Manual de Practicas Bromatologia 2014

MANUAL DE OPERACIN PARA EL ANLISIS DE LOS
ALIMENTOS
LABORATORIO DE BROMATOLOGIA.
M. en C. Ma Guadalupe Acero Godinez

Dr. Carlos U. Hubi Segura
Jess Mara, Aguascalientes. Enero del 2014
150 hojas tiles incluyendo portada y anexos.
CENTRO DE CIENCIAS AGROPECUARIAS DEPARTAMENTO DE

DISCIPLINAS PECUARIAS
Directorio
Rector
M. en C. Mario Andrade
Secretario General
Dr. Francisco lvarez
Decano del Centro de C. Agropecuarias

M. en C. Gabriel Ernesto Palls Guzmn
Jefe del Departamento de Disciplinas Pecuarias.

Dr. Ral Ortz Martnez
Responsable del Laboratorio

MC. Ma. Guadalupe Acero Godnez
Titular de la Materia de Bromatologa

Dr. Carlos Urban Hubi Segura
Contacto: +
Tel.:
Email:
52 (449) 9107400 ext. 8137

drhaubi@yahoo.com
Tabla de Contenidos
MANUAL DE OPERACIN PARA EL ANLISIS DE LOS ALIMENTOS ............... 1
LABORATORIO DE BROMATOLOGIA. ....................................................................... 1
Directorio ........................................................................................................................ 2
Tabla de Contenidos .................................................................................................... 3
Presentacin del Libro ....................................................................................................... 4
Parte I. Introduccin al Anlisis de los Alimentos ............................................................... 5
I. Generalidades del Anlisis de los Alimentos ................................................................. 5
II. Introduccin al Laboratorio de Bromatologa. ............................................................ 15
III. Programa del sistema de prcticas. ............................................................................ 18
IV. Prcticas generales de seguridad. .............................................................................. 20
Parte II. Conocer las instalaciones del Laboratorio de Nutricin Animal, las tcnicas de
muestreo y preparacin de muestras .................................................................................... 25
Prctica 1. Conocer la Fbrica de Alimentos y el Laboratorio de Nutricin Animal, sus
equipos y materiales empleados, toma de muestras en campo. ....................................... 26
Prctica 2: Identificacin y clasificacin y descripcin de los ingredientes usados en la
alimentacin del ganado. ................................................................................................. 30
Prctica 3: Preparacin de las muestras para anlisis. ..................................................... 34
Parte III. Anlisis Qumico Proximal o de Weende ........................................................... 39
Prctica 4. Humedad y materia seca. ............................................................................... 40
Prctica 5: Extracto Etreo Grasa Cruda ...................................................................... 46
Prctica 6: Fibra cruda o fibra bruta. ............................................................................... 50
Prctica 7: Determinacin de Protena Cruda. ................................................................. 55
Prctica 8: Determinacin de cenizas o materia inorgnica. ........................................... 65
Prctica 9: Extracto Libre de Nitrgeno e integracin de los resultados del Anlisis
Qumico Proximal............................................................................................................ 68
Parte IV. Componentes de la Pared Celular o Anlisis de Van Soest ................................ 72
Prctica 10. Determinacin de Fibra Detergente Neutra (FDN). .................................... 81
Prctica 11: Determinacin de Fibra Detergente cida (FDA)....................................... 85
Prctica 12: Determinacin de Lignina ........................................................................... 89
Prctica 13: Integracin de los resultados de los componentes de la pared celular (Van
Soest) ............................................................................................................................... 96
Parte V. Digestibilidad de los alimentos y bioenergtica ................................................. 103
Introduccin a los estudios de digestibilidad y fermentacin ruminal .......................... 103
Introduccin a la bioenergtica de los alimentos ........................................................... 105
Prctica 14: Digestibilidad de la Materia Seca In Situ .................................................. 106
Prctica 15: Digestibilidad de la Materia Seca In Vitro por la Tcnica ANKOM ........ 114
Prctica 16: Calorimetra y bioenergtica ..................................................................... 124
Prctica 17: Digestibilidad in vitro por produccin de gas. .......................................... 127
Prctica 18: Tilley & Terry Modificada ........................................................................ 133
Prctica 19: Tcnica de Simulacin Ruminal (RUSITEC)............................................ 136
Prctica 20: Visitas a ranchos y plantas de alimentos ................................................... 140
Bibliografa general ........................................................................................................... 142
Glosario de trminos .......................................................................................................... 144
ndice ................................................................................................................................. 145
3
Presentacin del Libro
Parte I. Introduccin al Anlisis de los Alimentos

I. Generalidades del Anlisis de los Alimentos
La Bromatologa es la disciplina cientfica que estudia integralmente los alimentos. Permite
conocer su composicin cualitativa y cuantitativa; el significado higinico y toxicolgico de las
alteraciones y contaminaciones, de qu manera y por qu ocurren y cmo evitarlas; cul es la
tecnologa ms apropiada para tratarlos y cmo aplicarla; cmo legislar y fiscalizar para proteger
los alimentos y al consumidor; qu mtodos analticos aplicar para establecer su composicin y
determinar su calidad.
Vivenciar e integrar los conocimientos tericos y prcticos de los alimentos y los mtodos de
evaluacin, desarrollando trabajo en equipo. Lo anterior bajo el cumplimiento del reglamento
interno y de las normas en el laboratorio y en campo, para garantizar el funcionamiento y uso
adecuado del material e instalaciones. Mismas que iremos conociendo y aplicando ante la prctica
y entorno inmediato.
Definiciones importantes en la bromatologa

Bromatologa
Estudio de los alimentos antes de ser ingeridos por los seres vivos
Nutrimento
Sustancia o elemento orgnico o inorgnico que tiene una funcin

especfica y que por lo tanto debe asegurarse su presencia en dicho
alimento. Ej.: Fibra cruda, Vitaminas, Lpidos, etc.
Ingrediente
Todo lo que forma al alimento. Sustancia de origen animal, vegetal,

mineral o qumico (sinttico) que puede formar parte de una racin.
Alimento
Conjunto de ingredientes y/o nutrientes o sustancias portadoras de

nutrimentos y que pueden ser susceptible de ser ingeridas.
Complemento
Ingrediente que se agrega a una racin para mantener el equilibrio de

nutrimentos.
Suplemento
Ingrediente que se agrega a una racin para suplir otro ingrediente y

mantener el equilibrio de nutrimentos.
Forraje
Material de origen vegetal, de gran volumen y >18% FC, deficiente en

nutrimentos.
Concentrado
Materia de origen animal, vegetal o mineral con alta densidad de

nutrimentos.
Racin o Dieta
Alimento que se asigna a un animal para su consumo en 24 horas, no

importando que llene o no sus necesidades.
OJO: En griego, diata significa forma de vida
Racin
o
balanceada
dieta
Mezcla de ingredientes para su consumo en 24 horas que llena las

necesidades del animal.
Racin
integral
dieta
Se proporciona en el caso de rumiantes en forma de mezcla

homognea evitando la selectividad e su consumo; en esta racin
estn incluidos tanto forrajes como concentrados y llenan las
necesidades de mantenimiento.
Digestibilidad
Diferencia entre el peso de MS que se ingiere (MSI) y la materia seca

excretada (MSE) y se expresa en % o en g/kg
Dig. Aparente = MSI MSE x 100
MSI
Digestibilidad
aparente (DAMS)
Digestibilidad
verdadera (DVMS)
Ejemplo
digestibilidad
de
Dig. Verdadera = MSI (MSE Desechos metablicos) x 100

MSI
Una vaca come 9 kg de heno de alfalfa con 8 kg MS y excreta 3 kg
MS en heces. Cul es la digestibilidad del alimento?
Alimentacin
Prctica de suministro de alimentos
Nutricin
Interaccin de procesos fisiolgicos, metablicos que sufren los

nutrimentos en las diferentes especies animales.
Muestreo
Mtodo de recoleccin al azar que contenga las mismas

caractersticas (fsicas, qumicas, biolgicas) del material a analizar.
Muestra prima
Primera muestra que se obtiene
Muestra bruta
Es la unin de varias muestras primas
Muestra contractual
Es la muestra que se manda a laboratorio
Muestreo en suelos
0-30 cm: incluye races de cultivos forrajeros

0-15, 15-30 cms: muestreo rutinario o comercial
0-10, 10-20,20-30 cms: se utiliza en investigacin
0-20, 0-30 cms: ms comn
Conceptos populares de Forraje y Concentrado
Qu es un Forraje?
El trmino forraje tiene diferentes significados para diferentes personas

Para el MVZ
Qu
es
Concentrado
un
Forraje es cualquier material vegetal que sirva de

alimento para el ganado
Para
ganadero
el
Alimento balanceado elaborado en una fbrica de

alimento o forrajera.
Para
experto
el
Partes comestible de las plantas, excepto el grano

que ha sido separado, que pueden proveer alimento
para animales en pastoreo, o pueden ser cosechadas
para alimentacin posterior del ganado
Segn
literatura
la
Material vegetal que sirve para alimentar a los

animales, que generalmente presenta alto contenido
de fibra (>18% FC) por lo que se usa principalmente
en la alimentacin de animales herbvoros.
Concentrado es un alimento que contiene un alto porcentaje de

nutrientes y una proporcin menor de fibra cruda.
Concentrado
proteico
Los concentrados proteicos pudren ser tambin altos

en energa, ya que sta provee 4.1 kcal EM/g MS
No obstante, esta energa no esta disponible para el
animal si los requerimientos de protena no han sido
cubiertos.
Concentrado
energtico
Tabla
de
concentracin
nutrientes en
alimentos
la
de
los
(Base Seca)
Clasificacin
Forrajes
de
Tipo
alimento
Los concentrados energticos no contienen alta

protena, o bien la protena no es de alta calidad
de
Fibra
(% FC)
Cruda
Protena
Cruda (%PC)
Energa
Digestible
(Mcal ED/kg)
Forraje
> 18%
< 20%
< 3.00
Concentrado
proteico
< 18%
>20%
Variable
Concentrado
energtico
< 18%
< 20%
> 3.00
Plantas
pastizales
naturales
de
Los pastizales naturales son sitios no adecuados

al cultivo, pero donde la vegetacin provee
alimento y abrigo para el pastoreo de ganado
domstico o fauna silvestre.
Pastos o zacates
Plantas
gramneas
herbceas:
Hierbas
Plantas
herbceas
diferentes a las gramneas
Ramoneo
Partes de arbustos o
rboles que pueden ser
consumidos:
Hojas
Ramitas
Frutos
Semillas
Forrajes
cultivados
Forrajes de corte
Son cosechados por el

hombre
para
proporcionrselos
posteriormente al ganado:
Frescos
Henificados
Ensilados
Praderas
cultivadas,
inducidas
artificiales
Subproductos
esquilmos
Plantas cultivadas por el

hombre para que el
ganado lo coseche l
mismo por medio de
pastoreo.
Son residuos vegetales que pueden ser utilizados

para la alimentacin del ganado.
Nomencaltura del NRC

En Mxico se utiliza el modelo de anlisis de alimentos para animales de los Estados Unidos, el
cual se establece desde un comit de trabajo denominado el Consejo Nacional de Investigacin
(National Research Council, NRC).
El NRC publica los requerimientos nutricionales de las diferentes especies domsticas, donde se
incluyen las ecuaciones para determinar las necesidades de energa protena, fibra, vitaminas y
minerales de cada grupo de animales. Adems, se publican las tablas de la composicin
nutrimental de los principales alimentos utilizados por el ganado. Cada ingrediente tiene un cdigo
que est basado en la clasificacin del NRC, por lo que es importante conocerla.
Existen otros sistemas de requerimientos nutricionales. Por ejemplo, cas todos los pases
europeos tienen su propio sistema, adecuado a los sistemas de produccin y a las exigencias
econmicas y ambientales de cada pas. Por su cercana con los EEUU y la relacin econmica
con el mismo, es normal que Mxico haya adoptado el sistema americano, si bien es cierto que no
es el que debera ser utilizado para todos los sistemas productivos. En todo caso, aqu se
presenta el sistema de nomenclatura y de clasificacin del NRC, que se utiliza para establecer el
No. Internacional de Referencia (McDowell et al., 1974)
Tabla 1.1 Sistema de nomenclatura y clasificacin de los alimentos segn el NRC.
Nomenclatura
NRC.
del
National Research Council
Nombre cientfico (gnero y especie)

Animal, vegetal, mineral o sinttica
1 Origen
o Cambia el valor nutritivo:
2.
Variedad
clase
3.
comestible
Maz: amarillo o blanco
Parte Qu se come del alimento?

Raz, tallo, hojas, germen, todo
o Ensilado, acicalado, trituracin, deshidratacin
4. Procesos
tratamientos
5.
Fase
maduracin
de A qu edad se corta?
A menor edad : mayor % nutrimentos, menor % MS
A mayor edad : mayor lignificacin, menor digestibilidad
6. Corte o cosecha
A mayor numero de cortes, menor % nutrimentos
7. Clase o calidad
Por reglamentacin gubernamental de cada pas
8. Clasificacin
8 grupos (ver clasificacin NRC)
Clasificacin del Permite una clasificacin numrica (ver Tablas NRC)
NRC
1. Forraje o pienso
grosero seco
Henificados
Pajas
Rastrojos
2. Forraje o pienso
grosero verde
Praderas naturales
Praderas cultivadas
Alfalfa, trbol, Rye Grass
3. Ensilados
Silo de maz, sorgo, triticale, alfalfa, rye grass
4. Suplemento
energtico
Granos y cereales: maz, trigo,

Subproductos industriales: harinas, cscaras de ctricos, de destilera
Desechos de panadera, galletera, pastelera
Lactosuero
5. Suplemento
proteico
Harinas animales: H. de carne, sangre, hueso, pescado, pluma

Pastas de oleaginosas: Soya, canola, harinolina, Semilla de Algodn
Derivados lcteos: leche, leche en polvo, descremada
Excretas animales: Pollinaza, gallinaza
6. Suplemento
mineral
Sales minerales
Macro-minerales: N, P, K, Ca, Mg, S
Micro-minerales: Fe, Cu, Zn, Mo, Mn, Se
7. Suplemento
vitamnico
Vitaminas hidrosolubles: Complejo B, Vit C
8. Aditivos
Zeolitas
Vitaminas liposolubles: A, D, E, K
Hormonas,
Antibiticos
Probiticos
Edulcorantes
Aglutinantes
NNP
Ejemplos
Silo de maz: Vegetal, Maz amarillos: , toda, ensilado, floracin,

corte 1, _, (3)
10
Composicin de los alimentos

Los alimentos se pueden clasificar en Forrajes, Concentrados proteicos y concentrados
energticos segn su contenido de Fibra Cruda, Protena Cruda Y energa Digestible.
Nutriente
Definicin
Clasificacin
de los
alimentos:
TIPO DE
ALIMENTO
- Grupo de componentes alimenticios con la misma composicin

qumica que se agrega en la dieta.
- Se incluyen sustancias que no son de origen alimenticio.
FIBRA
CRUDA
(%)
Ms de 18
PROTENA
CRUDA
(%)
Menos de 20
ENERGA
DIGESTIBLE
(Mcal/kg)
Menos de 3
Concentrado
Proteico
Menos de 18
Ms de 20
Variable
Concentrado
energtico
Menos de 18
Menos de 20
Ms de 3
Forraje
Categoras de
nutrientes
Agua
Protena
Energa
Vitaminas
Minerales
Organizacin
de los
nutrientes
Ejemplos de
nutrientes o
alimentos
(g/kg)
Conversin de
los datos a
Materia Seca
100%
Humedad
Materia
seca
Incluye protenas, pptidos, amino cidos, aminas, amidas,

bases nucleicas
Carbohidratos, lpidos y protenas
Agua
Materia
orgnica
Materia
inorgnica
Ingredientes
MS
Nabo
90
Pasto
200
Grano de cebada
860
Vaca
430
Leche
124
Msculo
280
Huevo
333
Cacahuate
940
Ingredientes
Nabo
Pasto
Grano de cebada
Vaca
Leche
Msculo
Huevo
Cacahuate
MS
100
100
100
100
100
100
100
100
Puede ser intracelular, extracelular o asociada

PC
Protena cruda
EE
Extracto etreo
FC
Fibra cruda
ELN
Elementos
Libres
de
Nitrgeno
Cenizas
Macrominerales
Microminerales
CHO
Lpido
Protena Cenizas
70
2
11
7
137
8
35
20
730
15
93
22
2
206
172
50
47
36
33
8
6
44
215
15
8
100
118
107
207
449
268
22
CHO
Lpido
Protena
Cenizas
11
Composicin
general de los
alimentos
Ingredientes
Pastos
Oleaginosas
Cereales
Animales
Msculo
Lcteos
Huevo
Tipos de
protena
Plantas
Animales
Protena
cruda
cidos
orgnicos
Protena
verdadera
cidos
metablicos
Productos de
fermentacin
MS
CHO
Protena
Cenizas
Bajo %PC, se compone de: enzimas; mayor en plantas

jvenes, disminuye con la madurez
Alto %PC, alta calidad, por su buen balance de amino
cidos
Forma tejidos: piel, msculo, hueso, faneras
La calidad de una protena aumenta con su digestibilidad,
por eso todava hay CANIBALISMO
Protena verdadera
Amino cidos
cidos nucleicos
Nitrgeno No Proteico
Aminas, amidas
Nitritos, nitratos
NNP: Urea, biuret
Se compone de cadenas de aminocidos
Ejemplos
Ac. Ctrico, Ac. Mlico, Ac. Succnico, Ac.

Fumrico, Ac. Ac. Pirvico, Ac. Lctico
F. Ruminal
Ensilaje
F. Etlica
F. Metanognica
Molculas
orgnicas
Lpido
Actico, Propinico, Butrico, Valrico,

Caprico
Ac. Lctico
Etanol
Gas metano (CH4)
Categora
Clasificacin
Funciones
Ejemplos
Carbohidratos
Monosacridos
Disacridos
Polisacridos
Energa
ADN
Transporte
azcares
Estructura
Reserva
Lpidos
Triglicridos
Ceras
Fosfolpidos
Esteroles
Protenas
Polipptidos
Grasas
Reservas
de
energa
Proteccin
del
fro
Cutcula vegetal
proteccin
contra el agua
Hormonas
Enzimas
Hexosas
Pentosas
Sacarosa
Lactosa
Almidn
Glucgeno
Celulosa
TG: glicerol + 3
cidos grasos
Ceras
Diglicrido
+
fosfato + colina
=
Lecitina
de
12
(Polmeros
de
aminocidos)
Ac. Nucleicos
Polmeros
nucletidos
Vitaminas
Vitaminas
hidrosolubles
de
Hormonas
Transporte
Estructurales
Contrctiles
Estructura
de
DNA y RNA
Molculas de alta
energa
Transportadores
de electrones
ADN, ARN
ATP, ADP AMP
NAD,
NADP,
FAD
Sntesis de
macromolcula
s
Experimento
de Miller-Urey
13
Importancia de la Bromatologa
El medico veterinario zootecnista que se dedique a la produccin animal, e incluso aquel que se
dedique a la clnica de grandes y pequeas especies, tiene que conocer la importancia de la
nutricin y la alimentacin de los animales para mantener la salud de los mismos al igual que para
promover su produccin, reproduccin y crecimiento. En base a esto, el Plan de Estudios de la
carrera establece la materia de Bromatologa, el anlisis de los alimentos, como una necesidad.
En el nuevo programa de estudios por competencias se busca que el alumno obtenga
conocimientos significativos, en situaciones similares a las que enfrentar en la prctica
profesional. El Programa de Bromatologa fue diseado para estimular al alumno a que utiliza este
conocimiento y las habilidades aprendidas en el laboratorio para reforzar su trabajo profesional.
Por lo tanto se busca reforzar el aprendizaje de los principios bsicos mediante la prctica en
laboratorio y en campo.
Desarrollar y / o reforzar los conocimientos:
Identificar los principales alimentos y sus componentes nutricionales.
Aplicara tcnicas de bsqueda, organizacin e integracin de informacin relevante en la
ciencia animal.
Desarrollar y / o reforzar las habilidades para:
Analizar e interpretar los resultados de los anlisis de los alimentos.
Emplear tcnicas apropiadas en bien de los animales para proporcionar a los humanos
alimentos de excelente calidad.
Manejar equipo de laboratorio y de campo utilizados en las prcticas programadas.
14
II. Introduccin al Laboratorio de Bromatologa.

