You are on page 1of 7

ANALISIS SECARA ENZIMATIS

Oleh : Fina Tri Handayani


1. Imunosio!imia dan imunohiso!imia
Imunohiso!imia diari!an se"a#ai suau meode unu! mendee!si suau mole!ul yan# ada di
$arin#an den#an men##una!an ani"odi %oli!lonal aau mono!lonal erhada% mole!ul yan#
a!an didee!si &meru%a!an rea!si ani#en'ani"odi( dan da%a mem"eri!an #am"aran
!ualiai) dari inensias *arna yan# er"enu! mau%un #am"aran !uaniai). Te!ni!
imunohiso!imia da%a di#una!an unu! mem%erla$ari disri"usi en+im yan# s%esi)i! %ada
sru!ur sel yan# uuh &normal,len#!a%(- mendee!si!an !om%onen sel- "ioma!romole!ul
se%eri %roein- !ar"ohidra.
.rinsi% dari e!ni! imunohiso!imia adalah adanya i!aan ani#en'ani"odi yan# di#una!an
unu! mendee!si sauau mole!ul dalam $arin#an. Tem%a %en#i!aan anara ani"odi den#an
ani#en diideni)i!asi den#an %enanda yan# "iasanya dile!a!an %ada ani"odi dan "isa
di/isualisasi se0ara lan#sun# aau den#an rea!si unu! men#ideni)i!asi %enanda. %enanda
da%a "eru%a senya*a "er*arna- +a "er)luoresensi- lo#am "era- la"el radioa!i)- aau en+im.
Terda%a dua meode dasar ideni)i!asi ani#en dalam $arin#an den#an imunohiso!imia- yaiu
meode lan#sun# &dire0 mehod( dan ida! lan#sun# &indire0 mehod(.
a. Meode lan#sun# &dire0 mehod(
Meode lan#sun# meru%a!an meode %en#e0aan sau lan#!ah !arena hanya
meli"a!an sau $enis ani"odi- yaiu ani"odi yan# erla"el- 0onohnya aniserum
er!on$u#asi )luores0ein isohio0yanae &FITC( aau rodhamin.
". Meode ida! lan#sun# &indire0 mehod(.
Meode ini men##una!an dua ma0am ani"odi- yaiu ani"odi %rimer &ida! "erla"el(
dan ani"odi se!under &"erla"el(. Ani"odi %rimer "er%eran men#enali ani#en yan#
diideni)i!asi %ada $arin#an &)irs layer(- sedan#!an ani"odi se!under a!an "eri!aan
den#an ani"odi %rimer &se0ond layer(. Ani"odi !edua meru%a!an ani'ani"odi
%rimer. .ela"elan ani"odi se!under dii!ui den#an %enam"ahan su"sra "eru%a
!romo#en. 1romo#en meru%a!an suau #u#us )un#si senya*a !imia*i yan# da%a
mem"enu! senya*a "er*arna "ila "erea!si den#an senya*a erenu. Conoh
!romo#en adalah FITC- rodhamin- dan Te2as'red &dise"u meode
immuno)luores0en0e- !arena da%a "er)luoresensi(3 %ero!sidase- al!ali )os)aase- aau
#lu!osa o!sidase &dise"u meode immunoen+yme- !arena "eru%a en+im(.
.rinsi% dan e!ni! imunosio!imia dan imunohiso!imia sama- %er"edaannya hanya erlea!
%ada sam%el yan# di#una!an. Imunohiso!imia men##una!an ani#en %ada $arin#an-
sedan#!an imunosio!imia men##una!an ani#en %ada !ulur sel.
1
h%:,,***.damandiri.or.id,)ile,darma*ii%"%"a"4.%d)
h%:,,00r0.)armasi.u#m.a0.id,*%'0onen,u%loads,so%'ih0'%56'laras.%d)
7. ELISA sand*i0h
8mumnya ELISA di"eda!an men$adi dua $enis- yaiu competitive assay yan# men##una!an
!on$u#a ani#en9en+im aau !on$u#a ani"odi9en+im- dan non-competitive assay yan#
men##una!an dua ani"odi. .ada ELISA non-competitive assay- ani"odi !edua a!an
di!on$u#asi!an den#an en+im se"a#ai indi!aor. Te!ni! !edua ini serin#!ali dise"u se"a#ai
:Sandwich: ELISA.
ELISA da%a di#una!an unu! mendee!si ani#en mau%un ani"odi. 8nu! mela!u!an e!ni!
