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Prctica # 3
DIFUSIN Y SMOSIS
I.

Objetivos

Al final del laboratorio el estudiante debe ser capaz de:

II.

Describir el mecanismo de difusin a nivel molecular.

Describir el concepto de membrana permeable selectiva y explicar su papel en la smosis

Entender los conceptos de hipotnico, hipertnico e isotnico.

Discutir la influencia de la membrana celular sobre el comportamiento osmtico en las clulas.

Reconocer los procesos de difusin, smosis y dilisis en clulas vivas.

Entender los principios de actividad osmtica en las actividades diarias de una persona.

Explicar como la presin que ejercen las molculas favorece los procesos de la difusin y smosis

Introduccin

Cualquiera que sea la organizacin especfica de un ser vivo,

unicelular o pluricelular, procariota o eucariota, en sus clulas no
puede faltar la membrana celular. La membrana celular es la
estructura que separa al lquido intracelular (LIC) del extracelular
(LEC). Ella est formada por dos compuestos orgnicos: los
fosfolpidos y las protenas. Su estructura actual -fue propuesta en
1972 por S. Singer y G. L. Nicholson. Su modelo se conoce con el
nombre de mosaico fluido o mosaico de los lquidos. El modelo
de mosaico fluido explica que la membrana plasmtica consiste en
una bicapa lquida de molculas de fosfolpidos en donde estn
incluidas las protenas.
Las protenas de la membrana celular permiten el paso del medio intracelular (LIC) al medio extracelular
(LEC) y viceversa, de molculas pequeas ya sea en forma activa o pasiva, otras actan como receptoras de
seales como por ejemplo de hormonas; otras actan como sitios de fijacin para enzimas solubles y para el
citoesqueleto.
Es a travs de la membrana celular que se controla el transporte de materiales entre el lquido intracelular
(LIC) y el lquido extracelular (LEC), dado que ella es selectiva y semipermeable, pues impide que algunas
sustancias grandes como los lpidos y protenas la atraviesen fcilmente; pero permiten el paso de azcares
simples, oxgeno, dixido de carbono, agua, glicerol, urea y otras molculas. Este paso depende del tamao y
carga de las molculas y de la composicin de la membrana celular. Este transporte celular puede ocurrir por
procesos pasivos y activos.
Los transportes pasivos no requieren el aporte de energa celular (ATP), y las molculas se desplazan a favor
de una gradiente de concentracin: la sustancia se desplaza del sitio de mayor al de menor concentracin.
Entre los ejemplos estn la difusin, smosis, dilisis y difusin facilitada. La difusin es el movimiento de
partculas (tomos, iones y molculas) de una regin de alta concentracin a otra de menor concentracin,
puede ocurrir en presencia o no de una membrana celular.
La difusin permite los procesos de smosis y dilisis. La smosis desplaza el agua a travs de la membrana
celular desde un sitio de alta hacia otro de baja concentracin. Los procesos osmticos se denominan
plasmlisis y turgencia en los vegetales y en las clulas animales se llaman lisis y crenacin. De acuerdo con
la presin osmtica, las soluciones extracelulares se dividen en isotnicas, hipotnicas e hipertnicas.

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En las soluciones isotnicas, la concentracin de solutos en el lquido intracelular es igual a la concentracin

presente en el lquido extracelular. En las soluciones hipotnicas, el lquido que rodea a la clula tiene menor
concentracin de sustancias, ms agua y menos presin osmtica que el interior de la clula; por lo tanto, el
agua se difunde desde el exterior hacia el interior celular.
Las soluciones hipertnicas tienen mayor concentracin de solutos, menor cantidad de agua y mayor presin
osmtica que el LIC, esto provoca que el agua pase del interior al exterior de la clula.

III. Procedimiento
Durante la sesin de laboratorio se realizarn 5 experimentos donde se estudiaran distintos aspectos del
transporte de solutos y agua a travs de membranas. Para ello, el grupo de laboratorio ser dividido en 8-10
subgrupos de trabajo, con 3-4 estudiantes cada uno. Cada experimento ser ejecutado y analizado por dos
subgrupos.
Al finalizar los experimentos, se har una discusin de los resultados obtenidos. Cada subgrupo debe estar
preparado para discutir sus resultados

Experimento 1.- Tasa de difusin de solutos:

