2011CLF22101 - A - Chevry

N dordre : DU : 2101
UNIVERSITE BLAISE PASCAL

U.F.R. Sciences et Technologies
ECOLE DOCTORALE DES SCIENCES FONDAMENTALES N 662
THESE
Prsente pour obtenir le grade de
DOCTEUR DUNIVERSITE
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 Spcialit : Chimie organique
Par Aurlien CHEVRY
Complexes click de platine et cuivre-NHC : applications en biologie

Soutenue publiquement le 11 janvier 2011, devant la commission dexamen.
Membres du jury Mme. Popowycz Florence, Matre de confrences, ICBMS-Universit Claude Bernard M. Pellet-Rostaing Stphane, Directeur de Recherche, ICSM-CEA Bagnols-sur-Cze M. Aitken David, Professeur des Universits, LSOM-ICMMO-Universit Paris Sud M. Beaudoin Claude, Professeur des Universits, GReD-Universit Blaise Pascal M. Gautier Arnaud, Charg de Recherche, SEESIB-Universit Blaise Pascal
Laboratoire Synthse Et Etudes de Systmes dIntrt Biologique UMR CNRS 6504 24 Avenue des Landais- 63171 AUBIERE
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RESUME
La cycloaddition 1,3-dipolaire catalyse par le cuivre(I) entre un azoture et un alcyne (CuAAC), raction de chimie click par excellence, suscite un grand intrt en raison de son efficacit et de sa versatilit. Lobjectif premier de cette thse est dappliquer cette raction pour llaboration de structures 1,2,3-triazoles fonctionnalises, en vue dobtenir des ligands jouant le rle de pince platine . Les complexes de platine biologiquement actifs rapports sont de type mono- ou bi-nuclaire et comportent un ou deux cycles triazole. Les complexes obtenus ont fait lobjet dune tude in vitro dinteraction avec des nuclosides et de lADN soit sous forme dhairpin (pingle cheveux) soit sous forme plasmidique. Nos complexes ont montrs une ractivit similaire celle du cisplatine, qui est la mtallodrogue de rfrence. En parallle, nous prsentons les proprits catalytiques et biologiques de complexes cuivre(I)-NHC (Carbne N-Htrocyclique), drivs du [CuCl(SIMes)], mis au point par Nolan et al. Dans un premier temps, un criblage dactivits catalytiques a t ralis avec divers additifs aromatiques azots afin damliorer lefficacit de la CuAAC. Dans un deuxime temps, la cytotoxicit et lactivit antitumorale du complexe [CuCl(SIMes)] ont t considres sur plusieurs lignes cellulaires. Nous rapportons ici, le premier exemple de cuivre(I)-NHC biologiquement actif, prsentant une activit largement suprieure celle du cisplatine. Enfin, la ractivit de ce complexe avec de lADN plasmidique a t value in vitro et nous rapportons sa capacit couper lADN. Mots-cls : Chimie click, catalyse, complexes de platine, cuivre(I)-NHC, agents anticancreux, interaction ADN.
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ABSTRACT
The copper(I)-catalyzed alkyne-azide cycloaddition (CuAAC), a click chemistry reaction, is of a great interest thanks to its efficiency and versatility. The present work aims to use this reaction for the elaboration of new functionalised 1,2,3-triazole, as pincer ligand to platinum. We have synthesized mono- or binuclear platinum anticancer complexes that contain one or two triazole cycles. These complexes were subject to in vitro tests, in order to investigate the interactions they can establish with both nucleosides and DNA. The results reveal a reactivity similar to cisplatin, the reference metallodrug. In parallel, we present the catalytic and biological properties of copper(I)-NHC complexes, like [CuCl(SIMes)] developed by Nolan et al. At first, a screening of the catalytic activity was realized with diverse nitrogen aromatics additives in order to improve the CuAAC efficiency. Secondly, the cytotoxicity and antitumoral activity of [CuCl(SIMes)] were considered on various cancer cell lines. We report here, the first example of a biologically active copper(I)NHC, this complexe exhibiting a superior activity than cisplatin. Finally, the reactivity of this copper(I)-NHC with DNA was evaluated in vitro and highlights its capacity to cleave DNA. Key-words: Click chemistry, catalysis, platinum complexes, copper(I)-NHC, anticancer agents, interaction DNA.
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TABLE DES MATIERES

INTRODUCTION GENERALE ................................................................... 11 Chapitre I : Etude Bibliographique .............................................................. 13 I.1. Introduction : ........................................................................................ 13 I.2. Complexes de platine : alkylation de lADN ................................. 15
I.2.1 Cisplatine, historique. .............................................................................................. 15 I.2.2 Cisplatine, chimiothrapie. ...................................................................................... 17 I.2.3 Cisplatine, mode daction et ractivit. .................................................................... 17 I.2.4 Cisplatine, phnomnes de rsistance ...................................................................... 21 I.2.5 Cisplatine, analogues utiliss en chimiothrapie ..................................................... 24 I.2.6 Nouvelles gnrations de complexes de platine. ..................................................... 25 I.2.6.a Les complexes de platine mononuclaires ........................................................ 25 I.2.6.b Les complexes de platine polynuclaires .......................................................... 30
I.3. Complexes de cuivre : coupure oxydative de lADN .......................... 35

tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 I.3.1 Coupure oxydative (gnralit)................................................................................ 35 I.3.2 Mcanisme de coupure de lADN par le complexe [CuI/II(phen)2] +/2+ .................... 37 I.3.3 Exemples de complexes bass sur le systme Cu(phen) 2. ....................................... 41 I.3.4 Autres exemples de complexes de cuivre pouvant provoquer une coupure de lADN .......................................................................................................................................... 44
I.4. Chimie click : Raction de cycloaddition 1,3-dipolaire alcyne-azoture catalys par le cuivre(I). ............................................................................. 46
I.4.1 Le concept de la chimie click................................................................................... 46 I.4.2 Cycloadditions de Huisgen ...................................................................................... 47 I.4.3 Les sources de cuivre pour la cycloaddition 1,3-dipolaire azoture-alcyne catalyse par le cuivre (I) (CuAAC) ................................................................................................ 48 I.4.3.a Formation du catalyseur cuivre(I) par rduction des sels de cuivre(II). ........... 49 I.4.3.b Formation du catalyseur Cu(I) par addition de sels de Cu(I) ............................ 53 I.4.3.c Catalyseurs Cu(I) stables................................................................................... 54 I.4.3.d Autres sources de cuivre ................................................................................... 56 I.4.4 Applications de la cycloaddition CuAAC ................................................................ 57 I.4.4.a Les triazoles comme bioisostres ...................................................................... 57 I.4.4.b Concept peptides modifis ............................................................................. 57 I.4.4.c Conjugaison de molcules................................................................................ 60 I.4.4.d Produits naturels modifis................................................................................. 60 I.4.4.e Synthses de dendrimres ................................................................................. 61 I.4.4.f Immobilisation de molcules sur un support ..................................................... 62 I.4.4.g Concept de raction click in situ ....................................................................... 62 I.4.4.h Concept de ligand click pour chlater les mtaux............................................. 63 I.4.4.i Ractions de CuAAC fluorogniques ................................................................ 66 I.4.4.j Concept de marquage des systmes cellulaires ................................................. 67
Chapitre II : Synthses de nouveaux ligands du platine par chimie Click ......................................................................................................................... 69 II.1. Introduction ........................................................................................ 69 II.2. Synthses des ligands bidentes comportant un cycle 1,2,3-triazole .. 72
II.2.1 Synthses des ligands triazoles avec une chane amide.......................................... 73
II.2.1.a Acylation damine : formation des chanes amides ......................................... 74 II.2.1.b Synthse des prcurseurs azotures ................................................................... 75 II.2.1.c Synthse des triazoles ...................................................................................... 76 II.2.2 Synthses des ligands triazoles avec une modification de la pince ........................ 79 II.2.2.a Variation de lamine participant la chlation ................................................ 79 II.2.2.b Synthse dun ligand triazole tridente ............................................................. 80 II.2.3 Synthse dun ligand triazole invers ............................................................... 81
II.3. Synthses des ligands bis -triazole ...................................................... 82

II.3.1 Synthses des ligands bis-triazoles possdant un pont aliphatique ........................ 83 II.3.2 Synthse dun ligand bis-triazole avec un pont aliphatique intgrant une amine... 85 II.3.3 Synthses de ligands bis-triazole possdant un pont ammonium. .......................... 86 II.3.4 Synthse dun ligand bis-triazole invers avec un pont di-ammonium. ................. 90
II.4. Conclusion ........................................................................................... 91 Chapitre III : Prparation de complexes de platine avec des ligands 1,2,3triazole. ........................................................................................................... 93 III.1. Introduction ....................................................................................... 93 III.2. Prparation des complexes mononuclaire de platine ..................... 96
III.2.1 Complexes mononuclaires de platine avec les ligands triazole-amine portant une chane amide ..................................................................................................................... 96 III.2.2 Complexes mononuclaire de platine avec des ligands triazole-amine alkyls .... 97 III.2.3 Complexes avec le ligand bidente triazole-amine 28 et diffrentes sources mtalliques. ...................................................................................................................... 98 III.2.4 Complexe palladi avec le ligand 28. .................................................................... 99 III.2.5 Complexe mononuclaire de platine avec le ligand tridente triazole-diamine. .. 100 III.2.6 Complexe mononuclaire de platine avec le ligand triazole invers. ................. 101
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III.3. Prparation des complexes binuclaires de platine ....................... 102

III.3.1 Complexes binuclaires de platine comportant des ligands bis-bidentes bistriazole pont aliphatique. ............................................................................................. 102 III.3.2 Complexe binuclaires de platine comportant le ligand bis-tridentes bis-triazole pont aliphatique. ............................................................................................................. 103 III.3.3 Complexes binuclaires de platine comportant des ligands bis-bidentes bistriazole pont ammonium aliphatique. .......................................................................... 103 III.3.4 Complexe binuclaire de platine comportant des ligands bisbis-bidentes bistriazole invers pont di-ammonium. ............................................................................ 106 III.3.5 Conclusion ........................................................................................................... 107
Chapitre IV : Ractivit des complexes avec lADN .................................. 109 IV.1. Introduction ..................................................................................... 108 IV.2. Interaction des complexes mtalliques (Pt, Pd) avec la guanosine.108 IV.3. Interaction des complexes mtalliques (Pt, Pd) avec lADN plasmidique surenroul. ........................................................................... 114 IV.4. Interaction du complexe mtallique (Pt) avec lADN en structure hairpin. ...................................................................................................... 116
IV.4.1 Rappel bibliographique ....................................................................................... 116 IV.4.2 Interaction du complexe de platine 1 avec lhairpin ........................................... 118
IV.5. Conclusion ........................................................................................ 121
Chapitre V : Le complexe [CuCl(SIMes)] : Catalyseur pour la CuAAC, activits biologiques. .................................................................................... 122 V.1. Introduction ....................................................................................... 123 V.2. Activit catalytique du [CuCl(SIMes)] pour la CuAAC et amlioration du systme par addition de ligand donneur datomes N. . 124
V.2.1 Criblage dactivit des cuivre(I)-NHC ................................................................. 124 V.2.2 Criblage dactivit du [CuCl(SIMes)] en prsence dadditifs chlatant le mtal . 125
V.3. Toxicit du complexe cuivre(I)-NHC contre les cellules tumorales humaines, arrt du cycle cellulaire, apoptose et induction de la coupure de lADN .................................................................................................... 134
V.3.1 Toxicit du complexe cuivre(I)-NHC .................................................................. 134 V.3.2 Induction de la coupure de lADN par le complexe cuivre(I)-NHC in vitro. ...... 137
V.4. Conclusion ......................................................................................... 140 CONCLUSIONS ET PERSPECTIVES ...................................................... 141

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PARTIE EXPERIMENTALE ..................................................................... 143 REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES .................................................... 185
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ABREVIATIONS
4-DMAP : 4-(dimthylamino)pyridine 5-MF : 5-mthylfurannone ADN : Acide DsoxyriboNuclique AcONH4 : actate dammonium Bathophen : bathophnanthroline. BER : Base Excision Repair CuAAC : Copper(I)-Catalysed Alkyne-Azide Cycloaddition. Cycloaddition azoture-alcyne catalyse par la cuivre(I) DIPEA : N,N-diisopropylthylamine DMAP : 4-dimthylaminopyridine tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 DMF : N,N-dimthylformamide DMSO : dimthylsulfoxide EDTA : EthylneDiamineTetraActate EPR : Enhanced Permeability and Retention ESI : ElectroSpray Ionisation FT-IR : Fourier Transform InfraRed Spectroscopy. Spectroscopie Infrarouge Tranforme de Fourier GSH : Glutathion HMG : High Mobility Group HPLC : High-Performance Liquid Chromatography. Chromatographie liquide haute performance. HR: Homologous Recombination HSAB : Hard and Soft Acids and Bases. Acides et bases durs et mous. HR-MS : High-Resolution-Mass Spectrometry. Spectromtrie de masse haute rsolution IR : Infra-Rouge Mt : Mtallothionine NER : Nucleotides Excision Repair NHC : N-Heterocyclic Carbene. Carbne N-hterocyclique NHEJ : Non-Homologous End Joining NMI : N-mthylimidazole ORTEP : Oak Ridge Thermal Ellispoid Program Phen : 1,10-Phnanthroline
RMN : Rsonance Magntique Nuclaire TBTA : Tris-(benzylpropyltriazolylmthyl)amine TEAA : Actate de trithylammonium THPTA : Tris-(hydroxypropyltriazolylmthyl)amine
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INTRODUCTION GENERALE
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Les agents gnotoxiques sont souvent utiliss en chimiothrapie anticancreuse. Parmi eux, nous trouvons le cisplatine, considr comme un agent alkylant de lADN, qui a t le premier complexe mtallique tre utilis pour le traitement de tumeurs solides. Cependant, son efficacit est parfois limite en raison de sa toxicit et de lapparition de chimiorsistances. Pour contourner ces problmes, la recherche de nouveaux complexes de platine sest fortement dveloppe. Les travaux prsents dans ce manuscrit, commencs en octobre 2007, sinscrivent dans ce contexte de recherche, travers la synthse, de nouveaux ligands du platine. Par ailleurs, depuis quelques annes, la recherche de nouvelles ractions la fois simples, efficaces et versatiles, permettant la construction de molcules indites facilement fonctionnalisables, est devenue un des centres dintrt de la communaut des chimistes tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 organiciens. A ce dfi fait cho lapparition du concept de chimie click en 2001, dfinissant une raction chimique quantitative, rgioslective, compatible avec une grande varit de systmes ractionnels et simple mettre en uvre. Parmi ces ractions, lune des plus tudies est la raction de cycloaddition 1,3-dipolaire entre un alcyne et un azoture catalyse par le cuivre(I) menant lhtrocyle 1,2,3-triazole. Son utilisation pour obtenir des triazoles fonctionaliss de faon construire des chlateurs, a permis de dvelopper de nouveaux ligands pouvant jouer le rle de pince mtal . Compte tenu des travaux dj raliss au laboratoire qui ont permis de valider la prparation de complexes de platine comportant des ligands triazole et den valuer la cytotoxit, lobjectif initial du projet est de construire de nouveaux ligands (mono-, bis-triazole) afin dlargir notre collection de complexes puis de tester leurs ractivits vis--vis de lADN.
En parallle cette tude, nous nous sommes intresss au dveloppement de mtallocarbnes de cuivre(I), ceci afin dvaluer la fois leurs potentiel comme catalyseurs de cycloadditions 1,3-dipolaires et leurs activits biologiques. Nous nous proposons donc dexplorer la synthse des ligands 1,2,3-triazole et de leurs complexes de platine associs, en prsentant les diffrentes stratgies retenues pour diversifier les familles de complexes. Le prsent manuscrit se divise en 5 parties qui dtaillent les diffrents aspects des travaux raliss. Le premier chapitre est une tude bibliographique prsentant les contextes de ltude. Il sera fait un rappel sur linteraction des mtaux avec lADN, travers les complexes de platine en 9
tant quagents alkylants, mais aussi travers les complexes de cuivre capables dinduire une coupure oxydative de lADN. Nous aborderons galement le concept de la chimie click , ses dveloppements et ses applications. Le deuxime chapitre concerne le dveloppement et les stratgies de synthse des ligands 1,2,3-triazole chlateurs du platine. Il permettra de poser les bases de nos travaux : les tapes de synthse et de caractrisation des diffrents ligands seront dcrites et discutes. Le troisime chapitre prsente la prparation des complexes de platine avec les ligands obtenus prcdemment. Un rappel sur la prparation des complexes de platine synthtiss prcdemment au laboratoire sera fait, avant de prsenter les synthses des nouveaux complexes mono- et binuclaires. Le quatrime chapitre porte sur la ractivit des complexes de platine avec des nuclosides et lADN sous diffrentes formes : plasmides surenrouls et structure ADN hairpin ( pingle tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 cheveux ). Cette tude permettra dapprofondir nos connaissances sur la ractivit de ces nouveaux complexes. Le cinquime chapitre prsente les diffrents travaux mens par lquipe sur les complexes cuivre(I)-NHC connus pour catalyser la raction de CuAAC. Ils feront lobjet dune tude doptimisation en catalyse. Par ailleurs, lactivit biologique de certains dentre eux sera value sur diffrents cellules tumorales humaine. En conclusion nous reviendrons sur les points cls de ce travail et les difficults rencontres puis, nous voquerons les perspectives cette tude.
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Chapitre I : Etude Bibliographique
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Chapitre I :Etude Bibliographique
I.1. Introduction :
Les lments mtalliques sont essentiels la vie. La plupart dentre eux perd facilement des lectrons pour former des ions solubles dans les fluides biologiques. Ces cations peuvent alors interagir avec des molcules biologiques riches en doublets libres dlectrons comme les protines et lADN. Lvolution a fait en sorte que les mtaux soient incorpors dans des enzymes et des protines qui jouent des rles essentiels dans le bon fonctionnement des cellules. Par exemple, lhmoglobine comporte un ion de fer(II) dont le rle est de fixer le dioxygne puis dassurer son transport dans le sang. De la mme manire le cuivre, le zinc, le fer et le manganse sont prsents dans de nombreuses protines avec un rle structural ou catalytique. tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 Il est intressant de noter que la mdecine utilise des mtaux depuis plus de 5000 ans.1 Dans le pass, entre 3000 et 1500 ans av. J.-C, les gyptiens utilisaient dj le cuivre pour striliser leau et le zinc pour amliorer la cicatrisation des blessures. Lor, quant lui, a trouv de nombreuses utilisations dans la mdecine traditionnelle chinoise.1 Lessor de la chimie inorganique mdicinale est rcent, une cinquantaine dannes, ce qui correspond la dcouverte de lactivit anticancreuse du cisplatine, considr comme le chef de file des mtallo-drogues. Bien entendu, dautres mtaux ont t tudis de par leur potentiel en thrapie et pour leur utilisation en diagnostic (Figure1).
Complmentations dlments minraux essentiels (Fe, Cu, Zn, Se) Agents pour le diagnostic IRM (Gd, Mn) Rayon X (Ba, I)
Thrapies par chlation des mtaux
Domaines dapplication de la chimie inorganique mdicinale
Inhibiteurs denzyme
Agents thrapeutiques (Li, Pt, Au, Bi, )
Radio-pharmaceutiques Diagnostique (99mTc) Thrapeutique (186Re)
Figure 1. Domaines dapplication de la chimie inorganique mdicinale.2
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De nombreux complexes mtalliques ont t envisags comme nouveaux agents thrapeutiques, notamment dans le domaine des anticancreux. Le tableau 1 ci-dessous prsente quelques exemples de complexes biologiquement actifs ainsi que leurs activits associes.3, 4 Elments Ag As Au Composs Suphadiazine dargent(I) Salvarsan, Melarsen, Tryparsamide Thiolates de Au(I) Auranofine Complexes Au(I) diphosphine Hexacarbonyle dicobalt Complexe cuivre(II)- histidine Nitroprussiate de sodium Fe(III) desferrioxamine ferrocifne 8-quinolate de Gallium (KP46) Maltolate de Gallium Li2CO3 Cisplatine, carboplatine Complexes de ruthnium(III) Dichlorure de titanocne, bisdictoneTi(IV) Activits biologiques Antibactrien Antimicrobien Antitumorale Anti-arthrosique Antiviraux Antiprolifrative Maladie de Menkes Vasodilatateur Antimicrobien Antitumorale Antitumorale Antitumorale Agent neurologique Antitumorale Antitumorale Antitumorale
Co Cu Fe tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Ga Li Pt Ru Ti
Tableau 1. Exemple de composs mtalliques activits biologiques.
Lmergence au fil des annes de complexes mtalliques actifs laisse penser que le dveloppement de nouveaux composs anticancreux est encore possible. Lintrt de ces nouveaux complexes rside dans le fait que lon peut ajuster le degr doxydation du mtal et sa coordination avec ses ligands (nombre de coordination, gomtrie du complexe). Bien sr, le choix du ou des ligand(s) est tout aussi important, car il est utile la fois pour contrler la ractivit du mtal et aussi pour favoriser les interactions avec les cibles biologiques (ADN, protines, enzymes et rcepteurs). Une grande partie des complexes mtalliques cytotoxiques ont pour cible lADN qui est le garant de lintgrit du gnome. Les interactions mtal-ADN dans les systmes vivants et leurs utilisations potentielles pour le traitement ou le diagnostic de maladies prsentent un grand intrt. La coordination de ces complexes offre diffrents modes dinteractions avec les oligonuclotides, comprenant les liaisons non covalentes (liaisons ioniques, liaisons hydrogne, forces de van der Waals) ; les liaisons covalentes avec les bases nucliques, mais aussi les coupures oxydatives des brins dADN. Par exemple, les mtaux de transition comme
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le platine et le ruthnium se fixent sur les atomes dazote riches en lectrons, notamment ceux des positions N-7 des guanines. Le titane, qui est oxophile, montre une capacit se fixer sur les nuclotides et /ou sur les phosphates. Laccessibilit en milieu physiologique dau moins deux tats doxydation pour les ions de fer, cuivre, cobalt, ruthnium et manganse permet lactivation de ractions doxydorduction pouvant aboutir la coupure oxydative des brins dADN. Les mtaux mis en avant dans cette thse sont le platine, pour ses proprits alkylantes des bases nucliques, et le cuivre, de par ses proprits de coupure des brins dADN. La recherche et le dveloppement de complexes de platine sont prsents dans la section I.2., les complexes de cuivre sont introduits dans la section I.3. La conception de nouveaux ligands pour former des complexes avec des proprits optimales tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 reste fondamentale. Lun des challenges est de trouver des stratgies de synthse qui permettent dobtenir une large gamme de ligands fonctionnaliss tout en facilitant leur prparation. Depuis quelques annes, lmergence de ractions simples regroupes sous le terme de chimie click , permet dobtenir rapidement des collections de molcules. Lune de ces ractions est la cycloaddition 1,3-dipolaire dun azoture avec un alcyne vrai catalyse par le cuivre(I) (CuAAC) pour former lhtrocycle cinq chanons 1,2,3-triazole. Les triazoles fonctionnaliss par un groupe donneur deviennent chlatants ( pinces mtaux ). Le concept de chimie click ainsi que les dveloppements des techniques de synthse et des applications seront prsents dans la section I.4.
I.2. Complexes de platine : alkylation de lADN

I.2.1 Cisplatine, historique.
Le cis-diamminedichloroplatine(II) ou cisplatine, galement nomm sel de Peyrone a t dcrit pour la premire fois dans la littrature en 1845.5 Sa structure a t ensuite dduite par Alfred Werner en 1893. Lactivit anticancreuse du cisplatine a t dcouverte fortuitement par Rosenberg dans les annes 1960.
H3N Pt H3N Cl H3N Cl Cl Pt Cl NH3
Cisplatine
Transplatine
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Son quipe, qui tudiait leffet dun courant lectrique sur le mtabolisme des bactries, a mis en vidence le fait que llectrolyse dune solution de chlorure dammonium par une lectrode de platine avait un effet retardant sur la croissance et la division des bactries dEscherichia coli. Les tudes qui ont suivi ont clairement identifi le cisplatine comme tant responsable de leffet antiprolifratif,alors que le transplatine demeure inactif.6 Des tudes ont t menes par la suite, pour tester diffrents complexes de platine sur des modles tumoraux implants chez le rat. Elles ont montr que le cisplatine tait le plus efficace pour rduire la taille des tumeurs.7 Rapidement aprs, des tests cliniques en phase I ont suivi sur des tumeurs solides chez lhomme. Pour lutilisation clinique du cisplatine, la mise au point dune synthse efficace tait tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 ncessaire. Celle-ci a t ralise par Dhara en 1970.8 Elle consiste utiliser le tetraiodoplatinate(II) de potassium et non plus son analogue chlor. Le fort effet trans des iodures dirige alors laddition de deux molcules dammoniaque exclusivement en cis alors que lon observe un mlange disomres cis et trans en utilisant les chlorures. Le cisplatine est finalement obtenu par change des iodures avec des chlorures via le complexe aqua (Schma 1.)
I K I Pt
I NH3
intermdiaire
Cl K2 Cl Pt
Cl Cl
excs KI
I K2 Pt I
I I + 4 KCl
2 NH3
I Pt I
NH3 NH3 + 2 KI
2 AgNO3
Cl 2 KNO3 + Cl Pt
NH3 NH3
excs KCl
H2O Pt H2O
NH3 NH3 (NO3)2 + 2 AgCl
Cisplatine
Schma 1 . Synthse du cisplatine dcrite par Dhara en 1970.8
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I.2.2 Cisplatine, chimiothrapie.

Le cisplatine, commercialis sous le nom de platinol , est autoris pour le traitement des cancers depuis 1978. Il est actuellement utilis en chimiothrapie des cancers des testicules, des ovaires, et se rvle efficace pour de nombreux autres (col de lutrus, tte et cou, sophage, poumon).9 Le cisplatine a une solubilit aqueuse limite (environ 1mg/ mL) ce qui est un problme pour son administration par voie intraveineuse. Le cisplatine peut tre utilis conjointement avec dautres molcules antitumorales comme le 5-fluorouracile10 et larabinofurannosylcytosine.11 Ces drogues rduisent la rparation des lsions ADN-cisplatine, augmentant par consquent lactivit du cisplatine. Dans le cas dune combinaison du 5-fluorouracile avec le cisplatine, le traitement est efficace pour le cancer du colon, connu pour tre insensible laction du cisplatine seul. tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 Les doses administres aux patients sont limites du fait de nombreux effets secondaires comme des toxicits nphrologiques, neurologiques, otologiques et nauses.12 Les problmes nphrologiques ont t attnus grce lhydratation intraveineuse et la diurse en cours de traitement. Cependant, il a t montr que certains types de cancer ne rpondaient pas au traitement et que dautres dveloppaient au cours du temps une rsistance. Ces problmes de chimiorsistance seront prsents dans le paragraphe I.2.4.
I.2.3 Cisplatine, mode daction et ractivit.

