PRACTICAS DE FARMACOLOGA I

DEPARTAMENTO DE FARMACOLOGA
FACULTAD DE FARMACIA
UNIVERSIDAD DE SEVILLA

Prcticas de Farmacologa y Farmacoterapia I

VALORACIN DE LA
ACTIVIDAD PSICOTROPA
DE FRMACOS

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1. VALORACIN DE FRMACOS PSICOTROPOS

1.1. INTRODUCCIN
Los psicofrmacos son sustancias que deprimen, estimulan o alteran la naturaleza de la conducta y/o
de las reacciones emocionales y por ello son empleados en el tratamiento de las enfermedades
mentales.
Tanto en animales como en el hombre no existe un criterio nico que permita clasificar un frmaco
psicotrpico, siendo necesaria una verdadera batera de mtodos de estudio. Los mtodos de
investigacin bsica, aunque presentan un valor provisional dada la dificultad en la extrapolacin de
resultados obtenidos desde el animal de experimentacin hacia el hombre, permiten valorar
molculas seleccionadas con potencial aplicacin teraputica.
A continuacin se describen los mtodos principales.
1.1.1. Pruebas de Comportamiento general

Esquema de Irwin

En la valoracin preliminar de nuevos frmacos posiblemente activos sobre SNC ocupa un lugar
destacado el Esquema de Irwin. Su sencilla realizacin as como la suficiente validez de los datos
aportados hacen que su prctica sea de gran utilidad antes de proseguir la investigacin con pruebas
de mayor complejidad. El desarrollo de esta batera de ensayos quedara resumido en tres grandes
apartados:
Estudio de comportamiento (alerta, aseo, irritabilidad)
Estudio neurolgico (temblores, convulsiones, ataxia)
Estudios relacionados con el SNA (salivacin, hipotermia, midriasis)

Efecto de Doma

Animales naturalmente hostiles como el mono rhesus, pueden adquirir un comportamiento

normal, fciles de manejar, cooperativos, por accin de frmacos con accin tranquilizante.

Facilitacin de hipnticos.

Un efecto comn de los tranquilizantes mayores es la facilitacin de los hipnticos y de los

anestsicos generales que se pone de relevancia por la prolongacin de la actividad de los mismos.

Reaccin emocional.

En determinado espacio especialmente indicado para este tipo de experimentacin, caja de

campos, se valora la mayor o menor sensibilidad y adaptacin del animal ante las nuevas
circunstancias ambientales. Adems de observar la actividad motora desarrollada por el animal, es
til y sencillo anotar el nmero de defecaciones producidas.

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1.1.2. Actividad motora

La accin de frmacos tranquilizantes y relajantes musculares, activos a nivel central, puede
ser estudiada ensayando las modificaciones inducidas en modelos relacionados con la actividad
motora.

Actgrafos

La motilidad espontnea del animal se cuantifica mediante aparatos denominados actgrafos.

El ms sencillo consistira en una jaula ligera suspendida de un soporte cuyos movimientos
son registrados. Existen sistemas ms complejos compuestos de clulas fotoelctricas sensibilizadas
en relacin con la actividad del animal.

Trastornos de la marcha

Se registran los cambios producidos en la marcha del animal previamente impregnado con
determinado colorante en sus extremidades. Las marcas producidas presentaran ciertos cambios o
irregularidades cuando el animal sufre ataxia.

Prueba del cilindro rotatorio

Consiste en un cilindro con capacidad de giro segn determinadas condiciones previamente

establecidas. Se registra el tiempo que tarda en caer el animal.

Prueba de la chimenea

Se introduce el animal, ratn, en un tubo de vidrio con la cabeza hacia abajo, anotando el
tiempo que tarda en recobrar la posicin normal.

Estudio sobre cambios catatnico o catalpticos.

Molculas con accin neurolptica tienen la propiedad de producir en la animales un estado

caracterizado por la permanencia de los mismos en posiciones anormales.

Excitacin provocada

El estudio de agentes con posible accin anticonvulsivante puede realizarse estimulando

previamente al animal con frmacos como estricnina, picrotoxina o cardiazol, productores de
convulsiones de diferentes caractersticas, y ver la accin antagonista del frmaco en estudio.

Pruebas de traccin, evasin y curiosidad.

1.1.3. Ensayos sobre aprendizaje y memoria

Adems de los ensayos anteriormente citados, los estudios se pueden completar con otros test
neurofarmacolgicos relacionados con los cambios en conducta exploratoria y emocional.

