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ALIMENTOS
LABORATORIO DE BROMATOLOGIA.
Directorio
Rector
M. en C. Mario Andrade
Secretario General
Dr. Francisco lvarez
Tabla de Contenidos
MANUAL DE OPERACIN PARA EL ANLISIS DE LOS ALIMENTOS ............... 1
LABORATORIO DE BROMATOLOGIA. ....................................................................... 1
Directorio ........................................................................................................................ 2
Tabla de Contenidos .................................................................................................... 3
Presentacin del Libro ....................................................................................................... 4
Parte I. Introduccin al Anlisis de los Alimentos ............................................................... 5
I. Generalidades del Anlisis de los Alimentos ................................................................. 5
II. Introduccin al Laboratorio de Bromatologa. ............................................................ 15
III. Programa del sistema de prcticas. ............................................................................ 18
IV. Prcticas generales de seguridad. .............................................................................. 20
Parte II. Conocer las instalaciones del Laboratorio de Nutricin Animal, las tcnicas de
muestreo y preparacin de muestras .................................................................................... 25
Prctica 1. Conocer la Fbrica de Alimentos y el Laboratorio de Nutricin Animal, sus
equipos y materiales empleados, toma de muestras en campo. ....................................... 26
Prctica 2: Identificacin y clasificacin y descripcin de los ingredientes usados en la
alimentacin del ganado. ................................................................................................. 30
Prctica 3: Preparacin de las muestras para anlisis. ..................................................... 34
Parte III. Anlisis Qumico Proximal o de Weende ........................................................... 39
Prctica 4. Humedad y materia seca. ............................................................................... 40
Prctica 5: Extracto Etreo Grasa Cruda ...................................................................... 46
Prctica 6: Fibra cruda o fibra bruta. ............................................................................... 50
Prctica 7: Determinacin de Protena Cruda. ................................................................. 55
Prctica 8: Determinacin de cenizas o materia inorgnica. ........................................... 65
Prctica 9: Extracto Libre de Nitrgeno e integracin de los resultados del Anlisis
Qumico Proximal............................................................................................................ 68
Parte IV. Componentes de la Pared Celular o Anlisis de Van Soest ................................ 72
Prctica 10. Determinacin de Fibra Detergente Neutra (FDN). .................................... 81
Prctica 11: Determinacin de Fibra Detergente cida (FDA)....................................... 85
Prctica 12: Determinacin de Lignina ........................................................................... 89
Prctica 13: Integracin de los resultados de los componentes de la pared celular (Van
Soest) ............................................................................................................................... 96
Parte V. Digestibilidad de los alimentos y bioenergtica ................................................. 103
Introduccin a los estudios de digestibilidad y fermentacin ruminal .......................... 103
Introduccin a la bioenergtica de los alimentos ........................................................... 105
Prctica 14: Digestibilidad de la Materia Seca In Situ .................................................. 106
Prctica 15: Digestibilidad de la Materia Seca In Vitro por la Tcnica ANKOM ........ 114
Prctica 16: Calorimetra y bioenergtica ..................................................................... 124
Prctica 17: Digestibilidad in vitro por produccin de gas. .......................................... 127
Prctica 18: Tilley & Terry Modificada ........................................................................ 133
Prctica 19: Tcnica de Simulacin Ruminal (RUSITEC)............................................ 136
Prctica 20: Visitas a ranchos y plantas de alimentos ................................................... 140
Bibliografa general ........................................................................................................... 142
Glosario de trminos .......................................................................................................... 144
ndice ................................................................................................................................. 145
3
Estudio de los alimentos antes de ser ingeridos por los seres vivos
Nutrimento
Ingrediente
Alimento
Complemento
Suplemento
Forraje
Concentrado
Racin o Dieta
Racin
o
balanceada
dieta
Racin
integral
dieta
necesidades de mantenimiento.
Digestibilidad
Digestibilidad
aparente (DAMS)
Digestibilidad
verdadera (DVMS)
Ejemplo
digestibilidad
de
Alimentacin
Nutricin
Muestreo
Muestra prima
Muestra bruta
Muestra contractual
Muestreo en suelos
Qu es un Forraje?
Qu
es
Concentrado
un
Para
ganadero
el
Para
experto
el
Segn
literatura
la
Concentrado
energtico
Tabla
de
concentracin
nutrientes en
alimentos
la
de
los
(Base Seca)
Clasificacin
Forrajes
de
Tipo
alimento
Fibra
(% FC)
Cruda
Protena
Cruda (%PC)
Energa
Digestible
(Mcal ED/kg)
Forraje
> 18%
< 20%
< 3.00
Concentrado
proteico
< 18%
>20%
Variable
Concentrado
energtico
< 18%
< 20%
> 3.00
Plantas
pastizales
naturales
de
Pastos o zacates
Plantas
gramneas
herbceas:
Hierbas
Plantas
herbceas
diferentes a las gramneas
Ramoneo
Partes de arbustos o
rboles que pueden ser
consumidos:
Hojas
Ramitas
Frutos
Semillas
Forrajes
cultivados
Forrajes de corte
Praderas
cultivadas,
inducidas
artificiales
Subproductos
esquilmos
del
1 Origen
2.
Variedad
clase
3.
comestible
4. Procesos
tratamientos
5.
Fase
maduracin
de A qu edad se corta?
A menor edad : mayor % nutrimentos, menor % MS
A mayor edad : mayor lignificacin, menor digestibilidad
6. Corte o cosecha
7. Clase o calidad
8. Clasificacin
NRC
1. Forraje o pienso
grosero seco
Henificados
Pajas
Rastrojos
2. Forraje o pienso
grosero verde
Praderas naturales
Praderas cultivadas
Alfalfa, trbol, Rye Grass
3. Ensilados
4. Suplemento
energtico
5. Suplemento
proteico
6. Suplemento
mineral
Sales minerales
Macro-minerales: N, P, K, Ca, Mg, S
Micro-minerales: Fe, Cu, Zn, Mo, Mn, Se
7. Suplemento
vitamnico
8. Aditivos
Zeolitas
Vitaminas liposolubles: A, D, E, K
Hormonas,
Antibiticos
Probiticos
Edulcorantes
Aglutinantes
NNP
Ejemplos
10
Definicin
Clasificacin
de los
alimentos:
TIPO DE
ALIMENTO
PROTENA
CRUDA
(%)
Menos de 20
ENERGA
DIGESTIBLE
(Mcal/kg)
Menos de 3
Concentrado
Proteico
Menos de 18
Ms de 20
Variable
Concentrado
energtico
Menos de 18
Menos de 20
Ms de 3
Forraje
Categoras de
nutrientes
Agua
Protena
Energa
Vitaminas
Minerales
Organizacin
de los
nutrientes
Ejemplos de
nutrientes o
alimentos
(g/kg)
Conversin de
los datos a
Materia Seca
100%
Humedad
Materia
seca
Agua
Materia
orgnica
Materia
inorgnica
Ingredientes
MS
Nabo
90
Pasto
200
Grano de cebada
860
Vaca
430
Leche
124
Msculo
280
Huevo
333
Cacahuate
940
Ingredientes
Nabo
Pasto
Grano de cebada
Vaca
Leche
Msculo
Huevo
Cacahuate
MS
100
100
100
100
100
100
100
100
Lpido
Protena
Cenizas
11
Composicin
general de los
alimentos
Ingredientes
Pastos
Oleaginosas
Cereales
Animales
Msculo
Lcteos
Huevo
Tipos de
protena
Plantas
Animales
Protena
cruda
cidos
orgnicos
Protena
verdadera
cidos
metablicos
Productos de
fermentacin
MS
CHO
Protena
Cenizas
F. Ruminal
Ensilaje
F. Etlica
F. Metanognica
Molculas
orgnicas
Lpido
Categora
Clasificacin
Funciones
Ejemplos
Carbohidratos
Monosacridos
Disacridos
Polisacridos
Energa
ADN
Transporte
azcares
Estructura
Reserva
Lpidos
Triglicridos
Ceras
Fosfolpidos
Esteroles
Protenas
Polipptidos
Grasas
Reservas
de
energa
Proteccin
del
fro
Cutcula vegetal
proteccin
contra el agua
Hormonas
Enzimas
Hexosas
Pentosas
Sacarosa
Lactosa
Almidn
Glucgeno
Celulosa
TG: glicerol + 3
cidos grasos
Ceras
Diglicrido
+
fosfato + colina
=
Lecitina
de
12
(Polmeros
de
aminocidos)
Ac. Nucleicos
Polmeros
nucletidos
Vitaminas
Vitaminas
hidrosolubles
de
Hormonas
Transporte
Estructurales
Contrctiles
Estructura
de
DNA y RNA
Molculas de alta
energa
Transportadores
de electrones
ADN, ARN
ATP, ADP AMP
NAD,
NADP,
FAD
Sntesis de
macromolcula
s
Experimento
de Miller-Urey
13
Importancia de la Bromatologa
El medico veterinario zootecnista que se dedique a la produccin animal, e incluso aquel que se
dedique a la clnica de grandes y pequeas especies, tiene que conocer la importancia de la
nutricin y la alimentacin de los animales para mantener la salud de los mismos al igual que para
promover su produccin, reproduccin y crecimiento. En base a esto, el Plan de Estudios de la
carrera establece la materia de Bromatologa, el anlisis de los alimentos, como una necesidad.
En el nuevo programa de estudios por competencias se busca que el alumno obtenga
conocimientos significativos, en situaciones similares a las que enfrentar en la prctica
profesional. El Programa de Bromatologa fue diseado para estimular al alumno a que utiliza este
conocimiento y las habilidades aprendidas en el laboratorio para reforzar su trabajo profesional.
Por lo tanto se busca reforzar el aprendizaje de los principios bsicos mediante la prctica en
laboratorio y en campo.
Desarrollar y / o reforzar los conocimientos:
Identificar los principales alimentos y sus componentes nutricionales.
Aplicara tcnicas de bsqueda, organizacin e integracin de informacin relevante en la
ciencia animal.
Desarrollar y / o reforzar las habilidades para:
Analizar e interpretar los resultados de los anlisis de los alimentos.
Emplear tcnicas apropiadas en bien de los animales para proporcionar a los humanos
alimentos de excelente calidad.
Manejar equipo de laboratorio y de campo utilizados en las prcticas programadas.
14
de
Costo/anlisis
(para 6 muestras)
Medicin
de
Protena Cruda con
extraccin de NH3
en cido sulfrico y
posterior titulacin
$130
Determinacin de
Protena Dumas
LECO FP528
Medicin
de
Protena Cruda por
combustin
y
arrastre
de
Nitrgeno
$130
Extracto etreo
Goldfisch
muestras
$50
Extracto etreo
Flujo Supercrtico
Marca LECO (TFE
2000)
Fibra Cruda
Marca Labconco
Determinacin de
fibra en detergente
neutro (FDN)
Determinacin de
fibra en detergente
cido (FDA)
FDN
y
FDA
ANKOM
Marca Labconco
Determinacin
de
Extracto Etreo por
extraccin en ter de
lpidos,
vitaminas
liposolubles, etc.
Determinacin
de
Extracto Etreo por
presin
y
temperatura
Degradacin
en
H2SO4 1.25% y
NaOH 1.25%
Determinacin
de
Fibra
Neutro
Detergente
Determinacin
de
Fibra
cido
Detergente
Utiliza
bolsas
especiales ANKOM
F57
Marca Labconco
Digestor de Fibra
Marca ANKOM
$130
$90
$90
$90
$180
15
Muflas
pequeas
(1) para anlisis de
cenizas
Estufas desecacin
para materia seca
600C
Obtencin
de
cenizas en 4 horas
$40
60C
Evitar prdida de
elementos voltiles
$40
Estufas desecacin
para materia seca
100C
Obtencin
de
materia seca para
AQP con flujo de
aire
$32
Bomba de Vaco
Crisoles Gooch
Varios tamaos y
porosidades
De 0.5 a 2 mm
Molino fino
De 0.5 a 1 mm
Necesario para la
preparacin
de
muestras
burdas,
tales como zacates,
granos, semillas
Necesario para la
preparacin fina de
las muestras
1 en existencia
1 en existencia
Hasta 2 kg
Medicin
de
muestras (0.00g)
1 en existencia
Balanzas (3)
Scientech (20g)
Ohaus (120g)
Sartorius (120g)
2 en existencia
Estufas desecacin
(3)
De 50 a 100C
Congelador
De -4 a 17C
Medicin
de
muestras en forma
exacta
(0.0000g)
Secar y mantener
seco muestras y
equipo
Congelar y preservar
muestras
Refrigerador
4C
Refrigerar muestras
1 en existencia
Eliminar
peligrosos
gases
1 en existencia
Desecar
muestras
salidas del horno
4 en existencia
Campana
Extraccin
Campanas
Desecacin (4)
de
3 en existencia
1 en existencia
16
Gas embotellado
Oxgeno
Mezcla
CO2
1 en existencia
30x60 cms
Mantener
temperatura
constante
1 en existencia
Destilador
1 en existencia
Utilizado
para
digestibilidad in vitro
con bolsas ANKOM
F57
1 en existencia
1
en
prstamo
(INIFAP)
Rango pH 0-14
Dos decimales
Spectronic Genesis
5
Denver Instrument
Model 10
Anlisis de fsforo,
cido lctico, etc.
