1 PROCEDIMIENTO ESPECIFICO CIDO METATARTARICO Fecha:03/07/20 Cdigo: PE-TECRevisin: 0 06 ANAL 1.

OBJETO Determinar el cido metatartrico aadido al vino para evitar las precipitaciones tartricas. Adicin de cido metatartrico hasta un mximo de 200 mg/l, siempre que la cantidad total de cido tartrico presente en el vino no provoque un rechazo de la dosis diaria admisible de tartrato de 30 mg/kg de peso, y que no se produzca la formacin de cido DLtartrico en el vino tratado. ALCANCE El caso de vinos blancos y tintos, en particular aquellos susceptibles de contener restos de cido metatartrico. 2. DEFINICIONES No corresponde. 3. DOCUMENTACIN DE REFERENCIA No corresponde. 4. RESPONSABILIDADES 4.1 Del Responsable de Laboratorio: 5.1.1. Controlar y observar que se cumplan todas las normas de seguridad 5.1.2. Verificar datos obtenidos 4.2 Del Personal de Laboratorio 5.2.1. Cumplir con las normas de seguridad para el manejo de productos qumicos 5.2.2. Conocer todos los pasos de la preparacin y valoracin 5.2.3. Cumplir con todos los cuidados para su determinacin. 5. DESARROLLO 6. Principio. El cido metatartrico forma con el acetato de cadmio en un medio medianamente cido un precipitado insoluble; es el nico de todos Confeccion: A. Cangi
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2 PROCEDIMIENTO ESPECIFICO CIDO METATARTARICO Fecha:03/07/20 Cdigo: PE-TECRevisin: 0 06 ANAL los elementos presentes en el mosto y el vino que provoca este precipitado. El cido tartrico tambin precipita con acetato de cadmio, pero solo en presencia de un contenido de alcohol superior al 25% vol. El precipitado se redisuelve en agua, contrariamente el precipitado obtenido con el cido metatartrico. El precipitado cdmico de cido metatartrico se descompone por calentamiento con hidrxido de sodio y libera cido tartrico. Este ultimo forma con el metavanadato de amonio una colocacin anarajanda especifica. SEGURIDAD Este mtodo entraa el uso de diversas sustancias qumicas peligrosas y procedimientos que pueden ocasionar un aumento del riesgo para quien los aplica. En caso de duda, consultar siempre con el asesor de seguridad competente. Precauciones generales Se llevara en todo momento ropas protectoras, incluido guardapolvo abotonado, gafas y guantes de seguridad. Los analistas se conocern cualesquiera de los riesgos atribuibles a sustancias qumicas y reactivos. Se debern mantener cerca la hoja de seguridad de los productos utilizados para este uso. La exclusin de otros compuestos de esta lista no implica que sean seguros. Primeros auxilios. Toda herida debe notificarse, todos los accidentes e incidencias se notificaran APARATOS Instrumental de vidrio pipeta de 5 ml pipeta 1 ml pipeta 10 ml pipeta 20 ml vaso de precipitado 100 ml embudo de vidrio tubo de ensayo de 25 ml de capacidad tubo para centrifuga 50 ml Equipos Espectrofotmetro UV/VISIBLE Centrifuga para tubos 50 ml y 11.000 r.p.m. Revis: AC
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3 PROCEDIMIENTO ESPECIFICO CIDO METATARTARICO Fecha:03/07/20 Cdigo: PE-TECRevisin: 0 06 ANAL Balanza analtica

REACTIVOS

Los productos qumicos y disolventes son reactivos de calidad analtica, salvo declaracin en contrario. En todo el proceso se usa agua desionizada o equivalente. Productos qumicos Acetato de cadmio 5% ( 5 g en 99 ml de agua y 1 ml de cido actico puro). cido actico Hidrxido de sodio 1 M cido sulfrico 1 M actica de acetato de sodio 27% (478 g de acetato en 1 litro de agua Metavanadato de amonio: 10 g de metavanadato en 150 ml de hidrxido 1 M. Aada 200 ml de acetato de sodio al 27% y complete a 500 ml con agua. Etanol al 96% Agua desionizada PROCEDIMIENTO Centrifugue 50 ml de vino a 11.000 r.p.m. Tome 40 ml de e introdzcalo en otro tubo para centrfuga. Aada 5 ml de etanol Aada 5 ml de acetato de cadmio Mezcle y deje en reposo 10 minutos. Centrifugue durante 10 minutos a 11.000 r.p.m. Decante por inversin total del frasco (una vez) tire el sobrenadante.

