1 FASE 3: CADENA DE TRANSPORTE DE ELECTRONES Tiene como finalidad reoxidar las coenzimas NADH y FADH2 reducidas en el CTC u otras

reacciones que impliquen la oxidacin de un sustrato. Los electrones se transfieren desde el NADH y el FADH2 (las coenzimas se reoxidan) a determinadas molculas que integran la cadena de transporte de electrones. Los electrones circulan entre los diferentes transportadores y terminan por fijarse sobre el oxgeno molecular. Los grandes complejos proteicos son tres: 1)NADH deshidrogenasa o NADH-Coenzima Q reductasa: Est constituido por 25 cadenas polipeptdicas, una de las cuales contiene FMN como grupo prosttico. El complejo tiene adems protenas hierro azufre. El NADH se reoxida cediendo sus electrones al FMN que se reduce a FMNH2 que luego se reoxida cediendo sus electrones a protenas hierro-azufre que integran el complejo. 2)Coenzima Q-Citocromo C reductasa 3)Citocromo Oxidasa La Coenzima Q o Ubiquinona es muy hidrofbica por lo que se puede mover a lo largo de la membrana mitocondrial. Sus grupos carbonilo en la forma oxidada se reducen aceptando cada uno de ellos un electrn y un protn, transformndose las funciones cetona en funciones alcohol. La forma reducida se llama ubiquinol. Es el nico transportador no ligado a protenas. Los Citocromos son protenas conjugadas que tienen hemo como grupo prosttico y catalizan el transporte de electrones. El hierro del hemo puede oxidarse o reducirse reversiblemente. Flujo de electrones a travs de los transportadores

2 En la cadena respiratoria los electrones fluyen en el mismo sentido que se incrementa el potencial de reduccin de los diferentes transportadores: desde los componentes de menor potencial de reduccin hacia los de mayor potencial de reduccin. Por lo tanto, la trayectoria que siguen los electrones desde las coenzimas reducidas hasta llegar al O2 est determinada por lo potenciales de reduccin de los distintos transportadores. Al fluir los electrones se producen descensos de la energa libre. Simultneamente a la transferencia de electrones a travs de estos complejos se produce un bombeo de protones desde la matriz mitocondrial hacia el espacio intermembrana, lo cual genera un gradiente electroqumico. La energa que genera la transferencia de electrones hacia el oxgeno es almacenada en el gradiente de protones que se forma simultneamente. => El pasaje de electrones a travs de los complejos genera un descenso de la energa libre suficiente para la sntesis de ATP. Por cada mol de NADH que se oxida se transfieren 2 moles de electrones y se sintetizan 3 moles de ATP. Como el FADH2 se oxida cediendo electrones a la Coenzima Q, los electrones que transfiere no atraviesan uno de los sitios donde se libera energa suficiente para la sntesis de ATP, entonces, por cada mol de FADH que se oxida se generan 2 moles de ATP. Reacciones catalizadas por enzimas con O2 como sustrato y Cadena de transporte de electrones no fosforilantes Existen otras cadenas que transportan electrones desde coenzimas reducidas hasta el O2 con liberacin de energa que es utilizada para otros fines distintos a la sntesis de ATP. Las enzimas que utilizan oxgeno como sustrato pueden reducirlo de una manera controlada sin liberar altas concentraciones de radicales libres al entorno. Estas enzimas utilizan iones metlicos, flavinas y otros cofactores para superar la barrera cintica impuesta por la restriccin del spin* y la barrera de energa en el proceso de reduccin. Los intermediarios de oxgeno que se generan, usualmente se mantienen unidos al sitio activo de estas enzimas formando complejos metal-oxgeno hasta que la reaccin termina. El nico que generalmente se libera es el perxido de hidrgeno. Las enzimas que catalizan reacciones que involucran al oxgeno son Oxidasas y Oxigenasas. *Restriccin del spin: las molculas orgnicas que sirven como sustrato para la oxidacin no contienen electrones desapareados, sino que sus enlaces tienen una forma estable con 2 electrones con spines antiparalelos. Para que el oxgeno acepte un par de electrones de un sustrato, uno de los electrones del oxgeno o uno de los electrones del sustrato deben invertir su spin. Existe una gran barrera termodinmica para la inversin del spin y debera ocurrir en un proceso en muchos pasos con una gran energa de activacin. La barrera cintica que representa la inversin del spin hace que la oxidacin directa del enlace C-H sea muy lenta y as se impide la combustin espontnea de las molculas orgnicas combustibles. Las reducciones de oxgeno con transferencia de un electrn no estn sujetas a la restriccin de spin y puede ocurrir fcilmente en presencia de donores de un electrn. La molcula de oxgeno puede aceptar un total de 4 electrones pareqa ser reducida a dos molculas de agua y tambin puede reducirse

