Actividad 1

Determinación del grado de reacción en presencia o ausencia de enzima.

TIEMPO (min) Cubeta cantidad de p-nitrofenol (nm) producido Absorbancia a 410 nm

0 Inicio 0 0,000
1 E1 78,4 1,257
2 E2 137,2 2,201
4 E3 171,1 2,745
6 E4 173,7 2,786
8 E5 173 2,775

Actividad 1
200
180
160
140
p-nitrofenol (nm)

120
100
80
60
40
20
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Tiempo (min)

La cantidad de p-nitrofenol aumenta con el tiempo; inicialmente se producirá más

cantidad debido a las altas concentraciones tanto de enzima como de sustrato.
Finalmente, al disminuir el sustrato, se produce más lentamente el producto.

Velocidad de reacción:13,5 nmol/min de p-nitrofenol.

Velocidad del patrón: 12,5 nmol/min de p-nitrofenol.

Actividad 2

Efecto de la temperatura.

TEMPERATURA P-nitrofenol (nmol) Absorbancia (410nm) [ ]/min

0 39,3 0,63 19,65
22 130,9 2,1 65,45
37 177,1 2,84 88,55
 Actividad 2
100
90
80
70
60

[ ]/min
50
40
30
20
10
0
0 5 10 15 20 25 30 35 40
Temperatura (ºC)

La elevación de la temperatura incrementa la velocidad de una reacción catalizada por

enzimas. Al principio la velocidad de reacción aumenta cuando la temperatura se eleva
debido al incremento de la energía cinética de la energía de las moléculas reactantes.
Sin embargo, al final, la energía cinética de la enzima excede a la barrera energética para
romper los enlaces débiles de hidrogeno que conservan su estructura secundaria y
terciaria. A esta temperatura predomina la desnaturalización con pérdida precipitada de la
actividad catalítica. Por tanto las enzimas muestran una temperatura óptima de acción.
Los limites de actividad para la mayor parte de las enzimas tiene lugar entre los 10°C y
50°C; la temperatura optima para las enzimas en el cuerpo son alrededor de 37°C.

Actividad 3

Efecto del pH.

pH Absorbancia (410nm) p-nitrofenol (nm) [ ]/ min

5 0,2320 14,3 7,15
6,3 0,2410 15 7,5
8,6 0,2300 14,3 7,15

Actividad 3
7,6

7,5

7,4

7,3
[ ]/min

7,2

7,1

6,9
4,5 5 5,5 6 6,5 7 7,5 8 8,5 9
 La intensidad máxima de la actividad de la enzima, ocurre en el pH óptimo, con rápida
disminución de la actividad a cada lado de este valor de pH. La actividad óptima
generalmente se observa entre los valores de 5 y 9.

El pH óptimo de una enzima puede guardar relación con cierta carga eléctrica de la
superficie, o con condiciones optimas para la fijación de la enzima a su sustrato. Cuando
hay un exceso de iones hidrógeno, las enzimas los unen a sus moléculas y ante un déficit
los ceden. Este cambio tiene una doble consecuencia sobre la molécula: como todas las
proteínas, las enzimas desempeñan su función por los residuos de aminoácidos; algunos
confieren a su superficie una distribución de cargas eléctricas. Cuando la concentración
de iones hidrógeno es muy baja en comparación con la concentración optima, la molécula
los cede desapareciendo cargas positivas o apareciendo cargas negativas en su
superficie. Ante una concentración elevada de iones hidrógeno, algunos se fijan a la
molécula desapareciendo cargas (-) o poniendo cargas (+) que no existían.

Actividad 4

Efecto de la concentración de la enzima:

Cubetas Absorbancia (410nm) p.nitrofenol (nmol) Tiempo V (nmol/min)

Blanco 0 0 0 [alta]
H1 0,65 41,563 1 41,56
H2 1,06 66,750 2
H3 1,51 95,063 8
Blanco 0 0,000 0 [Baja]
L1 0,28 18,250 1 18,25
L2 0,52 33,563 2
L3 1,03 65,250 8

Actividad 4
100
90
80
70
60
p-nitrofenol

50
40
30
20
10
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Tiempo

A mayor concentración de enzima la velocidad de reacción transcurre más rápido.

 Actividad 5

Efecto de la concentración del sustrato:

Cubetas Absorbancia (410nm) p.nitrofenol (nmol) Tiempo V (nmol/min)

Blanco 0 0 0 [alta]
H1 0,34 21,3 1 21,3
H2 0,51 31,7 2
H3 1,8 111,9 8
Blanco 0 0 0 [Baja]
L1 0,11 6,5 1 6,5
L2 0,17 10,7 2
L3 0,48 30,1 8

Actividad 5
120

100

80
p-nitrofenol

60

40

20

0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Tiempo

A concentraciones relativamente bajas de sustrato, la velocidad de la reacción aumenta

en forma proporcional a la concentración de sustrato, obteniéndose una relación de tipo
lineal. Sin embargo, a concentraciones más altas de sustrato, la relación proporcional no
se cumple ya que al aumentar la concentración de sustrato, la velocidad no aumenta
considerablemente. Es entonces cuando la velocidad de reacción alcanza un valor
máximo Vmax, en el cual aunque se aumente la concentración de sustrato, la velocidad
de la reacción no varía.

Actividad 6

Test de viabilidad de un hongo en la producción de p-nitrofenol:

 Cubetas Absorbancia (410nm) p.nitrofenol (nmol) Tiempo V (nmol/min)
Blanco 0 5,3 0
1 0,12 7,3 1 2
2 0,19 11,6 2
3 0,27 17,1 4
4 0,35 21,9 6
5 0,39 24,4 8

Actividad 6
30

25

20
p-nittrofenol

15

10

0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Tiempo

El blanco preparado ya contiene celobiasa proveniente del hongo, con lo que habrá una
lectura inicial de p-nitrofenol. Se verifica que la producción de p-nitrofenol sí se puede
obtener a partir de un hongo (biodiésel).