PRCTICA: MTODOS DE ANLISIS EN COAGULOPATAS

CUESTIONARIO N2

1. Fundamento del recuento de plaquetas para los mtodos directo e indirecto

Mtodo Directo: Rees Ecker En el recuento directo de las plaquetas mediante la cmara de Neubauer, se mezcla la sangre en la pipeta de Thoma con un diluyente que cause la hemlisis de los eritrocitos (oxalato de amonio). Se llena el hemocitmetro con dicha mezcla y se recuentan las plaquetas en la cuadrcula central, de preferencia con microscopio de contraste de fases y con el objetivo de 40X. Mtodo Indirecto: Mtodo Fonio Este mtodo se basa en el recuento de plaquetas por cada 1000 hemates. Se emplea solucin de Sulfato de magnesio que va a evitar la formacin del trombo para su coloracin mediante Tincin de Wright. Se calcula el nmero de campos que tenemos que ver para 1000 hemates. Contamos en ese nmero de campos las plaquetas que se presentarn como pequeos corpsculos de 2 a 4 micras teidas de color azul y algunas granulaciones prpuras. Despus sabiendo el nmero de hemates por mm3 podremos calcular fcilmente el nmero de plaquetas por mm3.

2. Composicin qumica del reactivo de Rees-Ecker

Composicin: Azul de cresilo brillante Citrato de Sodio Formol neutro Agua desmineralizada 1g/L 38g/L 22mL 987 mL

3. En qu casos se produce trombocitopenia y en qu casos trombocitosis

TROMBOCITOPENIA La trombocitopenia es cualquier situacin con un recuento plaquetario inferior a 100.000/mm, es decir, la disminucin de la cantidad de plaquetas circulantes en el torrente

sanguneo por debajo de los niveles normales. En trminos generales los valores normales se ubican entre 150.000/mm y 450.000/mm (Plaquetas por cada milmetro cbico). Etiologa: La trombocitopenia puede desencadenarse por 3 mecanismos:

Disminucin de la produccin de plaquetas o produccin de plaquetas anmalas: La anemia aplsica, la presencia de clulas neoplsicas en la mdula sea, la infeccin por VIH y los efectos de los frmacos y de la radioterapia son procesos que pueden disminuir la produccin de plaquetas. Acumulacin excesiva de plaquetas en el bazo: Incluso cuando la produccin de plaquetas es normal, el bazo almacena aproximadamente el 30 - 40% de las plaquetas antes de empezar a liberarlas a la circulacin. En los casos de esplenomegalia con hiperesplenismo el bazo puede acumular hasta el 80% de las plaquetas. La hipotermia puede ser un factor predisponente. Disminucin de la supervivencia de las plaquetas: Se puede producir una destruccin de las plaquetas por mecanismos inmunitarios cuando el organismo elabora anticuerpos contra las propias plaquetas. Por otro lado, la destruccin plaquetaria no inmunolgica se ha observado en algunas situaciones como lo son el consumo de drogas o alcohol ya que en los vasos sanguneos las plaquetas experimentan una lesin mecnica, y tambin cuando se produce un consumo excesivo de plaquetas por coagulacin intravascular diseminada aguda o por prpura trombtica trombocitopnica.

TROMBOCITOSIS Es la presencia de un alto nmero de plaquetas en la sangre (recuento de plaquetas > 450 x 109/L). Generalmente, el recuento normal de plaquetas est entre 150.000 y 450.000 por mm3. Trombocitosis Primaria: trombocitosis causada por una alteracin en las clulas hematopoyticas; el nivel srico de trombopoyetina (Tpo), la principal citocina responsable de la produccin de plaquetas, es bajo o normal. La trombocitosis primaria puede ser hereditaria (infrecuente) o adquirida (ms frecuente). Trombocitosis Secundaria: trombocitosis con causa externa; el nivel srico de TPO es normalmente, elevado. Normalmente, la trombocitosis secundaria es adquirida: algunas de las enfermedades que cursan con un elevado nmero de plaquetas son: la inflamacin, la deficiencia de hierro, el asplenismo y los sndromes mielodisplsicos. La trombocitosis secundaria hereditaria (familiar) es infrecuente. Trombocitemia: neoplasia mieloproliferativa caracterizada por trombocitosis.

4. Como se explica el comportamiento de las plaquetas en la prpura trombocitopnica idioptica

La denominacin previa de prpura trombocitopnica idioptica se sustituy por inmune debido a la importancia de los mecanismos inmunolgicos de destruccin de plaquetas mediada por autoanticuerpos y linfocitos T en su patogenia. Actualmente se recomienda la denominacin de trombocitopenia inmune primaria. Se elimina el trmino de prpura porque el sangrado cutneo o mucoso est ausente o es mnimo en algunos pacientes. Se mantiene el acrnimo Immune ThrombocytoPenia (ITP) y PTI en castellano, por su amplia difusin y utilizacin previa. La Prpura Trombocitopnica Idioptica es una enfermedad hemorrgica autoinmune causada por defecto en el nmero de plaquetas circulantes en sangre (<50,000 mm3). Prpura son hematomas (equimosis) en la piel, caractersticos de la enfermedad, trombocitopenia significa nmero de plaquetas bajo el valor normal, e idioptica quiere decir que la etiologa (es decir, la causa de la trombocitopenia) es desconocida. En un frotis para la observacin directa de plaquetas (si la sangre es extendida debidamente, de preferencia sobre un cubreobjetos, bien limpio, y bien teida), las plaquetas deben estar regularmente distribuidas y su nmero es fcil de determinar. Normalmente deben encontrarse plaquetas, aisladas o en grupos, en cada campo de inmersin en aceite. Con una moderada reduccin, los grupos se ven rara vez y las plaquetas aisladas se encuentran en nmero de 3 a 6 por campo. Si la reduccin es franca se las encuentra en menor nmero, 2, a lo sumo, por campo, y hasta ninguna en varios campos. Generalmente, en la prpura idioptica no solo estn disminuidas las plaquetas, sino que cambian tambin de forma; su tamao es mayor, como grandes hemates, y a veces son alargadas, ovales o redondas.