El Laboratorio de Nutricin Animal (LNA) del Centro de Ciencias Agropecuarias (CCA) de la UAA
inici como un laboratorio para la docencia y el servicio al pblico, en el cual se ofrece el anlisis
de los alimentos para ganaderos, veterinarios y nutrilogos que necesiten conocer la composicin
qumica nutrimental de los ingredientes y dietas que se ofrecen a los animales.
Con el tiempo, el LNA ha empezado a realizar proyectos de investigacin, tanto internos como
externos, apoyando a otras instituciones (INIFAP, universidades y centros de investigacin) en el
anlisis de alimentos y en determinaciones de digestibilidad in Vitro e in situ. Con esto se vio la
necesidad de ampliar las instalacin, abrindose una nueva unidad de trabajo, por lo que ahora el
LNA se compone de dos unidades, una dedicada al anlisis de la composicin qumica de los
alimentos, que es el Laboratorio de Bromatologa (LB), y otra unidad que se dedica al anlisis de
la digestibilidad de los alimentos, que se ha llamado Laboratorio de Fermentacin In Vitro (LFIV),
aunque tambin lleva a cabo los anlisis de digestibilidad in situ (en el rumen) e in vivo (en el
animal completo).
Equipos con los que se cuentan en el Laboratorio de Nutricin Animal:
Equipo para Anlisis Qumico Proximal (AQP)

Equipo
Caractersticas Uso
Determinacin
Protena
Kjeldahl
de
Costo/anlisis
(para 6 muestras)
Medicin
de
Protena Cruda con
extraccin de NH3
en cido sulfrico y
posterior titulacin
$130
Determinacin de
Protena Dumas
LECO FP528
Medicin
de
Protena Cruda por
combustin
y
arrastre
de
Nitrgeno
$130
Extracto etreo
Goldfisch
muestras
$50
Extracto etreo
Flujo Supercrtico
Marca LECO (TFE
2000)
Fibra Cruda
Marca Labconco
Determinacin de
fibra en detergente
neutro (FDN)
Determinacin de
fibra en detergente
cido (FDA)
FDN
y
FDA
ANKOM
Marca Labconco
Determinacin
de
Extracto Etreo por
extraccin en ter de
lpidos,
vitaminas
liposolubles, etc.
Determinacin
de
Extracto Etreo por
presin
y
temperatura
Degradacin
en
H2SO4 1.25% y
NaOH 1.25%
Determinacin
de
Fibra
Neutro
Detergente
Determinacin
de
Fibra
cido
Detergente
Utiliza
bolsas
especiales ANKOM
F57
Marca Labconco
Digestor de Fibra
Marca ANKOM
$130
$90
$90
$90
$180
15
Muflas
pequeas
(1) para anlisis de
cenizas
Estufas desecacin
para materia seca
600C
Obtencin
de
cenizas en 4 horas
$40
60C
Evitar prdida de
elementos voltiles
$40
Estufas desecacin
para materia seca
100C
Obtencin
de
materia seca para
AQP con flujo de
aire
$32
Bomba de Vaco
Necesaria para filtrar

muestras
Crisoles Gooch
Varios tamaos y
porosidades
Filtrar muestras para

determinacin
de
materia
seca
y
materia orgnica. Se
requiere una mayor
cantidad: 50 en total
Equipo para preparacin de muestras

Molino de rotor
De 0.5 a 2 mm
Molino fino
De 0.5 a 1 mm
Necesario para la
preparacin
de
muestras
burdas,
tales como zacates,
granos, semillas
Necesario para la
preparacin fina de
las muestras
1 en existencia
1 en existencia
Equipo para uso general de laboratorio

Bscula
Hasta 2 kg
Medicin
de
muestras (0.00g)
1 en existencia
Balanzas (3)
Scientech (20g)
Ohaus (120g)
Sartorius (120g)
2 en existencia
Estufas desecacin
(3)
De 50 a 100C
Congelador
De -4 a 17C
Medicin
de
muestras en forma
exacta
(0.0000g)
Secar y mantener
seco muestras y
equipo
Congelar y preservar
muestras
Refrigerador
4C
Refrigerar muestras
1 en existencia
Eliminar
peligrosos
gases
1 en existencia
Desecar
muestras
salidas del horno
4 en existencia
Campana
Extraccin
Campanas
Desecacin (4)
de
3 en existencia
1 en existencia
16
Gas embotellado
Oxgeno
Mezcla
CO2
Usado con Bomba

Calorimtrica
Usado
para
absorcin atmica
Calentar muestras
1 en existencia
Platina (Hot plate)
30x60 cms
Mantener
temperatura
constante
1 en existencia
Destilador
1 en existencia
Utilizado
para
digestibilidad in vitro
con bolsas ANKOM
F57
1 en existencia
1
en
prstamo
(INIFAP)
Rango pH 0-14
Dos decimales
Spectronic Genesis
5
Denver Instrument
Model 10
Anlisis de fsforo,
cido lctico, etc.
1 en existencia
Prismas de cuarzo
(4)
Perkin
Instruments
Prismas
(Spectroscopy Cells)
Los
prismas
de
cuarzo
son
reutilizables
Atomic Absorption
Perkin Elmer 2380
Determinacin
minerales traza
de
En laboratorio de
aguas y suelos del
CCA-UAA
Cromatgrafo
gases (GC)
Centro de Ciencias
Bscias de la UAA
Determinacin
de
cidos
Grasos
Voltiles (AGV)
En otros laboratorio
de la UAA
Cromatgrafo
(HPLC)
Centro de Ciencias
Bsicas de la UAA
En otros laboratorio
de la UAA
Bomba
calorimtrica
Modelo Parr
Determinacin
de
metabolitos
no
voltiles
Determinacin
de
energa bruta de los
alimentos
y
las
heces
Uso de cpsulas
entricas
para
empacar la muestra
Bao Mara
Agua destilada
H2O puro
6 en existencia
Equipo de fermentacin in Vitro

Digestor ANKOM
ANKOM Daisy II
Equipo de medicin especializado

Medidor de pH
Espectrofotmetro
de
Elmer
En laboratorio
aguas y suelos
CCA-UAA
En laboratorio
aguas y suelos
CCA-UAA
de
del
de
del
$250
17
III. Programa del sistema de prcticas.

En el curso de Bromatologa, que se lleva a cabo en el 6 Semestre de la carrera de MVZ, se
llevan a cabo un total de 18 prcticas diferentes, las cuales tienen como objetivo permitir al
alumno realizar personalmente todas las determinaciones necesarias para conocer la composicin
nutricional del alimento y evaluar el mismo
No. Prctica
Sesin programada
mbito de
desarrollo.
Duracin
(horas)
2 horas
Prctica 1
Conocer la fbrica de Fbrica de alimentos de

alimentos y el Laboratorio la posta y el Laboratorio
de
Nutricin
Animal, de Nutricin Animal
Reglamentos y toma de
muestras.
Identificar y clasificar los Laboratorio de Nutricin
ingredientes usados en la Animal
alimentacin del ganado.
2 horas
Prctica 2
Prctica 3
Preparacin de la muestra Laboratorio de Nutricin

en el laboratorio.
Animal
3 horas /
Prctica 4
Determinacin
humedad total.
la Laboratorio de Nutricin
Animal
4 horas /
Prctica 5
Determinacin de Extracto Laboratorio de Nutricin

Etreo
Animal
4 horas /
Prctica 6
Determinacin
cruda
fibra Laboratorio de Nutricin

Animal
5 horas /
Prctica 7
Determinacin de protena Laboratorio de Nutricin

cruda
Animal
6 horas /
Determinacin de cenizas
4 horas /
Prctica 8
Prctica 9
Prctica 10
Prctica 11
Extracto
Nitrgeno
de
de
Libre
Integracin
de
resultados del AQP
Determinacin de FDN
Determinacin de FDA
Laboratorio de Nutricin
Animal
de Saln de clases
semana 1
semana 2
semana 3
semana 4
semana 4
semana 5 y 6
semana 6
semana 7
2 horas /
semana 9
los
Animal
4 horas /
Animal
4 horas /
semana 10
semana 11
18
Prctica 12
Prctica 13
Prctica 14
Determinacin de Lignina
Animal
4 horas /
semana 11
Integracin
de
los Saln de clases.
resultados del anlisis de
fracciones de fibra
2 horas /
Digestibilidad en KOH
2
Horas
semana 13
4
Horas
semana 13
Animal
semana 12.
Digestibilidad
de
Materia Seca in Situ
la Vacas fistuladas
Prctica 15
Prctica 16
Digestibilidad
de
Materia Seca in Vitro
la Laboratorio
de
fermentacin in Vitro
4
Horas
semana 14
Prctica 17
Calorimetra
bioenergtica
y Laboratorio de Nutricin
Animal
2
Horas
semana 15
Prctica 18
Visita a las praderas de la Campos de la UAA y

Posta Zootcnica y otras viajes locales
unidades de produccin
particular.
Animal
6 horas
semana 13 y
14
19
IV. Prcticas generales de seguridad.

Reglamentos y procedimientos generales.
1. Se llevar en todo momento ropa protectora, incluida una bata de
laboratorio con mangas largas y blanca (abotonada),
2. Nunca se debe probar un producto qumico. La mayora son corrosivos o
venenosos.
3. Nunca oler directamente el contenido de un frasco. Se debe de abrir el
frasco pasar la mano recogiendo los vapores que salen y oler la mano. Si
hueles directamente te puedes quemar la pituitaria.
4. El pelo largo se debe recoger. No llevar ni bufandas, ni pauelos, ni lazos
que cuelguen porque la mayora de los tejidos estn hechos de fibras
inflamables que si tocan o rozan una llama comenzaran a arder
rpidamente.
5. Si el alumno se salpica la cara o las manos con cidos o bases que sean
disoluciones concentradas hay que lavar inmediatamente con gran
cantidad de agua. Despus si se trataba de un cido se debe poner
bicarbonato, y si era una base se debe aplicar cido brico.
6. Si se quema al tocar algo caliente se debes lavar con abundante cantidad
de agua fra para eliminar el calor, si hay hielo ponerlo sobre la zona
quemada. Despus aplicar una pomada para quemaduras que habr en el
botiqun y sino una pomada grasienta o aceite para que no se reseque la
piel.
7. Siempre que manipules tubos o varillas de vidrio para introducirlas en un
orificio que tiene que ajustar debes de cogerlas con una bayeta e
introducirlas girando. De esta forma si se rompen no te cortars.
8. Antes de comenzar a trabajar, el alumno debe asegrarse de que se ha
entendido bien lo que se tiene que hacer, y si no es as, preguntar tantas
veces como sea necesario. Si se tenan que hacer clculos, no comenzar
nunca a trabajar sin que el profesor revise los clculos.
9. Nunca pipetear chupando con la boca, utilizar las gomas de pipetear.
10. Si se utilizan mecheros de alcohol para calentar, nunca llenarlos ms que
hasta la mitad del contenido y nunca cambiarlos de lugar estando
encendidos. Primero se deben apagar colocando el capuchn. Cualquier
movimiento puede hacer que salpique el alcohol y se inflame.
11. No se debe introducir ni bebidas ni cosas de comer, un accidente que se
ha producido con frecuencia ha consistido en que de forma distrada y
pensando que se tena una botella con agua al lado algn alumno se ha
bebido un producto qumico que era corrosivo o venenoso.
20
21
Normas Generales de Trabajo
1. Para trabajar en el laboratorio evitar usar sortijas, pulseras, etc., porque

estn hechas de productos qumicos que tambin pueden reaccionar.
2. En los recipientes de los productos qumicos cuya etiqueta dice
qumicamente puro nunca se debe introducir nada, ni esptulas, ni
agitadores, ni producto que se ha sacado previamente. El producto se
debe sacar con cuidado golpeando ligeramente le frasco y si se saca ms
del necesario se debe guardar en otro frasco del mismo producto pero que
no sea qumicamente puro.
3. Nunca se deben arrojar productos slidos a la pila de lavar. Se debe vertir
el lquido que los acompaa, lavar los productos slidos por decantacin
con agua y echarlos a la papelera.
4. Si se van a utilizar disoluciones no es suficiente con leer la etiqueta del
nombre del producto qumico que contiene, tambin se debe evaluar la
concentracin de la disolucin.
5. Cuando se tiene que hacer una reaccin qumica se debe utilizar el
recipiente adecuado a la cantidad que se va a utilizar. Los ensayos se
hacen en tubos de ensayo o en placas de gotas, nunca en vasos,
matraces, etc.
6. Para medir volmenes solo se usan pipetas y buretas si se trata de anlisis
cuantitativos. En caso contrario se deben usar probetas del tamao
adecuado.
7. Trabajar en silencio, conservar en todo momento compostura y hacer un
adecuado uso del mobiliario y equipo del laboratorio.
22
Normas mnimas de seguridad para los laboratorios

Medidas generales
Vestimenta
La vestimenta es de vital importancia para evitar accidentes con qumicos y fuentes de calor.
El alumno debe llevar bata blanca en laboratorio, cerrada y con las mangas largas sin arremangar.
El calzado debe ser cerrado y antiderrapante.
Cada alumno es responsable de llevar cubrebocas, lentes de seguridad y guantes de cirujano.
Prcticas generales a realizar dentro del laboratorio, fbricas de alimentos o

bodegas.
Estar prohibido comer, beber, fumar y aplicarse cosmticos en el rea de trabajo.
El personal que realiza tareas de campo est expuesto a sufrir accidentes. Para reducir al mnimo
los riesgos se debe conocer el peligro asociado a dichas actividades.
Precauciones generales
No se debe beber, comer o fumar durante el trabajo.
Los elementos de proteccin personal deben estar siempre limpios y en perfecto estado de
conservacin y funcionamiento, los mismos deben usarse aunque moleste.
Al finalizar la tarea todos los materiales de desecho debern ponerse en bolsas plsticas, cerrarse
firmemente con precintos de seguridad y descartarse segn normas de seguridad.
Referencias
Harris, L.E., Asplund, J.M. and Crampton, E.W. (1968). An International Feed nomenclature and
methods for summarizing and using feed data to calculate diets. Utah Agr. Exp. Sta. Bull. 479.
McDowell, L.R., Conrad, J.H., Thomas, J.E. and Harris, L.E. (1974). Latin American tables of
feed composition, University of Florida, Gainesville, FL.
23
Fuentes de Informacin:
FUENTES DE INFORMACIN (BIBLIOGRAFA)
No. AUTOR/TITULO
CLASIFICACIN
Cherney, J.H.; Cherney, D. J. R. (1998). Grass for Dairy Cattle. CABI 636.2086G768
Publishing. Cambridge. U.K.
Church, D.C. (1977). Livestock Feeds and Feeding. Schultz Wack Weir 636.084Ch561
Publishing. Oregon. U.S.A.,
Cullison, A.E. (1983). Alimentos y Alimentacin de Animales. Editorial 636.084C967a

Diana. D.F. Mxico.
Cullison, A.E. (1979). Feeds and Feeding. Reston Publishing Company. 636.084C967f
Virginia. U.S.A.
COMPLEMENTARIAS:
5
Ensminger, M.E., Olentine, C.G. (1978). Feeds & Nutrition Complete. The 636.084E56f
Ensminger Publishing Company. California. U.S.A.
Fahey, G.C. (1994). Forage Quality, Evaluation and Utilization. Library of 636.20855N277f
Congress. Nebraska. U.S.A.
Givens, D.I.; Owen, E.; Axford, R.F.E. ; Omed, H.M. (2000). Forage 636.20852F6924
Evaluation in Ruminant Nutrition. CABI Publishing. London. U.K.
Hughes, H.D. ; Heath, M.E. ; Metcalfe, D.S. (1966). Forrajes. La Ciencia de 633.2H893f
la Agricultura Basada en la Produccin de Pastos. 12 Impresin.
Compaa Editorial Continental (C.E.C.S.A.). D.F. Mxico.
National Research Council (NRC). (2000). Nutrient Requirements of Beef 636.213N9762

Cattle. National Academy Press. Washington D.C. U.S.A.
10
National Research Council (NRC). (2001). Nutrient Requirements of Dairy 636.2142N9762

Cattle. National Academy Press. Washington D.C. U.S.A.
11
Theodoru, M.K.; France, J. (1999). Feeding Systems and Feed Evaluation 636.084F2953
Models. CABI Publishing Company. London. U.K.
12
Van Soest, P.J. (1994). Nutritional Ecology of the Ruminant. 2

Cornell University Press. Ithaca, New York. U.S,A.
nd
Edition. 636.2085V278n
24
Parte II. Conocer las instalaciones del Laboratorio de

Nutricin Animal, las tcnicas de muestreo y preparacin
de muestras
En esta parte se muestran las prcticas que tienen que ver con el conocimiento bsico del
laboratorio de bromatologa, la obtencin de muestras y su preparacin:
Prctica 1
Conocer la fbrica de Fbrica de alimentos de 2 horas

alimentos y el Laboratorio la posta y el Laboratorio
semana 1
de
Nutricin
Animal, de Nutricin Animal
Reglamentos y toma de
muestras.
Prctica 2
Identificar y clasificar los Laboratorio de Nutricin 2 horas

ingredientes usados en la Animal
semana 2
alimentacin del ganado.
Prctica 3
Preparacin de la muestra Laboratorio de Nutricin 3 horas /

en el laboratorio.
Animal
semana 3
El objetivo principal de estas primeras prcticas es que el alumno empiece a trabajar sobre su
proyecto semestral, que adquiera confianza en el manejo de equipo y materiales dentro del
laboratorio y se familiarice con los procesos a realizar.
25
Prctica 1. Conocer la Fbrica de Alimentos y el Laboratorio de

Nutricin Animal, sus equipos y materiales empleados, toma de
muestras en campo.
Responsable de la Prctica:
M. en C. Ma. Guadalupe Acero Godnez
Jess Mara, Ags. Enero de 2011
26
Prctica 1. Conocer la Fbrica de Alimentos y el Laboratorio de Nutricin

Animal, sus equipos y materiales empleados, toma de muestras en campo.
Introduccin.
En la primera prctica se hace un recorrido del Laboratorio de Nutricin Animal, la planta de
alimentos, y la Posta para que los alumnos empiecen a familiarizarse con las instalaciones y con
la forma de trabajar. As mismo se ensea la forma correcta de tomar las muestras, como
transportarlas e identificarlas
Toma de muestras.
Antes de realizar cualquier tipo de anlisis es necesario tener una muestra que represente lo ms
posible al lote que analizamos, para que podamos tener resultados reales.
Para lo cual debemos conocer y saber usar los muestreadotes, y de acuerdo al tipo de empaque
l numera de muestras para que sea representativa del lote.
Trminos usados en muestreo.
Envo total.
Lote: La cantidad de alimento que se va a adquirir. Puede ser el envo total o una parte del
mismo.
Muestra primaria: Muestra tomada de un lote, varias muestras primarias son
representativas de un lote.
Muestra bruta: Es la combinacin de varias muestras primarias combinadas, de las que se
extrae la muestra contractual.
Muestra contractual: Es la muestra representativa de un lote y es la que se usa para el
anlisis, el tamao de la muestra se determina por acuerdo entre el vendedor y el
comprador.
La extraccin de las muestras no debe ser menos del 2 % del lote y se extraen las muestras con
cucharones, muestreadotes cilndricos o cnicos. Si se extraen de sacos cerrados los
muestreadotes de rifle o similares son adecuados.
Los sacos deben de muestrearse en forma diagonal. Si son menos de 10 sacos debern
muestrearse todos, si son mas debern muestrearse al menos 2 %.
Toma de muestras a granel.

El muestreo debe hacerse con un muestreador cilndrico o cnico a tres niveles, dependiendo de
la muestra en los siguientes puntos.
b.1) Si son vagones, camiones o bodegas rectangulares de hasta 15 toneladas, muestrear 5
puntos, uno al centro y 4 puntos perimetrales a 50 cm. De las paredes.
b.2) Si son vagones o bodegas rectangulares de 15 a 30 toneladas, muestrear 8 puntos (2 al
centro y 6 a 50 cm. de las paredes).
b.3) Vagones o bodegas rectangulares de 30 a 50 toneladas, muestrear 11 puntos (3 al centro y 8
a 50 cm. de las paredes).
Si se toman las muestras primarias de bsculas hacerlo con palas o muestreadores mecnicos.
27
Figura 1.1. Implementos utilizados en la toma de muestra de alimentos.

Las muestras primarias deben ser mezcladas y divididas al tamao de la muestra contractual.
Para este mezclado puede hacerse uso de mezcladores mecnicos apropiados o utilizar
manuales.
Cuadro 1,1 Caractersticas de la toma de muestras
Tamao de la muestra Lote
Muestra primaria
(ton)
(Kg)
Semillas
largas
Hasta 500
(copra)
Semilla
mediana
Hasta 500
(cacahuate, may)
Semillas
pequeas(ajonjol,
100
sorgo)
Muestra bruta
(Kg)
Muestra
contractual
(Kg)
Hasta 200
0.5
Hasta 100
0.1
Hasta 20
Una vez que se han tomado las muestras se debern guardar en bolsas limpias de papel, tela de
fibra cerrada o polietileno o bien en frascos bien tapados, identificar especificando el tipo de
muestra, origen, nombre del solicitante, anlisis requerido y enviarlo al laboratorio.
Objetivos especficos de la prctica.

Que el profesional en formacin conozca la fbrica de alimentos balanceados, el tipo de
maquinaria con la que cuanta, las rutas crticas y de trnsito dentro de la misma, as como los
materiales usados para el muestreo y los reglamentos de la fbrica y del Laboratorio de nutricin
animal. Asimismo, realizar algunos muestreos de alimentos y la adecuada identificacin, para el
envo de muestras al laboratorio de anlisis.
Normas de seguridad especficas para la prctica.

Cuadro 1.2 Cuadro de deteccin de riesgos.
Tipo de peligro
Como evitarlo
Como proceder en caso de

un accidente.
Lesiones en general.
Ubicar las reas de riesgo, que sern Notificar cualquier incidente
mostradas por el encargado de la presentado
durante
la
fbrica y el laboratorio., Permanecer en prctica.
orden, en silencio, preguntar sin tocar la
maquinaria o equipos.
Notificar en caso de cualquier incidente al profesor.
28
Nota: Esta prctica representa un bajo riesgo, no obstante es importante acatar el reglamento vigente
colocado a la entrada del laboratorio.
Materiales y equipos utilizados.

