Informe Microbiologia 3

Universidad de Pamplona
Pamplona - Norte de Santander - Colombia

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PRACTICA N 3
MEDIOS DE CULTIVO
Mara Alejandra Guio Carrillo Cd.1094279576, Luisa Fernanda Manrique

Hernndez Cd.1120574456
DEPARTAMENTO DE INGENIERA EN ALIMENTOS FACULTAD DE

INGENIERA Y ARQUITECTURA.
RESUMEN:
Durante la prctica se realiz la preparacin de medios de cultivo teniendo
en cuenta la teora encontrada en el manual de laboratorio y las
especificaciones dadas por el docente. Esta consisti primeramente en
realizar los clculos para determinar las cantidades (agar y caldo nutritivo)
que se deban mezclar respecto al volumen que se iba a trabajar. Para el
caso del agar se pesaron 4.1 g para una solucin de 145 ml. Posteriormente
se llev el agar a calentamiento hasta punto de ebullicin, se dej enfriar y se
sirvi en 2 tubos de ensayo de a 10 ml de la solucin, se llev a esterilizacin
en autoclave durante 20 min y por ltimo se sirvi el cultivo en 5 cajas de
Petri y se llev a refrigeracin. Para el caldo nutritivo se pesaron 0.09 g para
una solucin de 7 ml, y la mezcla obtenida se verti directamente en un tubo
de ensayo; posteriormente se llev a esterilizacin en autoclave durante 20
min y luego a refrigeracin.
PALABRAS CLAVES: esterilizacin, bioelementos, agar nutritivo, caldo

nutritivo.
Una universidad incluyente y comprometida con el desarrollo integral
INTRODUCCION:
Un medio de cultivo es un sustrato
o una solucin de nutrientes que
permite
el
desarrollo
de
microorganismos.
En
las
condiciones de laboratorio para
realizar un cultivo, se debe
sembrar sobre el medio de cultivo
elegido las muestras en las que los
microorganismos van a crecer y
multiplicarse para dar colonias.
Los microorganismos son los seres
ms abundantes de la tierra,
pueden vivir en condiciones
extremas de pH, temperatura y
tensin de oxgeno, colonizando
una amplia diversidad de nichos
ecolgicos.
Entre
los
requerimientos ms importantes
para su desarrollo estn el
carbono, el oxgeno, nitrgeno,
dixido de carbono e hidrgeno.
Muchas bacterias sin embargo
necesitan del aporte extra de
factores de crecimiento especficos
en forma de suero, sangre y
extracto de levadura entre otros.(1)
Podemos
decir
que
la
microbiologa
empieza
su
verdadero desarrollo como ciencia
en el momento en que se descubre

el microscopio y comienza la
observacin de los primeros
microorganismos,
pero
es
indudable que la puesta a punto de
los medios de cultivo y la
utilizacin
del
agar
como
solidificante,
marcan
dos
importantes puntos de inflexin en
su evolucin. La primera noticia de
la utilizacin de medios de cultivo
nos llega del miclogo Brefeld, que
consigui aislar y cultivar esporas
de hongos en medios slidos
realizados a base de gelatina. Sin
embargo este sistema no era
adecuado para las bacterias (por
su menor tamao) y no fue hasta el
ao 1878 cuando Lister populariz
un mtodo enfocado al cultivo puro
basado en diluciones seriadas en
un medio lquido. Koch realiz sus
investigaciones utilizando en un
primer momento rodajas de patata
como soporte nutritivo slido, pero
no tard en recurrir al caldo de
carne 8 lquido, diseado por
Loeffler, al que, en 1881, aadi
gelatina, logrando un medio slido
transparente
ideal
para
la
observacin de la morfologa
macroscpica de las colonias
microbianas. En el ao 1882 tiene

lugar uno de los grandes avances
de la microbiologa en relacin con
los medios de cultivo: el mdico
alemn Walter Hesse introduce el
agar-agar (polisacrido extrado de
algas rojas) como solidificante. En
1887 un ayudante de Koch llamado
Petri, comienza a utilizar placas de
cristal planas, que se llaman desde
entonces placas de Petri, para
sustituir a las clsicas bandejas de
vidrio cubiertas con campanas que
se
usaban
hasta
entonces.
Beijerinck y Winogradsky, que
desde de 1888 realizaron sus
investigaciones sobre las bacterias
quimioauttrofas (utilizacin de
nitrgeno y azufre sobre todo)
tuvieron gran importancia en el
desarrollo de los medios selectivos
y de enriquecimiento. Disearon
este tipo de medios de tal forma
que su especial composicin
qumica favoreca el crecimiento de
ciertos tipos de microorganismos
que, en funcin de sus procesos
metablicos, eran los nicos
capaces de utilizar para su
desarrollo ciertos nutrientes del
medio. En 1892 Wrtz impuls el
uso de los medios diferenciales,
incorporando indicadores de pH a
la composicin de ciertos medios
con lo cual se poda observar la
produccin de cidos en la
fermentacin
en
ciertos
microorganismos.(2)
Agar nutritivo:
El Agar nutritivo es un medio de
cultivo usado normalmente como
rutina para todo tipo de bacteria.
Es muy util porque permanece
solido incluso a relativas altas
temperaturas.
Adems,
el
crecimiento bacteriano en este
agar lo hace en la superficie, por lo
que se distinguen mejor las
colonias pequeas.
En un caldo de nutrientes, la
bacteria crece en el lquido, y
aparece como una sustancia
espesa, con colonias difcilmente
observables. El agar nutritivo
contiene normalmente (w/v).(3)
0.5 % Peptona
0.3
%
extracto
de
carne/extracto de levadura
1.5 % agar
0.5% NaCl
Agua destilada
pH casi neutro (6.8) a 25 C.
MATERIALES:
Medios de cultivos sintticos

