Tincin de Gram

Bacterias gram positivas deBacillus anthracis (bacilos morados) que producen una enfermedad
llamada Carbunco, encontrados en una muestra de lquido cerebroespinal. Si hubiera una especie
de bacteria gram negativa, aparecera de color rosa. El resto son los leucocitos que atacan la
infeccin.

Una tincin gram en la que se observa un mezclado deStaphylococcus aureus (coco gram positivo)
y Escherichia coli (bacilo gram negativo).

La tincin de Gram o coloracin de Gram es un tipo de tincin diferencialempleado

en bacteriologa para la visualizacin de bacterias, sobre todo en muestras clnicas. Debe
su nombre al bacterilogo dans Christian Gram(1853-1938), que desarroll la tcnica en
1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfologa celular bacteriana, como para
poder realizar una primera aproximacin a la diferenciacin bacteriana,
considerndose bacterias gram positivas a las que se visualizan de color morado,
y bacterias gram negativas a las que se visualizan de color rosa, rojo o grosella.
ndice
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1Metodologa
o

1.1Explicacin

2Teoras

3Pasos para realizar la tincin

4Bacterias resistentes a la tincin gram

5Utilidades

6Fundamentos de diferenciacin de gram positivo y gram negativo

7Factores que alteran la tincin de Gram

8Bibliografa

Metodologa[editar]

Recoger muestras.

Hacer el extendido con un palillo de madera.

Dejar secar a temperatura ambiente o fijarlas utilizando un mechero.

Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado tres veces
aproximadamente).

Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar un minuto.

Enjuagar con agua no directamente sobre la muestra

Agregar lugol y esperar un minuto aproximadamente.

Agregar alcohol acetona y esperar entre 5 y 30 segundos segn la concentracin

del reactivo (parte crtica de la coloracin). (las gram - se decoloran, las gram + no)

Enjuagar con agua.

Tincin de contraste agregando safranina o fucsina bsica y esperar un minuto.

Este tinte dejar de color rosado-rojizo las bacterias gram negativas.

luego lavar levemente con agua

Para observar al microscopio ptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de

inmersin.
Explicacin[editar]
El cristal violeta (colorante catinico) penetra en todas las clulas bacterianas (tanto gram
positivas como gram negativas) a travs de la pared bacteriana. El lugol es un compuesto
formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio) y Sl (Siulterio), los cuales
estn presente para solubilizar el yodo, y actan de mordiente, haciendo que el cristal
violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la clula bacteriana. El I 2 entra en las
clulas y forma un complejo insoluble en solucin acuosa con el cristal violeta..
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloracin, ya que en
la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos gram positivos no se
decoloran, mientras que los gram negativos s lo hacen.
Para poner de manifiesto las clulas gram negativas se utiliza una coloracin de contraste.
Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Despus de la

coloracin de contraste las clulas gram negativas son rojas, mientras que las gram
positivas permanecen violetas.
La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la tcnica. Sirve para hacer una
tincin de contraste que pone de manifiesto las bacterias gram negativas. Al trmino del
protocolo, las gram positivas se vern azul-violceas y las gram negativas, se vern rosas
(si no se hizo la tincin de contraste) o rojas (si se us, por ejemplo, safranina).
Esta importante coloracin diferencial fue descubierta por Hans Christian Gram en 1884.
En este mtodo de tincin, la extensin bacteriana se cubre con solucin de uno de los
colorantes de violeta de metilo, que se deja actuar durante un lapso determinado. Se
escurre luego el exceso de violeta de metilo y se aade luego una solucin de yodo, que
se deja durante el mismo tiempo que la anterior; despus se lava el portaobjetos con
alcohol hasta que ste no arrastre ms colorante. Sigue a tal tratamiento una coloracin de
contraste, como safranina, fucsina fenicada diluida, pardo Bismarck, pironin B o hasta
inclusive verde de malaquita.
Algunos microorganismos retienen el colorante violeta, an despus de tratarlos con un
decolorante, y el color no se modifica al aadir ste; otros pierden con facilidad el primer
tinte, y toman el segundo. Los que fijan el violeta, se califican de grampositivos, y los que
pierden la primera coloracin y retienen la segunda, de gramnegativos. Basndonos pues,
en la reaccin gram, podemos clasificar a los microorganismos en uno de los dos grupos.
Los colorantes de p-rosanilina son los que mejores resultados dan en la coloracin gram.
Los representantes ms usados de este grupo son violeta de metilo y violeta cristal o de
genciana. En realidad, violeta de metilo es el nombre atribuido al compuesto tetrametil-prosanilina.
El matiz de color de la p-rosanilina se intensifica al aumentar el nmero de grupos metilo
en la molcula; por consiguiente, de los tres grupos, el tono ms oscuro es la hexametil-prosanilina (violeta cristal), y el tinte ms ligero, la tetrametil-p-rosanilina (violeta de metilo).
Los nombres violeta de metilo 3R, 2R, R, B, 2B, 3B, etc., se refieren al nmero de grupos
metilo contenidos. La letra R indica matices rojos, y la letra B, tonos azules. El violeta de
cristal contiene seis grupos metilo, y se considera como el mejor colorante primario para
teir por el mtodo de Gram.
La facultad de las clulas para tomar la coloracin gram no es propia de toda sustancia
viviente, sino que se limita casi en absoluto a hongos y bacterias. As vemos que las
clulas de plantas y animales superiores no conservan la primera coloracin; los mohos se
tien con cierta irregularidad; los grnulos de micelios propenden retener el colorante. La
reaccin de Gram no es infalible ni constante; puede variar con el tiempo del cultivo y el pH
del medio, y quiz por otras causas.

Teoras[editar]

Un microorganismo gram positivo debe presentar una pared celular sana. El mismo
microorganismo, si sufre dao de la pared por una u otra causa, se vuelve gram negativo.
Esto indica la importancia de la pared para la retencin o el escape del colorante. Una
posible teora del mecanismo de tincin es la siguiente:
El colorante bsico entra al microorganismo, donde forma con el yodo una laca insoluble
en agua. El alcohol o la acetonaempleados para aclarar, deshidrata las paredes de los
microorganismos gram positivos, tratados con mordiente, y forma una barrera que la laca
no puede atravesar. En las clulas gram negativas, los lpidos de la pared (ms
abundantes que en las clulas grampositivas) se disuelven por este tratamiento, lo que
permite el escape del complejo de cristal violeta con yodo. Algunos autores objetan esta
teora, pero es indudable la importancia general de la pared celular.
Varias son las teoras emitidas para explicar el mecanismo de la tincin de Gram. Stearn
(1923) bas la suya en una combinacin qumica entre el colorante y las protenas de las
bacterias, Las protenas y aminocidos son cuerpos anfteros, esto es, tienen la facultad
de reaccionar con cidos y con bases, gracias a sus grupos amino y carboxilo; en
soluciones cidas, reaccionan con los cidos, y en soluciones alcalinas lo hacen con las
bases. De igual manera, comprobaron que la reaccin de tincin de las bacterias obedece
en gran parte a su contenido protenico; estos microorganismos se conducen como
cuerpos anfteros, al combinarse con colorantes cidos en soluciones cidas y con los
bsicos en medio alcalino. La combinacin con ambos tipos de colorante no se produce en
el punto isoelctrico. Como los microorganismos contienen ms de una protena, ese
punto no tiene un valor preciso y definido, sino que constituye ms bien una gama o escala
que comprende dos o tres unidades de pH. Segn Stern y Stearn, los microorganismos
grampositivos tienen una escala isoelctrica de pH inferior a la de los microorganismos
gramnegativos; y, a base de sus datos experimentales, deducen las siguientes
conclusiones:

Los microorganismos grampositivos pueden hacerse gramnegativos al aumentar la

acidez.

Los microorganismos gramnegativos pueden hacerse grampositivos al aumentar la

alcalinidad.

Los microorganismos de reaccin positiva a los colorantes cidos pueden hacerse

gramnegativos por aumentar la alcalinidad.

Los microorganismos de reaccin positiva a los colorantes bsicos pueden hacerse

gramnegativos por aumentar la acidez.

En la zona isoelctrica caracterstica de cada especie es muy escasa la tendencia

a retener cualquier colorante.

Parece estar bien demostrado que las protenas de las bacterias no son simples,
sino ms bien una dbil combinacin de sustancias protenicas con otras lipoideas o
grasas.

La materia grasa extrada de los microorganismos grampositivos difiere de la

obtenida de los microorganismos gramnegativos, en que la primera contiene una
proporcin mucho mayor de cidos no saturados que muestren gran afinidad por los
agentes oxidantes. Todos los mordientes (como el yodo) empleados en la coloracin
gram son oxidantes; su efecto, en general, consiste en dar a la sustancia oxidada un
carcter ms cido. Esto aumenta la afinidad de un microorganismo por los colorantes
bsicos.

El cambio de respuesta a la coloracin de Gram con el tiempo es propio, sobre

todo, de los microorganismos dbilmente grampositivos cultivados en los medios que
contengan sustancias capaces de fermentar, y cuya reaccin se vuelve cida en el
curso del desarrollo.

