Universidad de sonora.

Laboratorio de bioqumica I.
Practica # 3
Reacciones de color para la identificacin de aminocidos.
Equipo #2.
Presenta:
Zuleth Romero.
Siria Caldern.
Azucena Garca.
1 de octubre del 2014.

Introduccin.
Las protenas son polmeros de aminocidos.
Todos los aminocidos tienen la misma estructura fundamental que consiste en un
carbono central unido a cuatro grupos funcionales distintos: un grupo amino
nitrogenado (NH2); un grupo carboxilo (COOH); un hidrgeno; y un grupo que
vara entre los diferentes aminocidos (R)
Los aminocidos difieren entre si en la estructura de sus cadenas laterales
distintivas llamadas grupos R.
Se han propuesto varios mtodos para clasificar los aminocidos sobre la base de
sus grupo R. El ms significativo se funda en la polaridad de los grupos R. Existen
cuatro clases principales: 1) Grupos R no polares; 2) Polares, pero sin carga; 3)
Grupos R con carga positiva y 4) Grupos R con carga negativa.
Los aminocidos difieren en sus propiedades qumicas y fsicas, como tamao,
solubilidad en agua, carga elctrica, debido a sus diferentes grupos R. Por lo
tanto, en gran parte la secuencia de aminocidos determina las propiedades y la
funcin de cada protena si es soluble en agua, y si es una enzima, una
hormona o una protena estructural. En algunos casos, basta un error en un
aminocido para que la protena no funcione correctamente.
Al igual que los lpidos y los polisacridos, las protenas se forman como resultado
de la sntesis por deshidratacin. El nitrgeno del grupo amino (NH2) de un
aminocido se une al carbono del grupo carboxilo (COOH) de otro aminocido,
con un enlace covalente sencillo. Este enlace se llama enlace peptdico y la
cadena resultante de dos aminocidos se conoce como pptido. Se agregan ms
aminocidos, uno por uno, hasta que se completa la protena. Las cadenas de
aminocidos en las clulas vivas varan en cuanto a longitud, desde tres hasta
miles de aminocidos. La palabra
protena o polipptido se reserva a menudo para las cadenas largas, digamos, de
50 o ms aminocidos de longitud; en tanto que el trmino pptido se utiliza para
referirse a cadenas ms cortas.
En los microorganismos, plantas y animales se encuentran alrededor de 300
aminocidos. En la mayora de los seres vivos solamente 20 aminocidos son
codificados por el ADN para formar las protenas . Los aminocidos que se
encuentran en las protenas tienen una configuracin L.

Objetivo: Identificar aminocidos segn su grupo funcional R llevando a cabo

diferentes reacciones
Materiales:
Gradilla
20 tubos de ensaye de 18x150
Vaso de precipitado de 600ml
Vaso de precipitado de 250 ml
7 vasos de precipitado de 50 ml
2 pipetas de 5 ml
3 pipetas de 1 ml
2 pinzas para tuvo de ensaye
Mechero, tripie y tela de asbesto
Escobetilla
Procedimiento.
Reaccin de la ninhidrina.
1.- Con su mechero, tripie, te la de asbesto y vaso de precipitado de 250 ml
prepare un bao de agua hirviendo. No llene de agua totalmente el vaso de
precipitado si no ms o menos a la mitad. Use agua destilada.
2.- Con masking tape o con plumn graso titule siete vasos de precipitados de 50
ml con los nombre de las muestras que van a contener y que son: albunina,
alanina, tirosina, triptfano, asprtico, arginina y gelatina.
3.- Con los vasos titulados vaya a la mesa de reactivo y tome ms o menos 15 ml
de cada una de las muestras. Estas soluciones estarn en su mesa de trabajo
para facilitar la prctica. Si al final algo sobrara se podr regresar al frasco original,
teniendo mucho cuidado de identificar bien las sustancias.
4.- coloque e n sus gradillas los 7 tubos de ensaye identificados de alguna manera
con los nombre de las sustancias que se va a probar.
5.- pipetee 3 ml de cada una de las muestras a sus correspondientes tubos, cuide
de no perder la identificacin de las muestras. Las muestras tienen ya en sus
vasos de precipitados en su lugar de trabajo.
6.- Con papel indicador cheque el pH de las muestras, si no est neutro ajstelo
con mucho cuidado.