Prueba del laberinto.

Los laberintos pueden ser de distinta complejidad e incluso introducir determinada recompensa.
Anotaramos el tiempo que tarda en encontrar la salida, as como el nmero de errores cometidos.
Previamente el animal habr sido sometido a un periodo de aprendizaje.

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Autoestimulacin

Esta tcnica consiste en implantar electrodos permanentes en determinados centros cerebrales del
animal y conectados a un dispositivo por el cual reciben determinadas descargas elctricas al
presionar una palanca. Los animales curiosamente reciben satisfaccin al autoestimularse. Algunos
frmacos alteran la velocidad de esas estimulaciones en distintas zonas del cerebro, como es el caso
del ratn y las anfetaminas o el gato y la morfina.
1.1.4. Reflejos condicionados

Respuesta de fuga y evitacin

El animal, normalmente rata, es colocado en una jaula cuya base recibe una descarga elctrica de
determinadas condiciones preestablecidas y algo dolorosas. Posteriormente, la rata es sometida a
una fase de aprendizaje ensendola a evitar la descarga pasando antes al compartimento prximo,
concretamente al observar determinada seal de aviso como puede ser un timbre o una luz. Este tipo
de ensayo son especialmente tiles en la valoracin de frmacos antidepresivos. Los animales por
tanto han de sufrir previamente determinada alteracin neurolgica que se aproxime a un posible
cuadro depresivo. Es til entonces utilizar el modelo de shock inescapable consistente en sesiones
diarias de descargas elctricas y que terminan generando en el animal un cuadro de estrs
emocional.
Este conjunto de pruebas son algunas de las que podran realizarse para valoracin de frmacos
activos sobre el SNC. No obstante el estudio completo, profundizando en su mecanismo de accin,
necesitara pruebas ms concretas y sofisticadas de tipo electrofisiolgico (EEG), bioqumico
(actividad sobre determinados enzimas, binding en receptores cerebrales) o anatomopatolgicos
1.2. MATERIAL Y MTODOS

1.2.1. Animales y sustancias ensayadas

Se toman dos grupos de ratones (n=12)
1. Grupo Control (vehculo, agua)
2. Grupo tratado con el frmaco psicodepresor- Diazepam (2mg/Kg)
A cada animal (uno por alumno) se le aplica, va i.p. 0.25 ml de las soluciones de los frmacos en
estudio. Mantendremos una secuencia de 15 min entre cada animal.
Pasados 30 min se procede a la valoracin de los cambios inducidos segn los tipos de test
propuestos. Las pruebas han de hacerse en silencio mximo, siendo imprescindible que la
manipulacin se intente realizar en idnticas condiciones para todos los animales.

Test de la curiosidad (Test de Boisier-Simon)

En primer lugar, cada animal, y segn la secuencia de aplicacin de 5 min, es colocado en el centro
de una plancha agujereada situada a 50 cm del suelo. Se contabiliza el nmero de veces que
introduce la cabeza de forma contundente en los orificios no valorndose aquellas realizadas
consecutivamente en el mismo orificio o en el borde de dicha plancha. Los resultados se anotarn
segn las observaciones obtenidas durante cada minuto, de los cinco que dura la prueba. Es decir,
representamos n de veces en un minuto durante 5 min, obtenemos por tanto 5 valores para cada
animal.

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Test de la Actividad Motora Espontnea (Actmetro)

El actmetro mide la motilidad del animal a travs de un sistema de sensores.

sensores Se contabilizar el
nmero de movimientos del animal mediante un actmetro.
actmetro Se contabilizarn intervalos de 5 minutos
(0-5, 5-10 y 10-15)
15) por un periodo total de 15 minutos.

Test
st de la Coordinacin Motora (Rota-Rod)
(Rota

Consiste en medir el tiempo que el animal es capaz de mantenerse sobre un cilindro que gira
a una velocidad constante de 5 r.p.m.
r m. Un frmaco que afecte a la coordinacin motora reducir este
tiempo.