Gianni (1952) comprob que los microorganismos grampositivos Bacillus subtilis y Bacillus
anthracis tomaban negativamente el gram cuando los cultivos databan de dos a tres horas.
Luego se desarrollaba la sustancia grampositiva debajo de la pared celular, para invertir la
reaccin. Otra explicacin de la reaccin de Gram puede ser la posible existencia de una
capa exterior alrededor de un ncleo gramnegativo. Libenson y Mcllroy, han comunicado
que si la reaccin grampositiva depende de que se forme una combinacin compleja entre
los componentes de la coloracin de Gram y las protenas de la pared celular, sera de
esperar que las bacterias desintegradas por medios fsicos retuviesen este tinte, ya que
ese tratamiento no podra cambiar el carcter qumico de los materiales de dicha pared.
Por el contrario, los grmenes grampositivos desintegrados pierden su capacidad de
retener el colorante primario y toman negativamente el gram.
La pared celular de los microorganismos grampositivos y gramnegativos es permeable al
violeta cristal. Sin embargo, la de los primeros no lo es al complejo de yodo y colorante
formado en el interior de la clula. Los resultados experimentales obtenidos con una
difusin celular exenta de protenas, y la escasa solubilidad del complejo de yodo y violeta
cristal en alcohol y acetona, parecen sustentar la opinin de que la reaccin grampositiva
consiste esencialmente en la formacin, dentro de la clula, de una cantidad apreciable de
complejo de yodo y colorante difcil de eliminar con el disolvente. La pared celular de los
microorganismos grampositivos, a diferencia de la de los gramnegativos, sera
prcticamente impermeable al violeta cristal. Los microorganismos aparecern teidos
despus de tratarlos con violeta cristal, por ser absorbido el colorante en la superficie
externa de la pared celular, y el disolvente eliminar sin dificultad el complejo formado
despus del tratamiento con yodo.

Ni los grupos sulfhidrilo ni las protenas bsicas han influido especficamente en el

mecanismo del colorante de Gram. Libenson y Mcllroy han sostenido que la permeabilidad
de la pared celular al violeta cristal, la escasa solubilidad del complejo de yodo y colorante
en alcohol y acetona, y el libre acceso del disolvente al complejo constituido, son los
principales factores que intervienen en el mecanismo de esa coloracin.

Pasos para realizar la tincin[editar]

Los pasos que se han de seguir para realizar la tincin son los siguientes:
1) Se fija la muestra mediante calor.
2) Cristal Violeta (tie todas las bacterias, gram positivas y gram negativas) durante 1
minuto.
3) Se fija con Lugol, 1 minuto.
4) Se decolora con una mezcla de alcohol y cetona (los gram negativos se decoloran).
5) Safranina (colorante de contraste, que tie a los gram negativos), 1 minuto.
Los tiempos para aplicar cada colorante son orientativos. En la tincin, las gram positivas
se observarn de color azul-violeta, y las gram negativas de color rosa.

Bacterias resistentes a la tincin gram[editar]

Las siguientes bacterias de naturaleza grampositiva se tien como gramnegativas:

Mycobacterias (estn encapsuladas).

Mycoplasmas (no tienen pared).

Formas L (prdida ocasional de la pared).

Protoplastos y esferoplastos (eliminacin total y parcial de la pared,

respectivamente).

Utilidades[editar]
En el anlisis de muestras clnicas suele ser un estudio fundamental por cumplir varias
funciones:

Identificacin preliminar de la bacteria causal de una infeccin.

Utilidad como control calidad del aislamiento bacteriano. Los morfotipos

bacterianos identificados en la tincin de Gram se deben de corresponder con
aislamientos bacterianos realizados en los cultivos. Si se observan mayor nmero de

formas bacterianas que las aisladas hay que reconsiderar los medios de cultivos
empleados as como la atmsfera de incubacin.
A partir de la tincin de Gram pueden distinguirse varios morfotipos distintos:
Los cocos son de forma esfrica. Pueden aparecer aislados despus de la divisin celular
(micrococos), aparecer por pares (diplococos), formar cadenas (estreptococos), o
agruparse de manera irregular (estafilococos).
Los bacilos poseen forma alargada. En general suelen agruparse en forma de cadena
(estreptobacilos) o en empalizada.
Tambin pueden distinguirse los espirales, que se clasifican en espirilos (si son de forma
rgida) o espiroquetas (si son blandas y onduladas). Si por el contrario, poseen forma de
coma (o curvados) entonces se los designa vibrios.

Fundamentos de diferenciacin de gram positivo y gram

negativo[editar]
Los fundamentos de la tcnica se basan en las diferencias entre las paredes celulares de
las bacterias gram positivas y gram negativas
La pared celular de las bacterias gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglicano,
adems de dos clases decidos teicoicos: anclado en la cara interna de la pared celular y
unido a la membrana plasmtica, se encuentra el cido lipoteicoico, y ms en la superficie,
el cido teicoico que est anclado solamente en el peptidoglicano (tambin conocido
como murena).
Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las gram negativas es delgada, y se
encuentra unida a una segunda membrana plasmtica exterior (de composicin distinta a
la interna) por medio de lipoprotenas. Tiene una capa delgada de peptidoglicano unida a
una membrana exterior por lipoprotenas. La membrana exterior est hecha
de protena, fosfolpidoy lipopolisacrido.
Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tien diferencialmente debido a estas diferencias
constitutivas de su pared. La clave es el peptidoglicano, ya que es el material que confiere
su rigidez a la pared celular bacteriana, y las gram positivas lo poseen en mucha mayor
proporcin que las gram negativas.
La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloracin, se debe a que la
membrana externa de las gram negativas es soluble en solventes orgnicos, como por
ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglucano que posee es
demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se
form previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdindose la coloracin azulviolcea. Pero por el contrario, las gram positivas, al poseer una pared celular ms
resistente y con mayor proporcin de peptidoglicanos, no son susceptibles a la accin del
solvente orgnico, sino que este acta deshidratando los poros, cerrndolos, lo que impide

que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloracin azulvioleta.

Factores que alteran la tincin de Gram[editar]

Edad de la bacteria.

Errores del operador.

Uso de antibiticos

A pesar de la gran utilidad de la tincin de Gram, este mtodo debe ser valorado con
precaucin, ya que la reaccin puede variar segn la edad de las clulas (cultivos viejos de
bacterias grampositivas pueden perder capas de peptidoglicanos y teirse como gram
negativos) y la tcnica empleada (al decolorar por un tiempo muy prolongado se puede
correr el riesgo que bacterias gram positivas se tian como gram negativas). Por esta
situacin, junto a la muestra deben teirse controles con bacterias gram positivas (por
ejemplo Staphylococcus aureus) y gram negativas (por ejemplo, Escherichia coli).
https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Gram

Tincin de Gram
La tincin de Gram, tambin conocida como coloracin de Gram, es una tcnica de
laboratorio que se utiliza rutinariamente en los estudios microbiolgicos de las bacterias.
Fue diseada por Christian Gram, un cientfico dans, en el ao 1884. El objetivo de Gram
era conseguir una prueba con la que fuera posible diferenciar diferentes grupos de
bacterias para as poder estudiarlas y clasificarlas. La prueba result todo un xito y pronto
se convirti en una tcnica muy til no solo para el estudio de las bacterias, sino tambin
para poder identificarlas rpidamente en una infeccin yseleccionar el antibitico ms
adecuado para tratarla.
La tcnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de cualquier origen
(esputo, orina, pus, etctera) que supuestamente contenga bacterias no identificadas. Los
colorantes tien la pared de las bacterias de color morado y, tras unos minutos, se realiza
un lavado del colorante. Despus de eso puede que el colorante permanezca en la pared
bacteriana o que se haya ido. En el primer caso permanecera el color morado, y se
tratara de bacterias Gram positivas y, en el segundo, la pared tendra un color rosado, y
seran Gram negativas.
Estos dos grupos de bacterias son los pilares en los que se basa la clasificacin de la
ampla mayora de las bacterias. Cada uno de los grupos responde de forma diferente a
cada tipo de antibiticos, por eso es una tcnica til para seleccionar el frmaco
antimicrobiano inicial ante una infeccin. Hay que tener en cuenta que en ciertas
situaciones (como la sepsis) es muy importante iniciar un tratamiento antibitico adecuado
de forma precoz, por eso la tincin de Gram se pide de urgencia en muchas ocasiones.
La tincin de Gram tambin tiene ciertas limitaciones. Algunas bacterias no tienen pared,
como por ejemplo lasChlamidias, y no se podrn identificar, al igual que los virus. En esos
casos la tincin no colorear ningn germen. Otro aspecto negativo de la prueba es que no

puede identificar el tipo exacto de bacteria responsable de la infeccin. Para ello es

necesario realizar un cultivo microbiolgico que se acompaa siempre de un antibiograma
para estudiar de forma exacta el antibitico ms efectivo.

http://www.webconsultas.com/pruebas-medicas/tincion-de-gram-13399
LA TINCIN NDE GRAM
La tincin de Gram es uno de los mtodos de tincin ms importantes en el laboratorio bacteriolgico y con el
que el lector debe estar perfectamente familiarizado. Su utilidad prctica es indiscutible y en el trabajo
microscpico de rutina del Laboratorio de Microbiologa las referencias a la morfologa celular bacteriana
(cocos, bacilos, positivos, negativos, etc.) se basan justamente en la tincin de GRAM

Esta tincin se denominada as por el bacterilogo dans Christian Gram, quien la desarroll en 1844. Sobre la
base de su reaccin a la tincin de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, grampositivas y
gramnegativas (simplemente designan dos grupos morfolgicos distintos de bacterias).
Las bacterias gram-positivas y gram-negativas tien de forma distinta debido a las diferencias constitutivas en
la estructura de sus paredes celulares. La pared de la clula bacteriana sirve para dar su tamao y forma al
organismo as como para crear una barrera fsica contra el medio ambiente externo. El material de la pared
celular que le da rigidez es el peptidoglicano. La pared de la clula gram-positiva es gruesa y consiste en varias
capas interconectadas de peptidoglicano as como algo de cido teicoico. La pared de la clula gram-negativa,
por otro lado, contiene una capa mucho ms delgada, (solo una unidad de espesor) nicamente de
peptidoglicano y est rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolpidos, lipopolisacridos, y
lipoprotenas.
Las bacterias Gram + retienen el cristal violeta despus de la decoloracin y aparecen de color azul intenso. Las
bacterias Gram- no son capaces de retener el cristal violeta despus de la decoloracin, y son teidas de rojo
con el colorante de contraste safranina dando un color rosa suave.