Le mode daction du cisplatine nest toujours pas parfaitement compris, mais il semble dpendre entre autres de sa capacit former des adduits non rparables avec lADN. Le cisplatine diffuse dans les tissus avant dtre limin par le rein. Dans le sang, la concentration leve en chlorure (100 mM environ) inhibe laquation du complexe, ce qui permet au cisplatine de rester sous forme neutre et inactive durant son transport travers le corps. Nanmoins, des donnes montrent quil peut se fixer aux cystines et aux mthionines des albumines durant son transport.13 Les premires tudes suggraient quil puisse pntrer dans la cellule par diffusion passive mais, trs rcemment, cette hypothse a t infirme puisquil a t montr que son entre est lie au transport et au mtabolisme du cuivre.14 Lorsque le cisplatine rentre dans la cellule o la concentration en ions chlorures est moindre (2 30 mM), il se produit une hydrolyse
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menant succssivement aux complexes mono et bis-aqua ([Pt(NH3)2Cl(H2O)]+) et ([Pt(NH3)2 (H2O)2]2+) (Figure 3). Ces deux complexes sont alors beaucoup plus ractifs et sensibles aux nuclophiles cellulaires.
H3N Pt H3N
Cl Cl
+H2O + Cl-
+ H3N Pt H3N Cl OH2
+H2O + Cl-
2+ H3N Pt H3N OH2 OH2
H3N Pt
OH Cl
H3N Pt H3N
OH OH
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H3N Plasma [ Cl- ] = 100 mM Cytoplasme [ Cl- ] = 2- 30 mM
Figure 2. Equilibres impliquant le cisplatine en milieu aqueux et en prsence de chlorures.15
La ractivit de ces espces a pour consquence quune grande diversit de composs au sein de la cellule peuvent tre cibls (phospholipides16, protines, peptides : glutathion, ARN, ADN, etc.). Des expriences ont confirm que la fixation du cisplatine sur lADN gnomique tait responsable de lactivit anticancreuse.9,10 Dautres rsultats ont montr que lADN mitochondrial peut tre galement endommag.9 Le cisplatine est connu pour induire un arrt du cycle cellulaire en phase G2, pouvant mener un phnomne dapoptose. Ce processus conduisant la mort cellulaire est assez efficace puisque seul 1 % du cisplatine intracellulaire se fixe lADN 17, le reste se liant aux protines cytoplasmiques et aux molcules comportant des fonctions soufres comme le glutathion, prsent des concentrations intracellulaires de 0,5 10 mM.18 Souvent, la fixation du cisplatine sur le glutathion est associe une rsistance au traitement (cf I.2.4). Dautre part, il a aussi t suggr que le complexe cisplatine-glutathion pouvait jouer le rle de rservoir drogue en modulant la cintique de platination de lADN.19 Toutes les bases de lADN prsentent des sites potentiels de fixation de latome de platine (Figure 3). En condition physiologiques latome dazote N-7 des bases purines (guanine, adnine) semble tre prfr.20
18
= site de fixation directe = site de fixation aprs perte de H+ NH2 N3

1
O N
7 9 6 3
NH2
1
O HN 3 O N dR
NH NH2
N
7 9
6 3
N dR
N dR
N dR
Cytosine (C)
Guanine (G)
Adnine (A)
Thymine (T)
Figure 3. Les sites de fixation potentiels du cisplatine sur les bases nucliques de lADN.21
Au niveau de la double hlice dADN, diffrents types dadduits sont susceptibles de se tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 former. Initialement le mono-adduit est form, puis il volue vers des bis-adduits produisant des pontages intrabrin et / ou interbrins responsables du blocage de la rplication et la transcription (Figure 4). Les adduits majoritaires sont les intrabrin-1,2 d(GpG) (60-65%) et d(ApG) (20-25%).9,18 Les adduits minoritaires sont les intrabrins-1,3 d(GpNpG), les interbrins et les adduits ADN-protine.
Mono adduit
Adduits intrabrin
Adduit interbrins
Adduit ADN-protine
Figure 4. Natures des adduits du cis platine-ADN.
La formation majoritaire de ladduit intrabrin-1,2 d(GpG) sexplique par la gomtrie du complexe de platine. En effet, il a t montr que le transplatine, pour des raisons striques, nest pas capable de former ce type dadduit. Par contre, ce complexe forme prfrentiellement des adduits intrabrin-1,3 et interbrins. Lobservation de lactivit suprieure du cisplatine par rapport au transplatine sexplique par une faible activit de rparation des adduits intrabrin-1,2 par le systme de rparation de lADN (NER).22 Si ladduit de platine nest pas rpar, des mutations peuvent avoir lieu au cours des rplications successives. Par exemple, les adduits GG et AG conduisent des mutations de
19
type transversion G>T et A>T. Lorsque les brins muts sont transcrits, cela mne la production de protines dfectueuses, un grand dsordre cellulaire, et, finalement, lapoptose.23 Les adduits provoquent des torsions (Figure 5) ou des droulements de la double hlice, ce qui peut avoir des consquences lors de la transcription.
Des tudes par RMN 2D et par modlisation molculaire ont permis de mesurer les angles de torsion en prsence dadduits intrabrin-1,2 et -1,3. Dans le premier cas, on observe une courbure de lADN de 40 70 vers le grand sillon et dans le second une courbure de 27 33 vers le grand sillon. Pour un adduit interbrins, langle de torsion est de 20 40 vers le petit sillon.24 tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Figure 5. Reprsentation de la structure rsolue Figure 6. Structure du domaine A de la par RMN de loligonuclotide d(CCTGGTCC) protine HMG1 lie ladduit intrabrin.d(GGACCAGG) comportant ladduit intrabrin- 1,2 d(GpG) form par le cisplatine.25 1,2 d(GpG).24
La torsion de lhlice joue un rle majeur dans la reconnaissance de la lsion par les systmes enzymatiques impliqus dans la rparation de lADN. Cependant, les protines bote HMG (High Mobility Group) peuvent bloquer la rparation. En effet, elles possdent un domaine reconnaissant spcifiquement la torsion de lhlice au niveau des adduit intrabrin-1,2.9 Le rsidu phnylalanine (en jaune, Figure 6) de la protine HMG sintercale entre les bases de lADN, le complexe form empche ainsi toute autre reconnaissance de cette lsion par les systmes de rparation.26
20
I.2.4 Cisplatine, phnomnes de rsistance

Lun des problmes majeurs de lutilisation du cisplatine comme agent anticancreux rside dans la rsistance de certaines lignes vis--vis de cette drogue. Cette rsistance est intrinsque (exemple du cancer du colon) ou peut tre acquise suite des administrations rptes de cisplatine au cours du traitement (exemple du cancer des ovaires). Trois types de phnomnes ont t identifis comme modulant la rsistance : les changements de laccumulation intracellulaire de la drogue (influx et efflux), laugmentation de la production intracellulaire de molcules comportant des thiols et laugmentation de la capacit de la cellule rparer les adduits cisplatine-ADN. Jusqu rcemment, le cisplatine tait prsum pntrer dans la cellule de manire passive, car tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 les premires tudes montraient que sa biodisponibilit ntait ni saturable, ni inhibe par des analogues structuraux.27 Dautres tests avec des petites molcules qui inhibent les pompes Na+/K+ ont t raliss, ces dernires bloquent limport de cisplatine dans la cellule. Ces observations vont dans le sens dun transport du cisplatine dpendant du potentiel membranaire. De plus, lutilisation dagents naltrant pas la permabilit des membranes, mais modifiant la fonction des protines (benzaldhyde et autres aldhydes), affecte la disponibilit du cisplatine.28 Cette observation suggre que le transport de la drogue est assur par des protines de transport membranaires.
Des travaux rcents ont montr que le transport du cisplatine est li celui du cuivre(II). Il a t mis en vidence que les transporteurs CTR1 responsables de limport de cuivre dans les cellules pouvaient aussi rguler le transport du cisplatine dans certains modles.14,12 Par ailleurs, deux autres transporteurs du cuivre semblent aussi impliqus dans les mcanismes de rsistance ; il sagit des transporteurs ATP7A et ATP7B responsables de lexport de lexcs de cuivre (Figure 7).29 Dans certains modles la surexpression de ces transporteurs peut tre corrle avec les phnomnes de rsistance.
21
Mitochondrie
Adduits Pt-ADN
Noyau Golgi
Pompe
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Figure 7. Schma reprsentant les similarits pour le transport du cuivre et du platine dans la cellule.30
Il est souvent observ que les cellules rsistantes prsentent un taux lev en glutathion. Celui-ci est capable de se fixer spontanment, ou grce laction de la glutathion Stransfrase sur latome de platine. Le platine(II) selon la thorie HSAB (Hard and soft Acids and Bases) est un mtal mou et a donc une grande affinit pour les molcules soufres.31 Ce phnomne de fixation est important puisque 60 % du cisplatine intracellulaire est inhib par la complexation avec le glutathion. Les tudes ont permis didentifier des complexes cisplatine-glutathion forms dans le milieu intracellulaire (Figure 8).32
OH OH O O HO NH HS HN O H2N O H2N O HN S O N N O O OH HO O O O NH S NH2 HO O
Pt
Figure 8. Structure du glutathion et exemple dun complexe platine- glutathion.31
Les complexes Pt-glutathion sont excrts hors de la cellule par le systme de pompes exportatrices de conjugus soufrs ATP-dpendantes (MRP2 ; Figure 7) qui sont surexprimes chez certaines lignes tumorales rsistantes.33 La corrlation entre le taux de glutathion et la cytotoxicit du cisplatine est nuancer selon le type de cancer considr. Des tudes montrent cependant quil existe une corrlation entre
22
lexpression de lenzyme glutathion-S-transfrase et la rsistance au cisplatine, notamment dans les cas de cancer du colon, des ovaires et de la tte.12 Une autre protine de faible poids molculaire, la mtallothionine (Mt), riche en cystines, est prsente de manire leve dans les cellules rsistantes au cisplatine. Il a t rapport que dans le cas des cancers tte et cou, le cisplatine induisait une surexpression de la Mt, alors que cela nest pas observ dans le cas du cancer des testicules. 12 Dautres mcanismes sont impliqus dans les phnomnes de rsistance, notamment les systmes de rparation de lADN. Deux systmes sont souvent mis en avant pour expliquer les phnomnes de rsistance. Tout dabord, le systme enzymatique du NER (Nucleoside Excision Repair), qui est capable de reconnaitre et de rparer les pontages intra- et interbrins. En labsence de ce systme, les cellules deviennent hypersensibles laction du cisplatine. Ce tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 complexe multiprotique ATP-dpendant est capable de reconnaitre la torsion de lhlice induite par des adduits intrabrin-1,2. Aprs cette reconnaissance, il assure la coupure dun fragment de 27 29 paires de bases contenant la lsion. Pour rgnrer le double brin, lADN polymrase synthtise le fragment complmentaire (Figure 9). La rparation des adduits intrabrin peut tre bloque par la fixation de protines de type HMG (high-mobility group).
Adduit intabrin-1, 2
Reconnaissance de ladduit intabrin-1, 2 Et ouverture partielle de lhlice
rplication
Fixation du complexe Protique du MMR
Incision du brin dADN
Complexe Protique du MMR Cycle futile
Excision des nuclotides
Coupure
Coupure
Synthse ADN et ligation
Apoptose
ADN double brin intacte
Figure 9. Schma illustrant les tapes Figure 10. Schma illustrant la prise en charge dun pour la rparation de lADN par le msappariement, induit par ladduit intrabrin-1,2 systme du NER.22 d(GpG) form pas le cisplatine, par le systme du MMR. 22
23
Le second systme de rparation capable daffecter la cytotoxicit du cisplatine est le MMR (MisMatch Repair), qui est un systme enzymatique post-rplication. Comme dans le cas du NER, les cellules dficientes en complexes protiques sont beaucoup plus sensibles la drogue. La fonction du MMR est de scanner les nouveaux brins dADN forms et dexciser les nuclotides mal apparis (incorpors par lADN polymrase de manire non fidle) pour de les remplacer par les nuclotides corrects (Figure 10). La prsence des adduits du cisplatine mne des mutations au cours des rplications succssives. La multiplication de ces dernires dclenche un message dapoptose. Dans le cas o ladduit cisplatine-ADN est pris en charge par les protines du MMR, un cycle de correction se met en place permettant ainsi de diminuer le nombre de mutations et donc de ralentir le dclenchement du signal apoptotique. tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
I.2.5 Cisplatine, analogues utiliss en chimiothrapie

Les dsavantages inhrents au cisplatine ont stimul la recherche de nouveaux complexes de platine ayant une bonne activit tout en tant moins toxiques. Le carboplatine, loxaliplatine, et nedaplatine (Figure 12) sont actuellement utiliss en chimiothrapie pour certains cancers o lutilisation de cisplatine est inefficace.
O H3N Pt H3N O O Carboplatine O H2 N O Pt N O H2 Oxaliplatine
O O
H3N Pt H3N
O O
Nedaplatine
Figure 11. Complexes de platine utiliss en chimiothrapie.
Ces trois complexes antinoplasiques ont une structure commune constitue dun atome de platine li de faon covalente quatre donneurs. Deux dentre eux sont azots (comme pour le cisplatine), les deux autres sont issus dun ligand bidente oxygn, plus labile. En milieu cellulaire, ces composs subissent une hydrolyse pour conduire des complexes aqua. Cette hydrolyse est plus lente que celle du cisplatine, ce qui explique les diffrences de temps dincubation (plus longs) et de concentrations (plus leves) ncessaires pour obtenir une cytotoxicit similaire celle du cisplatine.34 Le carboplatine35 est trs utilis en chimiothrapie depuis 1986. Il possde un profil pharmacologique similaire celui du cisplatine et apparat comme lgrement moins
24
cytotoxique. Il est actuellement utilis en traitement du cancer des ovaires pour les patientes sensibles aux effets secondaires en raison dune moindre nphrotoxicit et neurotoxicit. Le nedaplatine36 est autoris depuis 1995 au Japon. Il possde une bonne activit antitumorale tout en ayant des effets secondaires moindres. Cependant, il prsente le mme spectre de rsistance que le cisplatine, ce qui rend son utilisation limite. Loxaliplatine37 a t slectionn car il prsente une meilleure efficacit et une toxicit plus faible que celle du cisplatine. Il ne prsente pas de rsistances croises avec le cisplatine. De plus, il est trs efficace pour les cancers colorectaux. Malgr lefficacit de ces agents thrapeutiques de deuxime gnration, la recherche de nouveaux complexes de platine continue pour amliorer les traitements chimiothrapeutiques.
I.2.6 Nouvelles gnrations de complexes de platine.

tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 I.2.6.a Les complexes de platine mononuclaires Une grande partie de ces nouveaux complexes ont t synthtiss dans le but dobtenir une ractiv diffrente de celle du cisplatine. Les modifications apportes permettent davoir une meilleure affinit pour lADN, et dans certains cas, de mieux cibler les cellules tumorales. Linconvnient majeur des complexes de platine reste leur grande affinit pour les ligands soufrs. Afin dempcher la dsactivation du complexe de platine par le glutathion, des complexes comportant des ligands pyridine ont t synthtiss. Lexemple le plus connu est celui du picoplatine (ou ZD0473, Figure 12), pour lequel lencombrement strique autour du mtal (interactions CH3 Cl et CH3 - NH3) provoque une rotation de la pyridine autour de laxe Pt N pour lamener hors du plan. La fixation du glutathion est alors ralentie car une des deux faces du carr plan est encombre.38
S N Pt H3N Cl Cl O S Pt
S O S
Picoplatine
Thioplatine
Figure 12. Exemples de complexes de platine mononuclaires
25
Des travaux ont t mens pour mieux cibler les tumeurs. Le but des ces stratgies est de tirer profit des caractristiques physiologiques des cellules, notamment le pH intracellulaire. Un pH voisin de 6,8 (ou infrieur) est souvent observ dans les cellules cancreuses alors que le pH des cellules saines est voisin de 7,2-7,4. En se basant sur cette observation, des complexes dont lactivit est pH-dpendante ont t proposs. Par exemple, dans le cas du complexe bis(O-thiocarbonato)platine(II) (thioplatine), les ligands sont fortement lis au mtal un pH suprieur 7 ; par contre, un pH infrieur 7, on observe une ouverture rversible dun des ligands soufrs pour former un complexe aqua ragissant alors avec lADN.39 Dautres stratgies ont t dveloppes afin damliorer la dlivrance du complexe actif travers les tissus tumoraux. Le lipoplatine est une nouvelle formulation du cisplatine sous forme de liposome. Cette encapsulation a t dveloppe afin davoir une meilleure tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 dlivrance du compos au sein des cellules tout en limitant les effets indsirables. Ce compos est actuellement en phase (III) de tests cliniques en combinaison avec le 5fluoruracile pour le traitement de cancers tte et cou.40 Certaines macromolcules qui normalement ne schappent pas du systme vasculaire sont capables de saccumuler dans les tumeurs solides. Ce phnomne, appel EPR (Enhanced Permeability and Retention) apparat comme un mcanisme par lequel des macromolcules anticancreuses saccumulent prfrentiellement (par rapport des analogues de plus bas poids molculaire) dans les tumeurs. Le copolymre N-(2-hydroxypropyl)mthacrylamide (HPMA) li un complexe de platine prsente une bonne activit antitumorale (Figure 13).41 Lintrt de ce polymre est quil nest pas immunogne pour une utilisation chez lhomme. Lorsque le complexe entre dans la cellule, le pont form par la partie peptidique est susceptible dtre hydrolys au niveau du lysosome librant ainsi le complexe platin dans la cellule.
26
C C H2 HN HO O
C C H2 HN O NH O
HN O NH NH3 H3N Pt N O O O O OH
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Figure 13. Structure chimique du complexe de platine li au copolymre HPMA.
Leffet cytotoxique des complexes de platine rsulte principalement des interactions avec lADN gnomique. Lide est daugmenter laffinit vis--vis de lADN afin de permettre laugmentation de lactivit anticancreuse. Selon le ligand choisi, on cherche galement former des adduits avec lADN structuralement diffrents et moins bien reconnus par les systmes de rparation. Lutilisation de ligands reconnaissant spcifiquement le petit sillon est souvent mise en avant dans les stratgies ciblant lADN. Ces ligands forment des liaisons hydrogne et crent des interactions de type van der Waals avec les bases nucliques. Lun des ligands, le plus rfrenc dans le domaine, est la distamycine (DIST). Ltude du complexe Pt-DIST (Figure 14) montre que ce dernier a la mme slectivit de squence que le cisplatine mais la proportion dadduits interbrins est augmente.42
Cl Cl N
Pt
H2N NH2 NH O N O N N H H N O N HN O
Figure 14. Structure chimique du complexe de platine conjugu la distamycine, ligand du petit sillon de lADN.
27
Lutilisation dagents intercalants permet de favoriser galement linteraction du complexe avec lADN. Les intercalants sont des molcules polyaromatiques, qui peuvent se placer entre les bases de lADN grce des interactions de type -stacking. Deux exemples de molcules comportant les htrocycles acridine43 et anthraquinone44 sont prsents ci-dessous (Figure 15). Ces complexes prsentent une bonne activit antitumorale et une plus faible toxicit que le cisplatine. Dans certains cas ils permettent mme de contourner les phnomnes de rsistance. Dautres complexes binuclaires comportant des intercalants fluorescents ont galement t tudis afin de suivre leur localisation intracellulaire.45
NH2 O N O NH-(CH2)nO O N H (CH2)n N Cl Pt NH2 Cl O O NH3 Pt O NH3
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Figure 15. Exemples de complexes de platine conjugus des agents intercalants de lADN.
Parce que le cisplatine montre une activit antitumorale suprieure celle de son analogue trans, il a t admis pendant longtemps que ce type de compos tait moins efficace. Or, il a t dmontr que toute une srie de complexes de gomtrie trans prsentait une meilleure cytotoxicit que leurs analogues cis.46 Cest le cas, par exemple, du complexe transPt(pyridine)2Cl2, o lon observe une bonne activit cytotoxique tout en diminuant la ractivit avec les biomolcules comme le glutathion.47 Ce complexe forme plus dadduits interbrins et prsente une meilleure accumulation cellulaire que le cisplatine. Lutilisation de ligands iminother comme dans les cas du trans-Pt(iminother)48 induit des contraintes striques, qui ralentissent fortement la raction dchange des chlorures. Les diffrentes configurations des complexes (EE, EZ et ZZ) ont t tudies, le complexe transEE tant le plus efficace. Ce complexe forme majoritairement des mono-adduits sur des rsidus guanine. Les rsultats pour le complexe trans-[Pt(isopropylamine)(dimthylamine)Cl2]49 montrent une cytotoxicit comparable celle du cisplatine pour les cellules sensibles ce dernier. De plus ce complexe forme plus dadduits interbrins.
28
Cl Pt N
N Cl O
Cl Pt N H
H N Cl
O Cl NH2 Pt NH Cl
Pt(pyridine)2Cl2
trans-Pt(iminother)
trans-[Pt(isopropylamine)(dimthylamine)Cl2]
Figure 16. Exemples de complexes platins de configuration trans.
Une approche originale a t mene par lquipe de Marinetti avec lutilisation de carbnes Nhtrocycliques (NHC) comme ligand de latome de platine. Si les complexes NHC sont souvent utiliss en catalyse organomtallique, des tudes biologique portant sur les complexes dargent, dor, de palladium, de ruthnium et de rhodium ont t rcemment menes dans les domaines tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 antimicrobiens et anticancreux. Les complexes de formule gnrale
(NHC)PtI2(amine) dont les configurations sont trans semblent avoir le mme mcanisme daction que les drivs trans du cisplatine.50
R1 N X N R2 R4 Pt NH R5 I I
Figure 17. Strucuture gnrale des complexes (NHC)PtI2(amine).
Les complexes de platine(II) sont souvent prsents comme des molcules trs ractives et peu stables dans les milieux biologiques. Lutilisation de complexes de platine(IV) apparat donc comme une approche complmentaire intressante. En effet, ils ont une meilleure stabilit et sont activs aprs une biorduction en platine(II) ; ces proprits permettant de rendre disponible jusqu la cible une plus grande proportion de molcules intactes. Le satraplatine51 (Figure 18) est un exemple de complexe de platine(IV) hxacoordin qui prsente un large spectre dapplications tout en tant moins toxique que le cisplatine. Il est actuellement en phase III dessais cliniques. Cette nouvelle molcule est dveloppe actuellement pour une possible administration par voie orale. Lorsque le platine(IV) rentre dans la cellule, il est rduit en platine(II), probablement par laction de lacide ascorbique ou du glutathion. Il perd ses deux fonctions actate et acquiert une gomtrie plane, similaire celle du cisplatine.
29
O O H3N Pt Cl N Cl H2 O O Satraplatine
Figure 18. Structure du Satraplatine, complexe de platine(IV) administrable par voie orale.
Une autre approche pour les complexes de platine(IV) est lutilisation de complexes prodrogue pouvant tre activs par irradiation ultra-violette. Cette approche a t dveloppe pour cibler laction du traitement aux seules cellules cancreuses. Sadler a tudi lactivit du complexe cis,trans,cis-[Pt(N3)2(OH)2(NH3)2] et celle de son isomre tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 trans,trans,trans-[Pt(N3)2(OH)2(NH3)2] en prsence et en absence dultra-violets.52 Dans le cas du premier complexe, il a t observ que ladduit d(GG) tait form rapidement par photo-activation. Durant les tests aucune rsistance commune avec celle du cisplatine na t mise en vidence. Nanmoins, lutilisation de ce nouveau type de complexes reste limite aux seuls cancers accessibles un rayonnement ultra-violets.
OH H3N Pt H3N OH N3 N3 OH N3 H3N Pt NH3 OH N3
cis, trans, cis-[Pt(N3)2(OH)2(NH3)2]
cis, trans, trans-[Pt(N3)2(OH)2(NH3)2]
Figure 19. Complexes de platine(IV) photoactivables.
I.2.6.b Les complexes de platine polynuclaires Les complexes polynuclaires comportant 2 ou 3 atomes de platine et dont la gomtrie des centres mtalliques est de configuration cis et/ou trans sont largement tudis. Ils prsentent la caractristique de former de nouveaux types dadduits platine-ADN moins facilement reconnaissables par les systmes de rparation. En effet, ils favorisent les pontages interbrins qui peuvent se faire parfois longue distance. Certains de ces complexes polynuclaires offrent de nouveaux modes de liaisons originaux tels que des liaisons non covalentes.
30
Les premiers exemples de complexes polynuclaires permettant de relier deux atomes de platine (cisplatine53, carboplatine54, transplatine55) comportent une chane aliphatique avec deux fonctions amine coordinant les mtaux (Figure 20).
O Cl Pt Cl NH3 H3N Pt Cl Cl O H3N Pt O O Pt O NH3 Cl O O
O H3N Pt Cl Cl Pt NH3
H2N(CH2)nNH2
H2N(CH2)nNH2 Bis-carboplatine
H2N(CH2)nNH2 Cl Bis-transplatine
Bis-cisplatine
Figure 20. Complexes bimtalliques de platine avec pont aliphatique.
Bass sur la mme ide, des complexes de platine cationiques de configuration cis et trans ont tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 t synthtiss (Figure 21).56 Les charges positives portes par le complexe permettent une meilleure solubilisation en milieu physiologique et une meilleure affinit avec lADN charg ngativement. Les atomes de platine forment des mono-adduits (un seul chlore labile par platine) pouvant mener des pontages longues distances. Dautres exemples de complexes bimtalliques ont t tudis, ils consistent remplacer un des NH3 par une picoline ou des pyridines pour obtenir des composs moins toxiques.57
2+ Cl Pt NH3 H3N NH3 H3N Pt NH3 Cl 2+
H3N Pt H3N
Cl
Cl Pt
NH3
H2N(CH2)nNH2 Configuration cis
H2N(CH2)nNH2
Configuration trans
Figure 21. Complexes cationiques binuclaires de platine avec pont aliphatique.
Des travaux ont t mens par la suite pour modifier les ponts aliphatiques en intgrant des polyamines naturelles (spermine, spermidine ; Figure 22).58 Lintrt de ces complexes est de pourvoir crer des liaisons hydrogne avec lADN et de favoriser une pr-association au niveau des sites de fixations. De plus, ces liaisons hydrogne aident la stabilisation des adduits longues distances.
31
H3N Cl Pt
H2 N
H2 N
H3N Cl N Pt H2 NH3
3+
NH3
H3N Cl Pt
H2 N
H2 N
H3N N H2 Cl N Pt H2 NH3
4+
NH3
Figure 22. Complexes cationiques binuclaires de platine possdant un pont driv dune polyamine naturelle (spermine, en bas ou spermidine, en haut).
Lintroduction dun troisime atome de platine au centre de lespaceur a permis davoir une activit cytotoxique prometteuse, conduisant au dveloppement du complexe BBR3464 pour des tests cliniques (Figure 23).59 Ce complexe est constitu datomes de platine monofonctionnels chaque extrmit et au centre, dun atome de platine ttracoordonn quatre tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 amines. Ces dernires peuvent interagir avec lADN par lentremise de liaisons hydrogne. Le profil cytotoxique de ce complexe est trs diffrent de celui du cisplatine, puisquil est trs actif sur les cellules tumorales rsistantes ce dernier. Ce complexe forme des adduits interbrins-1,4 et 1,5 qui ne sont pas reconnus par les protines HMG.21
H3N H3N Cl N Pt H2 NH3 4+
H3N Cl Pt
H2 N
NH3
H2 Pt N N H2 NH3
Figure 23. Complexe trinuclaire de platine BBR3464.
Un autre complexe trinuclaire a permis de mettre en vidence une interaction avec les fonctions phosphodiesters de lADN. Le complexe Triplatine NC prsente trois centres de platine saturs par des amines, ce qui ne permet pas de former des adduits avec les bases nucliques.60 Le mode daction de ce complexe possdant 8 charges positives passe par ltablissement de liaisons hydrogne avec les atomes doxygne des fonctions phosphates (charges ngativement).
H2 N H3N Pt NH3 H2 N Pt H3N N H2 NH3 8+
H3N
N H2
H2 N H3N
NH3 Pt N H2 NH3
Figure 24. Complexe trinuclaire de platine Triplatine NC.
32
Reedijk et collaborateurs ont synthtis des complexes binuclaires possdant des ponts rigides de type pyrazolate ou 1,2,3-triazolate (Figure 25).61 Ces complexes aux designs originaux possdant des ponts courts permettent de former des adduits intrabrin-1,2 en minimisant les torsions de la double hlice. Cette approche permettrait une faible reconnaissance de ladduit par le systme de rparation et donc une meilleure cytotoxicit.
2+ 2+
N N N NH3 H3N Pt Pt O NH3 H3N H H3N N N NH3 Pt Pt O NH3 H3N H
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Figure 25. Complexes binuclaires de platine comportant des ligands pyrazolate et 1,2,3triazolate.
Le mode daction de ces complexes diffre fortement de ceux ayant comme ligands des chlorures. En effet, la fixation dune guanine sur un des atomes de platine provoque le dpart dun ligand hydroxo (Schma 2). Par la suite, une seconde guanine substitue ce groupement pour donner ladduit binuclaire final.
2+ N N NH 3 Pt Pt O NH3 H3N H 2+ N N Pt H3N Pt -OH N N Pt H3N G Pt 3+
H3N
H3N
NH3
H3N
NH3
OH G NH3
G NH3
Schma 2. Mcanisme de la substitution du ligand hydroxo par les guanines sur le complexe biplatine-pyrazolate.
Une tape supplmentaire est observe dans le cas des composs de type 1,2,3-triazole. Aprs la fixation de la premire guanine, une migration de latome de platine de la position N-2 vers la position N-3 du triazole est observe avant larrive de la deuxime guanine (Schma 3).
2+
N N N H3N NH3 G Pt Pt O NH3 H3N H N NH3 H 3N Pt Pt H3N OH G NH3 N N
2+
H3N H3N Pt
2+
N
3+
H3N H3N Pt G
N N N Pt NH3
OH
N N Pt
NH3
-OH
G NH3
G NH3
Schma 3. Mcanisme de la substitution du ligand lhydroxo par les guanines sur le complexe biplatine-1,2,3-triazolate.
33
Dans ce cas, ladduit form avec lADN permet daccder une plus grande distance interplatine62 et une flexibilit propice la formation dadduits intrabrin-1,2 tout en ne provoquant que des distorsions minimes de lADN bicatnaire. Une autre classe de complexes dinuclaires a t synthtise par lquipe de Broomhead. Le pontage entre les deux atomes de cisplatine est assur par le ligand 4,4-dipyrazolylmthane (Figure 26). Dans un premier temps, ce sont les complexes doublement ponts63 qui ont t dvelopps, puis par la suite, des complexes monoponts64 rappelant ceux de Farrell. Dune manire gnrale, ces complexes neutres prsentent une bonne activit antitumorale, mais leur faible solubilit aqueuse prsente un rel inconvnient pour ltude de cette drogue lors dessais cliniques.
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
HN Cl Cl
NH N N N N
Cl Cl Cl Cl
Pt
HN
NH3 N
H3N N
Pt
NH
Cl Cl
Pt
HN
Pt
NH
Figure 26. Complexes binuclaires de platine comportant le ligand 4,4-dipyrazolylmthane.
34
I.3. Complexes de cuivre : coupure oxydative de lADN