Test de la Tracci
raccin (Julon-Courvoisier)

Utilizaremos un alambre horizontal del que colgaremos al ratn por las extremidades
anteriores. Anotaremos el tiempo que tarda en caer dentro del tiempo asignado a la prueba (120 s).
1.3. EXPRESIN DE RESULTADOS
1.3.1. Representacin grfica
Se calcula para cada grupo, y segn los resultados obtenidos en los distintos ensayos
realizados, la media error standard.
En el TEST DE LA CURIOSIDAD realizaremos un grfico en el cual representamos en
abscisas los minutos (de 1 a 5) que ha durado la prueba y en ordenadas los valores de las medias
( error) de los resultados obtenidos en cada minuto. Obtendremos dos tipos de respuesta
relacionados con los dos tratamientos a los que hemos sometido a los animales (grupo control y
grupo diazepam).

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Para el TEST DE LA TRACCIN calcularemos la media de los valores obtenidos con los dos
grupos ( error estndar) y los resultados los representamos en un grfico tipo histograma (grfico de
barras).
EST DE LA ACTIVIDAD MOTORA ESPONTNEA
TEST
Realizaremos
os un grfico en el cual representamos en abscisas los intervalos en minutos (0-5,
(0
5-10, 10-15
15 min.) que ha durado la prueba y en ordenadas los valores de las medias (error)
(
de los
resultados obtenidos en cada intervalo.

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Para el TEST DE LA COORDINACION MOTORA calcularemos la media de los valores

obtenidos con los dos grupos ( error estndar) y los resultados los representamos en un grfico tipo
histograma (grfico de barras

1.4. ANLISIS ESTADSTICO

El anlisis estadstico nos permite conocer si las diferencias observadas entre los resultados de
los dos grupos de animales son significativas o no. Si las diferencias fueran efectivamente
significativas podramos afirmar que diazepam disminuye la curiosidad y traccin de los animales.
an
Asimismo podramos asegurar que diazepam disminuye la actividad motora, ya que estas pruebas
evalan dicha capacidad.
Las diferencias que observemos a simple vista no tienen porqu ser significativas, es necesario la
realizacin de pruebas matemtico-estadsticas
matemti estadsticas que nos confirmen que todos los resultados de un
grupo se parecen entre s y que son distintos de los de otro grupo.
Los conceptos que vamos a manejar para ello son los siguientes:

Media:

 =  


Error estndar:

ES= n-1 / n

Desviacin estndar:

n-1 =    1

Grado de libertad:

g.l.= n-1

Debemos elegir correctamente la prueba de significacin ms adecuada para nuestro

experimento. El test adecuado para este tipo de prueba es el de la t de Student (seudnimo que
utilizaba el matemtico que describi por primera vez este tratamiento de los datos). Es muy til para
comparar dos grupos de datos, como en nuestro caso, en el que tenemos un grupo control y un
tratamiento. Mediante la siguiente frmula, comparamos
comparamos dos medias y las dos desviaciones standard:
Obtendremos una t calculada que comparamos en una tabla con la t terica para los mismos
grados de libertad. Al valor terico que se le asemeja, le corresponde un valor de probabilidad, p.

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Esta p, nos da la probabilidad de que nuestros valores no sean diferentes, es decir, que mientras ms
pequea sea mayor ser la probabilidad de que nuestra afirmacin sea correcta.
Generalmente no se da el valor exacto de p, sino que se agrupa de la siguiente manera:

p > 0.05:

valores no significativos

p<0.05: *
p<0.01: **

todos ellos significativos

p<0.001: ***

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GASTROENTEROPATA POR ANTIINFLAMTORIOS

NO ESTEROIDEOS (AINE)