1 en existencia
Prismas de cuarzo
(4)
Perkin
Instruments
Prismas
(Spectroscopy Cells)
Los
prismas
de
cuarzo
son
reutilizables
Atomic Absorption
Determinacin
minerales traza
de
En laboratorio de
aguas y suelos del
CCA-UAA
Cromatgrafo
gases (GC)
Centro de Ciencias
Bscias de la UAA
Determinacin
de
cidos
Grasos
Voltiles (AGV)
En otros laboratorio
de la UAA
Cromatgrafo
(HPLC)
Centro de Ciencias
Bsicas de la UAA
En otros laboratorio
de la UAA
Bomba
calorimtrica
Modelo Parr
Determinacin
de
metabolitos
no
voltiles
Determinacin
de
energa bruta de los
alimentos
y
las
heces
Uso de cpsulas
entricas
para
empacar la muestra
Bao Mara
Agua destilada
H2O puro
6 en existencia
ANKOM Daisy II
de
Elmer
En laboratorio
aguas y suelos
CCA-UAA
En laboratorio
aguas y suelos
CCA-UAA
de
del
de
del
$250
17
No. Prctica
Sesin programada
mbito de
desarrollo.
Duracin
(horas)
2 horas
Prctica 1
2 horas
Prctica 2
Prctica 3
3 horas /
Prctica 4
Determinacin
humedad total.
la Laboratorio de Nutricin
Animal
4 horas /
Prctica 5
4 horas /
Prctica 6
Determinacin
cruda
5 horas /
Prctica 7
6 horas /
Determinacin de cenizas
4 horas /
Prctica 8
Prctica 9
Prctica 10
Prctica 11
Extracto
Nitrgeno
de
de
Libre
Integracin
de
resultados del AQP
Determinacin de FDN
Determinacin de FDA
Laboratorio de Nutricin
Animal
de Saln de clases
semana 1
semana 2
semana 3
semana 4
semana 4
semana 5 y 6
semana 6
semana 7
2 horas /
semana 9
los
Laboratorio de Nutricin
Animal
4 horas /
Laboratorio de Nutricin
Animal
4 horas /
semana 10
semana 11
18
Prctica 12
Prctica 13
Prctica 14
Determinacin de Lignina
Laboratorio de Nutricin
Animal
4 horas /
semana 11
Integracin
de
los Saln de clases.
resultados del anlisis de
fracciones de fibra
2 horas /
Digestibilidad en KOH
2
Horas
semana 13
4
Horas
semana 13
Laboratorio de Nutricin
Animal
semana 12.
Digestibilidad
de
Materia Seca in Situ
la Vacas fistuladas
Prctica 15
Prctica 16
Digestibilidad
de
Materia Seca in Vitro
la Laboratorio
de
fermentacin in Vitro
4
Horas
semana 14
Prctica 17
Calorimetra
bioenergtica
y Laboratorio de Nutricin
Animal
2
Horas
semana 15
Prctica 18
Laboratorio de Nutricin
Animal
6 horas
semana 13 y
14
19
21
22
Precauciones generales
No se debe beber, comer o fumar durante el trabajo.
Los elementos de proteccin personal deben estar siempre limpios y en perfecto estado de
conservacin y funcionamiento, los mismos deben usarse aunque moleste.
Al finalizar la tarea todos los materiales de desecho debern ponerse en bolsas plsticas, cerrarse
firmemente con precintos de seguridad y descartarse segn normas de seguridad.
Referencias
Harris, L.E., Asplund, J.M. and Crampton, E.W. (1968). An International Feed nomenclature and
methods for summarizing and using feed data to calculate diets. Utah Agr. Exp. Sta. Bull. 479.
McDowell, L.R., Conrad, J.H., Thomas, J.E. and Harris, L.E. (1974). Latin American tables of
feed composition, University of Florida, Gainesville, FL.
23
Fuentes de Informacin:
FUENTES DE INFORMACIN (BIBLIOGRAFA)
No. AUTOR/TITULO
CLASIFICACIN
Cherney, J.H.; Cherney, D. J. R. (1998). Grass for Dairy Cattle. CABI 636.2086G768
Publishing. Cambridge. U.K.
Church, D.C. (1977). Livestock Feeds and Feeding. Schultz Wack Weir 636.084Ch561
Publishing. Oregon. U.S.A.,
Cullison, A.E. (1979). Feeds and Feeding. Reston Publishing Company. 636.084C967f
Virginia. U.S.A.
COMPLEMENTARIAS:
5
Ensminger, M.E., Olentine, C.G. (1978). Feeds & Nutrition Complete. The 636.084E56f
Ensminger Publishing Company. California. U.S.A.
Fahey, G.C. (1994). Forage Quality, Evaluation and Utilization. Library of 636.20855N277f
Congress. Nebraska. U.S.A.
Givens, D.I.; Owen, E.; Axford, R.F.E. ; Omed, H.M. (2000). Forage 636.20852F6924
Evaluation in Ruminant Nutrition. CABI Publishing. London. U.K.
Hughes, H.D. ; Heath, M.E. ; Metcalfe, D.S. (1966). Forrajes. La Ciencia de 633.2H893f
la Agricultura Basada en la Produccin de Pastos. 12 Impresin.
Compaa Editorial Continental (C.E.C.S.A.). D.F. Mxico.
10
11
Theodoru, M.K.; France, J. (1999). Feeding Systems and Feed Evaluation 636.084F2953
Models. CABI Publishing Company. London. U.K.
12
nd
Edition. 636.2085V278n
24
Prctica 1
Prctica 2
Prctica 3
El objetivo principal de estas primeras prcticas es que el alumno empiece a trabajar sobre su
proyecto semestral, que adquiera confianza en el manejo de equipo y materiales dentro del
laboratorio y se familiarice con los procesos a realizar.
25
Responsable de la Prctica:
M. en C. Ma. Guadalupe Acero Godnez
Dr. Carlos U. Hubi Segura
Jess Mara, Ags. Enero de 2011
26
Introduccin.
En la primera prctica se hace un recorrido del Laboratorio de Nutricin Animal, la planta de
alimentos, y la Posta para que los alumnos empiecen a familiarizarse con las instalaciones y con
la forma de trabajar. As mismo se ensea la forma correcta de tomar las muestras, como
transportarlas e identificarlas
Toma de muestras.
Antes de realizar cualquier tipo de anlisis es necesario tener una muestra que represente lo ms
posible al lote que analizamos, para que podamos tener resultados reales.
Para lo cual debemos conocer y saber usar los muestreadotes, y de acuerdo al tipo de empaque
l numera de muestras para que sea representativa del lote.
Envo total.
Lote: La cantidad de alimento que se va a adquirir. Puede ser el envo total o una parte del
mismo.
Muestra primaria: Muestra tomada de un lote, varias muestras primarias son
representativas de un lote.
Muestra bruta: Es la combinacin de varias muestras primarias combinadas, de las que se
extrae la muestra contractual.
Muestra contractual: Es la muestra representativa de un lote y es la que se usa para el
anlisis, el tamao de la muestra se determina por acuerdo entre el vendedor y el
comprador.
La extraccin de las muestras no debe ser menos del 2 % del lote y se extraen las muestras con
cucharones, muestreadotes cilndricos o cnicos. Si se extraen de sacos cerrados los
muestreadotes de rifle o similares son adecuados.
Los sacos deben de muestrearse en forma diagonal. Si son menos de 10 sacos debern
muestrearse todos, si son mas debern muestrearse al menos 2 %.
27
Muestra bruta
(Kg)
Muestra
contractual
(Kg)
Hasta 200
0.5
Hasta 100
0.1
Hasta 20
Una vez que se han tomado las muestras se debern guardar en bolsas limpias de papel, tela de
fibra cerrada o polietileno o bien en frascos bien tapados, identificar especificando el tipo de
muestra, origen, nombre del solicitante, anlisis requerido y enviarlo al laboratorio.
Como evitarlo
28
Nota: Esta prctica representa un bajo riesgo, no obstante es importante acatar el reglamento vigente
colocado a la entrada del laboratorio.
Bibliografa recomendada
La bibliografa citada en su programa de estudios de la materia de Bromatologa, la AOAC y la
Norma Oficial Mexicana.
Glosario de trminos.
(Buscar el significado de los siguientes trminos y explicarlos)
Muestreador de pico.
Muestreador de pacas.
Muestra madre.
Muestra representativa.
Completar con palabras nuevas que identifique en su bsqueda.
Cuestionario
29
Responsable de la Prctica:
M. en C. Ma Guadalupe Acero Godinez
Dr. Carlos U. Hubi Segura
Jess Mara, Ags. Enero de 2011
30
Criterios de desempeo:
El profesional en formacin ser competente para identificar y justificar la clasificacin de los
ingredientes usados en al alimentacin del ganado.
Sabr buscar e interpretar la informacin de las tablas nutrimentales para cada especie animal
(NRC, FEDNA) y de otras fuentes, como son revistas cientficas y de divulgacin, el Internet, libros
especializados, etc.
Identificar y describir fsicamente los ingredientes y poder enlistar sus atributos y los identificar en
la clasificacin de la NRC.
Resultados esperados:
Los alumnos colectarn muestras en la fbrica de alimentos o forrajeras del estado, de ser posible
con la informacin de calidad del lote, las cuales sern llevadas al laboratorio el da de la prctica
24 horas antes.
Describir fsicamente el ingrediente.
Documentar en la literatura disponible la existencia de ms tipos o variedades y los valores del
anlisis qumico proximal por ingrediente.
Mesa redonda de competencia entre equipos, para identificar y describir los ingredientes desde el
punto de vista nutritivo como fsico.
31
Nota: Esta prctica representa un bajo riesgo, no obstante es importante acatar el reglamento vigente
colocado a la entrada del laboratorio.
Bibliografa recomendada
La bibliografa citada en su programa de estudios de la materia de Bromatologa.
Glosario de trminos.
(Buscar el significado de los siguientes trminos y explicarlos)
Bromatologa.
Toxicologa.
Nutriente.
Nutrimento.
Alimento.
Forraje.
Alimento balanceado.
Alimento concentrado.
Suplemento.
Complemento.
Insumo.
32
Energtico.
Proteico.
Peletizado.
Cuestionario
33
Responsable de la Prctica:
M. en C. Ma Guadalupe Acero Godinez
Dr. Carlos U. Hubi Segura
34
Introduccin
Las muestras obtenidas en el campo no pueden analizarse como tal: deben ser homogenizadas y
reducidas a un tamao que permita su determinacin qumica o por digestibilidad. Es necesario
conocer muy bien cada ingrediente que se quiere analizar para saber si se deben realizar pasos
especiales en la preparacin de la muestra.
Como proceder en
caso de un accidente.
Lesiones fsicas en el uso Leer los manuales de operacin de cada Apagar equipos
de molinos
equipo.
Retirar persona del equipo
Portar el equipo de seguridad necesario
Atencin mdica adecuada
Nota: Esta prctica representa un bajo riesgo, no obstante es importante acatar el reglamento vigente
colocado a la entrada del laboratorio.
Materiales y equipos
Frascos de plstico con tapadera.
Muestras de diferentes ingredientes.
Etiquetas.
Manual de prcticas.
Estufa de secado con aire forzado.
Molino con cribas intercambiables.
Tijeras
Bolsas de plstico trasparentes.
Una vez que la muestra es tomada deber ser protegida para evitar cambios que alteren su
composicin. Tejada recomienda los siguientes procedimientos:
1. Muestras secas pueden enviarse al laboratorio en frascos de boca ancha de vidrio o de
nalgeno con tapn de rosca o en bolsas de polietileno.
2. Forrajes frescos o muestras parcialmente secas debern enviarse en bolsas de papel
resistente, el papel permitir que el agua se evapore impidiendo que la humedad alta
favorezca el crecimiento de microorganismos que descompondrn la muestra.
35
3. Ensilajes debern enviarse en doble bolsa de polietileno grueso o en frascos con tapn de
rosca y congelarse inmediatamente para evitar as al laboratorio. Se pueden enviar en
guantes de palpacin.
4. Muestras lquidas como melazas y orina se envasarn en frascos de vidrio o nalgeno con
tapn de rosca.
5. Nota 1.- Si se analizara minerales guardar la muestra en frascos de nalgeno o polietileno
para evitar contaminacin de minerales propios del vidrio...
6. Nota 2.- Si la muestra es un forraje fresco mandarla en bolsa de papel resistente y anotar
el peso de la muestra al momento de colocarla en la bolsa, as aun cuando pierda
humedad esta se considerara por el analista, procurando enviar mnimo 2 Kg. de alimento.
36
Secado de la muestra
Si la muestra presenta ms de 13 % de humedad, deber secarse por el mtodo de materia seca
parcial (50 a 55 oC durante 24 h).
Molienda de la muestra.
La muestra debe de ser reducida a un tamao de partcula adecuado para ser sometido al
anlisis.
Este proceso se efecta en un molino de laboratorio tipo Wiley, que posee cribas intercambiables,
las muestras debern conservarse en frascos o en cualquier material inerte completamente
cerrado, en el caso de las melazas debern de ser conservadas en el refrigerador bien tapadas.
Debemos considerar que todos los resultados que obtengamos con este material debern ser
reportados como Base Materia Seca (BMS) o bien realizar la conversin a la base que sea
solicitado ya sea Base Materia Seca o Base Materia Humedad.
Es muy importante que al realizar cualquier anlisis sea efectuado por duplicado y triplicado para
asegurar la veracidad de los resultados.
Esta dinmica ser por equipo, buscando la participacin de todos y cada uno de los participantes.