Los distintos solutos se mueven en el interior celular y en los espacios intercelulares a travs del proceso de
difusin. Sin embargo, la tasa de difusin (la distancia que recorre el soluto en un tiempo determinado) es
afectada por mltiple factores. El siguiente experimento demuestra el efecto del tamao molecular o la
concentracin en la tasa de difusin sobre un sustrato comn (gelatina). En este experimento la gelatina es
utilizada como sustrato permeable y por lo tanto simula el espacio citoplasmtico. Para calcular la tasa de
difusin utilizaremos la siguiente ecuacin:
Tasa de difusin = distancia (mm, cm) / tiempo (seg, min, hrs)
1. Describa brevemente su hiptesis de trabajo y prediga sus resultados
2. En su mesn de trabajo encontrar una caja de petri que contiene una capa fina (matriz) de gelatina clara
solidificada o agar (2%).
3. Con un tubo de ensayo pequeo, haga 3 pozos en la superficie de la matriz.
4. Agregue una gota de uno de los colorantes disponible a uno de los pozos (evite la formacin de burbujas.
Anote el tiempo.
5. Repita el procedimiento para cada colorante (un colorante para cada pozo).
6. Transfiera cuidadosamente la caja de petri sobre una hoja blanca, sin temblar o correr el colorante.
7. Cada 10 min, haga medidas de la distancia (dimetro) recorrida por el colorante.
8. Haga una grfica donde represente la distancia recorrida por cada colorante en funcin del tiempo
transcurrido.
9. Responda las preguntas especificadas en su reporte.

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Experimento 2.- smosis

1. Colecte 6 bolsas de dilisis que contienen agua destilada (dH2O) y sacarosa a distintas concentraciones
(0.2M, 0.4M, 0.6M, 0.8M y 1.0M).
2. Lave cuidadosamente cada bolsa con dH2O y seque el exceso de solucin
3. Pese cada una de las bolsas de dilisis
4. Coloque cada bolsa de dilisis en un envase con dH2O y espere 1 hora
5. Mientras espera, disee una hiptesis experimental y prediga el resultado
6. Retire las bolsas de dilisis y pselas nuevamente. Recuerde secar el exceso de solucin en la superficie
externa de la bolsa antes de pesar
7. Calcule la diferencia en pesos antes y despus de 1 hora y determine el porcentaje de cambio en el peso
de la bolsa de dilisis
8. Responda las preguntas especificadas en su reporte

Experimento 3.- Efecto de la presin osmtica sobre las clulas

(a) Plasmlisis en clulas vegetales
1. Sobre un portaobjetos coloque una gota de solucin de NaCl 0.9% (isotnica) y un fragmento de
epidermis de cebolla u hoja de Elodea. Cubra y observe al microscopio.
2. Haga un dibujo de la preparacin (rotule las estructuras observadas). Describa la apariencia de las clulas
que observa
3. Retire la preparacin del microscopio y agregue una gota de solucin de NaCl 5% (hipertnica) en uno
de los bordes del cubreobjetos. En el lado opuesto coloque un pedacito de papel absorbente para permitir
que la solucin hipertnica quede en contacto con las clulas. Observe al microscopio.
4. Haga un dibujo de la preparacin que ilustre los cambios observados en la apariencia de las clulas en
esta condicin experimental. Rotule las estructuras observadas

(b) Turgencia en clulas vegetales

1. En la misma preparacin, reemplace la solucin hipertnica por agua destilada siguiendo el mismo
procedimiento anterior. Observe al microscopio y explique los cambios que ocurren.
2. Haga un dibujo de la preparacin que ilustre los cambios observados en esta condicin experimental.
Rotule las estructuras observadas

Experimento 4.- Difusin de molculas a travs de membranas

semipermeable
1. Tome una bolsa de celulosa ya preparada que contiene una mezcla de 10% glucosa (180 g/mol), 0.5%
almidn (~200,000 g/mol) y 1.5% albmina. 45,000 g/mol).Registre el color de la bolsa de dilisis
2. Lave cuidadosamente la bolsa de dilisis con dH2O. Seque el exceso de solucin presente en la cubierta
externa de la bolsa
3. Pese la bolsa de dilisis y registre ste valor

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4. Llene un beaker de 150mL con 100 ml de agua
destilada y aada aproximadamente 5 ml de
solucin de Lugol
5. Tome una muestra de esta solucin colquelo en
un tubo de ensayo y agrguele reactivo de
Benedict (cuando le agrega el reactivo, caliente
la muestra con un mechero o bao de mara).
Registre el color