I.3.1 Coupure oxydative (gnralit)
Les dommages oxydatifs de lADN, qui sont des vnements relativement courant au sein de la cellule, peuvent mener des mutations, des cancers ou la mort cellulaire.65 Ces lsions peuvent tre causes par des radiations ionisantes66, la photo-oxydation67, la formation de peroxyde dhydrogne via lintervention de mtaux de transition68 et dautres espces ractives de loxygne comme le radical hydroxyle via les ractions de Fenton et dHaberWeiss.
Raction de Fenton Rduction par le superoxyde

tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Fe
2+
H2O2 O2
.-
Fe
3+
OHO2 OH-
OH
Fe3+ O2.-
Fe2+ O2
Raction de Haber-Weiss (Raction bilan)
H2O2
OH.
Pour prserver lintgrit du gnome, les organismes possdent diffrents mcanismes de dfense : la dltion et la rparation du brin ls, larrt du cycle cellulaire pour stopper la transmission du gnome endommag ou incomplet et lentre en apoptose afin dliminer les cellules endommages. Diffrents mcanismes ont t identifis pour la rparation de ces lsions69 : la rparation par excision de base (BER), la rparation par excision de nuclotide (NER), la rparation des coupures double brin (NHEJ) la rparation des pontages interbrins (HR)
Il existe trois grandes voies pour induire des coupures simple ou double brin de lADN : loxydation des bases nucliques70, lhydrolyse des groupements phosphate71, loxydation du dsoxyribose.72 Loxydation des bases nucliques ninduit que trs rarement une coupure directe de lADN. Une deuxime tape est ncessaire pour aboutir la coupure du double brin, comme une temprature leve, labsence dune base (site abasique) ou le traitement par une enzyme (exemple glycosylase).73 Lhydrolyse de la liaison phosphodiester est un mcanisme naturel, utilis par certaines enzymes une coupure du brin. Il est galement utilis par certains composs synthtiques.74 35
Loxydation du dsoxyribose peut mener directement des coupures : cela commence par labstraction dun atome dhydrogne du sucre suivi par un rarrangement pour mener llimination de la base et la rupture des liaisons phosphodiesters reliant les nuclosides. Cest la blomycine qui a t la premire molcule identifie comme tant capable de couper lADN par loxydation de lunit monosaccharidique. Elle est utilise cliniquement contre les lymphomes, les cancers tte et cou. Cette molcule est forme de trois domaines (Figure 27) : Le domaine 1, constitu par une pyrimidine, une -amino-alanine et un hydroxyimidazole, joue le rle de chlateur du mtal ajustant le potentiel rdox, et est donc responsable de lactivit de ce dernier (Figure 27, sites de liaisons avec le mtal). tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 Le domaine 2, constitu par la partie bithiazole et la chane charge positivement, permet la fixation lADN et la reconnaissance de squences spcifiques. Le domaine 3, constitu par lunit disaccharidique, serait responsable de laccumulation du complexe mtal-blomycine dans les cellules cancreuses. La blomycine possde donc la capacit chlater des ions mtalliques comme le fer et le cuivre quelle recrute en milieu physiologique. Les complexes mtal-blomycine peuvent tre activs en prsence de dioxygne et dun rducteur pour fournir des radicaux oxygns.
Domaine 1 O NH2
NH2
H2N O H2N N
NH
Domaine 2
N
O HO O N H O HO
O N H N S S N O H N S
-N
O HO OH O OH O O OH Domaine 3 O
N
NH OH OH
O NH2
Figure 27. Structure de la blomycine (forme dprotonne) et de son site de liaisons aux mtaux (en rouge).75
Depuis la dcouverte de la blomycine, une grande varit de complexes a t synthtise pour mimer son activit. Les deux complexes les plus tudis pour la coupure oxydative de la 36
partie dsoxyribose sont le [FeII/III(EDTA)]76 (EDTA : EthylneDiamineTetraActate) et le [CuI/II(phen)2]77 (Phen : 1,10-Phnanthroline)(Figure 28).
O O Fe O O O O N N O N
N O
Cu
N
Figure 28. Structures des complexes [FeII/III(EDTA)] 2-/-et [CuI/II(phen)2]+/2+.
La raction du [FeIIEDTA]2- en prsence de peroxyde dhydrogne est bien connue. Elle est utilise comme outil lors danalyses structurales de lADN et de footprinting des complexes protine-ADN ou des complexes molcule-ADN.78 tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 Le complexe [CuI/II(phen)2] +/2+ prsente une bonne activit biologique et lui aussi a t utilis comme agent de coupure lors de tests de footprinting. Malheureusement, la faible constante dassociation K2 du deuxime ligand phnanthroline, ainsi que le manque de slectivit de squence font que son utilisation est reste relativement limite.
I.3.2 Mcanisme de coupure de lADN par le complexe [CuI/II(phen)2] +/2+

Le premire exemple rapport de complexes synthtiques mimant lactivit de nuclases est le complexe [CuI/II(phen)2]+/2+.79 La raction de coupure de lADN par ce complexe a lieu en prsence de H2O2 ou doxygne molculaire et dun agent rducteur. Le complexe ne contenant quune seule phnanthroline, est quant lui moins actif.79 Pour favoriser la formation du complexe 1:2 (cuivre : phnanthroline), un large excs de phnantroline par rapport au cuivre est ncessaire.80 La gomtrie des complexes cuivre-phnanthroline est dpendante du degr doxydation du mtal. La gomtrie passe dun ttradre pour un cuivre(I) une bipyramide trigonale ou une pyramide base carre pour un cuivre(II).81 Ltablissement dune interaction du complexe [CuI(phen)2]+ avec lADN est importante pour lactivit de coupure. Il a t montr que le complexe est capable de sintercaler entre les bases de lADN au niveau du petit sillon.82 Les tudes de modlisation portant sur linteraction du complexe avec lADN montrent que le ligand 1,10-phnanthroline est
37
partiellement intercal au niveau dun motif ApT, lautre ligand restant tourn vers lextrieur (Figure 29).
Figure 29. Modle de lintercalation du complexe [Cu I/II(phen)2] lADN.83
+/2+
dans le petit sillon de
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Le complexe amne une coupure relativement slective des squences 5-TAT, mme si dautres squences comme TGT, TAAT, TAGT, TAGC et CAGT ont t rapportes.84 Lactivit de coupure dpend aussi de la structure de lADN, le complexe est trs efficace sur lADN-B, moins sur lADN-A et quasiment inactif sur lADN-Z et lADN simple brin. Un effet de proximit avec lADN joue donc un rle cl dans le mcanisme de coupure, ce qui nest pas tonnant puisque les radicaux oxygns ractifs ne peuvent diffuser sur de grandes distances avant de ragir.84 Des tests ont t mens pour mettre en vidence les espces responsables de la coupure oxydative. Il a t tabli que lorsque le complexe [Cu I(phen)2]+ intercal ragit avec le peroxyde dhydrogne ou le dioxygne, il forme une espce active de type Cu(phen) 2-oxo (Figure 30). La nature exacte de cette espce reste inconnue. Le schma ci-dessous prsente le mcanisme menant aux dommages oxydatifs de lADN.
2 Cu(II)(Phen)2 2 Cu(I)(Phen)2 2 O2 . Cu(I)(Phen)2 Cu(Phen)2-"oxo"
2 RS2 O2 2 H+ H2O2 ADN
2 Cu(I)(Phen)2 2 Cu(II)(Phen)2 H2O2 O2
RS-SR 2 O2 . -
Cu(Phen)2-"oxo" Cu(II)(Phen)2 Dommage ADN
Figure 30. Mcanisme doxydorduction du complexe [CuI/II(phen)2]+/2+ menant la coupure de lADN.85
38
La premire tape est la rduction du complexe initial de cuivre (II) en complexe [CuI(phen)2]+ par des molcules soufres comme le glutathion. Dans une deuxime tape le dioxygne oxyde le complexe [CuI(phen)2]+ pour former le [CuII(phen)2]2+ et lanion superoxyde O2-. La participation de lion superoxyde a t mise en vidence par des tests dinhibition en prsence de superoxyde dismutase (SOD).86 La formation de peroxyde dhydrogne na pas t totalement prouve, mais des inhibitions de la coupure ont t mesures en prsence de catalase.86 Enfin, la raction entre le peroxyde dhydrogne et le complexe [CuI(phen)2]+ conduit lespce oxo qui va ragir avec lADN. Les produits de coupure gnrs sont typiques dune attaque par le radical hydroxyle. Dautres tests ont t raliss en prsence de scavengers de radicaux hydroxyles, dans ce cas la raction de coupure nest pas inhibe.87 Ces derniers rsultats ont t expliqus en considrant lencombrement strique au niveau de la rgion de ladduit ADN-[CuI/II(phen)2]2+/+ empchant laccs aux tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 scavengers. La voie doxydation faisant appel aux radicaux hydroxyles nest donc pas totalement exclure. Le complexe Cu(phen)2-oxo activ est capable darracher les hydrognes ports par les carbones C1, C4 et C5 du dsoxyribose. Les mcanismes dlimination de ces hydrognes sont prsents dans la figure 31. Loxydation du carbone C1 est mise en vidence par la dtection de la 5-mthylnefuranone (5-MF)88. La premire tape consiste en labstraction de lhydrogne H1 par le complexe Cu(phen)2-oxo. Ensuite, le radical est oxyd en carbocation, probablement par le complexe. Aprs raction avec leau, la base nuclique est limine pour gnrer le site oxyd abasique. Cette dsoxyribonolactone est stable, il faut une temprature leve ou un traitement alcalin pour aboutir la coupure du brin dADN.89 Dans le cas du [CuI/II(phen)2]+/2+, le complexe catalyse cette tape.90 La coupure du brin dADN est ralise par une premire -limination qui libre lextrmit 5-phosphate. Une seconde -limination libre lextrmit 3phosphate et le 5-MF.
39
Oxydation de C1
5-MF
-limination -limination
Oxydation de C4
Grob rarrangement
3-phosphoglycolate
Propanal base
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Criegee rarrangement
Oxydation de C5
furfural
Coupure directe -limination -limination
Figure 31. Mcanismes proposs pour loxydation des carbones C1, C4 et C5 du dsoxyribose. Les produits 5-MF, 3-phosphoglycolate et furfural ont t isols et purifis.91
Loxydation du carbone C1a t identifie comme tant la voie majoritaire de coupure de lADN dans le cas du complexe [CuI(phen)2]+. Ceci a t dmontr en conduisant une hydrolyse en milieu aqueux marqu loxygne 18 (Figure 32). En fin de raction, latome doxygne radioactif
92
se
trouve
incorpor
sur
le
groupe
carbonyle
de
la
5-
mthylnefuranone.
Cu(I)(Phen)2 H2O2
O OP O O H
Base H
H218O
O O P OH O O HO P O O
H H H
O H
O18
O H O PO O
Base
Figure 32. Mise en vidence du mcanisme de coupure de lADN par le complexe 1,10phenanthrolinecuivre(I) en prsence de peroxyde dhydrogne.97
40
Dans le cas de loxydation du carbone C4, les fragments typiques de type 3phosphoglycolate sont observs. Les deux voies conduisant loxydation de la position C4 sont prsentes dans la figure 31 (voie A et B). Ces deux voies ont en commun labstraction de lhydrogne H4 du dsoxyribose. Pour la voie A, une coupure de la liaison C3-OP pour librer le fragment 5-phosphate est propose. Le radical-cation form ragit avec une molcule deau pour conduire au radical localis en C4. Aprs addition de ce dernier sur le dioxygne et capture dun proton, un rarrangement de type Grob 93 a lieu et une dernire tape de -limination permet la libration de lextrmit 3-phosphoglycolate.94 La voie B est propose dans le cas du complexe Fe-blomycine95. Le radical positionn en C4 ragit avec le dioxygne pour former un radical peroxyde qui est ensuite transform en tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 hydroperoxyde. Ltape suivante correspond un rarrangement de type Criegee 96. Ce rarrangement est classiquement catalys par un acide,94 mais il a t suggr que la blomycine pouvait jouer le rle dacide de Lewis.97 Dans la dernire tape, la base nuclique est limine, le 3-phosphoglycolate et le propnal sont librs. La voie doxydation du carbone C5 dbute par labstraction de lhydrogne H5. Ensuite, la coupure de lextrmit 3-phosphate conduit la coupure directe du brin dADN. Le chauffage du fragment C5-aldhydique dans des conditions alcalines modres induit une limination qui libre du furfural. Nanmoins, loxydation du carbone C5 est une voie minoritaire pour linduction de la coupure de lADN par le complexe [CuI/II(phen)2]+/2+.
I.3.3 Exemples de complexes bass sur le systme Cu(phen)2.

Ce paragraphe se veut illustratif des diffrentes stratgies mises en uvre pour le design de nouveaux complexes de cuivre mimant lactivit de nuclases et prsente lintrt de ces nouveaux complexes. De nombreuses stratgies ont t dveloppes pour amliorer le systme [CuI/II(phen)2]+/2+. Elles consistent remplacer la deuxime phnanthroline par des acides amins98, des ligands multifonctionnels atomes donneurs N, S, et O99, des sulfonamides100 ou des peptides.101 Dans ce type de systmes, la partie phnanthroline/cuivre conserve son activit de coupure, le second ligand modifie son interaction avec lADN.
41
Linduction dune coupure slective dune squence a elle aussi fait lobjet de nombreuses tudes. Cette stratgie consiste introduire sur une phnanthroline un compos ciblant une partie de lADN. Par exemple, la phnanthroline a t lie diffrentes protines 102 pour dterminer leurs sites de liaisons spcifiques avec lADN. Des oligonuclotides ont t attachs pour induire des coupures slectives de squence.103 Enfin, la phnanthroline a t connecte des intercalants104 ou des ligands du petit sillon105. Nanmoins, comme ces complexes ne comportent quune phnanthroline, leur activit reste faible.106 Pour pallier ces difficults, des ponts de type srinol (clip) en position 2 ou 3 ont t utiliss afin de relier deux 1,10-phnanthrolines et de donner les complexes stables Cu (2-clip-phen) ou Cu (3-clip-phen).107 Ces deux complexes sont respectivement 2 et 60 fois plus efficaces que leurs analogues non ponts.108 tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
3 2
O NH2
O O
NH2
N N
N N O
2-Clip-Phen
3-Clip-Phen
Figure 33. Structure des ligands Clip-Phen.
Afin daugmenter la slectivit de squence mdiocre de ces complexes, lamine du groupement srinol a t fonctionnalise avec des ligands spcifiques du petit ou du grand sillon. Lquipe de Piti a utilis des analogues de la distamycine 109, ligand du petit sillon, afin daccroitre la slectivit de coupure au niveau dune succession de paires de bases A:T. Dautres complexes du mme type ont t synthtiss comme le 2-clip-phen conjugu une polyamine naturelle (la spermine) prsentant une grande affinit pour lADN. 110 Le complexe mtallique correspondant possde une bonne activit de coupure mais ne prsente aucune spcificit de squence. Enfin, des complexes Cu(3-clip-phen) ont t fonctionnalis avec des groupements acridine111, qui sont de bons intercalants mais galement des molcules pntrant rapidement dans la cellule. Dune manire gnrale, les complexes Cu(3-clip-phen) fonctionnaliss avec des molcules ayant une affinit pour lADN ont une meilleure activit de coupure que le complexe de clipphen non fonctionnalis.
42
3-Clip-Phen-dystamycine
O N N N N O
H N O
O N H
H N O
N H N O N O H N O HCl H N N
2-Clip-Phen-spermine O
O O N N N H
H N O
H N
N H
NH2
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
3-Clip-Phen-acridine
O N N N N O
O N H (CH2)n N H N
Figure 34. Exemples de structures de ligands clip-phen conjugus.
Des complexes htrodinuclaires possdant deux fonctions distinctes ont t raliss avec les ligands 3-clip-phen.112 Lassociation du complexe Cu(3-clip-phen) avec un complexe de platine (agent alkylant) donne de bons rsultats. En effet, il a t remarqu que la coupure induite par ces complexes bimtalliques se trouvait proche des sites daffinit du cisplatine (dAG, dGG). Le platine jouerait donc un rle dancre, ce qui forcerait le complexe de cuivre couper lADN proximit des adduits platins.113
O N H O
N N
CuCl2
N
(CH2)n NH Cl
Pt
NH2 Cl
Figure 35. Exemple de structure de complexe htrobinuclaire Cu(3-clip-phen)-platine.
43
I.3.4 Autres exemples de complexes de cuivre pouvant provoquer une coupure de lADN
Le Cu(II)-hydroxysalen est un exemple parmi les complexes capables doxyder lADN sans participation dagent activant.114 Il forme spontanment une espce oxyde Cu(III). La position des groupes hydroxyles a une influence sur lactivit de coupure. Il a t montr que les isomres ortho et para gnraient lespce cuivre(III) spontanment alors que lisomre mta en est incapable. Un exemple plus rcent de complexe capable de sauto activer est le Cu(pyrimol)Cl, issu de la raction du CuCl2 avec un ligand Hpyrimol. 115
N Cu O
N O OH O N Cu Cl N
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
OH
Cu(II)-hydroxy-salen
[CuII(Pyrimol)Cl]
Figure 36. Exemples de complexes de cuivre oxydant lADN.
La recherche sur les complexes multi-nuclaires conduit sintresser leur capacit reconnaitre des squences spcifiques. Lquipe de Karlin a mis au point le complexe (Tri)Cu3, molcule possdant 3 atomes de cuivre coordins par des ligands 2,2dipyridylamine. Ce complexe trinuclaire reconnait spcifiquement des jonctions entre simple et double brin.116
N N
Cu(II) N
N (II)Cu N N N N Cu (II) N
Figure 37. Complexe trinuclaire de cuivre (Tri)Cu 3.
44
Diverses tudes de lactivit de coupure de lADN, bases sur les complexes cuivre(II) daminoglycosides ont t menes. Parmi ces aminoglycosides, citons la nomycine B117, la kanamycine117 et lapramycine.118 Ces complexes sont capables de couper lADN et lARN de diffrentes manires, soit par hydrolyse, soit par oxydation du dsoxyribose.
NH2 HO HO H2N H2O O O O HO NH2 O O NH2 O NH2
H2O Cu H2O N HO OH2 H2
Figure 38. Complexe cuivre-Kanamycine.117
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
45
I.4. Chimie click : Raction de cycloaddition 1,3-dipolaire alcyneazoture catalys par le cuivre(I).
I.4.1 Le concept de la chimie click
Le concept de chimie click a t introduit en 2001 par Sharpless.119 Il dfinit un groupe de ractions chimiques quasi parfaites, varies et simples mettre en uvre. Les quatre classes de transformations sont les suivantes (Figure 39) : tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 Les cycloadditions despces insatures ; particulirement les ractions de cycloaddition 1,3-dipolaire Azoture Alcyne (CuAAC) et de Diels-Alder. Les substitutions nuclophiles, particulirement les ractions douvertures dhtrocycles contraints comme les poxydes, aziridines, sulfate cycliques, sulfamide cycliques et les ions aziridinium et pisulfonium. La chimie des carbonyles non enolisables, comme la formation dures, de thioures, dhtrocycles aromatiques, doximes et de leurs ther, dhydrazones et damides. Les additions sur des liaisons multiples carbone-carbone, c'est--dire les ractions doxydation telles que les poxydations, les dihydroxylations, les aziridinations et certaines additions de Michal.
Addition sur liaison C=C

OR2
R2O
R1
X R1
X = O, NR, +SR, +NR2
Cycloaddition de Diels-Alder
R1
[X] Catalyseur Nuc
R3-N3
Source naturelle [O] Cu(I)
XH Nuc
Ouverture de cycle par attaque nuclophile
N N R2
N R1
O R1 R2
R3X-NH2
R3X R1
N R2
Cycloaddition 1,3dipolaire de Huisgen
Chimie des carbonyles non nolisables
Figure 39. Schma prsentant lensemble des ractions de chimie click.
46
Pour quune raction puisse tre considre comme click , celle-ci doit rpondre un certain nombre de critres120 : tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 La raction doit tre modulable et doit sappliquer un large spectre de substrats La raction doit tre efficace et donner de bons rendements Elle ne doit pas fournir de sous-produits, ou seulement des sous-produits inoffensifs et facilement sparables Si la molcule possde des strocentres, la raction doit tre strospcifique Le chimiste doit avoir facilement accs au matriel de dpart Les ractions doivent tre menes sans solvant ou avec un solvant bnin Les techniques de purification doivent tre simples
Depuis ces dernires annes, la chimie click est trs utilise linterface chimie-biologie, en catalyse et pour fonctionnaliser des matriaux. Parmi toutes les ractions de la chimie click, la cycloaddition CuAAC demeure ce jour la raction la plus tudie.
I.4.2 Cycloadditions de Huisgen

