Bioqumica-Fosforilacin Oxidativa

FOSFORILACIN OXIDATIVA

La energa de oxidacin de combustibles carbonados en las mitocondrias se utiliza para sintetizar ATP de un modo muy eficaz.

Un hombre sedentario de 70kg requiere unas 2000 kcal para sus necesidades diarias, necesita 80kg de ATP/da. Cada molcula de ATP se recicla diariamente alrededor de 300 veces, esto es posible gracias al proceso de la fosforilacin oxidativa. La fosforilacin oxidativa es el proceso por el cual se forma ATP como resultado de la transferencia de electrones desde el NADH o FADH2. Ocurre en la mitocondria de los seres aerbicos por lo que depende del O2 atmosfrico como aceptor ltimo de electrones y protones que acaba dando H2O.

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Membrana externa rica en porina mitocondrial, protena de 30-35 kd, que permite el paso de molculas pequeas como fosfato, cloruro, aniones orgnicos, nucletidos de adenina, etc.

Solapamiento de dotaciones gnicas en mitocondrias. Reclinomonas contiene todos genes que codifican protenas de los organismos mencionados. Las mitocondrias son orgnulos semiautnomos que mantienen una relacin endosimbitica con la clula hospedadora, tienen DNA y RNAs propios. El contenido de informacin del DNA en este orgnulo vara segn las especies. Parte de las protenas mitocondriales estn codificadas por el ncleo celular. El genoma bacteriano mas parecido parecido al de la mitocondria es el de la Rickettsia prowazekii (causante del tifus, transmitido por piojos). El proceso endosimbitico con un antecesor primitivo de Rickettsia prowazekii parece ser el origen mitocondrial.

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Para medir el potencial de transferencia electrnica E0 de un electrn se mide como potencial redox, como es el caso del potencial de transferencia de electrones del NADH+H+ o del FADH2.

Una semipila conectada con la semipila estandar de referencia permite conocer el potencial de reduccin de un par redox.

4 Complejos: tres bombas de protones y una conexin con Krebs: Succinato-Q reductasa que no bombea protones.

Los complejos I, II, III, y IV estn asociados en un complejo macromolecular llamado respirosoma. Facilitan la transferencia rpida de electrones y previenen la liberacin de intermediarios (radicales) en las reacciones. La ubiquinona o CoQ difunde con gran rapidez en el interior de la membrana interna, es un excelente transportador de electrones. El citocromo c (protena pequea soluble 16kd) hace de conexin entre CIII y IV y esta situada en la membrana interna hacia el lado citoslico. Los electrones del FADH2 son transferidos al CoQ y posteriormente al complejo Q-citocromo oxidorreductasa (C. III).

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Estados de oxidacin de las quinonas:

Las reacciones de transferencia de electrones estn acopladas a la unin y liberacin de protones.

Desde el NADH los electrones son cedidos al FMN del Complejo I, dentro de este complejo pasan a protenas Fe-S.

Dentro del CI los e- pasan desde el FMN a una protena hierro-azufre, llevan hierro no hemnico. Las NADH-Q oxidorreductasas segn las diferentes especies, llevan complejos 2Fe2S como 4Fe-4S, adems de ir unidos a 4 residuos S- de Cys de las protena del CI. Despus pasaran a complejos CoQ y CoQ mviles. No aceptan ni liberan H+.

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Las reacciones redox tienen lugar en la parte externa de la MM hacia la matriz mitocondrial. El flujo de los electrones desde el NADH al CoQ a travs de este complejo bombea 4 protones y la captura de 2 protones adicionales al CoQ que se reduce a QH2.