Muestreador de pico **
Pala**
Etiquetas *
Bolsas de plstico con capacidad de 6 kilos **.
Manual de prcticas *
Libreta de notas y pluma *
Bata blanca o filipina *,
Nota: * es responsabilidad del profesional en formacin, ** es responsabilidad del profesor.
Bibliografa recomendada
La bibliografa citada en su programa de estudios de la materia de Bromatologa, la AOAC y la
Norma Oficial Mexicana.
Para saber ms.
Buscar en el Internet los diferentes mtodos de muestreo de grasas y de melazas.
Glosario de trminos.
(Buscar el significado de los siguientes trminos y explicarlos)
Muestreador de pico.
Muestreador de pacas.
Muestra madre.
Muestra representativa.
Completar con palabras nuevas que identifique en su bsqueda.
Cuestionario
29
Prctica 2: Identificacin y clasificacin y descripcin de los

ingredientes usados en la alimentacin del ganado.
30
Prctica 2: Identificacin y clasificacin y descripcin de los

ingredientes usados en la alimentacin del ganado.
Introduccin.
En la alimentacin de los animales se pueden utilizar muchos ingredientes, cada uno con sus
caractersticas especficas y nicas, y sin embargo es posible clasificarlos en grupos para su
mejor estudio y para facilitar la comparacin entre ingredientes con caractersticas similares.
Algunos ingredientes pueden sustituirse o intercambiarse, con el objetivo de reducir los costos de
produccin, para facilitar el manejo o para mejorar la racin.

El profesional en formacin a travs del conocimiento adquirido en la teora del curso, identifique,
describa y caracterice en base a sus valores de nutrientes a los alimentos segn el National
Research Council de los Estados Unidos (NRC). Dicha informacin le servir para la formulacin y
el balanceo de raciones para el ganado, as mismo para la compra de insumos.
Criterios de desempeo:
El profesional en formacin ser competente para identificar y justificar la clasificacin de los
ingredientes usados en al alimentacin del ganado.
Sabr buscar e interpretar la informacin de las tablas nutrimentales para cada especie animal
(NRC, FEDNA) y de otras fuentes, como son revistas cientficas y de divulgacin, el Internet, libros
especializados, etc.
Identificar y describir fsicamente los ingredientes y poder enlistar sus atributos y los identificar en
la clasificacin de la NRC.
Resultados esperados:
Los alumnos colectarn muestras en la fbrica de alimentos o forrajeras del estado, de ser posible
con la informacin de calidad del lote, las cuales sern llevadas al laboratorio el da de la prctica
24 horas antes.
Describir fsicamente el ingrediente.
Documentar en la literatura disponible la existencia de ms tipos o variedades y los valores del
anlisis qumico proximal por ingrediente.
Mesa redonda de competencia entre equipos, para identificar y describir los ingredientes desde el
punto de vista nutritivo como fsico.

Tipo de peligro
Como evitarlo
Lesin en la piel durante la Usar muestreador
colecta de muestras.
Ruptura del frasco para la Usar frascos de plstico
muestra
Como proceder en caso

de un accidente.
Lavar el rea lesionada al
chorro de agua.
**
**
31
Materiales y equipos utilizados

Frascos de plstico con tapadera.
Muestras de diferentes ingredientes.
Etiquetas.
Tablas de la NRC y FEDNA
Manual de prcticas.
Nota: si fueran muestras de ensilados o pastos con alta humedad se recomienda congelaremos en los
frascos y 24 horas antes de la prctica dejarlos a descongelar dentro del refrigerador o en hielera con hielo,
para evitar putrefaccin de las muestras.
La bibliografa citada en su programa de estudios de la materia de Bromatologa.
Para saber ms.

Leer artculos cientficos de las revistas Animal Science, Journal of Animal Science, Journal of
Dairy Science, Nutrition Research, www.elsevier.com, Scientiae naturae, archivos
latinoamericanos de nutricin, etc. Leer con cuidado los objetivos y los mtodos utilizados en la
investigacin cientfica. Posteriormente buscar la fuente y ver si los mtodos usados son los
adecuados para cada variable bajo estudio.
(Buscar el significado de los siguientes trminos y explicarlos)
Bromatologa.
Toxicologa.
Nutriente.
Nutrimento.
Alimento.
Forraje.
Alimento balanceado.
Alimento concentrado.
Suplemento.
Complemento.
Insumo.
32
Energtico.
Proteico.
Peletizado.
Cuestionario
33
Prctica 3: Preparacin de las muestras para anlisis.
34
Introduccin
Las muestras obtenidas en el campo no pueden analizarse como tal: deben ser homogenizadas y
reducidas a un tamao que permita su determinacin qumica o por digestibilidad. Es necesario
conocer muy bien cada ingrediente que se quiere analizar para saber si se deben realizar pasos
especiales en la preparacin de la muestra.

El profesional en formacin a travs del conocimiento adquirido en la teora del curso, sea capaz
de emplear la tcnica de preparacin de los alimentos para su posterior anlisis, describa y
caracterice cuales son los pasos y el fundamento de cada uno de ellos para tener una muestra
homognea y sus anlisis tengan repetibilidad.

Tipo de peligro
Como evitarlo
Como proceder en
caso de un accidente.
Lesiones fsicas en el uso Leer los manuales de operacin de cada Apagar equipos
de molinos
equipo.
Retirar persona del equipo
Portar el equipo de seguridad necesario
Atencin mdica adecuada
Materiales y equipos
Frascos de plstico con tapadera.
Muestras de diferentes ingredientes.
Etiquetas.
Manual de prcticas.
Estufa de secado con aire forzado.
Molino con cribas intercambiables.
Tijeras
Bolsas de plstico trasparentes.
Nota: si fueran muestras de ensilados o pastos con alta humedad se

recomienda congelaremos en los frascos y 24 horas antes de la prctica
dejarlos a descongelar dentro del refrigerador o en hielera con hielo, para
evitar putrefaccin de las muestras.
Metodologa
Una vez que la muestra es tomada deber ser protegida para evitar cambios que alteren su
composicin. Tejada recomienda los siguientes procedimientos:
1. Muestras secas pueden enviarse al laboratorio en frascos de boca ancha de vidrio o de
nalgeno con tapn de rosca o en bolsas de polietileno.
2. Forrajes frescos o muestras parcialmente secas debern enviarse en bolsas de papel
resistente, el papel permitir que el agua se evapore impidiendo que la humedad alta
favorezca el crecimiento de microorganismos que descompondrn la muestra.
35
3. Ensilajes debern enviarse en doble bolsa de polietileno grueso o en frascos con tapn de
rosca y congelarse inmediatamente para evitar as al laboratorio. Se pueden enviar en
guantes de palpacin.
4. Muestras lquidas como melazas y orina se envasarn en frascos de vidrio o nalgeno con
tapn de rosca.
5. Nota 1.- Si se analizara minerales guardar la muestra en frascos de nalgeno o polietileno
para evitar contaminacin de minerales propios del vidrio...
6. Nota 2.- Si la muestra es un forraje fresco mandarla en bolsa de papel resistente y anotar
el peso de la muestra al momento de colocarla en la bolsa, as aun cuando pierda
humedad esta se considerara por el analista, procurando enviar mnimo 2 Kg. de alimento.
Preparacin de las muestras

Posteriormente cada equipo se dedicar a la preparacin de las muestras la cual se lleva a cabo
en 3 etapas: cuarteo, secado y molienda.
6.1 Mtodo del cuarteo:

Material:
Una cartulina de 80 x 80 cm, una esptula, el material resultante del muestreo.
Procedimiento:
La muestra es colocada en el centro de la cartulina procurando formar un cono, el cual se dividir
en cuatro partes, eliminar dos de las porciones diagonales y mezclar las dos restantes, con las
cuales se formar un nuevo cono. Repetir el proceso anterior hasta obtener aproximadamente 50
g de la muestra original
Figura 3.1 Cuarteo de Forrajes frescos y hmedos.

Las partculas debern reducirse a 3 cm de longitud, procurando hacer todas las maniobras dentro
de una bolsa de plstico, como lo indica la figura siguiente
Reduccin del tamao de partcula de la muestra.
36
La homogeneizacin de la muestra debe hacerse dentro de la misma bolsa manteniendo sta

cerrada. Despus de haberla homogeneizado, se coloca en al cartulina y se procede al cuarteo
quedndonos con 500 g, la cual debe secarse y molerse como se indica en el punto 6.2 y 6.3.
Secado de la muestra
Si la muestra presenta ms de 13 % de humedad, deber secarse por el mtodo de materia seca
parcial (50 a 55 oC durante 24 h).
Molienda de la muestra.
La muestra debe de ser reducida a un tamao de partcula adecuado para ser sometido al
anlisis.
Este proceso se efecta en un molino de laboratorio tipo Wiley, que posee cribas intercambiables,
las muestras debern conservarse en frascos o en cualquier material inerte completamente
cerrado, en el caso de las melazas debern de ser conservadas en el refrigerador bien tapadas.
Debemos considerar que todos los resultados que obtengamos con este material debern ser
reportados como Base Materia Seca (BMS) o bien realizar la conversin a la base que sea
solicitado ya sea Base Materia Seca o Base Materia Humedad.
Es muy importante que al realizar cualquier anlisis sea efectuado por duplicado y triplicado para
asegurar la veracidad de los resultados.
Esta dinmica ser por equipo, buscando la participacin de todos y cada uno de los participantes.
La bibliografa citada en su programa de estudios de la materia de bromatologa.
Realizar bsquedas en el Internet.
37
Para saber ms.
Investigue cuanto mide la apertura de la criba No 20.

Cul es l numero de criba usado para el anlisis de micotoxinas por 2 mtodos diferentes, cite el
mtodo y la forma de preparacin de la muestra.
Base seca.
Base hmeda
Base Tal Cual
As fed.
Criba
38
Parte III. Anlisis Qumico Proximal o de Weende

Prctica 4
Prctica 5
Prctica 6
Prctica 7
Prctica 8
Prctica 9
Determinacin
de
la
Materia
Seca
y
la
Humedad total.
Determinacin de Extracto
Etreo
Determinacin de fibra
cruda
Determinacin de protena
cruda
Determinacin de cenizas
Extracto
Libre
Nitrgeno
Integracin
de
resultados del AQP
Laboratorio de Nutricin 4 horas /

Animal
semana 4
Animal
Animal
Animal
Animal
de Saln de clases
4 horas /
semana 4
5 horas /
semana 5 y 6
6 horas /
semana 6
4 horas /
semana 7
2 horas /
semana 9
los
39
Prctica 4. Humedad y materia seca.
40
Prctica 4. Humedad y materia seca.

Introduccin.
Materia Seca Parcial
Fundamento: Esta tcnica se basa en la evaporacin del agua que contiene el material a
una temperatura de 50 a 55 oC, hasta que el peso de la muestra sea constante en el
medio ambiente.
El material sigue conteniendo una pequea proporcin de agua que proviene de la
humedad ambiental, la prdida en peso se considera agua.
Los materiales que son secados a temperaturas superiores a 55 oC se alteran
significativamente en algunos de sus componentes (Van Soest, 1965), por lo tanto, si un
material se va a secar con el objeto de someterlo a anlisis diferentes al de humedad, no
deber sobrepasar los 55 oC.
Si el material se va a secar para medir exclusivamente el contenido de agua pueden
emplearse temperaturas superiores a los 55 oC, siempre que no haya prdidas de
substancias por volatilizacin o por descomposicin.
Materia Seca Total
Esta tcnica se basa en la evaporacin total de agua entre 100 y 105 oC hasta peso
constante. Se considera que la prdida de peso es agua.
Materia seca por el mtodo de la Termobalanza

Dicho mtodo tiene el mismo fundamento que la estufa es decir que se basa en la
evaporacin de agua mediante calor, este calor es generado por una fuente luminosa a
una determinada intensidad; el mtodo tiene la ventaja de ser rpido y econmico.
Material: balanza de humedad y esptula.
El profesional en formacin a travs del conocimiento adquirido en la teora del curso,
sea capaz de realizar la tcnica de materia seca y humedad en los alimentos por los
mtodos de estufa de aire forzado y el de balanza de humedad, y explicar las bondades
de cada mtodo y su aplicacin en la prctica agropecuaria, as como la interpretacin de
los resultados de materia seca y humedad.
Tipo de peligro
Como evitarlo
Como proceder en caso de

un accidente.
Sufrir alguna quemadura Usar pinzas para manipular Lavar la superficie y notificar
durante la manipulacin de las muestras.
al profesor.
las muestras en la estufa.
41

Balanza de humedad
Esptula.
Cajas de aluminio para humedad,
Estufa de aire forzado con rango de 0 a 200oC,
Esptula de acero inoxidable,
Pinzas para crisol,
Desecador
Balanza analtica.
Metodologa
Materia Seca Parcial
Materia Seca Total
Mtodo de estufa con aire forzado.
Esta tcnica se basa en la evaporacin total de agua entre 100 y 105 oC hasta peso
constante. Se considera que la prdida de peso es agua.
Procedimiento:
Lavar las cajas de aluminio perfectamente con agua y detergente.
Enjuagarlas con agua destilada y posteriormente con ter.
Introducir las cajas de muestra en la estufa (100 -115 oC hasta peso constante por 4
horas aproximadamente) colocando la tapa en la base de la caja.
Enfriarlas en desecador para evitar la hidratacin.
Pesar las cajas de aluminio en la balanza analtica.
Depositar dentro de la caja de 1 a 1.5 g de la muestra y registrar su peso exacto.
Secar en la estufa de 100 a 105 oC hasta peso constante (aproximadamente 24 horas)
colocando la tapa en la base de la caja.
Retirar la caja con su contenido, taparla y enfriarla en el desecador.
Pesarla en la balanza analtica, usar pinzas en todas las manipulaciones.
Clculos:
Clculo: % de humedad total = prdida de peso en gramos X 100
gramos de muestra
% de materia seca parcial = 100 - % de humedad
Tabla 4.1 Mtodo de clculo

Muestra
ID
A. Peso
Bolsa
B. Peso
Bolsa +
Muestra
C. Peso
Inicial
(Pi)
4.5678
Pi = B A
2.0000
Clculos
Ej. 4.1
2.5678
D. Bolsa
+
Muestra
seca
3.8765
E. Peso
Final
(Pf)
F.
%DMS
Pf =
DA
1.3087
= Pf / Pi
x 100
34.56%
G.
%MSP
H.
%DMS100
= %MS
94.5%
36.57%
Mtodo de la Termobalanza
42
Procedimiento:
Encender la Termobalanza.
Ajustar la Termobalanza en ceros.
Colocar la muestra en el plato de la Termobalanza ayudndonos con una esptula la
cantidad puede ser desde 1 a 10 g procurando que el material quede bien distribuido por
todo el plato para que nuestro resultado sea correcto.
Ajustamos la intensidad de la fuente de calor en 1.5 para evitar la calcinacin de la
muestra.
Se coloca la lmpara sobre el plato y se programa el tiempo de 10 a 15 minutos hasta
que la escala permanezca estable.
Anotar el peso final de la escala.
El clculo se realiza aplicando la misma frmula de materia seca.
Balanza de humedad
Esptula.
Cajas de aluminio para humedad,
Estufa de aire forzado con rango de 0 a 200oC,
Esptula de acero inoxidable,
Pinzas para crisol,
Desecador
Balanza analtica.
Para saber ms.
Leer artculos cientficos de las revistas cientficas de alto impacto:
-Journal of Animal Science,
Nutrition Research,
www.elsevier.com,
Scientiae naturae,
archivos latinoamericanos de nutricin,
Leer con cuidado los objetivos y los mtodos utilizados. Posteriormente buscar la fuente
y ver si los mtodos usados son los adecuados para cada variable bajo estudio. Busca
en el Internet que otros mtodos existen para determinar la humedad en los alimentos,
Grado brix.
Humedad funcional.
Humedad ambiental.
43
Cuestionario
44
Universidad Autnoma de Aguascalientes

Centro de Ciencias Agropecuarias
Departamento de Disciplinas Pecuarias.
PRCTICA 5
Extracto Etreo
Grasa Cruda.
45
Prctica 5: Extracto Etreo Grasa Cruda

Introduccin.
Grasa cruda en alimentos para animales. (AOAC, 920.39) y el mtodo de Grasa Cruda por el
mtodo de flujo supercrtico.
Principio: ambos mtodos cuantifican las substancias extrables en ter etlico, ter de petrleo o
hexano, slo que el primero usa solventes orgnicos y el segundo mediante presin y calor logra
el efecto de extraccin.

de realizar la tcnica de extraccin de grasa cruda pro los mtodos de flujo supercrtico y el
Goldfisch en los alimentos y comparar los resultados y la eficiencia de cada metodologa.
El profesional en formacin ser competente cuando sepa realizar e interpretar los resultados de
los anlisis y explique sus resultados por las dos metodologas.
Los profesionales en formacin usarn la tecnologa de flujo supercrtico y explicarn los
beneficios de esta tcnica en comparacin con la tcnica Goldfisch
Los profesionales en formacin determinarn grasa cruda por los 2 mtodos, los interpretarn y
calcularn el porcentaje de grasa o extracto etreo por muestra y los compararn con los que
encuentren en bases de datos.

Tipo de peligro
Como evitarlo
Como proceder en caso de un

accidente.
Sufrir
alguna
quemadura Manipular con cuidado y usar Lavar el rea quemada y
durante la manipulacin de las guantes de asbesto, procurar aplicar una pomada para
parrillas calientes en el equipo tomar el vaso y no recargar la quemaduras.
de Goldfisch.
mueca o palma de la mano en
la base de la platina caliente.

Aparato extractor tipo Goldfisch
Vasos de extraccin G. (peso constante)
Dedales de extraccin de celulosa.
TFE2000 equipo de determinacin de extracto etreo. (SFC9)
Reactivos:
ter de petrleo
46
Metodologa
Mtodo Goldfisch.
Pesar por diferencia 2 g de muestra e introducirlo en el dedal y taparlo con un trozo de algodn
seco.
Colocar el dedal que contiene la muestra dentro del portadedal y fijarlo bajo del condensador del
aparato de extraccin.
Pesar el vaso que se encuentra en el desecador usando pinzas para manipularlo y depositar
dentro del mismo 30 a 40 ml de ter, unirlo a la rosca y colocarlo debajo del condensador cerrado
hermticamente.
Abrir la llave del agua y subir las parrillas hasta que queden en contacto con el vaso.
Iniciar el calentamiento y observar durante los primeros diez minutos de ebullicin si hay fugas de
ter. Cuando el nivel de ter permanezca constante puede dejarse solo el aparato y observarse
peridicamente.
A partir del inicio de la ebullicin extraer durante 2 a 8 h como mnimo, dependiendo de la muestra
que se trate.
Cuando se finalice el tiempo de extraccin bajar las parrillas y dejar que el dedal termine de
gotear, desenroscar el vaso de extraccin y quitar el dedal que contiene la muestra, colocar en el
lugar del dedal un recolector de vidrio, volver a colocar el vaso de vidrio y subir las parrillas
calientes.
Destilar el ter que se encuentra en el vaso de extraccin y poco antes de que ste se evapore
hasta sequedad, bajar las parrillas y retirar el vaso.
Vaciar el ter de los tubos recolectores a un recipiente especial para ter usado.
Colocar el vaso en la estufa a 100 oC durante 40 minutos, enfriar en el desecador y
posteriormente pesar.
Clculos: % E.E.= (Peso del vaso
gr. de muestra.
con la grasa) - (Peso del vaso solo) X 100

Muestra
ID
A. Peso
Vaso
Clculos
Ej. 5.1
2.5678
B.
C. Peso
Inicial
(Pi)
Pi = B A
1.0000
D. Bolsa
+
Muestra
seca
2.6765
E. Peso
Final
(Pf)
F.
%DMS
Pf =
DA
0.1087
= Pf / Pi
x 100
%10.87
G.
%MSP
H.
%DMS100
= %MS
94.5%
11.50%
Mtodo de flujo supercrtico (SFC)
47
1.- Se pesa el tubo de extraccin con el papel usado como filtro en la base.
2.- se coloca dentro la muestra se vuelve a pesar lleno, se tapa y coloca en la charola de muestra.
3.- Se pesa el vial colector con la fibra de vidrio (glass wool).
4.- Colocar los tubos de extraccin y los viales colectores en el equipo.
5.- Establecer el mtodo y se ingresaron los parmetros de procedimiento:
Presin de extraccin 9000 psi, temperatura de extraccin 100 C, HVR temperatura 100 C,
tiempo de espera o rampeo 0 minutos, tiempo de extraccin 45 minutos, Flow Rate (tasa de
flujo) 1.3 lpm.
6.- Se ingresaron al equipo los datos tales como peso de tubos y viales de coleccin, se presiona
Start y al cabo de 45 minutos el equipo indica que se retiren los viales y los tubos, se pesan los
viales de coleccin y se introducen los datos al equipo y nos da directamente los resultados.
Para saber ms.

1.- Explicar por qu es importante secar la muestra para determinar la grasa cruda con un
solvente y por flujo supercrtico.
2.- En qu tipo de muestras es necesario determinar la grasa cruda y en cul se pudiera omitir.
Flujo sper critico.
Extraccin.
Soluble.
Sustancia
Grasa.
Aceite.
Solvente
Cuestionario
48

PRCTICA 6
Fibra cruda o fibra bruta.