, 7.

En presencia de cido metatartrico , se forma un precipitado laminar en el fondo del tubo. En ausencia de precipitado, la muestra se considerara exenta de cido metatartrico. De lo contrario o si se desea determinar con certeza la presencia de un ligero precipitado, proceda del modo siguiente: Lave una vez el precipitado con 10 ml de agua a chorro potente hacia el fondo del tubo para despegar el precipitado del fondo. Aada 2 ml de solucin de acetato de cadmio Centrifugue a 11.000 r.p.m. durante 10 minutos y tire el sobrenadante por inversin completa del tubo una vez. Revis: AC
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4 PROCEDIMIENTO ESPECIFICO CIDO METATARTARICO Fecha:03/07/20 Cdigo: PE-TECRevisin: 0 06 ANAL Tras aadir 1 ml de hidrxido de sodio 1M someta el tubo a durante 5 minutos en un bao de agua a 100 C. Deje enfriar y aada 1 ml de cido sulfrico 1 M y 1 ml de solucin de metavanadato de amonio. Espere 15 minutos. Centrifugue durante 10 minutos a 11.000 r.p.m. Vierta el sobrenadante en un cubeta de 1 ml y mida absorbancia a 530 nm, despus de haber hecho cero con agua. Abs E. Testigo se realiza en paralelo un testigo formado por el mismo vino que el analizado pero calentado previamente 2 minutos 30 segundos, mediante un microondas a potencia mxima o en un bao de agua a 100 C durante 5 minutos. AbsT. Calculo: AbsE Abs T > 0,050 Esto corresponde a mas de mg/l

CIDO TARTRICO y cido metatartrico

FUNDAMENTO DE LOS MTODOS Mtodo de referencia
El cido tartrico precipitado en forma de racemato de calcio, se determina gravimtricamente. Esta determinacin puede completarse con una determinacin volumtrica de comparacin. Las condiciones de precipitacin: pH, volumen total empleado, concentracin de los iones que precipitan, son tales que el racemato clcico precipita totalmente mientras que el D( ) tartrato de calcio queda en solucin. Cuando se haya aadido al vino cido metatartrico (lo que hace que la precipitacin del racemato de calcio sea incompleta), deber hidrolizarse previamente. 1.1. Mtodo usual El cido tartrico, aislado mediante una columna cambiadora de aniones, se determina por espectrofotometra en el eludo por la coloracin roja que da con el cido vandico. Este eludo contiene asimismo cidos lctico y mlico, que no interfieren.

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5 PROCEDIMIENTO ESPECIFICO CIDO METATARTARICO Fecha:03/07/20 Cdigo: PE-TECRevisin: 0 06 ANAL

1.1. MTODO DE REFERENCIA

1.1.Mtodo gravimtrico

1.1.1 Reactivos
Solucin de acetato clcico que contenga 10 g/l de calcio: Carbonato de calcio puro: (Ca CO3) 25 g cido actico (CH3COOH) (r20 = 1,05 g/ml)40 ml Agua c.s.p 1 litro

1.1.1.1. Racemato de calcio cristalizado: (CaC4O6H4 4H2O): En un vaso de precipitados de 400 ml introducir 20 ml de una solucin de cido L(+) tartrico de 5 g/l, 20 ml de una solucin de D(- ) tartrato amnico de 6,126 g/l y 6 ml de la solucin de acetato clcico de 10 g de calcio por litro (2.1.1.1).Dejar que precipite durante dos horas. Recoger el precipitado en un crisol filtrante de porosidad n 4, lavarlo tres veces con 30 ml de agua destilada. Secar en estufa a 70 C hasta lograr un peso constante. Con las cantidades de reactivos empleados, se obtienen aproximadamente 340 mg de racemato de calcio cristalizado, con 4 molculas de agua. Conservar en un frasco tapado. 1.1.1.2. Licor de precipitacin (pH: 4,75):
cido D( ) tartrico 122 mgSolucin de hidrxido de amonio 25 % (r20 = 0,97 g/ml) diluido al 25 % (v/v) 0,3 ml- Solucin de acetato de calcio de 10 g de calcio por litro 8,8 ml- Agua csp1 000 ml Disolver el cido D( ) tartrico y aadir el hidrxido amnico, llevar el volumen aproximadamente a 900 ml con agua; aadir 8,8 ml de solucin de acetato clcico (2.1.1.1), llevar hasta el litro y ajustar el pH a 4,75 con cido actico. Al ser el racemato clcico ligeramente soluble en este licor, es conveniente aadir 5 mg de racemato de calcio por litro, agitar durante 12 horas (una noche) y filtrar. -

