Histologia-2

-technika histologiczna


Badania histologiczne rozpoczy si wraz
z odkryciem prostego mikroskopu
i opracowaniem metod przygotowania cienkich skrawkw
z materiau biologicznego.
Technika histologiczna:
* utrwalanie
* skrawanie/sekcjonowanie
* barwienie/kontrastowanie
Pobranie materiau
i
utrwalanie
(zapobiega procesom gnicia oraz autolizy)
utrwalanie chemiczne- przez zanurzenie
w pynie zwanym utrwalaczem
(formalina, etanol)

utrwalanie fizyczne (np. za pomoc
mikrofal)
Przygotowanie skrawkw
Skrawanie
Barwienie histologiczne
Barwienie preparatw mikroskopowych
barwnikami histologicznymi w celu optycznego
zrnicowania struktur komrkowych i
tkankowych.

Polega na zanurzeniu preparatu w roztworze
pojedynczego barwnika, w mieszaninie kilku
barwnikw lub kolejno w roztworach kilku
barwnikw (b. sekwencyjne).
B. przegldowe (HE), specjalne, przyyciowe
Hematoksylina i Eozyna (H E).
(tkanka czna linianki poduchwowej)

Hematoksylina, b.niebieski, charakter zasadowy -> ma czynne,
dysocjujce grupy chemiczne zasadowe, np. NH
2
.

Eozyna, b. czerwony, charakter kwasowy -> ma czynne grupy
chemiczne kwasowe, np. PO
4
, COOH.

W czasie barwienia grupy zasadowe barwnika wytwarzaj wizania estrowe z grupami
kwasowymi czsteczek struktur tkankowych, wybarwiajc te struktury. W podobny
sposb wi si grupy kwasowe barwnika. Struktury tkankowe, ktre wybarwiaj si
barwnikami zasadowymi, s zasadochonne lub bazofilne, natomiast te, ktre
wybarwiaj si barwnikami kwasowymi, s kwasochonne, acydofilne czyli eozynofilne.
1. Barwienie przegldowe
oglna struktura mzgu i patw
wzrokowych Drosophila
Drosophila melanogaster
- barwienie
Richardsona
(1% roztwr bkitu metylenowego
w 1% boraksie)
barwienie przegldowe
Histologia praktyczna
(oglne zasady jakie mona stosowa przy ocenianiu aktywnoci
komrek ogldanych w preparatach cytologicznych lub tkankowych)
Jdro:
K. nieakt. metabol.: zwarte, okrge
jdro, intensywna barwa, jderko
niewidoczne

k. syntet. biaka: due, jasno
barwice si jdro, due
pojedyncze jderko lub mnogie
jderka

k. martwe: obkurczone jdro,
wygldajce jak bezstrukturalna,
zbita masa intensywnie
barwicego si materiau.

Cytoplazma:
Ziarnista, intensywnie rowa:
zawiera nagromadzenie organelli
choncych barwnik kwany,
ktrymi s zwykle mitochondria
lub ziarnistoci wydzielnicze
Rozlany, fioletowy odcie: wskazuje
na obecno cytoplazmatycznego
RNA w formie rybosomw, a tym
samym na aktywn produkcj
biaka.
Due, niewybarwione obszary:
wakuole wydzielnicze, takie jak
te, ktre s widoczne w
komrkach wydzielajcych luz.
W niektrych komrkach mog
one zawiera tuszcz.

Barwienie preparatw przeznaczonych do mikroskopu
elektronowego nosi nazw kontrastowania.
Interpretacja preparatw
histologicznych