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2. EVALUACIN DEL DAO DE LA MUCOSA GSTRICA POR DICLOFENACO

Los AINE son un grupo de frmacos ampliamente utilizados en clnica con interesantes
propiedades analgsicas, antiinflamatorias y antipirticas. Sin embargo, su efecto indeseable ms
significativo es el dao que provocan sobre la mucosa gstrica.
Para poder evaluar este efecto lesivo hemos administrado por va oral el frmaco en estudio,
diclofenaco (DC), a la dosis de 100 mg / Kg de animal.
2.1. Animales de experimentacin
Este estudio ha sido realizado con ratas Wistar de ambos sexos y de peso medio
comprendido entre 180-220 g, suministrados por el Centro de Produccin y Experimentacin Animal
de la Universidad de Sevilla, mantenidos en condiciones estndares de estabulizacin a 24-25 C, a
70-75% de humedad y sometidas a un rgimen de luz de doce horas al da y alimentacin controlada.
Veinticuatro horas antes de comenzar los ensayos, los animales fueron mantenidos en
ayunas, pero con libre acceso al agua, y se dispusieron en jaulas individuales, con rejillas altas en el
fondo para evitar la coprofagia.
El nmero de animales utilizado en el estudio ha estado comprendido entre 8-14/grupo.
Todos los protocolos llevados a cabo han seguido las recomendaciones de la Unin Europea
relativas a la experimentacin animal (Directiva del Consejo de Europa 86/609/CEE).
2.2. Sustancia ensayada y tratamiento
Se ha ensayado una dosis de diclofenaco (DC) de 100 mg/ kg de animal, en forma de
solucin de preparacin extempornea en agua destilada y administrada va oral (v.o.) por sonda
intragstrica (1 mL/ 100 g de animal).
2.2.1. Valoracin macroscpica del dao gstrico
Al finalizar el periodo establecido, 3 h, los animales son sacrificados con hidrato de cloral (24
% p/v), los estmagos son extrados, abiertos por la curvatura mayor y lavados con solucin salina
fisiolgica, procedindose a valorar el dao gstrico. Las lceras son medidas y el resultado final
2
expresado como superficie de estmago lesionada (mm ). La magnitud del dao tambin se evalu
de acuerdo con la siguiente escala:

No lesin.
Presencia de hiperemia y/o petequias.
1-5 lceras pequeas menores de 3 mm.
Ms de 5 lceras pequeas menores de 3 mm o una lcera mayor de 3 mm.
Varias lceras mayores de 3 mm.
lceras perforadas.

Los resultados obtenidos se expresaron como ndice de ulceracin (IU), y se compararon con
los de un grupo control que slo recibi el vehculo, 1 mL de agua destilada/ 100 g de animal.

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Dao macrocpico y microscpico inducido por Diclofenaco (tomado de Gut Liver. 2012
April; 6(2): 210217.
2.2.2. Procedimiento de obtencin y conservacin de las muestras
Tras la evaluacin del dao macroscpico, y para llevar a cabo los estudios mecansticos, los
estmagos fueron depositados en una placa sobre hielo y sometidos a un raspado con ayuda de un
porta objetos.
Las muestras son congeladas -80C hasta las determinaciones bioqumicas posteriores.
2.2.3. Preparacin de las muestras para los estudios bioqumicos
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Descongelar el tejido
Pesar 100 mg de tejido aprox.
Homogenizar en tampn pH 7.4 (dilucin 1/10), en frio
Agitar
Centrifugar 13.200 rpm, 20 min, 4C.
Nos quedamos con el sobrenadante donde determinaremos la actividad MPO y
niveles de NO por Reaccin de Griess.

2.3. Valoracin del infiltrado inflamatorio gstrico asociado al tratamiento con Diclofenaco.
Actividad Mieloperoxidasa (MPO)
Los neutrfilos estn involucrados en una serie de desrdenes gastrointestinales, entre los
que se incluyen las lesiones gstricas. Estos leucocitos migran al rea inflamada y se transforman en
clulas secretoras, liberando RLO, enzimas lisosomales, etc., y originando la reaccin tisular que
coadyuvar a la produccin del dao macroscpico (Bjarnason y col.,1993).
La determinacin de la actividad mieloperoxidasa (MPO), protena constitutiva de los
neutrfilos, es un mtodo para cuantificar el grado de infiltracin leucocitaria inflamatoria. Esta enzima
es liberada a los fluidos extracelulares, donde oxida a haluros y tiocianatos a los correspondientes

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cidos hipohalurosos (Klebanoff, 1988). Estos cidos reaccionan con los substratos disponibles,
disminuyendo as su reactividad y adems, participan en la gnesis de potentes oxidantes como las
cloraminas.
Para la medida de esta actividad enzimtica hemos seguido el mtodo propuesto por Bradley
y col. (1982), basado en la oxidacin, dependiente de H2O2, usado como donador de hidrgeno, de
un donador artificial de electrones, orto-dianisidina, con produccin de un cromgeno amarillo
anaranjado cuya absorbancia se mide espectrofotomtricamente.
H2O

H2O2

ORTOCROMOGENO

DIANISIDINA

COMPUESTO

=450 nm

MPO

El tiempo mximo para la determinacin de dicha enzima es de 2 semanas (-40 C), perodo
en el que se mantiene inalterada su actividad.