Les cycloadditons 1,3-dipolaires de Huisgen regroupent les ractions dun dipolarophile (alcne, alcyne, carbonyle ou nitrile) avec un compos 1,3-dipolaire (azoture, oxyde de nitrile, diazo-alcane) qui conduisent la formation dun htrocycle cinq chanons.
N N R1 N R2 R3 R1 N N R2 N R3 N N R2 N R1 R3
Schma 4 . Un exemple de raction de Huisgen.121
Ces ractions, initialement dcouvertes par Michael la fin du 19me sicle, puis dveloppes par Huisgen partir de 1963 requirent des tempratures leves et ne sont gnralement ni strospcifiques, ni rgiospcifiques. Par exemple, la cycloaddition [2 + 3] dun azoture et dun alcyne vrai produit un mlange de rgioisomres 1,4 et 1,5.
47
N N R1 N1
4
R2 Cu(I) Conditions thermiques N R1 Ru(II)
N N R1 N1
4
+ N R1 N 1 N
5
R2
R2 Mlange
R2
N R1 N 1 N
5
R2
Figure 40. Schma prsentant les produits obtenus par la cycloaddition 1,3-dipolaire dun azoture et dun alcyne dans les conditions thermiques ou en prsence de catalyseurs cuivre(I) ou de ruthnium(II).
En 2002, le groupe de Meldal introduit lutilisation des sels de cuivre (I) pour catalyser cette tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 cycloaddition122, permettant la synthse rgioselective, temprature ambiante, dun triazole disubstitu en position 1 et 4 : la CuAAC est ne. Cette raction a t dveloppe en parallle par le groupe de Sharpless qui propose rapidement un premier mcanisme.123 Dautres sels mtalliques ont galement t tests (NiCl2, PtCl2, PdCl2).124 Le catalyseur base de platine prsente une activit significative par rapport la raction non catalyse, mais la cintique est 10 fois plus lente que dans le cas de CuBr. Enfin, il apparat intressant de noter que certains catalyseurs base de ruthnium favorisent la formation de lisomre 1,5 lors de la cycloaddition, comme dmontr par le groupe de Sharpless.125 Cependant, cette raction ne peut tre considre comme click car elle ne se droule pas dans leau et de plus ncessite un chauffage du milieu ractionnel.
I.4.3 Les sources de cuivre pour la cycloaddition 1,3-dipolaire azoture-alcyne catalyse par le cuivre (I) (CuAAC)
Le cuivre (I) est reconnu comme le mtal de choix pour catalyser la cycloaddition azoturealcyne. Diffrentes mthodologies ont t dveloppes pour gnrer la forme cuivreuse du catalyseur. Le tableau 2 rsume les principaux systmes (catalyseurs et solvants) cits dans les publications traitant de la chimie click. Meldal et collaborateurs ont par ailleurs tabli la liste exhaustive des sources de cuivre(I) utilises ainsi que les conditions associes entre 2001 et 2008.126
48
Degr doxydation initial I Cu
Catalyseurs
Additifs
Bases additionnelles Trithylamine 2,6-lutidine DIPEA Aucune Aucune
Solvants
CuI CuBr Cu(PPh3)3Br CuSO4.5H2O Cuivre mtal Poudres/nanoparticules
aucun
CuII Cu0
Acide ascorbique Sel dammonium
DMF THF Tolune MeCN H2O/Alcool 1:1 H2O/Alcool 2:1
Tableau 2. Rcapitulatif des principaux systmes catalytiques pour la CuAAC.
I.4.3.a Formation du catalyseur cuivre(I) par rduction des sels de cuivre(II). La mthode la plus commune pour former un sel de Cu(I) consiste rduire des sels de tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 cuivre(II), comme le sulfate de cuivre pentahydrat (CuSO4.5H2O), par laction dun excs dacide ascorbique. Lactate de cuivre(II) peut aussi tre utilis comme source de cuivre(II) en prsence dautres agents rducteurs tels que lhydrazine ou la tris(2-carboxythyl) phosphine (TCEP). Cette raction est le plus souvent ralise dans un mlange eau-alcool mme si des co-solvants organiques (DMSO, THF, DMF) sont galement utiliss. Cette mthode est peu couteuse et se droule dans une atmosphre oxygne. Une alternative consiste utiliser des ligands stabilisant latome de cuivre dans son degr doxydation +1, tout en augmentant son activit. Le premier mcanisme propos pour la CuAAC est prsent dans le schma 5. La premire tape consiste en laddition du cuivre(I) sur lalcyne aprs limination du proton terminal. Le complexe dactylure de cuivre (I) form interagit avec lazoture, activant ainsi lattaque nuclophile du carbone sur latome dazote terminal afin de former un mtallacycle. Il sensuit une contraction du cycle (limination rductrice) pour former le complexe triazolure de cuivre. Enfin, le triazole attendu est gnr par une protonation, entranant la libration du cuivre qui peut rentrer dans un nouveau cycle catalytique.
49
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Schma 5. Mcanisme propos pour la CuAAC en prsence dun ligand.
Lutilisation de diffrents ligands chlatants htrocycliques azots a t rapporte. Certains de ces ligands sont eux-mmes issus dune raction click et peuvent comporter 1, 2 ou 3 groupements triazoles (Figure 41).
127
Parmi
ces
ligands
on
retrouve
la
tris-
(benzyltriazolylmthyl)amine (TBTA)
et la tris-(hydroxypropyltriazolylmthyl) amine
(THPTA).128 Cette dernire forme un complexe de cuivre(II) trs soluble dans leau et stable sur le long terme. Ces ligands permettent dacclrer fortement les ractions de CuAAC.
N N N NH2
R N N N
R = benzyl (TBTA) R = 3-hydroxypropyl (THPTA)

N N N R
R N
N N N N H N N N
N N N
Figure 41. Exemples de ligands triazoles et polytriazoles pour la CuAAC.
50
Les ligands possdant trois benzimidazoles ou benzothiazoles ont montrs eux aussi une bonne activit.129 Les tudes menes par le groupe de Finn suggrent que ces nouveaux ligands sont plus fortement lis au cuivre que dans le cas de leur analogue tris(triazolylmthyl)amine.
S N S N
NH N HN N
KO2C
N N N N
CO2K
N S
H N
N N
CO2K
(Bth)3 tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
(BimH)3
(BimC4A)3
Figure 42. Exemples de ligands de type benzimidazole et benzothiazole pour la CuAAC.
Les drivs de la pyridine ont galement fait lobjet de nombreuses tudes afin dvaluer leur efficacit catalytique. Avec ce type de bases/ligands de meilleurs rsultats sont obtenus en utilisant des sels de cuivre(I) comme CuI. Le disulfonate de la bathophnanthroline130 prsente une efficacit similaire voir suprieure celle du standard TBTA.
N
N N
N
Me N Me
NaO3S
SO3Na
DMAP
2,6 lutidine
bipyridine
driv de la bathophnanthroline
Figure 43. Exemples de ligands de type pyridine et phnanthroline pour la CuAAC.
Des drivs dimine comme les pyridylimines ont t utiliss pour la CuAAC.131 Ces additifs prsentent linconvnient dtre peu stables (ils doivent tre stocks 0C et sous atmosphre inerte), nanmoins, le ligand tetradent de type de benzimidazolylimine possde quant lui une meilleure stabilit.132 Il donne une bonne activit dans un mlange actonitrile/eau. Dautres ligands utilisables en milieux non hydroalcooliques ont galement fait lobjet dtudes. Par exemple, lquipe de Finn a montr que les ligands azots de types bis(oxazolinyle)pyridine ou pybox permettaient dacclrer la raction de cycloaddition
51
dans le dichloromthane tout en induisant une enantioslectivit par rsolution cintique dun racmique.133
O N N
N N
Et N N
N N N
Et
NH
HN
pyridylimines
benzimidazolyl-imine
bis(oxazolinyle)pyridine (pybox).
Figure 44. Exemples de ligands contenant les fonctions imines et oxazoline pour la CuAAC.
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Les phosphoramidites sont aussi efficaces pour acclrer la raction de cycloaddition 1,3dipolaire catalyse par le cuivre.134 Lavantage de ces ligands est la solubilit de ses complexes en milieu apolaire organique, ce qui permet de raliser les ractions de CuAAC en conditions homognes, ce qui est favorable certaines applications. Ils peuvent tre utiliss aussi bien avec des sels de cuivre(II) en prsence dacide ascorbique quavec des sels de cuivre(I).
O P O N
Figure 45. Exemple de ligand phosphoramidite pour la CuAAC.
Il existe un cas particulier de complexe de cuivre(II) actif qui ne ncessite pas laddition dun rducteur pour catalyser la raction de cycloaddition. Ce complexe contient un ligand soufr, le bis(2-benzylthio)thyl)amine capable de stabiliser le cuivre. Ce catalyseur a t utilis pour la raction de CuAAC o lazoture est form in situ.135 Le mcanisme nest pas encore tabli.
NH S Cu S OH2
OTf
TfO
Figure 46. Complexe cuivre(II) actif sans rducteur pour la CuAAC.
52
Enfin, Zhu rapporte rcemment que lactate de cuivre(II) seul est capable de catalyser la raction CuAAC de drivs de type 2-azido picoline. 136 Dans ce cas prcis, le cuivre(II) se lie avec lazote de la picoline et un azote de lazoture puis est rapidement rduit par le solvant (mthanol ou tert-butanol) en cuivre(I). Cette mthode reste cependant limite aux groupements azoture fonctionnalisant certains htrocycles azots.
I.4.3.b Formation du catalyseur Cu(I) par addition de sels de Cu(I) Une seconde mthode consiste introduire directement le sel de cuivre(I). Diffrents composs ont t utiliss comme CuBr, CuI, CuOTf.C6H6 et [(Cu(NCCH3)4][PF6] etc En gnral, lorsque la source est du cuivre(I), il a t remarqu que laddition dun excs de tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 base permettait dacclrer la raction et dobtenir le triazole avec un meilleur rendement.137 Cela sexplique par le fait que les bases aident la formation du complexe Cu(I)-actylure par dprotonation. Les bases les plus utilises sont la trithylamine et la diisopropylthylamine (DIPEA), qui peuvent tre employes dans des solvants organiques. Dans certains cas, lutilisation de la DIPEA limite la formation des produits secondaires.
Me
Et
N Et
Et
i-Pr
Et
N Me N Me Me N Me
i-Pr
trithylamine
DIPEA
PMDETA
Figure 47 . Exemples de bases/ligands pour stabiliser le cuivre (I)
Dautres additifs peuvent tre utiliss pour stabiliser le cuivre, des essais avec des ligands N,O-donneurs ont t mens. Les rsultats pour le compos driv de lhistidine montrent une efficacit similaire celle obtenue dans le cas de la DIPEA et de la trithylamine.138
N N N H Ph H COO H2N COOH
NBu4
Figure 48 . Exemples de ligands N,O : driv de lhistidine et proline.
53
I.4.3.c Catalyseurs Cu(I) stables La stabilit redox du cuivre(I) apparat comme un point essentiel pour le dveloppement de nouveaux catalyseurs de cuivre utilisables pour la CuAAC. De nombreuses tudes ont t menes pour laborer des complexes stables de cuivre(I). Le complexe de cuivre(I) [Cu(C186tren)]Br (C186tren = tris(2-dioctadecylaminoethyl)amine) prsente une excellente stabilit en milieu oxygn. Le ligand tridente protge efficacement le cuivre(I) contre loxydation tout en augmentant lactivit de celui-ci pour la raction de cycloaddition.139 Il est noter que ce complexe peut tre utilis pour catalyser la cycloaddition 1,3-dipolaire entre un azoture et un alcyne interne. Ce catalyseur respecte les conditions dune raction click, il est particulirement soluble dans les solvants hydrocarbons ce qui permet de lisoler facilement des produits de la raction par une simple tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 filtration. En ce qui concerne le recyclage du catalyseur, il peut tre rutilis deux fois sans quune baisse de rendement ne soit observe. Nanmoins, ce catalyseur ncessite un chauffage 60 C pour que son activit soit suffisamment leve.
Br
N Cu N C18H37 C18H37 C18H37
N N C18H37 C18H37
C18H37
Figure 49 . Catalyseur cuivre(I) [Cu(C186tren)]Br.
Le ligand tris(1-benzyl-1H-1,2,3-triazol-4yl)mthanol issu dune triple CuAAC forme un complexe stable aprs raction avec CuCl. Le complexe form est stable lair et prsente une bonne activit catalytique sur un large spectre de substrats.140 Cependant, les rsultats montrent aussi que la prsence ventuelle dune amine libre porte par le substrat de dpart inhibe fortement la raction. Le design de ce complexe est intressant, en effet le ligand prsente deux faces bien distinctes lune hydrophobe et lautre hydrophile ce qui permet de travailler dans les conditions on water. De plus, le groupe hydroxyle pourrait permettre dancrer la molcule sur des matriaux polymriques.
54
OH N Ph N N N N N Cl Ph
Cu
N Ph N N
Figure 50. Catalyseur cuivre(I) tris(1-benzyl-1H-1,2,3triazol-4yl)mthanol
Lutilisation de ligands comportant des soufres prsente un grand potentiel mme si ces derniers restent encore peu tudis. Dans un premier temps, le complexe CuBr(Me)2S a t utilis comme source de cuivre soluble dans les solvants organiques de manire similaire au complexe [(Cu(NCCH3)4][PF6]. Par la suite, dautres recherches se sont portes sur tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 lutilisation de ligands soufrs simples comme dans le cas du complexe cuivre(I)aminearnethiolato. Ce catalyseur stable lair nest pas ractif dans leau mais permet de bonnes ractions dans le dichloromthane.141
NMe2 S Cu
Figure 51. Catalyseur cuivre(I)-aminearenethiolato.
Enfin, lquipe de Nolan a mis au point des NHC-cuivre(I) (NHC = N-htrocyclique carbne) comme le complexe htroleptique [CuBr(SIMes)] qui prsente une bonne ractivit.142 Ce complexe prsente une excellente stabilit vis vis de la temprature et de loxygne. Dautres complexes homoleptiques cationiques du type [(NHC)2Cu]X (X = PF6, BF4) synthtiss par la mme quipe ont montrs une efficacit ingale en milieu sans solvant pour la cycloaddition 1,3-dipolaire.143 Le deuxime NHC semble avoir un rle actif dans le mcanisme catalytique. En effet, la formation du complexe Cu-actylure conduit au dpart dun ligand NHC pour former le sel dazolium correspondant. Ce sel sert alors de source de proton la fin du cycle catalytique pour reformer le complexe de dpart.
55
R N CuX N R X = Cl, Br ou I
R N Cu N R
R N N R X
X = PF6 ou BF4
N
N N
SIMes tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
IAd
N N
SIPr
N
IMes
ICy
N N
IPr
ItBu
Figure 52. Exemples de catalyseurs Cu(I)-NHC.
I.4.3.d Autres sources de cuivre Les ions de cuivre(I) peuvent tre galement obtenus par oxydation de cuivre mtallique, sous forme de poudre144 ou de nanoparticules.145 La prsence de cuivre sous forme solide permet de faciliter la purification du produit. Dautres systmes de cuivre(I) ont galement fait lobjet dtudes. Ainsi un systme htrogne de cuivre sur charbon est rapport par Lipshutz. Dans ce cas, les espces Cu(I) sont prsentes sur le charbon actif trait au nitrate de cuivre(II). Ce type de catalyse ne ncessite pas dagent rducteur, ni de ligand ou de base, bien que la raction puisse tre acclre par une quantit stchiomtrique de trimthylamine.146 Un autre exemple de catalyse htrogne de CuAAC est donn par le group de Somer qui utilise comme catalyseur un matriau Cu(I)-Zolites.147
56
I.4.4 Applications de la cycloaddition CuAAC

Lutilisation de la CuAAC en combinaison avec dautres ractions chimiques a permis la synthse rapide dune grande varit de structures dintrt biologique. Les diffrentes applications dans le domaine chimie-biologie de la CuAAC sont brivement prsentes cidessous. Le motif triazole peut mimer structuralement la fonction amide, servir de ligand pour les mtaux ou lier diffrentes molcules de complexit varies. La ligation CuAAC de deux molcules, lune comportant un azoture et lautre un alcyne, est une raction simple et rapide mettre en uvre ; quelques fois cette raction peut tre ralise directement dans des conditions in vivo.
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
I.4.4.a Les triazoles comme bioisostres Il est important dtablir le profil bioisostrique de ces nouveaux composs. Des travaux montrent que le groupe triazole 1,4-disubstitu prsente une similarit structurale avec les liaisons amides. En effet, ce triazole est considr comme mime de la forme rotamre Z dune fonction amide.148 Ainsi le doublet de lazote N-3 mime un des doublets de loxygne du carbonyle. La liaison polarise C5-H peut jouer le rle de donneur dhydrogne non-classique et mimer le NH de lamide. Enfin le carbone C-4 prsente un caractre lectrophile similaire celui du carbonyle de lamide (Figure 53).
Accepteur de liaison hydrogne Carbone lectrophile
Accepteur de liaison hydrogne Carbone lectrophile
O R1 N H R2
distance R1 R2 = 3,9
N R1
N N R2 H
distance R1 R2 = 5,0
Donneur de liaison hydrogne
Donneur de liaison hydrogne
Figure 53. Similarits lectroniques et topologiques entre un amide et un 1,2,3-triazole .
I.4.4.b Concept peptides modifis Meldal et collaborateurs sont les premiers avoir abord la synthse sur support solide de mimes de peptides via un lien triazole.122 Les conditions ractionnelles (CuI en prsence de DIPEA temprature ambiante) sont compatibles avec les stratgies de synthse peptidique
57
Fmoc- et Boc-. Les amines libres, les groupements carboxyliques ainsi que les groupes protecteurs tBu, trityl, Fmoc et Boc sont stables dans ces conditions.
O X Phe Gly 2) NaOH (aq) 0,1 M O 1) Acide 2-azido-2-methylpropionique CuI, DIPEA HO O X = Acide amin t t t Ala, Pro, Thr( Bu),Tyr( Bu), Asp( Bu), Asn(trt), Hist(trt), Cys(trt), Met, Lys(Boc), Trp(Boc), Arg(Pmc) Me Me N N N X Phe Gly
= Rsine HMBA-PEGA800
Figure 54. Synthse sur support solide dun peptido-triazole.
Le groupe de Arora rapporte la synthse de triazoles oligomriques peptido-mimtiques partir dacides amins portant un groupe mthyle, par la rptition de la squence tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 ractionnelle suivante : conversion de lamine en azoture, raction CuAAC avec un aminoalcyne puis dprotection de lamine. 149 Ces oligomres adoptent une conformation en zig-zag similaire celles de leurs analogues peptidiques.
1) TfN3, CuSO4, TEA CH2Cl2 2) CuSO4.5H2O acide ascorbique, TBTA H2O/ tBuOH BocHN R N N 3) 50% TFA dans CH2Cl2 4) rptition tape 1) et 2) BocHN R N R N N N R CO2Me N N BocHN R N R CO2Me
H2N R
CO2Me
N N BocHN R N R
N N R
N N N R CO2Me
Figure 55. Synthse doligomres triazoles.
Les peptides contraints de petites tailles sont souvent utiliss pour mimer des structures secondaires des protines telles que les boucles, les structures en pingle cheveux et les coudes . Diffrentes techniques de cyclisation ont t utilises pour former le macrocycle comme par exemple la formation de ponts disulfures, de liaisons amides, esters, thioesters et trs rcemment la cycloaddition de Huisgen. Souvent la ligation via un triazole entre deux 58
peptides prsente de meilleurs rsultats et est plus facile mettre en uvre comme dans le cas du peptide cyclique Tyr-Pro-Val-Pro, un inhibiteur de la tyrosinase. En effet, il a t dmontr que la macrocylisation via le triazole est plus facile raliser que la lactamisation.150 La technique consiste synthtiser le tetrapeptide comportant une fonction azoture du cot Nterminal et une fonction alcyne du cot C-terminal, puis raliser une raction CuAAC cyclisante. Le peptide comportant le lien triazole conserve alors une bonne activit inhibitrice de la tyrosinase.
O N HO O HN NH N O O
O N HO O N O HN N N N
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Inhibiteur de tyrosinase (lien amide)
Inhibiteur de tyrosinase (lien triazole)
Figure 56. Peptide cyclique Tyr-Pro-Val-Pro inhibiteur de la tyrosinase.
Certains motifs prsents dans la structure de protines ont un rle crucial pour linteraction avec les rcepteurs protiques correspondants. Souvent, des motifs de type coude sont incorpors dans les mimes de peptides pour conserver la conformation bioactive. Le groupement triazole peut tre utilis comme mime de coude . Les rsultats montrent que le triazole 1,4-disubstitu est un mime efficace de ce coude quand il possde des espaceurs carbons sur les deux substituants. Lexemple ci-dessous prsente un tel mime de coude .151
O N H O N
H N
H N N N N H O H N O
O N H O N
O N
O H N O
Figure 57. Comparaison des structures coude dans un peptide form par une proline ( gauche) et par un triazole ( droite).
La raction de CuAAC est aussi un outil trs intressant pour la fonctionnalisation de peptides ou de peptodes modifis. Au sein du laboratoire du laboratoire SEESIB, lquipe de C. Taillefumier a rapport la synthse dun macrocycle -peptode polyfonctionnalis par des 59
alcynes. Un essai de fonctionnalisation par CuAAC avec des drivs protgs de D-galactose a t ralis avec succs (Figure 58).152
O O N N O O N O N R-N3 Ligand TBTA t-BuOH:H2O, rt N N N R N N CuSO4 Acide ascorbique R N N N O N O N R N N N O N N N R
R = CH2Ph O O O O O
ou R =
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Figure 58 . Fonctionnalisation de -peptodes cycliques par raction de CuAAC.
I.4.4.c Conjugaison de molcules Les 1,2,3-triazoles sont des composs stables et inertes vis--vis des ractions doxydation, de rduction et dhydrolyse en milieu biologique. Il nest donc pas tonnant que la raction de ligation par des groupements triazoles ait trouv une multitude dapplications en chimie mdicinale et en biologie molculaire. Parmi les exemples, on trouve des modifications de produits naturels et de drogues, la modification de nuclotides, la ligation de sucres des peptides. I.4.4.d Produits naturels modifis Trois types de modifications des produits naturels127 et de composs actifs ont t dvelopps grce la CuAAC. Premirement, le triazole peut tre utilis comme lien pour fonctionnaliser une molcule afin de modifier ses proprits, comme sa solubilit, sa biodisponibilit ou sa vectorisation. Deuximement, le triazole peut tre utilis pour greffer un fluorophore ou un marqueur biotinyl dans les dernires tapes de synthses et ceci dans le but de dterminer sa localisation dans une cellule ou un organisme. Enfin, la troisime application consiste diversifier facilement la structure dune drogue dont lactivit est connue.
60
I.4.4.e Synthses de dendrimres Les dendrimres sont des molcules synthtiques multibranches, ils ont reu depuis ces 25 dernires annes un grand intrt pour leurs proprits uniques et leurs applications dans les domaines de la mdecine et des matriaux. La synthse de ces composs nest pas simple mettre en uvre et il est difficile de les obtenir en grandes quantit du fait que les tapes de purification sont fastidieuses. De nombreux progrs ont t accomplis notamment grce la CuAAC. Le premier exemple de dendrimre synthtis par chimie click est rapport par le groupe de Fokin (Figure 59).153
R X N Cl N CuSO4 Acide ascorbique N X Cl N
R N N N NaN3 N N
R N
R N N N X N3 R-X[G-1]-N3
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
2 quiv.
R-X[G-1]-Cl R N N CuSO4 Acide ascorbique Cl X N N N R N N N N N X R N R N N N NaN3
R-X[G-1]-N3 2 quiv.
R-X[G-2]-N3
N N
N N
X R-X[G-2]-Cl Cl
R-X[G-2]-N3 2 quiv.
X Cl
CuSO4 Acide ascorbique
NaN3 R-X[G-3]-Cl R-X[G-3]-N3 "centre"
triazole dendrimer G-3
Figure 59. Synthse de dendrimres triazoles assembls par raction CuAAC.
Les dendrimres sont construits en suivant une stratgie convergente, la formation du triazole sert de branchement entre les diffrentes units. Les dendrons (sous units) sont construits avec des blocs contenant un groupe chloromthyle et deux groupe alcynes. Dans le cycle de couplage le chlorure du dendron en croissance est substitu par un azoture, puis il est coupl
61
via la CuAAC avec 2 quivalents de bloc parent. La synthse de ces dendrimres est efficace jusqu plus de 4 gnrations. I.4.4.f Immobilisation de molcules sur un support La raction de CuAAC a t rapporte comme un outil pertinent pour limmobilisation de ligands sur un support solide, notamment pour la prparation de puces ADN. Par exemple, une ligation dun simple brin dADN sur une plate forme comportant une couche dor a t ralise en prsence de cuivre (I) / TBTA (Figure 60).154
O HN O N O
O HN O N O H H H S H H ODNA
O HN S H N H ODNA N H N H O N O H H N H ODNA N H S N
N N N
N N N
H
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
oligonuclotides 50 M 30 minutes T ambiante DMSO/H2O Cu(I)TBTA