3 de a un electrn cada vez. Sin embargo, el primer paso, la formacin del in superxido, no es termodinamicamente favorable y requiere un agente reductor moderadamente fuerte, el cual puede donar un nico electrn. Las enzimas que catalizan la reduccin del oxgeno, tales como citocromo oxidasa, tienen mecanismos que superan esta restriccin de spin y/o barrera energtica. 1)Las Oxidasas son enzimas que catalizan la oxidacin de diferentes sustratos utilizando O2 como aceptor de electrones (transfieren electrones al oxgeno). El O2 no se incorpora a la molcula oxidada sino que es reducido a agua o a perxido de hidrgeno. Un ejemplo de estas enzimas es la Citocromo C oxidasa, que cataliza la reduccin (4 electrones) del oxgeno a agua. En la reaccin el oxgeno se une al Cu y al Fe del hemo en el sitio activo, superando as la restriccin del spin. En una primera etapa se transfieren 2 electrones, dando perxido de hidrgeno, y luego se transfieren 2 electrones ms y se reduce finalmente a agua. Este mecanismo permite que la reaccin ocurra de manera controlada, sin interaccin entre radicales libres del oxgeno y otros componentes de la cadena respiratoria adyacentes. 2)Las Oxigenasas o Hidrolasas catalizan reacciones de oxidacin en las que un sustrato se oxida a expensas del O2. El O2 se incorpora a la molcula oxidada. Incorporan oxgeno al sustrato. Las dioxigenasas catalizan reacciones en las que los 2 tomos del O2 se incorporan al sustrato, las monooxigenasas catalizan reacciones donde slo uno de los tomos del O2 se incorporan al sustrato, en tanto que el otro tomo de oxgeno se reduce a H2O. Requieren dos sustratos que actan como reductores de los dos tomos del O2: el sustrato principal acepta uno de los dos tomos de O2, el cosustrato aporta los tomos de hidrgeno para reducir el otro tomo de oxgeno a H2O. Las diferentes monooxigenasas utilizan distintos cosustratos: nucletidos de flavina reducidos (FADH2, FMH2), NADH, NADPH. AH + BH2 + O-O --------------------------------> A-OH + B + H2O AH es el sustrato principal BH2 es el cosustrato Muchos de estos sistemas utilizan como transportador de electrones a una hemoprotena: citocromo P-450. Es un conjunto de monooxigenasas relacionadas estructuralmente, que hidroxilan muchos compuestos fisiolgicos como esteroides y cidos grasos y muchos compuestos xenobiticos. Incorporan un tomo de oxgeno en el sustrato, el cual se hidroxila y simultneamente se forma agua. El donor de electrones usualmente es el NADPH. Las dioxigenasas se encuentran generalmente en el camino metablico que convierte cido araquidnico en prostaglandinas, tromboxanos y leucotrienos. Tambin catalizan reacciones de ruptura de enlaces carbono-carbono en la degradacin de aminocidos.

4 Coenzimas de oxido reduccin NADP+ (fosfato de dinucletido de adenina y nicotidamida): estructura similar al NAD, pero el hidroxilo 2 del NAD est esterificado con cido fosfrico.

Fosforilacin Oxidativa Es el mecanismo ms importante de sntesis de ATP. Es la utilizacin de la energa obtenida en la reoxidacin de las coenzimas para la sntesis de ATP. El consumo de O2 , sntesis de ATP y oxidacin del sustrato se producen an cuando la mitocondria est aislada. La energa de oxidacin del sustrato es necesaria para la sntesis de ATP con consumo de O2. Por lo tanto, si se bloquea el pasaje de electrones al O2 bloquea la sntesis de ATP. En ausencia de ADP, cuando se pone O2 y un sustrato oxidable no se forma ATP y la transferencia de electrones al O2 se reduce drsticamente. Cuando se usa oligomicina (antibitico txico que inhibe la ATP sintetasa mitocondrial, por lo tanto, slo acta directamente sobre la sntesis de ATP) en una suspensin de mitocondrias se detienen tanto la snesis de ATP como el consumo de O2. La oxidacin de los sustratos y la fosforilacin oxidativa son procesos acoplados. En ciertas condiciones y con ciertos reactivos la oxidacin y la fosforilacin se desacoplan: -En mitocondrias aisladas que se rompen por detergentes, en los fragmentos de membrana persiste la transferencia del succinato o del NADH2 al O2, pero no se produce la sntesis de ATP.