Bibliografa recomendada
La bibliografa citada en su programa de estudios de la materia de bromatologa.
Realizar bsquedas en el Internet.
37
Glosario de trminos.
Base seca.
Base hmeda
Base Tal Cual
As fed.
Criba
38
Determinacin
de
la
Materia
Seca
y
la
Humedad total.
Determinacin de Extracto
Etreo
Determinacin de fibra
cruda
Determinacin de protena
cruda
Determinacin de cenizas
Extracto
Libre
Nitrgeno
Integracin
de
resultados del AQP
Laboratorio de Nutricin
Animal
Laboratorio de Nutricin
Animal
Laboratorio de Nutricin
Animal
Laboratorio de Nutricin
Animal
de Saln de clases
4 horas /
semana 4
5 horas /
semana 5 y 6
6 horas /
semana 6
4 horas /
semana 7
2 horas /
semana 9
los
39
Responsable de la Prctica:
M. en C. Ma Guadalupe Acero Godinez
Dr. Carlos U. Hubi Segura
Jess Mara, Ags. Enero de 2011
40
Fundamento: Esta tcnica se basa en la evaporacin del agua que contiene el material a
una temperatura de 50 a 55 oC, hasta que el peso de la muestra sea constante en el
medio ambiente.
El material sigue conteniendo una pequea proporcin de agua que proviene de la
humedad ambiental, la prdida en peso se considera agua.
Los materiales que son secados a temperaturas superiores a 55 oC se alteran
significativamente en algunos de sus componentes (Van Soest, 1965), por lo tanto, si un
material se va a secar con el objeto de someterlo a anlisis diferentes al de humedad, no
deber sobrepasar los 55 oC.
Si el material se va a secar para medir exclusivamente el contenido de agua pueden
emplearse temperaturas superiores a los 55 oC, siempre que no haya prdidas de
substancias por volatilizacin o por descomposicin.
Materia Seca Total
Esta tcnica se basa en la evaporacin total de agua entre 100 y 105 oC hasta peso
constante. Se considera que la prdida de peso es agua.
Como evitarlo
41
A. Peso
Bolsa
B. Peso
Bolsa +
Muestra
C. Peso
Inicial
(Pi)
4.5678
Pi = B A
2.0000
Clculos
Ej. 4.1
2.5678
D. Bolsa
+
Muestra
seca
3.8765
E. Peso
Final
(Pf)
F.
%DMS
Pf =
DA
1.3087
= Pf / Pi
x 100
34.56%
G.
%MSP
H.
%DMS100
= %MS
94.5%
36.57%
Mtodo de la Termobalanza
42
Procedimiento:
Encender la Termobalanza.
Ajustar la Termobalanza en ceros.
Colocar la muestra en el plato de la Termobalanza ayudndonos con una esptula la
cantidad puede ser desde 1 a 10 g procurando que el material quede bien distribuido por
todo el plato para que nuestro resultado sea correcto.
Ajustamos la intensidad de la fuente de calor en 1.5 para evitar la calcinacin de la
muestra.
Se coloca la lmpara sobre el plato y se programa el tiempo de 10 a 15 minutos hasta
que la escala permanezca estable.
Anotar el peso final de la escala.
El clculo se realiza aplicando la misma frmula de materia seca.
Materiales y equipos utilizados.
Balanza de humedad
Esptula.
Cajas de aluminio para humedad,
Estufa de aire forzado con rango de 0 a 200oC,
Esptula de acero inoxidable,
Pinzas para crisol,
Desecador
Balanza analtica.
Bibliografa recomendada
La bibliografa citada en su programa de estudios de la materia de bromatologa.
Para saber ms.
Leer artculos cientficos de las revistas cientficas de alto impacto:
-Journal of Animal Science,
Nutrition Research,
www.elsevier.com,
Scientiae naturae,
archivos latinoamericanos de nutricin,
Leer con cuidado los objetivos y los mtodos utilizados. Posteriormente buscar la fuente
y ver si los mtodos usados son los adecuados para cada variable bajo estudio. Busca
en el Internet que otros mtodos existen para determinar la humedad en los alimentos,
Glosario de trminos.
Grado brix.
Humedad funcional.
Humedad ambiental.
43
Cuestionario
44
PRCTICA 5
Extracto Etreo
Grasa Cruda.
Responsable de la Prctica:
M. en C. Ma Guadalupe Acero Godinez
Dr. Carlos U. Hubi Segura
Jess Mara, Ags. Enero de 2011
45
46
Metodologa
Mtodo Goldfisch.
Pesar por diferencia 2 g de muestra e introducirlo en el dedal y taparlo con un trozo de algodn
seco.
Colocar el dedal que contiene la muestra dentro del portadedal y fijarlo bajo del condensador del
aparato de extraccin.
Pesar el vaso que se encuentra en el desecador usando pinzas para manipularlo y depositar
dentro del mismo 30 a 40 ml de ter, unirlo a la rosca y colocarlo debajo del condensador cerrado
hermticamente.
Abrir la llave del agua y subir las parrillas hasta que queden en contacto con el vaso.
Iniciar el calentamiento y observar durante los primeros diez minutos de ebullicin si hay fugas de
ter. Cuando el nivel de ter permanezca constante puede dejarse solo el aparato y observarse
peridicamente.
A partir del inicio de la ebullicin extraer durante 2 a 8 h como mnimo, dependiendo de la muestra
que se trate.
Cuando se finalice el tiempo de extraccin bajar las parrillas y dejar que el dedal termine de
gotear, desenroscar el vaso de extraccin y quitar el dedal que contiene la muestra, colocar en el
lugar del dedal un recolector de vidrio, volver a colocar el vaso de vidrio y subir las parrillas
calientes.
Destilar el ter que se encuentra en el vaso de extraccin y poco antes de que ste se evapore
hasta sequedad, bajar las parrillas y retirar el vaso.
Vaciar el ter de los tubos recolectores a un recipiente especial para ter usado.
Colocar el vaso en la estufa a 100 oC durante 40 minutos, enfriar en el desecador y
posteriormente pesar.
Clculos: % E.E.= (Peso del vaso
gr. de muestra.
A. Peso
Vaso
Clculos
Ej. 5.1
2.5678
B.
C. Peso
Inicial
(Pi)
Pi = B A
1.0000
D. Bolsa
+
Muestra
seca
2.6765
E. Peso
Final
(Pf)
F.
%DMS
Pf =
DA
0.1087
= Pf / Pi
x 100
%10.87
G.
%MSP
H.
%DMS100
= %MS
94.5%
11.50%
47
1.- Se pesa el tubo de extraccin con el papel usado como filtro en la base.
2.- se coloca dentro la muestra se vuelve a pesar lleno, se tapa y coloca en la charola de muestra.
3.- Se pesa el vial colector con la fibra de vidrio (glass wool).
4.- Colocar los tubos de extraccin y los viales colectores en el equipo.
5.- Establecer el mtodo y se ingresaron los parmetros de procedimiento:
Presin de extraccin 9000 psi, temperatura de extraccin 100 C, HVR temperatura 100 C,
tiempo de espera o rampeo 0 minutos, tiempo de extraccin 45 minutos, Flow Rate (tasa de
flujo) 1.3 lpm.
6.- Se ingresaron al equipo los datos tales como peso de tubos y viales de coleccin, se presiona
Start y al cabo de 45 minutos el equipo indica que se retiren los viales y los tubos, se pesan los
viales de coleccin y se introducen los datos al equipo y nos da directamente los resultados.
Bibliografa recomendada
La bibliografa citada en su programa de estudios de la materia de bromatologa.
Glosario de trminos.
Flujo sper critico.
Extraccin.
Soluble.
Sustancia
Grasa.
Aceite.
Solvente
Cuestionario
48
PRCTICA 6
Fibra cruda o fibra bruta.
Responsable de la Prctica:
49
Aparatos utilizados:
Labconco
ANKOM
Como evitarlo
50
Metodologa
51
A. Peso
Bolsa
B. Peso
Bolsa +
Muestra
Clculos
C. Peso
Inicial
(Pi)
D. Bolsa
+
Muestra
seca
Pi = B A
E.
Peso
Final
(Pf)
Pf =
DA
F.
%DMS
G.
%MSP
= Pf / Pi
x 100
Ej. 6.1
H.
%DMS100
= %MS
94.50
Clculos
Ej. 6.2
A. Peso
Bolsa
B. Peso
Bolsa +
Muestra
C. Peso
Inicial
(Pi)
Pi = B A
D. Bolsa
+
Muestra
seca
E.
Peso
Final
(Pf)
Pf =
DA
F.
%DMS
G.
%MSP
= Pf / Pi
x 100
H.
%DMS100
= %MS
94.50
52
Bibliografa recomendada
La bibliografa citada en su programa de estudios de la materia de bromatologa.
Glosario de trminos.
Amiloltica.
Celuloltica.
Carbohidratos Estructurales
Carbohidratos no estructurales.
Fibra dietaria.
Fibra bruta.
Cuestionario
53
PRCTICA 7
Determinacin de Protena Cruda.
Responsable de la Prctica:
M. en C. Ma Guadalupe Acero Godinez
Dr. Carlos U. Hubi Segura
Jess Mara, Ags. Enero de 2011
54
Muestra con
Nitrgeno
I. Digestin en
cido
Componentes oxidados:
CO2, H2O, SO42-, PO43Amonia (NH3) atrapada como
(NH4)2SO4
II. Destilacin:
NH3 se volatiliza
III. Titulacin
con NaOH
55
Diagrama de un aparato de Kjeldahl sencillo donde se observan las primeras dos fases del
proceso:
Paso I: Digestin cida de la muestra con nitrgeno produciendo amoniaco
Paso II: Destilacin para separar el amonio vaporizado y atraparlo en el matraz
Erlenmeyer con un cido
Paso III: Finalmente se lleva acabo la titulacin (no se muestra).
56
10. La amonia es voltil y se libera por medio de una destilacin. Se destila el contenido del
matraz de Kjeldahl en un vaso con un cido fijador hasta que se recupera la amonia: el
cido atrapa la amonia en forma de amoniaco
a. Si se utiliza un cido fuerte (Ej.: H2SO4, HCl, etc.) se debe medir exactamente la
cantidad del cido y posteriormente se titula con una base:
57
b. Si se utiliza una cido dbil (Ej.: cido Brico: H 3BO3) no es necesario medir la
cantidad exacta pero luego se debe titular con un cido y no con una base!!
-
2-
58
Total de moles
de cido en el
frasco receptor
Menos
Moles de cido
no utilizados en
la formacin de
+
NH4
(= base, NaOH,
usada
en
titulacin)
es igual
Moles
de
amonia, NH3, en
la
solucin
destilada
(= nitrgeno en
muestra)
15. El clculo que se requiere hacer primero es determinar cuntos moles de cido haba en
la solucin fijadora antes que la amonia fuera atrapada. Se multiplica la molaridad del
cido por el volumen de la solucin:
Moles de cido = molaridad del cido X volumen usado en el frasco (molesA = M x V)
16. Se calcula el nmero de moles de NaOH utilizados para neutralizar los cidos restantes
(que no se utilizaron para neutralizar al amoniaco.
Moles de base = molaridad de la base X volumen adicionada de la bureta (molesB = M x V)
17. Se sustrae el nmero de moles de base del nmero de moles de cido presentes al
principio (antes de fijar la amonia) para obtener el numero de moles de cido que
neutralizaron la amonia:
Moles de cido usado = moles de cido al inicio (antes de fijar) moles de base usada en la
titulacin
18. El valor obtenido (moles de cido usado) es lo mismo que el nmero de moles de
amonia fijados como amoniaco
19. El nmero de moles de amonia es lo mismo que el nmero de moles de nitrgeno (la
amonia tiene un slo nitrgeno)
20. Para calcular el numero de gramos de nitrgeno en la muestra original de protena se
debe multiplicar los moles de nitrgeno por la masa atmica del nitrgeno:
Gramos de Nitrgeno = moles de nitrgeno x masa atmica (1 mol = 14.0067gA)
21. Para calcular porcentaje de nitrgeno en la muestra inicial se debe dividir los gramos de
nitgeno en la muestra entre los gramos de muestra inicial multiplicado por 100:
%Nitrgeno = (g N / g Muestra ) x 100
22. Para conocer el porcentaje de Protena Cruda se debe multiplicar el porcentaje de
nitrgeno de la muestra por un factor de conversin, generalmente 6.25, aunque hay
diferencias entre las diferentes muestras:
PC = %N x 6.25
59
Criterios de desempeo:
El profesional en formacin ser competente cuando sepa realizar e interpretar los resultados de
los anlisis.
Resultados esperados:
Los profesionales en formacin sern capaces de realizar la tcnica e interpretar los resultados
obtenidos.
Identificara la limitante del anlisis y su importancia para la evaluacin de los ingredientes.
Evaluacin de los datos obtenidos comparados contra los de tablas y literatura
Como evitarlo
Como proceder en
caso de un accidente.
60
Reactivos:
Solucin indicadora de nitrgeno.
Solucin valorada de cido sulfrico (0.1 N)
Solucin valorada de hidrxido de sodio a una normalidad conocida
cido sulfrico concentrado grado reactivo
Catalizador (selenio)
Granalla de zinc o piedras de ebullicin
Muestra a analizar, la cual tendremos parcialmente seca y el resultado ser reportado en BMS
(base materia seca)
Metodologa
A. Tcnica de Macro-Kjeldahl
Procedimientos:
1. Pesar de 0.5 a 1 g de muestra, sobre un papel libre de nitrgeno de preferencia blanco, y
colocarlo todo junto en el matraz Kjeldahl y en otro matraz colocar un papel sin muestra.
ste ser nuestro blanco.