49
Prctica 6: Fibra cruda o fibra bruta.

Introduccin.
ANLISIS DE FIBRA CRUDA. (Mtodo de Weende).
Principio. La fibra cruda es la prdida de la calcinacin del residuo seco despus de la digestin
de la muestra con soluciones de 1.25 % (peso /volumen) de cido sulfrico y 1.25 % de hidrxido
de sodio. Se aplica en muestras que previamente fueron desengrasadas, y se utiliza en granos,
carne, alimentos, y materiales fibrosos y alimentos para mascotas.
Al efectuar la digestin cida se disuelve parte de la hemicelulosa y al efectuar la digestin
alcalina se disuelve parte de la lignina; por lo tanto, el producto final no puede considerarse como
la totalidad de la fibra cruda y los resultados obtenidos son menores que reales.
Aparatos utilizados:
Labconco
ANKOM

El profesional en formacin, a travs del conocimiento adquirido en la teora del curso, ser capaz
de realizar la tcnica de fibra cruda o bruta en los alimentos y comparar los resultados y la
eficiencia del equipo ANKOM. Asimismo ser capaz de evaluar la utilidad del mtodo a pesar de
sus limitantes.
los anlisis.
Los profesionales en formacin sern capaces de realizar la tcnica e interpretar los resultados
obtenidos.
Identificara la limitante del anlisis y su importancia para la evaluacin de los ingredientes.
Evaluacin de los datos obtenidos comparados contra los de tablas y literatura

Tipo de peligro
Como evitarlo

accidente.
Sufrir alguna quemadura con El profesor ser el encargado de Lavar a la piel con abundante
vapor de agua al momento de manejar el equipo ANKOM y mostrarles agua ya que son sustancias
abrir las vlvulas de salida del las formas de manejarlo adecuadamente cidas y alcalinas. Acudir de
equipo ANKOM
inmediato a servicios mdicos.
Para esta determinacin se pueden utilizar dos aparatos diferentes: el Digestor de fibras ANKOM
y el digestor de fibras Labconco.
50
A. Digestor de Fibras ANKOM

Aparato de digestin ANKOM 200 Fiber Analyzer.
Filtracin ANKOM Technology F57 Filter Bags (bolsas de filtracin)
Selladora de bolsas (ANKOM Technology 1915/1920).
Desecador.
Reactivos.
Solucin de cido sulfrico (0.255 N) Valorada.
Solucin de hidrxido de sodio (0.313 N) Valorada.
Solucin indicadora de fenolftalena
Solucin indicadora de naranja de metilo
B. Digestor de Fibras Labconco

Aparato de digestin Labconco
Papel filtro Whatham
Desecador
Reactivos
Solucin de cido sulfrico (0.255 N) Valorada.
Solucin de hidrxido de sodio (0.313 N) Valorada.
Metodologa
A. Digestor de Fibras ANKOM

Preparacin de las bolsas de filtracin.
1.- Pesar las bolsas de filtracin en balanza analtica. (W1).
2.- Pesar directamente en la bolsa de filtracin 1.0 g de muestra (W2), de tamao de partcula 1
mm. Pesar un blanco con una bolsa vaca incluirla en la digestin para determinar la correccin de
bolsa (C1).
3.- Sellar la bolsa a una distancia de 0.5 cm. De la abertura.
4.- Acomodar la muestra uniformemente dentro de la bolsa.
5.- Si la muestra contiene grasa se recomienda colocar las bolsas con muestra en un frasco con
500 ml de acetona, agitando el frasco 10 veces dejar reposar 10 minutos. Repetir el procedimiento
con acetona nueva el procedimiento. Posteriormente sacar las bolsas de la acetona y ponerlas al
aire durante 5 minutos para eliminar el residuo.
6.- Colocar las 24 bolsas en las 8 charolas del suspensor de bolsas (tray), colocando 3 bolsas por
charola acomodadas a 120 grados, en relacin una con otra. La charola 9 se deja libre y acta
como el tope de la charola 8. Acomodar la charola (tray) dentro de la cmara del equipo.
7.- Adicionar 1900 a 2000 ml de la solucin de cido sulfrico (H2SO4 - 0.255 N) a temperatura
ambiente en el Vessel (contenedor de los tray), acomode el contrapeso y cierre, programe el
tiempo de digestin 45 minutos, encienda agitacin y calentamiento y Start para iniciar la
digestin cida.
8.- Transcurrido el tiempo se apaga la agitacin y calentamiento. Se abre la vlvula de salida de la
solucin caliente para reducir la presin interna. Se abre la parte superior de la cmara. Se vuelve
a cerrar la vlvula de salida, se agregan 1900 a 2000 ml de agua caliente (90 a 100 C) encienda
51
agitacin durante 3 a 5 minutos, se abre la vlvula de salida de lquido y se repite este

procedimiento 3 veces.
9.- Digestin alcalina: Se agregan 1900 a 2000 ml solucin de hidrxido de sodio (NaOH - 0.313
N) a temperatura ambiente se programa tiempo de digestin 45 minutos se enciende agitacin y
calentamiento y encender (Start).
10.- Transcurrido el tiempo se elimina la solucin alcalina por la vlvula de salida y se realiza el
enjuague como en el punto 8.
11.- Retirar las bolsas de las charolas y presionar ligeramente para eliminar el lquido que haya
quedado atrapado, sumerja durante 3 minutos las bolsas en un vaso de precipitado de 500 con
250 ml acetona, remueva las bolsas y elimine el exceso. Deje secar a la intemperie para eliminar
la acetona. Ms tarde para secar las bolsas se somete la muestra a 105C durante 2 a 4 horas,
enfriar en el desecador y pesar este peso corresponder al (W3).
12.- Colocar la bolsa en un crisol que este a peso constante, y calcinar durante 2 horas a 550 C,
enfriar en un desecador y pesar (W4)
Clculo:
FC = (W5 (W1 X C2)) X 100/ W2 X DM
W1= peso de la bolsa sola.
W2= peso de la muestra.
W3= peso de la bolsa con la fibra digerida.
W4= peso de la bolsa con la fibra digerida y calcinada.
W5= peso de la materia orgnica (M0) =W3- W4
C2= cenizas corregidas de la bolsa (blanco).
DM= materia seca.

Muestra
ID
A. Peso
Bolsa
B. Peso
Bolsa +
Muestra
Clculos
C. Peso
Inicial
(Pi)
D. Bolsa
+
Muestra
seca
Pi = B A
E.
Peso
Final
(Pf)
Pf =
DA
F.
%DMS
G.
%MSP
= Pf / Pi
x 100
Ej. 6.1
H.
%DMS100
= %MS
94.50
B. Digestor de Fibras Labconco

Muestra
ID
Clculos
Ej. 6.2
A. Peso
Bolsa
B. Peso
Bolsa +
Muestra
C. Peso
Inicial
(Pi)
Pi = B A
D. Bolsa
+
Muestra
seca
E.
Peso
Final
(Pf)
Pf =
DA
F.
%DMS
G.
%MSP
= Pf / Pi
x 100
H.
%DMS100
= %MS
94.50
52
Para saber ms.

Explicar la diferencia de fibra dietaria y fibra cruda.
Mtodo de Weende, por qu se llama as?
Amiloltica.
Celuloltica.
Carbohidratos Estructurales
Carbohidratos no estructurales.
Fibra dietaria.
Fibra bruta.
Cuestionario
53

PRCTICA 7
Determinacin de Protena Cruda.
54
Prctica 7: Determinacin de Protena Cruda.

Introduccin.
Para la determinacin del nitrgeno existen varios mtodos, los ms usados en la industria de los
alimentos balanceados son el mtodo Macro y Micro-Kjeldahl y el Mtodo Dumas o de combustin
interna.
Determinacin de Nitrgeno Total (Mtodo Macro-Kjeldahl).

Mtodo Kjeldahl
El mtodo Kjeldahl fue establecido en 1883 por el qumico dans Johan Kjeldahl. El mtodo se
utiliza para determinar la cantidad de nitrgeno en substancias conteniendo sales de amonio,
nitratos y compuestos orgnicos. El mtodo consta de tres fases:
I. Digestin en cido para convertir los grupos amino de las protenas y amino-cidos en
amoniaco
+
II. Conversin de los iones de amoniaco (NH4 ) en gas de amonia (NH3), se destilan y luego se
vuelven a convertir en iones de amoniaco en una solucin cida fijadora.
III. Finalmente, la cantidad de iones de amoniaco atrapados es determinada por medio de una
titulacin con una solucin estndar y se calcula.
Muestra con
Nitrgeno
I. Digestin en
cido
Componentes oxidados:
CO2, H2O, SO42-, PO43Amonia (NH3) atrapada como
(NH4)2SO4
Atrapar NH3 con

cido: NH4+
II. Destilacin:
NH3 se volatiliza
III. Titulacin
con NaOH
Neutralizacin con NaOH

para convertir NH4+ en NH3
Clculo del cido no utilizado

en la reaccin con amonia
55
Diagrama de un aparato de Kjeldahl sencillo donde se observan las primeras dos fases del
proceso:
Paso I: Digestin cida de la muestra con nitrgeno produciendo amoniaco
Paso II: Destilacin para separar el amonio vaporizado y atraparlo en el matraz
Erlenmeyer con un cido
Paso III: Finalmente se lleva acabo la titulacin (no se muestra).
56
Paso Uno: Digestin de la muestra en cido
1. Se pesa una muestra exacta : 0.5g a 3g, dependiendo de la cantidad de nitrgeno en la

muestra
2. Se trata con cido sulfrico (H2SO4 concentrado: 1.25%) en un matraz abierto (Matraz
Kjeldahl) con ventilacin (Aparato de Kjeldahl)
3. Se utiliza un catalizador (Ej.: Se, Hg, Cu o Ti) para acelerar la reaccin y reducir la energa
de activacin de la reaccin
4. La temperatura de la reaccin est limitada por el punto de ebullicin del cido sulfrico
(normal 290 C). Se puede incrementar la temperatura agregando sulfato de sodio o de
potasio (a ms de 370 C!)
5. Se calienta la mezcla hasta que se liberan humo blanco y se continua durante de 60 a 90
minutos.
6. Se enfra el frasco adicionando cuidadosamente 200 ml de agua destilada
7. Los compuestos orgnicos se oxidan y se eliminan, mientras que el nitrgeno de la
muestra se convierte en sulfato de amonio:
8. Este mtodo puede utilizarse para el anlisis de fsforo, arsnico y metales en

compuestos orgnicos.
Paso Dos: Destilacin
El propsito de este paso es separar la amonia (es decir, el nitrgeno)
de la mezcla de la digestin
9. Despus de la reaccin con cido sulfrico queda el nitrgeno en forma

de sulfato de amonio (NH4)2SO4. Al agregarse una base fuerte (NaOH al 45%) se
+
neutraliza el cido sulfrico (se eleva el pH) y el amoniaco (NH 4 ) lquido se convierte en
amonia (NH3) en forma gaseosa.
10. La amonia es voltil y se libera por medio de una destilacin. Se destila el contenido del
matraz de Kjeldahl en un vaso con un cido fijador hasta que se recupera la amonia: el
cido atrapa la amonia en forma de amoniaco
a. Si se utiliza un cido fuerte (Ej.: H2SO4, HCl, etc.) se debe medir exactamente la
cantidad del cido y posteriormente se titula con una base:
57
H2SO4 + 2 NH3 SO4 + 2 H + 2 NH3 2 NH4 + SO4
b. Si se utiliza una cido dbil (Ej.: cido Brico: H 3BO3) no es necesario medir la
cantidad exacta pero luego se debe titular con un cido y no con una base!!
-
H2BO3 + H + NH3 NH4 + H2BO3

Paso Tres: Titulacin
La amonia se disuelve en el frasco con cido, neutralizando parte

del mismo. El cido queda sin neutralizar servir para la titulacin, usando
una base de concentracin conocida. De esta forma se puede calcular la
cantidad de amonia destilada y por lo tanto tambin la cantidad de
nitrgenos en la protena.
11. La siguiente fase es la titulacin del cido utilizado para atrapar la

amonia.
12. Se adiciona un indicador de pH a la mezcla de cido y amoniaco. Se recomienda verde de
bromocresol, que tien un cambio de color en el rango de pH neutro.
13. Se introduce una solucin valorada de hidrxido de sodio (NaOH) de concentracin
conocida (0.1N) en la bureta para la titulacin. Se deja pasar poco a poco la solucin de la
bureta a la mezcla de cido y amoniaco con el indicador de pH
14. Se mezcla hasta que haya un cambio sostenido de color, lo que indica que se alcanzo el
punto de neutralizacin. Ver las reacciones qumcias
a. El cido fuerte que no se utiliz en el proceso de atrapar la amonia se titula con
una base de concentracin conocida (NaOH 0.1N)
+
2-
X H2SO4 + Y NH3 Y NH4 + Y SO4 + X-Y H2SO4

X-Y H2SO4 + z NaOH z/2 Na2SO4 + z H2O
b. El cido dbil que no se utiliz para atrapar la amonia se titula con un cido
fuerte de conocida concentracin (Ej.:HCl 0.1N)
+
NH4 + H2BO3 + HCl NH4Cl + H3BO4

Clculos :
Los clculos que se requiere hacer se basan en
que un mol de amonia proveniente de la mezcla
digestiva (y por lo tanto de la protena original) va
a neutralizar exactamente un mol de cido en la
solucin fijadora.
La cantidad de cido no utilizado se puede
conocer al titular la muestra, por lo que la
frmula matemtica bsica es:
58
Total de moles
de cido en el
frasco receptor
Menos
Moles de cido
no utilizados en
la formacin de
+
NH4
(= base, NaOH,
usada
en
titulacin)
es igual
Moles
de
amonia, NH3, en
la
solucin
destilada
(= nitrgeno en
muestra)
Para esto se llevaran a cabo tres clculos:

a. Calcular la cantidad de moles de amonia que se produjeron y que quedaron fijados
b. Calcular el porcentaje de nitrgeno dentro de la muestra
c. Calcular el porcentaje de protena en la muestra
15. El clculo que se requiere hacer primero es determinar cuntos moles de cido haba en
la solucin fijadora antes que la amonia fuera atrapada. Se multiplica la molaridad del
cido por el volumen de la solucin:
Moles de cido = molaridad del cido X volumen usado en el frasco (molesA = M x V)
16. Se calcula el nmero de moles de NaOH utilizados para neutralizar los cidos restantes
(que no se utilizaron para neutralizar al amoniaco.
Moles de base = molaridad de la base X volumen adicionada de la bureta (molesB = M x V)
17. Se sustrae el nmero de moles de base del nmero de moles de cido presentes al
principio (antes de fijar la amonia) para obtener el numero de moles de cido que
neutralizaron la amonia:
Moles de cido usado = moles de cido al inicio (antes de fijar) moles de base usada en la
titulacin
18. El valor obtenido (moles de cido usado) es lo mismo que el nmero de moles de
amonia fijados como amoniaco
19. El nmero de moles de amonia es lo mismo que el nmero de moles de nitrgeno (la
amonia tiene un slo nitrgeno)
20. Para calcular el numero de gramos de nitrgeno en la muestra original de protena se
debe multiplicar los moles de nitrgeno por la masa atmica del nitrgeno:
Gramos de Nitrgeno = moles de nitrgeno x masa atmica (1 mol = 14.0067gA)
21. Para calcular porcentaje de nitrgeno en la muestra inicial se debe dividir los gramos de
nitgeno en la muestra entre los gramos de muestra inicial multiplicado por 100:
%Nitrgeno = (g N / g Muestra ) x 100
22. Para conocer el porcentaje de Protena Cruda se debe multiplicar el porcentaje de
nitrgeno de la muestra por un factor de conversin, generalmente 6.25, aunque hay
diferencias entre las diferentes muestras:
PC = %N x 6.25
59
Protena cruda por mtodo Dumas (AOAC, 968.06)

El Mtodo Dumas de combustin interna se realiza con el equipo Leco FP 528. (ver Manual de
procedimientos FP-528 Protein / Nitrogen Determinator.
Principio: El nitrgeno es liberado por pirolisis y subsiguiente combustin y acarreada por CO 2 al

nitro metro. El CO2 es absorbido en KOH y el nitrgeno es medido y convertido a equivalente de
protena por un factor numrico de conversin.
Figura 7.1. Aparato de determinacin de nitrgeno Leco FP-528

El profesional en formacin a travs del conocimiento adquirido en la teora del curso, ser capaz
de realizar las tcnicas para determinar nitrgeno y calcular la protena bruta o cruda en los
alimentos, comparar los resultados y la eficiencia del equipo Leco FP 528.
los anlisis.
obtenidos.

Tipo de peligro
Como evitarlo
Como proceder en
Por el mtodo Kjeldahl es ms peligroso El profesor ser el encargado de

en virtud de que se realizan digestiones, realizar en forma demostrativa una
60
destilaciones y titulacin y se usan determinacin.

reactivos concentrados, y el grupo es
numeroso pro lo que se requiere seguir
los reglamentos de seguridad vigentes.

A. Macro-Kjeldahl.
Material:
Aparato de digestin y destilacin Macro-Kjeldahl.
2 matraces Kjeldahl de 800 ml
2 Matraces Erlenmeyer de 500 ml.
2 Buretas de 50 ml.
Reactivos:
Solucin indicadora de nitrgeno.
Solucin valorada de cido sulfrico (0.1 N)
Solucin valorada de hidrxido de sodio a una normalidad conocida
cido sulfrico concentrado grado reactivo
Catalizador (selenio)
Granalla de zinc o piedras de ebullicin
Muestra a analizar, la cual tendremos parcialmente seca y el resultado ser reportado en BMS
(base materia seca)
B. Material para el mtodo de combustin interna Dumas.

Helio cromatogrfico, bixido de carbono, oxgeno. Estndar de calibracin marca LECO.
Metodologa
A. Tcnica de Macro-Kjeldahl
Procedimientos:
1. Pesar de 0.5 a 1 g de muestra, sobre un papel libre de nitrgeno de preferencia blanco, y
colocarlo todo junto en el matraz Kjeldahl y en otro matraz colocar un papel sin muestra.
ste ser nuestro blanco.
2. Agregar 25 ml de cido sulfrico concentrado (1.25%???).
3. Agregar el catalizador una pequea cucharadita, junto con 5 piedras de ebullicin.
4. Colocar el matraz con su contenido en la parrilla del digestor, encender el extractor y la
parrilla.
5. Cuando la solucin adquiera la coloracin transparente, suspender el calentamiento y
dejar enfriar por un perodo aproximado de 30 minutos. Manteniendo el extractor
encendido para eliminar los gases.
6. Adicionar lentamente y por las paredes del matraz 250 ml de agua destilada antes de que
el residuo digerido se solidifique y despus djelo enfriar a una temperatura inferior a 25
oC.
61
7. Por otro lado agregar 50 ml de H2SO4 de normalidad conocida a un matraz en el que

recibiremos el destilado + 4 gotas de indicador de nitrgeno.
8. Al matraz K que est en condiciones del punto nmero f, inclinarlo y adicionar
lentamente por las paredes 100 ml de hidrxido de sodio al 45 % de tal manera que se
formen 2 capas.
9. Conectar el matraz K al refrigerante del destilador, iniciar el calentamiento.
10. Destilar aproximadamente unas dos terceras partes del contenido del matraz Kjeldahl o
hasta que se hayan recolectado 250 ml en el matraz Erlenmeyer.
11. Retirar el matraz Erlenmeyer antes de apagar la parrilla para evitar sifoneo, enjuagar con
una piseta el extremo del tubo colector recibiendo el agua de lavado en el matraz
Erlenmeyer.
12. Titular el destilado con hidrxido de sodio a normalidad conocida. Se anota el volumen
gastado de hidrxido de sodio normalidad conocida.
Frmulas:
% N = (ml gastados en la titulacin- ml gastados en el problema) * (N) * (Meq.
N)*(100)
gr. de muestra=
% PC= % N x 6.25
mEq. N= .014007
6.25= Factor de nitrgeno convencional para convertir el nitrgeno a protenas de cualquier
material excepto para trigo y subproductos que su factor es 5.7. Para la leche y sus subproductos
es 6.38
B. Mtodo Dumas de combustin interna con el equipo Leco FP 528.

Usando el manual de procedimientos FP-528 Protein / Nitrogen Determinator
Procedimiento:
1.- Se verifica las condiciones de los gases, temperaturas en el ambiente de monitor.
2.- Se corrieron 6 blancos. Usando el men anlisis en el inciso insertar blancos, con el fin de
eliminar ruido por el nitrgeno ambiental.
3.- Se calibra con 5 estndares de EDTA marca LECO.
4.- Se pesan por triplicado 0.16 gr. de muestra en un papel de estao, con la cual se hacen
paquetes tipo kiss. En el men principal anlisis con la tecla Selec., se introduce el peso de
muestra, y el factor de conversin, la identificacin de la muestra, y se introduce la muestra
envuelta en estao a loading heat se presiona la tecla next y star 2 veces. El tiempo de
anlisis es en promedio 2 minutos.
5.- Para las repeticiones se siguen los pasos a partir del punto 3 por ultimo en el men
resultados se selecciona la opcin estadstica obtenemos el promedio y la desviacin.
PROGRAMA DE ACTIVIDADES.
Los equipos trabajarn en forma coordinada para que sea una sola persona la que pese al inicio y
al final. Todos y cada uno deben tomar sus propias notas.
Dinmica utilizada.
En el laboratorio bajo la asesora del profesor, realizar la determinacin de nitrgeno (protena
cruda) cruda usando el equipo de combustin interna Dumas.
62
El alumno portara el manual de prcticas al momento de la prctica, mismo que habr ledo
previamente, el cual ser firmada por el profesor como medida de que ya ley y entendi la
prctica y verificativo de asistencia.
Los resultados y notas de la prctica sern revisados en la siguiente sesin y se les estampar la
firma del profesor y fecha, mismos que se anexarn al reporte de la prctica, en caso de no
incluirlos la prctica no ser vlida.
Para saber ms.
En qu se basa el mtodo de digestibilidad de las protenas y en que caso se recomienda.

Qu es el nitrgeno verdadero.
Qu es el nitrgeno no proteico.
Qu mtodo se usa para determinar urea en alimentos en forma cualitativa.
Estndar de calibracin.
Cuestionario
63

PRCTICA 8
Determinacin de cenizas o materia inorgnica.
64
Prctica 8: Determinacin de cenizas o materia inorgnica.

