CICLO DE LOS CIDOS TRICARBOXLICOS CICLO DEL CIDO CTRICO

Piruvato Deshidrogenasa
La conexin entre la llamada fase anaerbica de la gluclisis, en donde se metaboliza la glucosa para convertirla en 2 molculas de cido pirvico, con la fase aerbica de la gluclisis, que llevar la degradacin de la glucosa hasta CO2 y H2O en el Ciclo de Krebs, consiste en la descarboxilacin oxidativa del piruvato a Acetil-CoA. Esta transformacin es catalizada por un complejo multienzimtico llamado Piruvato Deshidrogenasa.

Piruvato Deshidrogenasa
La conversin del piruvato a Acetil-CoA por la accin

de la Piruvato Deshidrogenasa es un punto crtico del metabolismo, particularmente en el hgado, puesto que disminuye la posibilidad de que el piruvato se reconvierta en glucosa o en cido lctico. La conversin a Acetil-CoA compromete al piruvato a entrar al Ciclo de Krebs, donde puede ser utilizado como sustrato para la fosforilacin oxidativa, o puede ser convertido a citrato para ser exportado al citosol y servir como sustrato para la biosntesis de cidos grasos e isoprenoides.

Piruvato Deshidrogenasa
La descarboxilacin oxidativa del piruvato en los organismos anaerbicos requiere la utilizacin de un receptor de electrones diferente al NAD+, el cual es frecuentemente una protena ferro sulfurada. La conversin es catalizada por una enzima dependiente de tiamina (vitamina B1) que tambien produce la acilacin de la Coenzima-A. Los equivalentes reductores son eliminados por la produccin de H2 por la actividad de una hidrogenasa.

Piruvato
Piruvato deshidrogenasa

Acetil-CoA Citrato
Citrato Sintetasa

Oxaloacetato

H 2O

PIRUVATO DESHIDROGENASA

FORMACIN DE ACETIL-COENZIMA A

PIRUVATO DESHIDROGENASA
PIRUVATO

UNA REACCIN MUY FCIL DE PONER EN EL PAPEL. PERO MUY DIFCIL DE LLEVAR A CABO POR LA COMPLEJIDAD DEL SISTEMA ENZIMTICO NECESARIO PARA QUE SE REALICE

Acetil-CoA

Es un complejo formado por tres enzimas que transforma el piruvato resultante de la gluclisis, en Acetil-CoA por medio de una reaccin de descarboxilacin oxidativa. De esta manera enlaza la Va de Embden-Meyerhof con el Ciclo de Krebs.

Piruvato Deshidrogenasa
La Piruvato deshidrogenasa es un sistema complejo formado

por 60 unidades en los procariotas, 102 en los eucariotas, organizadas en 3 unidades enzimticas funcionales

Este complejo multienzimtico est estructural y

funcionalmente relacionado con otros dos procesos de gran importancia para el metabolismo celular la cetoglutrico deshidrogenasa y la alfa-cetocido deshidrogenasa responsable de la degradacin de algunos amino cidos. de las cuales requiere un conjunto de cofactores especficos:
Piruvato deshidrogenasa {Tiamina Pirofosfato} Dihidrolipoil Transacetilasa {Lipoil-CoA} Dihidrolipoil Deshidrogenasa {FAD y NAD+}

El complejo est formado por las siguientes enzimas. Cada una

1. 2. 3.

Es el paso limitante de toda la reaccin de conversin del pirvico en Acetil-CoA. Requiere Tiamina (Vitamina B1) pirofosfato como cofactor. Por esta razn la tiamina fue llamada en un tiempo cocarboxilasa. La enzima est formada por 24 subunidades en los procariotas y por 30 subunidades en los eucariotas. El mecanismo central de la actividad enzimtica es un ataque nucleoflico sobre el carbono 2 (ceto) del pirvico, con la produccin de un hemi-tioacetal que libera el CO2 Al final de la reaccin se libera el CO2 resultante de la descarboxilacin del piruvato y el derivado acilado de la tiamina pirofosfato.