2. Agregar 25 ml de cido sulfrico concentrado (1.25%???).
3. Agregar el catalizador una pequea cucharadita, junto con 5 piedras de ebullicin.
4. Colocar el matraz con su contenido en la parrilla del digestor, encender el extractor y la
parrilla.
5. Cuando la solucin adquiera la coloracin transparente, suspender el calentamiento y
dejar enfriar por un perodo aproximado de 30 minutos. Manteniendo el extractor
encendido para eliminar los gases.
6. Adicionar lentamente y por las paredes del matraz 250 ml de agua destilada antes de que
el residuo digerido se solidifique y despus djelo enfriar a una temperatura inferior a 25
oC.
61
PROGRAMA DE ACTIVIDADES.
Los equipos trabajarn en forma coordinada para que sea una sola persona la que pese al inicio y
al final. Todos y cada uno deben tomar sus propias notas.
Dinmica utilizada.
En el laboratorio bajo la asesora del profesor, realizar la determinacin de nitrgeno (protena
cruda) cruda usando el equipo de combustin interna Dumas.
62
El alumno portara el manual de prcticas al momento de la prctica, mismo que habr ledo
previamente, el cual ser firmada por el profesor como medida de que ya ley y entendi la
prctica y verificativo de asistencia.
Los resultados y notas de la prctica sern revisados en la siguiente sesin y se les estampar la
firma del profesor y fecha, mismos que se anexarn al reporte de la prctica, en caso de no
incluirlos la prctica no ser vlida.
Bibliografa recomendada
La bibliografa citada en su programa de estudios de la materia de bromatologa.
Glosario de trminos.
Estndar de calibracin.
Cuestionario
63
PRCTICA 8
Determinacin de cenizas o materia inorgnica.
Responsable de la Prctica:
M. en C. Ma Guadalupe Acero Godinez
Dr. Carlos U. Hubi Segura
Jess Mara, Ags. Enero de 2011
64
+ O2
Criterios de desempeo:
El profesional en formacin ser competente cuando sepa realizar e interpretar los resultados de
los anlisis.
Cuando tenga la habilidad de buscar la informacin necesaria para realizar la interpretacin de los
resultados obtenidos.
Resultados esperados:
Los profesionales en formacin sern capaces de realizar la tcnica e interpretar los resultados
obtenidos.
Identificara la limitante del anlisis y su importancia para la evaluacin de los ingredientes.
Evaluacin de los datos obtenidos comparados contra los de tablas y literatura
Como evitarlo
Quemadura en las manos o Usar pinzas largas para tomar Lavar la superficie quemada y
irritacin de la cara.
los crisoles e introducirlos a la aplicarse
pomada
para
mufla, cuando la mufla este quemaduras.
caliente abrirla y permanecer
en un lateral, de tal forma que
el calor no nos irrite la cara.
Notificar cualquier incidente al profesor.
65
Metodologa
A. Peso
Crisol
B. Peso
Crisol +
Muestra
Clculos
Ej. 8.1
C. Peso
Inicial
(Pi)
Pi = B A
D. Peso
Crisol +
Muestra
seca
E.
Peso
Final
(Pf)
Pf =
DA
F.
%DMS
G.
%MSP
= Pf / Pi
x 100
H.
%DMS100
= %MS
94.50
Bibliografa recomendada
La bibliografa citada en su programa de estudios de la materia de bromatologa.
Glosario de trminos.
Que es absorcin atmica.
Cenizas digestibles.
Sinnimo de cenizas.
Cuestionario
66
PRCTICA 9
Integracin de los resultados del anlisis qumico proximal.
Responsable de la Prctica:
M. en C. Ma Guadalupe Acero Godinez
Dr. Carlos U. Hubi Segura
Jess Mara, Ags. Enero de 2011
67
Figura 9.1 Composicin de los alimentos y flujograma para su anlisis qumico proximal (AQP o
Weende).
El siguiente cuadro seala los componentes de cada determinacin y el grupo del nutriente al cual
pertenece. Todas las determinaciones excepto la humedad pueden contener ms de un
compuesto qumico.
Cuadro 9.1 Composicin de las diferentes determinaciones del anlisis qumico proximal
(McDonald, 1973)
68
Nutriente
Determinacin
Agua
Humedad
Agua
Lpidos
Extracto Etreo
Carbohidratos
Fibra cruda
Grasas,
aceites,
ceras,
fosftidos,
lipoprotenas, pigmentos liposolubles,
vitaminas liposolubles
Celulosa, hemicelulosa y lignina
Extracto libre
nitrgeno
Protenas
Protena cruda
Minerales
Cenizas
de
cerebrsidos,
esteroides y
Monosacridos,
disacridos,
trisacridos,
pectinas,
almidones, resinas, cidos orgnicos hidrosolubles y
vitaminas hidrosolubles.
Protenas,
aminocidos,
compuestos
orgnicos
nitrogenados no proteicos as como aminas, vitaminas del
complejo B, cidos nucleicos, glucsidos nitrogenados;
clorofilas, compuestos inorgnicos nitrogenados como las
sales de amonio hidrxido de amonio, amoniaco, nitratos y
nitritos.
Compuestos de Ca, K, Mg, Na, P, Fe, Zn, Mo, Se, Si y
otros.
69
Criterios de desempeo:
El profesional en formacin ser competente cuando sepa realizar e interpretar los resultados de
los anlisis.
Cuando tenga la habilidad de buscar la informacin necesaria para realizar la interpretacin de los
resultados obtenidos.
Resultados esperados:
Los profesionales en formacin sern capaces de interpretar los resultados obtenidos.
Identificara la limitante del anlisis y su importancia para la evaluacin de los alimentos usados
para la alimentacin de los animales.
Evaluacin de los datos obtenidos comparados contra los de tablas y literatura.
No aplica.
Metodologa
PROGRAMA DE ACTIVIDADES.
Los equipos trabajarn en forma coordinada para realizar observaciones y complementar los
datos de los compaeros.
Todos y cada uno deben tomar sus propias notas.
Dinmica utilizada.
Esta prctica se realizar en el saln de clases, pasar al pizarrn equipo por equipo y presentar
la interpretacin de los anlisis.
El alumno portar el manual de prcticas al momento de la prctica, mismo que habr ledo
previamente, y har una presentacin tipo comercial de los ingredientes analizados, de tal forma
que d una amplia informacin de sus productos e interprete los anlisis y al mismo tiempo
sustente la defensa de los mismos.
Entregar un reporte escrito de esta prctica antes de iniciar la presentacin.
Bibliografa recomendada
La bibliografa citada en su programa de estudios de la materia de bromatologa.
70
Glosario de trminos.
Ingrediente
Insumo
Materia prima
Ensilado
Aditivos en la alimentacin
Grasas de sobrepaso
Protenas de sobrepaso
Grasas protegidas
Cuestionario
71
Determinacin de FDN
Laboratorio de Nutricin
Animal
Determinacin de FDA
Laboratorio de Nutricin
Animal
Determinacin de Lignina Laboratorio de Nutricin
Animal
Integracin
de
los Saln de clases.
resultados del anlisis de
fracciones de fibra
4 horas /
semana 10
4 horas /
semana 11
4 horas /
semana 11
2 horas /
semana 12.
Figura
72
PRCTICA 10
Determinacin de Fibra Detergente Neutra (FDN).
Responsable de la Prctica:
M en C. Ma. Guadalupe Acero G.
Jess Mara, Ags. Enero de 2011
73
Caractersticas
Evolucin
Diversidad
Anlisis de los
componentes
de la pared
celular
Figura 2.
Diagrama de
clula vegetal
Organelos de
clula vegetal
la
la
Organelo
Ncleo
Nucleolo
Membrana
nuclear
Membrana
celular
Pared celular
Funcin
Almacn de informacin gentica en forma de DNA
Controla la actividad dentro del ncleo
Separa el ncleo del citoplasma, contiene poros para
el paso del RNAm
Doble capa de fosfolpidos con protenas receptoras y
de transporte
Capas de celulosa estructurada por filamentos de
hemicelulosa y lignina
Citoplasma
Amiloplasto
Vacuola Central
Centrosomas
Ribosomas
Retculo
Endoplsmico
Rugoso
(RER)
74
Retculo
Endoplsmico
Liso
(REL)
Aparato
de
Golgi
Cloroplasto
Mitocondria
Fotosntesis
Reaccin en el
cloroplasto
Reaccin en la
mitocondria
Funciones
celulares
Homeostasis
Balance hdrico
Energa
Sntesis
proteica
Reproduccin
Defensa
Asimilacin
Excrecin
La Pared Vegetal
Funciones
de
la
Pared
Vegetal
75
Diagramas
de
la
Pared
celular
vegetal
Imagen
de
una
clula
vegetal
Esquema de
la
pared
vegetal
Esquema de
las
microfibrillas
de celulosa
Enlaces
-1-4
glicosdicos
76
Puentes
de
hidrgeno
entre
las
cadenas
de
celulosa
Pared primaria
y
pared
secundaria
Celulosa
cristalina
celulosa
amorfa
77
Estructura de
la celulosa
Celobiosa
Celulosa
Celulosa
cristalina
Hemicelulosa
Estructuras de
la
celulosa,
hemicelulosa y
pectinas
Estructura
la Lignina
de
Caractersticas
78
de la lignina
79
Degradacin
de la celulosa
Estructuras
de la pared
celular
Pared primaria
Lamela
Pared
secundaria
Membrana
celular
80
Criterios de desempeo:
El profesional en formacin ser competente cuando sepa realizar e interpretar los resultados de
los anlisis.
Y sea capaz de explicar su calidad nutritiva.
Resultados esperados:
Los profesionales en formacin sern capaces de realizar la tcnica e interpretar los resultados
obtenidos.
Identificar la importancia para la evaluacin de los forrajes.
Evaluacin de los datos obtenidos comparados contra los de tablas y literatura
Como proceder en
caso de un accidente.
81
Reactivos.
Solucin detergente neutro
Alfa-amilasa resistente al calor
Acetona grado reactivo libre de color
Metodologa
Preparacin de las bolsas de filtracin.
1. Pesar las bolsas de filtracin en balanza analtica.(W1).
2. Pesar directamente en la bolsa de filtracin 0.5 g de muestra (W2), de tamao de partcula
1 mm. Pesar un blanco con una bolsa vaca incluirla en la digestin para determinar la
correccin de bolsa (C1).
3. Sellar la bolsa a una distancia de 0.5 cm. De la abertura.
4. Acomodar la muestra uniformemente dentro de la bolsa.
5. Si la muestra contiene grasa se recomienda colocar las bolsas con muestra en un frasco
con 500 ml de acetona, agitando el frasco 10 veces dejar reposar 10 minutos. Repetir el
procedimiento con acetona nueva el procedimiento. Y posteriormente sacar las bolsas de
la acetona y ponerlas al aire durante 5 minutos para eliminar el residuo.
6. Colocar las 24 bolsas en las 8 charolas del suspensor de bolsas (tray), colocando 3
bolsas por charola acomodadas a 120 grados, en relacin uno con otra. La charola 9 se
deja libre y acta como el tope de la charola 8. Acomodar el tray dentro de la cmara del
equipo.
7. Adicionar 1900 a 2000 ml de la solucin de neutro detergente y 4 ml de alfa amilasa
resistente al calor, acomode el contrapeso y cierre, programe el tiempo de digestin 75
minutos, encienda agitacin y calentamiento y Start para iniciar.
8. Transcurrido el tiempo se apaga la agitacin y calentamiento. Se abre la vlvula de salida
de la solucin caliente para reducir la presin interna. Y se abre la parte superior de la
cmara. Se vuelve a cerrar la vlvula de salida, se agregan 1900 a 2000 ml de agua
caliente (90 a 100 C) encienda agitacin durante 3 a 5 minutos, se abre la vlvula de
salida de lquido y se repite este procedimiento 3 veces.
9. Retirar las bolsas de las charolas y presiona ligeramente para eliminar l lquido que haya
quedado atrapado, sumerja durante 3 minutos las bolsas en un vaso de precipitado de
500 con 250 ml acetona, remueva las bolsas y elimine el exceso. Deje secar a la
intemperie para eliminar la acetona.
10. Ms tarde para secar las bolsas se somete la muestra a 100C durante 2 a 4 horas,
enfriar en el desecador y pesar este peso corresponder al (W3).
11. Colocar la bolsa en un crisol que este a peso constante, y calcinar durante 2 horas a 550
C, enfriar en un desecador y pesar (W4)
NDF base tal cual = (W3 (W1 X C1)) X 100/ W2
NFD base materia seca = (W3 (W1 X C1)) X 100/ W2 X %materia seca
NDF en base materia seca de la materia orgnica =....
= (W4 (W1 X C2)) X 100/ W2 X DM
W1 = peso de la bolsa sola.
W2 = peso de la muestra.
W3 = peso de la bolsa con la fibra digerida.
W4 = peso de la bolsa con la fibra digerida y calcinada.
W5 = peso de la materia orgnica (M0) =W3- W4
82
Bibliografa recomendada
La bibliografa citada en su programa de estudios de la materia de bromatologa.
Glosario de trminos.
En sus revisiones de literatura anote y explique cuales palabras encontraron que no sean
comunes para usted.
83
PRCTICA 10
Determinacin de Fibra Detergente cida (FDA).
