Universidad Autnoma de San Luis Potos Facultad de Ciencias Programas Analticos de la Licenciatura de Biofsica.

1) NOMBRE DE CADA CURSO O ACTIVIDAD CURRICULAR

A) BIOLOGIA MOLECULAR APLICADA.

B) DATOS BSICOS DEL CURSO
Semestre Horas de teora por semana Horas de prctica por semana Horas trabajo adicional estudiante Crditos

7u8

10

C) OBJETIVOS DEL CURSO

Al finalizar el curso el estudiante ser capaz de comprender los principios fundamentales de la

Objetivos generales

manipulacin y recombinacin de molculas de ADN. Entender que existen toda una serie de herramientas que permiten el corte y pegado de molculas de ADN de manera especfica, as como el papel central que las bacterias cumplen en este proceso. Comprender los principios y las estrategias experimentales necesarias para la produccin y purificacin de protenas recombinantes tanto en bacterias como en diversos organismos eucariontes. Reconocer las distintas etapas involucradas en la generacin de ratones knockout, una herramienta esencial en la investigacin cientfica actual.
Unidades 1. Conceptos generales de la composicin y estructura de la molcula de ADN. 2. Corte y pegado de molculas de ADN con enzimas de restriccin y ADN ligasas. 3. Plsmidos bacterianos como vehculos para recombinar y amplificar fragmentos de ADN.

Objetivo especfico Revisar la composicion del ADN como una cadena de nucletidos y su organizacin en una doble hlice. Enfatizar los tipos de unin entre los diferentes componentes y su contribucin a la estabilizacin de la estructura. Introducir la existencia de un grupo de protenas bacterianas llamadas enzimas de restriccin con las que se puede cortar el ADN de manera especfica. Estas enzimas y la ADN ligasa van a permitir la recombinacin de dos molculas de ADN distintas, independientemente de su origen. Reconocer que para manipular molculas de ADN es necesario introducirlas en plsmidos, los cuales son molculas de ADN circular extracromosmicas bacterianas. Identificar los principios y numerosas aplicaciones de la reaccin en cadena de la polimerasa, una de las tcnicas mas comnes para amplificar, modificar y analizar molculas de ADN. Introducir el uso de promotores regulables para la produccin controlada de protenas en bacterias, as como de estrategias para la produccin de protenas txicas. Conocer la gran variedad de cepas bacterianas modificadas con el fin de producir protenas. Introducir las estrategias ms comnmente utilizadas para separar la protena de inters de todo un extracto bacteriano tanto en condiciones nativas como desnaturalizantes. Comprender las ventajas de producir protenas recombinantes en clulas eucariontes. Familiarizarse con los modelos biolgicos mas utilizados y conocer la diversidad de estudios que pueden realizarse. Revisar los conceptos y metodologas utilizados en la generacin de ratones knock-out. En estos ratones se inactiva un gen en el organismo completo o slo en tejidos especficos.

Objetivos especficos

4. Sntesis y modificacin de ADN in vitro con la reaccin de la polimerasa en cadena (PCR). 5. Expresin de protenas recombinantes en bacterias. 6. Purificacin de protenas recombinantes producidas en bacterias. 7. Produccin de protenas recombinantes en clulas eucariontes. 8. Generacin de ratones knock-out: manipulacin de ADN genmico y clulas madre

D) CONTENIDOS Y MTODOS POR UNIDADES Y TEMAS 5h/semana, 16 semanas: 80 h/semestre

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Universidad Autnoma de San Luis Potos Facultad de Ciencias Programas Analticos de la Licenciatura de Biofsica.

10 h Tema 1.1 El ADN se encuentra constitudo por cuatro tipos diferentes de nucletidos. 2h Tema 1.2 La polaridad 5 - 3 de la molcula de ADN es crtica para su funcin. 2h Tema 1.3 La molcula de ADN es una doble hlice. 2h Tema 1.4 El apareamiento Watson-Crick de las bases determinan la funcin del ADN. 1h Tema 1.5 Semejanzas y diferencias entre el ADN de procariontes y el de eucariontes. 3h Lecturas y Lecturas complementarias de libros especializados de biologa moderna para reforzar e otros recursos integrar conceptos. Mtodos de Exposicin detallada frente al pizarrn de cada uno de los temas haciendo nfasis del significado de enseanza cada uno de los conceptos nuevos Actividades de Lecturas complementarias, posteriores a cada tema, para concretar conceptos y reforzar aprendizaje conocimientos.