1.2.1. Procedimiento 1.2.2. Vinos a los que no se ha aadido cido metatartrico

En un vaso de precipitados de 600 ml, echar 500 ml de licor de precipitacin y 10 ml de vino. Mezclar y ayudar la precipitacin frotando las paredes del vaso con la extremidad de una varilla de vidrio. Dejar precipitar durante 12 horas (una noche). Filtrar en el crisol filtrante de porosidad n 4 tarado y colocado sobre un kitasato, arrastrando el precipitado. Lavar el vaso donde se ha realizado la precipitacin con el filtrado y arrastrar las ltimas partculas de precipitado. Secar en estufa a 70 C hasta lograr un peso constante. Confeccion: A. Cangi
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6 PROCEDIMIENTO ESPECIFICO CIDO METATARTARICO Fecha:03/07/20 Cdigo: PE-TECRevisin: 0 06 ANAL Pesar: se denominar p al peso del racemato de calcio, CaC4O6H4 cristalizado con 4 molculas de agua.

1.2.3. Vinos a los que se ha aadido cido metatartrico

Cuando se trate de un vino al que se haya aadido cido metatartrico o se suponga que ha habido tal adicin, se proceder a la hidrlisis de este cido en las condiciones siguientes: En un erlenmeyer de 50 ml, echar 10 ml de vino y 0,4 ml de cido actico puro (CH3COOH, r20 = 1,05 g/ml). Cerrar el erlenmeyer con un tapn provisto de un escape y llevar a ebullicin durante 30 minutos. Una vez fro, pasar el lquido del erlenmeyer a un vaso de precipitados; enjuagar el erlenmeyer 2 veces con 5 ml de agua y continuar como se indica en el procedimiento anterior. El cido metatartrico se expresa como cido tartrico en el resultado de la determinacin.

1.2.4. Expresin de los resultados

Una molcula de racemato clcico corresponde a 1/2 molcula de cido (L+) tartrico del vino. La cantidad de cido tartrico por litro de vino ser: - 384,5 p, expresada en mili equivalentes, - 28,84 p, expresada en gramos de cido tartrico, - 36,15 p, expresada en gramos de tartrato cido de potasio. Se dar con un decimal. 2.2. Determinacin volumtrica de comparacin

Reactivos 2.2.1.1. cido clorhdrico (CIH) (r20 = 1,18 a 1,19 g/ml) diluido a 1/5 (v/v). 2.2.1.2. Solucin de EDTA, 0,05 M:- EDTA (sal di sdica bihidratada del cido etilendiaminotetractico (C10H14N2O8Na2 2H2O) 18,61 g
- Agua destilada c.s.p:1 000 ml

2.2.1.3.Solucin de hidrxido sdico al 40 % (m/v):

Hidrxido sdico (NaOH) 40 g Agua destilada c.s.p 100 ml

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2.2.1.4. Indicador complexomtrico del EDTA. 1 % (m/m):

cido calcon carbnico o cido 2-hidroxi-4-sulfo-1-naftilazo-3naftoico (C21H14N2O7S 3H2O) 1 g Sulfato sdico anhidro (Na2SO4)100 g

2.2.2. Procedimiento
Despus de pesado se vuelve a colocar el crisol con el precipitado de racemato de calcio en el matraz de vaco y se disuelve el precipitado en 10 ml de cido clorhdrico diluido (2.2.1.1). Lavar el crisol filtrante con 50 ml de agua destilada. Aadir 5 ml de hidrxido sdico al 40 % (2.2.1.3) y unos 30 mg del indicador (2.2.1.4). Valorar con EDTA 0,05 M (2.2.1.2). Se denominar n al nmero de mililitros empleados.