Responsable de la Prctica:
M en C. Ma. Guadalupe Acero G.
Jess Mara, Ags. Enero de 2011
84
Criterios de desempeo:
El profesional en formacin ser competente cuando sepa realizar e interpretar los resultados de
los anlisis.
Y sea capaz de explicar calidad nutritiva de los recursos forrajeros.
Resultados esperados:
Los profesionales en formacin sern capaces de realizar la tcnica e interpretar los resultados
obtenidos.
Identificar la importancia para la evaluacin de los forrajes.
Evaluacin de los datos obtenidos comparados contra los de tablas y literatura
Sufrir alguna quemadura con El profesor ser el encargado de Lavar la piel con abundante
vapor de agua al momento de manejar el equipo ANKOM y agua.
abrir las vlvulas de salida del mostrarles las formas de manejarlo
equipo ANKOM.
adecuadamente.
Notificar en caso de cualquier incidente al profesor.
Reactivos.
Solucin de detergente cido:
cido sulfrico 1N
Acetona grado reactivo libre de color
85
Metodologa
Bibliografa recomendada
La bibliografa citada en su programa de estudios de la materia de bromatologa.
86
Glosario de trminos.
En sus revisiones de literatura anote y explique cuales palabras encontr que no sean comunes
para usted.
87
PRCTICA 11
Determinacin de Lignina
Responsable de la Prctica:
M en C. Ma. Guadalupe Acero G.
Jess Mara, Ags. Enero de 2011
88
89
Sin embargo, en esta fraccin tambin aparece el silicio. La diferencia entre el valor de las
paredes celulares y la fibra cida detergente, da una estimacin del valor de la Hemicelulosa, ya
que esta diferencia tambin incluye una fraccin de protena adherida a las paredes celulares. El
mtodo de fibra detergente cido tambin se emplea como paso preliminar en la determinacin de
la lignina.
Criterios de desempeo:
El profesional en formacin ser competente cuando sepa realizar e interpretar los resultados de
los anlisis.
Y sea capaz de explicar calidad nutritiva de los recursos forrajeros.
Resultados esperados:
Los profesionales en formacin sern capaces de realizar la tcnica e interpretar los resultados
obtenidos.
Identificar la importancia para la evaluacin de los forrajes.
Evaluacin de los datos obtenidos comparados contra los de tablas y literatura
90
Sufrir alguna quemadura con El profesor ser el encargado de Lavar la piel con abundante
vapor de agua al momento de manejar el equipo ANKOM y agua.
abrir las vlvulas de salida del mostrarles las formas de manejarlo
equipo ANKOM.
adecuadamente.
Notificar en caso de cualquier incidente al profesor.
Metodologa
91
Bibliografa recomendada
La bibliografa citada en su programa de estudios de la materia de bromatologa.
Glosario de trminos.
En sus revisiones de literatura anote y explique cuales palabras encontr que no sean comunes
para usted.
92
PRCTICA 12
Integracin de los resultados de las Fibras Detergentes Neutra (FDN)
y cida (FDA).
Responsable de la Prctica:
M en C. Ma. Guadalupe Acero G.
Jess Mara, Ags. Enero de 2011
93
Fibra Detergente Neutro (FDN): una muestra de forraje se digiere en una solucin
que extrae todos los contenidos celulares, quedando las paredes celulares
(celulosa, hemicelulosa y lignina). Esta determinacin permite predecir el
consumo que tendrn los animales de ese alimento.
Fibra Detergente cido (FDA): en este caso la solucin extrae adems la
hemicelulosa, quedando nicamente la lignina y celulosa. Esta es la fraccin
menos digestible de la fibra y permite estimar la digestibilidad del forraje.
4.- Propsito especfico de la prctica.
El profesional en formacin a travs del conocimiento adquirido en la teora del curso, sea capaz
de realizar un reporte con el anlisis de fracciones de fibras y hacer indicaciones a cerca de la
calidad de dicho recurso forrajero. Si fuera un ingrediente nuevo pudiera ubicarlo dentro de la
clasificacin de la NRC, convertir sus valores a las diferentes bases y predecir en base a sus
resultados el consumo de forrajes y su digestibilidad.
Criterios de desempeo:
El profesional en formacin ser competente cuando sepa realizar e interpretar los resultados de
los anlisis.
Cuando tenga la habilidad de buscar la informacin necesaria para realizar la interpretacin de los
resultados obtenidos.
Resultados esperados:
Los profesionales en formacin sern capaces de interpretar los resultados obtenidos.
Identificar la limitante del anlisis y su importancia para la evaluacin de los alimentos usados
para la alimentacin de los animales.
Evaluacin de los datos obtenidos comparados contra los de tablas y literatura.
Realizar bsquedas en el Internet para ver de acuerdo a las diferentes escuelas de nutricin
(USA, Europa, Cuba) cual es la tendencia de anlisis y prediccin de valor nutritivo de los forrajes.
94
Como evitarlo
No aplica
No aplica.
No aplica.
6.-Desarrollo de la prctica
PROGRAMA DE ACTIVIDADES.
Los equipos trabajarn en forma coordinada para realizar observaciones y complementar los
datos de los compaeros.
Todos y cada uno deben tomar sus propias notas.
Dinmica utilizada.
Esta prctica se realizar en el saln de clases, pasar al pizarrn equipo por equipo y nos
presentar la interpretacin de los anlisis.
El alumno portar el manual de prcticas al momento de la prctica, mismo que habr ledo
previamente, y har una presentacin tipo comercial de los ingredientes analizados, de tal forma
que d una amplia informacin de sus productos e interprete los anlisis y al mismo tiempo
sustente la defensa de los mismos.
Entregar un reporte escrito de esta prctica antes de iniciar la presentacin.
http://dels.nas.edu/banr/nut_req.shtml
Church y Pond. 2002. Fundamentos de nutricin y alimentacin de animales.
LIMUSA.
http://www.foragetesting.org/index.php
http://www.clemson.edu/agsrvlb/photo.htm
9.- Para saber ms.
Historia y usos de los ingredientes usados en el ganado.
Que es la para de sorgo.
Es bueno o malo el nopal como nutriente para los rumiantes.
El nopal forrajero cual es su principal nutriente.
Al alimentar a los bovinos con nopal cual es la recomendacin, cuando hay de proporcionarles y
por que causa heces liquidas.
10 - Glosario de trminos.
95
Criterios de desempeo:
El profesional en formacin ser competente cuando sepa realizar e interpretar los resultados de
los anlisis.
Y sea capaz de explicar calidad nutritiva de los recursos forrajeros.
Resultados esperados:
Los profesionales en formacin sern capaces de realizar la tcnica e interpretar los resultados
obtenidos.
Identificar la importancia para la evaluacin de los forrajes.
Evaluacin de los datos obtenidos comparados contra los de tablas y literatura
96
Bibliografa recomendada
La bibliografa citada en su programa de estudios de la materia de bromatologa.
Glosario de trminos.
En sus revisiones de literatura anote y explique cuales palabras encontr que no sean comunes
para usted.
97
PRCTICA 12
Responsable de la Prctica:
M. en C. Ma Guadalupe Acero Godinez
Dr. Carlos U. Hubi Segura
98
Fibra Detergente Neutro (FDN): una muestra de forraje se digiere en una solucin
que extrae todos los contenidos celulares, quedando las paredes celulares
(celulosa, hemicelulosa y lignina). Esta determinacin permite predecir el
consumo que tendrn los animales de ese alimento.
Fibra Detergente cido (FDA): en este caso la solucin extrae adems la
hemicelulosa, quedando nicamente la lignina y celulosa. Esta es la fraccin
menos digestible de la fibra y permite estimar la digestibilidad del forraje.
4.- Propsito especfico de la prctica.
El profesional en formacin a travs del conocimiento adquirido en la teora del curso, sea capaz
de realizar un reporte con el anlisis de fracciones de fibras y hacer indicaciones a cerca de la
calidad de dicho recurso forrajero. Si fuera un ingrediente nuevo pudiera ubicarlo dentro de la
clasificacin de la NRC, convertir sus valores a las diferentes bases y predecir en base a sus
resultados el consumo de forrajes y su digestibilidad.
Criterios de desempeo:
El profesional en formacin ser competente cuando sepa realizar e interpretar los resultados de
los anlisis.
Cuando tenga la habilidad de buscar la informacin necesaria para realizar la interpretacin de los
resultados obtenidos.
Resultados esperados:
Los profesionales en formacin sern capaces de interpretar los resultados obtenidos.
Identificar la limitante del anlisis y su importancia para la evaluacin de los alimentos usados
para la alimentacin de los animales.
Evaluacin de los datos obtenidos comparados contra los de tablas y literatura.
Realizar bsquedas en el Internet para ver de acuerdo a las diferentes escuelas de nutricin
(USA, Europa, Cuba) cual es la tendencia de anlisis y prediccin de valor nutritivo de los forrajes.
99
Como evitarlo
No aplica
No aplica.
No aplica.
6.-Desarrollo de la prctica
PROGRAMA DE ACTIVIDADES.
Los equipos trabajarn en forma coordinada para realizar observaciones y complementar los
datos de los compaeros.
Todos y cada uno deben tomar sus propias notas.
Dinmica utilizada.
Esta prctica se realizar en el saln de clases, pasar al pizarrn equipo por equipo y nos
presentar la interpretacin de los anlisis.
El alumno portar el manual de prcticas al momento de la prctica, mismo que habr ledo
previamente, y har una presentacin tipo comercial de los ingredientes analizados, de tal forma
que d una amplia informacin de sus productos e interprete los anlisis y al mismo tiempo
sustente la defensa de los mismos.
Entregar un reporte escrito de esta prctica antes de iniciar la presentacin.
7.-Sistema de evaluacin
Los conocimientos y habilidades sern evaluados a travs de la presentacin. Las actitudes se
evaluarn a travs de la responsabilidad del alumno ante su prctica y su entorno. (Anexo 1 y 2)
http://dels.nas.edu/banr/nut_req.shtml
Church y Pond. 2002. Fundamentos de nutricin y alimentacin de animales.
LIMUSA.
http://www.foragetesting.org/index.php
http://www.clemson.edu/agsrvlb/photo.htm
9.- Para saber ms.
100
10 - Glosario de trminos.
Incluir trmino en espaol o en ingls que sean nuevos en su vocabulario de profesional en
formacin en Medicina Veterinaria.
101
Prctica 10
Prctica 11
Prctica 12
Prctica 13
Determinacin de FDN
Laboratorio de Nutricin
Animal
Determinacin de FDA
Laboratorio de Nutricin
Animal
Determinacin de Lignina Laboratorio de Nutricin
Animal
Integracin
de
los Saln de clases.
resultados del anlisis de
fracciones de fibra
4 horas /
semana 10
4 horas /
semana 11
4 horas /
semana 11
2 horas /
semana 12.
102
Digestibilidad
de
Materia Seca in Situ
la Vacas fistuladas
Laboratorio de Nutricin
Animal
Digestibilidad
de
la Laboratorio
de
Materia Seca in Vitro
fermentacin in Vitro
Calorimetra
y Laboratorio de Nutricin
bioenergtica
Animal
Produccin de Gas
Laboratorio
de
fermentacin in Vitro
Tilley&Terry Modificada
Laboratorio
de
fermentacin in Vitro
RUSITEC
Laboratorio
de
fermentacin in Vitro
Ranchos
Salidas
a
otras
explotaciones
4 Horas / semana
13
4 Horas / semana
14
2 Horas / semana
15
96
Horas
/
semana 15
48
Horas
/
semana 14
10-20
das
/
semana 15
4 horas/ semana
15
103
Justificacin
DMS y DMO
Digestibilidad
in vivo
Digestibilidad
in situ
Digestibilidad
in vitro
Ejemplo
digestibilidad
de
Produccin
Gas
RUSITEC
de
104
Utilizacin
energa
de
Utilizacin de
protena
Calorimetra
de
la
TND
Historia
%TND =
Energa digestible
(ED)
Energa
Metabolizable
(EM)
Energa
Bruta
EB
Contenido
de energa
en
los
enlaces
qumicos
del
alimento
Energa
Digestible
ED
EB menos
la energa
perdida en
heces, sea
de
origen
alimenticio
o endgeno
Energa
Metabolizable
EM
ED menos la
energa
de
orina
y
de
gases
digestivos
(Metano, CH4;
Hidrgeno, H2)
Energa
Neta
EN
EM menos el
calor
producido
durante
la
fermentacin
(Incremento
Calrico, IC)
Energas Neta de
Mantenimiento y
Produccin
ENmant:
Metabolismo
basal
Actividad
Termorregulacin
EN prod:
Crecimiento
Lactancia
Reproduccin
Lana
la
Historia
Calorimetra
directa
Calorimetra
indirecta
Calormetro de Parr
Oxidacin completa de la muestra en un ambiente puro de
oxgeno, midiendo el cambio de temperatura del bao de
inmersin, se obtiene la energa bruta (EB) de la muestra
Si se mide la energa del alimento y de las heces se
puede obtener la energa digestible:
ED = EBalim EBheces
Medicin de consumo de O2 y eliminacin de CO2
105
Responsable de la Prctica:
Dr. Carlos U. Hubi Segura.
Jess Mara, Ags. Enero de 2011
106
Criterios de desempeo:
El profesional en formacin ser competente cuando sepa realizar e interpretar los resultados de
los anlisis.
Y sea capaz de explicar calidad nutritiva de los recursos forrajeros.
