http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones/libros/710/extraccion.

pdf
http://www.microbial-systems.com/web/docs/Newsletter_Microbial_03.pdf
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones/libros/530/cap16.pdf
Colecta de la muestra
Foliolos jvenes y sanos de la hoja.
Homogeneizacin del tejido
El tejido foliar fue pulverizado con ayuda de nitrgeno lquido
En un tubo Epependorff de 1,5 mL se tom una cantidad aproximada de 500 mg de
tejido molido.
Lisis celular
Luego se agregaron 1,2 mL de solucin de extraccin caliente (Tris HCl 100 mM,
EDTA 50 mM, NaCl 500 mM, -mercaptoetanol 10 mM y PVP 1% [p/v]
Posteriormente se agregaron 85 L de SDS (dodesilsulfato de sodio) al 20%.

Degradacin de la fraccin proteica asociada al ADN. Se consigue mediante

la adicin de una proteasa.
Los tubos se incubaron en bao mara a 65C durante 30 min y luego se agregaron 390
L de acetato de potasio 5 M.
La mezcla se centrfug a 12.500 xg durante 15 min

Purificacin. Consta de 3 fases:

Precipitacin del ADN
El sobrenadante se transfiri a un tubo, al cual se adicion 1 mL de isopropanol Fro.
La mezcla se incub a 20 C durante toda la noche.
Despus se centrifug a 25.000 xg durante 30 min y se desech el lquido teniendo
cuidado de no perturbar el botn de ADN.

Lavado pellet ADN

El botn de ADN, se lav con 2 mL de etanol al 70% para luego centrifugarlo a 25.000 xg
durante 3 min.

Recuperacin:
Se dej secar el botn a temperatura ambiente y se le adicionaron 350 L de solucin TEARNasa (10 mM de Tris HCl a pH 8,0; 1 mM de EDTA a pH 8,0;
5 mg mL-1 de ARNasa)
Se incub a 37 C durante 15 min. El ADN obtenido se almacen a 4 C para su posterior
utilizacin.
Cuantificacin
Para la cuantificacin del ADN se utiliz un mtodo comparativo teniendo como patrn de
referencia un ADN genmico de tomate de concentracin conocida.
Se realiz una electroforesis en gel de agarosa al 0,7 % (p/v) en donde se coloc el ADN de
tomate a diferentes concentraciones,

El cual se compar con el ADN de las muestras. La concentracin de las muestras se

determin segn la intensidad de fluorescencia emitida por el bromuro de etidio.