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ISSN 1980-3540

05.01, 57-61 (2010) www.sbg.org.br

Do laboratrIo Sala De aula: oS receNteS avaNoS Da GeNtIca


Francis de Morais Franco Nunes
Departamento de Biologia - Faculdade de Filosofia, Cincias e Letras de Ribeiro Preto - Universidade de So Paulo Email: francis@rge.fmrp.usp.br

Introduo Quase um sculo aps a descoberta das leis da hereditariedade (1865), Watson e Crick elucidaram a estrutura da dupla-hlice do DNA (1953), um marco entre a Gentica Clssica e a Gentica Molecular. Inaugurada a nova era, nunca se viu uma rea do conhecimento avanar tanto, desde a compreenso da regulao da expresso gnica em procariotos e eucariotos, o isolamento de genes de interesse e clonagem em vetores (tcnicas de DNA recombinante), a PCR (reao em cadeia da polimerase) at o desenvolvimento de mtodos para sequenciar cidos nuclicos e protenas. A Gentica representa muito mais que uma sub-rea da Biologia, j se consolida como um campo cientfico capaz de estudar caractersticas hereditrias e suas variaes com requinte de detalhes. Com as ferramentas disponveis, Gregor Mendel seria capaz de analisar, com preciso, se um ou se muitos genes seriam responsveis pela definio da cor ou rugosidade das ervilhas, alm de identificar suas posies no genoma (locus cromossmico). Mendel tambm poderia reconhecer as diferenas entre as sequncias nucleotdicas dos alelos (formas alternativas de um mesmo gene), diferenas essas que conferem diferenas biolgicas (variabilidade). Em especial, num passado no to remoto, as diferenas morfolgicas na prole diferenciavam os indivduos homozigotos (que possuem um par de alelos idnticos para um dado gene ou caracterstica) dos heterozigotos (que possuem um par de alelos diferentes para um dado gene ou caracterstica), mesmo sem conhecimentos moleculares. A Gentica vive uma fase mica, em que estudos em larga escala so cada vez mais comuns. Entende-se larga escala pela gerao de uma infinidade de dados. o caso dos trabalhos com genmica (sequenciamento completo de um genoma), trascriptmica (definio do conjunto de RNAs produzidos) e protemica (definio do conjunto de protenas produzidas). So dados que permitem explorar o cdigo gentico (DNA), o seu potencial de expresso gnica

(RNA), os seus produtos proteicos (polipeptdeos) e as interaes e mecanismos moleculares do metabolismo de cada organismo. As tecnologias existentes permitem sequenciar genomas inteiros e compar-los (genmica comparativa), elucidando principalmente a histria evolutiva dos seres vivos. Pode-se estudar micamente as fases do desenvolvimento de um organismo, as caractersticas genticas comuns e exclusivas de uma espcie, tecidos slidos (muscular, sseo etc.) ou fluidos (sangue, linfa etc.). Por exemplo, possvel conhecer o transcriptoma de um tecido tumoral e comparar com o transcriptoma de um tecido sadio. A manipulao gentica, como a produo de plantas e animais transgnicos, o silenciamento gnico e a reprogramao gentica de clulas (fazer uma clula diferenciada retornar ao estado indiferenciado) so campos potencialmente aplicados e promissores para as reas de sade, economia, agricultura, pecuria, indstria baseada em produtos biotecnolgicos e meio ambiente na manuteno de acervo gentico de espcies em extino. O objetivo deste texto mostrar algumas das inmeras abordagens e pesquisas em Gentica, publicadas nos ltimos trs anos, as quais podem servir de exemplos a serem explorados e discutidos em sala de aula. curiosidades - Pesquisadores egpcios esto mudando o contar da Histria por meio de testes genticos (Hawass et al., 2010). Eles colheram material de 10 mmias, identificadas como pertencentes famlia de Tutancmon e, tambm, dos restos mortais do prprio fara. Os resultados do estudo envolvem anlises de DNA, tomografias, provas arqueolgicas e registros histricos. Com base em anlise de microssatlites, regies repetitivas do DNA usadas em testes de paternidade, duas das mmias foram consideradas como sendo os pais do fara e, muito provavelmente, Tutancmon foi gerado num ato incestuoso. Os relatos histricos e os resultados genticos corroboram que a cosanguinidade e o acmulo de malformaes