La tincin de Gram es capaz de predecir el tipo de bacteria que est causando la infeccin, conocindolo La
diagnostica y la trata ms fcilmente. Los virus no pueden detectarse mediante tincin de Gram puesto que
carecen de la pared que capta el colorante.
EL MICROSCOPIO

Este instrumento, sirve para observar objetos muy pequeos, los cuales no pueden ser observados a simple
vista. O sea, el ojo humano, sin la ayuda de algn aparato, sera incapaz de ver estos objetos.

El microscopio ms utilizado, es el de tipo ptico. Este, asimismo, fue el primero en ser desarrollado. Este
microscopio, para su funcionamiento utiliza varias lentes, con las cuales se consigue ver un objeto amplificado,
en cuanto a su tamao real. Estos microscopios, funcionan por medio de la refraccin.

BIBLIOGRAFIA
- TINCIN DE GRAM Citado el 12 de septiembre de 2009

http://erikaquiceno.blogspot.mx/2009/09/tincion-de-gram-resumen.html

Tincin de Ziehl-Neelsen

Visualizacin de Mycobacterium tuberculosis usando la tincin de Ziehl-Neelsen.

La tincin de Ziehl-Neelsen es una tcnica de tincin diferencial rpida y econmica,

usada para la identificacin de bacterias cido-alcohol resistentes (BAAR) , como M.
tuberculosis o el gnero Apicomplexa (coccidios intestinales) entre otros. Fue descrita por
primera vez por dos mdicos alemanes: Franz Ziehl, un bacterilogo, y Friedrich Neelsen,
un patlogo.

Fundamento[editar]
Las paredes celulares de ciertas bacterias contienen cidos grasos (cidos miclicos) de
cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la
decoloracn con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes bsicos. Por esto se
denominan cido-alcohol resistentes. Las micobacterias como Mycobacterium tuberculosis
y M. marinum se caracterizan por sus propiedades de cido-alcohol resistencia. La
coloracin clsica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese
la pared bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar con agua,

provoca una nueva solidificacin de lo cidos grasos de modo que el colorante ya no

puede salir de las bacterias. Por otro lado, el calentamiento aumenta la energa cintica de
las molculas del colorante lo cual tambin facilita su entrada a las bacterias. Las bacterias
que resisten la decoloracin son de color rojo y las que no, se ven de color azul ya que se
utiliza azul de metileno como tincin de contraste.

https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Ziehl-Neelsen
Esta tincin demuestra la capacidad de bacterias teidas de resistir a la decoloracin
por cidos y alcoholes. Esto se correlaciona con su alto contenido en lpidos de su pared
celular y presencia de cidos miclicos que aumentan el carcter hidrfobo.
Mezcla en carbol-fuscina capaz de teir las clulas en caliente. El carbol facilita la
penetracin de fuscina en la envoltura celular.
Decolorante orgnico, mezcla de cido y alcohol.
Azul de metileno como colorante de contraste.
Los Bacilo Alcohol cido Resistente (BAAR) tras la unin de la fucsina, resisten el
tratamiento orgnico y se vern teidas de rosado/fuscia. El resto de las bacterias se
decolorarn y se contrastarn con azul de metileno.
El observar BAAR (+) en una muestra de esputo, no significa que esos bacilos sean
necesariamente de M. tuberculosis.

Citar
http://www.telmeds.org/atlas/bacteriologia/mycobacterias-nocardia-yactinomyces/muestra-de-esputo-baar-con-tincion-de-ziehl-neelsen/
mircoles, 8 de junio de 2011

Ziehl-Neelsen

La tincin de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una tcnica de

tincin diferencial rpida y econmica, para la identificacin de microorganismos
patgenos, por ejemplo M. tuberculosis.
Fue descrita por primera vez por dos mdicos alemanes, Franz Ziehl, un bacterilogo y
Friedrich Neelsen, un patlogo.

Fundamento
Las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen cidos grasos (cidos
miclicos) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la propiedad

de resistir la decoloracn con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes

bsicos. Por esto se denominan cido-alcohol resistentes. Las micobacterias como M.
tuberculosis y M. marinum y los parsitos coccdeos como Cryptosporidium se
caracterizan por sus propiedades de cido-alcohol resistencia. La coloracin clsica de
Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared
bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar con agua,
provoca una nueva solidificacin de lo cidos grasos de modo que el colorante ya no
puede salir de las bacterias. Por otro lado, el calentamiento aumenta la energa cintica
de las molculas del colorante lo cual tambin facilita su entrada a las bacterias. Las
bacterias que resisten la decoloracin son de color rojo y la que no se ven de color azul,
ya que se utiliza azul de metileno como tincin de contraste
Fundamento: los BAAR poseen una pared celular rica en lpidos y cidos carboxlicos
(cido miclico) que tienen la propiedad de unirse excepcionalmente fuerte al colorante
1rio (fuscina de Ziehl) cuando se usa el calor como mordiente. Una vez que se forma
este complejo colorante-pared, ni siquiera la accin conjunta del cido y del alcohol
pueden deshacerlo, ya que las paredes retienen el colorante en forma "resistente".

Tcnica
Se realiza el frotis. Se aplica el colorante 1rio sobre la muestra y se deja reposar. Luego
se emplea la llama de un mechero para calentar la muestra hasta la aparicin de
vapores blancos. El calor se emplea como mordiente, gracias al calor los lpidos de la
pared dejan pasar el colorante para que se combine con los cidos carboxlicos de la
pared, as se forma el complejo colorante-pared. Se deja reposar y se lava con agua. Las
bacterias que no han formado el complejo en su pared (no BAAR) no retendrn el
colorante, el exceso del mismo ser arrastrado por el agua. Se aplica el colorante 2rio,
se deja reposar y se lava con agua.
Coloracin en caliente (Tcnica de Ziehl-Neelsen): emplea el calor como mordiente
para formar el complejo colorante-pared. Es la tcnica recin descrita. La principal
desventaja consiste en que se puede llevar a cabo una decoloracin en caliente (tiempo
prolongado). Esta consiste en aplicar el decolorante cido-alcohol y luego calentar la
muestra, la capa lipdica se ablanda y el decolorante puede atravesar la pared celular
retirando el decolorante 1rio y revirtiendo el proceso de formacin del complejo
colorante-pared. Por esto se dice que la coloracin en caliente no brinda resultados
diferenciales.
Coloracin en fro (Tcnica de Kinyoun): utiliza un reactivo especial que adems de
fuscina agrega una [Fenol]. El fenol disuelve los lpidos de las paredes celulares
permitiendo que el colorante 1rio entre el contacto con los cidos carboxlicos y forme
el complejo cido-alcohol resistente. Esta tcnica permite obtener resultados
diferenciales ya que no es posible la decoloracin en caliente.
Publicado por Pedro en 19:19