2.4. Protocolo de la determinacin de la Actividad de la Mieloperoxidasa (MPO) (Bradley y

col., Journal Investigative Dermatology, 78, 206-209,1982)

2.4.1. Determinacin espectrofotomtrica

Para la determinacin espectrofotomtrica, se realiza una dilucin previa (1:25) de las
distintas muestras en tampn fosfato potsico 50 mM pH 6.0. Una alcuota de 50 l de cada una de
ellas, se colocar en los respectivos pocillos de la microplaca. Posteriormente, se aaden 50 l de
cada uno de los reactivos: O-dianisidina (0.067%), HETAB (0.5%) y agua oxigenada al 0.003%,
consecutivamente.
A. Colocar en la microplaca las distintas muestras, segn el siguiente esquema (Fig.1):
1.
2.

En los pocillos de la columna 1, se colocan 50 L de las distintas MUESTRAS

CONTROL.
En los pocillos de la columna 2, se colocan 50 L de las distintas MUESTRAS DE
DICLOFENACO.
1
A
B
C
D
E
F
G
H

Blanco

CS1
CS2
CS3
CS4
CS5
CS6

2
Blanco
DC1
DC2
DC3
DC4
DC5
DC6

10

11

12

Fig. 1: Esquema de la colocacin de las distintas muestras en la microplaca

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B. Posteriormente se aade sobre las muestras los siguientes reactivos

1.

50 L de O-Dianisidina

2.

50 L de HETAB

3.

50 L de agua oxigenada (H2O2)

C. Lectura de la Absorbancia: despus de 5 min. se mide la absorbancia a 450 nm de longitud

de onda en el lector de placa
2.4.2. Reactivos
Preparar en el momento de usar, mantener en fro y en oscuridad.

En un matraz aforado preparar 25 ml de o-Dianisidina al 0.067 % p/v en agua

destilada (16.75 mg/25 mL). Posteriormente, se divide dicho volumen en dos tubos
falcon.

En un matraz aforado preparar 25 ml de HETAB 0,5 % p/v en tampn fosfato pH 6.0

(125 mg/ 25 mL). Posteriormente, se divide dicho volumen en dos tubos falcon.

En un matraz aforado preparar agua oxigenada 0.003% v/v (9,09 L /100 mL agua
destilada). Posteriormente, se divide dicho volumen en dos tubos falcon.

2.4.3. Expresin de los resultados

Los resultados finales de la prctica se expresan en Unidades de MPO/ mg tejido.
Las unidades (U) de actividad enzimtica son obtenidas por el incremento de la Absorbancia
( Abs450nm) producido por unidad de tiempo (1 minuto).
clculo:

Por tanto, para determinar las Unidades de MPO/ mg tejido hay que realizar el siguiente

Clculo de mg tejido:

100 mg tejido
1000 ul

1ul

50ul

= 0,2 mg tejido

25 ul

Volumen
Cantidad

Dilucin de

final

de tejido

la muestra

aadido al

pesado
Unidades de MPO / mg tejido:

pocillo
U MPO

0,2 mg tejido x Tiempo (5 min)

Se expresarn los resultados como la media de los valores obtenidos de las unidades de MPO
(media error) para los dos grupos: SC: control sano y DC: tratados con diclofenaco.

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2.5. Evaluacin de la produccin de xido ntrico (NO)

2.5.1. NO en la inflamacin.
En el tracto gastrointestinal, el NO participa en la modulacin del tono de las clulas
musculares lisas, tanto en la regulacin del peristaltismo intestinal como en el vaciado gstrico. En
condiciones fisiolgicas, el NO acta como un mediador endgeno en la reparacin y el
mantenimiento de la integridad de los tejidos, presentando propiedades gastroprotectoras contra
diferentes tipos de agentes agresivos. Sin embargo, altas concentraciones de NO estn relacionadas
con numerosos procesos patolgicos, incluyendo todas las enfermedades gastro-intestinales
inflamatorias crnicas, como la lcera pptica y lagastritis crnica, entre otras.
El NO es un radical libre gaseoso que en los mamferos se sintetiza a partir del aminocido L-arginina
por accin de la enzima NO sintasa (NOS). Se trata de una reaccin molecular compleja que necesita
oxgeno molecular y coenzimas como la tetrahidrobiopterina, NADPH, FAD y FMN. Como productos
de la reaccin aparecen el NO y L-citrulina. En condiciones aerobias, el NO se oxida
espontneamente formando metabolitos ms estables como son nitratos y nitritos. Este radical libre
gaseoso difunde fcilmente desde las clulas donde se produce a las clulas musculares lisas.

