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Lo que firmo, para dar cumplimiento al art. 11.3 del R.D. 56/2005, en
León a 10 de Enero de 2006.
Fdo.: Dr. José Mª. Zumalacárregui Rodríguez Fdo.: Dr. Javier Mateo Oyagüe
1
Si la Tesis está dirigida por más de un Director tienen que constar los datos de cada uno y han de firmar todos ellos.
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ADMISIÓN A TRÁMITE DEL DEPARTAMENTO
(Art. 11.3 del R.D. 56/2005 y Norma 7ª de las
Complementarias de la ULE)
El Departamento de Higiene y Tecnología de los Alimentos en su
reunión celebrada el día 19 de enero de 2006 ha acordado dar su conformidad
a la admisión a trámite de lectura de la tesis Doctoral titulada: “Aportaciones a
la caracterización de la morcilla de León y evolución de determinados
parámetros físicos, químicos y microbiológicos durante su conservación a
refrigeración”, dirigida por el Dr. D. José Mª Zumalacárregui Rodríguez y el Dr.
D. Javier Mateo Oyagüe y elaborada por D. Enrique Alfonso Cabeza Herrera.
Lo que firmo, para dar cumplimiento al art. 8º 2 del R.D. 778/98, en León
a 19 de enero de 2006.
La Secretaria
Vº Bº
El Director del Departamento
Muchas gracias
A Dios todo poderoso, por ser mi refugio
y fortaleza durante estos años lejos de
los míos.
I. INTRODUCCIÓN 1
I.1. GENERALIDADES 3
I.1.1. Reseña histórica 3
I.1.2. Definiciones 4
I.1.3. Embutidos de sangre regionales típicos españoles 6
I.1.4. Embutidos de sangre en otros países 7
II.3. MÉTODOS 87
II.3.1. Determinación de los parámetros químicos y físico-químicos 87
II.3.1.1. Humedad 87
II.3.1.2. Grasa 88
II.3.1.3. Carbohidratos utilizables 89
II.3.1.4. Nitrógeno total (NT) – Proteína 90
II.3.1.5. Cenizas 92
II.3.1.6. Fibra dietética total 93
II.3.1.7. Nitrógeno no proteico (NNP) 94
II.3.1.8. Hidroxiprolina (Hpro) – Colágeno 95
II.3.1.9. Azúcares simples 97
II.3.1.10. Ácidos orgánicos 100
II.3.1.11. Nitritos 102
II.3.1.12. Contenido en elementos minerales 104
II.3.1.13. Hierro no hémico 106
II.3.1.14. Ácidos grasos 107
II.3.1.15. Acidez total 110
II.3.1.16. Acidez de la grasa (% Ác. Oleico) 112
II.3.1.17. Determinación de compuestos volátiles 113
II.3.1.18. pH 117
II.3.1.19. Actividad de agua (aw) 118
II.3.1.20. Potencial redox (Eh) 118
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
V. CONCLUSIONES 229
–2–
______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
I.1 GENERALIDADES
–3–
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
I.1.2. Definiciones
Las definiciones de embutidos de sangre que se han encontrado en la
bibliografía proceden principalmente de autores alemanes y españoles.
Respecto a los primeros, Dehmer (1995) define a los embutidos de sangre de
Alemania, como una masa de sangre, cortezas y de trozos de mayor o menor
tamaño de carne magra y tocino embutida y escaldada – la presencia de una
cantidad considerable de cortezas o piel de cerdo es una característica típica
de los embutidos de sangre alemanes –; generando un embutido cocido que se
puede rebanar en frío, y esta propiedad se basa en la gelatina de la corteza del
cerdo y en las proteínas de la sangre. Una apreciación similar ofrece Stiebing
(1992) quien afirma que la firmeza al corte de estos productos se debe a la
mezcla de la sangre con la gelatina solidificada y/o a la unión por coagulación
de la proteína de la sangre.
Según Reichert (1988), el aspecto característico de esta clase de
embutidos depende de su color, que proporciona la presencia de la sangre. El
color debe ser entre rojo y castaño rojizo, pero no negro para aquellos
embutidos de sangre curados no cocidos, mientras que aquellos embutidos
cocidos deben presentar una coloración de parda oscura a negra. De acuerdo
con Wirth (1992), las morcillas son clasificadas como embutidos cárnicos por
emplearse en su elaboración porciones o partes de animales de abasto tales
como trozos de carne, vísceras (por ejemplo hígado e intestino), cortezas,
grasa, sangre y ser embutidos en tripas naturales o artificiales. De acuerdo al
proceso tecnológico, el mismo autor clasifica a las morcillas como embutidos
escaldados frescos ya que son sometidos a un tratamiento térmico mediante la
aplicación de calor a baja temperatura (temperatura en el centro del producto
de 65-75ºC aproximadamente), y como tal habitualmente son almacenadas en
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______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
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______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
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I.2.1. Generalidades
La elaboración de embutidos de sangre se remonta a la antigüedad, en
el medio rural de distintas regiones del mundo tradicionalmente la sangre se
utiliza como ingrediente de embutidos, guisos y repostería – bloodcakes,
galletas crujientes – (Wismer-Pedersen, 1979).
Actualmente la tecnología de los embutidos de sangre es
extremadamente variable, siguiendo tradiciones y gustos regionales a veces
muy localizados. Existe una gran variedad de embutidos de sangre típicos a lo
largo y ancho de Europa y también en Latinoamérica. Sin embargo, a pesar de
la reconocida tradición en la fabricación de embutidos de sangre son pocos los
trabajos publicados sobre formulación y tecnología de elaboración de estos
productos cárnicos en comparación con otros más conocidos. Esto puede
deberse a que los embutidos de sangre han sido y aún son alimentos ligados a
la elaboración artesanal en zonas rurales, siendo escasamente industrializados
a gran escala (Bermúdez et al., 2002; Santos et al., 2002).
Cabe reseñar cuatro libros o catálogos con información relativamente
amplia sobre formulación y proceso de elaboración de diversas variedades de
embutidos de sangre en varios países de Europa. En España se han descrito
más de 20 embutidos de sangre típicos regionales en un catálogo oficial de
productos cárnicos elaborado hace más de 20 años (MAPA, 1983) y Luzón-
Merino y Martín-Bejarano (2001a) ha recogido información sobre alguno más.
En el libro de Schiffner et al. (1996) hay un capítulo que describe 19 variedades
de morcillas alemanas. También en el libro de Frentz y Migaud (1976) se
describen hasta 12 embutidos de sangre franceses.
El trabajo más completo y profundo del que se tiene referencia en
España sobre morcilla es el que se está llevando en la Universidad de Burgos
sobre la morcilla de Burgos. Ya se ha elaborado una tesis doctoral (Santos,
2001) y otras están en proceso. El estudio, además de caracterizar este
producto cárnico, aborda aspectos relacionados con su vida útil y el efecto de
diversos ingredientes sobre su calidad. Las publicaciones de las que tenemos
constancia hasta el momento son: Santos et al. (1998; 2002; 2003; 2005a,
2005b), González et al. (2004) y Díez et al. (2004).
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______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
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______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
son: pimienta, orégano, clavo, canela, comino, cilantro, anís, nuez moscada,
tomillo y alcaravea.
Finalmente, la sal es un condimento utilizado en todos los tipos de
embutidos de sangre, a excepción de alguna variedad dulce, en cantidades de
1,2 a 2,5%. Hay un dicho popular en León y también en Burgos que dice: La
morcilla GRACIOSA debe ser SOSA Y PICANTOSA o la morcilla SALEROSA:
PICANTE Y SOSA.
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______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
Mezclado
Embutido y atado
Cocción y enfriamiento
Secado y ahumado
(opcionales)
Almacenamiento, conservación
I.2.3.1.1. Sangre
La sangre es considerada como un subproducto del proceso de sacrificio
de los animales de abasto solamente en el caso de que sea recogida bajo
condiciones higiénicas y sea destinada a la elaboración de algún producto con
valor añadido. Aproximadamente se obtienen 2,5 litros de sangre en el
sacrificio de un cerdo y entre 5 y 12 litros en el caso del vacuno (Wismer-
Pedersen, 1979). Sin embargo, en muchos mataderos, bien por no tener un
sistema adecuado de recogida o bien por carecer de las infraestructuras
necesarias para su almacenamiento y comercialización que hagan posible y
rentable su venta, la sangre es considerada y tratada como un residuo
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I.2.3.1.2. Grasa
La grasa en los embutidos de sangre proporciona un sabor y aroma, una
apariencia y unas características de textura determinadas y características al
embutido (Heinz, 1985; Reichert, 1988; Wirth, 1992). Como el caso de la
sangre, la grasa más empleada en la elaboración de morcillas es la de cerdo.
La grasa de elección depende del tipo de embutido y esto está relacionado con
la consistencia del producto, la tecnología de elaboración, etc. A veces se
prefiere una grasa blanda como manteca fresca o incluso fundida, otras veces
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______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
una grasa más firme como el tocino y, otras veces, tejidos grasos con
presencia de carne y/o colágeno como la grasa de panceta o papada. La
firmeza de la grasa además de estar determinada por el depósito graso que se
considere, también es función de los ácidos grasos que la constituyen,
procedentes a su vez de la dieta del animal (Davenel et al., 1999). En general,
una mayor proporción de ácidos grasos saturados implica una mayor firmeza
de la grasa, siendo el contenido en C18:0 o la relación C18:0/C18:2 los mejores
predictores de la firmeza (Wood et al., 2003). Estos autores señalan además
que la humedad de la grasa, que puede ser del 25% en grasa dorsal de cerdo,
está inversamente correlacionada con su firmeza. En ocasiones se emplea el
sebo de vacuno o de ovino, pero el sebo confiere a los embutidos una
consistencia más firme, un sabor más ‘fuerte’ y además es menos
emulsionable que la grasa de cerdo (Heinz, 1985). También, algunos
embutidos de sangre franceses contienen grasa butírica procedente de la nata
que se usa en su formulación. En la tabla I.2., se muestra una relación con los
principales ácidos grasos de la grasa dorsal de diversas especies animales
donde se observa que la grasa de porcino es la más insaturada y la de ovino la
más saturada.
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Por una parte, las bajas cargas microbianas en las piezas de grasa
fresca se consiguen con medidas higiénicas, uso de bajas temperaturas y
cortos periodos de almacenamiento (Heinz, 1985). No conviene almacenar la
grasa apilada de forma que no haya ventilación en la superficie de los trozos o
piezas y evitando que la piel, con mayor carga microbiana que el resto,
contacte con la superficie de la grasa.
Por otra parte, la utilización de grasas oxidadas o de grasas propensas a
la oxidación ocasiona defectos en el flavor en el producto o un acortamiento de
su vida útil por aparición de dichos defectos, respectivamente. Además, hay
cierta relación entre la oxidación lipídica y la oxidación de los pigmentos, de
forma que una promueve a la otra y viceversa, aunque los mecanismos de esta
interrelación no están del todo claros (Renerre, 2000).
Las bajas temperaturas de almacenamiento, la integridad física del tejido
graso, la ausencia de sal común, luz y/o oxígeno ambiental contribuyen al
retraso de la oxidación lipídica (Zumalacárregui et al., 2000). La composición
de la grasa también es un factor determinante. Un mayor contenido en ácidos
grasos poliinsaturados está relacionado con una mayor inestabilidad de la
grasa a la oxidación, lo que por una parte puede acelerar la rancidez oxidativa
del producto, pero por otra puede disminuir el potencial de desarrollo del flavor
durante el tratamiento térmico ligado a la presencia de estos ácidos grasos
(Wood et al., 2003). Por el contrario, mayor presencia de antioxidantes en la
grasa procedentes de la dieta, como la vitamina E u otros, aumentan la
estabilidad (Rosenvold y Andersen, 2003).
Además de estos factores tecnológicos, actualmente se está dando
importancia a diversos parámetros relacionados con el valor nutritivo de las
grasas animales, como son la relación entre ácidos grasos poliinsaturados y
ácidos grasos saturados, la relación entre ácidos grasos omega-3 y omega-6,
la cantidad de ácido linoleico conjugado o ácidos grasos trans, colesterol
(Valsta et al., 2005).
Dependiendo del embutido de sangre que se esté considerando, la
manteca o los tejidos grasos pueden ser sometidos o no a un precalentamiento
previo a la formación de la masa. En caso de existir precalentamiento, a veces
una parte de la grasa o la totalidad de la misma se utilizan para freír o sofreír
algunos de los otros ingredientes utilizados como la cebolla, etc. Otras veces
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I.2.3.1.4. Carne
La carne es un ingrediente utilizado en ciertos embutidos de sangre en
proporciones muy variables; la incorporación de este ingrediente aumenta
considerablemente el costo del producto. Normalmente se utiliza carne de
cerdo, aunque también existen recetas con vacuno. Las partes más utilizadas
son la carrillada u otras partes gelatinosas, o también partes grasas como las
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______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
papadas y pancetas. La carne se puede añadir picada (en picadora como placa
de 2 a 18 mm) o cortada en trozos más o menos gruesos. La carne se puede
incorporar cruda o escaldada a la mezcla del embutido; los trozos de carne
gruesos se suelen añadir precocidos. A veces, con el fin de mejorar el color, las
piezas o trozos de carne se someten a curado por inmersión, inyección o
ambos, que luego se cuecen y finalmente se pican o trocean en cubos
uniformes (Frenzt y Migaud, 1976; MAPA, 1983; Frey, 1985; Stiebing, 1990;
Schiffner et al., 1996).
I.2.3.1.5. Vísceras
Son diversas las vísceras que se utilizan en la elaboración de embutidos
de sangre. Por una parte se encuentran las vísceras de tipo muscular como la
lengua o el corazón y por otra parte, vísceras rojas como el hígado, los
pulmones, los riñones o el bazo. Las primeras se tratan de manera similar a la
carne (Frenzt y Migaud, 1976; MAPA, 1983; Stiebing, 1990; Schiffner et al.,
1996). Las segundas se suelen picar y se incorporan crudas a la masa del
embutido. Las vísceras se alteran con facilidad debido a los altos contenidos
microbianos que alcanzan en el momento de su obtención y en algunos casos
a su alto pH y contenido acuoso.
I.2.3.1.6. Cebolla
Los ingredientes no cárnicos empleados en los embutidos de sangre son
muy variados. Uno de los más característicos en las morcillas españolas,
francesas y portuguesas es la cebolla (Allium cepa L.), que puede llegar en
algunos casos a representar el 70% del total de la formulación (MAPA, 1983).
La variedad de la cebolla es un criterio de calidad importante en la elección de
la misma como materia prima para elaborar morcillas. Específicamente en la
elaboración de dos tipos de morcillas españolas (la de Burgos y la de León) se
considera que la mejor variedad de cebolla es la conocida como ‘horcal’ o de
‘horco’, también llamada matancera o de matanza o denominada por otros
como “la de invierno”. La producción de esta cebolla es limitada y su
disponibilidad en el mercado es claramente estacional por lo que se recurre a
otras variedades como son la grano oro, la liria y la babosa (Santos, 2001).
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dulce (Hirasa y Takemasa, 2002; Suh et al., 2002), pero la naturaleza de estos
cambios es desconocida en gran medida (Bianchini y Vainio, 2001). Además de
las repercusiones en el flavor, se ha comprobado que los compuestos
azufrados de la cebolla y de otros vegetales de la familia de las aliáceas
muestran, al menos in vitro o en animales de experimentación, propiedades
antagónicas al desarrollo de células tumorales y cáncer (Bianchini y Vainio,
2001).