http://estudiemedicina.blogspot.mx/2011/06/ziehl-neelsen.html

Tcnicas de tincin. Fundamentos

El tamao de la mayora de las clulas bacterianas es tal que resultan difciles de ver con el
microscopio ptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la clula y el medio
que la rodea, y el medio ms simple de aumentar el contraste es la utilizacin de colorantes.
Estos pueden emplearse para distinguir entre tipos diferentes de clulas o para revelar la
presencia de determinados constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas, cpsulas,
paredes celulares, centros de actividad respiratoria, etc.
Las clulas generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teirlas,
proceso llamado fijacin. Para bacterias, la fijacin por el calor es lo ms corriente, aunque
tambin puede fijarse con sustancias qumicas como formaldehido, cidos y alcoholes.
Despus de la fijacin, si se aade el colorante, no se producen ulteriores cambios
estruturales en el protoplasma. La fijacin se realiza habitualmente en clulas que han sido
fijadas sobre un portaobjetos, tratando despus ste con el agente fijador, y siguiendo
inmediatamente el proceso de tincin. La fijacin produce habitualmente el encogimiento de
las clulas; la tincin, por el contrario, hace que las clulas aparezcan mayores que lo que
son realmente, de manera que las medidas de las clulas que han sido fijadas o teidas no
pueden realizarse con mucha precisin.
La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos que tienen alguna afinidad especfica
por los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia son molculas
cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los constituyentes
celulares cargados negativamente, tales como los cidos nucleicos y los polisacridos cidos.
Ejemplos de colorantes catinicos son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina.
Otros colorantes son molculas cargadas negativameute (aniones) y se combinan con los
constituyentes celulares cargados positivamente, tales como muchas protenas. Esos
colorantes incluyen la eosina, la fucsina cida y el rojo Congo. Otro grupo de colorantes son
sustancias liposolubles; los colorantes de este grupo se combinan con los materiales lipdicos
de la clula, usndose a menudo para revelar la localizacin de las gotculas o depstos de
grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro Sudn.
Algunos colorantes teirn mejor slo despus de que la clula haya sido tratada con otra
sustancia qumica, que no es un colorante por s mismo. Esta sustancia se denomina
mordiente; un mordiente habitual es el cido tnco. El mordiente se combina con un
constituyente celular y lo altera de tal modo que ahora s podr atacar el colorante.
Si se desea simplemente incrementar el contraste de las clulas para la microscopa, son
suficientes los procedimientos simples de tincin. El azul de metileno es un buen colorante
simple que acta sobre todas las clulas bacterianas rpidamente y que no produce un color
tan intenso que oscurezca los detalles celulares. Es especialmente til para detectar la
presencia de bacterias en muestras naturales, puesto que la mayor parte del material no
celular no se tie.
La tincin negativa es el reverso del procedimiento de tincin usual: las clulas se dejan sin
teir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es el perfil
de las clulas. La sustancia utilizada para la tincin negativa es un material opaco que no
tiene afinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea las clulas, tal como
la tinta china (que es una suspensin de particulas de carbono coloidal) o la nigrosina (un

colorante negro insoluble en agua). La tincin negativa es un modo satisfactorio de aumentar

el contraste de las clulas en la microscopia ptica, pero su mxima utilidad est en revelar
la presencia de cpsulas alrededor de las clulas bacterianas.
Los mtodos de tincin son de gran utilidad, pero deben usarse siempre con precaucin, ya
que pueden conducir a errores. Las molculas de colorante forman en ocasiones precipitados
o agregados que parecen estructuras celulares autnticas, pero que son formaciones
completamente artificiales inducidas por el mismo colorante. Tales estructuras se denominan
artefactos, y deben tomarse muchas precauciones para tener la seguridad de que no nos
estamos equivocando al creer que un artefacto es una estructura realmente existente.

Preparacin de un frotis
Sobre un portaobjetos de vidrio, limpio y seco, se coloca una gota del material que se va a
teir (si es lquido) o se hace rodar el hisopo con que se tom la muestra. Una vez que el
hisopo ha tocado la superficie del portaobjetos, que no est estril, ya no puede ser
empleado para inocular los medios de cultivo. Puede usarse una aguja estril para transferir
una pequea cantidad de un cultivo bacteriano a la superficie del portaobjetos. Este material
es suspendido en una gota de agua o solucin salina previamente colocada sobre el
portaobjetos. Cuando se trata de colonias muy pequeas que pueden perderse en una gota
de lquido se emplea una varilla delgada de madera estril con la cual se toca la colonia
obtenindose as una fraccin apreciable del desarrollo. El material se frota directamente
sobre el portaobjetos, donde puede visualizarse con facilidad. El material colocado en el
portaobjetos se deja secar al aire o bien se pasa varias veces por la zona azul de la llama de
un mechero de Bunsen hasta que el vidrio est tan caliente que moleste al tacto pero no
queme.

Examen de muestras al microscopio

Segn la manipulacin que efectuemos sobre la muestra a observar y segn los colorantes
que empleemos durante el proceso, podemos hablar de diferentes modalidades de tincin.

Examen microscpico directo de las muestras clnicas

Sin Tincin

No se utiliza ningn tipo de colorante.

Es el montaje directo hmedo o examen en fresco: las
muestras se extienden directamente sobre la superficie de
un portaobjetos para su observacin. El material que es
demasiado espeso para permitir la diferenciacin de sus
elementos puede diluirse con igual volumen de solucin
salina fisiolgica estril. Se deposita suavemente un
cubreobjetos sobre la superficie del material.

Este tipo de preparacin se emplea para detectar trofozotos mviles de parsitos intestinales
como Giardia,Entamoeba, huevos

y quistes de

otros parsitos,

larvas

y gusanos

adultos, Trichomonas, hifas de hongos, etc

En la imagen: Candida sp en un examen en fresco.

Examen microscpico de las muestras clnicas levemente modificadas

Tincin Simple
Se utiliza un solo colorante, por lo que todas las
estructuras celulares se tien con la misma tonalidad
(Tinta china, Azul Metileno de Loeffler, Azul de lactofenol).
El Hidrxido de potasio al 10% (solucin de KOH) permite
ver

elementos

de

hongos

ya

que

el

KOH

digiere

parcialmente los componentes proteicos, por ejemplo de

la clula husped, pero no acta sobre los polisacridos de
las paredes celulares de los hongos.
La

tinta

china

Nigrosina

permite

observar

clulas

levaduriformes

capsuladas

(Cryptococcus), sobre todo en LCR. Los polisacridos capsulares rechazan la tinta china y la
cpsula aparece como un halo claro alrededor de los microorganismos. Azul de metileno de
Loeffler puede agregarse a las preparaciones en fresco de heces para observar la presencia
de leucocitos.
En la imagen: Cryptococcus neoformans en una tincin con tinta china.

Examen microscpico de las muestras clnicas muy modificadas

Diferencial

Tincin

Se utilizan varios colorantes combinados. Las estructuras

celulares se diferencian en funcin de los diferentes
colorantes que fijan de acuerdo con su propia constitucin
qumica.
Los ejemplos clsicos sera la tincin de GRAM o la de
Ziehl-Neelsen
En la imagen: BGN y levaduras en una tincin GRAM

microfotografa: Daniel Val

Examen de muestras al microscopio: la tincin GRAM

La tincin de Gram es uno de los mtodos de tincin ms importantes en el laboratorio
bacteriolgico y con el que el estudiante debe estar perfectamente familiarizado. Su utilidad
prctica es indiscutible y en el trabajo microscpico de rutina del Laboratorio de Microbiologa
las referencias a la morfologa celular bacteriana (cocos, bacilos, positivos, negativos,
etc) se basan justamente en la tincin de GRAM
Descripta en forma breve, la secuencia de la tincin es la siguiente: el Frotis fijado con calor
se tie 1 min con Violeta Cristal, se lava con agua, se cubre con solucin Yodada durante 1
min y se lava de nuevo con agua, decolorar con mezcla
alcohol etlico/acetona. Escurrir y cubrir con Safranina
(color de contraste) durante 20 seg. Lavar y secar.
Esta tincin se denominada as por el bacterilogo dans
Christian Gram, quien la desarroll en 1844. Sobre la base
de su reaccin a la tincin de Gram, las bacterias pueden
dividirse en dos grupos, grampositivas y gramnegativas
(en este caso, los trminos positivo y negativo no tiene
nada que ver con carga elctrico, sino simplemente designan dos grupos morfologicos
distintos de bacterias).
Las

bacterias

gram-positivas

gram-negativas

tien

de

forma

distinta

debido

las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. La pared de la

clula bacteriana sirve para dar su tamao y forma al organismo as como para prevenir la
lisis osmtica. El material de la pared celular bacteriana que confiere rigidez es el
peptidoglicano. La pared de la clula gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas
interconectandas de peptidoglicano as como algo de cido teicoico. Generalmente, 80%90% de la pared de la clula gram-positiva es peptidoglicano. La pared de la clula gramnegativa,

por

otro

lado,

contiene

una

capa

mucho

ms

delgada,

nicamente

de

peptidoglicano y est rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolpidos,

lipopolisacridos, y lipoprotenas. Slo 10% - 20% de la pared de la clula gram-negativa es
peptidoglicano.
Debido a su importancia en taxonoma bacteriana y a que indica diferencias fundamentales
de la pared celular de las distintas bacterias, describiremos aqu con algn detalle la tincin
de Gram y las interpretaciones que actualmente se hacen sobre el porqu de su
funcionamiento.
Las clulas fijadas al calor sobre un portaobjetos se tien, primero con una solucin de cristal
violeta (otros colorantes bsicos no son tan efectivos) y son lavadas despus para quitar el
exceso de colorante. En este estado, todas las clulas, tanto las grampositivas como las
gramnegativas, estn teidas de azul.
El portaobjetos se cubre entonces con una solucin de yodo-yoduro potsico. El ingrediente
activo es aqu el I2; el KI simplemente hace soluble el I 2 en agua. El I2 entra en las clulas y

forma un complejo insoluble en agua con el cristal violeta. De nuevo tanto las clulas
grampositivas como las gramnegativas se encuentran en la misma situacin.
Se lleva a cabo despus la decoloracin, usando una mezcla de alcohol-acetona, sustancias
en las que es soluble el complejo I 2-cristal violeta. Algunos organismos (grampositivos) no se
decoloran, mientras que otros (gramnegativos) lo hacen. La diferencia esencial entre esos
dos tipos de clulas est por tanto en su resistencia a la decoloracin; esta resistencia se
debe probablemente al hecho de que en el caso de bacterias gram-negativas, la mezcla de
alcohol/acetona es un solvente lipdico y disuelve la membrana exterior de la pared de la
clula (y tambin puede daar la membrana citoplsmica a la que se une peptidoglicano). La
delgada capa de peptidoglicano es incapaz de retener el de complejo cristal violeta-yodo y la
clula se decolora. Las clulas grampositivas, a causa de sus paredes celulares ms espesas
(tienen ms peptidoglicano y menos lpido), no son permeables al disolvente ya que ste
deshidrata la pared celular y cierra los poros, disminuyendo as el espacio entre las molculas
y provocando que el de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado dentro de la pared
celular.