Unidad 1. Generalidades de la composicin de la molcula de ADN.

Unidad 2. Corte y pegado de molculas de ADN con enzimas de restriccin y ADN ligasas.

Tema 2.1 Origen, nomenclatura y funcin de las enzimas de restriccin. Tema 2.2 Compatibilidad de extremos pegajosos generados por enzimas diferentes Tema 2.3 Mapa de restriccin de una molcula de ADN. Tema 2.4 Anlisis de mezclas de molculas de ADN en geles de agarosa. Tema 2.5 Propiedades generales de las enzimas ADN ligasas. Lecturas y Lecturas complementarias de libros especializados de biologa moderna para reforzar e otros recursos integrar conceptos. Mtodos de Exposicin detallada frente al pizarrn de cada uno de los temas haciendo nfasis del significado de enseanza cada uno de los conceptos nuevos Actividades de Lecturas complementarias, posteriores a cada tema, para concretar conceptos y reforzar aprendizaje conocimientos.

10 h 2h 2h 2h 2h 2h

Unidad 3. Plsmidos bacterianos como vehculos para recombinar y amplificar fragmentos de ADN.

Tema 3.1 Componentes generales de los plsmidos bacterianos. Tema 3.2 Plsmidos empleados para manipular y amplificar ADN. Tema 3.3 Plsmidos utilizados para producir protenas en bacterias. Tema 3.4 Plsmidos empleados para producir protenas en clulas de mamferos. Tema 3.5 Seleccin de los eventos de ligacin exitosos entre dos molculas de ADN. Lecturas complementarias de libros especializados de biologa moderna para reforzar e Lecturas y otros recursos integrar conceptos. Exposicin detallada frente al pizarrn de cada uno de los temas haciendo nfasis del significado de Mtodos de cada uno de los conceptos nuevos. enseanza Experimentos demostrativos de los principios relacionados con esta unidad Actividades de Lecturas complementarias, posteriores a cada tema, para concretar conceptos y reforzar aprendizaje conocimientos. 10 h Tema 4.1 Etapas generales de la reaccion de la polimerasa en cadena. 2h Tema 4.2 Diseo de los oligonucletidos cebadores necesarios para la PCR 2h Tema 4.3 Propiedades especiales de las ADN polimerasas empleadas en la reaccin de PCR. 2h Tema 4.4 Introduccin de mutaciones puntuales en el ADN por la reaccin de PCR 2h Tema 4.5 Introduccin de numerosas mutaciones en el ADN por la reaccin de PCR 2h Lecturas y Lecturas complementarias de libros especializados de biologa moderna para reforzar e otros recursos integrar conceptos. Mtodos de Exposicin detallada frente al pizarrn de cada uno de los temas haciendo nfasis del significado de enseanza cada uno de los conceptos nuevos. Experimentos demostrativos de los principios relacionados con esta unidad Actividades de Lecturas complementarias, posteriores a cada tema, para concretar conceptos y reforzar aprendizaje conocimientos.

10 h 3h 1h 2h 2h 2h

Unidad 4. Sntesis y modificacin de ADN in vitro con la reaccin de la polimerasa en cadena (PCR).

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10 h Tema 5.1 Expresin de la proteina de inters nativa o unida a un pptido pequeo u otra protena. 2h Tema 5.2 Regulacin de la sntesis de la protena a travs de promotores inducibles. 3h Tema 5.3 Expresin simultnea de varias protenas para el estudio de complejos proteicos. 3h Tema 5.4 Anlisis de las diversas cepas bacterianas existentes para la produccin de protenas. 2h Lecturas complementarias de libros especializados de biologa moderna para reforzar e Lecturas y otros recursos integrar conceptos. Mtodos de Exposicin detallada frente al pizarrn de cada uno de los temas haciendo nfasis del significado de enseanza cada uno de los conceptos nuevos Actividades de Lecturas complementarias, posteriores a cada tema, para concretar conceptos y reforzar aprendizaje conocimientos.

Unidad 5. Expresin de protenas recombinantes en bacterias..

8h Tema 6.1 Primera prueba: ensayo de solubilidad para la protena recombinante. 2h Tema 6.2 Purificacin de protenas recombinantes con ayuda de la protena GST 3h Tema 6.3 Purificacin de protenas recombinantes con ayuda de una cola de histidinas 2h Tema 6.4 Purificacin de protenas recombinantes en condiciones desnaturalizantes. 1h Lecturas complementarias de libros especializados de biologa moderna para reforzar e Lecturas y otros recursos integrar conceptos. Mtodos de Exposicin detallada frente al pizarrn de cada uno de los temas haciendo nfasis del significado de enseanza cada uno de los conceptos nuevos Actividades de Lecturas complementarias, posteriores a cada tema, para concretar conceptos y reforzar aprendizaje conocimientos.

