Cromatografa

Mtodo fsico de separacin usando una fase estacionaria y una mvil.

Proceso de Elucin.
La fase estacionaria tiene afinidad por alguno de los compuestos a separar.
Cuando el solvente entra a la columna se llama eluyente y cuando sale
eluato.
Dependiendo de la fase mvil, la cromatografa ser lquida o gaseosa.
Hay distintos tipos de cromatografa:
Slido lquido
Lquido lquido
Lquido gas
Slido gas
Mecanismos de interaccin del soluto con la fase estacionaria:
Adsorcin: queda en la superficie por fuerzas de VdW
De Reparto: se relaciona con la solubilidad.
Intercambio inico: electrosttica
Exclusin molecular: Por tamao, influye el peso molecular, se usa para
protenas.
Afinidad: Reacciona con UN analito, se usa para anticuerpos pero es
MUUUY caro.
Aspectos instrumentales (se usa un cromatograma)
Tm: tiempo muerto, se refiere al compuesto que no tiene afinidad, pasa
directo por la columna.
Velocidad de migracin: La columna debe permitir que se separen todos
los compuestos, los picks en el cromatograma no deben solaparse
Una buena separacin implica que los picks tengan forma de tringulo
issceles y separados.
La eficacia de la columna para separar dos compuestos depende de la
velocidad relativa con que fluyen las dos especies.

Las velocidades estn determinadas por la constante de equilibrio.

Parmetros de un cromatograma:
Tr = tr tm --- tiempo de retencin ajustado
Velocidad promedio de migracin del soluto: V= L/tr
Velocidad lineal promedio del movimiento de las molculas de la fase
mvil

=L/tm
Volumen de retencin, depende para cada analito Vr=tr*F
Factor de retencin o factor de capacidad k=(tr-tm)/tm

Medidas cuantitativas (igual q materia)

L=H*N L es el alto de la columna
La eficiencia aumenta cuando mayor es el N y menor es el H

2
H=
L

Definicin del H:

Donde: 4 =wb = base del tringulo issceles

Definicin del N:

N=16

tr
wb

( )

Variables experimentales:
Dimetro
Espesor del relleno
Factor de retencin
Velocidad fase mvil
Temperatura
Largo de la columna
La altura de la columna se relaciona con la velocidad de la fase mvil segn
la prxima ecc:

B
H= A+ +C

Donde los parmetros se relacionan:

A: caminos mltiples (preferentes)
B: difusin longitudinal
C: transferencia de materia
Resolucin de la columna:

Rs =

2t
w b1 +w b 2

A mayor resolucin, mayor separacin.

Factor de selectividad o retencin relativa
'

tr
t

'
r2