida neutra, sino que es ligeramente cida, un pH 5.5, ya que tiene sustancias
con esta caracterstica que actan como defensa frente a organismos txicos.
Para mantener la piel sana lo recomendado es mantener el pH propio cerca de los
5.5, hasta un lmite de 5.9. Esto se puede lograr con geles o cremas que
contengan esa medida,
El portal de educando.edu.do indica que si se tratara de un pH mayor a 10 o
menor a 3, la piel pudiera disolverse causndonos un gran dao. Saber cul es el
pH de las sustancias es muy importante para nuestra seguridad ante cualquier
producto qumico. Es por eso la importancia de cuidar las concentraciones de
cada uno de los elementos que intervienen en la fabricacin del gel antibacterial
para as cuidar las manos de las personas que lo apliquen y evitar un dao
colateral. Hanna Instruments en su sitio de internet recomienda que los productos
que entran en contacto con la piel deben de tener su pH lo ms cercano posible a
5,5 o en todo caso cercano a la neutralidad. Es lo que se busca en esta
investigacin.
Para le medicin del PH se agreg el carbopol, y se midieron con tiras especiales
para medir el PH obteniendo resultados inmediatos sin dar lugar a la duda pues
los colores eran claros con su patrn de medida y los resultados se muestran en la
tabla.

CAPITULO 3 RESULTADOS Y DISCUSIN
Evidencia de actividad antibacterial
El diseo obtenido en el software Statistica para el arreglo L9 con un orden
estandarizado se muestran en las columnas de la 2 a la 5 de la tabla 2.
De la tabla los resultados de la evidencia antibacterial se muestran en la columna
de efectividad. Entre mayor son los valores, mejor funcionamiento tiene. En las
ultimas columnas se muestra que tan acido o base llegan a ser las mezclas.












Tabla 2
Niveles:
Alcohol
1. 97 %
2. 70 %
3. 40 %
Trietanolamina
1. 1.5 ml
2. 2 ml
3. 2.5 ml

Glicerina
1. N/A
2. 0.5 ml
3. 1 ml
Carbopol
1. 0.1 gr
2. 0.2 gr
3. 0.3 gr
# de
exp
alco-
hol
trieta-
nola-
mina
glicerina carbo-
pol
Efectividad PH
1 2 3 1 2 3
1 1 1 1 1 6.25 7.5 7 8 8 8
2 1 2 2 2 11.25 6 10.5 8 8 8
3 1 3 3 3 10.25 10.5 10 8 8 8
4 2 1 2 3 10.25 11 13 8 8 8
5 2 2 3 1 11 10.5 11.25 8 8 8
6 2 3 1 2 10.25 6 13.25 8 8 8
7 3 1 3 2 6.25 8.25 6 9 9 9
8 3 2 1 3 6.25 6 6.25 9 9 9
9 3 3 2 1 6.25 6 7.25 10 10 10
Resultados de Efectividad

Para la efectividad se realizo el anlisis con el software, se utiliz la caracteristica
mayor es mejor con una confiabilidad del 95%, para inhibir el crecimiento de la
bacteria en mayor proporcin. El anlisis mencionado se presenta mediante
tablas.
En la tabla 3, se muestra el anlisis de varianza de las variables en el experimento
de manera general. Se demuestra que el alcohol es el que tiene mayor
significancia respecto a las otras tres variables, al presentar un valor P<.05.

Tabla 3 Anlisis de Varianza
El efecto producido por el alcohol con concentracin del 70% (nivel 2), es
mostrado en la tabla 4. Se observa que es mayor el efecto de esta variable al
tener 2.04630 y las variables restantes con su respectivo nivel (representativo) son
menores.

Tabla 4. Seal/Ruido Esperado
El anlisis de los niveles de cada una de las variables son detallados en la tabla 5
e ilustrados en la grafica 1. Esto nos demuestra que los niveles propuestos en la
tabla 4 de cada una de las variables son sus muestras con mayor efecto, y que el
alcohol es el que tiene mayor efecto en el experimento para la inhibicin de la
bacteria.

Tabla 5 Anlisis de los niveles

Grfica 1
Resultado de pH
Para la medicion del pH se analizan los datos con el software en este caso se
utilza la caracteristica menor es mejor con un nivel de cofianza del 95%. El
anlisis mencionado se presenta mediante tablas.
En la tabla 6, se muestra el anlisis de varianza de las variables en el experimento
de manera general, observndose un valor P<.05. Es claro que todos los factores
analizados son los significativos para el anlisis.

Tabla 6 Anlisis de Varianza
En la tabla de Seal Ruido esperado bajo condiciones optimas (tabla 7) se
aprecia que las desviaciones estndar de cada uno de los factores se obtuvieron
valores de cero.

Tabla 7 Seal/ Ruido Esperada
El anlisis de los niveles de cada una de las variables son detallados en la tabla 8
e ilustrados en la grafica 2. Los niveles en Alcohol (1,2) Trietanolamina (1,2),
Glicerina (1;3) y Carbopol (2,3), son los que no llevan obtener un menor es
mejor.


Tabla 8 Anlisis de los niveles

Grfica 2

Conclusiones y Recomendaciones.