La intensidad del flavor de las cebollas depende tanto de factores
genéticos como ambientales y está relacionada con el contenido en
compuestos azufrados y la concentración en la enzima alinasa (Randle, 1997).
Dentro del bulbo hay un gradiente en la concentración de precursores del
aroma, estando más concentrados en el interior del mismo. Algunas variedades
aumentan la intensidad del flavor durante el almacenamiento pero en otras se
ve disminuido (Randle, 1997).
La cebolla también se caracteriza por tener polifenoles en una cantidad
que varía entre 73 y 180 equivalentes de ácido gálico por 100 g de producto
(Balasundram et al., 2005), y dentro de estos destacan los flavonoides, que son
potentes antioxidantes (Hertog et al., 1992; Kaur y Kapoor, 2001). En la cebolla
puede haber dos grupos de flavonoides, las antocianinas que dan un color rojo
a ciertas variedades y los flavonoles tales como las quercetinas y el canferol,
siendo las quercetinas los más abundantes (Kaur y Kapoor, 2001). La cantidad
de quercetina de la cebolla es variable, de 300 a 500 mg/Kg. según Lombard et
al. (2005). Además, el consumo de quercetinas ha sido asociado con la
disminución del riesgo de padecer enfermedades coronarias (Hollman et al.,
1996).
De forma experimental, las plantas del género Allium como el ajo y la
cebolla o sus extractos han sido considerados como ingredientes con un
importante efecto antioxidante sobre la oxidación lipídica (Cao et al., 1996;
Gazzani et al., 1998; Yin et al., 1998; Zhou y Yu, 2005). El efecto antioxidante
de la cebolla y el ajo se debe tanto a la acción de algunos de los compuestos
azufrados – alicina, el dialil disulfuro o dialil trisulfuro – (Kim et al., 1997;
Lampe, 1999), como a la de los flavonoides, concretamente la quercetina (Patil
y Pike, 1995; Kaur y Kapoor, 2001). Según el trabajo de Nuutila et al. (2003), la
cebolla mostró un claro efecto frente a la oxidación lipídica, principalmente
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______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
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______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
Tabla I.4.- Composición nutricional del arroz cocido y de la harina de trigo por
100 g de porción comestible.
Nutriente Unidades Arroz Harina
Agua g 12,89 13,66
Proteína “ 6,61 11,98
Lípidos “ 0,58 1,66
Ácidos grasos saturados “ 0,16 0,24
Ácidos grasos monoinsaturados “ 0,18 0,14
Ácidos grasos poliinsaturados “ 0,16 0,73
Carbohidratos (por diferencia) “ 79,34 72,53
Fibra dietética total “ - 2,4
Azúcares “ - 0,31
Cenizas “ 0,58 0,47
P mg 108 97
K “ 86 100
Mg “ 35 25
Ca “ 9 15
Na “ 1 2
Zn “ 1,16 0,85
Mn “ 1,10 0,79
Fe “ 0,80 4,41
Cu “ 0,11 0,18
Se µg - 39,7
Tiamina mg 0,07 0,81
Riboflavina “ 0,05 0,51
Niacina “ 1,60 7,55
Fuente: USDA (2005).
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especias (Ordóñez et al., 1999; Hirasa y Takemasa, 2002; Burt, 2004; Nasar-
Abbas y Kadir-Halkman, 2004).
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caso funda, y agregar algunos ingredientes, como por ejemplo los vegetales,
cereales y derivados, carne y vísceras, pimentón, ajo, etc., para
freírlos/sofreírlos en la manteca, y finalmente, normalmente en caliente a una
temperatura en torno a los 50-70ºC, agregar la sangre, las especias y el resto
de los ingredientes. Otra forma de mezclado requiere el uso de la cúter. El
mezclado con la cúter no se recoge en el proceso de elaboración de morcillas
españolas (MAPA, 1983; Luzón-Merino y Martín-Bejarano, 2001a), sin
embargo, se menciona en algunos tipos de embutidos de sangre franceses y
alemanes (Frentz y Migaud, 1976; Stiebing, 1990; Schiffner et al., 1996),
especialmente en aquellos que llevan cortezas y/o carne rica en tejido
conjuntivo. Las cortezas, el caldo de cocción y, en su caso la carne y las
vísceras, se trabajan en la cúter en caliente (40-95ºC) hasta formar una pasta
homogénea, y al alcanzarse una temperatura de unos 60ºC se adiciona la
sangre, las especias y los condimentos y aditivos. La temperatura durante el
proceso de mezcla ha de estar entre 40-60ºC. Si ésta es superior, el color de la
sangre se tornará marrón oscuro y si es inferior la gelatina puede gelificar y el
proceso de mezcla y embutido puede verse dificultado (Frey, 1985; Stiebing,
1992). Según estos autores un exceso de sangre en la mezcla también puede
ocasionar un color demasiado oscuro en la mezcla. Otros ingredientes como la
cebolla o la grasa se introducen en la cúter hacia el final del proceso de mezcla
o una vez acabado el cortado en la cúter, en cualquier caso en el momento
óptimo para que alcancen el grado de picado deseado. La carne y la grasa se
pueden fraccionar y añadir una parte al principio y otra hacia el final del
proceso, de tal manera que parte esté en forma de pasta fina y otra parte en
trozos visibles más o menos grandes. Además de los procedimientos de
mezclado descritos puede haber variantes de los mismos.
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______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
que usualmente se lleva a cabo con mezclas de CO2 y N2, también contribuye
significativamente al aumento de la vida útil de los productos cárnicos cocidos,
a la vez que se previenen o minimizan los defectos anteriormente mencionados
(Ahvenainen et al., 1990; Borch et al., 1996; Gray et al., 1996; Pexara et al.,
2000; Murcia et al., 2003).
En la práctica, en el mercado español, los embutidos de sangre se
conservan colgados en cámaras frigoríficas en contacto directo con el aire e
intercambiando humedad con el ambiente a través de la tripa. O también
pueden ser envasados en envases herméticos a vacío o en bandejas o bolsas
con o sin atmósferas modificadas. A veces los embutidos de sangre son
productos de precio bajo y el envasado en bandejas de pequeñas cantidades
de producto encarece considerablemente el coste del mismo (Industriales del
sector, comunicación personal).
En un estudio realizado sobre la morcilla de Burgos, Santos et al.
(2005a) encontraron mediante pruebas sensoriales que el envasado a vacío o
con atmósferas modificadas aumentó considerablemente la vida útil. Así la
morcilla conservada al aire no fue aceptable después de 17 días de
conservación, mientras las conservadas en vacío y atmósfera modificada con
30% de CO2 fue aceptable hasta los 22 días y con un 50% y 80% de CO2 esta
aceptabilidad se mantenía a los 32 días.
Por otro lado, en un breve trabajo realizado por Zapata et al. (2004) en el
que se evaluaron los efectos de la adición de sorbatos y del contenido en
humedad de una morcilla de cebolla sobre su vida útil envasada a vacío y en
atmósfera protectora, se encontró que los factores limitantes de la vida útil de la
morcilla fueron las adherencias al envase y la aparición de colonias visibles en
la tripa, respectivamente. También sugirieron que el envasado de morcillas en
atmósferas modificadas se debería hacer en frío, a temperaturas inferiores a la
de conservación, evitando así la condensación de vapor de agua en el interior
del envase y mejorando su presentación de cara al consumidor.
Hay otro estudio sobre la morcilla portuguesa “Morcela de Assar”
(Roseiro et al., 1998), que es ahumada y secada durante unos días,
alcanzándose una humedad en torno al 40% del peso del producto, en el que
se estudió la influencia del envasado (al vacío o en atmósferas modificadas) y
la temperatura de almacenamiento (4ºC o 20ºC) sobre la vida útil de dicho
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2003; KTL, 2005a y 2005b; Møller et al., 2005; Souci et al., 2005; USDA,
2005a).
Morcilla de Burgos 62,2 28,7 51,1 13,1 4,3 1,7 Santos et al. (2003)
Morcilla asturiana 38,5 69,1 8,0 7,0 2,9 - Martín et al. (2005)
Morcilla
extremeña 15,9 71,9 20,2 7,9 - - Gimeno et al. (1987)
(Badajoz)
Morcilla de cebolla
46,0 59,4 23,2 20,9 - 0,0 Martín et al. (2005)
de Córdoba
Morcilla del año,
30,9 64,3 25,9 11,3 - 0,0 Martín et al. (2005)
Córdoba
Morcilla Lustre,
34,0 70,9 18,0 19,4 - 0,0 Martín et al. (2005)
Córdoba
Otros países de
Europa
“Blutwurst”,
55,9 65,8 0,0 27,4 - - Souci et al. (2005)
Alemania
Tipo “Thueringer,”
66,2 32,3 0,0 58,9 - - Souci et al. (2005)
Alemania
Verivanukas,
61,1 22,6 43,9 19,3 - 9,8 KTL, (2005a)
Finlandia
Verimakkara
mustamakkara, 54,7 42,0 21,2 28,7 - 6,2 KTL, (2005b)
Finlandia
Blodpølse,
43,7 36,9 32,0 19,0 3,2 8,9* Møller et al. (2005)
Dinamarca
Morcela de Assar,
41,3 47,2 0,0 45,1 - - Roseiro et al. (1998)
Portugal
Morcela de Arroz, Cattaneo y
62,0 38,9 24,6 28,9 - -
Portugal Bonandrini (1998)
Boudin noir,
59,3 63,9 5,9 27,0 - - CIC, (2005)
Francia
América
Blood Sausage,
47,3 65,5 2,5 27,7 4,4 0,0 USDA (2005a)
E.E.U.U.
Tradicional de
77,8 38,3 0,0 47,3 8,6 5,9 Bunger et al. (1992)
Chile
Tradicional de FAO/LATINFOODS
44,5 57,3 10,8 31,7 1,8 -
Bolivia (2005)
Boliviana con FAO/LATINFOODS
48,8 55,5 0,0 41,2 3,3 -
lengua (2005)
FAO/LATINFOODS
Boliviana Stege 41,2 56,8 6,5 31,2 5,4 -
(2005)
Tradicional FAO/LATINFOODS
46,1 - - 25,1 3,0 -
Uruguaya (2005)
CU: Carbohidratos utilizables
*: Fibra dietética
– 44 –
______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
– 45 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
I.2.6.1. Generalidades
La morcilla de León es un producto cárnico tradicional, derivado,
asociado y dependiente originalmente de la matanza familiar, que constituye un
rito tradicional en el que se reúnen la familia, los vecinos, los amigos para la
– 46 –
______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
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Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 48 –
______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
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Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
elaboración de esta morcilla varía entre el 1 y el 1,5%, lo que la hace algo sosa
al gusto.
Para embutir la masa, antiguamente se usaba la tripa del propio cerdo
que se sacrificaba, bien lavada y, en la actualidad, generalmente a nivel
industrial se usa tripa de vacuno con un calibre próximo a los 45 mm (Mateo et
al., 2005a).
– 50 –
______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
A A’ B
MEZCLA: MEZCLA:
CEBOLLA PICADA CEBOLLA PICADA
ARROZ MEZCLA: GRASA PICADA
MANTECA PICADA/FUNDIDA CEBOLLA PICADA PAN
AGUA AGUA ESPECIAS
REPOSO
(3 HORAS)
ARROZ SANGRE
MANTECA PICADA
SANGRE SANGRE MEZCLA
ESPECIAS ESPECIAS
PRECOCCIÓN
PRECOCCIÓN
15-20 MIN
EMBUTIDO EMBUTIDO
CALIENTE FRÍO
COCCIÓN COCCIÓN
5-20 MIN 40-50 MIN
80-100ºC EBULLICIÓN
ENFRIADO
(AGUA FRÍA O
Tª AMBIENTE)
ALMACENAMIENTO
REFRIGERACIÓN
10-15 DÍAS
– 51 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
Foto I.2.- Aspecto de la masa de morcilla de León sin embutir lista para
su distribución al sector de restauración colectiva.
– 52 –
______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
– 53 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
I.3.1. Generalidades
La calidad de la carne y los productos cárnicos viene definida por
aquellos aspectos que condicionan su consumo. Dejando a parte el precio o las
cuestiones éticas o religiosas que evidentemente condicionan el consumo de
carne, la tabla I.7 muestra los aspectos más relevantes de calidad de carne y
productos cárnicos para la mayoría de los consumidores en la que se
establecen cuatro categorías: condiciones higiénicas y sanitarias, propiedades
nutritivas, funcionales y sensoriales.
– 54 –
______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
– 55 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
Condiciones intrínsecas
(Tipo y características de las materias primas)
•Formulación/composición.
•Propiedades físico-químicas, estructuras.
•Contaminación microbiana inicial.
(Efecto del procesado)
•Propiedades físico-químicas y estructuras del producto procesado.
•Contaminación microbiana del producto procesado.
Rancidez Putrefacción
Cambio de textura Acidificación
Pardeamiento Limosidad
Formación de gas
Fig. I.3.- Variables que afectan a la vida útil de los alimentos y las principales
manifestaciones que presentan los alimentos alterados. Adaptada de Huis in’t
Veld (1996).
– 56 –
______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
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Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
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______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
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______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
– 61 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
I.3.2.4.1. Generalidades
Se entiende por productos cárnicos cocidos o escaldados aquellos que
han sido sometidos a un tratamiento térmico de “pasteurización”, esto es a
temperaturas mínimas de 62ºC en el centro térmico del producto, y
frecuentemente entre 70-80ºC (ICMSF, 2001). Como ejemplo de estos
productos encontramos el jamón cocido, fiambres, mortadelas, patés, morcillas,
salchichas tipo Frankfurt, bacón, etc. Estos productos cárnicos presentan gran
variabilidad en cuanto a formulación y proceso de elaboración. Pueden ser
elaborados con piezas de carne intactas o enteras o con carnes picadas, con
mayor o menos cantidad de grasa, o incluso pueden llevar sangre. Los
ingredientes no cárnicos y aditivos son variados, la mayoría de ellos son
curados, es decir elaborados con sales del curado – nitritos y nitratos –. La
presencia de microorganismos en las materias primas – carne, grasa, tripas,
sólidos lácteos, especias, etc. – (Jay, 2002), así como la incorporación o
crecimiento microbiano durante el proceso de elaboración previo al tratamiento
térmico condicionan la carga microbiana antes de la cocción. El tratamiento
térmico dependiendo de su intensidad reduce en mayor o menor medida dicha
carga microbiana (la microbiota total experimenta 2 o más reducciones
decimales), viéndose especialmente afectados los microorganismos
psicrótrofos y mesófilos más sensibles al calor. Después de la cocción
generalmente se encuentran recuentos microbianos con valores comprendidos
entre 101 y 104 ufc/g (Heiszler et al., 1972; Samelis et al., 1998, 2000;
Vermeiren et al., 2005). Las pseudomonas, bacterias ácido lácticas, levaduras
y enterobacterias están en bajas cantidades. Sin embargo, tras el
calentamiento, el producto puede contaminarse debido a la manipulación y el
contacto con el ambiente, siendo la higiene de este proceso y, en mayor
medida, la protección que le confiere el envasado como barrera física a la
contaminación, los principales factores de la estabilidad microbiológica durante
el almacenamiento (Borch et al., 1996; Vermeiren et al., 2005). Posteriormente,
durante la conservación de los productos cárnicos a refrigeración (a
temperaturas entre -1,5 a 5ºC) tiene lugar un crecimiento microbiano dominado
– 62 –
______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
por la flora psicrótrofa mejor adaptada a las condiciones del alimento, con una
velocidad que está condicionada enormemente por la temperatura (Borch et al.,
1996). Dada la amplia variedad de productos cárnicos cocidos y las diferencias
en el envasado, el crecimiento microbiano de de cada producto presenta sus
propias peculiaridades. En cualquier caso el crecimiento microbiano produce
cambios bioquímicos en los alimentos que acaban por ser apreciados
organolépticamente.