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Esquema de la situacin y funcionamiento de los complejos integrantes de la cadena respiratoria:

La succinato deshidrogenasa del ciclo de Krebs que cataliza la oxidacin de succinato a fumarato y se genera un FADH2, forma parte del Complejo II, complejo succinato-Q reductasa es un complejo integral de membrana interna mitocondrial, desde el FADH2 los electrones se transfieren a complejos Fe-S y de aqu a Q (para dar QH2, Ubiquinol). Este complejo no transporta protones a diferencia del CI, por lo que un NADH en trminos energticos equivale a ms ATP que un FADH2. Otros enzimas como la lanzadera: glicerol fosfato deshidrogenasa implicada en la reoxidacin del NADH citoslico y la acil-CoA deshidrogenasa implicada en la degradacin de cidos grasos, transfieren sus electrones de forma similar a la anterior desde el FADH2 a Q para formar Ubiquinol (QH2), todas forman parte del complejo II y no bombean protones.

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El Complejo III: Q citocromo c reductasa transfiere los electrones desde el QH2 al citocromo c (cit c), bombea protones al espacio externo de la matriz mitocondrial. Un par de electrones bombea un neto de 2 H+ , la mitad de la HADH-Q reductasa al tener menor fuerza de empuje termodinmico. Contiene dos tipos de citocromos b y c1, los citocromos son protenas con hierro hemnico y transportan electrones, el hierropara de Fe +2 ferroso a Fe +3 frrico. El citocromo b lleva dos hemos el bL y el bH que presentan diferente afinidad por los electrones al estar en entornos polipeptdicos diferentes. Los tres citocromos llevan el grupo hemo es decir la ferro-protoporfirina IX, al igual que la hemoglobina y la mioglobina. Lleva tambin complejo 2F-2S, (centro de Rieske) en los que el Fe va unido a His en lugar de Cys.

EL CICLO Q: se oxidan 2 de QH2 a Q y otra Q pasa a QH2. Dos molculas de QH2 se unen de forma consecutiva al complejo III, cediendo cada una dos electrones y dos protones. Los protones se liberan al lado externo de la membrana mitocondrial, los 2 electrones viajan a travs del complejo. Uno de los electrones fluye al complejo 2Fe-2S del centro de Rieske y despus al cit c1 y de ah es transferido a una molcula del cit c oxidado, fuera ya del complejo, pasndolo a cit c reducido. El cit c reducido difunde a travs de la membrana hasta ser reoxidado de nuevo por el IV complejo. El segundo electrn es transferido a una Quinona oxidada en otro centro de unin y pasa a un anin radical

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semiquinona Q- La unin de la segunda QH2 cede un electrn a otro cit c y otro electrn al radical semiquinona que captura 2H+ de la matriz y pasa a QH2. Se ceden 4 protones al lado externo y se capturan 2 mas de la matriz. De este modo se van pasando los electrones al cit c de uno en uno ya que 1 cit c solo acepta 1 electrn y el QH2 los transporta de dos en dos.

El complejo IV llamado citocromo c oxidasa tambin bombea protones al exterior de la matriz mitocondrial. Cataliza la transferencia de electrones desde el cit c reducido al oxgeno molecular, que es el aceptor final de los electrones.

Esta reaccin depende de la presencia de oxgeno y condiciona a los seres aerbios a vivir en presencia de este aceptor de electrones. La reaccin es termodinmicamente espontnea con G0 = -55,4 kcal/mol. La citocromo c oxidasa bovina consta de 13 subunidades de las cuales 3 son codificadas por la propia mitocondria. Lleva dos grupos hemo y 3 iones Cu que ocupan 2 centros de cobre el cobre A y B. El centro A lleva 2 cobres CuA/ CuA enlazados por dos residuos de histidina. Este centro acepta en primera instancia los electrones desde el cit c reducido. El otro CuB esta coordinado con tres residuos de histidina uno de ellos modificado con un enlace covalente con una tirosina. (Fig. 1). Los centros van pasando de cuproso a cprico segn van aceptando y cediendo electrones. Los grupos hemo a y a3 se diferencian respecto a los del complejo III en que llevan diferentes radicales, cadenas carbonadas y uniones covalentes a la protena.