Resultados esperados:
Los profesionales en formacin sern capaces de realizar la tcnica e interpretar los resultados
obtenidos.
Identificar la importancia para la evaluacin de los forrajes.
Evaluacin de los datos obtenidos comparados contra los de tablas y literatura
107
Reactivos.
No se requieren
Metodologa
Para la tcnica mencionada se utilizan bolsas de nylon hechas a mano con hilo sinttico o bien se
pueden comprar bolsas sintticas ANKOM Forage Bags (ANKOM Technology, Macedon, NY).
Las cuales bolsas se cierran haciendo una asa y se amarran con una liga de 1 pulgada de
diferentes colores como cdigo identificador (Office Depot, Mex.). Para cada muestra y cada
tiempo se llenan bolsas por duplicado. Las bolsas y su liga se pesaron primero vacas, se introdujo
una muestra aproximada de 2g en el interior de la misma y se cerraron con la liga, para pesarse
de nuevo. El peso exacto de la muestra introducida (Peso Inicial) se calcul a partir de los pesos
de la bolsa vaca y llena. El da del experimento se formaron racimos de bolsas correspondientes
a los tiempos de retiro preestablecidos y se amarraron con un hilo de pesca. Los diferentes
racimos se introdujeron y se retiraron del rumen a los tiempos preestablecidos por el modelo
experimental.
Cabe mencionar que el trabajo con una vaca fistulada requiere de mucho cuidado y tacto. Las
vacas son animales sensibles y es importante que ella misma quiera trabajar por lo que se les
trata con gran delicadeza y paciencia, esperando a que ella est lista para el trabajo. Es
aconsejable llevar algn premio (alimento dulce y jugoso) para establecer una respuesta positiva.
Se amarra suavemente a la vaca contra un poste y se retira el tapn de la fstula. Se retira la
porcin superior de alimento a medio fermentar y se deposita en una cubeta. Cuando ya se tiene
espacio suficiente para maniobrar se procede a introducir los racimos de bolsas de fermentacin,
amarando cada uno por separado un hilo gua, el cual finalmente es el que se amarra al tapn de
la fstula. Se debe empujar el conjunto de racimos hasta que alcance el nivel del lquido ruminal y
se empape del mismo, sumergindose. Despus de esto se devuelve una cantidad del alimento
medio fermentado de la cuneta y se cierra de nuevo la fstula con el tapn. Se checa que el tapn
est bien colocado, con un cierre casi hermtico (no se puede lograr un cierre hermtico total por
la presencia del hilo gua) y que no haya escurrimientos importantes. A continuacin se procede a
lavar la vaca, se le premia de nuevo y se le regresa su corral. Cabe mencionar que las vacas
fistuladas, pese a lo que los observadores externos puedan opinar, son las mejor tratadas y
consentidas del hato, ya que tienen un alto valor para el CCA y es importante mantenerlas ms
tiempo que al ganado productor de leche.
Para retirar las bolsas se lleva a cabo el mismo proceso pero a la inversa. Se retira el tapn y se
saca suficiente alimento hasta alcanzar el racimo de bolsas. Muchas veces es necesario retirar
todos los racimos y buscar aquel racimo que corresponde al horario de retiro. Se corta el hilo de
nylon que lo conecta el cable gua y se devuelven las bolsas restantes al interior del rumen. Se
vuelve a colocar el tapn y se lava la zona circundante con abundante agua y un cepillo para
evitar que las moscas sean atradas y molesten a la vaca.
Las bolsas retiradas son lavadas a mano para retirar contenido ruminal que pega a las mismas y
para extraer el lquido ruminal de su interior que contiene alimento digerido y bacterias. Las bolsas
se colocan en charolas en un horno de aire forzado a 60C por 24 horas. No se recomienda meter
las bolsas al horno de 100C porque a esta temperatura es ms factible que se formen complejos
de Maillard y que se dificulten cualquier otro anlisis con el mismo material.
Las bolsas se sacan del horno y se dejan enfriar en un desecador con slica gel para evitar que la
humedad ambiental se condense en las mismas. Las bolsas se pesan con todo y liga. Se procede
a capturar los datos en una hoja de clculo electrnica, la cual automticamente calcula la
cantidad de peso final y el porcentaje de degradabilidad. A continuacin se muestran las casillas
utilizadas y un ejemplo:
108
A. Peso
Bolsa
B. Peso
Bolsa +
Muestra
Clculos
Ej. 20.1
C. Peso
Inicial
(Pi)
D. Bolsa
+
Muestra
digerida
Pi = B A
2.5678
4.5678
2.0000
3.8765
E. Peso
Final
(Pf)
F.
%DMS
Pf = D
A
= Pi Pf
/ Pi x
100
34.56%
1.3087
G.
%MS
H.
%DMS100
94.5%
= %DMS
*
100/%MS
36.57%
Donde:
A. Peso bolsa: es el peso de la bolsa y la liga vacas
B. Peso bolsa + muestra: es el peso de la bolsa ya con la muestra cerrada con su liga.
C. Peso inicial (Pi): es el clculo de la muestra sola
D. Bolsa + muestra digerida: es el peso de la bolsa con la muestra y su liga despus de ser
sometida a digestibilidad y secada a 60C durante 24 horas
E. Peso final (Pf): es el peso de la muestra degradada sola, se calcula a partir del peso de la
bolsa con la muestra (D) menos el peso de la bolsa y su liga (A).
F. %DMS: es el clculo de la digestibilidad aparente de la materia seca, se calcula como
proporcin de la diferencia entre el peso inicial y el peso final sobre el peso inicial y se expresa
en porcentaje.
G. %MS: es el porcentaje de materia seca que haba en la muestra al inicio de la
determinacin. Generalmente el valor flucto entre 93 y 96%.
H. %DMS100: es el valor de digestibilidad aparente corregido a materia seca 100%.
Es importante resaltar este punto ya que en otros experimentos en los que se ha asesorado a
alumnos de maestra y doctorado de otras instituciones, stos no haban llenado los registros en
forma correcta y al final del experimento haba dificultades para calcular los resultados. El principal
error observado es el de pesar nicamente la bolsa llena (B), o bien el peso de la muestra (C), lo
que obliga al investigador a vaciar las bolsas al final de la investigacin para obtener el valor del
peso final (D). Esto implica un trabajo adicional y una fuente de error importante.
Otro error observado es el de anotar los valores en cuadernos o libretas de apuntes, lo cual tiene
como desventaja el que se pierda la libreta, se ensucie, y que al momento de hacer los clculos
falten datos o no estos no estn ordenados en forma consistente.
Se aconseja generar la hoja de clculo primero y llenarla con valores dummy para detectar
posibles errores en el clculo de los resultados. Posteriormente se deben imprimir formatos antes
del pesaje de las bolsas. Los formatos deben llenarse a mano, para posteriormente vaciarlos en la
computadora y hacer los clculos en la misma, con el objetivo de evitar errores de captura.
Una vez que se han capturado los datos en la hoja de clculo se debe hacer el anlisis de data
mining. No se recomienda iniciar el proceso de anlisis estadsticos hasta no saber lo que los
datos arrojan. Se recomienda hacer una tabla dinmica de datos y moverlos de tal manera que
responda a las preguntas que se quiere contestar.
Los resultados se grafican en una grfica de dispersin (X-Y) con el tiempo como variable
independiente (eje de las X) y la degradabilidad como variable dependiente (eje de las Y). En este
caso se espera ver una serie de curvas sigmoides que alcanzan la asntota al final de los 96 120
horas de digestin. Los valores de digestin pueden variar segn la muestra y el tiempo de
digestin, pero en general, las curvas mantienen su forma a lo largo de todo el proceso.
Las bolsas con el material seco pueden guardarse para realizar otras pruebas sobre el mismo, por
ejemplo, resulta de gran inters incinerar una porcin para determinar la digestibilidad de la
materia orgnica, o bien, realizar un anlisis bromatolgico completo sobre las mismas para
evaluar la digestibilidad de cada nutriente. En este caso estas determinaciones ya no se realizaron
por falta de presupuesto.
109
Los resultados de las pruebas de digestibilidad en general son burdos, por lo que se sugiere
siempre complementar los mismos con otras tcnicas in vitro, como se describe a continuacin.
Bibliografa recomendada
Glosario de trminos.
En sus revisiones de literatura anote y explique cuales palabras encontr que no sean comunes
para usted.
110
PRCTICA 15
Responsable de la Prctica:
M. en C. Ma. Guadalupe Acero Godnez
Dr. Carlos U. Hubi Segura
111
Criterios de desempeo:
El profesional en formacin ser competente cuando sepa realizar e interpretar los resultados de
los anlisis.
Cuando tenga la habilidad de buscar la informacin necesaria para realizar la interpretacin de los
resultados obtenidos.
Resultados esperados:
Los profesionales en formacin sern capaces de interpretar los resultados obtenidos.
Identificar la limitante del anlisis y su importancia para la evaluacin de los alimentos usados
para la alimentacin de los animales.
Evaluacin de los datos obtenidos comparados contra los de tablas y literatura.
Realizar bsquedas en el Internet para ver de acuerdo a las diferentes escuelas de nutricin
(USA, Europa, Cuba) cual es la tendencia de anlisis y prediccin de valor nutritivo de los forrajes.
Como evitarlo
No aplica
No aplica.
No aplica.
Bibliografa recomendada
La bibliografa citada en su programa de estudios de la materia de bromatologa.
Internet.
http://dels.nas.edu/banr/nut_req.shtml
Church y Pond. 2002. Fundamentos de nutricin y alimentacin de animales.
LIMUSA.
http://www.foragetesting.org/index.php
http://www.clemson.edu/agsrvlb/photo.htm
112
Glosario de trminos.
Incluir trmino en espaol o en ingls que sean nuevos en su vocabulario de profesional en
formacin en Medicina Veterinaria.
113
114
115
Criterios de desempeo:
El profesional en formacin ser competente cuando sepa realizar e interpretar los resultados de
los anlisis.
Y sea capaz de explicar calidad nutritiva de los recursos forrajeros.
Resultados esperados:
Los profesionales en formacin sern capaces de realizar la tcnica e interpretar los resultados
obtenidos.
Identificar la importancia para la evaluacin de los forrajes.
Evaluacin de los datos obtenidos comparados contra los de tablas y literatura
Sufrir alguna quemadura con El profesor ser el encargado de Lavar la piel con abundante
vapor de agua al momento de manejar el equipo ANKOM y agua.
abrir las vlvulas de salida del mostrarles las formas de manejarlo
equipo ANKOM.
adecuadamente.
Notificar en caso de cualquier incidente al profesor.
K2HPO4
MgSO4*7 H2O
NaCl
CaCl2*2 H2O
Urea
Solucin B:
Na2CO3
Na2S
116
Metodologa
II
En este proyecto se utilizaron dos equipos de incubacin ANKOM Daisy (ANKOM Technologies,
Macedon, NY), Cada equipo consta de cuatro frascos de 5 L revolventes dentro de una
incubadora en los cuales se meten bolsas filtro con las muestras a degradar, una saliva artificial
apropiada para el tipo de trabajo y lquido ruminal.
Los frascos cuentan con una tapa de rosca con un ventil para evitar incrementos en la presin
interior. Durante el proceso de fermentacin se forma una cantidad importante de dixido de
carbono producido en forma primaria por la fermentacin bacteriana y en forma secundaria por el
efecto de los cidos sobre el bicarbonato y carbonato, empujando la reaccin hacia la izquierda:
-
2-
Los tiempos de degradacin son determinados por el investigador, pudiendo ser de tiempo final
(48 horas) o bien a diferentes tiempos para establecer curvas de degradacin.
La saliva artificial seleccionada para este experimento fue la propuesta por ANKOM, la cual tiene
un pH de 6.8 y permite mantener el pH estable durante todo el perodo de fermentacin.
Para cada frasco se requiere de 1330 ml de la solucin A y 266 ml de la solucin, por lo que se
prepararon suficiente solucin para 8 frascos (11.0 y 2.5 L respectivamente). La frmula y las
cantidades utilizadas fueron las siguientes.
Cuadro 3. Solucin de saliva artificial utilizada para la digestibilidad de la materia seca in Vitro
segn la tcnica de ANKOM Daisy II Incubator.
Solucin A:
g/L
g/11 L
K2HPO4
10
110
MgSO4*7 H2O
0.5
5.5
NaCl
0.5
5.5
CaCl2*2 H2O
1.0
11
Urea
0.5
5.5
Solucin B:
Na2CO3
Na2S
g/L
15.0
1.0
g/2.5L
37.5
2.5
Se preparan las soluciones por separado para evitar interaccin entre los iones de calcio y los
iones carbonato, lo cual precipitara inmediatamente la solucin.
Se utilizan las mismas bolsas filtro F57 (ANKOM Technologies, Macedon, NY) utilizadas en la
determinacin de componentes de la pared celular (FDN y FDA). Las bolsas se deben sumergir
previamente en acetona durante 3 a 5 minutos y luego dejar que se sequen al aire libre. Las
bolsas se enumeran con un marcador indeleble especial, pudindose utilizar marcadores textiles,
y se pesan. Acto seguido se llenan con 0.3 g de la muestra y se sellan trmicamente (HeatImpulse Sealer). Las bolsas se vuelven a pesar ya llenas y se anotan los valores en el formato
adecuado. Al igual que en la determinacin in situ se recomienda utilizar un sistema de columnas
para facilitar la captura y clculo de los datos. A continuacin se presenta el formato utilizado y un
ejemplo ya llenado:
Muestra
ID
A.