Por una parte, los productos cárnicos cocidos constituyen en general un
buen sustrato para el desarrollo de diversos grupos microbianos (Buchanan,
1986). Precisamente debido a las condiciones que presentan: aw relativamente
alta (generalmente entre 0,97 y 0,99), un pH en la mayoría de los casos
cercano a 6 y un elevado contenido en nutrientes fácilmente asimilables por la
mayoría de la microbiota, como la glucosa, aminoácidos, nucleótidos, urea y
proteínas solubles (Nychas et al., 1998). En los productos cárnicos cocidos
expuestos al aire la superficie será altamente aerobia lo que permite el
crecimiento de microorganismos aerobios y anaerobios facultativos. Sin
embargo, a una distancia más o menos corta de la superficie la cantidad de
oxígeno disminuye drásticamente y los microaerófilos anaerobios y anaerobios
facultativos será la microbiota con mayores posibilidades de predominar. Así
pues, el tipo de envasado empleado puede alterar el ambiente gaseoso en la
superficie y en la parte más superficial del interior del producto, o incluso en
todo el producto si debido a las características de la masa, como su porosidad,
hay una alta permeabilidad a los gases.
Por otra parte, estos productos cárnicos pueden contener sustancias con
efecto antimicrobiano tales como los nitritos en productos curados, cuya
actividad es más marcada en condiciones anaerobias y presentan un carácter
selectivo siendo más acusado para algunos grupos como las
enterobacteriáceas, Brochothrix thermosphacta o los clostridios que para otros
como las BAL o los micrococos (Nielsen, 1983; Borch et al., 1996; Vermeiren et
al., 2005). Diversos componentes de las especias, los ácidos orgánicos o los
compuestos derivados del humo (Beuchat y Golden, 1989; Aureli et al., 1992;
Sağdiç y Özcan, 2003; Nasar-Abbas y Kadir-Halkman, 2004; Holley y Patel,
2005) y, en algunos casos, los conservantes autorizados como el ácido sórbico
y los sorbatos, son otros agentes inhibidores del crecimiento microbiano. Sin
– 63 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
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______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
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______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
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Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
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______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
como nutrientes por este grupo (Gill, 1986). Estas particularidades metabólicas
de Pseudomonas spp. suponen una ventaja competitiva con respecto a otros
grupos alterantes.
En la alteración de la carne por Pseudomonas spp., y probablemente
también en la de los productos cárnicos cocidos, la concentración de glucosa
juega un papel clave. En la mayoría de los casos, una vez agotada la glucosa y
otros metabolitos no nitrogenados, los aminoácidos y otros compuestos del
nitrógeno no proteico son degradados, y es entonces cuando comienzan a
detectarse los signos de alteración en el aroma, descritos como olor a establo,
mantequilla, grasa, queso, y en estados más avanzados olores a putrefacción,
(Gill, 1996; Ellis y Goodacre, 2001). La degradación de los aminoácidos libres
da lugar a distintos compuestos como NH3, sulfuros, aminas, indol y escatol
(Ellis y Goodacre, 2001), que además de producir esos malos olores,
incrementan el pH. En este sentido, se ha observado que a mayor contenido de
glucosa, mayores son tanto el tiempo como la población de Pseudomonas spp.
necesarios para producirse signos de alteración (Drosinos y Board, 1994).
Otras características de alteración por Pseudomonas spp. son: la limosidad
superficial, ocasionada por formación de polisacáridos y proteólisis, y la
aparición de olores rancios por actividad lipolítica (Lasta et al., 1995; Huis in’t
Veld, 1996; Nychas et al., 1997, 1998).
La presencia de las Enterobacteriaceae en los productos cárnicos
cocidos suele atribuirse a contaminación por manipulación y mala higiene,
siendo pocas las bacterias de esta familia que sobreviven al tratamiento
térmico de pasteurización (Dykes et al., 1991). Por este motivo se utilizan, en
Europa preferentemente, para indicar la calidad sanitaria de alimentos
procesados – su presencia en niveles altos indicaría elaboración poco higiénica
o contaminación posterior –. En la norma de calidad específica para jamón
cocido y fiambre de jamón (BOE 3-1-84) se establece como límite
microbiológico 102 ufc/g de enterobacteriáceas totales.
Este grupo microbiano puede ser en ocasiones responsable del deterioro
de los productos cárnicos cocidos, especialmente cuando el pH es alto
(superior a 6) y el contenido salino bajo (inferior a 4%), encontrándose en
valores muy superiores a los indicados en la norma referida anteriormente.
Tres factores que inhiben fuertemente el crecimiento de las enterobacteriáceas
– 69 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
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______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
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Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
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______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
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Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
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______________________________________________________Capítulo I.- Introducción
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Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
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II. MATERIAL Y MÉTODOS
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 78 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
Fase A Fase B
Muestreo I Muestreo II
Composición
Físico–química
Sensorial
– 79 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 80 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
• Compuestos volátiles.
• pH, aw, y Eh.
• Color (L*, a* y b*).
• Textura (fuerza de extrusión hacia atrás).
- Parámetros microbiológicos
• Microbiota de la masa (FAMV, FAPV, mohos y levaduras, flora
esporulada aerobia mesófila y flora esporulada anaerobia mesófila,
Enterobacteriaceae, Enterococcus spp., BAL, Micrococcaceae,
Pseudomonas spp. y B. thermosphacta).
• Microbiota de la superficie (FAMV, FAPV y mohos y levaduras).
- Parámetros sensoriales
• Análisis sensorial discriminante.
II.1.3.1. Fase A:
En el muestreo I, necesario para la caracterización de la morcilla durante
su fase de comercialización, se analizaron ocho marcas diferentes. Las
morcillas se adquirieron en tiendas minoristas y fueron elaboradas por cuatro
industrias cárnicas o carnicerías (Embutidos MorciLeón, Embutidos Lucio,
Carnicería Matachana y Carnicería Visi) localizadas en la ciudad de León y por
otras cuatro (Morcillas Morvega, Morcillas Villamoros, Industrias Cárnicas José
Suárez, y Carnicería Carlos) ubicadas en distintas localidades de la provincia:
Sahelices de Sabero, Villamoros de las Regueras, Navatejera y La Robla,
respectivamente. De cada marca se tomaron muestras en dos días distintos.
Cada muestra consistió en cuatro unidades de morcilla con un peso
aproximado de 250 g cada morcilla. Todas las morcillas muestreadas tenían las
características típicas de la morcilla fresca de León y fueron elaboradas con
cebolla, sangre de cerdo o vacuno, grasa de cerdo o vacuno, arroz, pan o
fécula, sal, pimentón, ajo y otras especias.
– 81 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
II.1.3.2. Fase B:
Para el establecimiento de las modificaciones que sufre la morcilla de
León durante su almacenamiento a refrigeración, se partió de 6 lotes de 25 Kg
cada uno, elaborados por dos industrias (I y II) (Tabla II.1.a), siguiendo el
procedimiento habitual establecido por cada uno de los industriales, los cuales
no nos fueron totalmente desvelados debido al secreto industrial. En cualquier
caso, la materia prima de las morcillas elaboradas por la industria I consistió en
cebolla, sangre de cerdo, manteca de cerdo fundida, arroz y una mezcla de
especias. Mientras las materias primas de las morcillas elaboradas por la
industria II fueron cebolla, sangre de cerdo, manteca de cerdo fresca, arroz,
sal, ajo, pimentón y una mezcla de otras especias. En ambos casos no se
utilizaron aditivos para la elaboración de las morcillas y las materias primas
fueron sometidas a un precalentamiento antes del embutido y un segundo
tratamiento térmico posterior al mismo.
Los lotes de morcilla se llevaron al laboratorio al día siguiente de su
elaboración. Cada lote se dividió en grupos de 3-4 morcillas que se colocaron
– 82 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
2
Equipo de almacenamiento digital de temperatura.
– 83 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
a) condiciones de almacenamiento.
Industria Lote Temperatura (ºC) Tiempo (días)
I 1
0 35
II 2
I 3
3 29
II 4
I 5
6 14
II 6
– 84 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
– 85 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 86 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
II.3. MÉTODOS
II.3.1.1. Humedad
La determinación del contenido en humedad se realizó por desecación
en estufa de aire forzado caliente hasta peso constante, siguiendo la Norma
ISO 1442 (1973).
Reactivos
• Alcohol etílico al 96 % (v/v).
• Arena de mar lavada grano fino.
Procedimiento
Se tomaron unas cápsulas de acero inoxidable y se dejaron 1 hora a
100ºC, luego se pesaron aproximadamente 15 g de arena de mar de grano fino
en cada cápsula, colocando a continuación en su interior una varilla de vidrio.
El conjunto (cápsula, arena y varilla) se introdujo en una estufa, donde se
desecó durante 30 min. a 102 ± 2ºC, trasladándose seguidamente a un
desecador donde se dejó enfriar hasta temperatura ambiente, pesándolo a
continuación con ±0,01 g de precisión.
Posteriormente se colocaron en la cápsula aproximadamente 5 g de
muestra y se pesó nuevamente, se añadieron 5 mL de alcohol etílico al 96%,
se mezcló la muestra con la arena con la ayuda de la varilla de vidrio. Las
cápsulas se colocaron en baño de arena caliente hasta la evaporación del
alcohol, agitando periódicamente para prevenir la formación de costras y de
proyecciones. Finalmente se sometió el conjunto a desecación a 102 ± 2ºC
durante 4 h. Transcurrido este tiempo, se procedió al enfriamiento en el
desecador y el conjunto se pesó.
El contenido en agua de la morcilla se calculó por diferencia de pesada
antes y después del tratamiento.
La humedad se expresó como porcentaje en peso y se calculó según la
siguiente fórmula:
– 87 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
P1 − P 2
% Humedad = × 100
P1 − P 0
II.3.1.2. Grasa
Para la determinación de la grasa se siguió la Norma AOAC 960.39
(AOAC, 1999a), utilizando el extractor de grasa automatizado modelo
“SOXTEC System HT 1043 Extraction Unit” y la unidad de servicio, TECATOR.
Reactivos
• Éter de petróleo 40-60ºC.
Procedimiento
Primeramente, se secaron los vasos metálicos (conteniendo cada uno 3
perlas de vidrio), en los que se va a recoger la grasa, durante 30 min. a 102 ±
2ºC, se enfriaron en desecador y se pesaron con precisión de ±0,1 mg (al igual
que el resto de las pesadas que se indican a continuación). Se partió de la
muestra seca obtenida tras la determinación de la humedad (II.3.1.1). Se
introdujo cuidadosamente y de forma cuantitativa en un cartucho de extracción
de celulosa.
Dichos cartuchos se taparon con algodón y se les acopló el
correspondiente anillo para sujetarlos en el instrumento de extracción Soxhlet.
Los cartuchos una vez acoplados se sumergieron en los recipientes metálicos –
que contenían 40 mL de éter de petróleo – y se comenzó la extracción
manteniendo a ebullición durante 15 min.; durante los 30 min. siguientes, se
sacaron los cartuchos de los recipientes metálicos y se siguió con la destilación
a reflujo. Posteriormente se cerró la válvula de reflujo durante 5 min. con el fin
de evaporar el éter de las cápsulas y finalmente durante otros 5 min. se
mantuvo el modo de evaporación con aire para secar el éter de los cartuchos.
Por último, se retiraron los vasos metálicos con la grasa, se introdujeron 45
min. en la estufa a 102 ± 2ºC, se llevaron al desecador hasta alcanzar la
temperatura ambiente y se pesaron.
La grasa se expresó como porcentaje en peso según la siguiente
fórmula:
– 88 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
P1 − P 0
% Grasa = × 100
P2
– 89 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
1,2
1,0
0,8
Absorbancia
0,6
0,4
y = 0,0179x + 0,1241
0,2
R2 = 0,996
0
0 10 20 30 40 50
mg de glucosa/mL
– 90 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
– 91 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
gastado con una bureta graduada. Además de las muestras se realizaron dos
blancos.
El porcentaje de nitrógeno total se determinó mediante la siguiente
fórmula:
0 ,14 f × (V f − V 0 )
% Nitrógeno Total = ×N
P
II.3.1.5. Cenizas
Para la determinación de las cenizas se siguió el Método Oficial de
Análisis de Productos Cárnicos (Presidencia del Gobierno, 1979) consistente
en la calcinación en mufla.
Reactivos
• Agua Mili-Q.
• Acetato de magnesio anhidro al 15% (p/v).
Procedimiento
Se introdujeron las cápsulas de porcelana en una estufa a 102 ± 2ºC
durante al menos 30 min. para su desecación. Se sacaron y se enfriaron en el
desecador durante otros 30 min. y se anotó su peso. En dicha cápsula se
pesaron 5 g de muestra, se le añadió 1 mL de solución de acetato de
magnesio, se mezcló uniformemente y se introdujo en la mufla a 100ºC para ir
subiendo la temperatura 50ºC cada 30 min. hasta llegar a 250ºC.
Posteriormente se subió a 550ºC y se mantuvo a esa temperatura 1 h, se
comprobó que las cenizas tenían un color blanco o ligeramente gris – en caso
contrario se añadieron 2 mL de agua Mili-Q y se repitió el proceso de
– 92 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
P0 = Peso en g de la cápsula
P1 = Peso en g de la cápsula conteniendo la muestra
P2 = Peso en g de la cápsula y el residuo después de la incineración
P3 = Peso en g del óxido de magnesio proveniente de la disolución de acetato de
magnesio añadido (blanco)
– 93 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 94 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
– 95 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
Procedimiento
Preparación de la muestra
Se pesaron aproximadamente 5 g de muestra que se colocaron en un
matraz de 100 mL, se añadieron unas perlas de vidrio y 50 mL de HCl al 50%.
Los matraces con la mezcla se llevaron a un destilador de reflujo manteniendo
una ebullición suave durante al menos 7 h. Se refrigeraron los matraces con
agua corriente inmediatamente y se neutralizó el contenido con 28 mL de la
solución concentrada de NaOH y agitando vigorosamente. Posteriormente, se
dejó enfriar al chorro de agua y el pH final del contenido de los matraces fue
ajustado entre 6 y 7 con la solución diluida de HaOH. Entonces se transfirió el
contenido a un matraz aforado de 200 mL y se enrasó dejándolo en reposo
durante 1 h, y se tomó una alícuota previa filtrada de la solución, para la
determinación espectrofotométrica.