S S S S S S S S S
S S S S S S S S S
Figure 60. Immobilisation de sondes oligonuclotides sur une monocouche dor.
La chimie click a t aussi utilise pour llaboration de puces hydrates de carbone pour mettre au point des tests de criblage dinhibiteurs denzyme. Un exemple frappant rapporte que ce systme permet didentifier de nouveaux inhibiteurs de la fucosyltransferase possdant des activits de lordre du nanomolaire.155 I.4.4.g Concept de raction click in situ Lapproche conventionnelle pour dcouvrir et dvelopper de nouveaux agents thrapeutiques consiste en la synthse dune collection de molcules dont lactivit est ensuite crible. La procdure peut tre raccourcie et optimise si la cible biologique peut produire le meilleur ligand. Il a t envisag que lon puisse raliser une raction de cycloaddition non catalyse par un mtal entre un azoture et un alcyne directement lintrieur du site actif de lenzyme si celui-ci est bifonctionnel. La raction a lieu seulement si les deux ractifs sont suffisamment proches. Cette stratgie a t utilise par Sharpless et collaborateurs pour identifier les inhibiteurs potentiels de lactylcholinestrase (AChE).156 Les rsultats ont montr que
62
lenzyme pouvait effectivement tre considre comme un moule guidant la synthse de ses propres inhibiteurs. Les inhibiteurs identifis ont une constante de dissociation (Kd) de lordre du fentomolaire.
Site anionique priphrique
Site anionique priphrique
Chimie click in situ
Groupe tacrine ancr dans le site actif
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Figure 61. Reprsentation schmatique de la raction de de cycloaddition alcyne-azoture lintrieur du site actif de lactylcholinestrase (AChE).
I.4.4.h Concept de ligand click pour chlater les mtaux Les triazoles possdent des proprits de coordination des mtaux similaires aux imidazoles substitus. Les 1,2,3-triazoles fonctionnaliss en positions 1 et 4 sont des ligands versatiles qui prsentent diffrent sites donneurs pour la coordination avec un mtal. Il est souvent rapport que celle-ci se fait majoritairement avec lazote N-3 du triazole. Les positions N-2 et C-5 sont elles aussi des sites de coordination potentiels dans certains cas.157 Si la structure de la molcule est adquatement choisie, la fonctionnalisation du triazole par des atomes donneurs permet de constituer des pinces mtaux. Conception de catalyseurs La CuAAC a t utilise pour la synthse de ligands du palladium et dautres mtaux de transition dans le domaine de la catalyse. Le groupe de Zhang a synthtis des ligands du palladium de type triazole-monophosphine (ClickPhos) quil a utilis dans des couplages de Suzuki-Miyaura et de Hartwig-Buchwald.158 Dans ce cas, le triazole nest pas identifi comme un coordinant du mtal, la phosphine joue le rle de ligand monodente.
63
Plus tard, lquipe de Maarseveen a mis au point un complexe de palladium(II) avec un ligand triazole-phosphine potentiellement bidente (Figure 62) qui montre une bonne activit pour les substitutions allyliques.159
BnN3 Cu(I) BH3 Ph2P N N N Ph
BH3 Ph2P
DABCO
Ph2P N N
N Ph
[Pd(allyl)Cl]2
Ph2P Pd Cl N N
AgBF4 N Ph
Ph2P Pd N N
N Ph
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Figure 62. Synthse dun complexe de palladium triazole-phosphine.158
Conception de mtallocarbnes N-htrocycliques non classiques. Les carbnes N-htrocycliques (NHC) ont un large spectre dapplication en catalyse.160 Rcemment, des triazoles obtenus par CuAAC ont t utiliss comme prcurseurs dune nouvelle classe de ligands carbnes N-htrocycliques non classiques (c'est--dire ne drivant pas dion imidazol(in)ium).161 La mthylation slective de lazote N-3 dun triazole conduit la formation de sel de triazolium. Les complexes de palladium et dargent sont prpars par raction acide-base avec Pd(OAc)2 ou Ag2O. Les complexes de ruthnium, rhodium et diridium sont obtenus au dpart du carbne dargent par transmtallation.
64
N N N Ph
MeI N
N I N Ag2O Ph
[Pd(OAc)2]
N N
N Pd Ph I I Pd
Ph N N N
Ph N N N Ph Ag N N N [AgI2]1) [IrCl(cod)]2 2) CO(g) N CO Ir Cl Ph CO
N N
[RhCl(cod)]2
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N N
N Rh Cl Ph
Figure 63. Ligands de type carbnes N-htrocycliques non classique drivs de triazoles.
Complexes de rhnium(I) et de techntium(I) Le marquage isotopique de molcules est devenu un outil indispensable pour la dtection de cancers. Ces dix dernires annes, des recherches ont t menes sur des complexes organomtalliques comportant du
99m 188
Tc ou du
Re. Un grand nombre de ligands
fonctionnaliss ont t dvelopps pour permettre une bonne chlation. Les synthses multitapes utilises sont gnralement peu efficaces. La CuAAC a t utilise par le groupe de Schibli pour amliorer la synthse des ligands chlateurs du rhnium et du techntium afin de marquer des biomolcules ciblant des tumeurs.162
R N3 R CO2H NH2 Cu(I) R N N N H2N CO2H OC M = 99mTc, Re OC
9m
N [M(H2O)3(CO)3]
N N H2N M
O O
CO
Figure 64. Ligands tridentes compportant une unit triazole pour la chlation des mtaux ou du 188Re.
Tc
65
Complexes de platine Au sein du laboratoire SEESIB, lquipe de Gautier a dvelopp une petite librairie de 1,2,3triazole 1,4-disubstitus. Ces ligands sont de type N,O- ou N,N- donneur et chlatent le platine(II) et le palladium(II). La structure de ces composs permet de former une pince mtaux. La chlation du mtal se fait via un azote du triazole et une fonction exocyclique (amine, carboxylate).
Cl N H2N N N Pt Cl H2N Cl Pt DMSO N N N
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Cl
O N O Pt N N N O O O Pt Cl DMSO N N O N N N
Cl
Figure 65. Complexes de platine avec des ligands bidentes comportant des triazoles.163
I.4.4.i Ractions de CuAAC fluorogniques Les produits fluorescents synthtiss par CuAAC sont utiliss pour la localisation cellulaire de biomolcules. Des tudes rcentes ont t menes afin de mettre en uvre des ractions de CuAAC fluorogniques entre des substrats non-fluorescents. Ces ractions de ligation conduisent la formation de composs hautement fluorescents. La premire raction de ce type a t rapporte simultanment par deux quipes qui ont utilis des drivs de la coumarine. Celle ci a t choisie comme prcurseur du fait de sa petite taille, de sa biocompatibilit et car elle est facilement manipulable en synthse. Lintroduction dun alcyne vrai ou dun azoture en positions 3 ou 7 de la coumarine produit une perte totale de
66
fluorescence. Par contre, la formation dun triazole est sense rtablir les proprits optiques164 La raction de CuAAC peut donc servir dans ce cas dindicateur On-Off. Conformment ce principe, lquipe de Fahri a prpar une coumarine non fluorescente fonctionnalise en position 7 par un alcyne. Aprs raction de CuAAC, la fluorescence est restaure par la formation du triazole (Figure 66.A).165 Le mme principe peut tre appliqu en utilisant un azoture. Lquipe de Wang a dvelopp une mthode similaire base sur une srie de 3-azidocoumarines non fluorescentes. Aprs raction de cycloaddition avec diffrents alcynes vrais, les triazoles forms sont hautement fluorescents (Figure 66.B).166
A
N3 O O CuSO4, NaAsc N N N pH = 7,2
3N
N N N O O
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
CO2H
EtO2C
HO2C
non-fluorescent
fluorescent
O R= O CO2H
B
O O R2 R1 N3 O Cu(I) EtOH/H2O 0C - T Ambiante R1 N N N R2 O
non-fluorescent
fluorescent
Figure 66. Ractions de CuAAC fluorogniques bases sur des drivs de la coumarine nonfluorescents.
I.4.4.j Concept de marquage des systmes cellulaires Le dveloppement de mthodes pour dterminer le profil dactivit denzymes in vivo est ncessaire pour comprendre le rle de certaines protines et leur rgulation dans les processus physiologiques et pathologiques. Les stratgies initiales pour lapproche protomique sont bases sur lutilisation de gels dlectrophorse deux dimensions et de lHPLC couple la spectromtrie de masse pour la sparation, la quantification et lidentification des protines. Ces mthodes ne permettent malheureusement quune simple estimation indirecte de
67
labondance des protines. Pour contourner ce problme, dautres mthodes rassembles sous le concept ABPP ( Activity-Based Protein Profiling ) ont t dveloppes. Elles font appel des sondes chimiques qui ciblent directement le site actif de la protine. Les sondes ABPP sont gnralement constitues de deux parties : 1) un groupe ractif pour former un lien covalent avec le site actif de lenzyme ou un groupe ayant une affinit avec celui-ci, et 2) un ou plusieurs agents de marquage (biotine et/ou fluorophore) pour la dtection finale de lenzyme (Figure 67.A). Une mthode de marquage utilisant la CuAAC et tant de plus utilisable in vivo a t dveloppe par lquipe de Cravatt (Figure 67.B).167
A) Mthode ABPP standard
Sonde ABPP
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B) Mthode ABPP chimie click
Figure 67. Principe du marquage cellulaire par la mthode ABPP.
68
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Chapitre II : Synthses de nouveaux ligands du platine par chimie Click
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Chapitre II :Synthses de nouveaux ligands du platine par chimie Click
II.1. Introduction
La recherche de nouveaux complexes mtalliques susceptibles de contourner les phnomnes de rsistance du cisplatine reste un challenge dans le domaine de la chimie inorganique mdicinale. Les complexes de platine de type pyrazole et 1,2,3-triazole dvelopps par Reedijk ont fortement motiv au sein de lquipe, la recherche de nouveaux ligands pinceurs du platine comportant un cycle triazole. Avant mon arrive au laboratoire, il avait t envisag de mettre profit la raction de CuAAC pour gnrer une gamme de composs contenant un motif 1,2,3-triazole substitu en positions 1 et 4, pour mener de nouveaux complexes de platine mono- ou binuclaires. Dans les complexes envisags, le platine est chlat par un des azotes du triazole et par une fonction exocyclique (amine, carboxylate). Les ligands peuvent tre classs en deux tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 catgories selon Schibli 162: Les ligands click directs dans lesquels le substituant de la chane en position C4 et lazote N-3 du triazole participent la chlation du platine Les ligands click inverss dans lesquels la chlation est obtenue avec lazote N-2 du triazole et le substituant de la chane port par lazote N-1. Les ligands directs et inverses permettent respectivement la formation respectivement de complexes contenant des mtallacycles 5 et 6 chanons (Figure 68).
R MY2 X M Y N Y
Cu(I)
N N
3
N N
CuAAC
N N N R
Ligands directs
R Cu(I) R N N N X
MY2
R N
N N N
2
N N Y M X Y
CuAAC
Ligands inverss
Figure 68. Stratgies de synthse de complexes de platine comportant des ligands 1,2,3-triazoles bidentes.
69
Le design de ces ligands click permet dobtenir une grande varit de produits de faon simple et rapide. Il est intressant de noter que lon peut faire varier les diffrents groupements R, le groupe donneur X, les ligands ancillaires du mtal (Y) : Le groupement R peut tre un groupe alkyle, amide, benzyleCes groupements peuvent facilement intgrer des groupements apportant un intrt pour la solubilit, la ractivit du complexe avec lADN cible, ou facilitant le transport du complexe dans ou vers la cellule. Le groupement donneur X peut tre une amine ou un acide carboxylique. Ces htroatomes doivent avoir une grande affinit pour le mtal et ne doivent pas tre labiles. tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 Les ligands ancillaires Y permettent, selon leur nature, dobtenir des complexes mtalliques neutres ou chargs. Gnralement, par analogie avec le cisplatine, les ligands sont des chlorures. La figure 69 prsente quelques exemples de complexes de platine mononuclaires obtenus et ayant fait lobjet dune publication par lquipe avant mon arrive au laboratoire. 163 Ce travail a notamment permis de poser les bases exprimentales ncessaires la validation de cette stratgie.
Cl
N H2 N Cl N Pt Cl 1 N H2 N Cl N Pt
N N 2
DMSO
O N O Pt N N O 3 N O O Pt Cl DMSO 4 N N N O N N Cl
Figure 69. Exemples de complexes de platine possdant des ligands bidentes de type triazole.
Les diffrents complexes avaient t synthtiss et leurs potentiels cytotoxiques valus sur des lignes cancreuses humaines. Ces quatre complexes ont t soumis un pr-criblage 70
dactivit aux concentrations de 50 et 25 M sur trois lignes cellulaires cancreuses (MCF7 : sein, PA1 : ovaire et A549 : poumon) et sur les fibroblastes (ligne saine), afin dvaluer leur inhibition potentielle de la croissance des cellules (Tableau 3). Ce test a permis dvaluer linfluence de la coordination du mtal (N2Cl2 (1), N2SCl (2), N2O2 (3), NOSCl (4)). PA1 50 M 25M 100 98 95 75 50 40 40 40 100 100 MCF7 50 M 25M 80 76 45 20 20 0 15 5 95 75 A549 50 M 25M 45 40 35 35 23 17 30 27 100 100 Fibroblaste 50 M 25M 40 35 25 20 20 10 10 5 95 92
(1) (2) (3) (4) Cisplatine
Tableau 3. Pourcentages dinhibition de la croissance des cellules aux concentrations de 50 et 25 M des composs (1), (2), (3) et (4) compars ceux obtenus avec le cisplatine.163
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Le complexe (1) prsente une cytotoxicit significative sur les lignes cellulaires PA1 et MCF. Les mesures des IC50 (concentration inhibitrice 50 %) pour ce complexe ont t values sur les diffrentes lignes cellulaires et compares avec celle obtenues pour le cisplatine (Tableau 4). Compos (1) cisplatine PA1 6,7 0,4 MCF7 27,0 16,5 A549 >50 5,6 Fibroblaste >50 23,9
Tableau 4. Rsultats des IC50 (M) obtenus pour le compos 1 et le cisplatine sur diffrentes lignes cellulaires. 163
Le complexe neutre (1) prsente une cytotoxicit notable vis--vis des cellules du cancer du sein MCF7 et comparable celle du cisplatine. Il faut noter galement que le complexe reste inactif vis--vis de la ligne saine (fibroblaste), ce qui est un point favorable pour des tests thrapeutiques in vivo. La premire partie de mon travail de thse sinscrit dans la continuit de ce projet. Nous nous sommes propos de synthtiser de nouveaux complexes mono- et binuclaires afin de mettre en vidence leurs interactions avec lADN. Comme prsent dans la partie bibliographique, linteraction des complexes de platine avec les bases de lADN est un lment cl du mcanisme daction. Dans le cadre de notre tude, le groupement R sera constitu dun cycle aromatique uniquement ou comportera galement dun bras espaceur le reliant au triazole. Dans le cas de 71
ligands bis-triazole menant potentiellement des complexes binuclaires, ce groupement R sera une chane aliphatique, qui comportera dans certains cas des fonctions ammonium afin damliorer la solubilit aqueuse (Figure 70). Lors des premiers tests, le groupement X contenant un htroatome participant la chlation du platine tait, soit une fonction amine, soit un groupement carboxylate. En accord avec les rsultats probant obtenus avec le complexe (1), notre stratgie a consist privilgier les ligands azots. En effet, les complexes de platine possdant des ligands azots ont une cytotoxicit suprieure par rapport aux complexes N,O.168
H2N Cl Pt
N Cl
N N
H2N Cl Pt
N Cl
N N
(N)
N N
N Cl
NH2 Pt Cl
Complexe mononuclaire
Complexe binunuclaire
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Figure 70. Structures gnrales des complexes mono- et binuclaires envisags
Nous nous sommes fixs comme but dutiliser exclusivement des ractions simples et efficaces ne ncessitant pas dtape de purification chromatographique. Ceci peut reprsenter un rel dfi pour un travail acadmique, mais serait un rel atout de poids au cas o les applications de certains composs justifiraient des synthses grande chelle. De plus, nous essayerons de raliser le maximum de nos ractions dans des solvants cocompatibles ou bnins.
II.2. Synthses des ligands bidentes comportant un cycle 1,2,3-triazole

Nous avons envisag de raliser diffrentes sries de composs de type mono-triazole afin de moduler potentiellement la ractivit de leurs complexes de platine avec lADN. Tout dabord, nous avons entrepris la synthse dune srie de composs avec une chane amide fonctionnalise par un groupement aromatique. Ensuite, nous avons envisag dobtenir des amines secondaires, puis tertiaires, pour valuer les changements de ractivit avec lADN. Nous rapportons galement la synthse dun ligand triazole tridente menant potentiellement un complexe charg o latome de platine est chlat par lazote N-2 du triazole et deux amines exocycliques substitues en position C-4. Ce ligand servira de modle pour les tudes concernant les complexes bimtalliques forms par des ligands bis-triazoles tridentes. Enfin, un ligand triazole invers, rcemment introduit par Kosmrlj 169 a t synthtis pour valuer la ractivit de ce type de complexe avec lADN (Figure 71).
72
H R N O
N
n
N N NH2 R1 et R2 = Me ou H N N R1 N R2 N N N H2N H N
R = cycle aromatique
Ligands triazole avec une chane amide
Ligands triazole avec modifications de l'amine
Ligand triazole tridente
N N N N
Ligand triazole 'invers'
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Figure 71. Structures des diffrents ligands bidentes comportant un cycle 1,2,3-triazole envisags.
II.2.1 Synthses des ligands triazoles avec une chane amide

La synthse dune premire srie de triazoles fonctionnaliss en positions C-4 par une amine et en N-1 par une chane amide servant despaceur entre laryle R et le cycle azot a t entreprise. Le cycle aromatique apporte un intrt supplmentaire, car il est susceptible de sintercaler entre les bases nucliques de lADN. La chane aliphatique devrait donner une meilleure flexibilit la structure tout en permettant de mieux diriger la partie platine vers les azotes N-7 des guanines au sein de la double hlice dADN. Le schma rtrosynthtique est prsent ci-dessous.
O H R N O
n
R N NH2
N H
+
N3
n
R NH2 O R N H
n
O N3 R N H X
n
O Cl X
n
NH2
Schma 6. Rtrosynthse des ligands de type 1,2,3-triazoles 1,4-disubstitus avec une chane amide.
Le triazole est videment obtenu par raction CuAAC entre la propargylamine et un azoture port un amide. La fonction azoture est introduite par substitution nuclophile dun hallogenure dalkyle. Lamide de dpart est obtenu par acylation dune amine.
73
II.2.1.a Acylation damine : formation des chanes amides Dans un premier temps, nous avons utilis la mthode classique daddition dun chlorure dacide sur lamine dsire en prsence dune base pour obtenir notre amide de dpart.
O H2N R1 Cl R2 base R1 O N H R2
Schma 7. Raction dacylation damine primaire
Des premiers essais ont t raliss par raction de laniline avec le chlorure de chloroactyle en prsence de trithylamine dans le dichloromthane. Ces conditions ne se sont pas rvles totalement satisfaisantes par rapport notre stratgie de synthse puisquune tape de purification par colonne chromatographique tait ncessaire. tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 Pour rester dans lesprit de la chimie click, nous avons recherch des conditions ractionnelles permettant dobtenir des produits purs avec de hauts rendements, sans purification chromatographique. Pour ce faire, nous nous sommes intresss la mthode dacylation de Schotten-Baumann. Cette raction est effectue en milieux aqueux avec une solution dilue dhydroxyde de sodium dont le rle est de neutraliser lacide form (lamine est suffisamment nuclophile pour que la raction concurrente dhydrolyse du chlorure dacide soit ngligeable). Dans un premier temps nous avions dcid de mener bien cette raction uniquement dans leau. Ces essais nont pas t concluants, ces conditions aboutissant des rendements faibles allant de 20 40 % (Figure 72).
O R H2O, 1h N H Cl
O R NH2
NaOH 1q. Cl
n
+
Cl
Produits obtenus
O N H Cl 5, 20 % N H O Cl 6, 40%
Figure 72. Essais dacylation damine par mthode de Schotten-Baumann dans leau.
Par la suite, des essais de ractions dans les conditions biphasiques H2O/actate dthyle (1/1, v/v) ont t mens. Ces nouvelles conditions nous ont permis de synthtiser les amides
74
attendus avec de bons rendements (Figure 73). De plus, les produits finaux sont directement rcuprs dans la phase organique et sont isols avec une puret satisfaisante, par simple vaporation du solvant.
O R NH2 NaOH 1q. X
n
O R N H X
n
+
Cl
H2O/ AcOEt, 1h
Produits obtenus
O N H Cl
5, 80%
O N H Cl
6, 85%
O N H Br
7, 76%
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
O N H Cl HN
8, 70%
H N O
9, 60%
Cl N H
O Cl
10, 72%
O N H
11, 90%
Br
Figure 73 . Raction dacylation dans les conditions de Schotten-Baumann (systme biphasique).
Dans ces nouvelles conditions, nous obtenons une bonne diversit de produits avec de bons rendements allant de 60 90 %.
II.2.1.b Synthse des prcurseurs azotures Les azotures organiques sont prpars selon diffrentes mthodes que lon retrouve dans une revue par Brse et collaborateurs qui rcapitule les principales voies de synthse.170 Nous avons dcid dutiliser la substitution nuclophile des halognures dalkyle par lazoture de sodium (NaN3), ce qui est une mthode couramment employe en raison de sa grande versatilit, de son efficacit et du fait quelle peut avoir lieu dans de nombreux solvants organiques (DMF, DMSO, alcools...), mais galement dans leau.
75
Les azotures 12 17 ont t synthtiss au dpart des diffrents halognures obtenus dans ltape prcdente, daprs une procdure adapte de la littrature. 119 La substitution nuclophile des halognes par lion azoture est ralise en milieu aqueux en prsence de chlorure dammonium et dune quantit catalytique diodure de sodium 80C (Figure 74). Il faut prciser que lutilisation dune petite quantit de NaI est ncessaire pour que la raction puisse aller jusqu une conversion totale en azoture. Les chlorures de dparts tant insolubles dans leau, nos conditions ractionnelles peuvent tre qualifies de on water.171, 172
O R N H X
n
NaN3
NH4Cl 4q. NaI cat. R H2O/ EtOH (9:1) 80C, 1 jour N H
O N3
n
5q.
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Produits obtenus
O N H N3 N H
12, 80%
O N3
13, 75%
O N H N3
14, 76%
O N H N3 HN
H N O
N3 N H
O N3
15, 77%
16, 90%
17, 93%
Figure 74 . Raction de substitution nuclophile par lazoture sur les amides chlors.
Une simple extraction suffit purifier les produits qui sont tous obtenus avec des rendements suprieurs 75%, sauf dans le cas du substrat halogn 6, pour lequel les conditions ractionnelles prsentes ci-dessus aboutissent un mlange de produits indtermins (analyse RMN 1H).
II.2.1.c Synthse des triazoles La srie de ligands bidentes triazole-amine (fonctionnalisation en position C-4) a t synthtise par cycloaddition CuAAC entre la propargylamine commerciale et lensemble des azotures prpars prcdemment. Une solution 0,1 M de sulfate de cuivre avec le ligand hydrosoluble THPTA a ensuite t ajoute au mlange pour obtenir une charge en catalyseur de 1 mol %. Enfin une solution dacide ascorbique 0,1 M (3 mol %) a t introduite pour
76
rduire le cuivre(II) en cuivre(I). Les composs dsirs ont t isols du milieu ractionnel sous forme de chlorhydrate par simple filtration, aprs ajout de HCl (Figure 75). La formation du chlorhydrate permet de purifier les ligands.
1) CuSO4 + THPTA 1mol%
O R N H N3
n
Acide ascorbique 3mol%
NH2
H2O/ t-BuOH (1:1), 12h 2) HCl conc.
H R N O
N
nN
N NH2.HCl
Produits obtenus
H N O
18, 75%
N N NH2.HCl
H N O
19, 42%
N N NH2.HCl
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
H N O
N N NH2.HCl HN
H N O
21, 53%
N N NH2.HCl
20, 60%
H N O
N N NH2.HCl
H N O
23, 47%
N N NH2.HCl
22, 67%
Figure 75 . Etape de CuAAC pour la construction du cycle 1,2,3-triazole.
La mthode de catalyse utilise ici est efficace : la raction est rapide et ne ncessite quune petite quantit de catalyseur (1 mol %). Les diffrents triazoles de 18 23 sont obtenus avec des rendements allant de 42 % 75 %. Pour cette tape de cycloaddition nous avons aussi utilis un autre catalyseur dvelopp et mis au point par lquipe (Figure 76).173 Ce catalyseur est issu de la combinaison dun cuivre(I)NHC, le [CuCl(SIMes)] mis au point par lquipe de Nolan142 et dun ligand azot aromatique bidente, la 4,7-dichloro-1,10-phnanthroline pour donner le complexe [CuCl(SIMes)(4,7dichloro-1,10-phnanthroline)]. Cette combinaison permet damliorer le systme catalytique, entre autres du point de vue de la solubilit dans les solvants alcooliques. Les applications et les tudes concernant ce catalyseur seront prsentes dans le chapitre V.
77
N N Cl
Cu
N
Cl
Cl
Figure 76 : Structure du catalyseur [CuCl(SIMes)(4,7-dichloro-1,10-phnanthroline)]
Les triazoles 18-20 et 22 ont t synthtiss dans le mthanol. Le catalyseur [CuCl(SIMes)(4,7-dichloro-1,10-phnanthroline)] (2 mol %) a t ajout sous forme solide au mlange de ractionnel, dans lequel il est soluble. Les molcules dsires ont t isoles selon le mme protocole que prcdement par simple filtration avec des rendements allant de 80 tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 83 % (Figure 77).
O R N H N3
n
1) [CuCl(SIMes)(phenCl2)] 2 mol%
+
14
NH2
MeOH, 12h 2) HCl conc.
H R N O
N
nN
N NH2.HCl
Composs 18 19 20 22
Rendements 80 % 81% 80 % 83 %
Figure 77 : Etape de CuAAC pour la construction du cycle 1,2,3-triazole utilisant la catalyseur [CuCl(SIMes)(4,7-dichloro-1,10-phnanthroline)].
Pour les composs 18-20 et 22, les rendements des ractions ralises avec le catalyseur [CuCl(SIMes)(4,7-dichloro-1,10-phnanthroline)] sont suprieurs ceux obtenus avec la mthode utilisant le systme CuSO4-THPTA. La synthse de ligands bidentes triazole-acide carboxylique (fonctionnalisation en position C4) a t ralise par la cycloaddition de lacide propiolique commercial et les azotures 13, 17 ou lazoture de benzyle (Figure 78). La raction a lieu dans un mlange eau/tert-butanol (1/1, v/v) en prsence dune solution de CuSO4-THPTA (1 mol %) et dacide ascorbique (3 mol %).
78
CuSO4 + THPTA 1mol%
O R N H N3
n
Acide ascorbique 3mol%
HO
12 h
H2O/ tBuOH (1:1)
H R N O
N
nN
N OH O
Produits obtenus
N N OH
24, 71%
H N O
N N OH
O
25, 80 %
H N
N O
26, 60%
N N OH O
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Figure 78. Etape de CuAAC pour la construction du cycle 1,2,3-triazole 1,4 disubstitu avec une fonction carboxylique en C4.
Les composs dsirs sont obtenues avec de bons rendements et une puret satisfaisante par simple filtration.
II.2.2 Synthses des ligands triazoles avec une modification de la pince

Dans un premier temps nous avons vari la nature de lamine participant la chlation du mtal en introduisant des amines secondaires et tertiaires. Par la suite, nous avons entrepris de synthtiser un ligand tridente triazole-diamine, afin dobtenir un complexe cationique de platine. Ce dernier devrait avoir une meilleure solubilit dans leau que les complexes neutres. II.2.2.a Variation de lamine participant la chlation Cette srie de triazoles a t synthtise par CuAAC entre lazoture de benzyle 27 et diffrentes amines propargyliques commerciales, dans un mlange eau/tert-butanol (1/1, v/v) dans les conditions habituelles (CuSO4.THPTA (1 mol %), acide ascorbique (3 mol %)). (Figure 79).
79
N3 R1
1) CuSO4 + THPTA 1mol% Acide ascorbique 3mol% H2O/ t-BuOH (1:1), 12h
N N N R1 N R2 HCl
R2
2) HCl conc.
27
Produits obtenus
N N NH2.HCl N N NH HCl N N N HCl
30, 64 %
28, 74 %
29, 42 %
Figure 79. Etape de CuAAC pour la construction du cycle 1,2,3-triazole portant une fonction amine exocyclique primaire, secondaire ou tertiaire.
Les molcules dsires ont t isoles du milieu ractionnel sous forme de chlorhydrate par tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 filtration avec des rendements acceptables et une puret satisfaisante. II.2.2.b Synthse dun ligand triazole tridente La synthse dun ligand triazole tridente a t ralise en deux tapes succssives (Schma 8).
N3 1) 2.0 eq. Br.H3N 1.0 eq. H2O, 80 C, 3h Br 2) NaOH H2N NH2
1) CuSO4 + THPT A 1mol% Acide ascorbique 3mol%
N N N
H2N H N 2HCl
N H 31, non isol
H2O/ t-BuOH (1:1), 12h
2) HCl 32, 39%
Schma 8. Les tapes successives pour la synthse du ligand 1,2,3-triazole tridente.
La premire tape consiste en la substitution du brome de la 2-bromothylamine par la propargylamine commerciale dans leau 80C. Malgr de nombreux essais, le produit 31 na pu tre isol pur du milieu ractionnel. En effet, ce compos se dcompose rapidement en prsence dair comme le laisse supposer un noircissement aprs quelques minutes. De nombreux produits indtermins sont dtects par RMN du proton. La formation dun chlorhydrate sest galement rvle inefficace, un mlange tant toujours observ par RMN1
H. Enfin, il a t possible dobtenir un sel prcipitant en milieu aqueux et hydroalcoolique en
additionnant de lacide oxalique sur la diamine 31. Malheureusement, le compos obtenu est totalement insoluble dans tous les solvants classiques de RMN, ce qui a empch son analyse. Suite ces problmes nous avons opt pour lutilisation en CuAAC du compos 31
80
directement issu du brut ractionnel aprs limination de lexcs de propargylamine sous pression rduite. La raction de cycloaddition entre la diamine propargylique 31 et lazoture de benzyle se droule dans les conditions dj prsentes. Le triazole 32 est alors isol du mlange ractionnel sous forme de chlorhydrate par filtration. Cependant la prsence dimpurets nous a amen pratiquer une recristallisation dans lthanol pour obtenir le produit 32 pur. Le rendement global sur deux tapes nest que de 39 % (nanmoins ceci reprsente 62 % par tape).
II.2.3 Synthse dun ligand triazole invers

