Nombre alumno: Nstor Herrera Fecha: Martes 18 de diciembre Asignatura: Parasitologa clnica.

Docente encargado: Nancy Rivera

ndice

Introduccion_______________________________________________________________ 3 Objetivos__________________________________________________________________4 Desarrollo del practico_______________________________________________________5 Etapa preanalitica___________________________________________________________5 Etapa analtica______________________________________________________________7 Etapa postanalitica___________________________________________________________8 Conclusiones________________________________________________________________9 Conclusin general__________________________________________________________10 Bibliografia_________________________________________________________________1 1

Introduccin. Las enfermedades causadas por amebas de vida libre en humanos han sido reconocidas por ms de 35 aos, cuando Malcolm Fowler y Rodney F. Carter reportaron los primeros cuatro casos humanos de meningoencefalitis producidas por estos microorganismos. Sin embargo, son identificadas cada vez con ms frecuencia, no slo como causantes de enfermedad en inmunosuprimidos, sino tambin en huspedes sanos, por lo que podran considerarse entre las llamadas enfermedades emergentes, y por lo tanto, son de mucho inters, no slo para el mdico generalista, sino tambin para el especialista, especialmente para el otorrinolaringlogo. El siguiente prctico tiene como meta poder interiorizar en los alumnos que estos protozoos conocidos como amebas de vida libre pueden vivir en ambientes ubicuos tales como lagos, lagunas y riachuelos. Para evidenciar esto prcticamente se tomaran muestras de la laguna de los patos en la Universidad de concepcin. Tambin se desarrollara el anlisis y cultivo de dichas muestras en el laboratorio para comprobar la presencia de amebas.

Objetivos Principales Desarrollar y potenciar habilidades y destrezas en el uso de implementos y equipos de uso comn en el laboratorio. Conocer mtodos de diagnostico de amebas de vida libre en el laboratorio. Objetivos secundarios Tener nocin del impacto clnico de amebas de vida libre. Conocer la prevalencia de infecciones por amebas de vida libre. Compartir con compaeros y docentes un momento de esparcimiento y aprendizaje durante la toma de muestra en la salida a terreno.

Desarrollo del prctico.

Etapa pre analtica.

1.- Salida a terreno. Entrega de frascos para toma de muestras de agua para bsqueda de amebas de vida libre: Los alumnos debern recolectar muestras segn instrucciones, volver al laboratorio y dejar sedimentando las muestras toda la noche. De distintos sectores de la laguna se recolectan cinco recipientes de 200 ml de agua, de igual nmero de sectores de la periferia y de la parte central de la fuente; obtenidos en el transcurso de la maana, tanto de la superficie como del fondo de cada una de las fuentes de agua seleccionadas. Se utilizan cucharones de metal y frascos de vidrio o similar, estriles, que se sumergen en el agua hasta llenarse por completo; al momento de la recoleccin se registra el pH y la temperatura. La manipulacin del material se realiza con tcnica asptica en todo momento. Las muestras se sedimentan por 24 horas a temperatura ambiente. Eliminando el sobrenadante y se procede a sembrar 1 mL del sedimento mediante dispersin sobre dos placas petri.

La muestra para anlisis fue obtenida del sector en L de la laguna de los patos en la Universidad de Concepcin; utilizando un peachimetro en tira se registro un pH de 7.

2.- Preparacin de los reactivos para el prctico.

Solucin PAGES NaCl2 ------------------------------------------------------- 0,12 g MgS04------------------------------------------------------- 0,004 CaCl2 x 2H20----------------------------------------------- 0,004 g Na2HPO4---------------------------------------------------- 0,142 g KH2PO4------------------------------------------------------ 0,136 g H20 desionizada------------------------------------------- 1000 ml

Agar no nutritivo. Solucin PAGES ------------------------------------------- 1000 ml Agar-Agar---------------------------------------------------- 15 g Disolver completamente 15 g de agar-agar en la solucin PAGES. Autoclavar a 121C por 15 minutos. Enfriar a 50C y vaciar en forma asptica con mechero encendido en placas de Petri de 10 x 10 cm. Almacenar a 4C hasta por tres meses. Procesamiento de la muestra: Se retiran las placas con agar del refrigerador y se dejan a 37C por 30 minutos.

 Al tubo de cultivo de Escherichia coli se le agrega 0,5 ml de solucin PAGES y se realiza una emulsin. Se cubre la superficie del agar con una pelcula de la emulsin anteriormente preparada. Se re suspende en la solucin PAGES la muestra recolectada. Se centrifuga a 1000 rpm por 10 minutos. Se siembran 2 a 3 gotitas del sedimento al centro de la placa y se incuba a 37C

Etapa analtica.