5 -Sin romper la estructura mitocondrial, con cidos dbiles con propiedades hidrofbicas (DNP) y con ionferos se pueden desacoplar los procesos. Cuando se agrega DNP se consume O2 mientras que si haba oligomicina la sntesis de ATP continua inhibida. Los cidos dbiles hidrofbicos difunden fcilmente a travs de la membrana mitocondrial. Luego de entrar a la matriz mitocondrial en estado no disociado, se disocian y liberan protones y con ello disipan el gradiente de pH. Por lo tanto, se produce un cortocircuito y los protones no pueden llegar a la matriz mitocondrial a travs de la ATP-sintetasa y por lo tanto, no hay sntesis de ATP. Los ionferos forman complejos rodeando de un medio hidrofbico a iones inorgnicos para que estos puedan atravesar la MMI. Ej: Valiomicina con potasio= las cargas positivas que entran neutralizan el exceso de cargas negativas dentro de la matriz disipando el gradiente elctrico y disminuyendo la fuerza protn-motriz. Por lo tanto la valiomicina disminuye la sntesis de ATP sin bloquear la transferencia de electrones al O2. Teora Quimiosmtica La transferencia de electrones a travs de la cadena respiratoria es acompaada por el bombeo de protones desde la matriz mitocondrial hacia el espacio intermembrana. En consecuencia, se genera una diferencia en la concentracin de protones a travs de la membrana (un gradiente de pH). Entonces, el medio presente en la matriz se alcaliniza con respecto al del lado citosolico de la MMI. Como el protn tiene carga elctroca se genera un gradiente electroqumico (Fuerza protnmotriz). Esta energa del gradiente se utiliza para la sntesis de ATP catalizada por F1, cuando los protones retornan pasivamente a la matriz mitocondrial a travs del poro de protones de Fo. Para el bombeo de protones en contra del gradiente electroqumico, ambos trminos de la ecuacin tienen valores positivos y por lo tanto DG es positivo. Cuando el gradiente se disipa, se obtiene una cantidad equivalente de energa, til para realizar trabajo, que es la fuerza protn-motriz. Es por este acoplamiento que cuando la sntesis de ATP se bloquea, los protones no pueden fluir hacia la matriz a travs del complejo F1F0. Por lo tanto, no hay posibilidad de retorno de protones hacia la matriz mitocondrial y mientras contine el bombeo de protones por la cadena de transporte de electrones, el gradiente no se va a disipar y se va incrementar tanto hasta que la energa que se necesita para bombear un protn hacia fuera en contra de su gradiente es cada vez mayor e iguala o supera la energa que se obtiene en el transporte de electrones. Por lo tanto, se interrumpe la cadena de transporte de electrones. La energa libre del proceso completo del flujo de electrones y el bombeo de protones se hace igual a cero y se alcanza el estado de equilibrio Cuando se transfiere un par de electrones a partir de NADH a travs de la cadena respiratoria, se bombean 10 protones al espacio intermembrana. Se alcanza un estado estacionario cuando hay una diferencia de una unidad de pH y de 0,1 a 0,2 V de diferencia de potencial. La diferencia de energa libre para el movimiento de un equivalente de protones es de 15 a 25 KJ/mol, energa que es ms que suficiente para sintetizar un equivalente de ATP.