Preparación de la curva patrón
Se preparó una solución madre conteniendo 400 µg/mL de Hpro en agua
destilada. Se hicieron diluciones acuosas de 10, 15 y 20 µg/mL. A continuación
en una serie de tubos de ensayo aforados de 12 mL, se colocó en el primer
tubo (testigo) 1 mL de agua destilada y en los tres siguientes la misma cantidad
de las soluciones que contenían 10, 15 y 20 µg/mL de Hpro. Posteriormente se
añadieron a cada tubo 2 mL de isopropanol puro y 1 mL de la solución oxidante
recientemente preparada y se agitó dicha mezcla. Se dejó reposar durante 10
min. y se añadió a cada tubo 3 mL de la solución de ácido perclórico al 17,5% y
2 mL de p–DMAB al 5%. Se homogenizó y se llevó al baño de maría a 60ºC
durante 2 min. Entonces se ajustó el volumen hasta 12 mL con isopropanol, se
agitó y se leyó la densidad óptica de cada tubo a 560 nm. Se realizó la
correspondiente curva patrón colocando en las ordenadas la absorbancia y en
las abscisas las concentraciones (µg/mL de Hpro) y ajustando los pares de
valores mediante regresión lineal (Figura II.3.).
Determinación espectrofotométrica de la Hpro
Para la determinación de la Hpro de las muestras se procedió de la
misma forma que para la curva patrón, pero en lugar de 1 mL de las soluciones
patrón se tomó 1 mL de cada una de las alícuotas del filtrado con la muestra
problema y la lectura en el espectrofotómetro se interpoló en la curva patrón
para obtener la concentración de Hpro.
– 96 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
% Colágeno = 8 x %Hpro
0,6
0,5
Absorbancia
Absorbancia
0,4
0,3
0,2
y = 0,0923x + 0,1702
0,1 R2 = 0,999
0
0 1 2 3 4
µg/mL de Hpro
– 97 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
Procedimiento
Obtención del extracto
Para la extracción de los azúcares, se pesaron con una precisión de ±
0,01 g, 10 g de muestra, se adicionaron 50 mL de una solución caliente de
etanol-agua al 80% (v/v), a continuación se homogenizó la muestra en Sorvall
durante 1 min. y luego se transfirió a tubos de centrífuga de 100 mL. Se
centrifugó la muestra a 3000 rpm durante 5 min., pasado este tiempo se filtró el
sobrenadante en papel Albet 400. Acto seguido, fue llevada a cabo una
segunda extracción del residuo añadiéndose nuevamente 50 mL de alcohol
etílico al 80%, homogenizando, centrifugando y filtrando en las condiciones
descritas anteriormente. Una vez recolectada las dos fracciones del
sobrenadante, se procedió a la evaporación del disolvente de las mismas con
un rotavapor a una temperatura de 40ºC aprox. durante 20 min., hasta obtener
20-30 mL de volumen final. La solución obtenida fue enrasada con agua
destilada a un volumen de 50 mL.
Desarrollo cromatográfico en HPLC
Previamente a la inyección, las muestras fueron diluidas en ácido
sulfúrico 1 mM en una proporción 1:1 (v/v) y posteriormente fueron filtradas a
través de un filtro de 0,45 µm de diámetro de poro. 15 µL de esta solución
fueron inyectados en un cromatógrafo modelo Alliance – Waters 2690 –,
equipado con un detector de refractometría – Waters 410 – una columna de
separación de intercambio iónico Bio Rad-Aminex HPX-87H de longitud 300
mm x 7,8 mm, protegida con una precolumna Micro-Guard H+ (Bio-Rad
Laboratories) de 3 cm x 4,6 mm.
Las condiciones del análisis cromatográfico fueron:
• Fase móvil: ácido sulfúrico 5 mM, isocrático.
• Velocidad de flujo: 0,6 mL / min.
• Temperatura de la columna: 60ºC.
• Duración de la carrera: 30 min.
Identificación
Para la identificación de los compuestos se inyectaron patrones de
azúcares (Fluka) (Tabla II.2) y de NaCl y fueron comparados los tiempos de
retención obtenidos para los patrones con los de las muestras.
– 98 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
Cuantificación
Para la cuantificación de los azúcares identificados se realizó una curva
de calibración usando soluciones con 3 cantidades crecientes de azúcares y de
NaCl (Ej. Figura II.4.) e interpolando el valor del área obtenida para cada
azúcar identificado en la recta de regresión respectiva. El contenido final de
azúcares se expresó en g/100 g de producto.
4,0E+05
3,0E+05
Área
Área
2,0E+05
0,0E+00
0 1 2 3 4 5
mg de fructosa
– 99 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
Reactivos
• Ácido sulfúrico 4,5 mM.
• Ácido sulfúrico 3 mM.
Procedimiento
Desarrollo cromatográfico
Se utilizó el mismo cromatógrafo y las mismas precolumna y columna
que las descritas en el apartado anterior. Como detector se empleó un detector
de ‘Diode Array’ – Waters 996 –.
• Fase móvil: ácido sulfúrico 3mM.
• Velocidad de flujo: 0,5 mL/min. los primeros 30 min., se sube el flujo hasta
0,8 mL/min. durante los diez min. siguientes hasta completar los 40 min.,
posteriormente el flujo se redujo hasta 0,5 mL/min. durante los últimos 5 min.
• Temperatura de la columna: 65ºC.
• Duración: 45 min.
• Detección: UV 210 nm.
– 100 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
Identificación
Para la identificación de los ácidos orgánicos se inyectaron patrones de
diferentes ácidos (Tabla II.3) y los tiempos de retención obtenidos para los
patrones fueron comparados con los tiempos de los picos de las muestras. Así
mismo, se comparó el espectro obtenido para cada pico patrón frente al
respectivo espectro del pico problema para confirmar la pureza de los
compuestos.
Cuantificación
Finalmente, para la cuantificación de los ácidos orgánicos se realizó una
curva de calibración para cada ácido identificado con cantidades crecientes del
mismo, ajustando los valores con una regresión lineal (Ej. Figura II.5.), e
interpolando el valor del área obtenida para cada ácido identificado en la curva
patrón respectiva para obtener la concentración final de dicho ácido. El
contenido en los distintos ácidos orgánicos se expresaron en mg/100 g de
producto.
– 101 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
1,20E+07
1,00E+07
8,00E+06
Á re a
6,00E+06
Área
4,00E+06
y = 21013716x - 11022
2,00E+06
R2 = 1,000
0,00E+00
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6
mg de ácido oxálico/mL
II.3.1.11. Nitritos
La determinación de los nitritos se realizó según el método AOAC 973.31
(AOAC, 1999c).
Reactivos
• Reactivo NED. Se preparó disolviendo 0,2 g de N-(1-naftil)
etilendiamina·2HCl en 150 mL de CH3COOH al 15% (v/v). Se filtró y almacenó
en frasco de vidrio oscuro.
• Reactivo de Sulfanilamida. Se preparó disolviendo 0,5 g de
sulfanilamida·2HCl en 150 mL de CH3COOH al 15% (v/v). Se filtró y almacenó
en frasco de vidrio oscuro.
• Solución estándar de Nitrito: Solución Stock (1000 ppm NaNO2).
Disolver 1,000 g de NaNO2 en 500 mL de agua destilada y enrasar a 1000 mL.
Conservar en refrigeración.
• Solución Intermedia de Nitrito (100 ppm). Diluir 100 mL de la
solución Stock en 1 L de agua destilada.
• Solución de trabajo de Nitrito (1 ppm). Diluir 10 mL de la solución
intermedia en 1 L de agua destilada.
– 102 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
Procedimiento
Preparación del extracto
Para la determinación de los nitritos se preparó un extracto pesando 10
g de muestra con una precisión de ±0,01 mg a la que se adicionó 70 mL de
agua destilada, homogenizando en Sorvall durante 1 min. Se transfirió la
mezcla cuantitativamente a un vaso de precipitados. El extracto se calentó en
agitación a 80ºC durante 1 h y se transfirió luego a un frasco volumétrico de
100 mL, se enfrió y se llevó hasta un volumen final de 100 mL.
Determinación
Se tomaron 50 mL del extracto y se filtraron a través de papel filtro sin
residuos de nitritos, si después de la filtración aún existió turbidez remanente,
se centrifugó hasta obtener una solución clara. A 10 mL del filtrado se
adicionaron 2,5 mL de reactivo de sulfanilamida y se mezcló. Después de 5
min., se adicionaron 2,5 mL del reactivo NED, se completó el volumen a 50 mL,
se mezcló y esperó 15 min. hasta el desarrollo del color. Posteriormente, una
porción de la solución fue transferida a la cubeta fotométrica y se determinó la
absorbancia a 540 nm. Adicionalmente se preparó un blanco tomando 5 mL de
agua destilada Mili–Q la cual se trató de igual forma que las muestras. También
se midió la absorbancia de 10 mL de filtrado de cada muestra a la que se
adicionó 2,5 mL de sulfanilamida y 2,5 mL de una solución de ácido acético al
15%.
Preparación de la curva patrón
Se preparó una solución madre conteniendo 1000 ppm de NaNO2, de
esta solución se realizó una intermedia de 100 ppm y finalmente se preparó
una solución de trabajo conteniendo 1 ppm de NaNO2. A partir de esta solución
se prepararon patrones de 0, 0,2, 0,4, 0,6 y 0,8 ppm de NaNO2 tomando 0, 10,
20, 30 y 40 mL de la solución de trabajo en frascos volumétricos de 50 mL, se
le adicionan 2,5 mL de reactivo de sulfanilamida y se mezclaron y se procedió
según lo descrito para las muestras. Se trazó la correspondiente recta de
regresión con los resultados obtenidos (Figura II.6.).
Cuantificación
A los valores obtenidos en la lectura espectrofotométrica para las
muestras se le restó el valor de absorbancia obtenido para las mismas
muestras tratadas sin NED (para eliminar la interferencia del color inicial
– 103 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
0,5
0,4
nm)
(540 nm)
0,3
Ab (540
0,2
Ab
y = 9,6500x + 0,0386
0,1
R2 = 0,997
0
0 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05
mg de nitrito/50mL
– 104 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
– 105 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
Tabla II.4. Longitud de onda de emisión seleccionada para cada mineral, así
como los límites de detección.
Minerales K P Na Mg Ca Zn Fe Cu Mn
600
corregida
emisióncorregida
400
deemisión
200
Señalde
Señal
y = 46,210x
0
0 2 4 6 8 10 12
[Mn] mg/L
– 106 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
– 107 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
3
La solución estándar interno utilizada para la cuantificación del contenido de ácidos
grasos contiene 4 mg de ácido tridecanoico/mL tolueno.
– 108 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
Identificación
La identificación de los ácidos grasos se llevó por comparación de los
tiempos de retención con los de los patrones externos (Sigma-Aldrich) (Tabla
II.6.) y posterior confirmación con los espectros de masas de los picos con los
ácidos grasos de la base de datos HP Willey 275.L Mass Spectral Library
(Hewlett Packard, revisión D 01.00, de Nov de 1998) proporcionada por el
fabricante del equipo.
El caso de los picos con tiempos de retención diferentes a los patrones,
se llevó a cabo su identificación tentativa mediante la comparación de su
espectro con los espectros que figuran en la base de datos (a través de los
– 109 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
Cuantificación
La cuantificación se realizó a partir de los factores respuesta obtenidos
por regresión lineal de las áreas de los picos de los cromatogramas de los
patrones, que fueron inyectados a tres concentraciones diferentes por
duplicado. En aquellos casos en los que no se dispuso de patrones de metil-
ésteres para la cuantificación, se tomó como factor respuesta el del isómero
correspondiente.
– 110 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
– 111 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
V × PM × N
% ácido láctico =
10 × P
V = mL de NaOH gastados en la valoración de la muestra.
PM = Peso molecular del ácido láctico.
N = Normalidad exacta del NaOH.
P = Peso en g de la muestra.
– 112 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
V × PM × N
% ácido oléico =
10 × P
V = mL de KOH gastados en la valoración de la muestra.
PM = Peso molecular del ácido oleico.
N = Normalidad exacta del KOH.
P = Peso en g de la grasa presente en los mL del filtrado valorado.
– 113 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 114 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
100 x ( t RX − t RZ )
IK = + ( Zx 100 )
( t RZ + 1 − t RZ )
IK = Tiempo de retención relativo o índice de Kovats.
Z = Número de carbonos del n-alcano precedente.
tRZ+1 y tRZ = Tiempos de retención obtenidos para los n-alcanos posterior y precedente
al compuesto problema respectivamente.
tRX = Tiempo de retención obtenido para el compuesto problema.
– 115 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
C
A
Foto II.2. Montaje del Aparato Lickens-Nickerson. (A- Balón con la muestra en
baño de glicerina; B- Columna de extracción; C- Balón con solvente).
– 116 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
Cuantificación
Finalmente, para la cuantificación de los compuestos volátiles se tuvo en
cuenta el área generada por los patrones internos utilizados en las muestras: n-
dodecano y n-hexadecano. El contenido de los diferentes compuestos
obtenidos de la morcilla se expresan como ng equivalentes a dodecano/100 g
de morcilla para aquellos compuestos con un índice de Kovats inferior a 1270 y
para aquellos compuestos con índice de Kovats igual o superior a 1270 se
expresó en términos de ng equivalentes a hexadecano/100 g de morcilla.
II.3.1.18. pH
La medida del pH se llevó a cabo siguiendo el Método de análisis de
productos cárnicos de la Presidencia del Gobierno (1979). La medición del pH
– 117 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 118 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
II.3.1.21. Color
La medida instrumental del color se realizó de acuerdo a las
recomendaciones de AMSA (1991) utilizando un colorímetro de reflectancia
Minolta CM-500 (Minolta Camera CO. Osaka, Japón).
Procedimiento
Para el análisis del color, se tomaron entre 50 y 100 g de la masa de la
morcilla que fueron puestas en un film plástico, el cual se colocó en cajas de
Petri de 90 mm de diámetro; la masa se compactó hasta alcanzar una
profundidad de 1,5 cm. Sobre este homogenizado se realizaron las lecturas de
color por triplicado. En todas las determinaciones de color el equipo fue
calibrado previamente usando una placa estándar blanca No 677 T3
proporcionada por el fabricante, y utilizando el iluminate D65 y el observador 10º
SCI (AMSA, 1991). Los parámetros de color de la escala CIELab estudiados
fueron las coordenadas: luminosidad (L*), componente rojo-verde (a*) y
componente amarillo-azul (b*).
II.3.1.22. Textura
La textura de la morcilla se determinó de una manera objetiva sobre la
masa mediante un método mecánico de compresión realizado con un
texturómetro tipo INSTRON SMS TA-XT2i, equipado con una sonda cilíndrica
de 40 mm de diámetro (SMSP 40), siguiendo los métodos descritos por García
et al. (2002) y Sandoval et al. (2004) con algunas modificaciones. Como
parámetros de textura se calculó la firmeza y la extrusión por retroceso de
acuerdo a lo indicado por los mencionados autores.
Procedimiento
Para el análisis de la firmeza y la extrusión hacia atrás las muestras de
morcilla fueron introducidas en recipientes cilíndricos de plástico (5,96 cm
diámetro x 4,58 cm alto) hasta alcanzar una altura de 2,5 cm y evitando dejar
espacios de aire en el interior del recipiente. Las muestras se dejaron
– 119 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
P2 x100
% pérdida de Humedad = 100 −
P1
P1 = Peso, en gramos, de la morcilla antes de la conservación.