2.2.3. Expresin de resultados

La cantidad de cido tartrico/lt expresado en miliequivalentes= 5 n. El resultado se dar con 1 decimal. La cantidad de cido tartrico por litro de vino, expresado en gramos de cido trtrico es igual a: 0,375 n. El resultado se dar con 1 decimal. La cantidad de cido tartrico/ litro, expresado en gramos de tartrato cido de potasio = es igual a: 0,470 n. El resultado se dar con 1 decimal. MTODO USUAL

3.1. Reactivos 3.1.1. Para el tratamiento preliminar del vino 3.1.1.1. cido actico (CH3COOH, r20 = 1,05 g/ml) diluido al 30 % (v/v). 3.1.1.2. Intercambiador de aniones de fuerte basicidad (por ejemplo, intercambiador de aniones III de Merck de 20 a 50 mallas) en forma de acetato. Preparar una suspensin con el intercambiador (100 g aproximadamente) en 200 ml de cido actico diluido al 30 % (3.1.1.1).
Mantener en contacto durante 24 horas, como mnimo, antes de su utilizacin. Conservar el intercambiador en cido actico diluido al 30 % para posteriores determinaciones.

3.1.1.3. cido actico (CH3COOH, r20 = 1,05 g/ml) diluido al 0,5 % (v/v).
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8 PROCEDIMIENTO ESPECIFICO CIDO METATARTARICO Fecha:03/07/20 Cdigo: PE-TECRevisin: 0 06 ANAL

3.1.1.4. Solucin de sulfato sdico (Na2SO4) al 7,1 g/100 ml (0,5 M).

Disolver 71 g de sulfato sdico anhidro (Na2SO4) en agua destilada hasta alcanzar un volumen de 1 000 ml.3.1.2. Para la determinacin del cido tartrico

3.1.2.1. Solucin de acetato de sodio (NaCH3COO) al 27 % (m/v).

Disolver 270 g de acetato de sodio anhidro (NaCH3COO) en agua destilada hasta alcanzar un volumen de 1 000 ml.

3.1.2.2. Reactivo vandico

Disolver 10 g de metavanadato amnico (NH4VO3) en 150 ml de solucin de hidrxido sdico M (3.1.2.10). Pasar esta solucin a un matraz aforado de 500 ml y aadir 200 ml de solucin de acetato de sodio al 27 % (3.1.2.1). Enrasar a 500 ml con agua destilada. 3.1.2.3. Solucin de H2SO41M. 3.1.2.4. Solucin 0,5 M de H2SO4. 3.1.2.5. Solucin 0,05 M de H2SO4. 3.1.2.6. Solucin de cido perydico 0,05 M. En un matraz aforado de 1 000 ml, introducir 10,696 g de peryodato sdico (NaIO4), 50 ml de cido sulfrico 0,5 M (3.1.2.4) y aadir agua destilada hasta obtener 1 000 ml. 3.1.2.7. Solucin de glicerol al 10 % (m/v). En un matraz aforado de 100 ml poner 10 g de glicerol (C3H8O3) y aadir agua destilada hasta obtener 100 ml. 3.1.2.8. Solucin de sulfato sdico al 7,1 g p. 100 ml (vase 3.1.1.4). 3.1.2.9. Solucin de cido tartrico (C4H6O5) de 1 g/l. En un matraz aforado de 500 ml, poner 0,5 g de cido tartrico, 6,66 ml de solucin de hidrxido sdico M (3.1.2.10) y enrasar a 500 ml con la solucin de sulfato de sodio al 7,1 % (3.1.1.4). 3.1.2.10. Solucin de hidrxido sdico (NaOH) 1 M.3.2. Aparatos 3.2.1. Columna de vidrio de 300 mm de longitud, aproximadamente, y de 10 a 11 mm de dimetro interior, provista de una llave. 3.2.2. Espectrofotmetro que permita medir la absorbancia a una longitud de onda de 490 nm, con cubetas de 10 mm de recorrido ptico.

3.3.Procedimiento
3.3.1. Preparacin de la columna intercambiadora de iones Confeccion: A. Cangi
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9 PROCEDIMIENTO ESPECIFICO CIDO METATARTARICO Fecha:03/07/20 Cdigo: PE-TECRevisin: 0 06 ANAL Poner en la columna de vidrio un tapn de lana de vidrio por encima de la llave (3.2.1). Impregnar el tapn con agua destilada. Verter en la columna 10 ml de suspensin de inter cambiador de iones en fase de acetato (3.1.1.2). Dejar decantar. Colocar un tapn de lana de vidrio en la superficie del intercambiador depositado (para evitar que, en posteriores lavados, el intercambiador vuelva a formar una suspensin). El intercambiador slo deber utilizarse una vez. 3.3.2. Aislamiento de los cidos orgnicos Con la llave abierta, dejar que salga la solucin de cido actico hasta que rebase aproximadamente 2 a 3 mm del tapn de lana de vidrio, colocado por encima del intercambiador. Aadir 10 ml de solucin de cido actico al 0,5 % (3.1.1.3) y dejar que salga el lquido hasta que llegue al mismo nivel de la vez anterior. Repetir 4 veces ms la operacin de lavado. Tras el ltimo lavado, con la llave cerrada, verter sobre el intercambiador 10 ml de vino o de mosto. Dejar salir el vino gota a gota (a razn de 1 gota por segundo) e interrumpir la salida cuando el lquido se halle justo por encima del intercambiador. Volver a aadir en la columna 10 ml de solucin de cido actico al 0,5 % (3.1.1.3), dejar salir a la misma velocidad que la vez anterior y repetir el lavado otras 7 veces con 10 ml de agua cada vez. En el ltimo lavado, cerrar la llave en cuanto el nivel del lquido se halle un poco por encima del tapn superior de lana de vidrio. Eluir los cidos fijados sobre el intercambiador con la solucin de sulfato sdico al 7,1 % (3.1.1.4); recoger el eludo en un matraz aforado de 100 ml hasta el enrase.