Unidad 6. Purificacin de protenas recombinantes producidas en bacterias.

10 h Tema 7.1 Diversas modificaciones postraduccionales ocurren slo en clulas eucariontes. 1h Tema 7.2 Empleo de la levadura para la produccin de protenas recombinantes. 1h Tema 7.3 Utilizacin de clulas de insecto para la expresin de protenas desde baculovirus. 1h Tema 7.4 Produccin de protenas recombinantes en clulas de humano HEK-293 y HeLa S3. 2h Tema 7.5 Sobreexpresin de protenas fusionadas a las protenas fluorescentes. 2h Tema 7.6 Sobreexpresin de protenas fusionadas a pptidos pequeos (Ha, flag, etc). 2h Tema 7.8 Inmunoprecipitacin y western-blot para estudiar la unin entre protenas sobreexpresadas. 1h Lecturas y Lecturas complementarias de libros especializados de biologa moderna para reforzar e otros recursos integrar conceptos. Exposicin detallada frente al pizarrn de cada uno de los temas haciendo nfasis del significado de Mtodos de cada uno de los conceptos nuevos. enseanza Experimentos demostrativos de los principios relacionados con esta unidad Actividades de Lecturas complementarias, posteriores a cada tema, para concretar conceptos y reforzar aprendizaje conocimientos.

Unidad 7. Produccin de protenas recombinantes en clulas eucariontes.

Unidad 8. Generacin de ratones knock-out: manipulacin de ADN genmico y clulas madre.

12 h Tema 8.1 Importancia de los ratones knock-out en la ciencia: ko constitutivos vs ko condicionales. 2h Tema 8.2 Diseo de la construccin molecular con ADN genmico. 2h Tema 8.4 Linerarizacin y electroporacin de la construccin molecular en clulas madre de ratn. 2h Tema 8.5 Identificacin de los raros eventos de recombinacin homloga. 2h Tema 8.6 Inyeccin de clulas madre en un blastocisto en desarrollo para originar ratones quimeras. 2h Tema 8.7 Ratones transgnicos expresando la recombinasa cre para el sistema condicional loxP. 2h Lecturas complementarias de libros especializados de biologa moderna para reforzar e Lecturas y otros recursos integrar conceptos.

Exposicin detallada frente al pizarrn de cada uno de los temas haciendo nfasis del significado fsico de cada uno de los conceptos nuevos. Experimentos demostrativos de los principios relacionados con esta unidad Actividades de Lecturas complementarias, posteriores a cada tema, para concretar conceptos y reforzar aprendizaje conocimientos.
Mtodos de enseanza

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Universidad Autnoma de San Luis Potos Facultad de Ciencias Programas Analticos de la Licenciatura de Biofsica.

E) ESTRATEGIAS DE ENSEANZA Y APRENDIZAJE Exposicin del maestro con apoyo de recursos visuales y audiovisuales Tareas previas y posteriores a cada tema Anlisis de textos cientficos y tecnolgicos Evaluacin de conceptos formales en exmenes parciales Evaluacin de la capacidad de sntesis e integracin del conocimiento mediante exmenes parciales F) EVALUACIN Y ACREDITACIN
Elaboracin y/o presentacin
Primer examen parcial Segundo examen parcial Tercer examen parcial Cuarto examen parcial Trabajo de Investigacion Semestral escrito y presentacion en clase

Periodicidad
1 1 1 1 1

Abarca
Unidades 1 y 2 Unidad 3 y 4 Unidades 5 y 6 Unidad 7 y 8 Investigacin de literatura durante todo el semestre TOTAL

Ponderacin
20% 20% 20% 20% 20% 100%

G) BIBLIOGRAFA Y RECURSOS INFORMTICOS

Textos bsicos

-Lewis, B. Genes IX. Jones and Bartlett Publishers (2008). -Sambrook, J., y Russell, D.W. Molecular Cloning, a laboratory manual, Volmenes 1, 2 y 3. Cold Spring Harbor Laboratory Press, 3ed (2001).
Textos complementarios

-Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., y Walter, P. Molecular Biology of the Cell. Garland Science, Taylor & Francis Group, 5ed (2008).

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