xido

NO 3

Ntrico
L-Arginina+ O

Sintasa

L-Citrulina+ NO
-

NADPH

FAD

NO 2

FMN
BH4

Fig. 1. Papel de la NOS en la generacin de NO

Existen tres isoenzimas de NOS: inducible (iNOS), neuronal constitutiva (nNOS) y endotelial
constitutiva (eNOS). Las isoenzimas constitutivas generan pequeas cantidades de NO (del orden de
nM), mientras que la isoforma iNOS produce cantidades mucho mayores (del orden de M) que
caracterizan algunos estados patolgicos en los que se induce la expresin de esta enzima. La iNOS
se expresa en macrfagos, hepatocitos, neutrfilos, musculatura lisa y clulas endoteliales en
respuesta a diversos estmulos inmunolgicos como el IF- o el TNF-. Tambin es inducido por el
propio lipopolisacrido bacteriano a travs de la activacin del NF-.

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Fig 2. Induccin de iNOS en leucocitos polimorfonucleares (neutrfilos y macrfagos)

2.5.2. Deteccin de la concentracin de NO

La determinacin del radical NO por s slo, es difcil debido a su naturaleza como radical y su
corta vida media. Por lo tanto, la medida de la produccin del radical NO se realiza mediante la
determinacin de productos finales del NO, nitratos y nitritos. Estas medidas se llevan a cabo con la
Reaccin de Griess, basada en la determinacin de nitritos.
Una alcuota de 10 l de muestra se adiciona a cada pocillo de una placa de ELISA. A
continuacin, se aaden 5 l de nitrato reductasa (10 U/ml), 5 l de tampn HEPES (0,5 M), 5 l de
FAD (0,05 mM), 5 l de NADPH (1 mM) y 20 l de agua destilada. Incubamos a 37 C durante 15
minutos.
Posteriormente se incorpora 5 l de lctico deshidrogenada (1500 U/ml) y 5 l de cido
pirvico (100 mM), con objeto de regenerar el NADPH consumido por la nitrato reductasa, se incuba a
37 C durante 5 min.
Se colocan 100 l de cada una de las muestras de la curva patrn en la columna 1.
Finalmente se aaden 100 l de Reactivo de Griess, y se incuba 5 minutos a temperatura
ambiente, realizando la determinacin espectrofotomtrica a 543 nm, en el lector de placas.
Los valores de nitritos se interpolan en la pendiente de la curva patrn elaborado y se
expresan como concentracin (M) de nitritos en plasma.

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Ejemplo distribucin de las muestras en la placa:

A
B
C
D
E
F
G
H

1
Blanco
P200
P100
P50
P25
P10
P5
P2,5

2
CS1
CS2
CS3
CS4
CS5
CS6
DC1
DC2

3
DC3
DC4
DC5
DC6

10

11

12

2.5.3. Resumen del Protocolo

1. Se aaden 10 l de los blancos y 10 l las muestras
2. Sobre las muestras se aaden: 5 l de nitratro reductasa, 5 l de tampn HEPES, 5 l de la
solucin de FAD, 5 l de solucin de NADPH y 20 l de agua destilada.
3. Se incuba a 37 C durante 15 minutos.
4. Se aaden sobre las muestras: 5 l de lactato deshidrogenasa y 5 l de solucin de cido
pirvico.
5. Se incuba a 37 C durante 5 minutos.
6. Se aaden 100 l de cada una de las muestras de la curva patrn: P200, P100, P50, P25,
P10, P5, P2.5
7. Se aade sobre todos los pocillos 100 l del Reactivo de Griess
8. Se incuba a temperatura ambiente durante 5 minutos
9. Determinacin espectrofotomtrica a 543 nm.

2.5.4. Expresin de los resultados

Los valores de nitritos se obtuvieron de una recta patrn previamente elaborada por regresin
lineal. Se expresan como concentracin (M) de nitritos en plasma.

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2.5.5. ESQUEMA CURVA DE PATRN PARA NITRITOS

200 L NaNO2
+

4800 L PBS

200 M

1000

L+1000

PBS

125 L+1125 L PBS

10 M

100 M

750 L+750 L PBS

125 L+1125 L PBS

5 M

50 M

375 L+375 L PBS

125 L+1125 L PBS

25 M

2.5 M

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