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nessa famlia eram comuns. A doena de Khler II, semelhante artrite, foi diagnosticada em Tutancmon. O mais surpreendente foi a identificao de genes do protozorio Plasmodium falciparum, o agente causador da malria, no fara e em mais quatro mmias. Os autores acreditam que a malria e as complicaes sseas decorrentes de uma fratura explicam melhor a morte do fara, questionando outras causas at ento debatidas, como envenenamento ou atropelamento. - O debate sobre a origem humana est sempre em evidncia. H certo consenso de que a frica o bero do homem moderno, tendo surgido h aproximadamente 200 mil anos. Cientistas americanos, europeus e africanos genotiparam mais de 5 mil indivduos africanos e no africanos, com uso de 1327 marcadores moleculares para regies de microssatlites, inseres/delees ou polimorfismos de base nica (Tishkoff et al., 2009). Os dados buscaram mapear, com maior preciso, o local de origem e migrao da espcie humana moderna. Os cientistas afirmam que, muito provavelmente, esse local a regio litornea de fronteira entre a Angola e a Nambia. - Na mesma linha da evoluo humana, foi mostrada, recentemente, a ocorrncia de fluxo gnico entre o homem moderno e os Neandertais (extintos h 30 mil anos, aproximadamente). O contato sexual entre as duas espcies teria ocorrido entre 50 a 80 mil anos atrs (Green et al., 2010). Um dos principais autores do trabalho, o pesquisador Svante Pbo, sempre negou a hiptese de que esse cruzamento tivesse existido. Porm, os resultados mostram que partes do DNA de um Neandertal constituem at 4% do genoma do homem moderno. Assim como no trabalho sobre o fara Tutancmon, os pesquisadores encontraram dificuldades para sequenciar o genoma de um Neandertal, isso porque esses genomas de indivduos extintos no se encontram bem preservados e a taxa de contaminao bacteriana muito alta. Estima-se que mais de 95% do DNA extrado de ossos so pertencentes a bactrias, o que dificultam as anlises. - Muito se questiona sobre a relao do DNA com algumas caractersticas humanas. Os cientistas, que por sua vez so movidos pela curiosidade e busca pelo conhecimento, tentam desvendar essas incgnitas. Recentemente foi caracterizado um gene que pode estar ligado ao crescimento de cabelo (Shimomura et al., 2010). Esse gene, chamado de APCDD1 (do ingls, adenomatosis polyposis down-regulated 1) est localizado no brao curto do cromossomo 18 humano e codifica uma glicoprotena presente em abundncia na membrana plasmtica das clulas que formam os folculos pilosos. Os

cientistas descobriram uma mutao que impede a ocorrncia de modificaes qumicas na protena, necessria para ela seja transportada para a membrana. Num contexto mais amplo, essa alterao gentica acarreta uma diminuio do folculo piloso e est relacionada com a queda de cabelos. Essa mutao est presente em indivduos com hipotricose, um tipo raro de calvcie com herana autossmica. Experimentos adicionais mostraram que APCDD1 interage com a via de sinalizao Wnt, uma rede de protenas conservadas entre vertebrados e invertebrados, com papel importante na comunicao entre clulas, especialmente durante a embriognese. a primeira vez que essa via de sinalizao foi descrita como partcipe no crescimento de cabelos em humanos. A ocorrncia da calvcie geneticamente complexa, no podendo ser explicar apenas por uma mutao nesse gene. Mas, certamente, tal descoberta uma contribuio s informaes j existentes, abrindo novos caminhos para o desenvolvimento de tratamentos. Medicina/Sade - O mosquito Aedes aegypti transmissor do vrus da dengue. A doena transmitida somente atravs da picada da fmea. A Organizao Mundial da Sade estima que 100 milhes de pessoas no mundo so infectadas anualmente, e cerca de 20 mil morrem em consequncia da doena. No h vacinas ou tratamentos especficos at o momento. Na tentativa de se controlar a dengue, cientistas de Oxford (Inglaterra) e Irvine (EUA) criaram mosquitos machos geneticamente modificados (Fu et al., 2010). A alterao foi feita no gene importante para a atividade muscular e voo, chamado actina 4. A alterao pouco penetrante nos machos, que so capazes de voar e copular com fmeas selvagens. Desse cruzamento gerada uma prole totalmente mutante para o gene de interesse, na qual os machos so pouco ou nada afetados, mas as fmeas so muito afetadas. Elas apresentam capacidade reduzida de sair da gua aps a emergncia sendo, portanto, mais vulnerveis predao. Quando saem da gua, so incapazes de voar adequadamente, impossibilitando o contato com humanos. Existem questes ticas e de segurana relacionadas liberao de animais transgnicos na natureza. No se pode negar, no entanto, que os resultados apontam para alternativas no combate efetivo da dengue. Metagenmica - Com o progresso tecnolgico dos mtodos de sequenciamento, tornou-se possvel a anlise simultnea dos genomas de todas as espcies de microorganismos que compartilham um mesmo habitat. Esse emergente campo do conhecimento chamado de Metagenmica