Agua destilada
Cajas de Petri estriles
Tubos tapa rosca
Erlenmeyer
Probetas
Autoclave
Balanza
Baja lengua
METODOS:
MEDIOS DE CULTIVO
Desinfeccin del rea de trabajo
Pesar las cantidades requeridas

acorde con el volumen a preparar
(para cajas de Petri de 10* 100
mm emplee de 15 a 20ml. para
cajas de 10* 50 mm emplee 8 a
10ml)
En un Erlenmeyer Disolver
agar en el agua destilada
posteriormente
llevar
calentamiento hasta punto
ebullicin; dejar enfriar.
el
y
a
de
Repartir la solucin de agar en tubos

de ensayo (10 ml) y llevar al
autoclave durante 30 min a 15 lb de
presin a 121C.
Despus de la esterilizacin se
coloca un tubo en forma y otro
inclinado.
Con el agar restante en el

Erlenmeyer se sirven los medios
de cultivo en cajas de Petri en
una zona prxima al mechero.
Se
realiza
el
mismo
procedimiento para el caldo a
excepcin de que este no se lleva
a calentamiento sino que se vierte
directamente en el tubo de
ensayo y se lleva a esterilizacin.
Al finalizar marcar debidamente
con el nombre del material y
cantidad.
Tanto las cajas de Petri como los
tubos de ensayo se llevan a
refrigeracin.
RESULTADOS:
Solucin de
esterilizacin.
agar
despus
de
Tubos de 10 ml con el agar para

llevar al autoclave
Caldo nutritivo para llevar a

autoclave .
Tubos de ensayo y fiola despus de

sacarlas de la autoclave
Tubo inclinado con el agar despus

de la autoclave.
Cajas de petri con la solucin de

agar
DISCUSIN:
Para la realizacin correcta de los
medios de cultivo se necesita
contar con las condiciones ptimas
de incubacin como temperatura,
presin y condiciones atmosfricas
(concentracin de O2) para que
as el cultivo no se contamine por
diversos factores.
Durante el servido en las cajas de
Petri es importante esterilizar la
boquilla del Erlenmeyer a la llama
del mechero con el fin de eliminar
todos
los
microorganismos
presentes en este por aires de
corriente que puedan contaminar el
cultivo.
El agar-agar es un extracto
obtenido con agua caliente a pH
ligeramente cido a partir de un
heteropolisacrido formado por
molculas de -D-galactosa, 3,6anhidro--L-galactosa, con un 5 a
10% de steres de sulfato y algo
de cido D-galacturnico. Sus
geles
son
muy
resistentes
mecnicamente y estables al calor
(FENEMA, 2000). Por lo tanto son
tiles en los laboratorios de
microbiologa para la observacin
de
cultivos
debido
a
la
transparencia a la que luego se
tornan.
CONCLUSIONES:
Esta prctica se realiz con la
finalidad
de
conocer
los
componentes de los medios de
cultivo as mismo como la cantidad
que se requiere de cada uno de las
sustancias
utilizadas
en
la
preparacin de estos.
De acuerdo con lo realizado en la
presente prctica se concluye que
es de gran importancia preparar
adecuadamente los medios de

cultivo, aadir la cantidad de
solucin exacta y disolverla
correctamente para obtener los
resultados esperados.
Es indispensable aplicar las
normas de bioseguridad en el
laboratorio
para
evitar
contaminaciones en el cultivo que
afecten los resultados esperados.
Hemos aprendido a reconocer un

caldo a diferencia de un agar. El
caldo es para muestras liquidas y
el agar para muestras slidas.
nutritivos porque el incorrecto uso

de ellos puede llevar al fracaso de
nuestra experiencia de manipular
microorganismos.
Hay que ser minuciosos en la

composicin
de
los
caldos
ANEXOS:
Clculos:
Para el agar:
5 cajas de Petri x 25 ml = 125 ml + 20 ml Tubos de ensayo = 145 ml
1000 ml
145 ml
X= 4,1 g
28g
x
Para el caldo nutritivo son 7 ml de H2O:

1000 ml
7 ml
X= 0,09 g
13 g
x

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PALABRAS CLAVES: esterilizacin, bioelementos, agar nutritivo, caldo

Una universidad incluyente y comprometida con el desarrollo integral

en el momento en que se descubre

Una universidad incluyente y comprometida con el desarrollo integral

microbianas. En el ao 1882 tiene

Una universidad incluyente y comprometida con el desarrollo integral

Medios de cultivos sintticos

Desinfeccin del rea de trabajo

Pesar las cantidades requeridas

Repartir la solucin de agar en tubos

Con el agar restante en el

Una universidad incluyente y comprometida con el desarrollo integral

Tubos de 10 ml con el agar para

Caldo nutritivo para llevar a

Una universidad incluyente y comprometida con el desarrollo integral

Tubos de ensayo y fiola despus de

Tubo inclinado con el agar despus

Cajas de petri con la solucin de

Una universidad incluyente y comprometida con el desarrollo integral

adecuadamente los medios de

Una universidad incluyente y comprometida con el desarrollo integral

Hemos aprendido a reconocer un

nutritivos porque el incorrecto uso

Hay que ser minuciosos en la

Una universidad incluyente y comprometida con el desarrollo integral

Para el caldo nutritivo son 7 ml de H2O:

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