 Una

reaccin de transacilacin transfiere el grupo acetil del derivado acetil de la Tiamina pirofosfato y lo transfiere a la Coenzima A. Esto produce Acetil-CoA, que es liberada al interior de la mitocondria para entrar en el ciclo de Krebs y convierte la Lipoil-CoA en la forma reducida del cido Lipoico. La Dihidrolipoil Transacetilasa es la enzima mas compleja del grupo y esta formada por 24 subunidades en los procariotas y por 60 subunidades en los eucariotas.

E3 Dihidrolipoil Deshidrogenasa
Para que la reaccin contine se requiere reformar la

Lipoil-CoA, para lo cual el cido Lipoico debe ser oxidado nuevamente. La forma reducida del cido Lipoico es oxidada mediante un reaccin que requiere FAD como cofactor, el cual ser convertido a FADH2. Enseguida la forma reducida del FAD, FADH2, es reoxidada por una reaccin ligada a NAD+, producindose NADH. La dihidrolipoil deshidrogenasa es la parte ms sencilla del complejo enzimtico y est formada por 12 subunidades tanto en procariotas como en eucariotas

Por anaplerosis.- La mayor parte del piruvato se oxida a acetil-CoA, pero una cierta cantidad se convierte en oxalacetato (proceso anaplertico), permitiendo que la acetil-CoA se combine con este ltimo para que el ciclo de Krebs funcione adecuadamente. Por inhibicin competitiva.- Tanto la acetil-CoA como el NADH son inhibidores competitivos; de esta manera, cuando el aporte de acetil-CoA es suficiente a expensas de los cidos grasos, la enzima es inhibida, evitando as el desperdicio innecesario de piruvato derivado de la glucosa.

REGULACIN 2
Por el proceso de fosforilacin defosforilacin.- Existen dos

formas interconvertibles de la piruvato deshidrogenasa: una, fosforilada, o forma inactiva, la otra desfosforilada, es la forma activa. La intervonversin es catalizada por dos enzimas: la piruvato deshidrogenasa cinasa, que requiere ATP, y la piruvato deshidrogenasa fosfatasa. Ambas enzimas forman parte del complejo, asociadas a la dihidrolipoil transacetilasa. La principal funcin reguladora es ejercida por la cinasa que al fosforilar la piruvato deshidrogenasa la convierte en su forma inactiva; esto ocurre cuando hay exceso de ATP en la clula. Cabe destacar el papel estimulador que ejercen sobre la cinasa la acetil-CoA y el NADH, y el papel inhibidor del piruvato y el ADP.

REGULACIN 3
Por actividad endcrina.- La actividad del

complejo piruvato deshidrogenasa tambin es regulada por algunas hormonas. De entre ellas cabe destacar la insulina que incrementa la forma activa (desfosforilada) en tejido adiposo; Las catecolaminas como la adrenalina pueden activar la piruvato deshidrogenasa en el tejido cardiaco.

Piruvato deshidrogenasa
Localizacin
En las clulas eucariotas la descarboxilacin del piruvato para producir Acetil-CoA, se realiza dentro de las mitocondrias. Esto requiere que el piruvato sea transportado a travs de la membrana mitocondrial La difusin pasiva del piruvato al interior de la mitocondria es imposible porque el piruvato lleva una carga negativa. En consecuencia se sabe que el transporte del piruvato se hace por medio de una protena transportadora y requiere el gasto de energa.

Piruvato deshidrogenasa
Localizacin
Una vez dentro de la mitocondria el piruvato es

rpidamente descarboxilado y convertido en AcetilCoA. Esta reaccin es irreversible y atrapa la AcetilCoA en el interior de la mitocondria. La Acetil-CoA puede ser transportada fuera de la matriz mitocondrial utilizando el llamado desvo (Shuttle) del citrato El CO2 es pequeo y apolar y difunde fcilmente fuera de la mitocondria. En los procariotas, que no tienen mitocondrias, esta descarboxilacin se realiza en el citosol, o no se realiza.