Despus

de

la

decoloracin

las

clulas

grampositivas son todava azules, pero las gramnegativas

son incoloras.
Para poner de manifiesto las clulas gramnegativas se
utiliza una coloracin de contraste. Habitualmente es un
colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina
bsica. Despus de la coloracin de contraste las clulas
gramnegativas son rojas, mientras que las grampositivas
permanecen azules.
Deben destacarse algunos aspectos cruciales de la tincin de Gram:
1) El tratamiento con cristal violeta debe preceder al tratamiento con yodo. El yodo por s
solo tiene poca afinidad con las clulas.
2) La decoloracin debe realizarse con poca agua para evitar que pierdan la tincin las
clulas grampositivas. EI proceso de decoloracin debe ser corto y es esencial un clculo
preciso del tiempo para obtener resultados satisfactorios.
3) Cultivos ms viejo de 24 horas pueden perder su habilidad de retener el complejo cristal
violeta - yodo.
El carcter de grampositivo no es siempre un fenmeno del todo o nada. Algunos organismos
son ms grampositivos que otros y algunos son gram-variables, es decir, unas veces
grampositivos y otras gramnegativos.

Morfologa ultramicroscpica de las bacterias:

estructuras internas

Pared celular
Debajo de las sustancias extracelulares, como son las cpsulas y cubiertas mucilaginosas, y
en la periferia de una delicada membrana que est en inmediato contacto con el citoplasma,
se encuentra la pared celular, que es una estructura rgida que da forma a la clula. Las
paredes celulares pueden destruirse o romperse en condiciones especiales.
Constituyentes importantes de la pared celular son los aminocidos, aminoazcares,
azcares y grasas. Estas sustancias (protenas, Hidratos de carbono, grasas) estn enlazadas
formando el polmero complejo que forma la pared celular.
Entre los constituyentes de la pared celular de las bacterias Gram-positivas y Gramnegativas existen importantes diferencias. Por ejemplo, las paredes de las bacterias grampositivas contienen menos aminocidos que las gram-negativas; el contenido graso es
mucho ms elevado en las gram-negativas que en las gram-positivas. Este hecho se ha
propuesto como explicacin del mecanismo de la reaccin al gram (ver las dos imgenes
juntas).
Bacteria Gram Positiva

Bacteria Gram Negativa

Tiene una capa gruesa de peptidoglicano

Tiene una capa delgada de peptidoglicano

(mureina) y dos clases de cidos teicoicos.

(mureina) unida a una membrana exterior

cido Lipoteicoico que est en la superficie,

por lipoprotenas. La membrana exterior

empotrado en la capa de peptidoglicano y

est hecha de protena, fosfolpido y

unido a la membrana citoplsmica. Y cido

lipopolisacrido. En el lipopolisacrido, la

teicoico

la

porcin de lpido est embebida en el

superficie y se une slo a la capa de

de

la

pared

que

est

en

fosfolpido y el antgeno O polisacrido

peptidoglicano. El cido Teicoico es el

est en la superficie. El lpido se llama

responsable del determinante antignico

Lpido

del organismo.

lipopolisacrido

es

txico,

entero

pero
se

el

llama

Endotoxina. La pared de la clula tiene

poros llamado Porines para el transporte
de substancias de peso molecular bajo.
Entre la membrana citoplsmica y la
pared celular hay un espacio periplsmico
con

enzimas

hidrolticas,

enzimas

inactivadoras de antibiticos y protenas

de transporte.

Tambin existen diferencias en la composicin de la pared entre las clulas de las diversas
especies.

Membrana Citoplsmica (citoplasmtica o protoplasmtica)

Inmediatamente debajo de la pared celular, existe una membrana fina, o envoltura, que se
denomina membrana citoplsmica o protoplsmica y est formada por una bicapa de
fosfolpido integral y protenas perifricas empotradas. La membrana citoplsmica tiene una
significacin funcional de suma importancia. Se trata de una membrana semipermeable,
selectiva, que controla el paso de los elementos nutritivos dentro de la clula y la salida de
los productos de desecho. Tiene enzimas respiratorias y durante la divisin celular el
cromosoma se une a la membrana de la clula en el sitio llamado Mesosoma.

Citoplasma
El material celular contenido dentro de la membrana citoplsmica puede dividirse en tres
partes, regin citoplsmica, de apariencia granular, la cual es rica en RNA, regin nuclear o
cromatnica, que es rica en DNA, y la parte lquida que mantiene disueltos los elementos
nutritivos.

El

RNA,

combinado

con

protenas,

forma

partculas

corpsculos

macromoleculares, de unos 200 A de dimetro, que forman una masa densa y compacta en
todo el citoplasma. Estas partculas de RNA-protena se denominan ribosomas, y son el
equivalente en las bacterias de los microsomas, o partculas que se encuentran en las clulas
animales y vegetales.

Estructuras Citoplasmticas
Nucleoide (cuerpo cromatnico)
Las clulas bacterianas no contienen el ncleo caracterstico de las clulas de las plantas y
animales superiores. Sin embargo, contienen en el citoplasma "cuerpos" que se consideran
como una estructura nuclear, el ADN de la clula bacteriana se encuentra confinado en este
espacio, es nico y circular, doble hlice sin protenas. Como no se trata de un ncleo
discreto, se ha sugerido que se d a estas estructuras las denominaciones de cuerpo
cromatnico, nucleoides, equivalentes nucleares, y aun cromosomas bacterianos. Se
demuestra con el mtodo de tincin de Feulgen, especfico para el DNA, y por microscopia
electrnica, porque la sustancia nuclear es menos densa que el citoplasma cincundante.
Ribosomas
Tienen estrecha relacin con la sntesis de protenas (30S y 50S para formar un complejo
70S).

Plsmidos
Lazos extracromosmicos de ADN, algn cdigo para la resistencia a drogas, toxinas y otros
factores.
Endosporas
Algunas bacterias pueden transformarse en pequeos ovoides o esferas, que son formas
celulares muy resistentes, denominadas esporas, o endosporas, porque se producen
intracelularmente.

Todos

los

organismos

de

los

gneros Bacillus y Clostridium se

caracterizan, en parte, por su propiedad de producir esporas. Tambin tienen esta propiedad
otros gneros de bacterias verdaderas, pero slo en casos aislados. Las bacterias capaces de
esporular pueden crecer y reproducirse en forma de clulas vegetativas durante muchas
generaciones. Sin embargo, en cierto perodo del desarrollo del cultivo en medio nutritivo
apropiado, se produce, dentro del citoplasma, la sntesis de nuevo protoplasma destinado a
transformarse en espora.

Tincin GRAM: Morfologa Bacteriana

Ya hemos visto que la tincin de GRAM aporta dos ideas bsicas para la deficinin
"taxonmica" de las bacterias: el color que adquieren tras la tincin y la forma que presentan
las clulas bacterianas.
En lo relativo a la coloracin, ya hemos explicado anteriormente que hablamos de
microorganismos Gram-positivos cuando aparecen teidos de color azul-violeta y de Gram
negativos cuando se visualizan de color rojo-rosado.
Formas bsicas en que se puede visualizar la morfologa bacteriana en una tincin GRAM:

Cocos
Micrococos, aparecen aislados y dispersos tras la divisin celular. Diplococos, aparecen por
pares. Estreptococoss, tienden a unirse formando cadenas. Estafilococos, aparecen en
grupos irregulares, a veces de gran tamao

form

Divisin a lo largo del

Divisin a lo

mismo plano, formando

largo de 2

esfr

cadenas cortas

planos

ica:
se
llam

Divisin a lo largo de 3
planos

diferentes:
2 cocos

4 - 20 en

juntos:

cadenas:

Ttradas

regularmente

irregularmen

: Sarcinas

te:

Diplococo
a Coco

Estreptococos

Estafilococos

Bacilos
grandes variaciones morfolgicas: fusiformes, estreptobacilos, cocobacilos

Forma de

Dos bacilos

Cadenas de

vara: se

juntos:

bacilos:

llaman Bacilos

Diplobacilos

Estreptobacilos

Empalizadas,
Bacilos lado con
lado o en figuras
en X, V o Y

Espirales (Treponemas, Borrelias ...)

Forma espiral rgida se

Si la espiral es flexible y ondulada

llama: Espirilo

se llama: Espiroqueta

Utilizamos el trmino Pleomorfismo para referirnos a la adopcin de diferentes formas en una

misma especie.

