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DETERMINACIÓN DE BILIRRUBINA EN SUERO

1. INTRODUCCIÓN

La bilirrubina es un producto derivado del metabolismo de la hemoglobina en el Sistema Retículo


Endotelial. Los hematíes al degradarse liberan la hemoglobina que es metabolizada a dos moléculas el
grupo hemo y el grupo globina, el grupo hemo se transforma en biliverdina y esta en bilirrubina a la cual
se le llama no conjugada o indirecta. Al pasar por el hígado esta bilirrubina se conjuga con ácido
glucurónido transformándose en bilirrubina conjugada o directa.

El hígado segrega esta bilirrubina directa a través de las vías biliares hacia el intestino, al metabolizarse
por la flora intestinal se convierte en urobilinas que dan el color marrón a las heces. Parte de estas
urobilinas se reabsorben y pueden aparecer en la orina en forma de urobilinógeno.

Cuando se eleva la bilirrubina, la piel y los tejidos toman un color amarillo que se llama ictericia. Según
cual sea el origen de la bilirrubina elevada podemos saber si es un problema de hígado (elevación de la
bilirrubina no conjugada) o de las vías biliares (elevación de la bilirrubina conjugada).

Cuando se realiza un análisis de rutina se mide la bilirrubina total (directa más indirecta), el 70 al 85 %
corresponde a la bilirrubina no conjugada o indirecta.

• El Sistema Retículo Endotelial esta formado por la unión de macrófagos (este termino lo
asigno Aschoff en el año 1924 a un conjunto de células formado por monocitos , histocitos,
fibroblastos, células endoteliales y reticulares) , móviles y tisulares fijos.

Síntesis de Bilirrubina Directa: en el hígado

+ Ácido Glucurónico

Bilirrubina Directa o
Conjugada

Vesícula Biliar

Bilirrubina Indirecta o no
Conjugada (unida a la
albúmina) Bilis

Heces Estercobilinógeno

Intervención de
bacterias saprofíticas

Orina
(urobilina)

Urobilinógeno

Síntesis de Bilirrubina Indirecta: en la sangre

Fe 2+
Grupo Hemo

Hb Anillos Biliverdina Bilirrubina


Globina pirrólicos Indirecta

2. OBJETIVO
Determinar los valores de bilirrubina directa, total e indirecta en suero sanguíneo. Diferenciar los tipos de
bilirrubina según su solubilidad y mediante la reacción de diazotación.

3. FUNDAMENTO DEL MÉTODO

La determinación de bilirrubina en suero se realiza mediante un método no enzimático.

Reacción de Diazotación: reacción química que usa al óxido nitroso (N2O) para formar un complejo de
color.

Bilirrubina Total + Acelerador + Diazoreactivo Azobilirrubina


(en suero) (Benzoato de cafeína) (Cromógeno rosado a
λ= 555nm)

Bilirrubina Directa + Acelerador + Diazoreactivo Azobilirrubina


(en suero) (Benzoato de cafeína) (Cromógeno rosado a
λ= 555nm)

Diazoreactivo = NaNO2 (nitrato de sodio) + Ácido Sulfanílico

Bilirrubina Indirecta = Bilirrubina Total – Bilirrubina Directa

4. PROCEDIMIENTO

Tubo Blanco Tubo Problema


Bilirrubina Total 1,5 mL 1,5 mL
Bilirrubina Directa --- 50 µL
Muestra 100 µL 100 µL

Mezclar e incubar a 37º C por 5’. Leer a 555 nm. Repetir el procedimiento para Bilirrubina Total y Directa.

5. CÁLCULOS

F.C = [Standard] /ABS STANDARD


F.C = 17,85 mg/dL

[B. Total] = F.C x ABS M.P


[B. Total] = 0.071

[B. Directa] = F.C x ABS M.P


[B. Directa] = 0.535

6. IMPORTANCIA CLÍNICA

Los niveles aumentados de bilirrubina indirecta pueden indicar:

- Anemia hemolítica
- Eritroblastosis fetal
- Ictericia fisiológica del recién nacido
- Problemas en las transfusiones de sangre
- Otras anemias

Los niveles aumentados de bilirrubina total pueden indicar:

- Cirrosis
- Hepatitis
- Obstrucción de vía biliar (colangitis, colelitiasis)
- Tumores de vías biliares
- Deficiencia enzimática
- Ictericia

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