7.- Aada 1.5 ml de la solucin de ninhidrina al 0.1 % a cada uno de los siete
tubos.
8.- Cuando ya est hirviendo el agua del bao que preparo coloque ah los siete
tubos al mismo tiempo y djelos unos minutos. Vaya sacando los tubos del agua
hirviendo a medida que vayan reaccionando positivamente. Si algn tubo despus
de 10 minutos no ha dado la reaccin positiva squelo y considere en ese tubo
una reaccin negativa.
9.- Observe el color desarrollado y anote en su hoja de datos. Las caractersticas
de tiempo, color de la reaccin para cada tubo.
La reaccin que en esta parte ha practicado es la Reaccin de la ninhidrina.
Reaccin de Millon.
1.- Coloque en su gradilla 4 tubos de ensaye y numrelos o identifquelos de
acuerdo a las muestras que va a probar que son: tirosina, alanina, albumina y
gelatina.
2.- pipetee 3 ml de las soluciones correspondientes a los tubos as identificados.
3.- Coloque los tubos en el bao de agua hirviendo y djelos por cinco minutos.
5.- saque del bao de agua hirviendo los tubos y observe el color desarrollado en
algunos tubos. Identifique las muestras que estaban en los tubos de la reaccin
positiva.
6.- En su hoja de clculo anote sus observaciones y resultados. Lo que acaba de
realizar es la prueba llamada reaccin de milln.
Reaccin Xandroproteica.
1.- Coloque en su gradilla 5 tubos de ensaye y numrelos o identifquelo de alguna
manera los siguientes nombres: tirosina, triptfano, alanina, albumina y gelatina.
2.- pipetee 2 ml de las soluciones en los tubos correspondientes.
3.- Con mucho cuidado aada a cada uno de los cinco tubos 1 ml de cido ntrico
concentrado.
4.- Lleve los tubos al bao de agua hirviendo y djelos ah por cinco minutos.
5.- Saque los tubos de ensaye del bao de agua hirviendo y enfrelos con agua
corriente.

6.- Con sumo cuidado resbale lentamente con una pipeta por la pared de cada
tubo 2 ml de hidrxido de amonio concentrado.
7.- Observe el resultado si la reaccin es positiva se desarrollara un anillo de color
naranja.
8.- Anote sus observaciones en su hoja de datos. La prueba que acaba de
demostrar es la reaccin xandroproteica.
Resultados y observaciones:
Reaccin Ninhidrina
Tubo No.
1
2
3
4
5
6
7

Muestra
Albumina
Tirosina
Triptfano
Gelatina
Alanina
Asprtico
Arginina

Color
Morado violeta
Morado violeta
Violeta
Morado violeta
Violeta
Violeta

Tiempo
8:00 min
6:30 min
1:30 min
3:00 min
5:50 min
7:40 min

Reaccin Millon
Tubo No
1
2
3
4

Muestra
Tirosina
Albumina
Gelatina
Alanina

Color
Rojo
Amarillo-cafe
-

Tiempo
35 s
1:10 min
-

Reaccin
+

Color
Anillo amarillo
naranja.
Anillo amarillo
naranja.

Reaccin Xantoproteica
Tubo No
Muestra
1
Triptfano
2

Tirosina

3
4
5

Albumina
Gelatina
Alanina

Fundamentos de las reacciones.

Reaccin de la Ninhidrina
Esta reaccin es universalmente empleada para detectar cualitativa y
cuantitativamente a los aminocidos. Esta es la nica reaccin verdaderamente
importante. La ninhidirina es un agente oxidante poderoso y lleva a cabo de
aminacin oxidativa de los grupos -amino. Libera amoniaco, bixido de carbono,
el aldehdo correspondiente y la forma reducida de la ninhidirina.

El amoniaco ms una molcula de ninhidrina reducida, y otra molcula de

ninhidrina oxidada, al calentarse se una para producir un pigmento purpureo. La
intensidad del color producido en la reaccin es proporcional a la concentracin
del aminocido. La reaccin la dan positiva todos los aminocidos, pptidos y
protenas que contengan un grupo amino libre.

Reaccin de Millon
Es una reaccin especfica para grupos hidroxifenilos que puedan nitrarse
fcilmente. De los aminocidos, la tirosina es el nico que da positiva la reaccin.
El reactivo es mercurio disuelto en cido ntrico. El producto de la reaccin es la
formacin de un complejo del mercurio con los derivados de nitrofenol, de un color
rosa caracterstico. Cuando se aade el reactivo a una solucin proteica, se forma
primero un precipitado blanco, que corresponde a la protena coagulada por el
calor, pero si la protena contena tirosina, ese coagulo se pondr de color rosa
rojo al prolongar un poco el calentamiento. Si la solucin que se prueba es
alcalina, tendr que neutralizarse primero con un poco de clorhdrico, pues de lo
contrario se precipitara el mercurio del reactivo.