P2 = Peso, en gramos, de la morcilla después de la conservación.
– 120 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
– 121 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
Procedimiento
A partir de la serie de diluciones decimales y por duplicado, se depositó
con una pipeta estéril 1 mL de cada dilución en placas de Petri estériles de 90
mm de diámetro. A cada placa se le añadieron unos 15 mL de medio SPC a
una temperatura de 45ºC ± 0,5ºC, se mezcló cuidadosamente y se dejó
solidificar, colocando las placas sobre una superficie horizontal (Método de
siembra en profundidad). Una vez solidificadas las placas se introdujeron
invertidas en estufa de incubación a 30ºC ± 1ºC durante 72 h ± 3 h.
– 122 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
– 123 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
II.3.2.7. Enterobacteriaceae
Las Enterobacteriaceae se analizaron siguiendo las directrices
propuestas en la norma ISO 7402 (ISO, 1995).
Material – reactivos – medios de cultivo
• Agar Cristal Violeta-Rojo Neutro-Bilis-Glucosa (VRBGA) (CM0485,
Oxoid, Ltd.).
• Agar OF según Hugh y Leifson (HL) (1.10282, Merck KGaA).
• Reactivo de N,N-dimetil-p-fenilen-diamina para oxidasa.
Procedimiento
Se realizó el mismo procedimiento descrito en II.3.2.2 empleando el
método de siembra en profundidad, adicionando una segunda capa de medio.
Una vez solidificadas las placas de agar VRBGA se introdujeron invertidas en
estufa de incubación a 35ºC ± 2ºC durante 24 h - 48 h. Concluido el periodo de
incubación, se seleccionaron las placas que contenían colonias rojas rodeadas
de un halo de precipitación rojizo-violeta.
Confirmación
De las colonias presuntamente positivas, se tomaron 5 colonias y se
subcultivaron en agar nutritivo durante 18 h a 35ºC ± 2ºC, finalizado el tiempo
de incubación se confirmaron mediante las dos pruebas siguientes:
a) Test de Oxidasa: se tomó una pequeña porción de cada colonia sobre
papel de filtro, se adicionó una gota del reactivo para oxidasa y al cabo de 30
seg. se observó la formación de color en el papel filtro alrededor de la colonia.
Con el reactivo empleado, la formación de un color rosado indica prueba
positiva.
b) Prueba de fermentación de la glucosa: en tubos con medio OF se
sembró por picadura hasta el fondo una porción de la colonia a confirmar, se
incubó a 35ºC ± 2ºC durante 24 h y se procedió a la lectura del mismo. Una
coloración amarilla significa que ha habido una degradación fermentativa del
carbohidrato.
Se consideraron como Enterobacteriaceae si la reacción fue oxidasa
negativa y fermentación de glucosa positiva.
– 124 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
– 125 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
II.3.2.11. Micrococcaceae
El análisis de Micrococcaceae se realizó de acuerdo como lo describe
Cordero et al. (2000).
Material – reactivos – medios de cultivo
• Agar sal manitol (MSA) (CM85, Oxoid, Ltd.).
Procedimiento
Se realizó el mismo procedimiento descrito en II.3.2.2 empleando el
método de siembra en profundidad. Una vez solidificadas las placas de agar
MSA se introdujeron invertidas en estufa de incubación a 35ºC ± 2ºC por 48 h.
– 126 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
– 127 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
II.3.3.1. Muestras.
El análisis sensorial se realizó sobre las muestras tomadas en el
muestreo II (Fase experimental B). En dicho análisis se comparó la masa de
morcilla de cada lote recién elaborada, que se identificó como masa D0 – día 0
–, con la masa de morcilla conservada a diferentes tiempos y temperaturas de
refrigeración. En todos los casos, las masas de morcilla fueron almacenadas en
congelación a –40ºC hasta el momento del análisis.
– 128 –
________________________________________________Capítulo II.- Material y Métodos
Dos de estas 5 muestras son del mismo día de conservación y las otras 3 son de otro
día de conservación. Examina las muestras primero por su color, luego el olor y
finalmente el sabor, siguiendo el orden de muestra que se indica a continuación.
Identifica las dos muestras que son del mismo día de conservación colocando una X
después de su respectivo código numérico.
Código: _____ _____
_____ _____
_____ _____
_____ _____
_____ _____
Comentarios adicionales:
Indicar si rechazaría alguno de los dos grupos de muestras con distintos tiempo de
conservación por considerar que ha perdido su frescura y presenta deficiencias o
alteraciones en las características organolépticas (señalar con X)
Si _____
No _____
Observaciones adicionales:
Gracias
– 129 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 130 –
III. RESULTADOS
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 132 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
– 133 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
Media 42,87 ± 7,60 24,76 ± 5,03 16,29 ± 3,60 5,86 ± 1,21 10,09 ± 3,13
CU: carbohidratos utilizables
TDF: fibra total dietética
– 134 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
– 135 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
Fructosa
Glucosa
Fructosa
Sacarosa
Sacarosa
– 136 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
Piroglutámico 49,4 16,9 90,6 36,2 15,1 43,7 24,7 15,7 36,5±25,5
Total 1258,8 521,1 1370,0 759,7 506,1 642,5 657,1 575,9 786,4±337,0
NI: no identificado
Pirúvico
Piroglutámico
Fumárico + Fórmico
Málico
Succínico+ni
Oxálico
Cítrico
Acético
Láctico
– 137 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 138 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
Muestras Na K S P Ca Mg Fe
I 2171 574 214 99 108 55 47
II 1710 406 189 152 70 37 17
III 2455 604 319 130 119 49 46
IV 1208 448 236 142 101 49 40
V 1343 308 158 143 88 40 21
VI 1824 524 256 121 66 45 45
VII 3522 504 334 133 71 66 40
VIII 1672 385 212 169 69 42 25
Media 1988± 740 ± 101
469± 240± 61 136± 21 86± 21 48± 9 35± 12
– 139 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
Muestras Zn Mn Cu
I 0,99 0,70 0,32
II 1,05 0,50 0,20
III 1,23 0,53 0,28
IV 1,88 0,78 0,29
V 0,77 0,53 0,19
VI 0,97 0,52 0,31
VII 1,33 0,62 0,27
VIII 0,91 0,55 0,19
Media 1,14 ± 0,35 0,59 ± 0,10 0,26 ± 0,05
– 140 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
– 141 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 142 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
C13:0
C18:0
C14:0
C16:0
C18:2 n6
C16:1 9c
C18:1 9c
C17:0
C20:1 11c
C18:3 n3
– 143 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 144 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
– 145 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
C16
C12
– 146 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
a)
b)
– 147 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
B. HIDROCARBUROS 14100 14
– 148 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
Compuesto Cantidad1
Disulfuro de dipropilo 60990
C6H14S2, disulfuro de dipropilo o isómero 32339
Trisulfuro de propilo y propenilo o isómero 24345
C10H12O, cuminal o isómero 23190
Hexanal 20930
Disulfuro de alilo y propilo 17770
Trisulfuro de diisopropilo o isómero 15205
C10H12O2, 2-metoxi-4-(2-propenil)-fenol, eugenol 14885
Carvona 12030
Trisulfuro de metilo y propilo 11470
2,4-decadienal 10210
C8H10O2, 2,6-dimetoxi-fenol o isómero 10065
C10H12O, anetol 9330
1
: cantidad media expresada como ng de alcano (C12 ó C16) por g de
morcilla.
– 149 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
Muestras pH aw Eh (mV)
I 6,16 0,975 -127
II 6,04 0,969 -130
III 5,58 0,973 98
IV 6,09 0,977 73
V 6,12 0,977 -125
VI 6,10 0,976 77
VII 5,81 0,980 59
VIII 6,06 0,976 76
Media 5,99 ± 0,20 0,975 ± 0,003 0 ± 106
III.1.1.11. Color
Los resultados de las determinaciones colorimétricas de la morcilla se
presentan en la tabla III.13. Como puede observarse en dicha tabla, el valor
medio de la luminosidad (L*) es relativamente bajo (30) y el componente rojo
(a*) es la coordenada cromática dominante (con un valor medio de 17 y una
variación entre muestras en torno a un 13%). En cuanto al componente
amarillo-azul (b*) existe mayor variabilidad entre las medidas que con los otros
dos componentes (47%) oscilando estos valores entre 1,07 y 5,50.
Tabla III.13.- Valores de los parámetros del color L*, a* y b* obtenidos sobre la
masa de la morcilla.
Muestras L* a* b*
I 28,03 15,25 1,07
II 34,25 17,61 5,50
III 21,63 12,49 2,10
IV 30,53 18,10 4,08
V 31,86 18,75 4,67
VI 30,11 18,82 3,97
VII 28,49 15,11 1,80
VIII 31,57 18,83 5,11
Media 29,56 ± 3,76 16,87 ± 2,33 3,54 ± 1,66
– 150 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
III.1.1.12. Textura
Los valores de la textura de la morcilla determinados de una manera
objetiva sobre la masa sin tripa (extrusión por retroceso – A10 – y firmeza –
Fmáx10 –) quedan recogidos en la tabla III.14. Los valores individuales para
ambos parámetros presentaron variaciones cercanas al 40% con respecto a la
media en ambos casos. En la Figura III.7 se representa el gráfico del análisis
de textura obtenido en uno de los ensayos realizados con el texturómetro sobre
una muestra de morcilla, la fuerza máxima o firmeza es el valor más elevado
del componente fuerza (eje de las equis) y el trabajo o energía de extrusión es
el área de la curva en la zona positiva de los ejes.
– 151 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 152 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
– 153 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 154 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
– 155 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 156 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
– 157 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
Industria I Industria II
0ºC
2.0 2.0
1.5 1.5
g/100g
g/100g
1.0 1.0
0.5 0.5
0.0 0.0
0 10 20 30 0 10 20 30
Tiempo (d) Tiempo (d)
3ºC
2.0 2.0
a a
a
1.5 b 1.5
b
g/100g
g/100g
b
1.0 1.0
c c
0.5 0.5
0.0 0.0
0 10 20 30 0 10 20 30
Tiempo (d) Tiempo (d)
6ºC
2.0
2.0
1.5 1.5
g/100g
g/100g
1.0 1.0
0.5 0.5
0.0 0.0
0 10 20 30 0 10 20 30
Tiempo (d) Tiempo (d)
– 158 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
Tabla III.20a
– 159 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
Tabla III.20b
– 160 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
Tabla III.20c
– 161 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
Industria I Industria II
0ºC
400 400
300 300
mg/100g
mg/100g
200 200
100 100
0 0
0 10 20 30 0 10 20 30
Tiempo (d) Tiempo (d)
3ºC
400 400
300 300
mg/100g
mg/100g
200 200
100 100
0 0
0 10 20 30 0 10 20 30
Tiempo (d) Tiempo (d)
6ºC
400 400
300 300
mg/100g
mg/100g
200 200
100 100
0 0
0 10 20 30 0 10 20 30
Tiempo (d) Tiempo (d)
Figura III.9.- Evolución del contenido en ácido cítrico (●) y ácido succínico+no
identificado (▲) en la morcilla, expresado en mg /100 g. Curvas ajustadas con
función polinomial de 3er orden.
– 162 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
– 163 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 164 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
– 165 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 166 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
– 167 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
En las tablas III.25a y III.25b quedan recogidos los valores medios del
descenso e incremento, respectivamente, expresado en ng de alcano, de los
compuestos volátiles individuales que mostraron una mayor variación en su
concentración entre el primer y último día de conservación a 0, 3 y 6ºC. En
relación con la evolución de los compuestos volátiles individuales a lo largo de
la conservación conviene destacar el aumento importante de algunos aldehídos
tales como el 2,4-decadienal, nonenal, 2-decenal, nonanal, etc. Que se hacen
más evidentes en las muestras procedentes de la industria I, también
experimentan un incremento importante algunos ácidos en las dos industrias:
ácido hexadecanoico (palmítico), octadecenoico (oleico o un isómero del
oleico) y el decanoico (cáprico). Otros compuestos que también mostraron una
variación importante son el disulfuro de dipropilo y el limoneno pero estos con
tendencia a la baja. El resto de los compuestos muestran una evolución no
claramente definida.
– 168 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
– 169 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
III.2.1.10. Color
En la Figura III.12 se representan los resultados de la escala CIELab
obtenidos para la evolución del color. En la foto III.1 (ver anexo 9, cuadernillo
de anexos) se muestran las imágenes digitales obtenidas de la masa de la
morcilla a distintos tiempos de conservación (día 0 y día final). Si bien, no hubo
diferencias significativas en ninguno de los parámetros (L*, a* y b*) a lo largo
del tiempo de conservación, en las fotografías puede apreciarse una diferencia
en el color de la masa entre el día inicial y el día final de conservación.
III.2.1.11. Textura
Los dos parámetros (extrusión por retroceso – A10 – y la firmeza)
utilizados para determinar la textura de la morcilla aumentaron
significativamente durante el almacenamiento (Figura III.13).
– 170 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
Industria I Industria II
0ºC
10 10
abc a ab a
% pérdida humedad
% pérdida humedad
0.97 c bc ab ab 0.97
8 8
0.92 6 0.92 6
aw
aw
4 4
0.87 0.87
a a
ab
2 ab 2
bc
c c
0.82 0.82
0 0
0 10 20 30 0 10 20 30
Tiempo (d) Tiempo (d)
3ºC
10 10
0.97 ab a a a a
% pérdida humedad
% pérdida humedad
ab a b 0.97
8 8
0.92 6 0.92 6
aw
aw
a
a a 4 4
0.87 a 0.87 ab ab ab
ab ab ab bc bc
2 2
0.82 b 0.82 c
0 0
0 10 20 30 0 10 20 30
Tiempo (d) Tiempo (d)
6ºC
10 10
% pérdida humedad
% pérdida humedad
0.97 0.97
8 8
0.92 6 0.92 6
aw
aw
4 4
0.87 0.87
2 2
0.82 0.82
0 0
0 10 20 30 0 10 20 30
Tiempo (d) Tiempo (d)
– 171 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
Industria I Industria II
0ºC
7 300 7 300
a a
ac a c a a
b 200 a a a 200
a a
d a a
6 6
Eh (mV)
Eh (mV)
e a
a 100 100
pH
pH
a f g c
b b b b d b
0 0
5 5
b
b
-100 -100
c
4 -200 4 -200
0 10 20 30 0 10 20 30
Tiempo (d) Tiempo (d)
3ºC
a
7 a 300 7 300
ab
a
b bc bc a
a a 200 a 200
a
c a
6 6 a b
Eh (mV)
Eh (mV)
c c
d 100 100
pH
pH
a
d a d
e 0 e 0
5 5
b f
f g -100 -100
e g
h
4 -200 4 -200
0 10 20 30 0 10 20 30
Tiempo (d) Tiempo (d)
6ºC
7 300 7 300
200 200
a
a ab a ab
a c a ab ab
6 6 a ab a
Eh (mV)
Eh (mV)
d e
100 100
pH
pH
b ab ab b
ab f g c c
h 0 b 0
5 b 5
c -100 c -100
cd d
d
4 -200 4 -200
0 10 20 30 0 10 20 30
Tiempo (d) Tiempo (d)
– 172 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
Industria I Industria II
0ºC
40 40
30 30
20 20
10 10
0 0
0 10 20 30 0 10 20 30
Tiempo (días) Tiempo (das)
3ºC
40
40
30
30
20 20
10 10
0 0
0 10 20 30 0 10 20 30
Tiempo (días) Tiempo (das)
6ºC
40 40
30 30
20 20
10 10
0 0
0 10 20 30 0 10 20 30
Tiempo (días) Tiempo (das)
Figura III.12.- Evolución de los parámetros del color L* (X), a* (●) y b* (■) en la
morcilla. Curvas ajustadas con regresión lineal.