Lectura: Se revisa la placa diariamente al microscopio con aumento de Para la primera etapa del practico, se revisaron Placas de coleccin, que 4x o en lupa. corresponden a placas con cultivos positivos de diferentes lagunas de concepcin. Se describe a continuacin grficamente algunos planos que fueron observados.

Fuente:http://www.google.cl/imgres? q=naegleria+fowleri&start=95&um=1&hl=es&safe=off&sa=N&tbo=d&biw=1152&bih=642&tbm=isch&tbni d=c_2ApdWfzMTrAM:&imgrefurl=http://www.cdc.gov i:

Con aumento de 40x, se observan organismos fijados translucidos con morfologa amorfa, semejantes a sombras. Estas estructuras se denominan trofozoitos de amebas. En la segunda etapa del prctico, fueron revisadas las placas que los alumnos Con aumento de 40x, se observan estructuras ms condensadas y pequeas sembraron en el laboratorio anterior, bajo la misma metodologa descrita que las anteriores, algunos presentan morfologa circular y otros anteriormente. Estas placas tuvieron un periodo de incubacin de una semana. caracterstica forma de hexgono. Se definen experiencia. Se adjuntan a continuacin imgenes de dicha como quistes de amebas.

Con un aumento de 40x, se observan abundantes estructuras condensadas, de formas regulares y caractersticamente hexagonales, que podran corresponder a formas qusticas de Balamuthia mandrillaris Examinando detenidamente otros planos tambin se detecta la presencia de estructuras ameboidales con contornos estrellados, que podran corresponder a las fases trofozoitica del mismo organismo. Etapa post analtica.

Los cultivos ya analizados fueron sellados con papel film y rotulados correspondientemente para as asegurar su ptima conservacin para futuras experiencias de la misma ndole

Conclusiones. Las amebas d vida libre son organismos unicelulares que son ubicuos y pueden se encontrados en ambientes comunes en la naturaleza como lagos y lagunas. En relacin a la epidemiologia, las amebas de vida libre encontradas en el laboratorio presentaban muchas similitudes entre ellas y no hubieron hallazgos fuera de lo comn en el laboratorio El cultivo de amebas de amebas de vida libre difiere con el cultivo bacteriano en el medio en que estas crecen, necesitando las bacterias agares nutritivos, mientras que las amebas solo necesitan cultivarse con una cepa bacteriana en un agar no nutritivo. Debido a la dificultad para el diagnostico, se tiende a no asegurar la especie de ameba encontrada en los anlisis. Para llegar a este diagnostico, son necesarias tcnicas de biologa molecular. En los cultivos de amebas de vida libre es posible encontrar tanto quistes como trofozoitos de las mismas.

Conclusin El estudio en laboratorio de amebas de vida libre difiere de lo anteriormente visto en el estudio de otros microorganismos. Primeramente se tomaron muestras de agua en la laguna de los patos en la Universidad de Concepcin habiendo medido idealmente el pH y la temperatura del entorno. Con estos registros se dispone a ir al laboratorio para el cultivo de las mismas. Se contaba con material de aos anteriores del mismo practico que orient en la forma de conocer como son los cultivos positivos para luego poder evaluar de una forma ms certera los cultivos de las muestras tomadas. Las amebas de vida libre son protozoos que no son exigentes en su desarrollo, en el sentido que no necesitan de condiciones nutricionales del medio especiales para poder crecer; Solo fue suministrado una emulsin de colonias de Escheriachia coli para luego ser incubadas. Los resultados de estos cultivos fueron satisfactoriamente positivos, puesto que lo que se observo fue homologable a lo descrito anteriormente en las cepas de coleccin. En muchas placas se evidencio la presencia tanto de quistes como trofozoitos de amebas de vida libre. El diagnostico certero de la especie involucrada es difcil de alcanzar con mtodos tradicionales; es por eso que para llegar mas all en este propsito, son necesarias tcnicas de biologa molecular, tales como PCR o Western Blot.

Bibliografa.

http://caibco.ucv.ve/caibco/vitae/VitaeOnce/Articulos/Infectologia/Ameba s/ArchivosHTML/Infectologia.pdf http://www.scielo.cl/pdf/rci/v23n3/art02.pdf http://www.slideshare.net/trecemicro/amibas-de-vida-libre