Para recordar la secuencia en el Ciclo de Krebs, recordemos que est formado por tres fases: a) Componentes de 6 tomos de carbono (en verde) b) Componentes de 5 tomos de carbono (en purpura) c) Componentes de 4 tomos de carbono (en azul)

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.

Citrato Sintetasa Aconitasa Isocitrato Deshidrogenasa -cetoglutarato Deshidrogenasa Succinil-CoA Sintetasa Succinato Deshidrogenasa Fumarasa Malico Deshidrogenasa

 Es una serie de reacciones enzimticas cuya actividad es de

importancia central para todas las clulas vivas que utilizan oxgeno durante el proceso de respiracin celular. Constituye una va Anfiblica, es decir: contribuye tanto al catabolismo, como al anabolismo celular. Culmina la utilizacin aerbica de la glucosa convirtindola finalmente en CO2 y H2O, utilizando oxgeno como parte de la respiracin celular. Proporciona muchos precursores para producir algunas molculas fundamentales para la clula, entre ellas el cetoglutarato y el oxalacetato precursores de algunos aminocidos. El ciclo de Krebs ocurre en las mitocondrias de las clulas eucariotas y en el citoplasma de las clulas procariotas. Los componentes y reacciones del ciclo del cido ctrico fueron establecidos por Albert Szent-Gyrgyi y Hans Krebs.

LOCALIZACIN
Los componentes del ciclo se encuentran en las mitocondrias. Sin embargo algunas enzimas y metabolitos tambin se encuentran en el citosol (extramitocondrial). Dentro de las mitocondrias, las enzimas se localizan en la membrana interna y en la matriz mitocondrial, y prximas al sitio donde radican las de la cadena respiratoria. Esta proximidad facilita el adecuado acoplamiento de ambos procesos.

El ciclo de Krebs como va anablica

 En los organismos aerbicos, el ciclo de Krebs es el anillo de

conjuncin de las rutas metablicas responsables del catabolismo y degradacin de los carbohidratos, las grasas y las protenas convirtindolos finalmente en CO2 y H2O. El Ciclo de Krebs, ligado al proceso de fosforilacin oxidativa, constituye el proceso donde se produce la mayor cantidad de energa que finalmente puede ocupar la clula para el resto de sus funciones y metabolismo. La acetil-CoA constituye el principal sustrato del ciclo. Su inicio consiste en la condensacin de acetil-CoA con oxalacetato, generndose cido ctrico. De aqu uno de los nombres que ha recibido esta va enzimtica.

Glorieta Bioqumica"
Una va metablica es anfiblica cuando puede

funcionar tanto en sentido catablico como en sentido anablico. Desde este punto de vista nos parece muy adecuado el considerar al ciclo de Krebs como una Glorieta Bioqumica", ya que presenta diversos puntos de entrada y de salida que facilitan el que el material que llega, sea de fuentes hidrocarbonadas o de otras fuentes, pueda abandonarlo para formar grasa, sintetizar amino cidos o regenerar carbohidratos (gluconeognesis) para su almacenamiento o utilizacin en otras vas o en otros destinos.

CoA

Citrato Sintetasa
La reaccin inicial del Ciclo de Krebs, es la

condensacin de la acetil-CoA con oxalacetato (ltimo producto del ciclo) para producir el primero de los cidos tricarboxlicos que participan en el Ciclo y por los cuales lleva uno de sus nombres, Ciclo de los cidos tricarboxlicos (TCA). Esta reaccin de condensacin es catalizada por la enzima Citrato Sintetasa (tambin llamada enzima condensante de Ochoa). El citrato producido por la enzima, es capaz de inhibir competitivamente la actividad de la enzima. La reaccin supone la hidrlisis del enlace tioster de la acetil-CoA. Esta reaccin es sumamente exoergnica (G'=-31.4 kJ/mol), motivo por el cual este paso es irreversible.