+
Almidn
+
Albmina

6. Coloque la bolsa de dilisis dentro de la solucin

de Lugol de forma que quede completamente
cubierta. Sujete la bolsa como se observa en la
figura 3. Anote el tiempo.
7. Disee una hiptesis de trabajo y una prediccin
de sus resultados. Disee el experimento control apropiado
8. Despus de 45 minutos, retire cuidadosamente la bolsa del beaker y colquela en un recipiente seco y
limpio. Observe y registre cualquier cambio en la coloracin de la solucin contenida en la bolsa de
dilisis y en la solucin en el beaker
9. Seque con una toalla el exceso de solucin en el exterior y pese la bolsa de dilisis. Calcule el porcentaje
de cambio en el peso de la bolsa de dilisis
10. Tome una muestra de la solucin del beaker y haga la prueba de Benedict nuevamente
11. Complete la tabla en el reporte.
12. En base a sus resultados, conteste las preguntas del reporte

Experimento 5.- Permeabilidad de la membrana: efecto del tamao

molecular y la polaridad de la solucin
El mecanismo mediante el cual un soluto presente entra a la clula desde el medio extracelular depende de la
polaridad del soluto y de su tamao molecular, entre otros
Concentracin y
Coeficiente
factores. Solutos no polares pasan directamente a travs de la
Nombre
del
alcohol
de
Particin
membrana plasmtica. Dentro de un grupo de compuestos
0.01
qumicamente relacionados (compuestos no polares) aquellos con 22 M Alcohol Metlico
(32.04
gr/mol)
mayor solubilidad en lpidos pueden entrar a la clula ms
0.03
rpidamente que aquellos compuestos similares pero con baja 8.5 M Alcohol Etlico
(46.07 gr/mol)
solubilidad en lpidos.
3 M Alcohol Proplico
0.13
En este experimento se observar el efecto del tamao molecular y (60.09 gr/mol)
la polaridad de un solvente en el grado de permeabilidad de la 1.1 M Isobutil Alcohol
0.18
membrana. Para ello utilizaremos cubos o cilindros de remolacha (74,12 gr/mol)
(Beta vulgaris) cuyas clulas contienen una gran cantidad de
1.1 M n Butil Alcohol
0.58
pigmento rojo denominado antocianinas. Cuando ocurre alguna
(74,12 gr/mol)
ruptura mecnica o qumica de la membrana plasmtica, el
0.38 M Amil-alcohol
2.00
pigmento es liberado. Como agentes disruptores de la membrana,
(88.15 gr/mol)
utilizaremos distintos alcoholes que dependiendo de su estructura
molecular, posee diferentes grados de solubilidad en lpidos y tamao molecular.
Como un ndice del grado de solubilidad lipdica utilizaremos el coeficiente de particin que mide la afinidad
relativa de la sustancia en un solvente orgnico y grasa (octanol) en funcin de la solubilidad en agua.

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Mientras mayor es su valor, mayor es la solubilidad en octanol y solventes grasos, y por lo tanto, menor es la
polaridad.
1. Corte cubos o cilindros de remolacha, de aproximadamente el mismo tamao. Lvelos muy bien con una
solucin de 0.9% NaCl, de forma de eliminar cualquier remanente de antocianina presente.
2. Limpie los muestras de remolacha cuidadosamente con papel toalla
3. Prepare 6 tubos de ensayos pequeos, limpios y secos. Dispense las siguientes soluciones:
Tubo 1: 6-10 ml de alcohol metlico (22 M)
Tubo 2: 6-10 ml de alcohol metlico (8.5 M)
Tubo 3: 6-10 ml de alcohol proplico (3 M)
Tubo 4: 6-10 ml de alcohol butlico (1.1 M)
Tubo 5: 6-10 ml de amil-alcohol (0.38 M)
4. Coloque un pedazo de remolacha en cada tubo de ensayo. Este corresponde al tiempo 0. Evite cualquier
perturbacin mecnica de los tubos
5. Registre el tiempo requerido para la liberacin de la antocianina en cada tubo de ensayo. Anote ste valor
en la columna tiempo en su hoja de datos
6. Calcule el coeficiente de penetracin para cada alcohol, dividiendo el tiempo (en minutos) entre su
concentracin
7. Haga una grfica que correlacione el coeficiente de penetracin en funcin del coeficiente de particin
para cada alcohol (ver cuadro anexo)