ELISA dalam mendee!si ani"odi- di%erlu!an "e"era%a aha% yan# meli%ui:
1. Well dila%isi aau diem%eli ani#en.
7. Sam%el &ani"odi( yan# in#in diu$i diam"ah!an.
6. ;iam"ah!an ani"odi !edua yan# di!on$u#asi!an den#an en+im erenu se%eri
%ero!sidase al!ali. Ani"odi !edua ini a!an menem%el %ada ani"odi sam%el
se"elumnya.
<. ;imasu!!an su"sra en+im yan# da%a menim"ul!an *arna erenu saa "erea!si.
5. Inensias *arna 0am%uran diu!ur den#an s%e!ro)oomeer yan# dise"u ELISA
reader hin##a menda%a!an hasil "eru%a densias o%is &O;(. ;en#an men#hiun#
raa'raa !onrol ne#ai) yan# di#una!an- dida%a!an nilai cut-off unu! menenu!an
hasil %osii)'ne#ai) suau sam%el. Hasil O; yan# "erada di "a*ah nilai cut-
off meru%a!an hasil ne#ai)- dan demi!ian $u#a se"ali!nya.
2
8$i ini memili!i "e"era%a !elemahan- salah sau di anaranya adalah !emun#!inan yan# "esar
er$adinya hasil false positive !arena adanya rea!si silan# anara ani#en yan# sau den#an
ani#en lain. Hasil "eru%a false negative da%a er$adi a%a"ila u$i ini dila!u!an %ada window
period- yaiu *a!u %em"enu!an ani"odi erhada% suau /irus "aru dimulai sehin##a $umlah
ani"odi erse"u masih sedi!i dan !emun#!inan ida! da%a erdee!si.
=am"ar "eri!u adalah aha%an meode ELISA dalam mendee!si ani#en.
h%:,,id.*i!i%edia.or#,*i!i,ELISA
3
6. >esern "loin#
>esern "lo adalah %roses %emindahan %roein dari #el hasil ele!ro)oresis !e mem"rane
&misal niro0ellulose(. Mem"ran ini le"ih )le!si"el dari%ada #el sehin##a %roein yan# er"lo
%ada mem"ran da%a didee!si den#an 0ara /isual mau%un )luoresensi. ;ee!si e!s%resi
%roein %ada or#anisme dila!u!an den#an %rinsi% imunolo#i men##una!an ani"odi %rimer
dan ani"odi se!under. Seelah %em"erian ani"odi se!under- dee!si dila!u!an se0ara /isual
den#an %em"erian !romo#en aau se0ara )luoresensi. .ada dee!si se0ara )luoresensi- rea!si
anara ani"odi %rimer den#an ani"odi se!under a!an mem"eri!an hasil )luoresens yan#
selan$unya a!an mem"a!ar )ilm ?'ray- dee!si ini dila!u!an di !amar #ela%.
Lan#!ah'lan#!ah dalam >esern @lo :
1( Menyia%!an sam%el yan# a!an dielii- a%a!ah iu lim)osi T aau )i"ro"las aau%un sel
darah e%i. Sam%el harus di$a#a ea% din#in.
7( Menyia%!an "u))er a#ar %H da%a "erada %ada $an#!auan yan# sa"il.
6( Menyia%!an ani"odi yan# a!an di#una!an se"a#ai %ela0a!
a. Ani"odi mono!lonal adalah yan# le"ih "ai! di#una!an- !arena :
A Sinyal yan# le"ih "ai!
A S%esi)isias yan# le"ih in##i
A Hasil yan# le"ih $ernih %ada %roses %em"uaan )ilm *esern "lo
". Ani"odi .oli!lonal da%a men#enali le"ih "anya! e%io%e
<( Melisis Sel
.elisisan sel di%erlu!an unu! men#eluar!an %roein yan# diin#in!an dari sel. 8nu!
melisis sel da%a di#una!an S;S dan RI.A "u))er. @ila yan# diin#in!an adalah se"uah
%roein yan# er)os)orilasi- ma!a %erlu diam"ah!an inhi"ior )os)aase a#ar #u#us
)os)a %ada %roein erse"u ida! di"uan#.
Cara melisis : sam%el disenri)u#asi dan am"il enda%an yan# er"enu!. Ba#a a#ar
ea% din#in den#an men##una!an !oa! es. Tam"ah!an "u))er lisis- lalu !um%ul!an
dalam a"un# e%%endor)- $a#a a#ar ea% din#in.
5( =el Ele!ro)oresis
=el yan# "iasa di%a!ai misalnya S;S'.A=E &sodium dode0yl sul)ae' %olya0rylamide
#el ele0ro%horesis( unu! memisah!an %roein "erdasar!an u!urannya den#an adanya
arus lisri!. .en#i!aan %roein den#an S;S a!an menye"a"!an dua hal. Can# %erama
yaiu er%uusnya i!aan disul)ida den#an !aa lain sru!ur se!under %roein rusa!.