Peso
Bolsa
B. Peso
Bolsa +
Muestra
Clculos
#1
0.5678
0.8678
C.
Peso
Inicial
(Pi)
Pi = B A
0.3000
D. Bolsa
+
Muestra
digerida
0.7765
E.
Peso
Final
(Pf)
Pf = D
A
0.2087
F.
%DIVMS
= Pi Pf
/ Pi x 100
30.43%
G.
%MS
H.
%DIVMS100
94.5%
= %DIVMS
* 100/%MS
32.20%
117
Donde:
A. Peso bolsa: es el peso de la bolsa vaca
B. Peso bolsa + muestra: es el peso de la bolsa ya con la muestra sellada
C. Peso inicial (Pi): es el clculo de la muestra sola
D. Bolsa + muestra digerida: es el peso de la bolsa con la muestra y su liga despus de ser
sometida a digestibilidad y secada a 60C durante 24 horas
E. Peso final (Pf): es el peso de la muestra degradada sola, se calcula a partir del peso de la
bolsa con la muestra (D) menos el peso de la bolsa (A).
F. %DIVMS: es el clculo de la digestibilidad aparente de la materia seca, se calcula como
proporcin de la diferencia entre el peso inicial y el peso final sobre el peso inicial y se expresa
en porcentaje.
G. %MS: es el porcentaje de materia seca que haba en la muestra al inicio de la
determinacin. Generalmente el valor flucto entre 93 y 96%.
H. %DIVMS100: es el valor de digestibilidad aparente corregido a materia seca 100%.
La organizacin de las bolsas es importante, ya que en una corrida de este tipo se pueden llegar a
utilizar 250 bolsas y hay que saber dnde esta cada bolsa en cada instante. Se recomienda
imprimir un juego grande de los formatos y utilizar una hoja para cada muestra, aadiendo el
factor tiempo en la columna de la identificacin (Muestra ID).
Las bolsas se deben repartir en cada uno de los frascos segn el modelo experimental que se
quiera llevar a cabo. Se recomienda un mximo de 24 a 25 bolsas por frasco. Se pueden trabajar
diferentes muestras en un mismo frasco, donde el frasco representa un tiempo de incubacin. Se
recomienda siempre comparar el ingrediente a evaluar con otros forrajes usados en la
alimentacin animal (heno de alfalfa, rastrojo de maz, ensilado de maz y paja de cebada) y se
recomienda hacerlo por triplicado, lo que implica un total de 248 bolsas (9 muestras x 3 x 9
tiempos) y tres bolsas control.
En nuestros proyectos se manejan 9 tiempos (0, 6, 12, 18, 24, 36, 48, 72, y 96 horas) por lo que
cada frasco fue un tiempo de fermentacin, lo cual facilita el trabajo, ya que al momento de retirar
las bolsas se vaca completamente el frasco y se lavan todas las bolsas en forma conjunta.
El da de la incubacin, se mezclan en cada frasco de fermentacin las cantidades de solucin A y
II
B y se dejan a calentar dentro de una incubadora o dentro de los mismos equipos Daisy hasta
que alcancen la temperatura de 39 C y se equilibre la temperatura durante al menos veinte a
treinta minutos.
Para obtener el lquido ruminal es necesario contar con uno o dos animales fistulados, de
presencia con una dieta similar a la de los ingredientes que se van a evaluar.
El equipo necesario para obtener el lquido ruminal consta de una cubeta grande (15 L) y un
2
pequea (5 L), 2 frascos termos grandes (1 a 2 L), manta de cielo (1 m ), un embudo de plstico o
vidrio (cuidado), un vaso largo de plstico o frasco angosto o bien una botella de plstico PET. Se
recomienda utilizar 2 Guantes de palpacin y 2 guantes de latex de tacto por persona. Se requiere
de una licuadora elctrica grande para homogenizar el contenido ruminal y un tanque de CO 2 para
mantener todo el equipo bajo condiciones de anaerobiosis.
Antes de ir por el lquido ruminal se llenan los dos termos grandes (2 L) con agua a 39 C, y la
licuadora se llena con agua ms caliente (50-60 C).
El lquido ruminal utilizado es obtenido de las vacas fistuladas del CCA-UAA (vaca #998 y #999,
F1 cruza Holstein con ceb). Las vacas estn en produccin de leche por lo que se pueden
encontrar en produccin o secas en un momento dado, lo que implica que la dieta a la que estn
acostumbradas puede ser diferente en diferentes momentos del ao. Es importante elegir la dieta
cuidadosamente con respecto al tipo de experimento que se quiera realizar.
Se trabaja con la vaca fistulada de la misma manera que hace en la digestibilidad in situ. Se retira
el tapn y se comienza a sacar suficiente contenido ruminal hasta alcanzar la mata flotante, que
es el material vegetal en pleno proceso de fermentacin. Se toman puados de esta mata y se
coloca sobre la manta de cielo para exprimirla y dejar que el lquido escurra en el embudo y
adentro del frasco termo. Se repite este procedimiento hasta que los dos termos estn
completamente llenos. A continuacin se introduce la botella de PET o el vaso dentro del rumen
118
invertida y se voltea una vez que se alcanza el nivel donde se encuentra el lquido ruminal libre, de
manera que se obtiene una muestra de este otro compartimento ruminal. Finalmente se toma un
buen puo de contenido ruminal y sin exprimirlo se invierte el guante de palpacin para este
quede guardado en su interior. A continuacin se vuelve a colocar el tapn en su lugar, se lava a
la vaca y se le devuelve a su corral.
Este proceso no tiene que ser estril pero las bacterias deben estar el menor tiempo de contacto
con el aire. Se aconseja no dejar ms de una hora desde la extraccin del contenido ruminal hasta
su inoculacin. Se traslada el contenido ruminal y los termos al laboratorio.
En el laboratorio se introduce el contenido ruminal del guante de palpacin con una cantidad
similar de solucin buffer (200-300ml) en la licuadora y se llena la misma con CO 2 para mantener
un ambiente anaerbico durante el proceso de licuado. El licuado se filtra con la manta de cielo y
se le agrega el lquido ruminal de los termos y de la botella PET. Se debe calcular 400 ml de
lquido ruminal por frasco ANKOM.
II
A continuacin se saca un frasco del equipo Daisy , que ya contiene las dos soluciones buffer (A y
B) precalentadas a 39C, y se le aaden 400 ml de contenido ruminal y se le agregan las bolsas
filtro con las muestras a procesar. Durante todo este tiempo se tiene que tener una manguera con
CO2 dentro del frasco para evacuar el aire sobrenadante. Es importante que la manguera no
burbujee dentro de la solucin ya que esto causara una acidificacin del medio. Finalmente se
cierra el frasco y se devuelve a la incubadora y se repite el mismo procedimiento con el siguiente
frasco. La incubadora, que ya estaba a temperatura constante, ahora se pone a rotar.
La recoleccin de las muestras se realiza a los tiempos determinados. Se apaga el rotor y se
extrae el frasco correspondiente, se cierra la puerta y se vuelve a arrancar el rotor. El frasco se
abre y se extra el lquido, el cual puede ser guardado para anlisis posteriores y para determinar
el pH del mismo. Se extraen las bolsas y se lavan manualmente en agua tibia hasta que el lquido
salga limpio. Se meten a secar a un horno de aire forzado a 60C durante 24 horas, o bien a
105C por un mnimo de dos horas. Las bolsas se meten al desecador y se pesan, registrndose
los resultados en la columna D del formato presentado anteriormente. Con esto se puede
determinar la degradabilidad o digestibilidad aparente del forraje, utilizando la frmula:
%DMD =
Nota: Este valor debe ser corregido por el valor de materia seca
An cuando este valor de digestibilidad es til, se sabe que en la muestra degradad todava se
encuentra material digerido pero que no se pudo lavar completamente y una cierta cantidad de
bacterias que pueden afectar al resultado final, por lo que es aconsejable someter a las bolsas a
un lavado con detergente neutro. Con esto se logra eliminar los componentes solubles y obtener
el residuo FDN y calcular la digestibilidad verdadera in Vitro (IVTD, por sus siglas en ingls). A
continuacin se presenta la frmula y su explicacin:
IVTDAs Recived = 100 (W3 (W1 x C1)) x 100/ W2
IVTDDM = 100 (W3 (W1 x C1)) x 100/ W2 x DM
Donde:
W1 = Peso de la bolsa vaco (A)
W2 = Peso inicial, Peso de la muestra sola ( C)
W3 = Peso final de la bolsa despus de la digestin y del lavado FDN.
C1 = Correccin por bolsa control (Peso final seco/ peso inicial de la bolsa)
final oven-dried weight / original blank bag weight)
DM = % dry matter = % materia seca
119
Bibliografa recomendada
La bibliografa citada en su programa de estudios de la materia de bromatologa.
Glosario de trminos.
En sus revisiones de literatura anote y explique cuales palabras encontr que no sean comunes
para usted.
120
PRCTICA 16
Calorimetra y bioenergtica
Responsable de la Prctica:
M. en C. Ma Guadalupe Acero Godnez
Dr. Carlos U. Hubi Segura
121
Calorimetra y bioenergtica
Introduccin.
Objetivos especficos de la prctica.
El profesional en formacin a travs del conocimiento adquirido en la teora del curso, sea capaz
de realizar un reporte con el anlisis de fracciones de fibras y hacer indicaciones a cerca de la
calidad de dicho recurso forrajero. Si fuera un ingrediente nuevo pudiera ubicarlo dentro de la
clasificacin de la NRC, convertir sus valores a las diferentes bases y predecir en base a sus
resultados el consumo de forrajes y su digestibilidad.
Criterios de desempeo:
El profesional en formacin ser competente cuando sepa realizar e interpretar los resultados de
los anlisis.
Cuando tenga la habilidad de buscar la informacin necesaria para realizar la interpretacin de los
resultados obtenidos.
Resultados esperados:
Los profesionales en formacin sern capaces de interpretar los resultados obtenidos.
Identificar la limitante del anlisis y su importancia para la evaluacin de los alimentos usados
para la alimentacin de los animales.
Evaluacin de los datos obtenidos comparados contra los de tablas y literatura.
Realizar bsquedas en el Internet para ver de acuerdo a las diferentes escuelas de nutricin
(USA, Europa, Cuba) cual es la tendencia de anlisis y prediccin de valor nutritivo de los forrajes.
Como evitarlo
No aplica
No aplica.
No aplica.
6.-Desarrollo de la prctica
PROGRAMA DE ACTIVIDADES.
Los equipos trabajarn en forma coordinada para realizar observaciones y complementar los
datos de los compaeros.
Todos y cada uno deben tomar sus propias notas.
Dinmica utilizada.
Esta prctica se realizar en el saln de clases, pasar al pizarrn equipo por equipo y nos
presentar la interpretacin de los anlisis.
El alumno portar el manual de prcticas al momento de la prctica, mismo que habr ledo
previamente, y har una presentacin tipo comercial de los ingredientes analizados, de tal forma
que d una amplia informacin de sus productos e interprete los anlisis y al mismo tiempo
sustente la defensa de los mismos.
Entregar un reporte escrito de esta prctica antes de iniciar la presentacin.
122
Can y PC.
Pster.
Materiales que traigan los participantes para exponer sus productos .
Bibliografa recomendada
La bibliografa citada en su programa de estudios de la materia de bromatologa.
Internet.
http://dels.nas.edu/banr/nut_req.shtml
Church y Pond. 2002. Fundamentos de nutricin y alimentacin de animales.
LIMUSA.
http://www.foragetesting.org/index.php
http://www.clemson.edu/agsrvlb/photo.htm
Para saber ms.
Historia y usos de los ingredientes usados en el ganado.
Que es la para de sorgo.
Es bueno o malo el nopal como nutriente para los rumiantes.
El nopal forrajero cual es su principal nutriente.
Al alimentar a los bovinos con nopal cual es la recomendacin, cuando hay de proporcionarles y
por que causa heces liquidas.
Glosario de trminos.
Incluir trmino en espaol o en ingls que sean nuevos en su vocabulario de profesional en
formacin en Medicina Veterinaria.
123
124
Introduccin.
Criterios de desempeo:
El profesional en formacin ser competente cuando sepa realizar e interpretar los resultados de
los anlisis.
Y sea capaz de explicar calidad nutritiva de los recursos forrajeros.
Resultados esperados:
Los profesionales en formacin sern capaces de realizar la tcnica e interpretar los resultados
obtenidos.
Identificar la importancia para la evaluacin de los forrajes.
Evaluacin de los datos obtenidos comparados contra los de tablas y literatura
Sufrir alguna quemadura con El profesor ser el encargado de Lavar la piel con abundante
vapor de agua al momento de manejar el equipo ANKOM y agua.
abrir las vlvulas de salida del mostrarles las formas de manejarlo
equipo ANKOM.
adecuadamente.
Notificar en caso de cualquier incidente al profesor.
Bibliografa recomendada
La bibliografa citada en su programa de estudios de la materia de bromatologa.
125
Glosario de trminos.
En sus revisiones de literatura anote y explique cuales palabras encontr que no sean comunes
para usted.
126
Responsable de la Prctica:
M. en C. Ma Guadalupe Acero Godinez
Dr. Carlos U. Hubi Segura
127
Criterios de desempeo:
El profesional en formacin ser competente cuando sepa realizar e interpretar los resultados de
los anlisis.