Tincin GRAM: Bacterias Gram-Positivas

Cocos Gram-positivos
Racimos:

forma

tpica

de Staphylococcus sp, como S. aureus

Cadenas: forma tpica de Streptococcus

sp,

como S.

pneumoniae,Streptococcus grupo B

Tetradas: forma tpica de Micrococcus

sp

Bacilos Gram-positivos
Gruesos:

forma

tpica

de Clostridium

sp,

como C. perfringens, C. septicum

Finos: forma tpica de Listeria sp

Ramificados:

forma

de Actinomycetes y Nocardia,
israelii

tpica
como A.

grficos obtenidos de: http://www.uphs.upenn.edu/bugdrug/antibiotic_manual/gram.htm

Tincin GRAM: Bacterias Gram-Negativas

Cocos Gram-negativos

Diplococos: forma usual de Neiseria sp, como N.

meningitidis
Tambin Moraxella

sp y Acinetobacter

sp aparecen con morfologa de diplococos.

Acinetobacter puede ser pleomrfico, y a veces
aparece como coco Gram-positivo.

Cocobacilos: forma usual de Acinetobacter sp,

que puede ser Gram-positivo o Gram-negativo,
y, a menudo, Gram-variable.

Bacilos Gram-negativos

Bacilos

finos:

forma

usual

de

enterobacteriaceae, como E. Coli

Cocobacilos:

forma

usual

sp,

como H.

de Haemophilus
influenzae

Curvados: forma usual de Vibrio sp,

como V. cholerae, yCampylobacter
sp, como C. jejuni

Forma

de

aguja

fina:

forma

usual

de Fusobacterium sp

grficos obytenidos de: http://www.uphs.upenn.edu/bugdrug/antibiotic_manual/gram.htm

Otras tinciones de uso habitual

RODAMINA-AURAMINA
Los cidos miclicos de las paredes celulares de las micobacterias poseen afinidad para los
fluorocromos auramina y rodamina. Estos colorantes se fijan a las bacterias, que aparecen
de color amarillo o naranja brillante contra un fondo verdoso. El permanganato de potasio,
empleado como contraste, evita la fluorescencia inespecfica. Todos los microorganismos
cido-alcohol resistentes, incluyendo los esporozoarios parsitos, se tien con estos
colorantes.
Un aspecto importante de la coloracin rodamina-auramiria es que luego los frotis pueden
ser reteidos con la coloracin de Ziehl-Neelsen o Kinyoun directamente sobre la tincin con
el fluorocromo, si se elimina antes el aceite de inmersin. De esta forma, los resultados
positivos pueden ser confirmados con las coloraciones tradicionales, que adems permiten la
diferenciacin morfolgica.

NARANJA DE ACRIDINA
El fluorocromo naranja de acridina se une al cido nucleico ya sea en su forma nativa o
desnaturalizada. En algunas preparaciones de naranja de acridina, el color de la fluorescencia
puede variar, dependiendo del pH y de la concentracin. El naranja de acridina ha sido
empleado como colorante vital, que da una fluorescencia verde si el microorganismo est
vivo y roja si est muerto. De todos modos, como el colorante se intercala en el cido
nucleico, el germen viable se inactivar poco tiempo despus de la tincin.
El uso de naranja de acridina para detectar la presencia de bacterias en los hemocultivos ha
sido ampliamente aceptado. De hecho, una gran cantidad de estudios han demostrado que la
tincin de hemocultivos con naranja de acridina es tan sensible como el subcultivo ciego para
la deteccin inicial de hemocultivos positivos.

ZIEHL-NEELSEN (BAAR)
Las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen cidos grasos (cidos
miclicos) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la propiedad de
resistir la decoloracn con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes bsicos. Por
esto se denominan cido-alcohol resistentes. Las micobacterias como M. tuberculosis y M.
marinum y

los

parsitos

coccdeos

como Cryptosporidium se

caracterizan

por

sus

propiedades de cido-alcohol resistencia. La coloracin clsica de Ziehl-Neelsen requiere

calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras.
Se ha desarrollado una coloracin de cido-alcohol resistencia modificada que diferencia las
especies de Nocardia (bacterias ramificadas filamentosas cuyas paredes celulares contienen
cidos-grasos de unos 50 tomos de carbono), de los actinomiceos (muy semejantes pero no
cido-alcohol resistentes).Nocardia spp son decoloradas por la mezcla cido-alcohol
estndar pero no por un tratamiento ms suave con cido sulfrico 0,5 a 1%. Estos
microorganismos se denominan cido-alcohol resistentes parciales o dbiles.

El frotis se tie durante unos 5 min con Carbolfucsina aplicando calor suave. Lavar con agua.
Decolorar con alcohol etlico 95% con un 3% de ClH concentrado. Lavar y teir durante 3060 seg con Azul de Metileno (color de contraste). Lavar y secar

BLANCO DE CALCOFLOR
Las paredes celulares de los hongos fijan el colorante blanco de calcoflor aumentando
considerablemente su visibilidad en los tejidos y otras muestras. Segn fue descrito por
Hageage y Harrington, este colorante se emplea en lugar de KOH al 10% para el examen
inicial de los materiales clnicos. Tambin se emplea para aumentar la visualizacin de los
elementos morfolgicos de los cultivos puros de los hongos. En algunos laboratoros ha
suplantado al azul de lactofenol en muchas aplicaciones. Los organismos fluorescen con luz
blanco-azulada o verde manzana, segn la fuente luminosa que se utilice.

TINCIN DE ESPORAS (WIRTZ-CONKLIN)

Algunos gneros bacterianos, entre los que destacan Clostridium y Bacillus,
producen en su interior formas de resistencia denominadas endosporas. Se producen cuando las
condiciones ambientales son desfavorables (agotamiento de los nutrientes, temperaturas
extremas, radiaciones, compuestos txicos, etc.) formndose una espora por cada forma
vegetativa. Al finalizar el proceso de esporognesis, la clula vegetativa se lisa y libera la espora
al exterior. Cuando el ambiente es favorable, la espora germina generando una nueva forma
vegetativa. La capacidad de germinar perdura durante aos. Algunas de las bacterias
productoras de endosporas son patgenas para el hombre, por lo que su estudio y observacin
son de enorme inters.

FUNDAMENTO
Las endosporas poseen unas cubiertas exclusivas que las hacen resistentes a los
factores ambientales adversos. Adems, estas cubiertas hacen que las esporas aparezcan en el
microscopio ptico como estructuras refringentes y de difcil tincin.
La tincin especfica de esporas requiere dos colorantes:
1.- Verde malaquita: capaz de teir las esporas en caliente.
2.- Safranina: colorante de contraste que tie las formas vegetativas.
Las endosporas, tras la primera tincin, no perdern el colorante en el lavado con
agua, y s lo harn las formas vegetativas, que quedarn teidas con el segundo colorante.

REALIZACIN
Se emplearn cultivos en fase estacionaria para dar lugar a que las bacterias
produzcan las esporas. Esta tincin es delicada en su realizacin y para poder obtener unos
resultados satisfactorios hay que seguir cuidadosamente las instrucciones.
1. Preparar los frotis
bacterianos indicados.
2. Teir con verde
malaquita. Con unas pinzas de
madera colocar la muestra encima
de la llama del mechero de forma
que el colorante humee durante 5
min.
Nota: evitar que la
muestra

hierva.

Aadir

ms

colorante si ste se evapora; es

importante que la muestra no se
seque.
3. Lavar
abundante

agua

el

con
exceso

de

colorante.
4. Teir

con

safranina 1 min.
5. Lavar
abundante

agua

el

con
exceso

de

colorante.
6. Secar la preparacin.
7. Observar la preparacin al microscopio. Anotar la disposicin y la morfologa
de las tres especies del gnero Bacillus.

INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS

La posicin y la morfologa de la endospora en el interior de la bacteria constituyen
un carcter taxonmico til para diferenciar especies dentro de un mismo gnero.

Las

tres

bacterias

disposicin

empleadas

morfologa

de

las

en

esta

prctica

endosporas. B.

difieren

en

la

sphaericusposee

una

endospora esfrica con localizacin terminal y deformante de la clula

vegetativa, por lo que suele ser denominada "en palillo de tambor". B.
thuringiensis tiene localizada la endospora elipsoidal en el centro de
la clula vegetativa, lo que provoca un abombamiento caracterstico
denominado

"en

huso". B.

subtilis forma

una

espora

cilndrica

subterminal no deformante.

