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“ZARAGOZA”
MICROBIOLOGIA GENERAL I
SEMINARIO DE AISLAMIENTO Y
CUANTIFICACION DE MICROORGANISMOS
AISLAMIENTO Y CUANTIFICACIÓN
DE MICROORGANISMOS
AISLAMIENTO
Consiste en separar los microorganismos de interés de
una comunidad microbiana ,el aislamiento es
importante por que se obtienen cultivos para estudios
detallados y controlados de laboratorio y para su
aplicación en biotecnología y en microbiología
ambiental e industrial.
¿COMO SE LOGRA?
Paso de la muestra a
través de una membrana
porosa que retiene los
microorganismos y que
posteriormente se coloca
sobre una placa.
RECUENTO EN PLACA POR FILTRO
DE MEMBRANA
Ventajas Desventajas
Mide el no. De células Requiere bastante tiempo
viables (24 horas o más)
Las bacterias crecen en
unidad, en cadenas o como
grumos
RECUENTO EN PLACA
Fundamento:
Se basa en la suposición de que cada bacteria o
agrupación de colonia crece y se divide para formar
una sola colonia.
Dispersión de la muestra
Formación de colonias
¿COMO SE CUENTAN LAS COLONIAS POR
VACADO EN PLACA?
Ventajas Desventajas
Mide el no. De células Requiere bastante tiempo
viables (24 horas o más)
Microorganismos sensibles Las bacterias crecen unidad,
al calor pueden resultar en cadenas o como grumos.
dañados por el agar fundido
SIEMBRA POR VERTIDO DE PLACA
Ventajas Desventajas
Mide el no. De células Requiere bastante tiempo
viables (24 horas o más)
Microorganismos sensibles Las bacterias crecen unidad,
al calor pueden resultar en cadenas o como grumos.
dañados por el agar fundido
En medios diferenciales las
colonias que se forman
debajo de la superficie no
son adecuadas (solo las de la
superficie)
FACTORES QUE AFECTAN EL
VACIADO EN PLACA
• Tipo de muestra y microorganismos presentes en ella.
• Procesamiento de la muestra.
• Tipo de diluyentes.
Ventajas Desventajas
rápido Poco exacta
No diluciones Carencia de uniformidad en
la extensión
Muy poca muestra tiempo
Evita el contacto de las
células con el agar fundido
DILUCIONES SERIADAS
FUNDAMENTO:
VENTAJAS
Es fácil.
DESVENTAJAS
Afecta el no hacer bien las
diluciones.
No homogenizar bien la
muestra.
No contar correctamente.
Cuenta los viables mesofilos.
No cuenta anaerobios.
Cuantifica muestras solidas y
trabajar mas.
No cuantifica bacterias
exigentes nutricionalmente.
FUNDAMENTO:
VENTAJAS DESVENTAJAS
Su rapidez. El tiempo.
No ocupas material
de laboratorio.
Se utiliza poca
muestra.
No hay restricción
de unidades
formadoras de
colonias.
MILES-MISRA
FUNDAMENTO:
Es un método rápido
Es un método económico
DESVENTAJAS
Es imposible diferenciar a las células vivas de las
muertas.
Cuando se tienen muestras que contienen poblaciones
pequeñas, el margen de error es grande.
El método no suele ser adecuado para suspensiones
con baja densidad celular.
Las pequeñas células son difíciles de ver.
APLICACIÓN
Utilizada para contar bacterias de la leche.
Es usado para diagnóstico de mastitis bovina
(diagnóstico subclínico).
MÉTODO DEL NÚMERO MÁS PROBABLE
(NMP)
FUNDAMENTO:
Es un método estadístico que se fundamenta en la
teoría de la probabilidad.
En él se preparan múltiples series de diluciones
decrecientes, con cada dilución se inoculan varios
tubos que contienen el medio de cultivo adecuado.
APLICACIONES
Este método se utiliza para contar microorganismos
difíciles de cultivar en medio sólido, o para determinar
el número de células que pueden crecer en un medio
líquido determinado, como el análisis para determinar
la contaminación del agua potable.
NEFELOMETRÍA
(TURBIDEZ)
FUNDAMENTO.
En una suspensión microbiana, la cantidad de m.o está
directamente relacionada con la turbiedad o densidad
óptica de la misma, e inversamente relacionada con la
cantidad de luz que pasa por la misma. A mayor
turbidez mayor número de bacterias.
ESCALA MCFARLAND
Es una curva estándar construida con una suspensión
testigo de concentración celular conocida. Se basa en
la mezcla de concentraciones crecientes de BaCl2 con
concentraciones decrecientes de ácido sulfúrico
obteniéndose un precipitado de Sulfato de bario en
cantidades diferentes.
VENTAJAS
Rápido
Poca muestra
Sensible
DESVENTAJAS