Introduccin.
Determinacin de Cenizas Totales y Materia Orgnica
Fundamento. Esta determinacin se basa en someter la muestra de alimento a combustin

entre 500 y 600 C La materia orgnica es oxidada, y al residuo que contiene la materia mineral se
le llama cenizas.
Muestra
600 C
(Materia Orgnica e Inorg.)
+ O2
----------> CO2 + H2O + materia inorgnica (cenizas)

de realizar las tcnicas para determinar cenizas y mediante clculo el contenido de materia
orgnica
los anlisis.
Cuando tenga la habilidad de buscar la informacin necesaria para realizar la interpretacin de los
resultados obtenidos.
obtenidos.

Tipo de peligro
Como evitarlo

de un accidente.
Quemadura en las manos o Usar pinzas largas para tomar Lavar la superficie quemada y
irritacin de la cara.
los crisoles e introducirlos a la aplicarse
pomada
para
mufla, cuando la mufla este quemaduras.
caliente abrirla y permanecer
en un lateral, de tal forma que
el calor no nos irrite la cara.
Notificar cualquier incidente al profesor.
65
Crisoles de porcelana (peso constante).

Mufla.
Pinzas cortas y largas.
Desecador
Balanza analtica.
Muestra.
Metodologa

Muestra
ID
A. Peso
Crisol
B. Peso
Crisol +
Muestra
Clculos
Ej. 8.1
C. Peso
Inicial
(Pi)
Pi = B A
D. Peso
Crisol +
Muestra
seca
E.
Peso
Final
(Pf)
Pf =
DA
F.
%DMS
G.
%MSP
= Pf / Pi
x 100
H.
%DMS100
= %MS
94.50
Para saber ms.

Cuales mtodos son los empleados para determinar la cuantificaron de los minerales (macro y
micro).
Cuales son los macro minerales.
Cuales son el micro mineral.
Que importancia tiene la determinacin de los mismos en los alimentos para el ganado.
Que es absorcin atmica.
Cenizas digestibles.
Sinnimo de cenizas.
Cuestionario
66

PRCTICA 9
Integracin de los resultados del anlisis qumico proximal.
67
Prctica 9: Extracto Libre de Nitrgeno e integracin de los resultados

del Anlisis Qumico Proximal.
Introduccin.
El Sistema Weende o Anlisis Qumico Proximal. Este sistema de anlisis es un conjunto de
determinaciones de laboratorio que pretende evaluar en forma global cada grupo de los nutrientes
que contienen un alimento.
Consta de las siguientes determinaciones: humedad, extracto etreo, fibra cruda, extracto libre de
nitrgeno, protena cruda y ceniza. Este sistema fue establecido hace ms de 110 aos en la
estacin experimental de Weende Alemania.
Composicin de los alimentos segn el AQP.
Figura 9.1 Composicin de los alimentos y flujograma para su anlisis qumico proximal (AQP o
Weende).
El siguiente cuadro seala los componentes de cada determinacin y el grupo del nutriente al cual
pertenece. Todas las determinaciones excepto la humedad pueden contener ms de un
compuesto qumico.
Cuadro 9.1 Composicin de las diferentes determinaciones del anlisis qumico proximal
(McDonald, 1973)
68
Nutriente
Determinacin
Compuestos qumicos incluidos
Agua
Humedad
Agua
Lpidos
Extracto Etreo
Carbohidratos
Fibra cruda
Grasas,
aceites,
ceras,
fosftidos,
lipoprotenas, pigmentos liposolubles,
vitaminas liposolubles
Celulosa, hemicelulosa y lignina
Extracto libre
nitrgeno
Protenas
Protena cruda
Minerales
Cenizas
de
cerebrsidos,
esteroides y
Monosacridos,
disacridos,
trisacridos,
pectinas,
almidones, resinas, cidos orgnicos hidrosolubles y
vitaminas hidrosolubles.
Protenas,
aminocidos,
compuestos
orgnicos
nitrogenados no proteicos as como aminas, vitaminas del
complejo B, cidos nucleicos, glucsidos nitrogenados;
clorofilas, compuestos inorgnicos nitrogenados como las
sales de amonio hidrxido de amonio, amoniaco, nitratos y
nitritos.
Compuestos de Ca, K, Mg, Na, P, Fe, Zn, Mo, Se, Si y
otros.
Limitaciones del AQP.

Las determinaciones de este sistema que poseen errores fundamentales son la fibra cruda y por
consecuencia el valor derivado por diferencia: el extracto libre de nitrgeno. En 1806, Henneberg y
Stohmann, atribuyeron a Einhof el haber establecido el mtodo de obtencin de fibra empleando
extracciones con cido diluido y lcali diluido, sin embargo, Einhof no menciona este mtodo en
sus trabajos (citado por Van Soest, 1977) lo que s es indudable, es que al menos desde 1806,
apareci citado el actual mtodo para la determinacin de fibra cruda.
La crtica al mtodo se basa en que parte de los compuestos que constituyen la fibra, son
disueltos en el tratamiento cido y por otra parte esos compuestos son disueltos en el alcalino, por
lo tanto este mtodo no puede medir el contenido real de la fibra que posee el alimento.
La fibra era considerada como la porcin indigestible de los alimentos, hasta que se descubri la
digestibilidad y se encontr que en los rumiantes, la fibra posee un valor de digestibilidad;
tampoco es posible considerar a la fibra cruda como una entidad qumica presente en el alimento,
puesto que como ya se mencion, el mtodo no permite medir en su totalidad la fibra, por los
errores en el fundamento de la metodologa.
Van Soest (1963) public una alternativa para la determinacin de fibra en los forrajes,
lamentablemente el mtodo no poda ser aplicado a aquellos alimentos con alto contenido de
almidones. El mismo autor en 1978, dio a conocer una modificacin de su mtodo original por
medio de la cual se puede medir la fibra de cualquier alimento.
El anlisis proximal no dice cuales compuestos y cuantos de cada uno de ellos contiene cada
determinacin, esta es otra de sus limitantes, pero que puede ser superada en gran parte,
empleando otros mtodos.

de realizar un reporte con el Anlisis Qumico Proximal completo y hacer indicaciones a cerca de
la calidad de dicho alimento o ingrediente. Si fuera un ingrediente nuevo pudiera ubicarlo dentro
de la clasificacin de la NRC, convertir sus valores a las diferentes bases y predecir en base a su
% de humedad la vida de anaquel e incluso el precio del mismo.
69
los anlisis.
Los profesionales en formacin sern capaces de interpretar los resultados obtenidos.
Identificara la limitante del anlisis y su importancia para la evaluacin de los alimentos usados
para la alimentacin de los animales.
Evaluacin de los datos obtenidos comparados contra los de tablas y literatura.

Tipo de peligro
Como evitarlo
No aplica
No aplica.

de un accidente.
No aplica.
Metodologa
Los equipos trabajarn en forma coordinada para realizar observaciones y complementar los
datos de los compaeros.
Todos y cada uno deben tomar sus propias notas.
Dinmica utilizada.
Esta prctica se realizar en el saln de clases, pasar al pizarrn equipo por equipo y presentar
la interpretacin de los anlisis.
El alumno portar el manual de prcticas al momento de la prctica, mismo que habr ledo
previamente, y har una presentacin tipo comercial de los ingredientes analizados, de tal forma
que d una amplia informacin de sus productos e interprete los anlisis y al mismo tiempo
sustente la defensa de los mismos.
Entregar un reporte escrito de esta prctica antes de iniciar la presentacin.

Pizarrn.
Can y Laptop.
Pster.
Materiales que traigan los participantes para exponer sus productos .
70
Para saber ms.

Historia y usos de los ingredientes usados en el ganado.
Qu es el mijo, por qu es ms usado el sorgo que el mijo en Mxico.
Ingrediente
Insumo
Materia prima
Ensilado
Aditivos en la alimentacin
Grasas de sobrepaso
Protenas de sobrepaso
Grasas protegidas
Cuestionario
71
Parte IV. Componentes de la Pared Celular o Anlisis de

Van Soest
Prctica 10
Prctica 11
Prctica 12
Prctica 13
Determinacin de FDN
Animal
Determinacin de FDA
Animal
Determinacin de Lignina Laboratorio de Nutricin
Animal
Integracin
de
los Saln de clases.
fracciones de fibra
4 horas /
semana 10
4 horas /
semana 11
4 horas /
semana 11
2 horas /
semana 12.
Figura
72

PRCTICA 10
Determinacin de Fibra Detergente Neutra (FDN).
M en C. Ma. Guadalupe Acero G.
73
Breve introduccin al estudio de los componentes de la pared celular
Composicin de la Clula Vegetal

La Clula Vegetal
Las Plantas y su
Pared Celular
Caractersticas
Evolucin
Las clulas vegetales presentan una pared celular que

les da firmeza, lo cual le quita a la planta la necesidad
de un esqueleto adicional como en los animales.
Esta pared se conforma de complejos ligno-celulsicos
de baja digestibilidad.
Las plantas evolucionaron de organismos unicelulares
acuticos con capacidad de fotosntesis
Diversidad
Anlisis de los
componentes
de la pared
celular
Figura 2.
Diagrama de
clula vegetal
Organelos de
clula vegetal
la
la
Organelo
Ncleo
Nucleolo
Membrana
nuclear
Membrana
celular
Pared celular
Funcin
Almacn de informacin gentica en forma de DNA
Controla la actividad dentro del ncleo
Separa el ncleo del citoplasma, contiene poros para
el paso del RNAm
Doble capa de fosfolpidos con protenas receptoras y
de transporte
Capas de celulosa estructurada por filamentos de
hemicelulosa y lignina
Citoplasma
Amiloplasto
Vacuola Central
Lquido intracelular. Tienen caractersticas de gel

Vacuolas con reserva energtica de almidn
Gran vacuola con contenido de agua y pigmentos, da
reserva de agua a la clula
Organelos que dirigen el proceso de mitosis
Sntesis de las cadenas lineares de amino cidos
(estructura primaria de las protenas)
Formacin de la estructura cuaternaria de las
protenas
Centrosomas
Ribosomas
Retculo
Endoplsmico
Rugoso
(RER)
74
Retculo
Endoplsmico
Liso
(REL)
Aparato
de
Golgi
Cloroplasto
Mitocondria
Fotosntesis
Reaccin en el
cloroplasto
Reaccin en la
mitocondria
Funciones
celulares
Sntesis de lpidos, reserva de calcio
Empaquetamiento de producto y formacin de

vesculas
Organelo encargado de la fotosntesis. Posblemente
se trata de una alga primitiva que qued atrapada en
una clula vegetal y ahora tiene una relacin
simbionte:
Organelo encargado de la produccin de energa en
forma de ATP
Proceso de captacin de energa solar para la sntesis
de carbohidratos. Se compone de dos fases: lumnica
y oscura
6 H2O + 6 CO2 C6H12O6 + 6 O2
C6H12O6 + 6 O2 6 H2O + 6 CO2
Homeostasis
Balance hdrico
Energa
Sntesis
proteica
Reproduccin
Defensa
Asimilacin
Excrecin
La Pared Vegetal
Funciones
de
la
Pared
Vegetal
75
Diagramas
de
la
Pared
celular
vegetal
Imagen
de
una
clula
vegetal
Esquema de
la
pared
vegetal
Esquema de
las
microfibrillas
de celulosa
Enlaces
-1-4
glicosdicos
76
Puentes
de
hidrgeno
entre
las
cadenas
de
celulosa
Pared primaria
y
pared
secundaria
Celulosa
cristalina
celulosa
amorfa
77
Estructura de
la celulosa
Celobiosa
Celulosa
Celulosa
cristalina
Hemicelulosa
Estructuras de
la
celulosa,
hemicelulosa y
pectinas
Estructura
la Lignina
de
Fig. 3: The three common monolignols:

paracoumaryl alcohol (1), coniferyl alcohol (2) and sinapyl
alcohol (3)
Caractersticas
La palabra lignina proviene del trmino latino lignum, que
78
de la lignina
significa madera; as, a las plantas que contienen gran cantidad

de lignina se las denomina leosas.
La molcula de lignina presenta un elevado peso molecular, que
resulta de la unin de varios cidos y alcoholes fenilproplicos
(cumarlico, coniferlico y sinaplico). El acoplamiento aleatorio
de estos radicales da origen a una estructura tridimensional,
polmero amorfo, caracterstico de la lignina.
La lignina es el polmero natural ms complejo en relacin a su
estructura y heterogeneidad. Por esta razn no es posible
describir una estructura definida de la lignina; sin embargo, se
han propuesto numerosos modelos que representan su
estructura
79
Degradacin
de la celulosa
Estructuras
de la pared
celular
Pared primaria
Lamela
Pared
secundaria
Membrana
celular
80
Prctica 10. Determinacin de Fibra Detergente Neutra (FDN).

Introduccin.
El procedimiento del detergente neutro para determinar los componentes de la pared celular es un
mtodo rpido para fibra total en alimentos fibrosos vegetales. Este mtodo no se aplica a
materiales altos en protenas y bajos en fibra.

de realizar la tcnica de fibra detergente neutra en los alimentos e interpretar la calidad del mismo
y su implicacin en la alimentacin y nutricin de los animales domsticos.
los anlisis.
Y sea capaz de explicar su calidad nutritiva.
obtenidos.
Identificar la importancia para la evaluacin de los forrajes.
a) Cuadro de deteccin de riesgos.

Tipo de peligro
Como evitarlo
Sufrir alguna quemadura con vapor
de agua al momento de abrir las
vlvulas de salida del equipo
ANKOM
Como proceder en
El profesor ser el encargado de Lavar la piel con abundante

manejar el equipo ANKOM y agua.
mostrarles las formas de manejarlo
adecuadamente
Notificar cualquier incidente al profesor.

Bolsas de Filtracin (Filter Bags F57, ANKOM Technology)
Desecador.
81
Reactivos.
Solucin detergente neutro
Alfa-amilasa resistente al calor
Acetona grado reactivo libre de color
Metodologa
Preparacin de las bolsas de filtracin.
1. Pesar las bolsas de filtracin en balanza analtica.(W1).
2. Pesar directamente en la bolsa de filtracin 0.5 g de muestra (W2), de tamao de partcula
1 mm. Pesar un blanco con una bolsa vaca incluirla en la digestin para determinar la
correccin de bolsa (C1).
3. Sellar la bolsa a una distancia de 0.5 cm. De la abertura.
4. Acomodar la muestra uniformemente dentro de la bolsa.
5. Si la muestra contiene grasa se recomienda colocar las bolsas con muestra en un frasco
con 500 ml de acetona, agitando el frasco 10 veces dejar reposar 10 minutos. Repetir el
procedimiento con acetona nueva el procedimiento. Y posteriormente sacar las bolsas de
la acetona y ponerlas al aire durante 5 minutos para eliminar el residuo.
6. Colocar las 24 bolsas en las 8 charolas del suspensor de bolsas (tray), colocando 3
bolsas por charola acomodadas a 120 grados, en relacin uno con otra. La charola 9 se
deja libre y acta como el tope de la charola 8. Acomodar el tray dentro de la cmara del
equipo.
7. Adicionar 1900 a 2000 ml de la solucin de neutro detergente y 4 ml de alfa amilasa
resistente al calor, acomode el contrapeso y cierre, programe el tiempo de digestin 75
minutos, encienda agitacin y calentamiento y Start para iniciar.
8. Transcurrido el tiempo se apaga la agitacin y calentamiento. Se abre la vlvula de salida
de la solucin caliente para reducir la presin interna. Y se abre la parte superior de la
cmara. Se vuelve a cerrar la vlvula de salida, se agregan 1900 a 2000 ml de agua
caliente (90 a 100 C) encienda agitacin durante 3 a 5 minutos, se abre la vlvula de
salida de lquido y se repite este procedimiento 3 veces.
9. Retirar las bolsas de las charolas y presiona ligeramente para eliminar l lquido que haya
quedado atrapado, sumerja durante 3 minutos las bolsas en un vaso de precipitado de
500 con 250 ml acetona, remueva las bolsas y elimine el exceso. Deje secar a la
intemperie para eliminar la acetona.
10. Ms tarde para secar las bolsas se somete la muestra a 100C durante 2 a 4 horas,
enfriar en el desecador y pesar este peso corresponder al (W3).
11. Colocar la bolsa en un crisol que este a peso constante, y calcinar durante 2 horas a 550
C, enfriar en un desecador y pesar (W4)
NDF base tal cual = (W3 (W1 X C1)) X 100/ W2
NFD base materia seca = (W3 (W1 X C1)) X 100/ W2 X %materia seca
NDF en base materia seca de la materia orgnica =....
= (W4 (W1 X C2)) X 100/ W2 X DM
W1 = peso de la bolsa sola.
W2 = peso de la muestra.
W3 = peso de la bolsa con la fibra digerida.
W4 = peso de la bolsa con la fibra digerida y calcinada.
W5 = peso de la materia orgnica (M0) =W3- W4
82
C2 = cenizas corregidas de la bolsa (blanco).

DM = % materia seca.
Para saber ms.

Qu porciones de la fibra estn contenidas en la FDN.
Qu porciones de la fibra estn contenidas en la FDA.
Qu es la lignina y qu utilidad tiene.
Cmo se puedo determinar la Hemicelulosa. Y qu utilidad tiene en la alimentacin del ganado.
En sus revisiones de literatura anote y explique cuales palabras encontraron que no sean
comunes para usted.
83

PRCTICA 10
Determinacin de Fibra Detergente cida (FDA).
84
Prctica 11: Determinacin de Fibra Detergente cida (FDA).

Introduccin.
Este mtodo permite una rpida determinacin de la proporcin de lignina y celulosa con respecto
al contenido de la fraccin de la pared celular de los forrajes. Se trabaja a partir de la muestra de
FDN realizada en la prctica anterior (Prctica 10).
La diferencia entre el valor de las paredes celulares (FDN) y la fibra cida detergente (FDA), da
una estimacin del valor de la Hemicelulosa, si bien no es exacto, ya que esta diferencia tambin
incluye una fraccin de protena adherida a las paredes celulares. El mtodo de fibra detergente
cido tambin se emplea como paso preliminar en la determinacin de la lignina.

de realizar la tcnica de determinacin de lignina a partir de la muestra de fibra cido detergente
en los alimentos e interpretar la calidad del mismo y su implicacin en la alimentacin y nutricin
de los animales domsticos.
los anlisis.
Y sea capaz de explicar calidad nutritiva de los recursos forrajeros.
obtenidos.

Tipo de peligro
Como evitarlo

de un accidente.
Sufrir alguna quemadura con El profesor ser el encargado de Lavar la piel con abundante
vapor de agua al momento de manejar el equipo ANKOM y agua.
abrir las vlvulas de salida del mostrarles las formas de manejarlo
equipo ANKOM.
adecuadamente.

Bolsas de Filtracin ANKOM Technology F57 Filter Bags
Desecador
Reactivos.
Solucin de detergente cido:
cido sulfrico 1N
85
Metodologa
A. Determinacin de FDA en el Digestor de Fibras ANKOM

Utilizar las bolsas de filtracin con el residuo FDN
1. Colocar las 24 bolsas en las 8 charolas del suspensor de bolsas ( tray), colocando 3
bolsas por charola acomodadas a 120 grados, en relacin una con otra. La charola 9 se
deja libre y acta como el tope del charola 8. Acomodar el tray dentro de la cmara del
equipo.
2. Adicionar 1900 a 2000 ml de la solucin de cido sulfrico 72%, acomode el contrapeso y
cierre, programe el tiempo de digestin 60 minutos, encienda agitacin y calentamiento y
Start para iniciar.
de la solucin caliente para reducir la presin interna, esperar a que salga la solucin
lentamente. Unicamente despus se puede abrir la parte superior de la cmara.
4. Se vuelve a cerrar la vlvula de salida, se agregan 1900 a 2000 ml de agua caliente (90 a
100 C) encienda agitacin durante 3 a 5 minutos, se abre la vlvula de salida de lquido y
se repite este procedimiento 3 veces.
5. Retirar las bolsas de las charolas y presiona ligeramente para eliminar el lquido que haya
6. Ms tarde, para secar las bolsas, se somete la muestra a 100C durante 2 a 4 horas,
7. Enfriar en el desecador y pesar; este peso corresponder al (W3).
8. Colocar la bolsa en un crisol que este a peso constante, y calcinar durante 2 horas a
550C, enfriar en un desecador y pesar (W4)
Frmulas:
ADF tal cual = (W3 (W1 X C1)) X 100/ W2
ADF base materia seca = (W3 (W1 X C1)) X 100/ W2 X %materia seca
ADF en base materia seca de la materia orgnica =....
= (W4 (W1 X C2)) X 100/ W2 X DM
DM = materia seca.
86
Para saber ms.

Qu es la lignina y que utilidad tiene.
Cmo se puede determinar la Hemicelulosa, y qu utilidad tiene en la alimentacin del ganado.
En sus revisiones de literatura anote y explique cuales palabras encontr que no sean comunes
para usted.
87
PRCTICA 11
Determinacin de Lignina
88
Prctica 12: Determinacin de Lignina

Introduccin.
Este mtodo permite una rpida determinacin de la proporcin de lignina con respecto al
contenido de la fraccin de lignocelulosa en los alimentos. Se trabaja a partir de la muestra de
FDA realizada en la prctica anterior (Prctica 11). La FDA contiene lignina, celulosa, algunas
protenas insolubles, minerales y silicio.
La lignina es un polisacrido compuesto de la unin de varios tipos de cidos y alcoholes
fenilproplicos
Dentro de los alcoholes fenilproplicos, los ms comunes son el cumarlico, el coniferlico y el

sinaplico, los cuales se entrelazan para formar estructuras complejas
89
Sin embargo, en esta fraccin tambin aparece el silicio. La diferencia entre el valor de las
paredes celulares y la fibra cida detergente, da una estimacin del valor de la Hemicelulosa, ya
que esta diferencia tambin incluye una fraccin de protena adherida a las paredes celulares. El
mtodo de fibra detergente cido tambin se emplea como paso preliminar en la determinacin de
la lignina.

de realizar la tcnica de determinacin de lignina a partir de la muestra de fibra cido detergente
los anlisis.
obtenidos.
90

Tipo de peligro
Como evitarlo

de un accidente.
equipo ANKOM.
adecuadamente.