– 173 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
Industria I Industria II
0ºC
40 6 6
b a
5 35 b a 5
c
a
Firmeza (N)
A1 0 (N*mm)
Firmeza (N)
A1 0 (Nxmm)
b b b 4 b b 4
30
a 3 c 3
25
b b b 2
2
20 1 1
0 15 0
0 10 20 30 0 10 20 30
Tiempo (días) Tiempo (d)
3ºC
40 6
40 6
5 5
Firmeza (N)
A1 0 (Nxmm)
Firmeza (N)
b
A1 0 (Nxmm)
a 4
4
30 c b a 30 c d
d 3 3
2 2
a
20 c b
20 b a 1 1
c
d d
0 0
0 10 20 30 0 10 20 30
Tiempo (días) Tiempo (días)
6ºC
40 6 40 6
5 5
a a
Firmeza (N)
Firmeza (N)
A1 0 (Nxmm)
A1 0 (Nxmm)
a a b
4 4
30 b 30 b b
3 3
a
a 2 a 2
a b
b b
20 b 1 20 1
0 0
0 5 10 15 20 25 30 35 0 5 10 15 20 25 30 35
Tiempo (días) Tiempo (días)
– 174 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
7.5 7.5
log10 ufc/g
log10 ufc/g
5.0 5.0
2.5 2.5
0.0 0.0
0 10 20 30 40 0 10 20 30 40
Tiempo (d) Tiempo (d)
– 175 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
a b
7.5 7.5
log10 ufc/g
log10 ufc/g
5.0 5.0
2.5 2.5
0.0 0.0
0 10 20 30 40 0 10 20 30 40
Tiempo (d) Tiempo (d)
– 176 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
a b
10.0 10.0
7.5 7.5
log10 ufc/g
log10 ufc/g
5.0 5.0
2.5 2.5
0.0 0.0
0 10 20 30 40 0 10 20 30 40
a b
7.5 7.5
log10 ufc/g
log10 ufc/g
5.0 5.0
2.5 2.5
0.0 0.0
0 10 20 30 40 0 10 20 30 40
Tiempo (d) Tiempo (d)
– 177 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
7.5 7.5
log10 ufc/g
log10 ufc/g
5.0 5.0
2.5 2.5
0.0 0.0
0 10 20 30 40 0 10 20 30 40
Tiempo (d) Tiempo (d)
– 178 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
a b
7.5 7.5
log10 ufc/g
log10 ufc/g
5.0 5.0
2.5 2.5
0.0 0.0
0 10 20 30 40 0 10 20 30 40
Tiempo (d) Tiempo (d)
7.5 7.5
log10 ufc/g
log10 ufc/g
5.0 5.0
2.5 2.5
0.0 0.0
0 10 20 30 40 0 10 20 30 40
Tiempo(d) Tiempo (d)
– 179 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
log10 ufc/g
5.0 5.0
2.5 2.5
0.0 0.0
0 10 20 30 40 0 10 20 30 40
Tiempo (d) Tiempo (d)
– 180 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
a b
7.5 7.5
log10 ufc/g
log10 ufc/g
5.0 5.0
2.5 2.5
0.0 0.0
0 10 20 30 40 0 10 20 30 40
Tiempo(d) Tiempo (d)
a b
7.5 7.5
2
2
5.0 5.0
log10 ufc/cm
log10 ufc/cm
2.5 2.5
0.0 0.0
-2.5 -2.5
0 10 20 30 40 0 10 20 30 40
Tiempo (d) Tiempo (d)
– 181 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
7.5 7.5
2
2
5.0 5.0
log10 ufc/cm
log10 ufc/cm
2.5 2.5
0.0 0.0
-2.5 -2.5
0 10 20 30 40 0 10 20 30 40
Tiempo (d) Tiempo (d)
7.5 7.5
2
2
log10 ufc/cm
log10 ufc/cm
5.0 5.0
2.5 2.5
0.0 0.0
-2.5 -2.5
0 10 20 30 40 0 10 20 30 40
Tiempo (d) Tiempo (d)
– 182 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
– 183 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
Tabla III.26a
Tabla III.26b
– 184 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
Tabla III.27a
Tabla III.27b
– 185 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 186 –
______________________________________________________Capítulo III.- Resultados
– 187 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 188 –
IV. DISCUSIÓN
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 190 –
_______________________________________________________Capítulo IV.- Discusión
– 191 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 192 –
_______________________________________________________Capítulo IV.- Discusión
– 193 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 194 –
_______________________________________________________Capítulo IV.- Discusión
– 195 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
para los embutidos de este tipo con contenidos en cloruro sódico similares
(Cattaneo y Bonandrini, 1998; Santos et al., 2003; KTL, 2005a y b; Møller et al.,
2005; Souci et al., 2005; USDA, 2005a), pero más bajo con relación a los
valores obtenidos por Alcaide et al. (1995) en diferentes variedades de morcilla
andaluza, morcillas que sufren un proceso de secado.
Para el resto de minerales – K, P, Mg, Ca, Zn, Cu, etc. –, entre los que
no incluimos al Fe, al que daremos posteriormente una consideración especial,
los niveles obtenidos en nuestro caso son del mismo orden de magnitud que
los citados para el resto de embutidos de sangre, aunque con cierto grado de
variabilidad debida a los diferentes ingredientes usados en su elaboración.
Cabe destacar que los niveles de Cu y Mg fueron similares a los de la carne
magra de vacuno (USDA, 2005c).
El hierro constituye el mineral característico de los “embutidos de
sangre”, debido a la riqueza en el mismo del único ingrediente común y
definitorio de este tipo de embutidos – la sangre –. Su cuantía oscila entre los 6
mg/100 g observados en la morcilla alemana tipo “blutwurst” y los “Blood
sausages” en general (Souci et al., 2005; USDA, 2005a, respectivamente) y los
21 mg/100 g puestos de manifiesto en la morcilla finlandesa (KTL, 2005b);
dentro de este rango la morcilla de León ocuparía una posición intermedia.
Dada la importancia nutritiva del hierro hémico en la dieta – hecho que
comentaremos posteriormente –, se procedió a su cuantificación por diferencia
entre el hierro total y el hierro no hémico experimentalmente determinados.
Este tipo de análisis solo ha sido llevado a cabo por Roseiro et al. (1998) en la
“Morcela de Assar” portuguesa, siendo sus resultados muy similares a los
nuestros, que en definitiva establecen que el hierro hémico representa entre el
70-80% del hierro presente en la morcilla.
El contenido en ácidos grasos de los embutidos de sangre solamente
figura en diferentes tablas de composición de los alimentos, en las que se
recoge la abundancia de los tres grupos de ácidos grasos característicos –
saturados, monoinsaturados y poliinsaturados – o de los ácidos mayoritarios o
más importantes desde el punto de vista nutritivo. La distribución observada en
la morcilla de León en cuanto a los tres grupos de ácidos grasos es similar a la
citada para un tipo de morcilla finlandesa (KTM, 2005b), en ambos casos
predominan los saturados, seguidos de los monoinsaturados y poliinsaturados.
– 196 –
_______________________________________________________Capítulo IV.- Discusión
– 197 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 198 –
_______________________________________________________Capítulo IV.- Discusión
– 199 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 200 –
_______________________________________________________Capítulo IV.- Discusión
Trisulfuro de propilo y
Azufrado, sudor, pungente (17) / --- ---
propenilo o isómero
– 201 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 202 –
_______________________________________________________Capítulo IV.- Discusión
– 203 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
(1990) y algo superiores a los observados por Fontes et al. (2004) en la sangre
de porcino. La luminosidad es un componente del color que depende en gran
medida de la cantidad de sangre presente, ya que a mayor contenido
sanguíneo menor luminosidad y por lo tanto mayor oscuridad (Oellingrath y
Slinde, 1985; Ferreira et al., 1994).
Por otra parte, Stiebing (1990) considera también importante en los
embutidos de sangre el parámetro a* (índice del rojo), que debería tener un
valor superior a 20 para proporcionar un color aceptable, refiriéndose a
embutidos de sangre tratados con nitritos. Esta cifra no la posee la sangre
fresca de porcino (a* = 7,4) (Fontes et al., 2004), ni tampoco se alcanza en la
morcilla de León, aunque está próximo. En la morcilla de León, además de la
sangre, el pimentón añadido – con un valor de a* de 11-12 (Lozano et al.,
2003) – puede contribuir al valor alcanzado por el parámetro a*.
El parámetro b* (índice del amarillo) es probablemente el componente
más estable en los embutidos de sangre, habida cuenta la escasa variabilidad
que sufre al aumentar el contenido en sangre en el embutido, al incrementar la
intensidad del tratamiento térmico o después de la adición de algunos aditivos
como el ácido ascórbico (Stiebing, 1990; Mielnik y Slinde, 1983). Los valores
observados en nuestro caso para este componente fueron los que presentaron
mayor variabilidad entre las muestras (47%), a diferencia de L* y a* cuya
variación estuvo en torno al 12%. De todas formas, nuestros valores de b* son
ligeramente superiores a los descritos en la sangre de porcino por Fontes et al.,
(2004) (2,3); probablemente de nuevo la adición de pimentón, con valores de b*
entre 6 y 8, podría suponer un factor con influencia en el color de la morcilla.
Sin embargo, los valores de b* en la morcilla de León son 4-5 veces inferiores a
los puestos de manifiesto por Stiebing (1990) en embutidos de sangre
alemanes, desconocemos cuales pueden ser las razones de estas diferencias.
Aunque tal vez tenga que ver con la presencia de carne – ausente en la
morcilla leonesa – en los embutidos alemanes, ya que la carne de cerdo posee
un valor de b* en torno a 13 y los embutidos cocidos curados como la salchicha
cocida en torno a 10-14 (Mielnik y Slinde, 1983; Estévez et al., 2006).
No hemos encontrado en la bibliografía consultada datos referentes a la
textura de los embutidos de sangre. Tanto los valores del área como de la
firmeza observados en nuestras muestras presentan una amplia variabilidad,
– 204 –
_______________________________________________________Capítulo IV.- Discusión
– 205 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 206 –
_______________________________________________________Capítulo IV.- Discusión
– 207 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 208 –
_______________________________________________________Capítulo IV.- Discusión
– 209 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 210 –
_______________________________________________________Capítulo IV.- Discusión
– 211 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 212 –
_______________________________________________________Capítulo IV.- Discusión
– 213 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 214 –
_______________________________________________________Capítulo IV.- Discusión
Fig. IV.1.- Espectros de absorción del pico correspondiente al tiempo de retención del
ácido succínico de tres cromatogramas del análisis de ácidos orgánicos (a) Ácido
succínico patrón; (b) Ácido succínico + compuesto no identificado en la morcilla II
conservada a 3 ºC en el día 0 de conservación; (c) Ácido succínico + compuesto no
identificado de esa misma morcilla en el día final (día 29) de conservación.
– 215 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 216 –
_______________________________________________________Capítulo IV.- Discusión
– 217 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 218 –
_______________________________________________________Capítulo IV.- Discusión
apreciadas en las imágenes tomadas con cámara fotográfica digital (ver Anexo
9). La constancia en los parámetros del color de la morcilla a lo largo de su
conservación sugiere que la hemoglobina no se oxida sensiblemente en el
transcurso del mismo, probablemente por que ya tuvo lugar en la máxima
extensión posible durante los tratamientos térmicos previos sufridos por el
embutido. Stiebing (1991), por el contrario sí ha observado variación en los
parámetros del color en un embutido de sangre, sobre todo en lo que hace
referencia al aumento en el índice del rojo (parámetro a*), pero este embutido a
diferencia de la morcilla de León lleva nitritos en su formulación y estaba
enlatado, por lo tanto en un ambiente anaerobio y reductor.
Los dos parámetros analizados para determinar la textura de la morcilla
sufrieron un aumento evidente y significativo durante el periodo de
conservación. Este incremento probablemente se deba a la ligera perdida de
humedad que el producto sufre, así como a la aparición de algún mecanismo
que favorezca el endurecimiento del producto. En este sentido cabe
preguntarse: ¿Se establecen durante el almacenamiento agregaciones
proteicas o entre proteínas y otras sustancias, como los productos de la
oxidación?, ¿Generan los microorganismos sustancias que aumentan la
viscosidad del sistema? ¿El descenso en el pH contribuye a que se
establezcan interacciones moleculares?. A la luz de nuestras investigaciones
no podemos en la actualidad dar respuesta a estos interrogantes.
En relación con la evolución de los microorganismos durante el
almacenamiento de la morcilla de León, hemos preferido discutir nuestros
resultados en dos apartados diferentes; en el primero comentaremos aquellos
aspectos más relevantes que hacen referencia al conjunto de los grupos
microbianos y en el segundo consideraremos cada uno de los grupos de una
manera individualizada.
La evolución de la microbiota durante el almacenamiento de los
productos cárnicos tratados por el calor ha sido frecuentemente estudiada. El
objetivo de estos estudios, en la mayoría de las ocasiones, ha sido establecer
la influencia en la misma de las diferentes temperaturas de refrigeración y/o de
los distintos sistemas de envasado utilizados – al aire, en películas con distinto
grado de permeabilidad al oxigeno, al vacío o en atmósfera modificada –
– 219 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
(Nielsen, 1983; Samelis y Georgiadou, 2000; Samelis et al., 1998, 2000; Santos
et al., 2005a; Patsias et al., 2005; etc.).
La comparación de los resultados obtenidos por nosotros en la masa de
la morcilla, con los recogidos en los estudios anteriormente reseñados resulta
muy difícil, fundamentalmente debido a las diferencias en el tipo de producto, a
los procesos que en algunas ocasiones se somete a los productos cárnicos
después del tratamiento térmico – pelado, loncheado, etc. –, que generalmente
implican una recontaminación, a las diferentes temperaturas de
almacenamiento utilizadas – entre 0 y 15ºC – y a los variados sistemas de
envasado usados.
Pese a lo anteriormente comentado, los resultados obtenidos en el
presente trabajo son en general comparables, sobre todo en lo que hace
referencia al crecimiento observado en la mayoría de los grupos microbianos
estudiados, a los puestos de manifiesto en productos cárnicos cocidos
almacenados al aire o en películas permeables al oxígeno, como en el caso de
la morcilla de Burgos (Santos et al., 2005a), en un embutido tipo Bolonia
(Nielsen, 1983), en la Taverna griega (Samelis y Georgiadou, 2000) o en un
conjunto de productos de este tipo (Samelis et al., 2000). Sin embargo, son
bastante diferentes de los indicados por los mismos autores y por otros (Borch
et al., 1988; von Holy et al., 1991; Samelis et al., 1998; Santos et al., 2005a) en
productos almacenados al vacío o en atmósferas modificadas ricas en gases
diferentes al oxígeno, donde no se observa crecimiento significativo de los
microorganismos que la presencia de oxígeno facilita, como son las
Pseudomonas, B. thermosphacta o los mohos.