Can# !edua yaiu a!an menye"a"!an "a#ian luar mole!ul %roein erselu"un#i oleh
muaan ne#ai) dari S;S sehin##a mole!ul %roein a!an er%isah!an hanya
"erdasar!an "era mole!ulnya sa$a "u!an "erdasar!an "esar dan $enis muaannya
!arena semua mole!ul %roein se!aran# "ermuaan ne#ai). ;isosiasi ini er$adi
den#an "anuan %emanasan dan %enam"ahan a#en %eredu!si disul)ida se%eri D'
mer!a%oeanol aau 1-<'dihiohreol. 1emudian sam%el erle"ih dahulu dimasu!!an
4
!e dalam sumur #el. Sau $alur "iasanya unu! sau mar!er. .roein yan# "ermuaan
ne#ai) a!an "er#era! menu$u ele!roda %osii) melalui %ori'%ori a!rilamid. @er"a#ai
$enis %roein %ada suau sam%el a!an er%isah %ada #el %olia!rilamida er#anun# %ada
mo"iliasnya. Sema!in !e0il "era mole!ulnya ma!a sema!in $auh %ula %roein
"er#era! den#an !aa lain mo"iliisnya in##i. Se"ali!nya- %roein den#an "era
mole!ul le"ih "esar a!an "er#era! %ada $ara! yan# le"ih %ende! den#an !aa lain
mo"iliisnya rendah. ;en#an demi!ian- %ada $alur %er#era!an %roein a!an dida%a!an
$a$aran %roein &dise"u se"a#ai "and aau %ia %roein( yan# sudah er%isah
"erdasar!an "era mole!ulnya.
E( Trans)er =el
A#ar %roein erse"u da%a diem%eli oleh ani"odi- ma!a %roein erse"u harus
di%indah!an dari #el !e se"uah !eras mem"ran- "iasanya niroselulosa aau .F;F.
Mem"ran ini dilea!!an di aas #el- dan um%u!an !eras %enyera% dilea!!an di
aasnya. Laruan "u))er !emudian a!an meram"a !e aas melalui rea!si !a%iler
den#an mem"a*a %roein'%roeinnya. Cara lain unu! menrans)er %roein adalah
den#an men##una!an e!ni! ele!ro"loin#. Te!ni! ini men##una!an arus lisri!
unu! menari! %roein dari #el !e mem"ran. Selain iu- di%erlu!an %ula se"uah
%rosedur unu! men0e#ah er$adinya inera!si anara mole!ul'mole!ul yan# ida!
diin#in!an a#ar hasil yan# di%erlu!an le"ih $ernih &o redu0e GnoiseH(. Caranya adalah
den#an menem%a!an mem"ran %ada @SA &@o/ine serum al"umin( aau non')a dry
mil! den#an sedi!i deer#en *een 7I sehin##a serum erse"u a!an menem%el %ada
%ada daerah yan# ida! diem%eli %roein sam%el. Hal ini "eru$uan unu! mem"ua
ani"odi hanya a!an da%a menem%el %ada "indin# sie %roein ar#e. Seelah iu-
"arulah mem"ran den#an %roein sam%el erse"u diin!u"asi den#an ani"odi.
J( ;ee!si
;ee!si dila!u!an den#an ani"odi yan# elah dimodi)i!asi "ersama den#an se"uah
en+im yan# dise"u re%orer en+yme. .roses dee!si "iasanya "erlan#sun# dalam dua
aha%- yaiu :
a. Ani"odi .rimer
5
1eras mem"rane diam"ah!an den#an ani"odi %rimer yan# s%esi)i!. Ani"odi
erlaru !emudian diin!u"asi "ersama !eras mem"ran %alin# sedi!i selama 6I
meni.
". Ani"odi Se!under
Seelah diin!u"asi "ersama ani"odi %rimer- !eras me"ran di"ilas erle"ih dahulu
!emudian diin!u"asi den#an ani"odi se!under. Ano"odi se!under adalah
ani"odi yan# s%esi)i! unu! suau s%esies %ada ani"odi %rimer. Ani"odi
se!under ini !emudian a!an men#ua!an sinyal yan# dihasil!an oleh ani"odi
%rimer.
4( Analisis
a. Colorimeri0 dee0ion
Meode ini di#una!an "ila su"sra da%a "erea!si den#an re%orer en+yme
sehin##a da%a me*arnai mem"ran niorselulosa.