Condensacin de la Acetil-CoA con Oxalacetato Se inicia el Ciclo de Krebs

Aconitasa
El citrato es convertido en isocitrato por medio de la

enzima aconitasa (aconitato hidratasa). La reaccin tiene lugar en dos pasos:

enzima) y rehidratacin hasta isocitrato

deshidratacin hasta cis-aconitato (el cual permanece unido a la

Las concentraciones (en condiciones estndar) de citrato

(91%), del intermediario cis-aconitato (3%) y de isocitrato (6%), conducen la reaccin hacia la produccin de isocitrato. Adems, el consumo de isocitrato y la produccin continua de citrato in vivo, por ley de accin de masas, hace que la reaccin est desplazada hacia la conversin citratoisocitrato. La aconitasa reacciona en forma asimtrica, actuando sobre la parte del citrato que deriva del oxalacetato.

Isocitrato Deshidrogenasa
El isocitrato es oxidado por deshidrogenacin, en una

reaccin catalizada por la enzima isocitrato deshidrogenasa. La enzima requiere NAD+ y Mg++. La reaccin se lleva a cabo en dos pasos:
1. 2.

Deshidrogenacin, en la que se forma oxalosuccinato que permanece unido a la enzima, y Descarboxilacin para formar el -cetoglutarato.

En esta reaccin irreversible se produce CO2 y el primer

NADH + H+ del ciclo. El citosol posee tambin una isocitrato deshidrogenasa pero esta isozima requiere NADP+ como coenzima, a diferencia de la enzima mitocondrial que participa en el ciclo de Krebs, la cual requiere NAD+.

El isocitrato es oxidado por deshidrogenacin, en una reaccin catalizada por la enzima

Isocitrato Deshidrogenasa.

La enzima requiere NAD+ y Mg++. Este ltimo facilita la

liberacin de CO2 La reaccin se lleva a cabo en dos pasos:

1. 2.

Deshidrogenacin, en la que se forma oxalosuccinato que permanece unido a la enzima, y Descarboxilacin para formar el -cetoglutarato.

-Cetoglutarato Deshidrogenasa
El ciclo prosigue mediante la actividad de la enzima

-cetoglutarato deshidrogenasa, la cual convierte el -cetoglutarato (o 2-oxo-glutarato) en succinil-CoA. La -cetoglutarato deshidrogenasa es un complejo multienzimtico, cuya accin es anloga a la piruvato deshidrogenasa y utiliza los mismos cofactores: pirofosfato de tiamina (TPP), cido lipoico, NAD+, FAD y coenzima A. La reaccin es prcticamente irreversible y en ella se forma el segundo CO2, que proviene del oxalacetato. Para que la acetil-CoA convierta en CO2 su radical acetato, el ciclo ha de dar dos vueltas.

-Cetoglutarato Deshidrogenasa
Succinil-CoA la enzima -cetoglutarato deshidrogenasa convierte el -cetoglutarato (o 2-oxoglutarato) en succinil-CoA.

La -cetoglutarato deshidrogenasa es un complejo

multienzimtico, cuya accin es anloga a la piruvato deshidrogenasa y utiliza los mismos cofactores: pirofosfato de tiamina (TPP), cido lipoico, NAD+, FAD y coenzima A. Esta enzima tambin es un complejo de 3 subunidades y el mecanismo de la reaccin se semejante

Succinil-CoA Sintetasa
El ciclo contina con la liberacin de la CoA y la conversin

de succinil CoA en succinato. La succinil CoA es un tioster de alta energa (su G de hidrlisis est en unos -33.5 kJ mol-1, parecido al del ATP que es de -30.5 kJ mol-1). En este punto del ciclo de Krebs se realiza una fosforilacin a nivel del sustrato, y puede generarse ATP. Sin embargo, la transferencia del enlace de alta energa no se hace directamente al ADP, sino que se realiza la fosforilacin de GDP (guanosina difosfato) que pasa a GTP (o de IDP, inosina difosfato, que pasa a ITP). Ambos nucletidos pueden ser utilizados para la formacin de ATP por accin de una enzima, la nuclesido difosfato cinasa o fosfocinasa.