ou Ecogenmica, e j existem pesquisas com amostras de gua doce e de oceanos, solos e microbiota de fsseis. Alm de gerar informaes biolgicas em larga escala, e contribuir com o conhecimento cientfico, os dados podem ser aplicados, como, por exemplo, para a biorremediao de solos contaminados e para a descoberta de molculas (especialmente enzimas) de interesse industrial e farmacutico. - Um consrcio de laboratrios europeus dedicouse a compreender o impacto de micrbios que residem no intestino humano, dada a importncia desses seres sobre nossa fisiologia e nutrio (Qin et al., 2010). Doenas intestinais e obesidade podem estar associadas a alteraes dessa microbiota. Os cientistas usaram amostras fecais de 124 indivduos europeus, entre sadios ou pacientes com doenas crnicas inflamatrias intestinais, diabetes ou obesidade. Foram caracterizados mais de 3 milhes de genes, sendo 99% desses pertencentes a bactrias. Estimaram que um indivduo pode abrigar em seu trato intestinal no mnimo 160 espcies, de um conjunto de cerca de 1200, observada na totalidade das amostras analisadas. Muitos desses genes conferem a capacidade das bactrias sobreviverem e prosperarem em nossos intestinos. Outros genes esto associados com a captao de energia dos alimentos. As bactrias intestinais utilizam principalmente a fermentao para produo de energia a partir da converso de acares (pectina, manose, frutose, sacarose, celulose) e cidos graxos (gordura animal e vegetal). A partir de nossa dieta, as bactrias sintetizam, por exemplo, acetato, importante para a fisiologia de nossos msculos, corao e clulas nervosas. Os dados refletem a dependncia humana desse metagenoma bacteriano para nosso bem-estar. Silenciamento de genes - Atualmente os geneticistas so capazes de desativar um gene, utilizando a tcnica de Interferncia por RNA (do ingls RNA interference, e sigla RNAi). O avano se deve ao trabalho liderado por Andrew Fire e Craig Mello, publicado na revista Nature em 1998, que lhes rendeu o Prmio Nobel de Fisiologia e Medicina, em 2006. A tcnica baseia-se no uso de molculas de RNA de fita dupla, em que uma das fitas possui complementaridade sequncia do RNA mensageiro (alvo) que se deseja silenciar. Essas molculas so geralmente introduzidas nos organismos por injeo ou pela alimentao. Quando a molcula de RNAi encontra seu alvo no citoplasma, ativa-se uma maquinaria da prpria clula hospedeira capaz de impedir a traduo do RNA mensageiro e, consequentemente, no se produzir uma determinada protena. A tcnica viabiliza a descoberta da