Los resultados observados en el presente estudio en relación con la
evolución de la microbiota ponen de manifiesto cuatro hechos reseñables:
1) Los bajos recuentos observados en la morcilla recién
elaborada (día 0), que en términos generales son inferiores a
102 ufc/g, y en algunos casos coincidentes con el límite de
detección o inferiores al mismo, de las respectivas técnicas,
para la mayoría de los grupos microbianos. Solamente en una
de las industrias se observaron valores superiores en la flora
aerobia mesófila (105 ufc/g) y en las bacterias acido-lácticas
(103 ufc/g).
– 220 –
_______________________________________________________Capítulo IV.- Discusión
– 221 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 222 –
_______________________________________________________Capítulo IV.- Discusión
Diez et al., 2004; Santos et al., 2005a). Crecimientos importantes de este grupo
microbiano se han observado en atmósferas con CO2 (Santos et al., 1998;
2005a; Samelis y Georgiadou, 2000) o también en almacenamiento al aire
(Samelis y Georgiadou, 2000; Santos et al., 2005a). En nuestro caso se ha
puesto de manifiesto un crecimiento relevante, sobre todo a 6ºC, aunque sin
alcanzar las tasas próximas 108 ufc/g, que se observan en la mayoría de los
estudios anteriormente comentados. Probablemente la competencia con otros
grupos microbianos, impida un crecimiento más acusado de este tipo de
microorganismos. A diferencia de lo que ocurre con la mayoría de las células
vegetativas de los distintos grupos microbianos, algunas especies ácido-
lácticas – como es el caso de Weissella viridescens – son capaces de resistir
los tratamientos térmicos normalmente utilizados en los productos cárnicos
cocidos (Borch et al., 1988; Samelis y Georgiadou, 2000), hecho que
probablemente también ha tenido lugar en la morcilla de León, pues en todas
las muestras analizadas del producto recién elaborado se pusieron de
manifiesto niveles superiores al límite de detección superando, en algunos
casos las 103 ufc/g.
Los enterococos se encuentran incluidos dentro de la flora ácido-láctica
y poseen una de las más elevadas termotolerancias entre las bacterias no
esporuladas. Su evolución a lo largo del almacenamiento de los productos
cárnicos cocidos ha sido escasamente estudiada. En el caso de la morcilla de
Burgos no se detecto su presencia – límite de detección para este grupo 102
ufc/g – a lo largo del almacenamiento (Santos et al., 2005a). Sin embargo, si ha
sido puesto de manifiesto en algunos productos cárnicos cocidos envasados al
vacío o en atmósferas modificadas, aunque su número se mantiene
prácticamente constante, sin llegar a alcanzar los 102 - 103 ufc/g (Kotzekidou y
Bloukas, 1996; Samelis et al., 1998, 2000). Por el contrario, en nuestro caso,
aunque a ninguna temperatura se alcanzaron niveles superiores a 105 ufc/g,
tiene lugar un crecimiento importante.
Las pseudomonas constituyen uno de los grupos microbianos con
velocidad de crecimiento más rápida y fase de latencia más corta – ambos
parámetros coincidentes con los de la evolución de la flora aerobia psicrotrófica
– durante el almacenamiento de la morcilla de León. La presencia de
pseudomonas a niveles relativamente importantes, que oscilan entre 104 y 108
– 223 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 224 –
_______________________________________________________Capítulo IV.- Discusión
obtenidos en nuestro trabajo, oscilando entre 104 y 106 ufc/g (Nielsen, 1983;
Samelis y Georgiadou, 2000).
La evolución de los tres grupos microbianos estudiados en la piel de la
morcilla – flora aerobia mesófila viable, psicrótrofos y mohos y levaduras –
presenta una gran similitud con la observada en la masa interna, tanto en lo
que hace referencia a la velocidad de crecimiento como a los recuentos finales
observados. Este hecho pone en evidencia que las características del producto
– que en principio son diferentes en la superficie de la tripa que en el interior
del producto – no son un obstáculo para el crecimiento microbiano. No existen
en la bibliografía consultada estudios en los que se realicen recuentos en la
masa y en la piel de productos similares a la morcilla con los que comparar
nuestros resultados; aunque Santos et al. (1998) agrupan inicialmente a las
morcillas de Burgos en cuatro grupos en función de los niveles de la flora
aerobia externa e interna, para luego estudiar su evolución bajo envasado a
vacío. De sus resultados, por otra parte muy variables, parece deducirse una
mayor presencia microbiana en la piel que en la masa.
Algunos de los cambios en los parámetros físico-químicos observados
en la morcilla pueden asociarse con el metabolismo microbiano durante la
conservación como son el descenso de glucosa, de pH, la acumulación de
ácido cítrico e incluso el aumento en los valores de la textura. Respecto a los
componentes volátiles, se puede atribuir al desarrollo microbiano el incremento
en ácidos grasos libres por lipólisis y la aparición del ácido isovalérico.
Hay otros compuestos volátiles asociados con el metabolismo
microbiano durante su crecimiento en la carne, que han sido denominados
“Volatile Organic Compounds – VOCs –” como etanol, acetona, acetaldehído,
2-butenal, metil-etil cetona, etil acetato, metil propionato, propil formiato, sulfuro
de dimetilo y disulfuro de dimetilo, y acetoína (Dainty, 1996, Mayr et al., 2003a
y b). Estos compuestos no han sido detectados en la morcilla, ya que el método
utilizado para la extracción de los compuestos volátiles no permite su
aislamiento debido a su gran volatilidad que hace que se eliminen con el
disolvente durante la concentración del extracto etéreo o que coeluyan con el
mismo durante el desarrollo cromatográfico.
En relación con los análisis sensoriales realizados, la capacidad de
diferenciar las muestras de morcilla con distintos periodos de almacenamiento
– 225 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 226 –
_______________________________________________________Capítulo IV.- Discusión
– 227 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 228 –
V. CONCLUSIONES
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 230 –
_____________________________________________________Capítulo V.- Conclusiones
– 231 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 232 –
_____________________________________________________Capítulo V.- Conclusiones
– 233 –
VI. BLIOGRAFIA
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
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– 264 –
ANEXO 1
– 265 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......_______________________
– 266 –
______________________________________________________________________________________________________Anexo 1 – Tabla III.11a
Tabla III.11a.- Compuestos volátiles de la morcilla, expresado en ng de dodecano por g de morcilla (IKO* < 1270) o ng de
hexadecano por g de morcilla (IKO* ≥ 1270).
1
Nº Compuesto IKR IKO %C n Cantidad Mínimo Máximo
COMPUESTOS TERPÉNICOS
Monoterpenos
40 C10H16, tujeno 928 (g) 929 97 1 275 - 2200
49 Sabineno 973 (a) 969 89 1 265 - 2120
50 β-pineno 977 (a) 977 94 2 271 410 1760
55 C10H16, α-terpineno 1012 (n) 989 97 1 3355 - 26840
60 δ-3-careno 1001 (a) 1004 95 1 156 - 1250
66 Limoneno 1030 (a) 1024 99 4 1940 840 12070
73 γ-terpineno 1055 (l) 1056 97 4 2220 1330 10580
76b C10H16, terpineno 1064 95 1 138 - 1100
87 C10H16, δ-terpineno 1096 97 1 1484 - 11870
88 Terpinoleno o isómero 1091 (a) 1099 95 1 176 - 1410
97 C10H16 1120 91 1 100 - 800
99 C10H16 1140 91 1 418 - 3340
132b C10H16 1208 89 1 74 - 590
146a C10H16 1263 96 2 244 610 1340
Sesquiterpenos
189b C15H24, α-copaeno 1360 (b) 1360 97 1 368 - 2950
198 C15H24, cis-cariofileno 1403 (e) 1403 95 1 376 - 3005
202 C15H24, longifoleno o isómero 1395 (b) 1407 95 2 248 775 1205
203 C15H24, cariofileno o isómero 1409 97 3 1170 1580 4545
208 C15H24, β-cariofileno 1418 (f) 1424 99 5 5395 1070 26150
– 267 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 268 –
______________________________________________________________________________________________________Anexo 1 – Tabla III.11a
– 269 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 270 –
______________________________________________________________________________________________________Anexo 1 – Tabla III.11a
– 271 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 272 –
______________________________________________________________________________________________________Anexo 1 – Tabla III.11a
– 273 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 274 –
______________________________________________________________________________________________________Anexo 1 – Tabla III.11a
– 275 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 276 –
______________________________________________________________________________________________________Anexo 1 – Tabla III.11a
– 277 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
* .
IKO Índice de Kovats observado
1
Nº de asignación dado a cada pico del cromatograma
IKR: índices de Kovats obtenidos en la bibliografía para columnas tipo DB5 o similares (entre paréntesis figura la referencia bibliográfica); IKO: índices
de Kovats observados en el análisis; %C: porcentaje de coincidencia obtenidos por comparación de los espectros problema con los espectros de
referencia (base de datos Nist).
(a) Tran et al. (1992); (b) Adegoke et al. (1998); (c) Madruga y Mottram, 1998; (d) Fadel et al. (1999); (e) Lazari et al. (2000); (f) Asghari et al. (2001);
(g) Ngassoum et al. (2001); (h) Ghannadi et al. (2002); (i) Song et al. (2002); (j) Edris et al. (2003); (k) Ghasemi et al. (2003); (l) Veliĉkoviĉ et al. (2003);
(m) Xu et al. (2003); (n) Acree et al. (2004); (ñ) Gocmen et al. (2004).
– 278 –
ANEXO 2
Figura III.6.- Representación del color obtenido para cada una de las diferentes morcillas estudiadas en la
caracterización del producto final.
– 279 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 280 –
_______________________________________________________________________________________________________Anexo 2 – Figura III.6
– 281 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 282 –
ANEXO 3
Tabla III.22a.- Evolución del contenido de compuestos volátiles en la morcilla de la industria I conservada a
0ºC.
– 283 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 284 –
__________________________________________________________________________________________________Anexo 3 – Tabla III.22a
Tabla III.22a.- Evolución del contenido de compuestos volátiles en la morcilla conservada a 0ºC, expresado en ng de
dodecano por g de morcilla (IKO* < 1270) o ng de hexadecano por g de morcilla (IKO* ≥ 1270).
1
Nº Compuesto IKR IKO %C Día 0 Día 17 Día 35
COMPUESTOS TERPÉNICOS
Monoterpenos
50 β-pineno 977 (a) 969 91 246 1328 1630
M32 C10H16, terpineno o isómero 1011 70 389 - 433
66 Limoneno 1030 (a) 1023 99 10645 17107 2047
73 γ-terpineno 1055 (l) 1055 97 1388 4895 3629
146a C10H16 1265 96 436 858 615
Sesquiterpenos
208 C15H24, β-cariofileno 1418 (f) 1425 99 742 1812 1182
224 C15H24 1484 90 1039 1099 771
Terpenoides
89 Linalool 1100 (a) 1101 95 22627 29273 22575
109 Terpinen-4-ol 1182 (n) 1178 95 8777 9045 6763
111 α-terpineol 1195 (n) 1193 78 2400 1940 1604
114 C10H16O 1194 70 922 1009 474
137b C11H16O, carvacrol metil éter 1225 (b) 1242 91 283 - 161
138 C10H12O, cuminal o isómero 1258 (n) 1245 97 42192 42831 20491
141 Carvona 1255 (a) 1252 97 13170 11956 7781
142 C11H16O, carvacrol metil éter o isómero 1225 (b) 1250 90 529 972 728
144 C10H12O, anetol o isómero 1258 98 1079 963 773
– 285 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 286 –
__________________________________________________________________________________________________Anexo 3 – Tabla III.22a
– 287 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 288 –
__________________________________________________________________________________________________Anexo 3 – Tabla III.22a
– 289 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 290 –
__________________________________________________________________________________________________Anexo 3 – Tabla III.22a
– 291 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 292 –
__________________________________________________________________________________________________Anexo 3 – Tabla III.22a
– 293 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
* .
IKO Índice de Kovats observado
1
Nº de asignación dado a cada pico del cromatograma
IKR: índices de Kovats obtenidos en la bibliografía para columnas tipo DB5 o similares (entre paréntesis figura la referencia bibliográfica); IKO: índices
de Kovats observados en el análisis; %C: porcentaje de coincidencia obtenidos por comparación de los espectros problema con los espectros de
referencia (base de datos Nist).
(a) Tran et al. (1992); (b) Adegoke et al. (1998); (c) Madruga y Mottram, 1998; (d) Fadel et al. (1999); (e) Lazari et al. (2000); (f) Asghari et al. (2001);
(g) Ngassoum et al. (2001); (h) Ghannadi et al. (2002); (i) Song et al. (2002); (j) Edris et al. (2003); (k) Ghasemi et al. (2003); (l) Veliĉkoviĉ et al. (2003);
(m) Xu et al. (2003); (n) Acree et al. (2004); (ñ) Gocmen et al. (2004).
– 294 –
ANEXO 4
Tabla III.22b.- Evolución del contenido de compuestos volátiles en la morcilla de la industria I conservada a
3ºC.
– 295 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 296 –
_____________________________________________________________________________________________________Anexo 4 – Tabla III.22b
Tabla III.22b.- Evolución del contenido de compuestos volátiles en la morcilla conservada a 3ºC, expresado en ng de
dodecano por gramo de morcilla (IKO* < 1270) o ng de hexadecano por g de morcilla (IKO* ≥ 1270).
1
Nº Compuesto IKR IKO %C Día 0 Día 15 Día 29
COMPUESTOS TERPÉNICOS
Monoterpenos
49 Sabineno 973 (a) 968 89 - 372 411
M32 C10H16, terpineno o isomero 1010 70 846 172 300
66 Limoneno 1030 (a) 1023 99 853 831 250
73 γ-terpineno 1055 (l) 1054 97 2126 2115 1719
87 C10H16, δ-terpineno 1090 (n) 1097 97 392 192 112
146a C10H16 1263 96 784 872 705
Sesquiterpenos
203 C15H24, cariofileno o isómero 1409 97 961 1113 587
208 C15H24, β-cariofileno 1418 (f) 1422 99 2676 2768 4374
219 C15H24, cariofileno o isómero 1470 (a) 1458 99 - - 750
224 C15H24 1483 90 1238 1477 1813
Terpenoides
89 Linalool 1100 (a) 1099 95 5993 5159 4925
M36 2-ciclohexen-1-ol, mentenol o isómero 1119 98 429 264 342
M49 2-ciclohexen-1-ol, mentenol 1145 (a) 1139 96 724 487 146
109 Terpinen-4-ol 1182 (n) 1182 95 9316 9209 7577
111 α-terpineol 1195 (n) 1190 78 1536 2460 1929
114 C10H16O 1192 70 908 1062 834
116 C10H16O, dihidrocarvona o isómero 1255 (a) 1195 98 - - 990
– 297 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 298 –
_____________________________________________________________________________________________________Anexo 4 – Tabla III.22b
– 299 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 300 –
_____________________________________________________________________________________________________Anexo 4 – Tabla III.22b
– 301 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 302 –
_____________________________________________________________________________________________________Anexo 4 – Tabla III.22b
– 303 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 304 –
_____________________________________________________________________________________________________Anexo 4 – Tabla III.22b
– 305 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 306 –
_____________________________________________________________________________________________________Anexo 4 – Tabla III.22b
* .