5. Fundamento del recuento de reticulocitos

Los reticulocitos contienen una fina red de ARN y protoporfirina que se puede teir con el azul de cresil brillante. Este colorante en combinacin con una misma cantidad de sangre anticoagulada se mezcla y con la ayuda de la temperatura (bao mara) se produce la coloracin de estos eritrocitos jvenes visualizndose en los frotices sanguneos por microscopa.

6. Mtodos para el recuento de reticulocitos

Para el recuento de reticulocitos, se dispone de 2 mtodos generales de conteo: 1. Recuento manual o en cmara (Desarrollado en el laboratorio) 2. Recuento automtico: Contadores electrnicos

Mtodos Electrnicos de Recuento Celular. Cada contador electrnico, se basa en su propio fundamento para obtener los resultados. A continuacin se recogen los fundamentos ms habituales e importantes.

Mtodo de la Resistencia Elctrica o de la Impedancia. Es el utilizado por los primeros contadores, ya que fue descubierto por Coulter en 1956. Se basa en lo siguiente:

Mientras que las clulas sanguneas conducen mal la electricidad, el lquido diluyente es un buen conductor de la electricidad (posee una gran conductividad elctrica). El dispositivo de medida consiste en un pequeo orificio, a travs del cual se hace pasar la sangre diluida. Tiene colocados un electrodo a su entrada y otro a su salida. Tambin se hace pasar una corriente elctrica constante a travs de ese mismo orificio. Si el orificio es atravesado solamente por lquido diluyente, la resistencia elctrica medida por los electrodos es mnima y constante, pero cuando el orificio es atravesado por una clula sangunea, se produce un aumento de la resistencia elctrica y un cambio de potencial entre los electrodos. El nmero de seales elctricas generadas indica el nmero de clulas presentes en la sangre y la amplitud de estas seales es directamente proporcional al volumen celular. De este modo es posible la identificacin de las clulas y por tanto el recuento.

Mtodo de la Dispersin de la Luz o de la Difraccin. MTODO DEL CAMPO OSCURO. El dispositivo de medida consiste en un capilar por el que circula la sangre diluida y que es atravesado por un haz de luz halgena. Cuando no pasan clulas a lo largo del capilar, el haz de luz incide sobre una zona no sensible (disco campo oscuro); pero si una clula pasa a travs del capilar, dispersa los rayos del haz luminoso hacia afuera del disco, donde son captados por un fotodetector. El nmero de seales luminosas detectado indica el nmero de clulas presentes en la sangre, y la intensidad de la dispersin luminosa producida por cada una de ellas es directamente proporcional al tamao y contenido de las clulas, siendo de este modo posible la identificacin y por tanto el recuento.

MTODO DEL RAYO LSER. El dispositivo de medida consta de un detector situado detrs de un capilar por el que circula un flujo continuo de sangre diluida; es pues un citmetro de flujo. Un rayo lser atraviesa el capilar y se dirige hacia el detector. Cuando no pasan clulas a lo largo del capilar, el rayo lser incide sobre el detector, pero si una clula pasa a travs del capilar, el rayo lser es interceptado por ella y deja de incidir sobre el detector. El nmero de interferencias indica el nmero de clulas presentes en la sangre, y el grado de interferencia que produce cada clula a su paso es directamente proporcional a su tamao. En estos contadores, la luz lser puede ser, por ejemplo, un lser de helio-nen polarizado verticalmente a una longitud de onda de 632,8 nm (el empleado en los contadores CELL-DYN 3000 y 3500 de los Laboratorios Abbott). Parmetros que determina un contador electrnico. Los modernos contadores electrnicos pueden llegar a determinar hasta ms de 50 parmetros. Entre stos cabe destacar los siguientes:

Nmero de hemates por mm3 de sangre. Porcentaje de reticulocitos. Nmero de leucocitos por mm3 de sangre. Frmula leucocitaria. Nmero de plaquetas por mm3 de sangre. ndices hematimtricos (eritrocitarios, reticulocitarios, leucocitarios y plaquetarios). Valor hematocrito. Concentracin de hemoblobina en la sangre. Velocidad de sedimentacin globular.

Bibliografa http://es.scribd.com/doc/8551328/RECUENTO-DE-RETICULOCITOS http://www.wfh.org/3/docs/Publications/Diagnosis_and_Treatment/Lab_Manual/Lab _Manual_Section-10_SP.pdf http://www.raco.cat/index.php/AnalesMedicina/article/viewFile/181252/254317 http://biblioms.dyndns.org/Libros/Medicina/Manual%20de%20cuidados%20neonatal es-Clohert_Stark/20.pdf

 http://impascience.eu/COSTBM0902_net/images/HEREDITARY-THROMBOCYTOSISsp.pdf?PHPSESSID=c7e8f24679c072acd929b3632afc7b03 http://www.cvsp.cucs.udg.mx/guias/TODAS/IMSS_143_08_PURPURA_TROMBOCITOP ENICA_INMUNOLOGICA/IMSS_143_08_EyR.pdf