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Mecanismo de transferencia de electrones en la citocromo c oxidasa. El hemo a3 y el CuB forman el centro activo donde el O2 se reduce a H2O. Estructura del puente de perxido:

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Se incorporan 4 H+ de la matriz mitocondrial para formar 2molculas de agua. Adicionalmente el complejo bombea otros 4 H+ al exterior durante el paso de los electrones. Por lo que se genera tambin gradiente de protones y contribucin a la diferencia de carga en la matriz mitocondrial respecto al compartimento externo de la membrana mitocondrial.

Resumen del respirosoma:

El NADH +H+ y el FADH2 que proceden del ciclo de Krebs y de la degradacin de los cidos grasos ceden sus electrones y protones a la cadena de transporte electrnico. Estas reacciones espontaneas generan adems a la generacin de una fuerza protn-motriz que va asociada al bombeo de protones a medida que los electrones fluyen de potenciales mas electronegativos a mas electropositivos. Esta fuerza se utilizar para la sntesis de ATP y produccin de calor.

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El gradiente de protones impulsa la sntesis de ATP:

Hiptesis quimiosmtica de Mitchell 1961 propuso que el transporte de electrones y la sntesis de ATP eran dos procesos acoplados a travs de un gradiente de protones en de la membrana interna mitocondrial. La fuerza protn motriz tiene dos componentes: uno elctrico y otro qumico (el gradiente de pH). El flujo de protones genera la fuerza suficiente para llevar a cabo la sntesis de ATP. Un proceso exergnico como el flujo de electrones desde -0,32 a +0,82 V est acoplado a un proceso endergnico:

El complejo enzimtico se denomina ATP sintasa o complejo V.

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El flujo de protones en las subunidades del anillo c (de F0), propulsa la sntesis de ATP a travs del movimiento rotatorio de la subunidad . El mecanismo implica a las subunidades a y c: a esta en contacto directo con las 10 subunidades c del anillo que atraviesa la membrana interna, cuando giran. La subunidad a contiene dos semiconductos hidrfilos que no atraviesan la membrana, los protones pueden entrar en los conductos pero no pueden salir del hemiconducto. La interaccin de a con c facilitar la salida de los protones hacia la matriz mitocondrial. La estructura de c se ha determinado por cristalografa de RX y NMR. La subunidad est formada por 2 hlices que atraviesan la membrana, en la mitad de una de las hlices un Asp 61 est en contacto con el entorno del conducto hidroflico y su grupo carboxilo est como COO-. El entorno del espacio externo rico en protones tender a pasar a la matriz mitocondrial pobre en protones a travs de los semiconductos. Un protn se unir en el semiconducto externo y se unir al residuo de aspartato 61, se provoca una rotacin sucesiva del anillo de tal forma que las subunidades c se van protonando en los asprticos 61, as interaccionan al final de la rotacin con el otro semiconducto abierto a la matriz y el protn es liberado. El movimiento de protones promueve la rotacin coordinada de las subunidades del anillo desde la concentracin alta de protones (exterior, espacio intermembrana) a la concentracin baja de protones (interior, matriz mitocondrial). El anillo est firmemente unido a la subunidad y , formando el rotor, mientras que el estator del motor, lo forman las subunidades 3 3 junto con a, b2 y de la ATP sintasa, estas dos ltimas evitan el giro de la cabeza hexamrica. Cada giro de 360 hace que las 3 subunidades sintetizen un ATP. Un anillo con 10 subunidades c (levadura) corresponder a 10 protones desplazados del exterior al interior y 3 molculas de ATP sintetizadas: 10/3 = 3,33 protones por molcula de ATP. Segn las especies puede haber diferencia en el n de subunidades c del anillo.

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Si tenemos 10 subunidades c en el anillo, en 360 sintetiza 3 ATPs 10/3 =3,33 protones por ATP sintetizado. Asumiendo 3 protones por ATP hay que tener en cuenta que parte de estos protones se disipan cuando el ATP sale de la mitocondria al citosol. Se consideran 2,5 ATPs por NADH y 1,5 ATPs por FADH2. Para justificar los 85 kg de ATP diarios para un hombre de 70 kg: 85000/507=167,65 moles de ATP; 167,65 x 6,022 1023 = 1,0x1026 molculas de ATP. Deberan fluir a travs de la ATP sintasa 3,3 x 1026 protones cada da. Lo que sera : 3,8x1021 prot/s.