Curiosamente la enzima que cataliza esta reaccin es ms conocida por su actividad en sentido inverso, por lo cual se llama succinil-CoA sintetasa, que por su actividad real, por la cual debe llevar el nombre de

succinato tiocinasa

GTP

Otras Enzimas
Una reaccin alternativa en tejidos extra-hepticos

es la transferencia de la CoA de la succinil-CoA al acetoacetato, para producir acetoacetil-CoA Esta reaccin, de gran importancia en algunos estados metablicos, permite la incorporacin de cuerpos cetnicos al ciclo de Krebs y es catalizada por la enzima succinil CoA transferasa (o tioforasa). En el hgado se puede producir la desacilacin directa de la succinil-CoA por la actividad de una succinil-CoA deacilasa, producindose succinato y, lo que es importante, aumentando los niveles de CoA libre.

Parte final del ciclo

La parte final del ciclo consiste en la reorganizacin

de molculas de cuatro tomos de carbono, hasta la regeneracin del oxalacetato. Para que esto sea posible, el grupo metilo presente en el succinato tiene que convertirse en un carbonilo. Como ocurre en otras rutas, por ejemplo en la beta oxidacin de los cidos grasos, tal conversin ocurre mediante tres pasos: una primera oxidacin, una hidratacin y una segunda oxidacin. Estos tres pasos, adems de regenerar oxalacetato, permiten la extraccin ulterior de energa mediante la formacin de FADH2 y NADH.

 Por accin de la succinato deshidrogenasa, el succinato es

deshidrogenado a fumarato, Esta enzima utiliza FAD como coenzima, el cual en estado reducido (FADH2) constituye una fuente directa de electrones para la cadena respiratoria a nivel de la coenzima Q. Esta es la nica enzima del ciclo integrada a la membrana mitocondrial interna, directamente ligada a la cadena respiratoria. Se renen as, anatmica y fisiolgicamente, el ciclo de Krebs el transporte de electrones y la fosforilacin oxidativa.

fumarato

FADH2 FAD

Succinato Deshidrogenasa
succinato

Mlico Deshidrogenasa
L-malato

H2O

Fumarasa

El fumarato presenta luego una serie de cambios para regenerar el oxalacetato, los cuales comprenden una hidratacin catalizada por la fumarasa (fumarato hidratasa) para formar L-malato, el cual luego se oxida o oxalacetato por medio de la deshidrogenasa mlica y el NAD+ como coenzima.

REGULACIN
La regulacin del ciclo de Krebs se realiza principalmente por

la disponibilidad de sustrato y por la retro-inhibicin por acumulacin de los productos del ciclo

El aumento en la concentracin de NADH, inhibe a la piruvato deshidrogenasa, a la isocitrato deshidrogenasa y a la citrato sintetasa La acetil-CoA inhibe a la piruvato deshidrogenasa. La succinil-CoA inhibe a la succinil-CoA sintetasa y a la citrato sintetasa Aunque los niveles de ATP son consistentemente conservados in vivo y no cambian ms del 10% entre el reposo absoluto y el ejercicio ms activo, in vitro, el ATP es un potente inhibidor alostrico de la citrato sintetasa y de la -cetoglutarato deshidrogenasa El Calcio tambin funciona como regulador. Activa tres de las deshidrogenasas que participan en el ciclo: la piruvato deshidrogenasa, la isocitrato deshidrogenasa y la -cetoglutarato deshidrogenasa y por lo tanto aumenta el flujo continuo a travs del ciclo. Recordemos adem<s que el citrato es un inhibidor de la fosfofructocinasa (la enzima que es paso limitante de la gluclisis) y acta eficientemente disminuyendo el aporte de sustrato inicial, piruvato, para el ciclo de Krebs

 La proximidad intracelular fsica y funcional

del ciclo del cido ctrico y la cadena respiratoria, determina que la actividad de uno dependa de la otra y viceversa. A su vez, ambas vas metablicas estn reguladas por las concentraciones relativas de ATP/ADP y NADH/NAD+.