Nous avons ralis la synthse du ligand triazole 34 pour valuer les proprits dun chlate invers de platine vis--vis de lADN. De plus, ltude de ce chlate nous servira de modle pour des complexes inverss binuclaires. La synthse de ce ligand a dj t rapporte par le tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 groupe dUrankar et Kosmrlj, pionnier en synthse de complexes inverss de platine. 169 La synthse du prcurseur azoture 33 a dj t publie.174 La substitution de la 2chloromthylpyridine avec lazoture de sodium est rapporte dans leau reflux pendant 2 jours. Le produit est isol par extraction et ncessite une tape de purification par chromatographie, le rendement final est de 54 %. Dans notre cas, nous avons prfr une mthode dans laquelle la substitution est ralise dans le DMF en prsence dther couronne (18-crown-6) et de la base de Hnig (diisopropylthylamine : DIPEA ; Schma 9).132 Le produit 33 est alors isol par extraction avec un rendement de 80 % et ne ncessite pas dtape de purification supplmentaire.
NaN3 1,2 q 18-crown-6 DIPEA N Cl DMF, 24h N N3 33, 80%
Catalyseur N MeOH ou t-BuOH 24h 34, 95 % N N N
Schma 9 . Les tapes successives pour la synthse du ligand bidente triazole-pyridine invers.
Lquipe de Zhu a rapport la synthse du ligand triazole 34 catalyse par diffrentes sources de cuivre(II) (CuCl2, CuSO4, Cu(OAc)2) dans diffrents solvants alcooliques (MeOH, EtOH, tert-BuOH).132 La mthode optimale ncessite 5 mol % dactate de cuivre(II) dans le tertbutanol. Le produit 34 est alors isol par simple extraction avec un rendement suprieur 95 %. Nous avons ralis la raction de cycloaddition dans les conditions optimales de Zhu, et 81
galement en prsence du catalyseur [CuCl(SIMes)(4,7-dichloro-1,10-phnanthroline)] dans le mthanol. Le produit 34 est isol avec un rendement de 95 % quelque soit la mthode.
II.3. Synthses des ligands bis -triazole

Diffrentes sries de ligands ont t envisages afin de moduler potentiellement la ractivit du complexe avec lADN. La structure de nos ligands bis-triazole rappelle celle utilise par Farrell, que nous avons dcrite dans la partie bibliographique. Tout dabord, nous avons synthtis des composs bis-triazole comportant une chane aliphatique 4 ou 6 carbones reliant les deux htrocycles. Ces ligands devraient nous mener des complexes binuclaires neutres avec une coordination de type N2Cl2. Par la suite, toujours en utilisant un simple pont aliphatique, nous avons entrepris de synthtiser un ligand bis-(triazole-diamine) bis-tridente afin dobtenir des complexes cationiques de type N3Cl. tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 Ensuite, nous avons essay dintroduire un ammonium au centre de la chane aliphatique afin daugmenter la solubilit aqueuse du complexe. Enfin, sur le modle du ligand triazole invers 34, nous avons tent dobtenir un ligand bis-triazole invers avec un pont aliphatique comportant deux ammoniums.
ligands bis-triazoles avec pont aliphatique
N N N N H2 N N N
n n = 1, 3
H2 N N N HN
NH2 NH2 H N N N N
ligands bis-triazole bidentes
ligand bis-triazole tridente
ligand bis-triazole avec pont amine

N N N N H N N N
ligands bis-triazole avec un pont ammonium

H2 N N N N
n
Cl
H2 N
NH2
N N N
n n = 1, 2
NH2
ligand bis-triazole 'invers' avec un espaceur diammonium

Br N N N N N N N N N Br N
Figure 80 Structures des diffrents ligands bis-triazole envisags.
82
II.3.1 Synthses des ligands bis-triazoles possdant un pont aliphatique

Une mthode prcdemment mise au point au laboratoire par Aurlie Maisonial permet dobtenir les prcurseurs fonctionnaliss par deux azotures 35 et 36. Cette mthode est base sur la substitution des halognures par lazoture de sodium en prsence de bromure de ttrabutylammonium et diodure de sodium dans le DMF. Nous avons remarqu que des rendements suprieurs peuvent tre obtenus en remplaant ce solvant par lactonitrile. Les produits sont isols purs par extraction (Schma 10).
NaN3 5.0 quiv. TBABr 0.2 quiv. NaI cat. MeCN ou DMF 12h N3 35, n =1 36, n = 3
n
Br
Br
n
N3
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
n = 1, 3
Schma 10. Prparation des prcurseurs diazotures 4 et 6 carbones.
Le tableau 5 prsente les rendements obtenus pour les bis-azotures 35 et 36 dans les conditions exprimentales dcrites ci-dessus. Solvants DMF Actonitrile 44 % 91 % 68 % 77 %
Compos 35, n = 1 Compos 36, n = 3
Tableau 5. Rendements des ractions de substitution nuclophile par lazoture des composs dihalogns dans le DMF et lactonitrile pour obtenir les composs 35 et 36.
Ltape de cycloaddition entre les diazotures et la propargylamine se droule dans les conditions habituelles. Les produits 37 et 38 sont isols sous forme de chlorhydrates aprs ajout dacide chlorhydrique concentr en fin de raction, avec des rendements respectifs de 90 % et 94 %.
83
NH2
1) CuSO4 + THPTA 1mol% Acide ascorbique 3mol%
N N N N N N
n
NH2.HCl
N3
N3
n
H2O/ t-BuOH (1:1), 12h
2) HCl conc. ClH.H2N 37, n = 1, 90% 38, n = 3, 94%
35, n = 1 36, n = 3
Schma 11. Etape de cycloaddition entre compos diazotures et la propargylamine.
La raction de cycloaddition entre le diazoture 35 galement t ralise avec dautres catalyseurs, les conditions ractionnelles sont prsentes dans le tableau 6 ci-dessous.
1) NH2 N N N 37 N N N NH2.HCl
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
N3 35
N3
Catalyseur Cuivre (I) MeOH 2) HCl conc. ClH.H2N
a b c d
Catalyseur Cu(I) + ligand [CuCl(SIMes)] (4 mol %) [CuCl(SIMes)] (4 mol %) [CuCl(SIMes)] (4 mol %) + Phnanthroline (4 mol %) [CuCl(SIMes)(4,7-dichloro1,10-phnanthroline)] (4 mol %)
Solvants mthanol H2O/ tert-butanol (1/2, v/v) mthanol mthanol
Rendements 81 % 84 % 87 % 89 %
Tableau 6. Diffrentes conditions catalytiques utiliss pour synthtiser le bis-triazole 37.
Les diffrentes conditions ractionnelles testes ici nous ont permis dobtenir le ligand bistriazole 37 avec des rendements comparables ceux obtenus en utilisant le couple CuSO4THPTA (Schma 11). Afin dobtenir un ligand bis-triazole bis-tridente nous avons fait ragir le diazoture 36 avec la diamine propargylique brute 31 (Schma 8). La raction CuAAC a lieu en prsence du prcatalyseur de cuivre(II)-THPTA (1 mol %) et dacide ascorbique (3 mol %) dans un mlange eau/tert-butanol (1/1, v/v) (Schma 12).
84
H2N H2N N H HN 31 4 HCl N N N
N3
1) CuSO4 + THPTA 1mol% Acide ascorbique 3 mol% H2O/ t-BuOH (1:1), 12h
N3 36
N N NH2 N H N 39, 40 %
2) HCl
Schma 12 . Synthse du ligand bis-triazole bis-tridente reli par un pont aliphatique.
Une purification par recristallisation du produit 39 dans le mthanol a t ralise afin dliminer une petite proportion du produit 38, form par la cycloaddition dune faible tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 quantit de propargylamine toujours prsente en mlange avec 31. Le produit 39 est obtenu avec un rendement de 40 %.
II.3.2 Synthse dun ligand bis-triazole avec un pont aliphatique intgrant une amine
La synthse dun ligand bis-triazole possdant une amine centrale sur lespaceur reliant les deux htrocycles a t ralise. La synthse de ce compos est prsente dans le schma 13. La disubstitution des chlores de la moutarde lazote 40 par lazoture a t ralise dans leau. Le diazoture 41 est isol par extraction, les diffrents sels sont alors limins ainsi que lexcs dazoture de sodium.
1) NaN3 5.0 q NH4Cl 4.0 q H2O, 80C, 24h 2) NaOH N3 N3
Cl
N H.HCl 40
Cl
N H
41, 93%
NH2 1) CuSO4 + THPTA 1mol% acide ascorbique 3 mol% ClH.H2N H2O/ t-BuOH (1:1), 12h 2) HCl conc.
N3
N H 41
N3
N N N N H.HCl
N N N
NH2.HCl
42, 69%
Schma 13. Synthse du ligand bis-triazole avec un pont aliphatique intgrant une amine.
85
Ltape de CuAAC entre le bis-azoture 41 et la propargylamine est ralise dans les conditions habituelles. Aprs acidification, le ligand bis-triazole 42 est obtenu sous forme de chlorhydrate par filtration avec un rendement de 69 %.
II.3.3 Synthses de ligands bis-triazole possdant un pont ammonium.

Pour la synthse de ces ligands bis-triazoles, nous devons dans un premier temps obtenir un prcurseur bis-azoture. Ce dernier est ralis en 3 tapes successives qui sont prsentes dans le schma 14.
H
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
O H Cl N H.HCl 40 Cl HCOOH H2O, 100C, 3h 43, 91% HCl Cl N Cl 1) NaN3, NH4Cl H2O, 80C, 24h 2) NaOH 44, 92%
N3
N3
1) CH3I, MeOH, 24h N3 2) Rsine ClN
X N3
X = I-, 45, 100 % X = Cl-, 46,100%
Schma 14. Synthse du prcurseur bis-azoture possdant un pont 5 chanons centr sur un ammonium
Dans la premire tape, la moutarde lazote 40 est mthyle par la mthode dEschweilerClarke pour fournir le produit 43 avec un rendement de 91 % aprs filtration.175 La deuxime raction consiste en la substitution nuclophile de lespce dihalogne 43 avec lazoture de sodium dans leau en prsence de chlorure dammonium. Le produit 44, obtenu avec un rendement de 92 % est isol par extraction et ne ncessite pas de purification supplmentaire pour poursuivre la synthse. La troisime tape consiste former lammonium par laction dun excs diodure de mthyle. Liodure dammonium intermdiaire 45 est obtenu aprs vaporation de lexcs de MeI puis liodure est chang avec un chlorure en utilisant une rsine changeuse dion (Dowex Marathon Cl-) pour conduire au produit attendu 46 avec un rendement de 100 %. Enfin, Le bisazoture 46 est engag dans une raction de CuAAC avec la propargylamine (Schma 15) dans un mlange eau/mthanol (1/1, v/v).
86
NH2
1) CuSO4 + THPTA 1mol%
Cl N3 N N3
acide ascorbique 3 mol% ClH.H2N H2O/ MeOH (1:1), 12h
N N N
Cl
N 47
N N N
NH2.HCl
2) HCl conc. 46
Schma 15. Synthse du ligand bis-triazole avec une chane ammonium 5 chanons.
En fin de raction, laddition dacide chlorhydrique concentr permet de former le chlorhydrate du triazole 47. Malheureusement, malgr des essais de prcipitation dans diffrents solvants organiques (mthanol, thanol, ther et actone), nous ne sommes pas parvenus isoler convenablement ce produit trs hygroscopique par filtration. Le ligand est tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 alors simplement rcupr aprs vaporation du solvant et est conserv tel quel. Afin de synthtiser un ligand bis-triazole bis-tridente, le diazoture 46 est mis en raction avec la diamine propargylique 31 dans un mlange eau/mthanol (1/1, v/v) (Schma16).
H2N
N H
31
NH2 NH N N N
H2N
Cl N3 N 46 N3
1) CuSO4 +THPTA 1mol% acide ascorbique 3mol% H2O/ MeOH (1:1)
Cl
N
N N N
HN
48, dgradation
Schma 16. Essai de synthse du ligand bis-triazole bis-tridente avec une chane ammonium 5 chanons.
Malheureusement, en utilisant ces conditions ractionnelles nous navons pas obtenu le produit dsir 48. Le pont ammonium 5 chanons ne parait pas stable dans les conditions ractionnelles utilises, en effet, une raction indsirable a lieu lors de cet essai de synthse. Lanalyse RMN-1H du brut ractionnel a t ralise dans D2O afin de dterminer la nature des produits forms. Sur le spectre, nous avons not la prsence de deux singulets 8,30 et 8,12 ppm que nous pouvons attribuer aux protons H-5 de deux triazoles. Dautres parts, nous avons relev la prsence de 3 signaux (ppm) : 7,51 (dd, J = 15.9 Hz, J = 8.8 Hz), 5,94 (dd, J = 15.9 Hz, J = 1.8 Hz) et 5,44) (dd, J = 8.8 Hz, J = 1.8 Hz) intgrant chacun pour un proton. Ces signaux sont caractristiques de la prsence dune double liaison carbone-carbone
87
monosubstitue porte par lun des produits darrive.176 A partir de ces observations, nous avons pu identifier le mcanisme de coupure qui a eu lieu lors de la raction (Schma 17).
NH2 NH2 NH N N N H2N NH N N N Milieu basique 49 N H2N N N N B 50 HN
Cl
N H 48
N N N
HN
Schma 17. Mcanisme de coupure du ligand bis-triazole bis-tridente avec un pont ammonium.
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Le caractre basique de la solution provoque llimination du proton en de lammonium amenant libration de lamine tertiaire 49 et du N-vinyl-triazole 50. Ce mcanisme dlimination de type Hofmann a dj t mentionn dans la littrature pour la synthse de vinyl-tetrazoles.177 Pour pallier ce problme nous avons pens loigner les triazoles de lammonium. En effet, nous supposons que la prsence dun htrocycle favorise la raction dlimination en augmentant lacidit de lhydrogne en et/ou en stabilisant par conjugaison le produit vinylique form. La moutarde lazote 52 ntant pas commerciale, nous lavons synthtis en deux tapes partir de laminopropanol et du 3-chloropropanol commerciaux (Schma 18). La premire tape consiste en laddition du 3-aminopropanol sur le 3-chloropropanol dans leau reflux daprs un mode opratoire dcrit dans la littrature pour former laminodiol 51.178 Ce produit est purifi par distillation avec un rendement de 15 %.
88
HO
NH2 reflux H2O SOCl2 HO N H OH CH2Cl2 51, 15% Cl N H.HCl 52, 87% Cl
Cl
OH
H O H HCOOH H2O, 100C, 3h 53, 43 % X N3 N X = I-, 55, 100 % X = Cl-, 56,100% N3 HCl Cl N Cl 2) NaOH 54, 78% 1) NaN3 5.0 q. NH4Cl 4.0 q H2O, 80C, 24h N3 N N3
1) CH3I, MeOH 2) Rsine Cl-
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Schma 18. Synthse du prcurseur double azoture ammonium avec une chane 7 chanons centre sur un ammonium.
La chloration du diol 51 laide de chlorure de thionyle dans le dichloromthane est ensuite ralise. La moutarde azote 52 est isole du milieu ractionnel par une simple extraction avec un rendement de 87 %. Le compos 52 est ensuite mthyle par la mthode dEschweiher-Clarke dans leau reflux pour donner le produit 53 qui est isol par simple filtration avec un rendement de 43 %. Ltape dazoturation est ralise dans leau en prsence dazoture de sodium et de chlorure dammonium. Le produit bis-azoture 54 est isol par extraction avec un rendement de 78 %. La cinquime tape consiste former lammonium par laction dun excs diodure de mthyle puis dchanger les halognures grce une rsine. Le produit 56 est obtenu avec un rendement quantitatif.
NH2 1) CuSO4 + THPTA 1mol% acide ascorbique 3mol% Cl N3 N N3 2) HCl conc. 56 H2O/ MeOH (1:1), 12h H2N HCl 57 N N N N
Cl
N N N NH2 HCl
Schma 19. Synthse du ligand bis-triazole avec chane ammonium 7 chanons.
89
Le compos 56 est engag dans une raction de cycloaddition avec la propargylamine dans un mlange eau/tert-butanol (1/1, v/v) selon les conditions habituelles (Schma 19). Comme dans le cas du compos 47, le bis-triazole 57 est obtenu sous forme de chlorhydrate aprs acidification mais il sest avr trs hygroscopique et donc difficilement rcuprable par filtration : un rendement prcis na donc pu tre dtermin et le compos a t utilis brut par la suite.
II.3.4 Synthse dun ligand bis-triazole invers avec un pont diammonium.

Un ligand bis-triazole invers a t synthtis selon la mthode prsente dans le schma 20. La premire tape correspond en la prparation du prcurseur dialcyne 60. La substitution tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 nuclophile du bromure de propargyle 59 par la diamine 58 commerciale est ralise dans lactonitrile de 0C temprature ambiante sur une nuit. Le produit 60 est isol par filtration avec un rendement de 60 %. Alternativement, lutilisation de chlorure de propargyle mne un produit extrmement hygroscopique et par consquent trs difficilement filtrable. De ce fait, ce prcurseur na pas t retenu pour poursuivre la synthse.
Br Br
N 58
N 59
Br CH3CN OC Tambiante
N 60, 60%
N3 N Br Br Cu(OAc)2 N N N t-BuOH N 60 61 N N N 34 Br N N N N Br N
Schma 20. Synthse du ligand bis-triazole invers avec une chane diammonium 7 chanons.
Nous avons obtenu le produit 61 selon la mthode de Zhu en utilisant lactate de cuivre(II) dans le tert-butanol. Malheureusement, le produit sest montr extrmement hygroscopique ce qui ne nous permet pas de rapporter de rendement de cette dernire tape.
90
II.4. Conclusion
Cette premire partie nous a permis de dmontrer la pertinence de la CuAAC comme outil pour la synthse de triazole fonctionnaliss 1,4 disubstitus pour obtenir des familles de ligands potentiellement chlateurs du platine. Hormis le ligand bis-triazole bis-tridente avec le pont ammonium 5 chanons nous avons ralis la quasi-totalit des ligands cibls. Au cours des diffrente synthses, nous avons russi suivre notre ligne directrice de dpart, c'est--dire de mettre au point des conditions ractionnelles efficaces pour lesquelles les produit sont isols par extraction et/ou filtration. Cependant, quelques difficults ont t rencontres pour lisolation par filtration de certains chlorhydrates des ligands cible prsentant un caractre fortement hygroscopique. tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 Pour la deuxime partie de ltude, les proprits de coordination vis--vis du platine(II) de lensemble des ligands synthtiss seront considres.
91
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Chapitre III : Prparation de complexes de platine avec des ligands 1,2,3-triazole.
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Chapitre III :Prparation de complexes de platine avec des ligands 1,2,3-triazole.
III.1. Introduction
Les ligands drivs de triazole envisags ont t construits pour chlater le mtal par un azote du triazole et une fonction exocyclique permettant de former des cycles 5 ou 6 chanons selon la nature du ligand (direct ou invers).
R R N
N X M Y N Y N
N N Y M X Y
Ligands directs
Ligands inverss
Les premiers tests de platination des ligands triazole bidentes ont t raliss au laboratoire tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 avec deux sources diffrentes de platine. Aurlie Maisonial avait utilis le
trichloro(dimthylsulfoxyde-S)platinate(II) de potassium K[PtCl3(DMSO)] (ou sel de Kukushkin) et le ttrachloroplatinate(II) de potassium (K2PtCl4).

O H3 C S Cl H3 C Pt Cl Cl
Figure 81. Trichloro(dimthylsulfoxyde-S)platinate(II) de potassium K[PtCl3(DMSO)].
Lutilisation de K2PtCl4 est plus propice pour lobtention de complexes de platine biologiquement actifs. En effet, il est connu que la prsence dun ligand dimthylsulfoxyde sur le mtal modifie lactivit cytotoxique.179 Un mode opratoire commun lobtention de tous les complexes a t mis en place, le ligand (sous forme de chlorhydrate) et le sel de platine sont solubiliss sparment dans leau. Une solution aqueuse dhydroxyde de potassium est ajoute la solution contenant le ligand pour neutraliser le chlorhydrate. Cette solution est additionne goutte--goutte sur celle contenant le sel de platine. Aprs des temps dagitation variables, temprature ambiante et labri de la lumire, les complexes de platines forms sont isols par filtration. La figure 82 prsente la complexation du ligand 28 par les diffrents sels de platine.
93
KOH, K2PtCl4 H2O

N ClH.H2N N N
H2N Cl
N N Pt Cl 1, 65 %
Cl 28 N H2N Cl N N Pt dmso 2, 42 %
KOH, K[(PtCl3)DMSO] H2O
Figure 82. Synthses des complexes de platine avec des ligands bidentes de type N,N.163
La caractrisation de ces complexes t ralise par RMN-1H, 13C et tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
195
Pt dans le DMF-d7.
En ce qui concerne lanalyse par RMN 195Pt, dans le cas du complexe 1, le signal -2143 ppm rvle une coordination de type N2Cl2.180 Un monocristal du complexe (1) a t obtenu par Aurlie Maisonial, en ralisant la diffusion dthanol dans une solution de DMF sature en complexe. La structure a t lucide par diffraction des rayons X (Figure 83).
Figure 83. Diagramme ORTEP du complexe de platine (1).163
Les complexes de platine envisags dans le cadre de cette thse seront des complexes neutres ou cationiques pour lesquels la coordination du mtal sera de type N2Cl2, N3Cl ou N4. Pour cela, nous avons utilis comme source de platine les sels K2PtCl4, K[PtCl3NH3] (trichloromonoammineplatinate(II) de potassium ou sel de Cossa ; Figure 84) et le cisplatine commercial.
94
H3N Pt Cl
Cl Cl
Figure 84. Trichloromonoammineplatinate(II) de potassium K[PtCl3NH3].
La prparation du sel de Cossa est prsente dans le schma 21.181 Lchange dun ligand NH3 du cisplatine par un chlorure est ralis par laction de lacide chlorhydrique concentr au reflux de leau. Aprs refroidissement, les restes de cisplatine prcipitent et sont limins par filtration. Le sel attendu 62 est obtenu aprs vaporation avec un rendement de 91 %. Enfin, lchange du contre-ion ammonium par un potassium est ralis par le passage sur rsine Dowex 50 x 8 charge en K+. tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
H3N Pt Cl
NH3 Cl
HCl concentr H2O, reflux
H3N Pt Cl
Cl Cl 62, 91%
NH4 Dowex 50 x 8 [K+]
H3N Pt Cl 63
Cl Cl
Schma 21. Prparation du trichloromonoammineplatinate(II) de potassium.
La caractrisation des sels est ralise par analyse infrarouge. Pour le sel 62, on observe une bande caractristique de lammonium 1410 cm-1 (en comparaison avec le chlorure dammonium, bande 1400 cm-1) ; cette bande tant absente dans le cas du sel potass 63. La coordination du platine par nos ligands en utilisant du sel de Cossa devrait nous permettre dobtenir des complexes chargs de type N3Cl ayant une meilleure solubilit et ne formant que des mono-adduits avec les bases de lADN. Cette stratgie t envisage essentiellement pour les complexes binuclaires de platine afin de permettre des pontages longue distance. Dans certains cas, nous avons aussi utilis le cisplatine directement afin de former des complexes chargs avec une coordination de type N4 dans le but dobtenir des composs plus solubles dans leau que leurs analogues N3Cl.
95
III.2. Prparation des complexes mononuclaire de platine

III.2.1 Complexes mononuclaires de platine avec les ligands triazole-amine portant une chane amide
Les complexes de cette srie sont prpars selon le mode opratoire prcdemment dcrit en prsence de K2PtCl4 et dun quivalent de KOH. La raction de complexation se droule sur 24 heures et les produits 64 69 ont t isols par filtration.
H R N O N N N NH2,HCl H2O KOH, K2PtCl4 N N O Cl N Pt Cl NH2
H R N
Produits attendus
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
H N O
Cl N Pt Cl NH2
64
H N O
Cl N Pt Cl NH2
65
H N O
Cl N N Pt Cl N NH2
66
H N N H H N O O
N N
Cl N Pt Cl NH2
67
H N O
Cl N Pt Cl NH2
68
Cl N Pt Cl NH2
69
Figure 85. Complexation du platine par des ligands bidentes triazole-amine avec une chane amide.
Les complexes de cette srie sont insolubles dans leau et trs peu solubles dans le DMF. Les spectres RMN-1H, raliss dans le DMF-d7 nous ont permis dobserver diffrent singulets correspondant au proton H-5 du triazole. La solubilit du complexe dans le DMSO-d6 est plus importante. Dans ce solvant nous observons galement la prsence de plusieurs signaux du triazole, cependant nous navons pas pu dterminer si ceci est du la prsence de plusieurs produits ou dune complexation du mtal avec le solvant. Lanalyse des complexes par spectromtrie de masse na pas pu tre valide, du fait dune mauvaise ionisation des composs due la prsence de DMF. Cependant, nous observons pour chaque complexe un pic de masse majoritaire correspondant une espce PtL2 dicationique (m/z= M(PtL2)/2). 96
Pour la validation de cette srie de complexe de platine, nous avons ralis les analyses lmentaires. Les rsultats obtenus nous montrent une trop forte teneur en lments lgers doss (C, H, N). Ces rsultats laissent penser, que nous sommes en prsence de mlanges entre le complexe souhait et un complexe de stchiomtrie 1 Pt pour 2 ligands. Nous ne pouvons donc conclure sur lobtention des complexes attendus.
III.2.2 Complexes mononuclaire de platine avec des ligands triazole-amine alkyls

Les complexes de cette srie ont t prpars au dpart des chlorydrates et de K2PtCl4 en milieux aqueux basique. Les complexes sont isols par filtration.
N K2PtCl4 N R1 N HCl R2 KOH H2O N Cl N Pt Cl N R2 R1
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Produits attendus
N Cl N Pt Cl NH2 N Cl N Pt Cl NH N Cl N Pt Cl N
(1), 63%
70, 40%
71
Figure 86. Complexation du platine par des ligands triazoles bidentes avec amine methyle.
Les complexes 70 et 71 sont insolubles dans leau et peu solubles dans des solvants tels que le DMSO et le DMF. Ceci nous a malheureusement empch dutiliser la RMN pour les analyser. Lanalyse HRMS rvle, de la mme manire que prcdemment, la prsence dun pic m/z= M(PtL2)/2. Nous avons par la suite ralis les analyses lmentaires des complexes 70 et 71. Alors que lanalyse de 70 est en accord avec la structure attendue, celle de 71 ne possde pas un accord suffisant entre les valeurs calcules et les valeurs exprimentales (< 0,4 %) pour conclure.
97
III.2.3 Complexes avec le ligand bidente triazole-amine 28 et diffrentes sources mtalliques.