Reaccin Xantoproteica
Consiste en la nitracin del anillo benceno con cido ntrico concentrado, dando
derivado de nitrobenceno que son de color amarillo. Si entonces se aade
hidrxido de amonio, el color se vuelve anaranjado. En las condiciones en que se
hace el experimento solo la tirosina y el triptfano dan positiva la reaccin. Para
nitrar la fenilalanina se requiere de sulfrico como catalizador. Si se prueba una

solucin de protena que contenga tirosina o triptfano, se formara primero un

precipitado blanco al aadir el ntrico concentrado. Al calentar, ese precipitado se
vuelve amarillo, y si la solucin se hace alcalina, el precipitado finalmente se torna
anaranjado.

Conclusin.
Las reacciones utilizadas en el proceso experimental arrojaron como resultado la
correcta identificacin de aminocidos con sus determinadas caractersticas de
color y precipitados. Por ejemplo en la reaccin de ninhidrina fueron oxidados los
grupos amino de los aminocidos liberando asi amoniaco y algunos otros gases
pero el amoniaco principalmente es unos de los participantes de la reaccin de
color azul violeta resultante.
En el caso de la reaccin de milln la identificacin es especifica para los grupos
que puedan nitrarse fcilmente. Y en este caso el color rosado que dio la reaccin
con la tirosina y el reactivo se cree que es debido a un complejo de mercurio y
derivados de nitrofenol.
Por ultimo con la reaccin xandroproteica se dieron solo dos aminocidos con
reacciones positivas ya que estas se efectan gracias a la nitracin del anillo de
benceno con el cido ntrico concentrado para dar como productos de color
amarillo o naranja.

Cuestionario:
1.- Cal de las dos configuraciones de aminocidos se encuentran en la
estructura de las protenas?
En las protenas encontramos aminocidos con configuracin L.
Solamente los L-aminocidos se fabrican en las clulas y se incorporan a las
protenas. Algunos D-aminocidos se encuentran en las paredes de las clulas de
las bacterias, pero no en protenas bacteriales.

2.- Cuales son las caractersticas de solubilidad de los aminocidos?

Apolares: Los grupos R hidrocarbonados son apolares e hidrofbicos.
Polares: los grupos R de estos aminocidos son ms solubles en agua, o
hidroflicos, que los aminocidos apolares, debido a que contienen grupos
funcionales que forman puente de H con el agua. Aqu se incluyen la serina,
treonina, cistena, metionina, asparagina y glutamina.
Aromticos: La fenilalanina, tirosina y el triptfano con sus cadenas laterales
aromticas son relativamente apolares. Todos ellos pueden participar en
interacciones hidrofbicas, las cuales son especialmente fuertes cuando los
grupos aromticos se apilan los unos sobre los otros. El grupo OH de la tirosina
puede formar puentes de H y acta como un grupo funcional importante en la
actividad de algunas enzimas. La tirosina y el triptfano son significativamente
ms polares que la fenilalanina.
Los aminocidos son compuestos orgnicos, unos son ms solubles que otros en
agua y en solventes orgnicos.
3.- En sus cursos de qumica inorgnica Recuerda haber tocado cido
ntrico? Qu pas y qu reaccin era?
Se genera una mancha amarilla en la zona con la que se entr en contacto.
El fenmeno que ocurre es lo que se conoce como desnaturalizacin, o sea
bsicamente se alteran algunas de las estructuras secundaria, terciaria o
cuaternaria de las protenas y precipitan, esto puede ocurrir por varias causas:
alteracin del pH, calor, presencia de sales, etc.

Bibliografas:
Bioqumica I Eva Irma Vjar Rivera, Jess Rubn Garcilaso Prez.
Hermosillo, Sonora, Editorial Universidad de Sonora 2010. AminocidosReacciones de Identificacin, pg. 172-174
Prcticas de Bioqumica Descriptiva Eva Irma Vjar Rivera. Hermosillo,
Sonora, Editorial UniSon 2005. Lectura 7 - Reacciones de color para
aminocidos, pg. 165-168
Audesirks T, Audesirk G., Byers, Biologa en la Vida en la Tierra, octava
edicin, Pearson educacion.
http://acemucsc.galeon.com/articulos/Bioquimica/aminoacidos.htm l
Lehninger, Bioquimica, cuarta edicin