". Chemilumines0en
Meode ini di#una!an "ila su"sra meru%a!an mole!ul yan# "ila "erea!si den#an
ani"odi se!under aau den#an re%orer en+yme a!an eriluminasi. Hasilnya
!emudian diu!ur den#an densiomeri unu! men#eahui $umlah %roein yan#
er*arnai.
0. Radioa0i/e dee0ion
Meode ini men##una!an ?'ray yan# "ila men#enai la"el a!an men0i%a!an
re#ion #ela%.
d. Fluores0en dee0ion
.ela0a! yan# mem%unyai la"el yan# da%a men#alami )luorosensi lalu !emudian
didee!si oleh )oosensor se%eri !amera CC; yan# menan#!a% ima#e di#ial dari
*esern "lo. Hasil !emudian da%a dianalisi se0ara !uaniai) mau%un !ualiai)
Meode ini $u#a meru%a!an salah sau meode yan# %alin# serin# di#una!an
!arena san#a sensii).
Sum"er: h%:,,id.sh/oon#.0om,medi0ine'and'healh,medi0ine'hisory,71115I<'*esern'
"lo,Ki2++67I$./ER?
h%:,,)a0hiyah.le0ure.u".a0.id,)iles,7I17,I4,.ra!i!um'TA@M'S1'@iolo#i'MI.A'8@.%d)
<. ;ee!si A%o%osis men##una!an Anne2in F'.I
Anne2in F mem%unyai !ara!erisi! "io!imia dan )isi!o!imia- anara lain in /iro ani'
)os)oli%ase- ani!oa#ulan- ani'!inase- dan a!i/ias %en#i!aan )os)oli%id. 1emam%uan
6
%ela"elan "ioin' aau FITC' %ada anne2in F da%a di#una!an unu! mem%ela$ari
%ele%asan )os)aidilserine %ada mem"ran luar sel dan menyedia!an ida! hanya ala yan#
"er#una unu! men#u!ur !e"eradaan )os)aidilserine di %laele dan erirosi- namun $u#a
%ada a%o%osis yan# sedan# "erlan#sun#. Fos)aidilserine adalah amoni)os)oli%id yan#
a!an !eluar !e %ermu!aan mem"rane %lasma %ada saa a%o%osis- di mana
!e"eradaannya di"uuh!an unu! %en#enalan dan %emusnahan sel mai. Fos)aidilserine
da%a di#una!an se"a#ai early mar!er a%o%osis sel.
Anne2in F yan# elah dila"el den#an ha%en &FITC aau "ioin( dan den#an !ondisi
!e"eradaan milimolar Ca
7L
a!an "eri!aan den#an residu )os)aidilserine yan# ada diluar
mem"ran %lasma sel yan# men#alami a%o%osis. Anne2in F ida! da%a "eri!aan den#an
sel normal !arena mole!ul erse"u ida! da%a "er%enerasi !e dalam la%isan )os)oli%id
"ilayer. .ada sel mai- la%isan dalam mem"rane da%a eri!a se0ara e!srinsi! den#an
anne2in F !arena ine#rias mem"rane %lasma yan# sudah hilan#. Hal ini menye"a"!an
anne2in F $u#a a!an "eri!aan den#an sel ne!rosis. 8nu! mem"eda!an anara sel mai
dan sel a%o%osis- %ro%idium iodide &.I( da%a diam"ah!an. .I meru%a!an %enanda
;NA yan# "ersi)a mem"rane im%ermea"le. .ro%idium iodide ida! da%a menem"us
mem"rane sel yan# hidu%. Namun !ei!a sel men#alami a%o%osis a!hir dan ne!rosis-
er$adi %eru"ahan %ermea"ilias mem"rane %lasma dan ini sehin##a .I da%a memasu!i
sel dan "eri!aan den#an ;NA sehin##a menye"a"!an )luoresensi merah %ada sel
erse"u. .ela"elan #anda anne2in F dan .I selan$unya da%a dianalisis den#an )lo*
0yomeer aau mi!ros!o% )luoresensi. 8$i ini 0u!u% mudah unu! dila!u!an dan da%a
mem"eda!an sel normal &anne2in F
'
,.I
'
(- sel a%o%osis a*al &anne2in F
L
,.I
'
(- dan sel
a%o%osis a!hir &anne2in F
L
,.I
L
(- dan sel mai &anne2in F
'
,.I
L
(.
h%:,,lonar.ui.a0.id,)ileM)ileNdi#ial,7I6IO<E7'S<7E44'TrisP7IFe"rianaP7IChani!a.%d)
7

You might also like