Desecador
Reactivos.
Solucin de cido sulfrico al 72%
Metodologa
A. Determinacin de Lignina en el Digestor de Fibras ANKOM

Utilizar las bolsas de filtracin con el residuo FDA
1. Colocar las 24 bolsas en las 8 charolas del suspensor de bolsas ( tray), colocando 3
bolsas por charola acomodadas a 120 grados, en relacin una con otra. La charola 9 se
deja libre y acta como el tope de la charola. Acomodar el tray dentro de la cmara del
equipo.
2. Adicionar 1900 a 2000 ml de la solucin de cido sulfrico 72%, acomode el contrapeso y
cierre, programe el tiempo de digestin 60 minutos, encienda agitacin y calentamiento y
Start para iniciar.
de la solucin caliente para reducir la presin interna. Y se abre la parte superior de la
cmara. Se vuelve a cerrar la vlvula de salida, se agregan 1900 a 2000 ml de agua
caliente (90 a 100 C) encienda agitacin durante 3 a 5 minutos, se abre la vlvula de
salida de lquido y se repite este procedimiento 3 veces.
4. Retirar las bolsas de las charolas y presiona ligeramente para eliminar el lquido que haya
5. Ms tarde, para secar las bolsas, se somete la muestra a 100C durante 2 a 4 horas,
6. Enfriar en el desecador y pesar; este peso corresponder al (W3).
7. Colocar la bolsa en un crisol que este a peso constante, y calcinar durante 2 horas a
550C, enfriar en un desecador y pesar (W4)
Frmulas:
91
Lignina tal cual = (W3 (W1 X C1)) X 100/ W2

Lignina base materia seca = (W3 (W1 X C1)) X 100/ W2 X %materia seca
Lignina en base materia seca de la materia orgnica =....
= (W4 (W1 X C2)) X 100/ W2 X DM
DM = materia seca.
Para saber ms.

para usted.
92

PRCTICA 12
Integracin de los resultados de las Fibras Detergentes Neutra (FDN)
y cida (FDA).
93
Integracin de los resultados del anlisis de fracciones de fibras.
2.- Nmero de alumnos por unidad de prctica.
Se realiza esta prctica en el saln de clases, se seguir trabajando en

equipo para defender o sustentar su criterio de evaluacin de los
ingredientes.
3.- Introduccin.
La fibra es el componente primordial de los forrajes, tiene importancia desde el punto de vista
fisiolgico y nutritivo. Ya que es indispensable para el funcionamiento del rumen, y posee
nutrientes que son parcialmente digeridos en el mismo rumen. Por lo tanto conocer su
composicin nos permite estimar el grado de aprovechamiento que tendr un forraje. Hay que
recordar que la clula vegetal difiere de la clula animal en que posee una pared celular, la cual
constituye la fibra, que est compuesta principalmente por celulosa, hemicelulosa y lignina. sta
fibra es prcticamente indigestible para los monogstricos y parcialmente digestible por los
rumiantes y otros herbvoros. La lignina es completamente indigestible y adems dificulta la
digestin de los otros componentes.
Fibra Detergente Neutro (FDN): una muestra de forraje se digiere en una solucin
que extrae todos los contenidos celulares, quedando las paredes celulares
(celulosa, hemicelulosa y lignina). Esta determinacin permite predecir el
consumo que tendrn los animales de ese alimento.
Fibra Detergente cido (FDA): en este caso la solucin extrae adems la
hemicelulosa, quedando nicamente la lignina y celulosa. Esta es la fraccin
menos digestible de la fibra y permite estimar la digestibilidad del forraje.
4.- Propsito especfico de la prctica.
de realizar un reporte con el anlisis de fracciones de fibras y hacer indicaciones a cerca de la
calidad de dicho recurso forrajero. Si fuera un ingrediente nuevo pudiera ubicarlo dentro de la
clasificacin de la NRC, convertir sus valores a las diferentes bases y predecir en base a sus
resultados el consumo de forrajes y su digestibilidad.
los anlisis.
Identificar la limitante del anlisis y su importancia para la evaluacin de los alimentos usados
Realizar bsquedas en el Internet para ver de acuerdo a las diferentes escuelas de nutricin
(USA, Europa, Cuba) cual es la tendencia de anlisis y prediccin de valor nutritivo de los forrajes.
94
5).- Normas de seguridad especficas para la prctica.

Tipo de peligro
Como evitarlo

de un accidente.
No aplica
No aplica.
No aplica.
6.-Desarrollo de la prctica
Dinmica utilizada.
Esta prctica se realizar en el saln de clases, pasar al pizarrn equipo por equipo y nos
presentar la interpretacin de los anlisis.
MATERIALES Y EQUIPOS UTILIZADOS.

Pizarrn.
Can y PC.
Pster.
8.- Bibliografa recomendada

Internet.
http://dels.nas.edu/banr/nut_req.shtml
Church y Pond. 2002. Fundamentos de nutricin y alimentacin de animales.
LIMUSA.
http://www.foragetesting.org/index.php
http://www.clemson.edu/agsrvlb/photo.htm
9.- Para saber ms.
Que es la para de sorgo.
Es bueno o malo el nopal como nutriente para los rumiantes.
El nopal forrajero cual es su principal nutriente.
Al alimentar a los bovinos con nopal cual es la recomendacin, cuando hay de proporcionarles y
por que causa heces liquidas.
10 - Glosario de trminos.
95
Incluir trmino en espaol o en ingls que sean nuevos en su vocabulario de profesional en

formacin en Medicina Veterinaria.
Prctica 13: Integracin de los resultados de los componentes de la

pared celular (Van Soest)
Introduccin.
El mtodo establecido por Van Soest permite
una rpida determinacin de la lignocelulosa en los alimentos. Sin embargo, en esta fraccin
tambin aparece el silicio. La diferencia entre el valor de las paredes celulares y la fibra cida
detergente, da una estimacin del valor de la Hemicelulosa, ya que esta diferencia tambin incluye
una fraccin de protena adherida a las paredes celulares. El mtodo de fibra detergente cido
tambin se emplea como paso preliminar en la determinacin de la lignina.

de realizar la tcnica de fibra cido detergente en los alimentos e interpretar la calidad del mismo y
su implicacin en la alimentacin y nutricin de los animales domsticos.
los anlisis.
obtenidos.

Tipo de peligro
Como evitarlo
No hay
NA

accidente.
NA

No se utilizan materiales ni equipos en esta prctica
No se utilizan Reactivos.
Metodologa
96
Para saber ms.

para usted.
97

PRCTICA 12
98
2.- Nmero de alumnos por unidad de prctica.
Se realiza esta prctica en el saln de clases, se seguir trabajando en

equipo para defender o sustentar su criterio de evaluacin de los
ingredientes.
3.- Introduccin.
La fibra es el componente primordial de los forrajes, tiene importancia desde el punto de vista
fisiolgico y nutritivo. Ya que es indispensable para el funcionamiento del rumen, y posee
nutrientes que son parcialmente digeridos en el mismo rumen. Por lo tanto conocer su
composicin nos permite estimar el grado de aprovechamiento que tendr un forraje. Hay que
recordar que la clula vegetal difiere de la clula animal en que posee una pared celular, la cual
constituye la fibra, que est compuesta principalmente por celulosa, hemicelulosa y lignina. sta
fibra es prcticamente indigestible para los monogstricos y parcialmente digestible por los
rumiantes y otros herbvoros. La lignina es completamente indigestible y adems dificulta la
digestin de los otros componentes.
Fibra Detergente Neutro (FDN): una muestra de forraje se digiere en una solucin
que extrae todos los contenidos celulares, quedando las paredes celulares
(celulosa, hemicelulosa y lignina). Esta determinacin permite predecir el
consumo que tendrn los animales de ese alimento.
Fibra Detergente cido (FDA): en este caso la solucin extrae adems la
hemicelulosa, quedando nicamente la lignina y celulosa. Esta es la fraccin
menos digestible de la fibra y permite estimar la digestibilidad del forraje.
los anlisis.
99

Tipo de peligro
Como evitarlo

de un accidente.
No aplica
No aplica.
No aplica.
Dinmica utilizada.

Pizarrn.
Can y PC.
Pster.
7.-Sistema de evaluacin
Los conocimientos y habilidades sern evaluados a travs de la presentacin. Las actitudes se
evaluarn a travs de la responsabilidad del alumno ante su prctica y su entorno. (Anexo 1 y 2)
Mtodo de asignacin de calificaciones.

Asistir a laboratorio y cumplir con las actividades es obligatorio para tener
5%
calificacin en cada prctica.
Lista de cotejo (Anexo 1)
5%
Entrega y calidad del reporte (Anexo 2)
5%
Presentacin de su seminario
5%
Nota: la calificacin y su ponderacin ser de acuerdo a lo estipulado en el plan de estudios.

Internet.
LIMUSA.
9.- Para saber ms.
100

101
Prctica 10
Prctica 11
Prctica 12
Prctica 13
Determinacin de FDN
Animal
Determinacin de FDA
Animal
Determinacin de Lignina Laboratorio de Nutricin
Animal
Integracin
de
los Saln de clases.
fracciones de fibra
4 horas /
semana 10
4 horas /
semana 11
4 horas /
semana 11
2 horas /
semana 12.
102
Parte V. Digestibilidad de los alimentos y bioenergtica

Prctica 14
Prctica 15
Prctica 16
Prctica 17
Prctica 18
Prctica 19
Prctica 20
Digestibilidad
de
Materia Seca in Situ
la Vacas fistuladas
Animal
Digestibilidad
de
la Laboratorio
de
Materia Seca in Vitro
Calorimetra
y Laboratorio de Nutricin
bioenergtica
Animal
Produccin de Gas
Laboratorio
de
Tilley&Terry Modificada
Laboratorio
de
RUSITEC
Laboratorio
de
Ranchos
Salidas
a
otras
explotaciones
4 Horas / semana
13
4 Horas / semana
14
2 Horas / semana
15
96
Horas
/
semana 15
48
Horas
/
semana 14
10-20
das
/
semana 15
4 horas/ semana
15
Introduccin a los estudios de digestibilidad y fermentacin ruminal

La calidad nutricia de los alimentos, tal y como es medida en el laboratorio de bromatologa slo
permiten conocer un aspecto de los mismos, la composicin qumica de los mismos, sin embargo,
no ofrecen informacin sobre el valor que pueden tener como nutrientes, ya que estos no estarn
disponibles para el animal hasta que no hayan sido digeridos y absorbidos. Para esto se requiere
conocer tanto la extensin y velocidad de los procesos de digestin como los compartimentos
digestivos donde esto se lleva a cabo.
En el caso de los rumiantes, los alimentos pasan primero a una cmara de fermentacin
bacteriana donde las diferentes poblaciones de bacterias, hongos y protozoarios degradan los
nutrientes para formar su propio crecimiento y liberando productos de degradacin al medio
ruminal. Dentro de estos se encuentran los productos finales de la fermentacin anaerbica, los
llamados cidos grasos voltiles (actico, propinico, butrico, principalmente), los cuales se
absorben a travs de las vellosidades de la pared ruminal y que son la principal fuente de energa
para el rumiante.
Los carbohidratos se dividen en aquellos que son parte del contenido celular y que son solubles
(azcares, almidones y pectinas) y aquellos que son parte de la pared vegetal y que son
insolubles (hemicelulosa, celulosa y lignina) y que deben ser fermentados por los
microorganismos ruminales. Este proceso puede ser muy tardado, dependiendo del grado de
complexin entre la lignina y la celulosa, por lo que parte del alimento sale del rumen sin ser
completamente degradado.
Por otro lado, una parte protena de los alimentos es parcialmente degradada y reconvertida a
protena microbiana, la cual es de un valor biolgico superior a la de la protena de los alimentos
ingeridos, especialmente cuando estos son de origen fibroso, como en los pastos tropicales. Las
protenas no degradadas as como bacterias y protozoarios pasan al estmago (abomaso) y al
intestino delgado para ser digeridos y absorbidos.
Es, pues, el objetivo de las tcnicas de digestibilidad el cuantificar la extensin y tasa de
degradacin en el rumen, con el objetivo de valorar el verdadero potencial alimenticio de los
alimentos. Se dividen las tcnicas de digestibilidad en aquellas que se realizan en el interior del
animal, in situ cuando es dentro del rumen e in vivo cuando es todo el animal, y a las tcnicas in
vitro, que se realizan en laboratorio. En este proyecto se realizaron una tcnica in situ y otra in
vitro.
103
Justificacin
DMS y DMO
Digestibilidad
in vivo
Digestibilidad
in situ
Digestibilidad
in vitro
Ejemplo
digestibilidad
de
Tilley & Terry

ANKOM
Produccin
Gas
RUSITEC
de
En la prctica de la nutricin animal ya no basta con conocer nicamente la

composicin qumica de los alimentos, tambin es necesario conocer cunto y
qu tan rpido se digieren stos en los diferentes segmentos del tracto digestivo.
Esto permite balancear dietas que no slo llenan los requerimientos nutricionales
de los animales sino que tambin permiten bajar su costo al usar de forma ms
eficiente los alimentos.
Los resultados se presentan como Digestibilidad de la Materia Seca (DMS) en
g/kg MS o en %
Tambin se presentan como Digestibilidad de la Materia Orgnica (DMO) en g/kg
MS o en %
Determinacin de la digestibilidad en el tracto digestivo completo del animal vivo,
calculando la diferencia de MS entre el alimento ofrecido y lo recogido en heces:
DMSin vivo = MSalim MSheces / MSAlim
Determinacin de la digestibilidad en el rumen de un bovino o borrego fistulizado
introduciendo bolsas de nylon y dejndolo durante 48 horas.
Se calcula la diferencia de MS entre el alimento ofrecido y lo recogido al final de
la fermentacin:
DMSin situ = MSalim MSresiduo / MSAlim
Determinacin de la digestibilidad en un sistema de fermentacin in vitro,
calculando la diferencia de MS entre el alimento introducido al sistema y el
residuo del mismo
DMSin vitro = MSalim MSresiduo / MSAlim
Una vaca come 9 kg de heno de alfalfa con 8 kg MS y excreta 3 kg MS en heces
Sistema de fermentacin en lotes a 48 horas seguido de una digestin

cida
Incubadora ANKOM DAISY II de 4 frascos rotativos con capacidad de 2
litros de lquido ruminal y buffer cada uno para utilizarse con bolsas de
fermentacin tipo ANKOM F57.
Basado en la produccin de gas durante el proceso fermentativo, se mide
el volumen (ml) y la presin dentro del frasco (p.s.i.). Es importante
correlacionar los resultados con aquellos de la digestibilidad in vitro.
Tcnica de Simulacin Ruminal (Rumen Simulation Technique) de
Czerkawski & Breckenridge (1977). Sistema de fermentacin semicontinuo
a largo plazo y toma de muestras de pH, AGV, volumen y composicin de
gases y microflora a diferentes tasas de paso y niveles de alimentacin.
104
Introduccin a la bioenergtica de los alimentos

Bioenergtica
los alimentos
Utilizacin
energa
de
Utilizacin de
protena
Calorimetra
de
la
TND
Historia
%TND =
Total de Nutrientes Digestibles
Energa digestible
(ED)
ED = TND * 4.409 Mcal/Kg MS
Energa
Metabolizable
(EM)
EM = TND * 3.615 Mcal/Kg MS
Energa
Bruta
EB
Contenido
de energa
en
los
enlaces
qumicos
del
alimento
PCD + EED + FCD + ELND

(%PC)*(1)*(0.75) + (%EE)*(2.25)*(0.9) + (%FC)*(1)*(0.5)
+ (ELN)*(1)*((0.9 = Concentrados) (0.75 = Forrajes))
Energa
Digestible
ED
EB menos
la energa
perdida en
heces, sea
de
origen
alimenticio
o endgeno
Energa
Metabolizable
EM
ED menos la
energa
de
orina
y
de
gases
digestivos
(Metano, CH4;
Hidrgeno, H2)
Energa
Neta
EN
EM menos el
calor
producido
durante
la
fermentacin
(Incremento
Calrico, IC)
Energas Neta de
Mantenimiento y
Produccin
ENmant:
Metabolismo
basal
Actividad
Termorregulacin
EN prod:
Crecimiento
Lactancia
Reproduccin
Lana
la
Historia
Calorimetra
directa
Calorimetra
indirecta
Calormetro de Parr
Oxidacin completa de la muestra en un ambiente puro de
oxgeno, midiendo el cambio de temperatura del bao de
inmersin, se obtiene la energa bruta (EB) de la muestra
Si se mide la energa del alimento y de las heces se
puede obtener la energa digestible:
ED = EBalim EBheces
Medicin de consumo de O2 y eliminacin de CO2
105

Prctica 14: Digestibilidad de la Materia Seca In Situ
Dr. Carlos U. Hubi Segura.
106
Prctica 14: Digestibilidad de la Materia Seca In Situ

Introduccin
La tcnica original de Digestibilidad In Situ es la Tcnica de la bolsa de Nylon de Bob Orskov
(Orskov et al., 1980), donde se introduce una muestra de alimento en una bolsa de material
sinttico y se deposita en el rumen de una vaca u oveja fistulada, dejndose ah durante un
perodo de 48 horas, con el objetivo de alcanzar una degradacin del alimento similar a la que
ocurrira en un animal comiendo en forma natural. Para proyecto de investigacin se puede
modificar dicha tcnica y se establecen ms tiempos de permanencia en el rumen (0, 6, 12, 18,
24, 36, 48, 72, 96 y 120 horas) con el objetivo de obtener curvas de degradabilidad que no slo
indiquen la cantidad que se digiri a un tiempo dado, sino que adems permitan comparar las
velocidades de degradacin relativa entre cada ingrediente.
En una corrida de digestin in situ es aconsejable incluir muestras de otros

forrajes utilizados en la alimentacin del ganado: heno de alfalfa, rastrojo de maz,
ensilado de maz y paja de cebada, aunque estos slo se utilicen para tener un
punto de comparacin con respecto al ingrediente en investigacin
de realizar la tcnica de fibra cido detergente en los alimentos e interpretar la calidad del mismo y
los anlisis.
obtenidos.

Tipo de peligro
Como evitarlo

de un accidente.