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Integracin de los complejos I, II, III, IV y V:

LANZADERAS. Regeneracin del NADH citoslico: El FADH2 y el NADH+H+ en estado reducido del citosol no pueden atravesar la MI de la mitocondria por lo que para re-oxidarse y ceder sus electrones y protones al respirosoma deben de usar una de las lanzaderas: 1-del glicerol 3-fosfato o 2-la del malato-aspartato. En cada tipo celular se expresa solo uno de los tipos de lanzadera. De esta forma los coenzimas como el NADH+H+ que proceden de la glucolisis (citosol) se re-oxida, para intervenir en la glucolisis, de nuevo. La glicerol 3-fosfato deshidrogenasa citoslica y su isoenzima glicerol 3-fosfato deshidrogenasa mitocondrial son las responsables de la oxidacin del NADH+H+ citoslico a FADH2 mitocondrial. Se pierde un ATP en el intercambio.

Se expresa un msculo y otros tejidos.

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Teniendo en cuenta que: 1 NADH+H+ equivale a 2,5 ATPs y 1 FADH2 equivale a 1,5 ATPs, se pierde un ATP en la re-oxidacin.

La lanzadera del malato-aspartato se expresa en corazn e hgado y la re-oxidacin del coenzima se lleva a cabo sin perdida de ATP ya que es el NADH+H+ el producto final formado y equivale a 2,5 ATPs.

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Mecanismo de la ATP-ADP translocasa mitocondrial: El ATP formado por el complejo V, queda en la matriz mitocondrial por lo que debe salir al citosol donde se consume a ADP y Pi. La translocasa importa ADP acoplado a la salida de ATP y viceversa. Este enzima representa el 15 % de la protena total de MI mitocondrial y tiene 30kd, en este intercambio se pierde del rendimiento energtico asociado a la transferencia de electrones. La inhibicin de este enzima bloquea la respiracin celular.

Estructura propuesta para la ATP-ADP translocasa y otros varios transportadores mitocondriales o carriers. Es una estructura tripartita en la que las hlices transmembrana se disponen en forma de tienda india con el centro de unin al nucletido en el centro geomtrico. El Pi tambin es transportado al interior mitocondrial a travs del transportador del fosfato que se intercambia por un grupo OH-. El genoma humano codifica para mas de 40 de este tipo de transportadores. Estos transportadores aportan a la ATP sintasa de sus sustratos, formando un gran complejo: ATP sintatosoma.

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La velocidad de fosforilacin est determinada por la necesidad de ATP. (Carga energtica). A su vez la disponibilidad de los coenzimas NAD+ y FAD controlan la velocidad del ciclo de Krebs. Se trata de procesos acoplados, por lo que la C.E controla la velocidad de transferencia de los electrones hasta el O2.

Desacoplamiento entre la fosforilacin oxidativa y el transporte electrnico para producir calor: Una forma de mantener la T corporal en animales que hibernan, seres recin nacidos y mamferos adaptados al fro. UCP-1 o termogenina es una protena desacoplante de 33kd parecida a la ATP translocasa. El paso de electrones a travs de esta protena produce calor. Las hormonas en ambientes frios produce liberacin de cidos grasos de los TG del tejido adiposo que activan a la termogenina, y se produce calor.

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Algunos inhibidores del transporte electrnico que han ayudado en el estudio del proceso oxidativo y su acoplamiento a la fosforilacin oxidativa. La oligomicina y la diciclohexilcarbodiimida son inhibidores de la ATP sintasa. El atractilsido y el cido bongcrquico son inhibidores de la ATP trasnlocasa.

Un desacoplante de ambos procesos. Los desacoplantes consumen oxgeno porque cortocircuitan el transporte de electrones a travs de la membrana interna mitocondrial, pero no se sintetiza ATP en su presencia.