funo de um gene, pois, quando se impede sua expresso, as consequncias so observadas nas alteraes do fentipo desses mutantes. - Em abelhas, por exemplo, o silenciamento de um gene chamado vitelogenina, em operrias adultas, capaz de mudar o comportamento, resultando num envelhecimento precoce da abelha. Ocorre que at cerca de 20 dias de vida adulta, uma operria desenvolve tarefas apenas no interior de suas colnias. A partir de ento, mudam naturalmente seu comportamento, passando a cumprir atividades fora da colnia (forrageamento), como a busca por plen, nctar, gua e resinas e, indiretamente, promovem a polinizao. Pesquisadores brasileiros injetaram molculas de RNA de fita dupla em operrias recm-nascidas. As abelhas que receberam essas molculas mudaram de comportamento antes de 10 dias, portanto, forrageando antes do previsto (Marco Antonio et al., 2008). - Na prtica, pesquisas mdicas exploram o potencial teraputico da tcnica, por exemplo, no combate ao cncer, AIDS, hepatite e mal de Alzheimer. Os dados at o momento referentes s aplicaes na medicina so apenas preliminares ou experimentais, mas apontam para um futuro promissor. - No campo da produo alimentar, pesquisadores do Texas (EUA) apresentaram dados de experimentos in vitro, mostrando o silenciamento do gene miostatina em cultura de clulas de caprinos (Long et al., 2010). A expresso natural da miostatina impede o crescimento exagerado de msculos. Com base nesse experimento, os autores do trabalho querem agora silenciar artificialmente esse gene in vivo, buscando um efeito contrrio, ou seja, o ganho de massa muscular, que geraria lucros dado o aumento da produo de carne. clulas-tronco - As clulas-tronco tm sido um dos grandes alvos cientficos nos ltimos cinco anos. Muita esperana de cura de doenas e tambm debates ticos esto relacionados com o seu potencial teraputico e ao uso de tecidos embrionrios para pesquisas, respectivamente. So clulas totipotentes, isto , totalmente indiferenciadas e que so capazes de se diferenciar em qualquer tecido. Assim, podem, potencialmente, substituir danos em rgos e serem usadas em transplantes. Tambm criam perspectivas para o tratamento de doenas neurodegerenrativas, cardiovasculares, diabetes, leucemias, entre outras. - De tantos exemplos, um deles, a induo da

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diferenciao de clulas-tronco em epiderme para o tratamento de queimaduras. Cientistas franceses conseguiram transformar, in vitro, clulas-tronco embrionrias humanas em clulas fenotipicamente similares a queratincitos (clulas diferenciadas do tecido epitelial). Fizeram enxerto desses potenciais queratincitos em camundongos e observaram, aps 12 semanas, a formao da estrutura de uma epiderme pluriestratificada (Guenou et al., 2009). - Uma alternativa ao uso de clulas embrionrias a desdiferenciao de clulas adultas. Ou seja, clulas em estgio avanado de diferenciao podem ser reprogramadas geneticamente, retornando a estgios parcialmente indiferenciados ou tambm chamados de pluripotentes. Essa possibilidade possvel graas pesquisa liderada pelo cientista Shinya Yamanaka, da Universidade de Quioto (Japo). Em 2006, Yamanaka e equipe descobriram um coquetel de molculas (fatores de transcrio) capaz de induzir a pluripotncia em clulas diferenciadas. - Baseando-se no princpio e tcnica de Yamanaka, um grupo de pesquisadores chineses gerou camundongos a partir de clulas pluripotentes induzidas (Zhao et al., 2009). Para tal, induziram pluripotncia em fibroblastos de camundongos. Em seguida, geraram embries tetraplides (4N), na fase de blastocisto. Esses blastocistos servem como hospedeiros de clulas pluripotentes, criando um ambiente biolgico propcio e receptivo para a sobrevivncia das clulas pluripotentes. No entanto, os blastocistos tetraplides no contribuem genomicamente para o desenvolvimento do organismo. Em outras palavras, as informaes genticas para gerar os camundongos so exclusivamente oriundas do DNA contido do ncleo das clulas pluripotentes. Aps injetar as clulas pluripotentes em embrio 4N, esses foram introduzidos no tero de uma fmea adulta, para gestao. Os pesquisadores obtiveram 27 camundongos recm-nascidos que atingiram a fase adulta, mostraram-se frteis, cruzaram e tiveram prole vivel. biologia Sinttica - A Biologia Sinttica emerge como um campo cientfico em que o limite a imaginao humana. Acaba de ser criada a primeira bactria com genoma totalmente artificial. O pesquisador americano James Craig Venter e sua equipe trabalharam mais de uma dcada para conseguir tal feito. Eles sintetizaram quimicamente o genoma da bactria Mycoplama mycoides, que possui mais de 1 milho de pares de bases. Para garantir a funcionalidade do genoma sinttico, introduziram-no em outra bactria,

chamada Mycoplasma capricolum, mas antes retiraram cromossomo da bactria hospedeira. O genoma sinttico foi capaz de controlar as funes biolgicas para a correta replicao e crescimento da M. capricolum. Como esperado, a morfologia (fentipo externo) das colnias bacterianas resultantes apresentou caractersticas de M. mycoides, o que prova o sucesso do experimento (Gibson et al., 2010). Referncias Bibliogrficas
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