Bolsas de nylon
Ligas de 1 de colores
107
Hilo de nylon de pesca

Balanza electrnica
Horno de secado de aire forzado
Vacas fistuladas
Reactivos.
No se requieren
Metodologa
Para la tcnica mencionada se utilizan bolsas de nylon hechas a mano con hilo sinttico o bien se
pueden comprar bolsas sintticas ANKOM Forage Bags (ANKOM Technology, Macedon, NY).
Las cuales bolsas se cierran haciendo una asa y se amarran con una liga de 1 pulgada de
diferentes colores como cdigo identificador (Office Depot, Mex.). Para cada muestra y cada
tiempo se llenan bolsas por duplicado. Las bolsas y su liga se pesaron primero vacas, se introdujo
una muestra aproximada de 2g en el interior de la misma y se cerraron con la liga, para pesarse
de nuevo. El peso exacto de la muestra introducida (Peso Inicial) se calcul a partir de los pesos
de la bolsa vaca y llena. El da del experimento se formaron racimos de bolsas correspondientes
a los tiempos de retiro preestablecidos y se amarraron con un hilo de pesca. Los diferentes
racimos se introdujeron y se retiraron del rumen a los tiempos preestablecidos por el modelo
experimental.
Cabe mencionar que el trabajo con una vaca fistulada requiere de mucho cuidado y tacto. Las
vacas son animales sensibles y es importante que ella misma quiera trabajar por lo que se les
trata con gran delicadeza y paciencia, esperando a que ella est lista para el trabajo. Es
aconsejable llevar algn premio (alimento dulce y jugoso) para establecer una respuesta positiva.
Se amarra suavemente a la vaca contra un poste y se retira el tapn de la fstula. Se retira la
porcin superior de alimento a medio fermentar y se deposita en una cubeta. Cuando ya se tiene
espacio suficiente para maniobrar se procede a introducir los racimos de bolsas de fermentacin,
amarando cada uno por separado un hilo gua, el cual finalmente es el que se amarra al tapn de
la fstula. Se debe empujar el conjunto de racimos hasta que alcance el nivel del lquido ruminal y
se empape del mismo, sumergindose. Despus de esto se devuelve una cantidad del alimento
medio fermentado de la cuneta y se cierra de nuevo la fstula con el tapn. Se checa que el tapn
est bien colocado, con un cierre casi hermtico (no se puede lograr un cierre hermtico total por
la presencia del hilo gua) y que no haya escurrimientos importantes. A continuacin se procede a
lavar la vaca, se le premia de nuevo y se le regresa su corral. Cabe mencionar que las vacas
fistuladas, pese a lo que los observadores externos puedan opinar, son las mejor tratadas y
consentidas del hato, ya que tienen un alto valor para el CCA y es importante mantenerlas ms
tiempo que al ganado productor de leche.
Para retirar las bolsas se lleva a cabo el mismo proceso pero a la inversa. Se retira el tapn y se
saca suficiente alimento hasta alcanzar el racimo de bolsas. Muchas veces es necesario retirar
todos los racimos y buscar aquel racimo que corresponde al horario de retiro. Se corta el hilo de
nylon que lo conecta el cable gua y se devuelven las bolsas restantes al interior del rumen. Se
vuelve a colocar el tapn y se lava la zona circundante con abundante agua y un cepillo para
evitar que las moscas sean atradas y molesten a la vaca.
Las bolsas retiradas son lavadas a mano para retirar contenido ruminal que pega a las mismas y
para extraer el lquido ruminal de su interior que contiene alimento digerido y bacterias. Las bolsas
se colocan en charolas en un horno de aire forzado a 60C por 24 horas. No se recomienda meter
las bolsas al horno de 100C porque a esta temperatura es ms factible que se formen complejos
de Maillard y que se dificulten cualquier otro anlisis con el mismo material.
Las bolsas se sacan del horno y se dejan enfriar en un desecador con slica gel para evitar que la
humedad ambiental se condense en las mismas. Las bolsas se pesan con todo y liga. Se procede
a capturar los datos en una hoja de clculo electrnica, la cual automticamente calcula la
cantidad de peso final y el porcentaje de degradabilidad. A continuacin se muestran las casillas
utilizadas y un ejemplo:
108

Muestra
ID
A. Peso
Bolsa
B. Peso
Bolsa +
Muestra
Clculos
Ej. 20.1
C. Peso
Inicial
(Pi)
D. Bolsa
+
Muestra
digerida
Pi = B A
2.5678
4.5678
2.0000
3.8765
E. Peso
Final
(Pf)
F.
%DMS
Pf = D
A
= Pi Pf
/ Pi x
100
34.56%
1.3087
G.
%MS
H.
%DMS100
94.5%
= %DMS
*
100/%MS
36.57%
Donde:
A. Peso bolsa: es el peso de la bolsa y la liga vacas
B. Peso bolsa + muestra: es el peso de la bolsa ya con la muestra cerrada con su liga.
C. Peso inicial (Pi): es el clculo de la muestra sola
D. Bolsa + muestra digerida: es el peso de la bolsa con la muestra y su liga despus de ser
sometida a digestibilidad y secada a 60C durante 24 horas
E. Peso final (Pf): es el peso de la muestra degradada sola, se calcula a partir del peso de la
bolsa con la muestra (D) menos el peso de la bolsa y su liga (A).
F. %DMS: es el clculo de la digestibilidad aparente de la materia seca, se calcula como
proporcin de la diferencia entre el peso inicial y el peso final sobre el peso inicial y se expresa
en porcentaje.
G. %MS: es el porcentaje de materia seca que haba en la muestra al inicio de la
determinacin. Generalmente el valor flucto entre 93 y 96%.
H. %DMS100: es el valor de digestibilidad aparente corregido a materia seca 100%.
Es importante resaltar este punto ya que en otros experimentos en los que se ha asesorado a
alumnos de maestra y doctorado de otras instituciones, stos no haban llenado los registros en
forma correcta y al final del experimento haba dificultades para calcular los resultados. El principal
error observado es el de pesar nicamente la bolsa llena (B), o bien el peso de la muestra (C), lo
que obliga al investigador a vaciar las bolsas al final de la investigacin para obtener el valor del
peso final (D). Esto implica un trabajo adicional y una fuente de error importante.
Otro error observado es el de anotar los valores en cuadernos o libretas de apuntes, lo cual tiene
como desventaja el que se pierda la libreta, se ensucie, y que al momento de hacer los clculos
falten datos o no estos no estn ordenados en forma consistente.
Se aconseja generar la hoja de clculo primero y llenarla con valores dummy para detectar
posibles errores en el clculo de los resultados. Posteriormente se deben imprimir formatos antes
del pesaje de las bolsas. Los formatos deben llenarse a mano, para posteriormente vaciarlos en la
computadora y hacer los clculos en la misma, con el objetivo de evitar errores de captura.
Una vez que se han capturado los datos en la hoja de clculo se debe hacer el anlisis de data
mining. No se recomienda iniciar el proceso de anlisis estadsticos hasta no saber lo que los
datos arrojan. Se recomienda hacer una tabla dinmica de datos y moverlos de tal manera que
responda a las preguntas que se quiere contestar.
Los resultados se grafican en una grfica de dispersin (X-Y) con el tiempo como variable
independiente (eje de las X) y la degradabilidad como variable dependiente (eje de las Y). En este
caso se espera ver una serie de curvas sigmoides que alcanzan la asntota al final de los 96 120
horas de digestin. Los valores de digestin pueden variar segn la muestra y el tiempo de
digestin, pero en general, las curvas mantienen su forma a lo largo de todo el proceso.
Las bolsas con el material seco pueden guardarse para realizar otras pruebas sobre el mismo, por
ejemplo, resulta de gran inters incinerar una porcin para determinar la digestibilidad de la
materia orgnica, o bien, realizar un anlisis bromatolgico completo sobre las mismas para
evaluar la digestibilidad de cada nutriente. En este caso estas determinaciones ya no se realizaron
por falta de presupuesto.
109
Los resultados de las pruebas de digestibilidad en general son burdos, por lo que se sugiere
siempre complementar los mismos con otras tcnicas in vitro, como se describe a continuacin.
Para saber ms.
para usted.
110

PRCTICA 15
Digestibilidad de la Materia Seca In Vitro
M. en C. Ma. Guadalupe Acero Godnez
111
PRCTICA 15: Digestibilidad de la Materia Seca In Vitro

Introduccin.
los anlisis.

Tipo de peligro
Como evitarlo

de un accidente.
No aplica
No aplica.
No aplica.

Pizarrn.
Can y PC.
Pster.

Pizarrn.
Can y PC.
Pster.
Materiales que traigan los participantes para exponer sus productos.
Internet.
LIMUSA.
112
Para saber ms.

113

Prctica 15: Digestibilidad de la Materia Seca In Vitro por la Tcnica

ANKOM
114
Prctica 15: Digestibilidad de la Materia Seca In Vitro por la Tcnica

ANKOM
Introduccin.
Debido al elevado costo y complejidad de mantener ganado vivo para realizar pruebas de
digestibilidad se han desarrollado varias tcnicas de laboratorio que simulan ambientes ruminales
y que permiten un mejor control de las variables que pueden afectar el resultado (poblaciones
bacterianas, tipos de alimentos, aditivos, antibiticos, pH, temperatura, velocidad de paso, etc.).
Entre estas tcnicas se encuentra la de Tilly&Terry (1963), las tcnicas de produccin de gas, el
RUSITEC y el digestor ANKOM, que es la que se realiza actualmente en el CCA.
La tcnica ANKOM es una tcnica de degradacin en lotes, donde el incubador contiene cuatro
frascos revolventes, cada uno con hasta 100 pequeas bolsas de papel filtro (Modelo F57)
sumergidas en lquido ruminal amortiguado.
Esta tcnica permite realizar determinaciones de la degradacin materia seca, fibras neutro
detergentes (FND), fibra cido detergente (FAD) y lignina (Lig) utilizando la misma muestra. La
tcnica puede utilizarse para hacer determinaciones parciales durante 96 horas para obtener
curvas de degradacin exactas (Mould y Nordheim, 1998) cuyos parmetros pueden analizarse
matemticamente con modelos exponenciales (McDonald, 1981) o sigmoides (Gompertz, France
et al., 1993).
II
El modelo Daisy de ANKOM permite trabajar con cuatro ambientes de fermentacin diferentes al
mismo tiempo. Las bolsas con alimentos pueden ser extradas a tiempos diferentes para dar
curvas de degradacin exactas.
115

de realizar la tcnica de digestibilidad de la materia seca in Vitro en los alimentos e interpretar la
calidad del mismo y su implicacin en la alimentacin y nutricin de los animales domsticos.
los anlisis.
obtenidos.

Tipo de peligro
Como evitarlo

de un accidente.
equipo ANKOM.
adecuadamente.

Aparato DaisyII Incubator (ANKOM Tehnologies, Macedon, NY)
Desecador.
Reactivos.
Para la Saliva artificial:
K2HPO4
MgSO4*7 H2O
NaCl
CaCl2*2 H2O
Urea
Solucin B:
Na2CO3
Na2S
116
Metodologa
II
En este proyecto se utilizaron dos equipos de incubacin ANKOM Daisy (ANKOM Technologies,
Macedon, NY), Cada equipo consta de cuatro frascos de 5 L revolventes dentro de una
incubadora en los cuales se meten bolsas filtro con las muestras a degradar, una saliva artificial
apropiada para el tipo de trabajo y lquido ruminal.
Los frascos cuentan con una tapa de rosca con un ventil para evitar incrementos en la presin
interior. Durante el proceso de fermentacin se forma una cantidad importante de dixido de
carbono producido en forma primaria por la fermentacin bacteriana y en forma secundaria por el
efecto de los cidos sobre el bicarbonato y carbonato, empujando la reaccin hacia la izquierda:
-
2-
H2O + CO2 H2CO3 HCO3 + H CO3 + H + H
Los tiempos de degradacin son determinados por el investigador, pudiendo ser de tiempo final
(48 horas) o bien a diferentes tiempos para establecer curvas de degradacin.
La saliva artificial seleccionada para este experimento fue la propuesta por ANKOM, la cual tiene
un pH de 6.8 y permite mantener el pH estable durante todo el perodo de fermentacin.
Para cada frasco se requiere de 1330 ml de la solucin A y 266 ml de la solucin, por lo que se
prepararon suficiente solucin para 8 frascos (11.0 y 2.5 L respectivamente). La frmula y las
cantidades utilizadas fueron las siguientes.
Cuadro 3. Solucin de saliva artificial utilizada para la digestibilidad de la materia seca in Vitro
segn la tcnica de ANKOM Daisy II Incubator.
Solucin A:
g/L
g/11 L
K2HPO4
10
110
MgSO4*7 H2O
0.5
5.5
NaCl
0.5
5.5
CaCl2*2 H2O
1.0
11
Urea
0.5
5.5
Solucin B:
Na2CO3
Na2S
g/L
15.0
1.0
g/2.5L
37.5
2.5
Se preparan las soluciones por separado para evitar interaccin entre los iones de calcio y los
iones carbonato, lo cual precipitara inmediatamente la solucin.
Se utilizan las mismas bolsas filtro F57 (ANKOM Technologies, Macedon, NY) utilizadas en la
determinacin de componentes de la pared celular (FDN y FDA). Las bolsas se deben sumergir
previamente en acetona durante 3 a 5 minutos y luego dejar que se sequen al aire libre. Las
bolsas se enumeran con un marcador indeleble especial, pudindose utilizar marcadores textiles,
y se pesan. Acto seguido se llenan con 0.3 g de la muestra y se sellan trmicamente (HeatImpulse Sealer). Las bolsas se vuelven a pesar ya llenas y se anotan los valores en el formato
adecuado. Al igual que en la determinacin in situ se recomienda utilizar un sistema de columnas
para facilitar la captura y clculo de los datos. A continuacin se presenta el formato utilizado y un
ejemplo ya llenado:
Muestra
ID
A.
Peso
Bolsa
B. Peso
Bolsa +
Muestra
Clculos
#1
0.5678
0.8678
C.
Peso
Inicial
(Pi)
Pi = B A
0.3000
D. Bolsa
+
Muestra
digerida
0.7765
E.
Peso
Final
(Pf)
Pf = D
A
0.2087
F.
%DIVMS
= Pi Pf
/ Pi x 100
30.43%
G.
%MS
H.
%DIVMS100
94.5%
= %DIVMS
* 100/%MS
32.20%
117
Donde:
A. Peso bolsa: es el peso de la bolsa vaca
B. Peso bolsa + muestra: es el peso de la bolsa ya con la muestra sellada
C. Peso inicial (Pi): es el clculo de la muestra sola
D. Bolsa + muestra digerida: es el peso de la bolsa con la muestra y su liga despus de ser
sometida a digestibilidad y secada a 60C durante 24 horas
E. Peso final (Pf): es el peso de la muestra degradada sola, se calcula a partir del peso de la
bolsa con la muestra (D) menos el peso de la bolsa (A).
F. %DIVMS: es el clculo de la digestibilidad aparente de la materia seca, se calcula como
proporcin de la diferencia entre el peso inicial y el peso final sobre el peso inicial y se expresa
en porcentaje.
G. %MS: es el porcentaje de materia seca que haba en la muestra al inicio de la
determinacin. Generalmente el valor flucto entre 93 y 96%.
H. %DIVMS100: es el valor de digestibilidad aparente corregido a materia seca 100%.
La organizacin de las bolsas es importante, ya que en una corrida de este tipo se pueden llegar a
utilizar 250 bolsas y hay que saber dnde esta cada bolsa en cada instante. Se recomienda
imprimir un juego grande de los formatos y utilizar una hoja para cada muestra, aadiendo el
factor tiempo en la columna de la identificacin (Muestra ID).
Las bolsas se deben repartir en cada uno de los frascos segn el modelo experimental que se
quiera llevar a cabo. Se recomienda un mximo de 24 a 25 bolsas por frasco. Se pueden trabajar
diferentes muestras en un mismo frasco, donde el frasco representa un tiempo de incubacin. Se
recomienda siempre comparar el ingrediente a evaluar con otros forrajes usados en la
alimentacin animal (heno de alfalfa, rastrojo de maz, ensilado de maz y paja de cebada) y se
recomienda hacerlo por triplicado, lo que implica un total de 248 bolsas (9 muestras x 3 x 9
tiempos) y tres bolsas control.
En nuestros proyectos se manejan 9 tiempos (0, 6, 12, 18, 24, 36, 48, 72, y 96 horas) por lo que
cada frasco fue un tiempo de fermentacin, lo cual facilita el trabajo, ya que al momento de retirar
las bolsas se vaca completamente el frasco y se lavan todas las bolsas en forma conjunta.
El da de la incubacin, se mezclan en cada frasco de fermentacin las cantidades de solucin A y
II
B y se dejan a calentar dentro de una incubadora o dentro de los mismos equipos Daisy hasta
que alcancen la temperatura de 39 C y se equilibre la temperatura durante al menos veinte a
treinta minutos.
Para obtener el lquido ruminal es necesario contar con uno o dos animales fistulados, de
presencia con una dieta similar a la de los ingredientes que se van a evaluar.
El equipo necesario para obtener el lquido ruminal consta de una cubeta grande (15 L) y un
2
pequea (5 L), 2 frascos termos grandes (1 a 2 L), manta de cielo (1 m ), un embudo de plstico o
vidrio (cuidado), un vaso largo de plstico o frasco angosto o bien una botella de plstico PET. Se
recomienda utilizar 2 Guantes de palpacin y 2 guantes de latex de tacto por persona. Se requiere
de una licuadora elctrica grande para homogenizar el contenido ruminal y un tanque de CO 2 para
mantener todo el equipo bajo condiciones de anaerobiosis.
Antes de ir por el lquido ruminal se llenan los dos termos grandes (2 L) con agua a 39 C, y la
licuadora se llena con agua ms caliente (50-60 C).
El lquido ruminal utilizado es obtenido de las vacas fistuladas del CCA-UAA (vaca #998 y #999,
F1 cruza Holstein con ceb). Las vacas estn en produccin de leche por lo que se pueden
encontrar en produccin o secas en un momento dado, lo que implica que la dieta a la que estn
acostumbradas puede ser diferente en diferentes momentos del ao. Es importante elegir la dieta
cuidadosamente con respecto al tipo de experimento que se quiera realizar.
Se trabaja con la vaca fistulada de la misma manera que hace en la digestibilidad in situ. Se retira
el tapn y se comienza a sacar suficiente contenido ruminal hasta alcanzar la mata flotante, que
es el material vegetal en pleno proceso de fermentacin. Se toman puados de esta mata y se
coloca sobre la manta de cielo para exprimirla y dejar que el lquido escurra en el embudo y
adentro del frasco termo. Se repite este procedimiento hasta que los dos termos estn
completamente llenos. A continuacin se introduce la botella de PET o el vaso dentro del rumen
118
invertida y se voltea una vez que se alcanza el nivel donde se encuentra el lquido ruminal libre, de
manera que se obtiene una muestra de este otro compartimento ruminal. Finalmente se toma un
buen puo de contenido ruminal y sin exprimirlo se invierte el guante de palpacin para este
quede guardado en su interior. A continuacin se vuelve a colocar el tapn en su lugar, se lava a
la vaca y se le devuelve a su corral.
Este proceso no tiene que ser estril pero las bacterias deben estar el menor tiempo de contacto
con el aire. Se aconseja no dejar ms de una hora desde la extraccin del contenido ruminal hasta
su inoculacin. Se traslada el contenido ruminal y los termos al laboratorio.
En el laboratorio se introduce el contenido ruminal del guante de palpacin con una cantidad
similar de solucin buffer (200-300ml) en la licuadora y se llena la misma con CO 2 para mantener
un ambiente anaerbico durante el proceso de licuado. El licuado se filtra con la manta de cielo y
se le agrega el lquido ruminal de los termos y de la botella PET. Se debe calcular 400 ml de
lquido ruminal por frasco ANKOM.
II
A continuacin se saca un frasco del equipo Daisy , que ya contiene las dos soluciones buffer (A y
B) precalentadas a 39C, y se le aaden 400 ml de contenido ruminal y se le agregan las bolsas
filtro con las muestras a procesar. Durante todo este tiempo se tiene que tener una manguera con
CO2 dentro del frasco para evacuar el aire sobrenadante. Es importante que la manguera no
burbujee dentro de la solucin ya que esto causara una acidificacin del medio. Finalmente se
cierra el frasco y se devuelve a la incubadora y se repite el mismo procedimiento con el siguiente
frasco. La incubadora, que ya estaba a temperatura constante, ahora se pone a rotar.
La recoleccin de las muestras se realiza a los tiempos determinados. Se apaga el rotor y se
extrae el frasco correspondiente, se cierra la puerta y se vuelve a arrancar el rotor. El frasco se
abre y se extra el lquido, el cual puede ser guardado para anlisis posteriores y para determinar
el pH del mismo. Se extraen las bolsas y se lavan manualmente en agua tibia hasta que el lquido
salga limpio. Se meten a secar a un horno de aire forzado a 60C durante 24 horas, o bien a
105C por un mnimo de dos horas. Las bolsas se meten al desecador y se pesan, registrndose
los resultados en la columna D del formato presentado anteriormente. Con esto se puede
determinar la degradabilidad o digestibilidad aparente del forraje, utilizando la frmula:
%DMD =
(Peso inicial Peso final) x 100

Peso inicial
Nota: Este valor debe ser corregido por el valor de materia seca
An cuando este valor de digestibilidad es til, se sabe que en la muestra degradad todava se
encuentra material digerido pero que no se pudo lavar completamente y una cierta cantidad de
bacterias que pueden afectar al resultado final, por lo que es aconsejable someter a las bolsas a
un lavado con detergente neutro. Con esto se logra eliminar los componentes solubles y obtener
el residuo FDN y calcular la digestibilidad verdadera in Vitro (IVTD, por sus siglas en ingls). A
continuacin se presenta la frmula y su explicacin:
IVTDAs Recived = 100 (W3 (W1 x C1)) x 100/ W2
IVTDDM = 100 (W3 (W1 x C1)) x 100/ W2 x DM
Donde:
W1 = Peso de la bolsa vaco (A)
W2 = Peso inicial, Peso de la muestra sola ( C)
W3 = Peso final de la bolsa despus de la digestin y del lavado FDN.
C1 = Correccin por bolsa control (Peso final seco/ peso inicial de la bolsa)
final oven-dried weight / original blank bag weight)
DM = % dry matter = % materia seca
119
Para saber ms.
para usted.
120

PRCTICA 16
Calorimetra y bioenergtica
M. en C. Ma Guadalupe Acero Godnez
121
Calorimetra y bioenergtica
Introduccin.
los anlisis.

Tipo de peligro
Como evitarlo

de un accidente.
No aplica
No aplica.
No aplica.
Dinmica utilizada.

Pizarrn.
122
Can y PC.
Pster.
Internet.
LIMUSA.
Para saber ms.
123

Prctica 16: Calorimetra y bioenergtica
124
Introduccin.

de realizar la tcnica de calorimetra directa en los alimentos e interpretar la calidad del mismo y
los anlisis.
obtenidos.

Tipo de peligro
Como evitarlo

de un accidente.
equipo ANKOM.
adecuadamente.

Reactivos.
Metodologa
Para saber ms.
125
para usted.
126

Prctica 17: Digestibilidad in vitro por produccin de gas.
127
Digestibilidad in Vitro por produccin de gas

Introduccin
El volumen de gas producido durante la fermentacin ruminal puede ser utilizado para determinar
la degradabilidad y la energa metabolizable (EM) de los forrajes para rumiantes mediante el uso
de mediciones fraccionadas (Theodorou et al., 1994). La tcnica de produccin de gas utilizada
(Reading Pressure Technique, RPT, Mauricio et al., 1999) utiliza una combinacin de medicin de
la presin de gas por medio de un transductor de presin conectado a una computadora y la
degradacin de la materia seca. Las mediciones se realizan a intervalos preestablecidos y las
botellas se abren para medir el pH y obtener muestras para anlisis qumicos, as como para
medir la tasa de degradacin de la materia orgnica.
Objetivos esperados de la prctica

los anlisis.

Tipo de peligro
Como evitarlo

de un accidente.
No aplica
No aplica.
No aplica.