Pour avoir des composs plus solubles que les prcdents nous avons essay dobtenir des complexes cationiques. Pour cela, le ligand 28 a t complex avec le cisplatine et le sel de Cossa. Les conditions exprimentales sont reportes sur les figures 87 et 88.
2+ N N N NH2 HCl 28 H2O 72, 100 % [PtCl2(NH3)2], KOH N N H3N N Pt NH3 NH2 2Cl-
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Figure 87. Mtallation du ligand 28 par le cisplatine
Pour obtenir le complexe dicationique 72, le ligand 28 a t mis en raction avec le cisplatine dans leau pendant 3 4 jours temprature ambiante. En fin de raction, les traces de cisplatine nayant pas ragi sont limines par filtration et 72 est obtenu avec un rendement quantitatif. Le complexe peut tre form de la mme manire en chauffant le mlange ractionnel pendant 5 heures 40 C. Le complexe form, charg positivement, est soluble dans leau ce qui nous a permis de raliser les analyses RMN 1H,
13
C et spectromtrie de masse. Ces analyses ont permis de
confirmer la formation de lespce mononuclaire PtL attendue. Dans le cas de 73, le ligand 28 a t mis en raction avec le sel de Cossa dans leau. Un prcipit blanc est obtenu aprs quelques heures. Le prcipit est alors filtr et les eaux mres vapores pour donner un solide jaune. Le prcipit blanc, trs peu soluble dans leau, a t analys dans le DMSO-d6 et le solide jaune dans D2O. Dans les deux cas, nous avons observ la formation de multiples produits.
Cl N N N NH2 HCl 28 Pt Cl
NH Cl
K N N Cl N Pt NH3 NH2
+ Cl-
KOH H2O
73
Figure 88. Mtallation du ligand 28 par le sel de Cossa.
98
III.2.4 Complexe palladi avec le ligand 28.

Nous avons russi isoler un complexe de Pd(II) du ligand triazole 28. Ce complexe, qui peut tre considr comme lanalogue palladi de 1, sera utilis pour des tudes comparatives avec la srie platine.
N N N NH2.HCl H2O 28 74, 82% K2PdCl4 N N Cl N Pd Cl NH2
Figure 89. Complexation du palladium par le ligand 28.
Pour former le complexe palladi 74 il nest pas ncessaire dutiliser un quivalent de base tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 pour librer lamine entrant en jeu dans la chlation du mtal. En effet, celle-ci a lieu spontanment avec le ligand sous sa forme chlorhydrate. La caractrisation de ce complexe a t ralise par analyse RMN-1H, 13C dans le DMF-d7. Un monocristal du complexe 74 a t obtenu par Aurlie Maisonial en ralisant la diffusion de lthanol dans une solution de DMF satur en complexe 35 C Le cristal a pu tre analys par diffraction des rayons X (Figure 90) par Pascale Lemoine (Universit ParisV).
Figure 90. Diagramme ORTPEP du complexe de palladium 74.
La structure met en vidence la formation, comme prvu, dun mtallacycle 5 chanons. Le tableau 7 prsente les longueurs de liaisons ainsi que les valeurs des diffrents angles caractristiques.
99
Distances [] N1-Pd N4-Pd Cl1-Pd Angles [] N4-Pd-Cl2 N4-Pd-Cl1 N4-Pd-N1
2,000(2) 20,38(2) 2,302(1) 90,35(5) 176,90(5) 81,69(7)
Cl2-Pd H8-H10a H8-H10b N1-Pd-Cl1 N1-Pd-Cl2 Cl1-Pd-Cl2
2,270(1) 33,07(8) 3,30(3) 95,96(5) 171,94(5) 92,06(2)
Tableau 7. Longueurs des liaisons et angles choisis pour le complexe palladium 74.
Comme son analogue platin, le centre Pd(II) prsente une gomtrie de type plan carr. Une distorsion dun angle de 2 entre les plans dfinis par les atomes N1-Pt-N4 et Cl1-Pd-Cl2 est observe. Les diagonales de ce carr distordu ne sont pas quivalentes. En effet, la liaison N1tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 Pd est plus courte que la liaison N4-Pd (2,000(2) et 2,038(2) respectivement) et la liaison Pt-Cl2 est galement plus courte que la liaison Pt-Cl1 (2,270(1) et 2,302(1) respectivement). Les interactions avec lADN du complexe palladi 74 feront lobjet dune tude comparative avec son complexe analogue de platine 1.
III.2.5 Complexe mononuclaire de platine avec le ligand tridente triazole-diamine.

La synthse du complexe platin 75 a t ralise selon les conditions standard basiques au dpart du chlorhydrate du ligand 32. Le complexe 75 est isol par filtration avec un rendement de 57 %.
K2PtCl4 N N N H2N H N 2HCl 32 KOH N H2O N Cl N Pt NH 75 H2 N
Cl
Figure 91. Complexation du platine par ligand triazole tridente.
Si le spectre RMN-195Pt de 75 dans le DMF-d7 rvle un pic unique -2400 ppm correspondant effectivement une coordination de type N3Cl, le spectre RMN-1H rvle la formation de deux produits. Puisque trois signaux correspondant aux H-5 des triazoles sont
100
observs, lchantillon analys pourrait tre un mlange avec un second complexe de stchiomtrie 1 Pt : 2 ligands. Sachant que la coordination du platine est de type N3Cl, nous pensons avoir obtenu le complexe 75 en mlange avec 76.
Cl N N Cl N N Cl N Pt NH N 75 N N Pt NH NH2 76 Cl H2 N H2N N HN
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Figure 92. Proposition des complexes de platine de coordination N3Cl forms
III.2.6 Complexe mononuclaire de platine avec le ligand triazole invers.

La synthse du complexe platin 77 prsente en figure 93 est dj rapporte dans la littrature.169
N N N N 34
cis-[PtCl2(DMSO)2] CH2Cl2, 13 jours
N N N Cl Pt N Cl 77, 80 %
Figure 93. Complexation du platine par ligand triazole bidente invers rapport par Kosmrlj.169
Pour des raisons dhomognit, nous avons prfr utiliser le protocole standard en faisant ragir le ligand 34 avec K2PtCl4 dans leau pendant 6 jours lobscurit. Le complexe est isol par filtration avec un rendement de 50 %. La chlation du platine par un ligand 1,2,3triazole invers se fait beaucoup plus lentement que dans le cas dun triazole direct (6 jours contre 1 jour). De plus, nous obtenons un rendement plus faible par rapport celui rapport par Kosmrlj lorsque K2PtCl4 est utilis comme source de platine.
101
N N N N 34
K2PtCl4 H2O
N N N Cl Pt N Cl 77, 50%
Figure 94. Complexation du platine par le ligand bidente triazole inverse.
Lanalyse RMN 1H du complexe 77 a t ralise dans le DMSO-d6, celle-ci est accord avec la littrature.
III.3. Prparation des complexes binuclaires de platine

tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
III.3.1 Complexes binuclaires de platine comportant des ligands bis-bidentes bis-triazole pont aliphatique.
Les synthses des complexes binuclaires de platine 78 et 79 ont t ralises au dpart des chlorhydrates des ligands 37 et 38 en prsence de deux quivalents de KOH pour librer les deux amines entrant en jeu pour la chlation du mtal (Figure 95).
Cl N N N N H2N HCl N N
n n = 1, 37 n = 3, 38
Cl Pt NH2
HCl NH2
K2PtCl4 KOH H2O Cl Cl Pt N H2N N N

n
N N N
n = 1, 3 n = 1, 78 n = 3, 79
Figure 95. Complexation du platine par les ligands bis-bidentes bis-triazole possdant un pont aliphatique 4 ou 6 carbones.
Les complexes 78 et 79 sont isols en fin de raction par filtration. Malheureusement, leur caractre trs insoluble ne nous a pas permis de raliser danalyse RMN correctement exploitable. Nous avons ralis lanalyse lmentaire du complexe 79, celle-ci est en accord avec les rsultats attendus. Nanmoins, cette analyse isole ne nous permet pas de conclure sur la caractrisation du produit.
102
III.3.2 Complexe binuclaires de platine comportant le ligand bistridentes bis-triazole pont aliphatique.
Pour pallier aux problmes de solubilit rencontrs prcdemment, nous avons cherch obtenir des complexes cationiques. La synthse du complexe binuclaire de platine 80 a t ralise selon nos conditions standard au dpart du chlorhydrate du ligand 36 et de K2PtCl4 en prsence de quatre quivalents de KOH pour librer les amines entrant en jeu lors la chlation du mtal (Figure 96).
H2N HN N 4 HCl N K2PtCl4 N N NH2 N H N 36 KOH,H2O Cl H2N Pt NH N N N 80 N H2N Cl N N Pt NH N 2Cl-
2+
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Figure 96. Complexation du platine par le ligand comportant deux units triazole-diamine tridentes avec relis par un pont aliphatique 6 carbones.
Contrairement ce que nous esprions, le complexe 80 est insoluble dans leau et le DMF. Aussi, nous avons ralis lanalyse RMN-1H dans le DMSO-d6. Nous observons diffrents signaux correspondant au H-5 du triazole. Nous ne savons pas si ceci est du la mauvaise solubilit du complexe et la prsence dimpurets plus soluble ou si il y a eu des changes de ligands avec le solvant.
III.3.3 Complexes binuclaires de platine comportant des ligands bis-bidentes bis-triazole pont ammonium aliphatique.
Lintroduction dun ammonium sur lespaceur reliant les deux triazoles devrait nous permettre dobtenir des composs plus solubles. Les synthses des complexes binuclaires de platine 81 et 82 ont t ralises au dpart des chlorhydrates 47 et 57 en prsence de deux quivalents de base (Figure 97).
103
HCl H2N Cl HCl H2N N N N

n
Cl Cl K2PtCl4 KOH H2O Cl H2N Pt Cl N N N N N

n
N N
N Cl N
n
Pt NH2 N
n = 1, 47 n = 2, 57
n = 1, 81 n = 2, 82
Figure 97. Complexation du platine par les ligands bis-bidentes bis-triazole pont ammonium 5 ou 7 chanons.
Les complexes 81 et 82 ne sont pas solubles dans leau, dans le DMSO ou le DMF. Les analyses RMN-1H nont donc pu tre ralises. Nous avons dcid de former le complexe aqua du complexe 81 en esprant obtenir un tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 produit soluble et analysable. Ce dernier est mis en raction en prsence de cinq quivalents dAgNO3 dans de leau deutrie (Figure 98). En fin de raction le chlorure dargent form est limin laide dun filtre millipore.
4+ OD2 AgNO3, D2O D2O H2N OD2 Pt N N N NO3 N 83 D2O Pt NH2 N N N
Cl Cl Cl Pt N N N N N Pt NH2 N
Cl H2N
Cl N
81
Figure 98. Aquation du complexe 81 par laction du nitrate dargent.
Malheureusement, la RMN-1H rvle la prsence de multiples produits. Toujours dans le but dobtenir des complexes solubles plus facilement analysables, nous avons tent de modifier la coordination du platine en changeant les deux chlorures par des NH3 puisque nous avions obtenu avec succs le produit soluble 72 dont la coordination du mtal est identique. Pour cela, nous avons mis le complexe 81 en raction avec lammoniaque (Figure 99).
104
Cl Cl Cl Pt N N N N N Pt NH2 N
4+ 4ClH3N Pt NH2 N N Cl N N NH3
Cl H2N
Cl N
NH3 aqueux, H2O H3N H2N NH3 Pt N N N
81
84
Figure 99. Tentative dchange des ligands chlorures du platine par lammoniac.
Nous navons pas observ la formation du complexe attendu 84. Lanalyse RMN 1H, ralise dans D2O, nous montre la prsence de deux singulets ( 8,2 et 8,3 ppm) correspondant deux triazoles. De plus, la prsence dun doublet ddoubl 7,4 ppm (Jtrans = 15,8 Hz et Jcis = 8,7 tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 Hz) et de deux doublets 6,1 et 5,5 ppm (respectivement Jtrans = 15,8 Hz et Jcis= 8,7 Hz) nous amne conclure quune limination de type Hofmann similaire celle rapporte plus haut pour le produit 48 a eu lieu (cf II.3.3). Nous avons essay dobtenir le complexe 85 au dpart du cisplatine comme ralis avec succs pour le compos 72.
4+
HCl H2N Cl HCl H2N N N N N N N N PtCl2(NH3) H3N H2N NH3 Pt N N N Cl N
H3N Pt 4ClNH2 N N N
NH3
47
KOH, H2O
85
Figure 100. Complexation du cisplatine par le ligand bis-bidente bis-triazole pont 5 chanons centr sur un ammonium.
Aprs limination des restes de cisplatine par filtration, le filtrat a t vapor et analys par RMN 1H dans D2O. Malheureusement, nous avons observ la prsence de multiples signaux.
105
III.3.4 Complexe binuclaire de platine comportant des ligands bisbis-bidentes bis-triazole invers pont di-ammonium.
La synthse du complexe binuclaire de platine 86 a t ralise au dpart du ligand 61 possdant deux fonctions ammonium en milieux aqueux et en prsence de deux quivalents du sel de platine K2PtCl4 pendant trois jours (Figure 101).
Br N N
N N
X N X N
N N Cl N Pt Cl
Br N
K2PtCl4
N N N Pt N Cl 86, 70 % Cl
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
N N
N N 61 H2O N
Figure 101. Complexation du platine par le ligand bis-bidente bis-triazole pont 7 chanons avec deux ammoniums.
Le complexe 86 est insoluble dans leau et dans le DMF. Nous avons donc ralis lanalyse RMN-1H dans le DMSO. Nous observons un jeu de signaux caractriss par la prsence des signaux aromatiques de la pyridine, les protons aliphatiques ainsi que les mthyles. Nous observons, de plus, le dplacement caractristique li une complexation des triazoles au platine via le dplacement du pic H-5 triazole de 8,64 8,57 ppm et du proton en de lazote de la pyridine de 8,56 8,51 ppm.
106
III.3.5 Conclusion
Dans cette partie, nous avons ralis la complexation du platine(II) avec diffrentes familles de ligands triazoles. Nous avons dans un premier temps utilis K2PtCl4 comme source de mtal mais les complexes neutres obtenus savrent tre trs insolubles dans leau et le DMF, ce qui rend leurs caractrisation difficile et limite leur utilisation en biologie.. De ce fait, nous avons dutilis dautres sources de mtal (cisplatine et sel de Cossa) pour former des complexe cationiques dans le but daugmenter la solubilit aqueuse. Cette stratgie nous a permis dobtenir certains complexes dont lanalyse a pu tre ralise dans leau. Ainsi, nous avons pu obtenir le complexe soluble 72. Par contre, lutilisation du sel de Cossa ne nous a pas permis dobtenir des complexes possdant une solubilit suffisante et a men la formation de plusieurs produits. tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 Nanmoins, nous avons obtenu trois complexes (deux directs (Pt, 1 ; Pd, 74 et un invers 77) dont les solubilits permettent dentamer une tude plus pousse vis--vis de leurs interactions avec les bases nucliques, laquelle sera consacr le chapitre suivant.
107
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Chapitre IV : Ractivit des complexes avec lADN
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IV.1. Introduction
Lactivit biologique des complexes de platine 1,2,3-triazole bidentes avait dj fait lobjet avant mon arrive au laboratoire dune tude montrant, dans certains cas, leur cytotoxicit. Nanmoins, nous ne connaissions pas encore leur mode daction. Dans un premier temps, nous nous sommes propos dtudier leurs interactions avec les nuclosides avant denvisager une tude sur lADN. Pour cela, nous sommes parti dun modle simple, la guanosine, afin didentifier les adduits du platine et de la partie guanine du nucloside. Notre tude sest poursuivie par lvaluation des interactions avec de lADN plasmidique. Enfin nous avons dcid dtudier plus en dtail le mode dinteraction des complexes avec une squence dADN autocomplmentaire avec une structure en pingle cheveux (hairpin) pour tenter de tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 quantifier les diffrents types dadduits forms (mono, intra ou interbin).
IV.2. Interaction des complexes mtalliques (Pt, Pd) avec la guanosine.

Nous avons mis en raction les complexes platins et palladis 1 et 74 avec la guanosine. Pour cela, nous nous sommes bas sur les travaux dEastman prcdemment raliss avec le cisplatine et diffrents dsoxyribonucloside (G, A et C).182 (Schma 22).
O N Cl H3N Pt Cl NH3 HO O OH H2O, pH 5.5, 37 C N N NH NH2 NaClO4 10 mM Adduits Pt-dsoxyguanosine
Schma 22. Raction du cisplatine avec la dsoxyguanosine.
Diffrentes expriences ont t ralises, notamment en variant les rapports molaires cisplatine/dsoxyguanosine (rapports : 1/5, 1/1, 5/1). Les mlanges ractionnels ont t analyss par HPLC et les diffrents produits spars ont t analyss par RMN-1H afin dtre identifis. Les profils chromatographiques des ractions sont prsents dans la figure 102.
108
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Figure 102. Chromatogramme HPLC pour la sparation des produits issus de la raction du cisplatine avec la dsoxyguanosine avec des rapports molaires diffrents : 1/5, 1/1, 5/1. 182
La proportion des produits forms dpend fortement des conditions ractionnelles. En prsence dun excs de dsoxyguanosine (dG), le produit majoritaire correspond un adduit dG-Pt-dG (Figure 102). En prsence dun excs de cisplatine par rapport au dsoxyribonucloside, le produit majoritaire correspond au mono-adduit dG-Pt. Un autre produit peut ventuellement tre observ, il sagit de ladduit dG-Pt2. La RMN-1H du monoadduit dG-Pt a rvl un changement du dplacement chimique du proton H-8 de la guanosine pour lequel une variation de +0,4 ppm a lieu (tableau 8).182 Dplacement chimique du H-8 (ppm) Dsoxyguanosine (dG) 8,08 Adduit dG-Pt 8,49
Tableau 8. Analyse des dplacements chimiques du proton H-8 de la dsoxyguanosine.
Les mmes observations ont t rapportes par Plavec et Chattopadhyaya qui ont utilis la forme active aqua du cisplatine. 183 Pour notre tude, nous avons dcid de suivre le protocole de Plavec et Chattopadhyaya pour obtenir les formes aqua des complexes 1 et 74. Les complexes sont mis en raction avec deux quivalents de nitrate dargent dans leau et lobscurit pendant 48 heures. En fin de
109
raction le prcipit de chlorure dargent form est limin laide dun filtre Millipore (Schma 23).
2+ N H2N Cl N N M Cl 2NO3AgCl
AgNO3 2,5q.
H2O, 3jours
N H2N H2O N N M OH2
M = Pt, 1 M = Pd, 74
M = Pt, 87 M = Pd, 88
Schma 23. Activation du complexe par aquation du mtal en prsence dAgNO 3.
Nous avons mis les complexes aqua 87 et 88 en raction avec 2,5 quivalents de guanosine dans leau pendant 24 heures (Schma 24). Aprs un temps choisi, une addition de NaCl tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 satur permet darrter toute raction, puis les chantillons sont filtrs.
2+ O N N HO O OH OH N NH NH2 H2N N N H2N H N O M N N N O H N N N O OH HO HO OH OH NH2
N H2N H2O N N M OH2
2+
H2O 1-2 jours

HO
M = Pt, 87 M = Pd, 88
M = Pt, 89 M = Pd, 90
Schma 24. Raction des complexes aqua 87 et 88 avec la guanosine.
Pour la raction du complexe aqua 87 avec la guanosine, le mlange ractionnel a t analys par HPLC analytique (MeOH/AcONH4 (0,1 M), pH 5,5 avec un gradient de MeOH de 5 30 %) (Figure 103). Sur le chromatogramme, nous observons le pic rsiduel du complexe platin de dpart (7,9 min.), le second pic correspondant la guanosine libre (13,2 min) et le troisime pic lunique adduit form, ladduit G-Pt-G (29,9 min).
110
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AC1 49
2 - 13,155
O
N N N O N N O OH HO HO OH H N
UV_VIS_1 WVL:254 nm
200
HO O
N N N
NH NH2
H2N H N N N O HO O
H2N
Pt
NH2
150
OH OH
OH
100
3 - 29,895
50
1 - 7,987
-50 0,0
min 5,0 10,0 15,0 20,0 25,0 30,0 38,3
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Figure 103. Chromatogramme HPLC pour la sparation des produits issus de la raction du driv aqua du complexe platin (1) avec la guanosine. 184
Ladduit platin 89 a pu tre isol aprs sparation du mlange par HPLC prparative (MeOH/AcONH4 0,1 M, pH 5,5 condition isocratique 25 % - 75 %). Le mlange a ensuite t dessal en utilisant une membrane de dialyse dont le cut-off est 500 daltons. Le complexe a t identifi par analyse RMN-1H et par spectromtrie de masse. La structure du complexe platin 89 a t confirme par analyse RMN-1H. Le spectre prsent dans la figure 104 confirme la prsence dun unique produit de stchiomtrie 1:2 (mtal/guanosine). Nous observons un changement du dplacement chimique des protons H-8 des deux guanosines pour lequels une variation de + 0,4 et + 0,5 ppm a lieu (en comparaison avec le dplacement chimique du H-8 de la guanosine de 8,0 ppm dans D2O). Ceci confirme une platination de lazote N-7 des guanosines par le complexe 1, comme dj rapport pour le cisplatine. En raison de lasymtrie du complexe, le spectre prsente deux groupes de signaux distincts pour la partie nucloside (cela nest pas observ dans le cas de ladduit symtrique avec le cisplatine).183 Lattribution des signaux a t faite grce lexploitation de lanalyse dun spectre RMN de corrlation 1H-1H (COSY). Lanalyse en spectromtrie de masse du complexe 89 (masse exacte = 949.2543), prsente un pic de base caractristique m/z = 474.5974, correspondant [M]2+ (Figure 105). Ceci nous permet dattester de la formation du complexe. Le motif isotopique de ce pic est en accord avec la prsence dun platine. 111
H2N H2N H N N N H
1'
O N H8 OH
Pt
N N N O N H8 HO OH N H1' O OH H N N NH2
O HO
Htriazole H8 H1 H8 CH2-Ph
H3 H3 H2 CH2-NH2 + H4
HO
H5
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Figure 104. Spectre RMN 1H du complexe platine guanosine 89 dans D2O (300 K).
Figure 105. Spectre de masse du complexe platine guanosine 89.
112
Dans le cas du complexe palladi 90, la raction fournit un produit unique sans doute parce que la premire tape daquation est plus efficace que dans le cas du platine. Le produit a donc pu tre utilis tel quel pour lanalyse RMN-1H (Figure 106). Le spectre RMN du complexe palladium-guanosine confirme une stchiomtrie 1:2. La mtallation de lazote N-7 des guanosines est confirme par les dplacements chimiques des protons H-8, pour lesquels on observe une variation de + 0,40 et + 0,30 ppm par rapport la guanosine. Comme pour son analogue platin, on observe deux groupes de signaux distincts pour la partie nucloside, du fait de lasymtrie de la molcule. Lanalyse en spectromtrie de masse du complexe 90 (masse exacte = 860.1930), prsente un pic de majoritaire caractristique m/z = 430.0948, correspondant [M]2+ (Figure 117). Ceci nous permet dattester de la formation du complexe. Le motif isotopique de ce pic est en tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 accord avec la prsence dun palladium.
H2N H2N H N N N H
1'
O N H8 OH
N N N Pd
H N N N
NH2
N H8 HO
H1' O OH OH
O HO
H3H3 Htriazole H8 H8 CH2-Ph H1 H2 H4, H4 CH2-NH2
HO
H5
Figure 106. Spectre RMN 1H du complexe palladium-guanosine 90 dans D2O (300 K).
113
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Figure 107. Spectre de masse du complexe palladium-guanosine 90.
En conclusion, nous avons russit obtenir des adduits similaires ceux obtenus avec le cisplatine. La formation des complexes cationiques semble plus facile dans le cas du palladium, un phnomne que nous attribuons la plus grande facilit de formation de lespce aqua.
IV.3. Interaction des complexes mtalliques (Pt, Pd) avec lADN plasmidique surenroul.
LADN plasmidique surenroul est souvent utilis comme un outil servant mettre en vidence linteraction dune molcule avec lADN. Selon la nature de linteraction, le plasmide peut adopter diffrentes formes appeles relaxes . Dans le cas dune interaction covalente produite par une platination (Figure 108), des forces de tension se crent et produisent une dtorsion du plasmide en forme relaxe. Dans le cas dune coupure, la dtrioration dun brin entraine aussi une relaxation que lon nomme forme ouverte ou open circular. Une simple lectrophorse sur gel permet alors didentifier facilement les diffrentes formes du plasmide.
114
Forme surenroule
cisplatine
H2O/NaClO4
Forme relaxe
Forces de tension
Figure 108. Relaxation du plasmide surenroul par laction du cisplatine.
Nous avons donc mis profit ce type dexprience pour nous assurer que nos complexes tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 interagissent avec lADN plasmidique de faon similaire au cisplatine. Pour cette srie danalyses nous avons examin la gnotoxicit des complexes directs 1 et 74 et le complexe inverse 77 sur le plasmide surenroul pcDNA4TO. Les rsultats pour nos complexes sont compars ceux obtenus avec le cisplatine. La figure 109 prsente le gel dlectrophorse obtenu aprs 24 heures de raction. La ligne 1 correspond au contrle plasmide surenroul. En ligne 2, lendonuclase BamH1 est utilise pour linariser le plasmide afin de diffrencier les formes linaire et relaxe. La ligne 3 correspond au contrle plasmide en prsence de perchlorate de sodium. La ligne 4 correspond laction du cisplatine connu pour relaxer le plasmide. La ligne 5 correspond au contrle plasmide en prsence de DMF et de NaClO4. Enfin, les lignes 6, 7 et 8 prsentent respectivement laction des complexes 1, 74 et 77.
1 2 3 4 5 6 7 8
Forme relaxe Forme linaire Forme surenroule
Figure 109. Gel lectrophorse (1% agarose) prsentant laction du cisplatine et des complexes 1, 74 et 77 sur le plasmide surenroul pcDNA4TO. 1) Blanc plasmide surenroul, 2) plasmide linaris par BamHI, 3) contrle plasmide + NaClO 4, 4) action du cisplatine, 5) contrle plasmide + DMF+ NaClO4, 6) action complexe 1, 7) action complexe 74, 8) action complexe 77 .
115
Il apparat que la relaxation du plasmide a lieu quelque soit la nature du mtal (platine, ligne 6 ou palladium, ligne 7) ou du ligand (direct, ligne 6 ou inverse, ligne 8) et ceci, de faon similaire laction du cisplatine. Pour aller plus loin dans la dmarche de comprhension, nous avons essay de dterminer le type dadduits forms avec lADN grce lutilisation dun oligonuclotide de squence connue.
IV.4. Interaction du complexe mtallique (Pt) avec lADN en structure hairpin.