3.3.3. Determinacin del cido tartrico

3.3.3.1. Vinos a los que no se ha aadido cido metatartrico. Introducir 20 ml de eludo en 2 matraces erlenmeyer a y b. El matraz erlenmeyer a sirve para efectuar la determinacin, el matraz erlenmeyer b, en el que el cido tartrico es destruido por el cido perydico, sirve de testigo. Echar en el matraz erlenmeyer a: - 2 ml de H2SO4M (3.1.2.3),- 5 ml de H2SO4 0,05 M (3.1.2.5), - - 1 ml de glicerol al 10 % (3.1.2.7). Echar en el matraz erlenmeyer b: - 2 ml de H2SO4M (3.1.2.3), - - 5 ml de solucin de cido perydico 0,05 M (3.1.2.6). Esperar 15 minutos. Aadir:- 1 ml de solucin de glicerol al 10 % (3.1.2.7) para destruir el exceso de cido perydico. Esperar 2 minutos. Verter entonces, agitando, primero en el matraz erlenmeyer b, y acto seguido en el matraz a, 5 ml de reactivo vandico (3.1.2.2). Confeccion: A. Cangi Revis: AC
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10 PROCEDIMIENTO ESPECIFICO CIDO METATARTARICO Fecha:03/07/20 Cdigo: PE-TECRevisin: 0 06 ANAL Poner en marcha inmediatamente un cronmetro y colocar el contenido de los matraces a y b en las cubetas del espectrofotmetro. Al cabo de 90 segundos medir la absorbancia, a 490 nm, del lquido procedente del matraz erlenmeyer a (determinacin), con relacin al testigo (matraz b). Si el eludo contiene mucho cido tartrico y por consiguiente la absorbancia es muy elevada, diluir el eludo con la solucin de sulfato sdico al 7,1 % y proceder a la medida de la solucin diluida.

3.3.3.2. Vinos a los que se ha aadido cido metatartrico.

Cuando se trate de un vino al que se ha aadido cido metatartrico o se suponga que ha habido tal adicin, se proceder a la hidrlisis de ese cido tal como se indica para el mtodo de referencia. Una vez fro, se vierte el contenido del matraz erlenmeyer, as como el agua de lavados (2 veces con 5 ml cada vez), en la parte superior de la columna de intercambiador. Continuar como se ha indicado antes. El cido metatartrico est incluido como cido tartrico en el resultado de la determinacin. 3.3.4. Obtencin de la curva patrn Verter 10, 20, 30, 40 y 50 ml de solucin de cido tartrico de 1 g/l (3.1.2.9) en matraces aforados de 100 ml y enrasar con la solucin de sulfato de sodio al 7,1 % (3.1.1.4). Las concentraciones de estas soluciones corresponden en las condiciones de trabajo a contenidos en el vino de 1, 2, 3, 4 y 5 g de cido tartrico por litro. En 2 matraces erlenmeyer a y b, verter 20 ml de estas soluciones y continuar como se ha indicado anteriormente para el eludo de vino. La representacin grfica de las absorbancias de estas soluciones en funcin del contenido en cido tartrico es una recta que se curva ligeramente hacia el punto cero. Si fuera necesario precisar esta parte de la curva, medir soluciones cuyo contenido sea inferior a 1,0 g/l. 3.3.5. Expresin de los resultados Llevar a la curva patrn la absorbancia resultante de medir el eludo, para obtener el contenido del vino en cido tartrico expresado en gramos por litro.

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