Se logro inhibir el crecimiento de E. coli con todas las combinaciones propuestas.
La combinacin obtenida en el software para los niveles de los factores son los
siguientes:
Alcohol (Nivel 2), 70%
Trietalonamina (nivel 3), 2.5 ml
Glicerina (nivel 3), 0.2 ml
Carbopol (Nivel 3), 20mg
Con esta combinacin esperamos un grado de inhibicin de dimetro de 12.16mm
con una confiabilidad de 95%.
En lo concerniente al pH se obtuvieron resultados desfavorables para el anlisis,
debido que el mtodo que se utilizo para medir el pH no fue confiable y se
demostr en la tabla 8, una hiptesis surgida ante tal problemtica fue que las tiras
medidoras de pH. no estaban en condiciones optimas y no se conto con el equipo
necesario para realizar las pruebas con mayor confiabilidad.
Adems de lo anterior al inicio del experimento se manejo un nominal es mejor
para esta variable (Neutro) sin embargo en el desarrollo del proyecto nos
percatamos que todas las combinaciones daban un pH con tendencia alcalina, por
tanto se toma la decisin de utilizar la caracterstica menor es mejor
Recomendamos se vuelva a hacer el anlisis de pH con un instrumento de
medicin con mayor exactitud y confiabilidad.





FUENTES DE INFORMACIN

Avis K.E., Lieberman H.A., Lachaman L. (1993) " PHARMACEUTICAL
DOSAGE FORMS" 2ed. MARCEL DEKKER INC, USA.
Aker, David, Como construir marcas poderosas, Edit, Gestin 2000,
Madrid Espaa, 2000.
Fenner, F, D. White, Virologa mdica, 2. Ed: Ediciones cientficas La
Prensa Mexicana, Mxico, 1993
Gennaro, A. Remington de Farmacia. 20 Edicin. Buenos Aires: Mdica
Panamericana. 2003.
Leppard, B. Ashton, R. Tratamiento en Dermatologa. Radcliffe Medical
Press. Oxford. 1994.

Ramrez Luis Felipe, Santoyo,Alexander, Ortiz Flores Ma. Gpe. Elaboracin
de un gel antibacterial y repelente de mosquitos.
Rodrguez C. R. "Vademecum Acadmico De Medicamentos".
Rodrguez C. R. "Vademecum Acadmico De Medicamentos".

Snchez, F; Gmez, P. Bases para la atencin farmacutica del acn
vulgar Ediciones Daz de Santos. 2000
Sanz Elena (Mayo, 2011) Qu es la bacteria E.Coli? Recuperado en
http://www.muyinteresante.es/salud/preguntas-respuestas/ique-es-la-
bacteria-ecoli
Torres Mara Eugenia. Relacin husped parasito: mecanismos de defensa
del husped. Recuperado en
http://www.educa2.madrid.org/web/educamadrid/principal/files/6046b373-
a0b6-4737-8f6b-4553dfefcd53/14.-
%20relacion%20huesped%20parasito.pdf
Anlisis de productos desinfectantes y antibacteriales. Recuperado
www.profeco.gob.mx Marzo 2010
Pruebas de sensibilidad a agentes microbianos. Recuperado
http://minnie.uab.es/~veteri/21273/Practica%202.2009-10.pdf
Profeco (2009) TV #14.6 Tecnologa domstica Profeco: Gel antibacterial,
en lnea. Recuperado http://revistadelconsumidor.gob.mx/wp-
content/uploads/2009/06/gel-antibacterial1.pdf
Mtodos R. Taroco, V. Seija, R. Vignoli. Estudio de la Sensibilidad
Antibitica. 2010
Manual de Procedimientos Diagnstico y caracterizacin de Shigellaspp.
2007. Recuperado en
http://fos.panalimentos.org/LinkClick.aspx?fileticket=8Ogf8C9F5%2F8%3D&
tabid=120&mid=460&language=es-ES
Salmonella. Recuperado en
http://www.tchd.org/pdfs/salmonella_spanish_fact_sheet.pdf
Salmonella. Recuperado en http://www.bvsops.org.uy/pdf/salmonella.pdf
Pruebas de desempeo de productos. Recuperado en
http://www.inti.gob.ar/productos/pdf/mat_escherichia_coli.pdf
Vibrio. Recuperado en http://www.bvsops.org.uy/pdf/vibrio.pdf
Reologa. Recuperado en
http://fluidos.eia.edu.co/hidraulica/articuloses/conceptosbasicosmfluidos/reol
ogia/reologia.html
Manual de procedimientos Campylobacter .Recuperado en
http://www.cdc.gov/ncidod/dbmd/gss/publications/documents/Argentina-
LevelI/ManualProcedimientos_Campylobacter.pdf
Aeromonas. Recuperado en http://www.bvsde.paho.org/cd-
gdwq/docs_microbiologicos/Bacterias%20PDF/Aeromonas.pdf
Coloides. Recuperado en
http://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/60052/mod_resource/cont
con/0/coloides2013.pdf
Glosario de Microbiologa. Recuperado en
http://www.solociencia.com/biologia/microbiologia-glosario.htm
Factores que afectan el crecimiento .Recuperado en
http://www.biblioteca.upibi.ipn.mx/Archivos/Material%20Didactico/Microbiolo
g%C3%ADa%20ambiental/IV.%20Crecimiento%20microbiano%202-
Factores%20ambientales.pdf
El Ph en nuestra vida. Junio 2010. Recuperado en
http://www.educando.edu.do/articulos/estudiante/el-ph-en-nuestra-vida/
Qu es Escherichia Coli?. Recuperado en
http://www.abc.es/20110531/sociedad/abci-escherichia-coli-pepinos-
201105301450.html