ESTUDIO DE LA CROMATINA SEXUAL (X). METODO DE LA ACETOORCENA.

Introduccin: La cromatina sexual permiti establecer la diferencia en el periodo de interfase del ciclo celular entre un individuo masculino y uno femenino. Se observa como un pequeo corpsculo de una a dos micras de dimetro adherido a la membrana nuclear que aparece en las clulas femeninas y no en las masculinas. La proporcin de ncleos en los cuales se puede apreciar la cromatina vara segn las clulas estudiadas, la tcnica de tincin empleada y la influencia de algunas sustancias hormonales y drogas. En las neuronas, los porcentajes de cromatina son muy altos, ya que se alcanzan valores de hasta 98%; en la mucosa vaginal, tambin los valores son altos y, en otros tejidos, la positividad vara entre el 30 y 60%. Los varones normales no muestran corpsculo de Barr y solo ocasionalmente algunos cromocentros pueden ser confundidos con la cromatina X. En el periodo neonatal, los porcentajes de cromatina son mas bajos y las pacientes que reciben tratamiento con hidrocortisona pueden mostrar valores de cromatina mas bajos que los controles. Existen varias tcnicas para observar la cromatina sexual. El mtodo mas fcil y rpido es el estudio en frotis de la mucosa bucal, haciendo un ligero aplastamiento de las clulas y recurriendo a su tincin con cualquier colorante bsico. Debe tomarse muestra, tanto del lado derecho como del lado izquierdo de la mucosa. Para la obtencin de la muestra se sigue este procedimiento. OBTENCIN DE MUESTRA: 1. Con esptula metlica con abatelenguas se hace un raspado suave de la mucosa bucal y se extiende sobre el portaobjeto procurando que el frotis no quede demasiado delgado. 2. Se procede a la tincin con una gota de acetoorcena preparada y se coloca un cubreobjetos sobre la tincin. Se observa al microscopio en el siguiente orden: 10x, 40x y finalmente en 100x AGREGANDO UNA GOTA DE ACEITE DE INMERSIN PREVIO a la colocacin del objetivo 100x TINCIN DE ACETOORCENA. Solucin madre. Orcena sinttica 1gr cido actico 45ml. Se calienta hasta ebullicin, se deja enfriar y se filtra. Solucin de trabajoSolucin madre Agua bidestilada Se procede a filtrar la solucin 45ml 55ml

Sobre el portaobjeto que contiene el frotis de la mucosa bucal se deja caer una gota de la solucin de acetoorcena en el centro de la preparacin. La observacin de la preparacin debe hacerse de inmediato. Requerimientos: 1. Acudir al laboratorio con bata blanca. 2. Cada alumno llevar a la prctica dos abatelenguas de plstico preferentemente. 3. Previo aseo bucal nicamente con pasta dental, no utilizar enjuagues especiales (Astringosol, etc). 4. Para realizar la prctica se agruparn en equipos de dos, masculino y femenino 5. Un alumno tomar, procesar y analizar la muestra de su compaero de trabajo.

6. El cuestionario anexo se entregar en la siguiente prctica y ser INDIVIDUAL. Cuestionario complementario a la practica del laboratorio de Gentica. HERENCIA LIGADA AL X. Incluir Ttulo, Nmero de prctica. Fecha de prctica, nombre y grupo. Cuestionario y respuestas y dibujo solicitado a mano Desarrolla el tema que se indica: 1. Quienes y en que ao desarrollaron el estudio de la cromatina sexual? 2. Porqu es observable el cuerpo de Barr y cul es la relacin con el nmero de X de un individuo 3. Realiza un cuadro de relacin entre el nmero de corpsculos de cromatina y el de cromosomas X en donde se observe de cero a cuatro cuerpos de Barr, indicando el nmero de X de replicacin tarda, el fenotipo masculino probable para cada cuerpo de Barr y el fenotipo femenino. 4. Describe los tres puntos caractersticos de la hiptesis de Lyon y sus consecuencias importantes (tres) 5. En que consiste la compensacin de dosis y cul es un ejemplo (patologa) que escapa a la compensacin de dosis completa? 6. A que se refiere la variabilidad de expresin en heterocigotas y en qu consiste la lyonizacin desfavorable? 7. A qu se refiere el mosaicismo del cromosoma X en las mujeres y qu repercusiones clnicas puede tener? 8. Cul es el riesgo en la descendencia de las siguientes parejas: a) Varn afectado / mujer normal b) Varn normal / mujer portadora c) Varn afectado / mujer portadora 9. Escribe todos los criterios considerados en la herencia recesiva ligada al X: 10. Tres situaciones en las cuales se afecta una mujer en herencia recesiva ligada al X: 11. Cmo se diferencia una herencia recesiva ligada al X de una dominante ligada al X? 12. Cul es la diferencia entre fenotipo limitado e influido por el sexo y la herencia ligada al X? 13. Realiza un dibujo con las dos laminillas observadas (una de cada uno de los integrantes del equipo). En el dibujo se debe sealar con flechas el citoplasma, el ncleo y el cuerpo de Barr.

Disfruta tu practica!!!!!