Campuzano Márquez Pamela

Lobato Ramos Alejandra

Soriano Pineda Iveett
Ê
  

 
Las bacterias, microorganismos unicelulares englobados
en el reino ?
 
 pueden presentar una
morfología:

x
n forma esférica: (coco).
x
n forma cilíndrica (bacilo).
x
n forma helicoidal.
 

CONDICION
S S

NCU
NTRAN

Dependiendo de los Aislados.(individualizad

planos de división os)
celular y de la mayor
o menor capacidad Agrupados.
de separación o
adherencia de las
células hijas, los
cocos pueden
aparecer
a
a

a a


en parejas (diplococos).

n Cadenas (estreptococos).

n Racimos (estafilococos).

Tétradas (agrupación 4 elemntos).

Sarcinas (agrupación 8 elementos).

ia

 „




x iacilo común: en forma de bastón.

x Claviforme: terminación en clava o maza.

x Fusiformes: extremos afilados.

x Cortados a pico o en forma recta.

x Filamentosos (ramificaciones).

 

streptobacilos (en cadenas).

mpalizada.

Agrupados en letras.

Cocobacilos.
O 
 a

a

    
x
l número de curvaturas
x Cuerpo rígido o flexible (poseen filamentos internos
contráctiles).

Rígido:
Vibriones. (1 c)

spirilos. (2c)
 

iorrelia.

Treponema.

Leptoespira.

Pleomorfismo:La morfología no siempre es constante

pueden presentar forma de estrella, piriformes,
discoidales con apéndices o yemas y planas
cuadrangulares.

Ê 



Unidades de medida bacteriana:

Micra (µ) o micrómetro (µm). (10¯³mm)
Nanómetro (nm). (10¯‰mm)

Diámetro de los cocos: +/- 0.5 a 2 µm

iacilos: ancho: 0.2-2 µm
largo: 2-20 µm


a
ia
  aa


Capsula:

s la estructura mas externa, rígida, compuesta

por polisacáridos y glucoproteinas. Sirve como
cubierta protectora resistiendo a la fagocitosis.
Pared Celuar:
Con un esqueleto de petidoglucanos o mureina. Da
esructura y protege a la bacteria de la lisis.
 
Responsable de la movilidad bacteriana.
Clasificados por numero y disposición:

Átrica

Monótrica

Anfítrica

Lofótrica

Perítrica
 
 Ê

Ê
 

De polifosfato. Acumulan fosfato cuando la

síntesis de ácidos nucleicos está
impedida. Se tiñen de color púrpura con
azul de metileno y se usan para
identificar ciertas bacterias.

Gránulos metacrormáticos en los Ms

(Giemsa x400).

!"  

Ê # $

Algunas bacterias producen

formas de resistencia
llamadas esporas
(metabólicamente inactivas)
que pueden sobrevivir en
condiciones desfavorables
tales como el calor o la
sequía. bajo condiciones
ambientales apropiadas,
pueden germinar.
Las esporas que se forman dentro de la célula se llaman
endoesporas, produciéndose una por célula.
xisten
distintos tipos según su forma (ovoides, esféricas) y
localización dentro de la célula (centrales, subterminales y
terminales).

 % Ê

AUtilizan un solo colorante

ALas estructuras se tiñen con la misma
tonalidad
ASe utiliza para ver la morfología y arreglo en el
crecimiento de las bacterias


 & 
Utilizada para la
observación de
esporas
(mecanismo de
defensa)
Y para la tinción
negativa, con la cual
se observa la
cápsula bacteriana
'Ê

Se utilizan para observar
morfología y agrupación

Para tinción de bacterias

alcoholXácido resistente
como bacilos de
Tuberculosis o la lepra

n este método esta solución

es considerada como
colorante de contraste, por
lo que tiñe de color azul los
tejidos de soporte y otras
estructuras orgánicas de
los bacilos
'
 
Usado para la observación de hongos :
-
l fenol destruye la flora acompañante, el acido
láctico conserva las estructuras fúngicas al
provocar un cambio de gradiente osmótico con
relación al interior del fúngico generando una
película
-Azul de algodón posee la capacidad de adherirse
a la quitina presente en las hifas y conidios y de
los hongos microscópicos




Se denomina frotis a la extensión que se

realiza sobre un portaobjetos de una
muestra o cultivo con objeto de separar
lo más posible los microorganismos