Cuando tenga la habilidad de buscar la informacin necesaria para realizar la interpretacin de los
resultados obtenidos.
Resultados esperados:
Los profesionales en formacin sern capaces de interpretar los resultados obtenidos.
Identificar la limitante del anlisis y su importancia para la evaluacin de los alimentos usados
para la alimentacin de los animales.
Evaluacin de los datos obtenidos comparados contra los de tablas y literatura.
Realizar bsquedas en el Internet para ver de acuerdo a las diferentes escuelas de nutricin
(USA, Europa, Cuba) cual es la tendencia de anlisis y prediccin de valor nutritivo de los forrajes.
Como evitarlo
No aplica
No aplica.
No aplica.
128
Vacas fistuladas
Equipo para toma de lquido y contenido ruminal
Reactivos.
Elementos Traza
Cloruro de calcio
Cloruro de manganeso
Cloruro de cobalto
Cloruro de hierro
Total
Solucin buffer
Bicarbonato de sodio
Bicarbonato de amonia
Total
Elementos macro
Fosfato di-sdico
Fosfato de potasio
Sulfato de magnesio
Total
Sol Reduccin
Sulfato de sodio
Hidrxido de sodio
Total
Sol Colorante
Resarzurina
Metodologa
129
alfalfa y 40% rastrojo de maz. Muestras de cada ingrediente, as como la mezcla de ambos, se
mandan al laboratorio de bromatologa para realizar el anlisis qumico proximal de los mismos.
Esto incluye las determinaciones de materia seca, extracto libre de nitrgeno (ELN), protena
cruda (PC), extracto etreo (EE), cenizas (Cen.). Adems se lleva a cabo la determinacin de fibra
neutro detergente (FND) y fibra cido detergente (FAD) y lignina (Lig) con el mtodo de ANKOM.
En este caso adems se determinar la cantidad de fsforo ya que de esto depender la cantidad
de fsforo a utilizar como tratamiento.
130
Frmula
CaCl2
MnCl2
CoCl2
FeCl2
Presentacin
CaCl2*2H2O
MnCl2*4H2O
CoCl2*6H2O
FeCl2*6H2O
Cantidad
13.2g
10.0g
1.0g
0.8g
100ml H2Odest.
Solucin buffer
Bicarbonato de sodio
Bicarbonato de amonia
Total
Frmula
NaHCO3
(NH4)HCO3
Presentacin
NaHCO3
(NH4)HCO3
Cantidad
35.0g
4.0g
1000ml H2Odest
Elementos macro
Fosfato di-sdico
Fosfato de potasio
Sulfato de magnesio
Total
Sol Reduccin
Sulfato de sodio
Hidrxido de sodio
Total
Sol Colorante
Resarzurina
Frmula
Na2HPO4
KH2PO4
MgSO4
Presentacin
Na2HPO4*12H2O
KH2PO4
MgSO4*7H2O
Frmula
Na2S
NaOH
Presentacin
Na2S*9H2O
NaOH
Frmula
Presentacin
Cantidad
5.7g
6.2g
0.6g
1000ml H2Odest
Cantidad
6.25g
cbp ajustar pH
1000ml H2Odest
Cantidad
100mg
Orden de mezclado
Agua destilada
Sol. Buffer
Macro-minerales
Micro-minerales
Sol. Colorante
Sol. Reductora
TOTAL
Cantidad
500 ml
200 ml
200 ml
0.1 ml
1 ml
60 ml
961.1 ml
El medio de cultivo para este experimento se realizar con una concentracin menor de
fosfatos, siendo stos adicionados en forma individual a las botellas de fermentacin
segn los tratamientos especificados.
Una vez preparado el medio de cultivo en grandes frascos (20 L) stos son llenados con
CO2 hasta lograr la saturacin del medio, mismo que se manifiesta por un cambio de
coloracin de la rezarsurina, de azul a rosa.
131
Las botellas deben ser colocadas en forma estratgica en charolas que sern puestas en los
incubadores. El orden de las botellas debe permitir retirar las botellas de las ltimas carolas
cuando sea el momento de sacrificar botellas para la toma de muestras.
132
Criterios de desempeo:
El profesional en formacin ser competente cuando sepa realizar e interpretar los resultados de
los anlisis.
Y sea capaz de explicar calidad nutritiva de los recursos forrajeros.
Resultados esperados:
Los profesionales en formacin sern capaces de realizar la tcnica e interpretar los resultados
obtenidos.
Identificar la importancia para la evaluacin de los forrajes.
Evaluacin de los datos obtenidos comparados contra los de tablas y literatura
133
amortiguadora), la cantidad total de solucin en el tubo T&T debe ser suficientemente baja (10ml
de solucin amortiguadora + 50 ml de agua destilada) para que el proceso de fermentacin
acidifique gradualmente el medio.
La diferencia en pH puede ser considerada un reflejo del proceso de fermentacin, mismo que
puede ser equiparado a la actividad bacteriana. Los resultados siempre deben ser presentados
+
como valores logartmicos (pH) y valores lineares (concentracin de iones de hidrgeno ([H ]=
pH
1/10 ) para poder interpretar correctamente los resultados y poderlos correlacionar con la
medicin de otros electrolitos y metabolitos (presentados como mmol/L mEq/L).
En experimentos de fermentacin ruminal (anaerbica) no se acostumbra esterilizar el material a
utilizar, o los substratos, ya que estos ltimos cambian sus caractersticas fsicas y qumicas,
afectando los resultados. En los experimentos para determinar la actividad microbiana de
patgenos especficos es importante que tanto tubos, soluciones amortiguadoras y substratos
deben estar correctamente esterilizados para el experimento y posteriormente debe ser
esterilizados (o desechados) segn las normas de bioseguridad adecuadas.
El tipo de substrato utilizado y la forma de preparacin del mismo debe ser el adecuado para el
tipo de bacteria a utilizar, as como los elementos nutricionales adicionales (macro y micro
elementos, reductores, colorantes, etc.) para optimizar la actividad de las mismas. Idealmente la
bacteria debe tener un substrato especfico y un producto de fermentacin cido.
La concentracin de bacterias al inocular y a diferentes tiempos durante el proceso de
fermentacin puede ser determinada de varias maneras: diluciones seriales, conteo en placas, el
nmero ms probable (Most Probable Number, MPN, Koch, 1981), cintica de primer orden (la
cantidad de producto de fermentacin es proporcional a la concentracin de enzimas y al tiempo)
15
o por produccin de protena microbiana utilizando nitrgeno radioactivo ( N).
Para iniciar el experimento, los tubos T&T son llenados con el substrato (1g de materia seca
previamente molido), el medio amortiguador (10ml), agua destilada (50ml) y las bacterias
seleccionadas, posteriormente se aplica el tratamiento (compuesto inhibidor a o estimulante a
diferentes concentraciones) por triplicado o cuadriplicado, los frascos son llenados con CO 2, en
caso de tratarse de bacterias anaerbicas, y se incuban a 37-39C.
Cada experimento requiere de controles negativos y positivos debidamente replicados. Los
controles negativos no contienen substrato, mientras que los controles positivos no contienen
bacterias. Esto es necesario para determinar el efecto de autolisis bacteriana en el primer caso y
degradacin por otras bacterias en el segundo.
En esta tcnica muy sencilla, el pH del medio es considerado la variable ms importante, por lo
que es medido frecuentemente (0, 3, 6, 9 12, 15, 18, 24, 30, 36, 48, 72, 96 horas) para tener un
patrn exacto de los cambios en el proceso de fermentacin. Para esto se utiliza un electrodo de
vidrio y un medidor de pH con dos decimales de exactitud. Despus de cada medicin, el tubo
debe ser lavado (flushed) con CO2 en caso de tratarse de bacterias anaerbicas.
Se pueden utilizar medidores de pH continuos y realizar mediciones a intervalos cortos preprogramados (Phillip-Harris System, Phillip-Harris Education, Leicestershire, GB) que permite
tener curvas de pH muy exactas y evitar la apertura de los tubos de fermentacin, evitando
contaminacin y reduciendo el trabajo manual. Desgraciadamente, el costo de estos equipos
reduce el nmero de muestras a evaluar simultneamente.
Los tubos de T&T pueden ser de plstico o de vidrio. Tienen un tapon de goma con un ventilador
de cristal para permitir la salida de los gases de fermentacin e impedir la entrada de aire exterior.
Debido a que siempre hay una presin positiva dentro de los tubos es muy difcil que el ambiente
anaerbico sea alterado por oxgeno exterior.
134
Bibliografa recomendada
La bibliografa citada en su programa de estudios de la materia de bromatologa.
Glosario de trminos.
En sus revisiones de literatura anote y explique cuales palabras encontr que no sean comunes
para usted.
135
136
Criterios de desempeo:
El profesional en formacin ser competente cuando sepa realizar e interpretar los resultados de
los anlisis.
Y sea capaz de explicar calidad nutritiva de los recursos forrajeros.
Resultados esperados:
Los profesionales en formacin sern capaces de realizar la tcnica e interpretar los resultados
obtenidos.
Identificar la importancia para la evaluacin de los forrajes.
Evaluacin de los datos obtenidos comparados contra los de tablas y literatura
Reactivos.
McDougall, 1948
Ingredientes
NaHCO3
Na2HPO4*12H2O
NaCl
KCl
MgCl2*6H2O
CaCl2*2H2O
1 litro
[g/L]
9.8
9.3
0.47
0.57
0.128
0.053
1 litro
[mEq/L]
117
26
8
8
0.2
0.3
Metodologa
Bibliografa recomendada
La bibliografa citada en su programa de estudios de la materia de bromatologa.
138
Glosario de trminos.
En sus revisiones de literatura anote y explique cuales palabras encontr que no sean comunes
para usted.
139
Criterios de desempeo:
El profesional en formacin ser competente cuando sepa realizar e interpretar los resultados de
los anlisis.
Y sea capaz de explicar calidad nutritiva de los recursos forrajeros.
Resultados esperados:
Los profesionales en formacin sern capaces de realizar la tcnica e interpretar los resultados
obtenidos.
Identificar la importancia para la evaluacin de los forrajes.
Evaluacin de los datos obtenidos comparados contra los de tablas y literatura
Bibliografa recomendada
La bibliografa citada en su programa de estudios de la materia de bromatologa.
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Glosario de trminos.
En sus revisiones de literatura anote y explique cuales palabras encontr que no sean comunes
para usted.
141
Bibliografa general
Adesogan, A. T., Owen, E. and Givens, D. I. (1998). A comparison between in vitro
digestibility, in situ degradability and a gas production technique for predicting the in vivo
digestibility of whole-crop wheat. In: In vitro techniques for measuring nutrient supply to
ruminants, pp. 33-35. (Eds. E.R. Deaville, E. Owen, A.T. Adesogan, J.A. Huntington and T.
Lawrence). Occasional Publication No. 22 - British Society of Animal Science. July, 1997, Reading.
UK.
France, J., Dhanoa, M. S., Theodorou, M. K., Lister, S. J., Davies, D. R. and
Isaac, D. (1993). A model to interpret gas accumulation profiles associated with in vitro
degradation of ruminant feeds. Journal of Theoretical Biology, 163: 99-111.
Groot, J. C. J., Cone, J. W., Williams, B. A., Debersaques, F. M. A. and
Lantinga, E. A. (1996). Multiphasic analysis of gas production kinetics for in vitro
fermentation of ruminant feeds. Animal Feed Science & Technology, 64:1, 77-89.
Harris, L.E., Asplund, J.M. and Crampton, E.W. (1968). An International Feed
nomenclature and methods for summarizing and using feed data to calculate
diets. Utah Agric Exp. Sta. Bull. 479.
Hubi Segura, C.U. (2004). Use of the Rumen Simulation Technique (RUSITEC) to model
clinical and subclinical rumen acidosis in dairy cattle. PhD Thesis, Department of Agriculture,
University of Reading, UK.
142
Mauricio, R. M., Mould, F. L., Dhanoa, M. S., Owen, E., Channa, K. S. and
Theodorou, M. K. (1999). A semi-automated in vitro gas production technique for ruminant
feedstuff evaluation. Animal Feed Science & Technology, 79:4, 321-330.
McDougall, E. I. (1948). Studies on ruminant saliva. I. The composition and output of sheep's
saliva. Biochemical Journal, 43: 99-109.
McDowell, L.R., Conrad, J.H., Thomas, J.E. and Harris, L.E. (1974). Latin
American tables of feed composition, University of Florida, Gainesville, FL.
Menke, K. H., Raab, L., Salewski, A., Steingass, H., Fritz, D. and Schneider,
W. (1979). The estimation of the digestibility and metabolizable energy content of ruminant
feedingstuffs from the gas production when they are incubated with rumen liquor in vitro. Journal
of Agricultural Science, UK, 93:1, 217-222.
Pell, A. N. and Schofield, P. (1993). Computerized monitoring of gas production to
measure forage digestion in vitro. Journal of Dairy Science, 76:4, 1063-1073.
Rymer, C., Moss, A. R., Deaville, E. R. and Givens, D. I. (1998). Factors affecting
the amount of indirect gas produced by the in vitro gas production technique. In: In vitro
techniques for measuring nutrient supply to ruminants, pp. 89-91. (Eds. E.R. Deaville, E.
Owen, A.T. Adesogan, J.A. Huntington and T. Lawrence). Occasional Publication No. 22 - British
Society of Animal Science. July, 1997, Reading. UK.
143
Glosario de trminos
144
ndice
145