Balanza electrnica
128
Horno de secado de aire forzado

100 Frascos de vidrio de 125 ml
100 Agujas insulinitas (Cal 25)
Incubadora (39C)
Transductor de presin
Computadora
Potencimetro
Vacas fistuladas
Equipo para toma de lquido y contenido ruminal
Reactivos.
Elementos Traza
Cloruro de calcio
Cloruro de manganeso
Cloruro de cobalto
Cloruro de hierro
Total
Solucin buffer
Bicarbonato de sodio
Bicarbonato de amonia
Total
Elementos macro
Fosfato di-sdico
Fosfato de potasio
Sulfato de magnesio
Total
Sol Reduccin
Sulfato de sodio
Hidrxido de sodio
Total
Sol Colorante
Resarzurina
Metodologa
Preparacin de los substratos

Los ingredientes a utilizar en la produccin de gas deben ser similares a los utilizados en la
produccin animal, en especial de los sistemas productivos a evaluar. As mismo, es importante
combinar ingredientes de alta digestibilidad, para estimular el crecimiento bacteriano, junto con
ingredientes de baja digestibilidad, para obtener diferencias medibles en respuesta al tratamiento
elegido. En el caso del presente estudio, se utilizarn ingredientes utilizados en la produccin de
leche, heno de alfalfa y rastrojo de maz. Es de esperarse que la alfalfa sea degradada ms rpido
que el rastrojo de maz, con lo que las curvas de produccin de gas sern ms detalladas.
Los ingredientes se secan a 60C durante 48 horas, posteriormente se muelen hasta pasar por
una rejilla de 1mm de dimetro. Los ingredientes se mezclan en proporcin de 60% heno de
129
alfalfa y 40% rastrojo de maz. Muestras de cada ingrediente, as como la mezcla de ambos, se
mandan al laboratorio de bromatologa para realizar el anlisis qumico proximal de los mismos.
Esto incluye las determinaciones de materia seca, extracto libre de nitrgeno (ELN), protena
cruda (PC), extracto etreo (EE), cenizas (Cen.). Adems se lleva a cabo la determinacin de fibra
neutro detergente (FND) y fibra cido detergente (FAD) y lignina (Lig) con el mtodo de ANKOM.
En este caso adems se determinar la cantidad de fsforo ya que de esto depender la cantidad
de fsforo a utilizar como tratamiento.
Preparacin de los medios de cultivos

El medio de cultivo paras las bacterias cuenta con solucin buffer (bicarbonato de sodio y de
+
+
2+
2+
2+
2+
2+
amonia), macro (Na , K , Mg , Cl , sulfatos) y microminerales (Ca , Mn , Co , Fe ), as como
una solucin reductiva (Na2S) y un colorante (Resarzurina).
En este caso en especial, en el que se mide el efecto de los fosfatos sobre la actividad bacteriana,
es necesario modificar la composicin del medio de cultivo de manera que el control (bajo fosfato)
est por debajo de los requerimientos nutricionales de las bacterias. Estos niveles sern
determinados por medio de experimentos preliminares utilizando cultivos en botellas, semejantes
a la tcnica de Tilley&Terry (1963).
La composicin del medio de cultivo estndar se presenta a continuacin como referencia (Tabla
1), sin embargo, es importante hacer los ajustes necesarios de cationes y aniones para mantener
un pH y una capacidad buffer adecuada. En estos experimentos se busca determinar el posible
efecto buffer de los fosfatos, por lo que se desea una menor capacidad buffer que permita
diferencias en el pH como resultado de la fermentacin.
130
Tabla 1: Composicin qumica del medio de cultivo utilizado en la produccin de

gas.
Elementos Traza
Cloruro de calcio
Cloruro de manganeso
Cloruro de cobalto
Cloruro de hierro
Total
Frmula
CaCl2
MnCl2
CoCl2
FeCl2
Presentacin
CaCl2*2H2O
MnCl2*4H2O
CoCl2*6H2O
FeCl2*6H2O
Cantidad
13.2g
10.0g
1.0g
0.8g
100ml H2Odest.
Solucin buffer
Bicarbonato de sodio
Bicarbonato de amonia
Total
Frmula
NaHCO3
(NH4)HCO3
Presentacin
NaHCO3
(NH4)HCO3
Cantidad
35.0g
4.0g
1000ml H2Odest
Elementos macro
Fosfato di-sdico
Fosfato de potasio
Sulfato de magnesio
Total
Sol Reduccin
Sulfato de sodio
Hidrxido de sodio
Total
Sol Colorante
Resarzurina
Frmula
Na2HPO4
KH2PO4
MgSO4
Presentacin
Na2HPO4*12H2O
KH2PO4
MgSO4*7H2O
Frmula
Na2S
NaOH
Presentacin
Na2S*9H2O
NaOH
Frmula
Presentacin
Cantidad
5.7g
6.2g
0.6g
1000ml H2Odest
Cantidad
6.25g
cbp ajustar pH
1000ml H2Odest
Cantidad
100mg
Orden de mezclado
Agua destilada
Sol. Buffer
Macro-minerales
Micro-minerales
Sol. Colorante
Sol. Reductora
TOTAL
Cantidad
500 ml
200 ml
200 ml
0.1 ml
1 ml
60 ml
961.1 ml
Por litro (ml)

520.2
208.1
208.1
0.104
1.0
62.4
1000.0 ml
El medio de cultivo para este experimento se realizar con una concentracin menor de
fosfatos, siendo stos adicionados en forma individual a las botellas de fermentacin
segn los tratamientos especificados.
Una vez preparado el medio de cultivo en grandes frascos (20 L) stos son llenados con
CO2 hasta lograr la saturacin del medio, mismo que se manifiesta por un cambio de
coloracin de la rezarsurina, de azul a rosa.
Preparacin de las botellas e incubacin

El da anterior al inicio del experimento, las botellas de fermentacin son numeradas y llenadas
con 1g de substrato. Los controles negativos no llevan substrato, nicamente solucin buffer y
lquido ruminal. Posteriormente se llenan los frascos con el medio de cultivo (90ml) y se meten a
incubar a 39C hasta el da siguiente. El lquido ruminal es obtenido de dos vacas fistulizadas,
filtrado a travs de dos capas de tela para queso y mantenido en una atmsfera pura de CO2 a
39C hasta ser inyectado en los frascos (10ml). Los frascos son sellados con tapones de goma y
mezclados, posteriormente son colocados en las incubadoras a 39C.
131
Las botellas deben ser colocadas en forma estratgica en charolas que sern puestas en los
incubadores. El orden de las botellas debe permitir retirar las botellas de las ltimas carolas
cuando sea el momento de sacrificar botellas para la toma de muestras.
Medicin de gas, pH, AGVs, DMS y DMO

La medicin del gas producido durante la fermentacin se realizar a plazos determinados (0, 2, 4,
6, 8, 10, 12, 15, 19, 24, 30, 36, 48, 72, 96 y 120 horas) para obtener curvas precisas de las tazas
de fermentacin. Asimismo, se sacrifican una cantidad de frascos para obtener muestras de pH,
AGV, fosfatos y para determinar la degradacin de la materia orgnica (DMO). Los frascos se
abren, se mide el pH y se toma una muestra del fluido (8ml) para futuras determinaciones de AGV
en el cromatgrafo de gases y anlisis de fosfatos. Para la determinacin de la DMO, se hace filtra
el contenido de los frascos en crisoles porosos y se secan a 100C durante 24 horas, se pesan
para determinar la degradabilidad de la materia seca (DMS) y posteriormente se queman en el
horno mufla a 500C durante 6 horas para determinar la DMO. Alternativamente se pueden utilizar
muestras especficas para determinar la degradabilidad de la fibra (FND, FAD y lignina).
Desarrollo del experimento
Una vez que las botellas han sido llenadas con el lquido ruminal, stas son selladas con tapones
de hule, sacudidas y puestas en los incubadores a 39C. A la hora de medicin, las charolas se
vuelven a agitar y se colocan debajo de una campana de extraccin. La temperatura debajo de la
campana debe ser constante para no afectar las caractersticas de volumen y presin de los
gases.
Antes de iniciar el proceso de medicin se debe prender la computadora y cargar el programa que
permite la medicin y registro de los datos de presin. El orden de las botellas en la hoja de
clculo a utilizar debe ser el correcto para no perder datos.
Para medir la presin de cada botella, el tcnico coloca firmemente una aguja insulnica (calibre
23, 0.6mm) en el transductor de presin e inserta esta a travs del tapn de hule, permitiendo que
el transductor llegue a una lectura estable de la presin. Acto seguido se retira el transductor pero
se deja la aguja insertada para que se salga el gas acumulado y se equilibre la presin en el
interior de la botella con la presin atmosfrica. Para medir la siguiente botella en la charola el
tcnico coloca otra aguja al transductor y repite los eventos anteriores. La velocidad promedio por
botella debe ser de 5 a 6 segundos para evitar que la temperatura de la primera a la ltima botella
vare. Al finalizar de medir la ltima botella de la charola se procede a retirar las agujas en el
mismo orden en que fueron insertadas. La charola es agitada de nuevo y se guarda en el
incubador hasta la siguiente medicin.
Una cierta cantidad de botellas sern sacrificadas para determinar la degradacin de la materia
seca y de la materia orgnica. Estas botellas son retiradas de las charolas despus de la ltima
medicin de gas. Se abren y se les mide inmediatamente el pH, y se toman muestras del lquido
para determinacin de AGVs, lactatos y otros anlisis pertinentes. El contenido de la botella es
filtrado con crisoles porosos ayudado de una bomba de vaco. Los crisoles se colocan en un horno
asistido por ventilacin a 60C durante 48 horas. Posteriormente se pesan los crisoles para
determinar la degradacin de la materia seca y se colocan en el horno mufla a 500C durante 6
horas y se dejan enfriar en el horno toda la noche.

Internet.
9.- Para saber ms.

132
Prctica 18: Tilley & Terry Modificada

Introduccin
La tcnica original de Tilley&Terry (T&T, 1963) es una tcnica de cultivo en lotes (batch culture)
que fue desarrollada como un proceso de digestin in vitro para determinar la degradabilidad de
los forrajes. La tcnica consista de dos etapas: la primera, una fermentacin anaerbica por parte
de bacterias ruminales mixtas obtenidas de un animal fistulizado; la segunda etapa inclua la
digestin cido con enzimas digestivas para simular la digestin del abomaso.
En estas prcticas se realiza una tcnica de Tilley&Terry Modificada (TTM) para permitir la
evaluacin de la actividad microbiana.

de r
los anlisis.
obtenidos.

Tipo de peligro
Como evitarlo

de un accidente.

Reactivos.
Metodologa
La tcnica Tilley&Terry Modificada (TTM) utiliza los mismos tubos de fermentacin con tapn y
tubo para eliminar el gas producido durante la fermentacin. El gas debe eliminarse sino el
aumento en la presin parcial de CO2 (pCO2) dentro del tubo acidificar el medio y afectar
directamente la actividad bacteriana.
Se utiliza una solucin amortiguadora (por ejemplo, saliva artificial de McDougall, 1948) para
mantener un pH inicial estable. A diferencia de la tcnica original (que usaba 60ml de solucin
133
amortiguadora), la cantidad total de solucin en el tubo T&T debe ser suficientemente baja (10ml
de solucin amortiguadora + 50 ml de agua destilada) para que el proceso de fermentacin
acidifique gradualmente el medio.
La diferencia en pH puede ser considerada un reflejo del proceso de fermentacin, mismo que
puede ser equiparado a la actividad bacteriana. Los resultados siempre deben ser presentados
+
como valores logartmicos (pH) y valores lineares (concentracin de iones de hidrgeno ([H ]=
pH
1/10 ) para poder interpretar correctamente los resultados y poderlos correlacionar con la
medicin de otros electrolitos y metabolitos (presentados como mmol/L mEq/L).
En experimentos de fermentacin ruminal (anaerbica) no se acostumbra esterilizar el material a
utilizar, o los substratos, ya que estos ltimos cambian sus caractersticas fsicas y qumicas,
afectando los resultados. En los experimentos para determinar la actividad microbiana de
patgenos especficos es importante que tanto tubos, soluciones amortiguadoras y substratos
deben estar correctamente esterilizados para el experimento y posteriormente debe ser
esterilizados (o desechados) segn las normas de bioseguridad adecuadas.
El tipo de substrato utilizado y la forma de preparacin del mismo debe ser el adecuado para el
tipo de bacteria a utilizar, as como los elementos nutricionales adicionales (macro y micro
elementos, reductores, colorantes, etc.) para optimizar la actividad de las mismas. Idealmente la
bacteria debe tener un substrato especfico y un producto de fermentacin cido.
La concentracin de bacterias al inocular y a diferentes tiempos durante el proceso de
fermentacin puede ser determinada de varias maneras: diluciones seriales, conteo en placas, el
nmero ms probable (Most Probable Number, MPN, Koch, 1981), cintica de primer orden (la
cantidad de producto de fermentacin es proporcional a la concentracin de enzimas y al tiempo)
15
o por produccin de protena microbiana utilizando nitrgeno radioactivo ( N).
Para iniciar el experimento, los tubos T&T son llenados con el substrato (1g de materia seca
previamente molido), el medio amortiguador (10ml), agua destilada (50ml) y las bacterias
seleccionadas, posteriormente se aplica el tratamiento (compuesto inhibidor a o estimulante a
diferentes concentraciones) por triplicado o cuadriplicado, los frascos son llenados con CO 2, en
caso de tratarse de bacterias anaerbicas, y se incuban a 37-39C.
Cada experimento requiere de controles negativos y positivos debidamente replicados. Los
controles negativos no contienen substrato, mientras que los controles positivos no contienen
bacterias. Esto es necesario para determinar el efecto de autolisis bacteriana en el primer caso y
degradacin por otras bacterias en el segundo.
En esta tcnica muy sencilla, el pH del medio es considerado la variable ms importante, por lo
que es medido frecuentemente (0, 3, 6, 9 12, 15, 18, 24, 30, 36, 48, 72, 96 horas) para tener un
patrn exacto de los cambios en el proceso de fermentacin. Para esto se utiliza un electrodo de
vidrio y un medidor de pH con dos decimales de exactitud. Despus de cada medicin, el tubo
debe ser lavado (flushed) con CO2 en caso de tratarse de bacterias anaerbicas.
Se pueden utilizar medidores de pH continuos y realizar mediciones a intervalos cortos preprogramados (Phillip-Harris System, Phillip-Harris Education, Leicestershire, GB) que permite
tener curvas de pH muy exactas y evitar la apertura de los tubos de fermentacin, evitando
contaminacin y reduciendo el trabajo manual. Desgraciadamente, el costo de estos equipos
reduce el nmero de muestras a evaluar simultneamente.
Los tubos de T&T pueden ser de plstico o de vidrio. Tienen un tapon de goma con un ventilador
de cristal para permitir la salida de los gases de fermentacin e impedir la entrada de aire exterior.
Debido a que siempre hay una presin positiva dentro de los tubos es muy difcil que el ambiente
anaerbico sea alterado por oxgeno exterior.
134
Para saber ms.
para usted.
135
Prctica 19: Tcnica de Simulacin Ruminal (RUSITEC)

Introduccin
La Tcnica de Simulacin Ruminal (RUSITEC, por sus siglas en ingls) es un sistema de
fermentacin semi-continuo, que reproduce los eventos ms significativos del rumen: movimientos
ruminales, infusin de buffer, salida de efluente, dilucin del contenido, crecimiento bacteriano y
de protozoarios, fermentacin de 48 horas de los substratos. El sistema tiene puertos para insertar
electrodos de pH y otro puerto que permite tomar muestras de fluido para medicin de AGV y
cido lctico, amonia, fosfatos, etc.
Figura 3. RUSITEC en el Laboratorio de Fermentacin del Departamento de Agricultura de la

Universidad de Reading, Inglaterra.
El equipo cuenta con ocho frascos de fermentacin, sellados completamente y sumergidos en
baos mara a 39C. Una canastilla en el interior se encuentra en perpetuo movimiento reciproco
(8.5 RPM) para simular el movimiento ruminal. La entrada de saliva artificial produce el
desplazamiento de fluido ruminal y gas hacia los frascos recolectores y las bolsas de gas. Las
muestras pueden ser obtenidas del lquido efluente o del fluido en los frascos.
136
Figura 4. Modelo esquemtico del RUSITEC, incluyendo el sistema de medicin continua de pH

(pH-Meter y Data Logger)
Cada da, el RUSITEC debe ser abierto para extraer las bolsas de comida que han estado en
fermentacin durante 48 horas y son sustituidas por nuevas bolsas. Las bolsas viejas, ricas en
bacterias celulolticas son lavadas para extraer la mayor cantidad de microorganismos y reinocular
el sistema. Adems de las bolsas de alimento se pueden utilizar bolsas ANKOM para medir la
degradacin de la fibra en forma especfica y diferenciada de la degradacin de la racin
alimenticia.
La saliva artificial (McDougall, 1948) funciona como buffer y como factor de dilucin de los
productos de la fermentacin, lo cual es muy importante ya que no existe otra manera de retirar
los AGV y el cido lctico, los acidificara el medio en exceso.

de r
los anlisis.
obtenidos.

Tipo de peligro
Como evitarlo

de un accidente.
137

Equipo RUSITEC de 8 tubos de fermentacin (espacio mnimo necesario 2
metros de ancho por 80 cms de fondo y 90 cms de altura)
El RUISTEC requiere de termostatos y motores elctricos y una fuente constante
de electricidad.
Tubos y gomas de repuesto para el RUSITEC
Campana de extraccin
Frascos de recoleccin Erlenmeyer (8 ms repuestos)
Tubos para frascos de recoleccin
Balones de gas metereolgicos (8 ms repuestos)
Bomba peristltica para 8 lneas
Tubos para bomba peristltica
Recipiente de 25 litros para saliva artificial
Tubos, tuercas y tornillos para dar mantenimiento al RUSITEC
Caja de herramientas
Tanque de CO2
Reactivos.
McDougall, 1948
Ingredientes
NaHCO3
Na2HPO4*12H2O
NaCl
KCl
MgCl2*6H2O
CaCl2*2H2O
1 litro
[g/L]
9.8
9.3
0.47
0.57
0.128
0.053
1 litro
[mEq/L]
117
26
8
8
0.2
0.3
Metodologa
Para saber ms.
138
para usted.
139
Prctica 20: Visitas a ranchos y plantas de

alimentos
Introduccin

de r
los anlisis.
obtenidos.

Tipo de peligro
Como evitarlo

de un accidente.

Reactivos.
Metodologa
140
Para saber ms.
para usted.
141
Bibliografa general
Adesogan, A. T., Owen, E. and Givens, D. I. (1998). A comparison between in vitro
digestibility, in situ degradability and a gas production technique for predicting the in vivo
digestibility of whole-crop wheat. In: In vitro techniques for measuring nutrient supply to
ruminants, pp. 33-35. (Eds. E.R. Deaville, E. Owen, A.T. Adesogan, J.A. Huntington and T.
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UK.
Blmmel, M. and Bullerdieck, P. (1997). The need to complement in vitro gas

production measurements with residue determinations from in sacco degradabilities to improve
the prediction of voluntary intake of hays. Animal Science, 64:1, 71-75.
Blmmel, M. and Orskov, E. R. (1993). Comparison of in vitro gas production and nylon
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Cone, J. W. (1998). The development, use and application of the gas production technique at
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Owen, A.T. Adesogan, J.A. Huntington and T. Lawrence). Occasional Publication No. 22 - British
Society of Animal Science. July, 1997, Reading. UK.
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143
Glosario de trminos
144
ndice
145

Manual de Practicas Bromatologia 2014

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Materia de origen animal, vegetal o mineral con alta densidad de

Alimento que se asigna a un animal para su consumo en 24 horas, no

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Se proporciona en el caso de rumiantes en forma de mezcla

Diferencia entre el peso de MS que se ingiere (MSI) y la materia seca

Dig. Verdadera = MSI (MSE Desechos metablicos) x 100

Prctica de suministro de alimentos

Interaccin de procesos fisiolgicos, metablicos que sufren los

Mtodo de recoleccin al azar que contenga las mismas

Primera muestra que se obtiene

Es la unin de varias muestras primas

Es la muestra que se manda a laboratorio

0-30 cm: incluye races de cultivos forrajeros

Conceptos populares de Forraje y Concentrado

El trmino forraje tiene diferentes significados para diferentes personas

Forraje es cualquier material vegetal que sirva de

Alimento balanceado elaborado en una fbrica de

Partes comestible de las plantas, excepto el grano

Material vegetal que sirve para alimentar a los

Concentrado es un alimento que contiene un alto porcentaje de

Los concentrados proteicos pudren ser tambin altos

Los concentrados energticos no contienen alta

Los pastizales naturales son sitios no adecuados

Son cosechados por el

Plantas cultivadas por el

Son residuos vegetales que pueden ser utilizados

Nomencaltura del NRC

National Research Council

Nombre cientfico (gnero y especie)

o Cambia el valor nutritivo:

Maz: amarillo o blanco

Parte Qu se come del alimento?

o Ensilado, acicalado, trituracin, deshidratacin

A mayor numero de cortes, menor % nutrimentos

Por reglamentacin gubernamental de cada pas

8 grupos (ver clasificacin NRC)

Clasificacin del Permite una clasificacin numrica (ver Tablas NRC)

Silo de maz, sorgo, triticale, alfalfa, rye grass

Granos y cereales: maz, trigo,

Harinas animales: H. de carne, sangre, hueso, pescado, pluma

Vitaminas hidrosolubles: Complejo B, Vit C

Silo de maz: Vegetal, Maz amarillos: , toda, ensilado, floracin,

Composicin de los alimentos

- Grupo de componentes alimenticios con la misma composicin

Incluye protenas, pptidos, amino cidos, aminas, amidas,