 %  


AColocar una pequeña gota de
agua en el centro de un
portaobjetos limpio

AFlamear el asa de siembra,

tomar, en condiciones
asépticas, una pequeña
cantidad del cultivo
bacteriano en medio sólido y
transferirlo a la gota de
agua.
ARemover la mezcla con el asa
de siembra hasta formar
una suspensión homogénea
que quede bastante
extendida para facilitar su
secado.
( % 




 (


Por calor: Pasar tres veces el portaobjetos por la llama

durante unos segundos
Con metanol (para bacterias procedentes de medio
líquido). Añadir unas gotas de metanol sobre la
extensión completamente seca.
sperar a que el
metanol se evapore completamente.
 
 
ia
  a

A Cubrir el frotis con abundante colorante y

dejarlos actuar durante el tiempo que indique
el protocolo de cada tinción concreta. Suele
oscilar entre 1 y 5 minutos.
Lavar la preparación con
agua para eliminar el
colorante.
sta
operación se realiza
inclinando el
portaobjetos y
aplicando el chorro de
agua en su parte
superior de manera
que resbale sobre el
frotis, pero sin que
vaya dirigido
directamente sobre él,
pues podría arrastrar
parte del frotis consigo
A Secar el porta presionando entre dos
papeles filtro, pero en ningún caso se
debe frotar el portaobjetos.
A Observar la preparación al microscopio
Êa      a
 aa

Pasar sucesivamente los portaobjetos por las siguientes
soluciones manteniéndolos un mínimo de 5 minutos
en cada baño.
l objetivo es que la preparación quede
totalmente deshidratada.
scurrir bien el reactivo
antes de introducirlo en el siguiente baño.
´ Alcohol de 70º
´ Alcohol de 95º
´ Acetona pura
´ Acetona-xilol (1:1)
´ Xilol

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 ! Ê $

Se utilizan para mostrar las diferencias entre bacterias;

se denominan compuestas porque se emplea más de
un colorante. Las más utilizadas en microbiología son
de Gram y Ziehl-Neelsen
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Ê #'&)


1. COLORANT
PRINCIPAL O PRIMARIO; básico que a las
células cargadas negativamente las colorea
2. MORDI
NT
: permite al colorante actual con más
intensidad y que se fije a las células (sales metálicas,
solución yodada o lugol, tanino y fenol).
3. AG
NT
D
COLORANT
: disolvente orgánico como el
alcohol, un ácido o alcohol acetona.
4. CONTRACTOR O COLORANT
S
CUNDARIO; Colorante
básico de distinto color que el primer colorante

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Además de observar las bacterias permite diferenciar los dos
grandes grupos:

*  

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1. Ya fijo el extendido cubrir la superficie con cristal violeta o con
violeta de genciana (colorante primario) por un minuto.
2. Lavar con abundante agua
3. Cubrir con lugol (mordiente) durante 1 minuto
4. Lavar con abundante agua
5. Inclinar el portaobjeto y dejar gotear al alcohol de acetona
(decolorante) hasta que deje de perder color
6. Lavar con agua
7. Cubrir el preparado con fucsina básica (contracolor) por 1 min
8. Lavar con agua
9. Dejar secar el preparado al aire
10. Observar con objetivo de inmersión
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 % 
Ê
x La afinidad gram positiva o negativa depende de la composición
química de la pared celular en la parte de su estructura física
x Después de las primeros 4 pasos, al observar al microscopio
todo se ve violeta
x Luego del decolorante algunas conservan su color mientras que
otras se decoloran.
x Las violetas son Gram positivas, las que pierden su color son
gram negativas, pues los decolorantes orgánicos utilizados
abren poros de la membrana externa de las bacterias
gramnegativas (principalmente de lipoproteínas y
lipopolisacáridos), permiten la salida del colorante principal; al
agregar el contracolor éstos quedan rojos .
x La fuscina a veces es reemplazada por rojo congo o safranina

scherichia- coli
Tinción de Gram
 
 % '&) 
Las Ê
 
las especies 
 
y algunas veces
con los actinomicetos, no se tiñen con la coloración de Gram. La
presente es una técnica ácido-alcohol resistente ideada por

rlich.