Bibliografa:

http://www.danival.org/notasmicro/tincion/_madre_tincion.html
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm

Introduccin

En su mayor parte los microorganismos son demasiado pequeos para observarse a simple
vista: protozoos, algas, hongos, bacterias y virus.
Estos microorganismos difieren en caractersticas tales como forma de nutricin, estructura, tamao,
composicin entre otros aspectos; es por ello que se emplea el estudio microscpico el facilita
notablemente la observacin; principalmente en las bacterias se facilita al tratarlas con colorantes o tintes
los cuales facilitan tambin la observacin de ciertasestructuras celulares y como en este caso particular
las endosporas.
En este informe se distinguirn las endosporas presentes en una muestra bacteriolgica y para lo cual se
desarrollar el mtodo de tincin con verde de malaquita y safranina; asimismo se da a conocer un
anlisis de los resultados obtenidos en la prctica.
OBJETIVO
Realizar la tincin y observacin de endosporas en una bacteria

Marco terico
Una endospora es una sustancia inactiva, resistente, no reproductiva producida por una pequea cantidad
de bacterias de la familia de Firmicute. La funcin primaria de las endosporas es sobrevivir en tiempos de
tensin ambiental. Por lo tanto son resistentes a la radiacin ultravioleta y gamma, a la desecacin, a

lisozima, a la temperatura, al hambre y a los desinfectantes qumicos. Las endosporas se encuentran

comnmente en el suelo y el agua donde sobreviven por periodos de tiempo largos.
Estructura. En contraste con las esporas eucariontes, que son producidos por muchos eucariontes para
propsitos reproductivos, las bacterias solo producen una endospora internamente en ambientes
desfavorables. La espora es a menudo cubierta por una cubierta fina conocida como exosporium, que
cubre la capa de espora. La capa de la espora es impermeable a muchas molculas txicas y puede
tambin contener las enzimas implicadas en la germinacin. La corteza se encuentra debajo de la capa
de la espora y consiste en peptidoglucano. La pared de la base se encuentra debajo de la corteza y rodea
al protoplasto o base de la endospora. La base tiene estructuras normales de la clula tales como:ADN y
ribosomas, pero tiene un metabolismo inactivo.
Hasta el 15% de la endospora consiste en calcio en la base, que se piensa se utiliza para estabilizar el
ADN. El cido Dipicolinico podra ser responsable de la resistencia trmica de la espora y el calcio puede
ayudar a la resistencia al calor y a los agentes que oxidan. Sin embargo los agentes mutagenos se
encuentran aliados, sugiriendo que existen otros mecanismos que contribuyen a la resistencia trmica.
Localizacin. La posicin de la endospora diferencia entre especies bacterianas y es til en la
identificacin. Los tipos principales dentro de la clula son: terminales, subterminales y endosporas
centralmente puestos. Las endosporas terminales se encuentran en los polos de la clula, las endosporas
centralmente puestos estn normalmente en el centro. Las endosporas subterminales se encuentran en
los extremos, lo suficientemente lejos de los polos pero no lo bastante cercanos al centro para ser
considerados central.
Las endosporas son difciles de observar al microscopio debido a la impermeabilidad de su pared que
evita la entrada de las tinciones ordinarias. Mientras el resto de la bacteria puede teirse, la endospora
permanece descolorida.
Debido a esto surgi la tcnica conocida como Tincin de Moeller, que permite que se muestre la
endospora en color rojo, mientras que el resto de la clula permanece en color azul. Otra tcnica de
tincin para el estudio de la endospora, es la Tincin de Schaffer-Fulton con la que vemos la endospora
verde y la bacteria roja.
Formacin y destruccin. Cuando una bacteria percibe condiciones ambientales desfavorables, comienza
el proceso de esporulacin, el cual llega a durar cerca de 10 horas. Se repliega el ADN y una pared de la
membrana conocida como tabique se comienza a formar. La membrana de plasma de la clula rodea esta
pared formando una doble membrana alrededor del ADN y la estructura se convierte ahora en lo que se
conoce como forespora. El calcio se incorpora a la forespora.
La corteza se forma despus entre las dos capas y la bacteria agrega una capa ms a la forespora. La
esporulacin es completa ahora, y la endospora es lanzada cuando se degrada la clula vegetativa.
La endospora es resistente a la mayora de agentes que mataran normalmente a las clulas vegetativas.
Los productos de limpieza de la casa generalmente no producen ningn efecto, ni la mayora
de alcoholes, compuestos de amonio o de los detergentes, sin embargo el oxido de etileno es eficaz
contra las endosporas.
Importancia. Como un modelo simplificado para la diferenciacin celular, los detalles de la endospora se
han estudiado extensivamente, especialmente el Bacilo subtilis. Estos estudios han contribuido al estudio
de los genes, transcripcin y unidades del factor sigma de la polimerasa del ARN.
Bacterias productoras de esporas
Los ejemplos de bacterias que poseen este mecanismo incluyen los gneros:
Bacilo
Clostridium
Desulfotomaculum
Sporolactobacillus
Sporosarcina
Thermoactinomyces

Materiales y mtodos

Microscopio
Portaobjetos
Asa bacteriolgica
Pinzas
Frasco lavador
Mechero de Bunsen
Toalla de papel

Aceite de inmersin
Verde de malaquita
Safranina
Agua destilada
Solucin salina
Cultivo bacteriano
Desarrollo prctico
Seguido de la explicacin por parte del auxiliar de laboratorio se procedi a colocar con la punta del asa
bacteriolgica una gota de solucin salina, luego se esterilizo el asa en el mechero, se enfri y se tomo
la muestra de un cultivo bacteriolgico utilizado con muestra y se realizo el frotis. La placa se flameo
hasta que se evaporara toda el agua y se coloreo con verde de malaquita. Se flameo durante 5 minutos,
adicionando colorante cada vez que se secaba la muestra. Se lavo con agua hasta retirar el exceso de
colorante y se realizo la tincin con safranina durante un minuto. Posteriormente se lav con agua y se
sec con papel absorbente.
La muestra se rotul y observ al microscopio ptico con el objetivo de inmersin. Finalmente se
esquematizaron y anotaron los resultados obtenidos.

Resultados
Luego del montaje al microscopio ptico, se observaron bacilos Gram positivos esporulados; asimismo se
apreciaron esporas solitarias de forma circular y bacilos que no presentaban formacin de esporas.
Las imgenes de lo visto se muestran en la figura 1.
Figura 1. Bacilos observados con la tincin de Verde de Malaquita. a) Bacilos endosporados, b) bacilos
sin formacin aparente de endospora, c) Esporas solitarias. Microscopio ptico. 1000 aumentos.

Discusin y conclusiones
Finalmente podemos mencionar que a pesar que la bacteria es una estructura muy pequea, por medio
de la tincin con verde de malaquita, el cual requiri del calor para la penetracin; se pudo observar la
estructura interna de la clula bacteriana, particularmente las endosporas. En este experimento se utiliz
una tincin simple debido a que la misma permite que se coloree toda la clula excepto la espora que se
observa de un tamao bien aceptable

Preguntas complementarias

1. Qu es un frotis y para que se utiliza?

Se denomina frotis a la extensin que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con
objeto de separar lo ms posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparacin
es muy difcil obtener una imagen clara y ntida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del
portaobjetos para poder aplicar los mtodos habituales de tincin que permiten la observacin al
microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijacin de
una extensin bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo
menos posible la morfologa y bacteriana y las posibles agrupaciones de clulas que pudiera haber.
2. Qu es una tincin? Cuntos tipos existen? Escribe la tcnica de preparacin de cada una de ellas.
La tincin es la aplicacin de un colorante sobre una muestra, lo que permite poner en manifiesto
diferencias entre las clulas o en partes una clula, o de un microorganismo. Entre
los procedimientos para la observacin de clulas o microorganismos existen 2 fundamentalmente que
son:
Tincin simple: Permite observar la forma, tamao y agrupamiento de las bacterias usando un
nico colorante (normalmente bsico). Se utiliza un solo colorante, por lo que todas
las estructuras celulares se tien con la misma tonalidad (Tinta china, Azul Metileno de Loeffler, Azul de
lactofenol). El Hidrxido de potasio al 10% (solucin de KOH) permite ver elementos de hongos ya que el
KOH digiere parcialmente los componentes proteicos, por ejemplo de la clula husped, pero no acta
sobre los polisacridos de las paredes celulares de los hongos.
Tincin diferencial: Las tinciones diferenciales son aquellas tinciones que se usan para
diferenciar de manera ms explcita los microorganismos. Estas tinciones utilizan los colorantes
diferenciales, que se componen de ms de una sustancia tintrea. En algunas tcnicas de coloracin, las
tinciones diferenciales ms importantes que se emplean en bacteriologa son las de Gram y la tincin