6 Si se genera un gradiente artificial de pH se genera una fuerza protn motriz suficiente para inducir la sntesis de ATP, si se rompe la mitocondria, la transferencia de electrones funciona pero se interrumpe la sntesis de ATP porque la integridad de la membrana es imprescindible para que se forme el gradiente de pH. Cuando se transfiere un par de electrones a partir de NADH a travs de la cadena respiratoria, se bombean 10 protones al espacio intermembrana. Se alcanza un estado estacionario cuando hay una diferencia de una unidad de pH y de 0,1 a 0,2 V de diferencia de potencial. La diferencia de energa libre para el movimiento de un equivalente de protones es de 15 a 25 KJ/mol, energa que es ms que suficiente para sintetizar un equivalente de ATP. Si se genera un gradiente artificial de pH se genera una fuerza protn motriz suficiente para inducir la sntesis de ATP, si se rompe la mitocondria, la transferencia de electrones funciona pero se interrumpe la sntesis de ATP porque la integridad de la membrana es imprescindible para que se forme el gradiente de pH. Cmo es que la energa del gradiente electroqumico se transforma en la energa almacenada en el enlace anhdrido del ATP? La ATP sintetasa es capaz de catalizar la sntesis de ATP a partir de ADP y Pi, an en ausencia del gradiente de protones, pero en este caso el ATP formado permanece estrechamente unido al sitio activo, bloqueando el sitio cataltico para una nueva reaccin. La fuerza protn-motriz, provee la energa necesaria para disociar el ATP del sitio cataltico y permitir que comience un nuevo ciclo. Quizs, la energa liberada del gradiente se utiliza para cambiar la conformacin de la enzima y liberar el ATP unido, por lo tanto, la disociacin del ATP constituye la etapa limitante de todo el proceso, de manera que la fuerza protn motriz en realidad disminuye la afinidad de la enzima por el ATP (Modificacin inducida por unin). Cuando los protones entran por el poro de Fo, la energa induce un cambio conformacional de F1. Los pares a-b cambian su conformacin de forma tal que se disocia ATP de un par y se unen ADP y Pi en otro, los que una vez unidos se combinan espontneamente para formar ATP. Mecanismos de transporte activo en la MMI La energa obtenida en la cadena de transporte de electrones adems de ser utilizada en la sntesis de ATP, es utilizada en otros procesos esenciales para la fosforilacin oxidativa. La MMI es impermeable a especies cargadas pero contiene dos sistemas especficos para el transporte de ADP y Pi hacia la matriz mitocondrial y de ATP hacia el citosol.

Regulacin de la Fosforilacin Oxidativa En ausencia de ADP el consumo de O2 es muy bajo y se incrementa luego de su agregado (Control por aceptor). La concentracin intracelular de ADP es una medida del estado energtico celular.

7 La relacin ATP/ADP x Pi tambin es un ndice del estado energtico. Esta relacin en general es muy alta porque predomina el compuesto fosforilado. Cuando aumenta la velocidad de los procesos que requieren energa y la consiguiente hidrlisis del ATP, aumenta la velocidad de hidrlisis de ATP y la relacin disminuye. Cuanto mayor es la disponibilidad de ADP para la fosforilacin oxidativa, la velocidad de la respiracin aumenta, causando regeneracin de ATP. Este proceso continua hasta que el cociente de concentraciones alcanza los niveles normales altos y entonces la respiracin celular se hace ms lenta. En el tejido adiposo pardo la oxidacin de los combustibles no se utiliza para la sntesis de ATP sino para generar calor ya que luego de que se oxidan los combustibles (especialmente cidos grasos) y stos transfieren sus electrones por la cadena de transporte, son bombeados al espacio intermembrana y en vez de pasar por la ATP sintetasa lo hacen por la TERMOGENINA y llegan a la matriz mitocondrial, disipndose la energa de oxidacin como calor y contribuyendo a mantener la temperatura corporal. El msculo cardaco tiene una alta demanda de ATP y por eso, muchas mitocondrias, tiene mucha cantidad de enzimas utilizadas en la respiracin, y en especial tiene un alto contenido de creatina-quinasa, que cataliza la transferencia del enlace de alta energia del ultimo fosfato del ATP a la creatina, formando creatinafosfato que es un amortiguador y un transportador energtico. La isoenzima mitocondrial de la CQ est localizada en la MMI, donde utiliza rpidamente el ATP para sintetiza creatina-fosfato y regenerar ADP en un sitio prximo a la ATP/ADPtranslocasa. La creatina-fosfato y el ATP difunden hacia la membrana plasmtica y all pueden acceder a la Na/K ATPasa, a la miosina y otras enzimas. El corazn es sensible a la anoxia isqumica y a los compuestos que interfieren con el metabolismo energtico. Las mitocondrias cardacas pueden secuestrar el Ca2+ que en bajas concentraciones estimula el ciclo de krebs y otras reacciones del metabolismo oxidativo, pero en altas concentraciones activa una fosfolipasa que degrada lpidos de membrana, el resultado es el hinchado de las mitocondrias y la prdida de nucletidos de adenina y nicotidamida.