*  
1. Ya fijo con la superficie cubierta con carbolfuscina como
colorante principal (fucsina)+ un primer mordiente (ácido fénico
o carbólico)
2. Calor por 5 min con un hisopo encendido hasta que haya vapor
(calor mordiente físico o segundo mordiente)
3. Lavar con abundante agua
4. Inclinar el portaobjetos y gotear el ácido alcohol (decolorantes:
ácido sulfúrico al 3% en el alcohol etílico al 95%) hasta que deje
de transmitir calor.
5. Lavar con abundante agua
6. Cubrir el preparado con azul de metileno (contracolor) por 1 min
7. Lavar con agua
8. Dejar secar el preparado al aire
9. Observar el preparado con objetivo de inmersión
 Ê
 
 % 
'&) 
Manifiesta la capacidad de resistir a la decoloración gracias al alto
contenido de lípidos complejos (ácidos micólicos) y ceras que
poseen algunos microorganismos en su pared celular.
Los que resisten la decoloración se llaman ácido alcohol resistentes
AAR y se ven rojos mientras que se tiñen azul son los no ácido
alcohol reisistentes (no AAR).
Tinciones de Ziehl-Neelsen y PAS sin nada a
destacar.

Formación nodular de 3 cm
de diámetro máximo,
compatible con ganglio
linfático que muestra
superficie externa lisa con
restos de tejido adiposo, y
superficie de corte
amarillenta homogénea
 
 % Ê
Modificación de la de Romanowsky (azul de metileno y eosina) :
Para diferenciar lo intracelular de lo extracelular de parásitos en
sangre circulante en las especies como ë 


y
 
, Para demostración de formas de levaduras de
 
ë 
 ë 
?

   , para
la observación de especies Ê
  especies de   y
cuerpos elementales de especies de  


n laboratorios de hematología para demostrar la diferencia entre el

núcleo y el citoplasma de las distintas células sanguíneas.

 %  
+

l colorante no tiñe los microorganismos, se queda alrededor de ellos.

Se usa tinta china (suspensión de partículas de carbón coloidal) o
nigrosina (colorante negro insoluble en agua)
Se usa para encontrar presencia de cápsulas alrededor de las células
microbianas y micóticas, ya que este elemento no se tiñe con bases.
Para examinar estas tinciones debe aumentarse el contraste cerrando el
diafragma del condensador, la cápsula parece un halo que se ve gris
en el fondo negro.

 %   

Ya que las endosporas poseen cubiertas exclusivas para teñirlas se requiere calor
para que el colorante pueda penetrar se usa el verde de malaquita y safranina o
fucsina (tiñe contraste en formas vegetativas)
Según lo visto con aceite de inmersión, la
presencia de endosporas teñidas de
verde con malaquita verde y las células
vegetativas se tiñe con safranina. Sin
errores el material verde que puede estar
presente en la diapositiva después de la
tinción de endosporas -las endosporas
son simétricos en forma y apariencia, y
más pequeñas que las células vegetativas
(varios se indican con flechas de color
negro).
n este grupo, endosporas
quedan algunos dentro de las células (un
ejemplo de una endospora en una celda
se muestra por la flecha azul),
prácticamente todos han sido liberados

 %  #  

structuras muy delgadas se realiza una suspensión coloidal de sales de ácido

tánico (mordiente) que forman un precipitado que se deposita sobre las
estructurasy a la fucsina ácida los cilios y flagelos pueden ser visualizados como
estructuras de color rojo.
 
  
 

Se usan colorantes llamados fluorocromos que se iluminan con luz especial como :
naranja de acridina (afinidad especial por el ácido nucleico) rodamina-auramina
(ácidos micólicos de las paredes de micobacterias) y el blanco coflúor (afinidad
hacia celulosa, levaduras, hifas y seudohifas).

Naranja de acridina
susceptibilidad del ADN del
espermatozoide al ácido
inducido por la
desnaturalización   por
cuentificación del cambio
metacromático del naranja de
acridina fluorescente del
verde (ADN natural) al rojo
(ADN desnaturalizado
 

Negroni Marta ´Microbiología estomatológica ,
ditorial Médica Panamericana S. A.,
iuenos Aires 1999.
Liebana Ureña J. ´Microbiología oral 2ª
d. Interamericana de
spaña Mc Graw- Hill,
Madrid, 1995