cido-resistente. Ambas tinciones se utilizan para obtener informacin acerca de la composicin de las
capas de la pared celular de las clulas bacterianas.
3. Qu es un colorante? Cmo esta constituido? Cmo es que cambia con los diferentes
componentes celulares?
Un colorante es una sustancia que es capaz de teir las fibras vegetales y animales. Los colorantes se
han usado desde los tiempos ms remotos, emplendose para ello diversas materias procedentes de
vegetales (crcuma, ndigo natural, etc.) y de animales (cochinilla, moluscos, etc.) as como
distintos minerales. Los colorantes ms usados son sales, las cuales estn constituidas por un ion
cargado positivamente y un ion cargado negativamente. Por ejemplo, azul de metileno es actualmente la
sal cloruro azul de metileno.
El grupo auxocromo es el que facilita la unin del colorante a otras sustancias con carga elctrica.
4. Qu factores intervienen para que los colorantes se combinen con los componentes celulares?
Muchos colorantes utilizados con frecuencia son molculas cargadas positivamente (cationes) y se
combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como
los cidos nucleicos y los polisacridos cidos. Ejemplos de colorantes catinicos son el azul de metileno,
el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes son molculas cargadas negativamente (aniones) y se
combinan con los constituyentes celulares cargados positivamente, tales como muchas protenas. Esos
colorantes incluyen la eosina, la fucsina cida y el rojo Congo. Otro grupo de colorantes son sustancias
liposolubles; los colorantes de este grupo se combinan con los materiales lipdicos de la clula, usndose
a menudo para revelar la localizacin de las gotculas o depsitos de grasa. Un ejemplo de colorante
liposoluble es el negro Sudn.
5. Qu es un mordiente? Menciona tres ejemplos
El mordiente es una sustancia empleada en tintorera que sirve para fijar los colores en los productos
textiles, la funcin del mordiente es favorecer la fijacin del colorante en las fibras. Este trmino es usado
principalmente en la industria textil para designar a aquellas sales metlicas (de aluminio, hierro,
plomo...), cidos (el cido tnico, usado para fijar colores bsicos), sustancias orgnicas (casena, gluten,
albmina,...), etctera, que sirven para fijar los colores de estampados en los textiles.
6. Escribe el fundamento de las siguientes tinciones: Gram, Zielh Neelsen, endosporas (Verde malaquita)
Tincin de Gram: es un sistema de dos tinciones simples sucesivas, separadas por una fase de
decoloracin selectiva. Permite diferenciar las bacterias que retienen el primer color (Gram-positivas) de
las que no lo retienen (Gram-negativas). Esta diferencia en comportamiento refleja diferencias
estructurales y fisiolgicas entre ambos grupos de bacterias.
Tincin de esporas: ciertos tipos de bacterias producen esporas de resistencia cuya pared
celular es caracterstica. La tincin de esporas permite detectar este tipo de clulas lo que tiene utilidad en
la identificacin del microorganismo en estudio.
Tincin de Ziehl-Neelsen (cido-alcohol resistencia): es un tipo especial de tincin que permite
la identificacin de microorganismos de los grupos Mycobacterium y Nocardia de gran relevancia clnica
8. Elabora una tabla en la que seales todas las diferencias que existen entre bacterias Gram
positivas y bacterias Gram negativas.
8. Escribe correctamente el nombre de 3 microorganismos acido alcohol resistentes, 3 microorganismos
esporulados, 3 microorganismos capsulados, 3 bacterias Gram positivas y 3 bacterias Gram negativas.
Seala la importancia de cada una de ellas.
Microorganismos acido alcohol resistentes: Mycobacterium
tuberculosis (causa tuberculosis), Mycobacterium leprae (causa la lepra), Mycobacterium
avium (causa fiebre, perdida de peso y fatiga).
Microorganismos esporulados: . (enteritis necrtica o la gangrena gaseosa.), Clostridium
botulinum (produce botox), Bacillus cereus (Produce dos tipos de toxiinfecciones alimentarias: la forma
diarreica y la forma emtica.)
Microorganismos capsulados: Haemophilus influenzae, (causa la influenza), Streptococcus
pneumoniae (causa neumona), Cryptococcus neoformans (micosis sistemtica)
Bacterias Gram positivas: Bacillus anthracis (produce la enfermedad del carbunco), Clostridium
botulinum (produce botox), Clostridium tetani (produce tetanos)
bacterias Gram negativas: Neisseria gonorrhoeae, (produce la gonorrea), Serratia
marcescens (causa de infecciones nosocomiales y urinarias.), Rhizobium leguminosarum (ayuda a
las plantas a fijar nitrogeno).

Leer ms: http://www.monografias.com/trabajos69/tincion-esporas-bacterianas/tincion-esporasbacterianas.shtml#ixzz3yTUCHaHo

Fundamentos La envuelta de la endospora es mas compleja e impermeable

que la envuelta de las clulas vegetativas en las que se forma. Slo se
puede teir el contenido de la espora alterando su envuelta. La
impermeabilidad de las cubiertas dificulta que las endosporas se decoloren
una vez teidas.
El verde de malaquita es un colorante dbilmente bsico (tiene una carga
positiva dbil) y por tanto, se une dbilmente a la bacteria. Penetra en las
clulas vegetativa . Cuando se calienta la preparacin tambin penetra las
endosporas.
Durante el lavado con agua, el verde de malaquita se elimina de las clulas
vegetativas, pero no de la endospora. El colorante de contraste (la
safranina) solo puede teir a las clulas vegetativas (decoloradas por el
agua).
INTRODUCCION
La cpsula bacteriana es una capa de material viscoso o mucoide. El tamao
de estas cpsulas est influenciado por el medio en el que crece la bacteria. En
algunos casos el grosor de la cpsula es slo una fraccin del dimetro de la clula,
en otros casos la cpsula es mucho mayor que la clula. Las cpsulas bacterianas
son importantes tanto para la bacteria como para otros organismos. A las bacterias
les proporcionan una cubierta protectora y adems sirven de reservorio de alimento
almacenado. Tienen Propiedad Antifagocitaria : Dificulta o impide la fagocitosis, lo
cualpotencia su virulencia ya que favorece la multiplicacin y facilita la invasin.
Brinda Proteccin frente a Fagos.: Dificulta la fijacin de bacterifagos e impide el
pasaje su pasaje que puedan afectar a la bacteria Las cpsulas de ciertas bacterias
productoras de enfermedades aumentan la capacidad infectiva de las bacterias. Si
la bacteria pierde totalmente su cpsula, puede perder su virulencia y por lo tanto
su capacidad de producir enfermedad Algunos ejemplos de bacterias productoras
de cpsulas son: neumococos, Klebsiella., aunque tambin puede estar presente en
bacterias gram positivas y Gram. negativas

Sin embargo las cpsulas tiene diversas propiedades como:

Induce la produccin de anticuerpos protectores (esto es til en
laproduccin de algunas vacunas) y Permite la diferenciacin de tipos
serolgicos dentro de la misma especie ya sea por aglutinacin con
sueros
PROCEDIMIENTO
TINCION DE CPSULA
A) METODO DE DUGUID
1.- Poner con el asa una gota pequea de tinta china en el centro de un
portaobjetos limpio.
2.-Poner una gota de agua del mismo tamao junto a la gota de tinta china
3.- Tomar con el Asa bacteriolgica un pequeo fragmento del cultivo de bacterias
4.- Hacer una suspensin ( sin extenderla) en la gota de agua

5.- Mezclarla con la tinta china

6.- Colocar un cubreobjetos sobre la suspensin, evitando que queden burbujas
7.- Observar la preparacin al microscopio con el objetivo seco fuerte y de
inmersin.
La cpsula se observa como una zona brillante alrededor de la bacteria en
un campo oscuro.
B) METODO DEL ROJO CONGO
1.- Poner una gota pequea de rojo congo en el centro de un portaobjetos limpio
2.-Tomar con el asa bacteriolgica un pequeo fragmento de crecimiento de colonia
bacteriana
3.- Suspender la muestra en la gota de rojo congo y hacer un frotis
4.- cubrir el frotis ( SIN FIJARLO A LA FLAMA DEL MECHERO) con una gotas del
mordente
de cpsula y dejarlo actuar durante un minuto.
5.-Lavar el frotis con agua destilada y dejarlo secar al aire
6.- Observar la preparacin al microscopio con el objetivo de inmersin
La cpsula se observa como una zona brillante alrededor de la bacteria de color rojo
en un campo de azul oscuro.
CUESTIONARIO
1.- Qu importancia mdica tiene la cpsula bacteriana?
La importancia medica que tiene la capsula bacteriana es que mediante ellase
pueden ver las diferentes bacterias cuales nos pueden afectar con enfermedades e
infecciones, como tambien pueden descubrir bacterias que nos ayuden a nuestra
salud
2.-Qu caractersticas presenta la cpsula en las bacterias?

La cpsula es una capa rgida organizada en matriz impermeable que

excluye colorantes como la tinta china. En cambio, la capa de
material extracelular que se deforma con facilidad, es incapaz de
excluir partculas y no tiene un lmite definido, se denomina capa
mucosa o glucocalix. Ambas se pueden detectar con mtodos como
la tincin negativa o la tincin de Burri.
La cpsula le sirve a las bacterias de cubierta protectora resistiendo
la fagocitosis. Tambin se utiliza como depsito de alimentos y como
lugar de eliminacin de sustancias de desecho. Protege de la
desecacin, ya que contiene una gran cantidad de agua disponible en
condiciones adversas. Adems, evita el ataque de los bacterifagos y
permite la adhesin de la bacteria a las clulas animales del
hospedador.

3.- Qu importancia tiene la presencia de la cpsula en las bacterias?

La cpsula bacteriana es la capa con borde definido formada por una serie de
polmeros orgnicos que en las bacterias se deposita en el exterior de su pared
celular. Generalmente contiene glicoprotenas y un gran nmero
depolisacridos diferentes, incluyendo polialcoholes y aminoazcares.
4.- Qu sucede con las bacterias cuando estas llegan a perder la cpsula?
Al perder la capsula la bacteria sigue presentando sus caractersticas patgenas
pero pierden virulencia.Las bacterias al estar capsulada dificultan la fagocitosis
adems poseen un anfgeno llamadoanfgeno k, ya que la capsula les confiere
antigeneidad o especificidad antignica; por lo que a mayor tamao de la capsula la
bacteria posee mayor virulencia.
5.- Investiga de qu est compuesta la capa de material mucosa que forma la
cpsula
La capa mucilaginosa usualmente compuesta de glicoprotenas y proteoglicanos
que est presente sobre la superficie exterior de los peces tambin se considera un
glicoclix. El trmino fue aplicado inicialmente a la matriz de polisacrido secretada
por las clulas epiteliales y que forman una capa superficial. Los glicoclix son
compuestos, casi siempre con cadenas de carbohidratos, que recubren la superficie
celular.