IKO Índice de Kovats observado
1
Nº de asignación dado a cada pico del cromatograma
IKR: índices de Kovats obtenidos en la bibliografía para columnas tipo DB5 o similares (entre paréntesis figura la referencia bibliográfica); IKO: índices
de Kovats observados en el análisis; %C: porcentaje de coincidencia obtenidos por comparación de los espectros problema con los espectros de
referencia (base de datos Nist).
(a) Tran et al. (1992); (b) Adegoke et al. (1998); (c) Madruga y Mottram, 1998; (d) Fadel et al. (1999); (e) Lazari et al. (2000); (f) Asghari et al. (2001);
(g) Ngassoum et al. (2001); (h) Ghannadi et al. (2002); (i) Song et al. (2002); (j) Edris et al. (2003); (k) Ghasemi et al. (2003); (l) Veliĉkoviĉ et al. (2003);
(m) Xu et al. (2003); (n) Acree et al. (2004); (ñ) Gocmen et al. (2004).
– 307 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 308 –
ANEXO 5
Tabla III.22c.- Evolución del contenido de compuestos volátiles en la morcilla de la industria I conservada a
6ºC.
– 309 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 310 –
_____________________________________________________________________________________________________Anexo 5 – Tabla III.22c
Tabla III.22c.- Evolución del contenido de compuestos volátiles en la morcilla conservada a 6ºC, expresado en ng de
dodecano por gramo de morcilla (IKO* < 1270) o ng de hexadecano por g de morcilla (IKO* ≥ 1270).
1
Nº Compuesto IKR IKO %C Día 0 Día 7 Día 14
COMPUESTOS TERPÉNICOS
Monoterpenos
49 Sabineno 973 (a) 967 89 525 363 -
50 β-pineno 977 (a) 968 91 64 - 56
66 Limoneno 1030 (a) 1023 99 25631 37986 133
73 γ-terpineno 1055 (l) 1054 97 556 106 433
88 Terpinoleno o isómero 1091 (a) 1096 95 2488 - -
146a C10H16 1263 96 337 889 57
Sesquiterpenos
208 C15H24, β-cariofileno 1418 (f) 1422 99 686 1249 1091
219 C15H24, cariofileno o isómero 1470 (a) 1458 99 - 549 -
224 C15H24 1482 90 448 136 297
Terpenoides
89 Linalool 1100 (a) 1098 95 1734 2556 630
M36 2-ciclohexen-1-ol, mentenol o isómero 1129 98 567 1198 289
109 Terpinen-4-ol 1182 (n) 1175 95 5425 4961 1315
111 α-terpineol 1195 (n) 1190 78 1526 1362 304
114 C10H16O 1191 70 - - 72
137b C11H16O, carvacrol metil éter 1225 (e) 1237 91 277 775 -
138 C10H12O, cuminal o isómero 1258 (n) 1243 97 26164 21076 5927
141 Carvona 1255 (a) 1249 97 8982 8460 2045
– 311 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 312 –
_____________________________________________________________________________________________________Anexo 5 – Tabla III.22c
– 313 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 314 –
_____________________________________________________________________________________________________Anexo 5 – Tabla III.22c
– 315 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 316 –
_____________________________________________________________________________________________________Anexo 5 – Tabla III.22c
– 317 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 318 –
_____________________________________________________________________________________________________Anexo 5 – Tabla III.22c
– 319 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 320 –
_____________________________________________________________________________________________________Anexo 5 – Tabla III.22c
* .
IKO Índice de Kovats observado
1
Nº de asignación dado a cada pico del cromatograma
IKR: índices de Kovats obtenidos en la bibliografía para columnas tipo DB5 o similares (entre paréntesis figura la referencia bibliográfica); IKO: índices
de Kovats observados en el análisis; %C: porcentaje de coincidencia obtenidos por comparación de los espectros problema con los espectros de
referencia (base de datos Nist).
(a) Tran et al. (1992); (b) Adegoke et al. (1998); (c) Madruga y Mottram, 1998; (d) Fadel et al. (1999); (e) Lazari et al. (2000); (f) Asghari et al. (2001);
(g) Ngassoum et al. (2001); (h) Ghannadi et al. (2002); (i) Song et al. (2002); (j) Edris et al. (2003); (k) Ghasemi et al. (2003); (l) Veliĉkoviĉ et al. (2003);
(m) Xu et al. (2003); (n) Acree et al. (2004); (ñ) Gocmen et al. (2004).
– 321 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 322 –
ANEXO 6
Tabla III.23a.- Evolución del contenido de compuestos volátiles en la morcilla de la industria II conservada a
0ºC.
– 323 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 324 –
_____________________________________________________________________________________________ ________Anexo 6 – Tabla III.23a
Tabla III.23a.- Evolución del contenido de compuestos volátiles en la morcilla conservada a 0ºC, expresado en ng de
dodecano por gramo de morcilla (IKO* < 1270) o ng de hexadecano por g de morcilla (IKO* ≥ 1270).
1
Nº Compuesto IKR IKO %C Día 0 Día 17 Día 35
COMPUESTOS TERPÉNICOS
Monoterpenos
50 β-pineno 977 (a) 977 94 893 1102 782
60 δ-3-careno 1001 (a) 1004 95 611 1117 625
66 Limoneno 1030 (a) 1024 99 1486 1652 1140
73 γ-terpineno 1055 (l) 1056 97 4734 5290 3880
76b C10H16, terpineno 1064 95 843 921 655
M47 Terpinoleno o isómero 1089 (l) 1083 98 1094 778 554
87 C10H16, δ-terpineno 1090 (n) 1096 97 11436 6096 4498
97 C10H16 1120 91 457 857 811
146a C10H16 1263 96 1627 1588 1453
Sesquiterpenos
189b C15H24, α-copaeno 1360 (b) 1360 97 3177 2359 2345
203 C15H24, cariofileno o isómero 1409 98 3611 2968 2710
208 C15H24, β-cariofileno o isómero 1418 (f) 1424 99 18783 28357 27250
219 C15H24, cariofileno o isómero 1460 99 17883 23757 22250
224 C15H24 1484 90 1843 1544 2784
230 C15H22, calamaneno o isómero 1530 95 1401 1367 162
Terpenoides
109 Terpinen-4-ol 1182 (n) 1182 95 12349 18083 15893
111 α-terpineol 1195 (n) 1191 78 2038 2525 2250
114 C10H16O 1193 70 2446 2957 2533
– 325 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 326 –
_____________________________________________________________________________________________ ________Anexo 6 – Tabla III.23a
– 327 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 328 –
_____________________________________________________________________________________________ ________Anexo 6 – Tabla III.23a
– 329 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 330 –
_____________________________________________________________________________________________ ________Anexo 6 – Tabla III.23a
– 331 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 332 –
_____________________________________________________________________________________________ ________Anexo 6 – Tabla III.23a
* .
IKO Índice de Kovats observado
1
Nº de asignación dado a cada pico del cromatograma
IKR: índices de Kovats obtenidos en la bibliografía para columnas tipo DB5 o similares (entre paréntesis figura la referencia bibliográfica); IKO: índices
de Kovats observados en el análisis; %C: porcentaje de coincidencia obtenidos por comparación de los espectros problema con los espectros de
referencia (base de datos Nist).
(a) Tran et al. (1992); (b) Adegoke et al. (1998); (c) Madruga y Mottram, 1998; (d) Fadel et al. (1999); (e) Lazari et al. (2000); (f) Asghari et al. (2001);
(g) Ngassoum et al. (2001); (h) Ghannadi et al. (2002); (i) Song et al. (2002); (j) Edris et al. (2003); (k) Ghasemi et al. (2003); (l) Veliĉkoviĉ et al. (2003);
(m) Xu et al. (2003); (n) Acree et al. (2004); (ñ) Gocmen et al. (2004).
– 333 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 334 –
ANEXO 7
Tabla III.23b.- Evolución del contenido de compuestos volátiles en la morcilla de la industria II conservada a
3ºC.
– 335 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 336 –
______________________________________________________________________________________________________Anexo 7 – Tabla III.23b
Tabla III.23b.- Evolución del contenido de compuestos volátiles en la morcilla conservada a 3ºC, expresado en ng de
dodecano por gramo de morcilla (IKO* < 1270) o ng de hexadecano por g de morcilla (IKO* ≥ 1270).
1
Nº Compuesto IKR IKO %C Día 0 Día 15 Día 29
COMPUESTOS TERPÉNICOS
Monoterpenos
50 β-pineno 977 (a) 977 94 313 895 586
60 δ-3-careno 1001 (a) 1002 95 1057 1113 1280
66 Limoneno 1030 (a) 1023 99 860 809 258
73 γ-terpineno 1055 (l) 1054 97 3109 2914 2444
76b C10H16, terpineno 1066 780 652 -
M47 Terpinoleno o isómero 1089 (l) 1082 98 583 297 178
87 C10H16, δ-terpineno 1090 (n) 1095 97 8419 5996 -
88 Terpinoleno o isómero 1091 (a) 1097 95 1012 361 -
97 C10H16 1117 91 528 246 294
146a C10H16 1263 96 891 976 1306
Sesquiterpenos
189b C15H24, α-copaeno 1360 (b) 1376 97 1981 1930 -
203 C15H24, cariofileno o isómero 1407 97 3601 3459 2817
208 C15H24, β-cariofileno 1418 (f) 1421 99 7757 11066 9984
219 C15H24, cariofileno o isómero 1457 99 1709 1777 1716
224 C15H24 1483 90 1002 1232 1468
M49n2 Cadineno 1529 (d) 1528 96 - 651 727
M436 C15H24, cariofileno o isómero 1753 95 709 686 329
Terpenoides
109 Terpinen-4-ol 1182 (n) 1175 95 10003 9758 11638
– 337 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 338 –
______________________________________________________________________________________________________Anexo 7 – Tabla III.23b
– 339 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 340 –
______________________________________________________________________________________________________Anexo 7 – Tabla III.23b
– 341 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 342 –
______________________________________________________________________________________________________Anexo 7 – Tabla III.23b
– 343 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 344 –
______________________________________________________________________________________________________Anexo 7 – Tabla III.23b
– 345 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
* .
IKO Índice de Kovats observado
1
Nº de asignación dado a cada pico del cromatograma
IKR: índices de Kovats obtenidos en la bibliografía para columnas tipo DB5 o similares (entre paréntesis figura la referencia bibliográfica); IKO: índices
de Kovats observados en el análisis; %C: porcentaje de coincidencia obtenidos por comparación de los espectros problema con los espectros de
referencia (base de datos Nist).
(a) Tran et al. (1992); (b) Adegoke et al. (1998); (c) Madruga y Mottram, 1998; (d) Fadel et al. (1999); (e) Lazari et al. (2000); (f) Asghari et al. (2001);
(g) Ngassoum et al. (2001); (h) Ghannadi et al. (2002); (i) Song et al. (2002); (j) Edris et al. (2003); (k) Ghasemi et al. (2003); (l) Veliĉkoviĉ et al. (2003);
(m) Xu et al. (2003); (n) Acree et al. (2004); (ñ) Gocmen et al. (2004).
– 346 –
ANEXO 8
Tabla III.23c.- Evolución del contenido de compuestos volátiles en la morcilla de la industria II conservada a
6ºC.
– 347 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 348 –
______________________________________________________________________________________________________Anexo 8 – Tabla III.23c
Tabla III.23c.- Evolución del contenido de compuestos volátiles en la morcilla conservada a 6ºC, expresado en ng de
dodecano por gramo de morcilla (IKO* < 1270) o ng de hexadecano por g de morcilla (IKO* ≥ 1270).
1
Nº Compuesto IKR IKO %C Día 0 Día 7 Día 14
COMPUESTOS TERPÉNICOS
Monoterpenos
50 β-pineno 977 (a) 968 94 1024 - 8
60 δ-3-careno 1001 (a) 1002 95 822 - 350
66 Limoneno 1030 (a) 1022 99 1045 - 81
73 γ-terpineno 1055 (l) 1054 97 3357 2572 2614
76b C10H16, terpineno o isómero 1066 175 - -
87 C10H16, terpineno o isómero 1095 97 4546 4634 4438
M235n10 Terpinoleno 1091 (a) 1097 95 346 262 479
146a C10H16 1263 96 277 194 335
Sesquiterpenos
189b C15H24, α-copaeno 1360 (b) 1378 97 4124 4589 3880
198 C15H24, cariofileno o isómero 1407 97 2771 3041 2635
208 C15H24, β-cariofileno 1418 (f) 1421 99 28615 21320 21978
219 C15H24, cariofileno o isómero 1457 99 3951 3228 3371
224 C15H24 1482 90 855 478 840
230 C15H22, calamaneno o isómero 1528 603 - 692
Terpenoides
109 Terpinen-4-ol 1182 (n) 1175 95 7924 6569 8430
114 C10H16O 1191 70 272 263 676
118 C10H14O, safranal o isómero 1195 94 663 - 1427
138 C10H12O, cuminal o isómero 1258 (n) 1244 97 39253 36353 44356
– 349 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 350 –
______________________________________________________________________________________________________Anexo 8 – Tabla III.23c
– 351 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 352 –
______________________________________________________________________________________________________Anexo 8 – Tabla III.23c
– 353 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 354 –
______________________________________________________________________________________________________Anexo 8 – Tabla III.23c
– 355 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 356 –
______________________________________________________________________________________________________Anexo 8 – Tabla III.23c
* .
IKO Índice de Kovats observado
1
Nº de asignación dado a cada pico del cromatograma
IKR: índices de Kovats obtenidos en la bibliografía para columnas tipo DB5 o similares (entre paréntesis figura la referencia bibliográfica); IKO: índices
de Kovats observados en el análisis; %C: porcentaje de coincidencia obtenidos por comparación de los espectros problema con los espectros de
referencia (base de datos Nist).
(a) Tran et al. (1992); (b) Adegoke et al. (1998); (c) Madruga y Mottram, 1998; (d) Fadel et al. (1999); (e) Lazari et al. (2000); (f) Asghari et al. (2001);
(g) Ngassoum et al. (2001); (h) Ghannadi et al. (2002); (i) Song et al. (2002); (j) Edris et al. (2003); (k) Ghasemi et al. (2003); (l) Veliĉkoviĉ et al. (2003);
(m) Xu et al. (2003); (n) Acree et al. (2004); (ñ) Gocmen et al. (2004).
– 357 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 358 –
ANEXO 9
Foto III.1.- Imágenes digitales de la evolución del color en la masa de morcilla a distintos tiempos de
conservación (día 0 y día final). (a) 0ºC, (b) 3ºC, (c) 6ºC.
– 359 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
– 360 –
________________________________________________________________________________________________________Anexo 9 – Foto III.1.
a
Industria I, 0ºC Industria II, 0ºC
Día 0 Día 35 Día 0 Día 35
b
Industria I, 3ºC Industria II, 3ºC
Día 0 Día 29 Día 0 Día 35
– 361 –
Aportaciones a la caracterización de la morcilla de León......____________________________________________________________________
Foto III.1.- Imágenes digitales de la evolución del color en la masa de morcilla a distintos tiempos de conservación (día 0 y
día final). a) 0ºC; b) 3ºC; c) 6ºC.
– 362 –
– 363 –