IV.4.1 Rappel bibliographique
Pour ce travail, nous avons repris des tudes ralises par lquipe de Kozelka qui, pour la mise en vidence du mcanisme ractionnel des complexes de platine sur lADN, utilise des tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 squences connues doligonuclotides auto-complmentaires en forme dpingle cheveux (hairpin).185,186 Lhairpin prsente dans la figure 110 a t slectionne car elle permet de former la fois des pontages inter- et intrabrin.
Pt
Intra
Pt
Inter
Figure 110. Structure de lhairpin (20 mer auto-complmentaire : 5-TATGGCAT(T)4 ATGCCATA-3) dont la structure permet des pontage intra- et interbrins par laction dun complexe de platine.
Lquipe de Kozelka a ralis des cintiques de complexation du cisplatine sous forme diaqua en considrant des mono-adduits et des chlations intra- et interbrins. La raction entre cette hairpin et le cis-[Pt(NH3)2(H2O)2]2+ volue selon trois ractions de platination indpendantes et quatre ractions de chlation (Figure 111). Le rsultat a t analys par HPLC (Figure 112), cinq nouvelles espces ont pu tre mises en vidence : 3 mono-adduits, 1 pontage intrabrin et 1 pontage interbrins.
116
Figure 111. Raction du driv diaqua du cisplatine avec lhairpin.185
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Figure 112. Chromatogramme HPLC du mlange ractionnel issu de laction du driv diaqua du cisplatine avec lhairpin. D : hairpin libre, I5, I3, IG : monoadduit respectivement sur G1, G2 et G3, Cintra : chelation intrabrin, Cinter : pontage interbrins.185
Les sites de fixation et les intermdiaires ont t identifis aprs une digestion enzymatique des produits et une analyse par spectromtrie de masse des fragments ou par la mthode de squenage de Maxam-Gilbert.187
117
IV.4.2 Interaction du complexe de platine 1 avec lhairpin

Nous nous sommes concentrs sur la ractivit du complexe platin 1 avec lhairpin par comparaison avec le cisplatine. La figure 113 prsente le mode opratoire mis en place. Nous nous sommes bass sur une stchiomtrie 1:1 platine/hairpin afin de faciliter la dtermination de la proportion des diffrents adduits. Les concentrations utilises pour les complexes de platine sont en accord avec celles dcrites dans les expriences de Kozelka (10-4M).
Cl H 3N
Pt
Cl NH3
24h, TA, obscurit ADN Hairpin NaClO4(10mM), H2O Adduits ??
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
concentrations Hairpin 1,72 .10-4 M Cisplatine 2,00 .10-4 M
nombre de moles 1,72 nmoles 2,00 nmoles
Figure 113. Conditions utilises pour la raction du cisplatine avec lhairpin.
Pour le complexe 1, la raction se droule en prsence de 1% de DMF, pour des raisons de solubilit. Les chantillons ont ensuite t analyss par HPLC analytique (colonne nucleosil C8, phase mobile TEAA (actate de trithylammonium) 20 mM + NH4Cl 1M, gradient actonitrile 10-20%). Les figures 114 et 115 prsentent respectivement les chromatogrammes obtenus pour le cisplatine et le complexe 1. Les chantillons ont galement t analyss par HPLC couple la spectromtrie de masse, ce qui nous a permis de vrifier la nature des adduits (simple ou double adduit).
120 hairpinKOzl #38 mAU HP cispt 10-4M perchlo UV_VIS_2 WVL:250 nm
1
75
1: Hairpin 2: mono-adduit 3: di-adduit
50
2
25
5 0,169 0,947 3 - 0,772 12- --0,641
4 - 0,877
-40 0,0
min 10,0 20,0 30,0 40,0 50,0 55,0
Figure 114. Chromatogramme du mlange des adduits forms entre le cisplatine et lhairpin.
118
300 hairpinKOzl #37 mAU
HP ac-I-42 10-4m perchlo
UV_VIS_2 WVL:250 nm
1
200
1: Hairpin 2: mono-adduit
100
6 0,461 1,060 5 - 0,953 3 -- 0,772 12- -Peak 1 - 0,037 4 - 0,850
-50 0,0
min 10,0 20,0 30,0 40,0 50,0 55,0
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Figure 115. Chromatogramme du mlange des adduits forms entre le complexe de platine (1) et lhairpin.
Pour la raction entre le cisplatine et lhairpin, nous observons sur le chromatogramme HPLC la prsence de trois produits. Le premier pic correspond lhairpin seule (mme temps de rtention). En spectromtrie de masse, les fonctions phosphates sont partiellement protones pour donner un signal associ une espce trianionique (masse dun hairpin : 6094 daltons, m/3 = 2031,3). Le second pic correspond un mono-adduit du platine. Il se caractrise par un signal dune espce trianionique m/3 = 2119,6 ce qui correspond laddition de [Pt(NH3)2Cl]+ sur lhairpin (m = 6358,6 daltons). Le troisime pic, obtenu majoritairement, correspond laddition de [Pt(NH3)2]2+ sur lhairpin (m = 6323,1 daltons), caractris en spectromtrie masse par un signal m/3 = 2107,6. Dans le cas du complexe 1, mis part lhairpin de dpart, un seul produit est dtect. En spectromtrie de masse il se caractrise par un signal m/3 = 2171,3 conforme laddition de [Pt(triazole)Cl]+ sur lhairpin (m= 6515,8 daltons). Dans ces conditions ractionnelles, dune manire gnrale peu dadduits sont forms par rapport la quantit dhairpin de dpart. Le cisplatine forme majoritairement du di-adduit, tandis que le complexe 1 ne forme quune petite quantit de mono-adduit. Pour essayer de mieux comprendre les rsultats obtenus, nous avons dcid de travailler directement avec les drivs aqua des complexes de platine connus pour tre plus ractifs. Pour cela, les complexes aqua du cisplatine et du complexe 1 ont t obtenus en utilisant le nitrate dargent comme dcrit prcdemment. Les complexes aqua ont t mis en raction dans leau directement avec lhairpin dans les mmes conditions ractionnelles que celles 119
prsentes dans la figure 113. Les chantillons ont t analyss par HPLC analytique (Figures 116 et 117) et la nature des adduits a t vrifie par spectromtrie de masse.
300 hp janv 2010 #39 mAU
aqua cispt
UV_VIS_2 WVL:260 nm
200
1: Hairpin 2: mono-adduit 3: di-adduit 3
100
1
4 - 0,970
1 2 Peak 1 - 0,021 - - 0,547 3 - 0,890
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
-50 0,0
min 5,0 10,0 15,0 20,0 25,0 30,0 35,0 40,0
Figure 116. Chromatogramme du mlange des adduits cisplatine et lhairpin.
forms entre le driv diaqua du
Grce lutilisation du complexe aqua, la quantit totale dadduits forme est suprieure celle obtenue avec le cisplatine. Les proportions des adduits forms sont changes (comparaison figures 114 et 116). On constate que le di-adduit semble tre favoris et que la quantit de mono-adduit est diminue.
140 hp janv 2010 #24 mAU hp +aqua 42 1eq UV_VIS_1 WVL:250 nm
100
1: Hairpin
50
1
6 - 0,959
1 2 Peak 1 - 0,037 - -- 0,542 4 0,734 3 0,701 5 - 0,879
-40 0,0
min 5,0 10,0 15,0 20,0 25,0 30,0 35,0 40,0
Figure 117. Chromatogramme du mlange des adduits forms entre le driv diaqua du complexe 1 et lhairpin.
120
Dans le cas du complexe aqua de 1, la quantit dhairpin restante est trs infrieure celle obtenue avec le complexe 1, mais de multiples produits sont forms (comparaison figure 115 et 117). Les conditions HPLC utilises avant lintroduction dans le spectromtre de masse ne nous ont pas permis de sparer les diffrents produits, leurs identifications nont donc pu tre ralises.
IV.5. Conclusion
Nos expriences nous ont confirm la formation dadduits complexe-guanine de stchiomtrie 1 : 2. Nous avons test la ractivit de trois complexes de natures diffrentes sur de lADN plasmidique surenroul, les rsultats ont montr une relaxation du plasmide similaire au cisplatine. tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 Enfin, nous avons essay didentifier la nature des adduits forms par le complexe 1 avec une squence doligonuclotide en pingle cheveux. Pour ce faire nous avons ralis des ractions au dpart du complexe neutre et de son driv aqua. Le complexe 1 forme une espce de type mono-adduit. Sa forme aqua est apparue plus ractive, mais nous avons obtenus plusieurs produits que nous navons pas pu identifier.
121
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Chapitre V : Le complexe [CuCl(SIMes)] : Catalyseur pour la CuAAC, activits biologiques.
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
V.1. Introduction
Au sein de lquipe, diffrents sujets dtude autour de complexes de carbnes Nhtrocyclique sont mens aussi bien dans le domaine de la catalyse que dans le domaine la ltude de lactivit antitumorale. Ce chapitre prsente tout dabord diffrents rsultats obtenus lors dtudes de ractivit de drivs du complexe de Nolan [CuCl(SIMes)], 91 comme catalyseur de la CuAAC. Par la suite nous rapportons les activits biologiques associes 91 dans le domaine apoptotique.
N CuCl 91
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Figure 118. Complexe [CuCl(SIMes)].
Dune manire gnrale les mtallo-NHC sont souvent reconnus comme de bons catalyseurs, cependant quelques uns ont fait galement lobjet de tests dactivit biologique. Beaucoup de tests se sont focalises sur leurs activits antimicrobiennes, et trs rcemment leurs proprits anticancreuses ont fait lobjet dtude et ont t rapportes dans une revue (Figure 119).188
2+
N Au N N N Au
N N N
tBu N N N Cl Pd Cl N tBu Cl N N Cl N AgOAc
92
93
94
Figure 119. Exemples de complexes mtal-NHC prsentant des proprits antiprolifratives.
Dans ce domaine, lquipe de Baker et Berners-Price a mis au point une srie de complexes homoleptiques Au(I)-(NHC)2 comme le complexe 92 (Figure 119) possdant une activit proapoptotique.189 Par la suite lquipe de Panda et Ghosh a publi une tude ddie aux complexes palladium(II)-NHC. Le complexe 93 se trouve tre un agent antiprolifratif suprieur au cisplatine, notamment contre les cellules tumorales HL60 (leucmie) et provoque un arrt du cycle cellulaire en phase G2.190 Enfin un exemple rcent de complexe anticancreux, le complexe htroleptique argent(I)-NHC 94 dvelopp par lquipe de
123
Youngs prsente une IC50 similaire celle du cisplatine sur des lignes cellulaires des ovaires et du sein.191 Suites aux dcouvertes dactivits anticancreuses de ces divers mtallo-NHC, lquipe a dcid de mener des tests dactivit biologique sur des NHC base de cuivre(I). Ainsi, le complexe [CuCl(SIMes)] a galement fait lobjet dtudes de cytotoxicit contre les cellules tumorales.
V.2. Activit catalytique du [CuCl(SIMes)] pour la CuAAC et amlioration du systme par addition de ligand donneur datomes N.
V.2.1 Criblage dactivit des cuivre(I)-NHC
De nombreux complexes de cuivre ont t dvelopps comme catalyseurs de la CuAAC. La tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 mthode de catalyse la plus efficace consiste combiner du cuivre avec des ligands amins (TBTA, (BimC4A)3, bathophnantroline) en prsence dagent rducteurs sacrificiels (pour rduire le cuivre introduit ltat Cu(II) et/ou pour empcher loxydation du Cu(I)). Dautres catalyseurs a base de cuivre(I) ne ncessitant pas dagent rducteur ont eux aussi fait leur preuves, notamment le complexe [CuCl(SIMes)], dvelopp par lquipe de Nolan. Dans un premier article, diffrents cuivre(I)-NHC ont fait lobjet de criblage dactivit. Il en ressort que les complexes [CuX(SIMes)] (X = Cl, Br) prsentent une bonne activit avec une charge relativement leve dans un mlange eau/tert-butanol. Lactivit de ce catalyseur est encore augmente dans des conditions on water ou en labsence de solvant (Figure 120).142
N3
[Cu] N Solvant, Tambiante
N N
Entre 1 2 3 4 5 6
Catalyseurs (mol %) [CuCl(IPr)] (5) [CuCl(IMes)] (5) [CuCl(SIMes)] (5) [CuBr(SIMes)] (5) [CuBr(SIMes)] (5) [CuBr(SIMes)] (0,8)
Solvant eau/tBuOH eau/tBuOH eau/tBuOH eau/tBuOH eau non
Temps (h) 18 18 18 9 0.5 0.3
Rendements [%] 18 65 93 95 98 98
Figure 120. Criblage dactivit de complexe cuivre(I)-NHC pour la raction de CuAAC entre lazoture de benzyle et le phnylactylne.142
124
Dans un second article, Nolan et Diez rapportent le criblage dactivit de complexes de cuivre(I) homoleptiques de type [Cu(NHC)2]X (Figure 121). Au cours de ce travail, le complexe [Cu(ICy)2]PF6 sest rvl trs efficace pour catalyser la raction de cycloaddition entre lazoture de benzyle et le phnylactylne. Le catalyseur peut tre utilis avec une charge catalytique de 50 ppm dans des conditions sans solvant.143
N3
[Cu(NHC)2]X 2 mol % N eau, Tambiante
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
[Cu(NHC)2]PF6 Temps (h) [Cu(IPr)2]PF6 18 [Cu(SIPr)2]PF6 5 [Cu(IMes)2]PF6 6 [Cu(SIMes)2]PF6 18 [Cu(ICy)2]PF6 1,5 [Cu(IAd)2]PF6 5 [Cu(ItBu)2]PF6 18
% conv. 71 100 100 5 99 100 76
[Cu(NHC)2]BF4 [Cu(IPr)2] BF4 [Cu(SIPr)2] BF4 [Cu(IMes)2] BF4 [Cu(SIMes)2] BF4 [Cu(ICy)2] BF4 [Cu(IAd)2] BF4 [Cu(ItBu)2] BF4
Temps (h) 8 5 6 18 5 3 18
% conv. 100 100 100 13 95 100 35
Figure 121. Criblage dactivit de complexe [Cu(NHC)2]X pour la raction de CuAAC entre lazoture de benzyle et le phnylactylne.143
Nanmoins, les conditions optimales (on water ou sans solvant) de ces deux catalyseurs restent limites la synthse de triazoles au dpart de produits liquides. Ces conditions ne sont galement pas adaptes la synthse en solution de produits sensibles.
V.2.2 Criblage dactivit du [CuCl(SIMes)] en prsence dadditifs chlatant le mtal

Pour surmonter les limitations prsentes ci-dessus, nous avons tent dassocier un ligand azot donneur aux complexes cuivre-NHC. En effet, linspection des donnes obtenues par diffraction X des complexes [CuX(NHC)] nous rvle une gomtrie linaire de la partie C(Carbne)-Cu-X et une faible distance Cu-X (2,1 pour X = Cl) typique des ligands donneurs. Les effets dacclration de la catalyse en conditions homognes sont observs avec des ligands aromatiques azots donneurs tels que la TBTA ou la phnanthroline. Dans les complexes de phnanthroline la gomtrie du centre mtallique est ttradrique et non pas linaire. Nous avons suppos que lintroduction de ligands azots devrait, en augmentant la 125
densit lectronique sur le mtal, augmenter la distance Cu-Cl et rendre le complexe plus soluble en facilitant la formation dun complexe cationique dans des solvants polaires. De plus, nous avons suppos que lintroduction de ce type de ligand devrait mener un centre mtallique ttradrique plus propice la catalyse tout en conservant la stabilit du cuivre vis-vis de loxydation. En rsum, nous esprons obtenir un catalyseur soluble, efficace et fonctionnant sans lintervention dun rducteur sacrificiel.
Nous avons slectionn plusieurs htrocycles azots insaturs: la L-histidine, le Nmthylimidazole (NMI), la 4-dimthylaminopyridine (DMAP), la phnathroline (Phen) et la bathophnanthroline (Bathophen) pour valuer leur influence sur le droulement de la CuAAC catalyse par le [CuCl(SIMes)] entre lazoture de benzyle et le phnylactylne (Figure 122).192 tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
N3
[CuCl(SIMes)] additifs eau/tBuOH 2:1
N N
Entre Additifs (ratio) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 non L-histidine (1:1) NMI (1:1) NMI (1:2) 4-DMAP (1:1) 4-DMAP (1:2) Phen (1:1) Phen (1:1) Phen (1:1) Bathophen (1:1)
Charge [mol %] 1 1 1 1 1 1 1 1 0.1 1
Temps [h] 18 18 18 18 18 18 18 4 72 18
T [C] 20 20 20 20 20 20 20 85 50 20
Rendement [%] 10 0 76 24 63 84 78 83 73 69
Figure 122. Criblage dactivit du complexe [CuCl(SIMes)] en prsence dadditifs pour la raction de CuAAC entre lazoture de benzyle et le phnylactylne. 192
Les rsultats de la figure 122 montrent quen utilisant le [CuCl(SIMes)] seul en solution nous obtenons un trs faible rendement. Tandis que lhistidine semble avoir un effet dltre sur lactivit catalytique, laddition dun quivalent de NMI est bnfique (entre 3) et permet disoler le produit avec un bon rendement. Par contre, laddition dun second quivalent de NMI diminue lefficacit (entre 4) et fournit rapidement un compos rouge insoluble. Ceci
126
est peut tre du une oxydation du centre mtallique par loxygne de lair. Dans les cas o la DMAP est additionne, le meilleur rendement est obtenu en prsence de 2 quivalents de cette dernire (entres 5 et 6). Un effet bnfique est galement observ avec les ligands bidentes phnanthroline (entre 7) et bathophnanthroline (entre 10). Dans ce cas, la raction a lieu mme dans des conditions plus dures (solvant est port reflux, entre 8). Nous observons aussi que la raction est efficace avec une charge en catalyseur de 0,1 mol %.
Nous avons galement russi obtenir un monocristal du complexe [CuCl(Phen)(SIMes)] 95 analysable par diffraction des rayons X. (Figure 123) par addition dther thylique sur une solution du complexe dans le dichloromthane. Le cristal obtenu est de couleur rouge vif qui est la couleur classique des complexes de cuivre(I) avec la phnanthroline. tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Figure 123. Diffrentes vues du complexe [CuCl(Phen)(SIMes)] 95. 192
Latome de cuivre au sein du complexe 95 adopte une gomtrie distendue ttradrique profondment diffrente de celle observe pour le [CuCl(SIMes)]. Le tableau prsente les diffrents changements pour les longueurs et les angles de liaison.
Longueurs liaisons [] Cu-Cl [CuCl(Phen)(SIMes)] 2.347(2) [CuCl(SIMes)] 2.099(1) Angles de liaisons [] N3-Cu-N4 [CuCl(Phen)(SIMes)] 77.4(2) [CuCl(SIMes)] Cu-N3 2.114(5) N4-Cu-Cl 99.9(1) Cu-N4 2.128(5) N3-Cu-Cl 102.0(2) Cu-C1 1.916(7) 1.882(4) C1-Cu-Cl 120.5(2) 178.5(1)
Tableau 9. Distances et angles reprsentatifs des complexes 95 et 91.192
Nous observons que si la liaison carbne-cuivre reste inchange, la distance cuivre-chlore est allonge lorsque lon passe du complexe 91 au complexe ttradrique 95.
127
Aprs avoir lucid la structure du complexe ltat solide nous avons essay de connatre son comportement en solution. Pour cela, nous avons tout dabord utilis la mthode de Job qui permet de dterminer la stchiomtrie dun complexe en solution, si certaines conditions sont vrifies, notamment si un seul complexe est prpondrant en solution. Nous avons tir parti de labsorption 450 nm donnant sa couleur rouge au complexe. Le maximum de la courbe de Job se situant 0,5, ce qui montre lexistence dun complexe de stchiomtrie 1 :1 en solution (Figure 124).
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Figure 124. Jobs plot pour dterminer la stchiomtrie du complexe 95 dans CH2Cl2.
Comme les phnanthrolines mnent la formation de complexes en quilibre en solution, nous avons cherch dterminer la constante dassociation K (Figure 125). Ce travail a t ralis par Marie-Laure Teyssot, ATER au laboratoire SEESIB. La mthode classique de titration a t utilise, toujours en se basant sur la labsorption caractristique du complexe 450 nm. Lquation correspondant la formation dun complexe de stchiomtrie 1 :1 a permis dajuster les donnes exprimentales, en utilisant le programme de rgression non linaire Gnuplot (Figure 126).193
128
N K
CuCl
N N N
Cl
Cu
N
Phen 91 95
Figure 125. Equilibre en solution entre 91, Phen et 95.
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Figure 126. Courbe de titration du complexe 95 dans CH2Cl2.
Nos rsultats montrent une constante dassociation K denviron 240 - 250 M-1. Cette constante dassociation peut tre considr comme faible en comparaison avec les valeurs de la littrature reportes pour les complexes [Cu(phen)]+ et [Cu(phen)2]+ (K >105 M1 194
).
Cette faible association peut tre due un encombrement strique entre la partie carbne
et la phnanthroline ou , un effet lectronique entre ligands et . Nanmoins, cette association faible semble tre un lment cl pour laugmentation de la vitesse ractionnelle. Le complexe [CuCl(Phen)(SIMes)] est difficilement cristallisable et se dcompose en prsence dair aprs quelques semaines. De plus, sa dure de vie en solution, bien que suprieure la dure dune raction CuAAC est relativement courte (environ 24h). Nous avons alors cherch obtenir un autre catalyseur qui soit facilement cristallisable et stable sur le long terme. Pour cela, nous avons cribl dautres combinaisons carbne de cuivre(I)additif.172
129
Entre 1 2 3 4 5 6 7 8
Cuivre(I)-NHC (1mol %) [CuCl(SIMes)] [CuCl(SIMes)] CuCl(IMes)] CuCl(IMes)] [CuCl(SIPr)] [CuCl(SIPr)] [CuCl(IPr)] [CuCl(IPr)]
Additif non Phnanthroline non Phnanthroline non Phnanthroline non Phnanthroline
Rendement [%] 10 78 15 49 0 <10 0 <10
Tableau 10. Criblage dactivit des complexe cuivre(I)-NHC en prsence ou non de phnanthroline pour la raction de CuAAC entre lazoture de benzyle et le phnylactylne dans un mlange tert-butanol/eau (2:1) pendant 18 heures.173
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Il ressort que seuls [CuCl(SIMes)] et [CuCl(IMes)], en combinaison avec la phnanthroline sont capables de catalyser efficacement la raction entre lazoture de benzyle et le phnylactylne (Tableau 10). Pour la suite, seul [CuCl(SIMes)] sera retenu. Un nouveau criblage dadditifs a t ralis en utilisant des ligands bidentes, drivs de la phnanthroline et de la bipyridine, et des pyridines commerciales (Figure 127 et 128).173
N3
[CuCl(SIMes)] additifs eau/tBuOH 2:1
N N
Figure 127. Criblage dadditifs pour la raction de CuAAC entre lazoture de benzyle et le phnylactylne catalyse par le complexe [CuCl(SIMes)].
130
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Figure 128. Rsultats du criblage dadditifs pour la raction de CuAAC entre lazoture de benzyle et le phnylactylne catalyse par le complexe [CuCl(SIMes)].173
Les
deux
Rendement (%)
complexes
[CuCl(SIMes)(Phen)]
et
[CuCl(SIMes)(4,7-dichloro-1,10-
phnanthroline] 96 nous sont apparus comme tant les plus efficace lissue du criblage.
N N Cl
Cu
N
Cl
Cl 96
Figure 129. [CuCl(SIMes)(4,7-dichloro-1,10-phnanthroline].
Dans la srie de la phnanthroline, nous avons observ que les groupements lectrodonneurs donnent des ractions rapides (quelques minutes) mais incompltes. La prsence dun prcipit rouge semble indiquer la dcomposition du catalyseur en cours de raction. Lintroduction datomes de chlore, lectroattracteurs, en position 4 et 7 provoque linverse un lger ralentissement (quelques dizaines de minutes) de la raction, mais une plus grande robustesse du systme catalytique, la raction savrant totale. Nous pensons que les atomes de chlore diminuent loxydabilit du catalyseur en prsence dair. Cette plus grande stabilit
131
redox du catalyseur est dailleurs confirme par le fait quune solution de celui-ci dans le dichloromthane ou le mthanol est stable sur une dure dune deux semaines. Pour essayer davoir une meilleure vision sur lefficacit du complexe 96, la raction de CuAAC a t ralise dans diffrents solvants organiques en utilisant la mme charge de catalyseur 1 mol % pendant 18 h (Figure 130). Comme nous pouvons le constater le 96 est efficace dans des solvants alcooliques (MeOH et EtOH), mais la raction peut galement avoir lieu dans le dichloromthane. Par contre, lefficacit est sensiblement rduite en prsence de solvants polaires aprotiques comme le DMF et le DMSO.
[CuCl(SIMes)(phenCl2)] additifs solvants
N3
N N
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
entre 1 2 3 4 5
Solvant MeOH EtOH CH2Cl2 DMF DMSO
Rendement [%) 87 92 82 40 37
Figure 130 : Effet du solvant sur la raction de CuACC entre lazoture de benzyle et le phnylactylne catalys par le complexe 96.173
Finalement, le complexe 96 a galement t test avec diffrentes collections dazotures et dalcynes dans le mthanol pour tudier sa tolrance divers groupes fonctionnels (Figure 131).
132
H N O
N NH2,HCl
H N O
N N N NH2.HCl
18, 80 %
19, 81%
H N O
N N
N NH2,HCl
H N O
N NH2,HCl
20, 80 %
22, 83 %
N N N NH2.HCl N N N N
28, 80 %
N N N
34, 95 %
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
N N N
OMe 97, 75 %
98, 72%
NO2
Br N N N CO2H 99, 0 % N N N 100, 85 % N N
Br N N N
Figure 131. Exemples de triazole issus de la CuAAC catalyse par [CuCl(SIMes) (PhenCl2)]. 173
Comme prcdemment observ, les azotures aromatiques riches 97 ou pauvres 98 en lectron sont bien tolrs. Lacide propiolique 99 a un effet dltre sur la raction, probablement cause de la protonation de la phnathroline du catalyseur.
En conclusion, nous avons pu obtenir un catalyseur stable de CuAAC utilisable en solution alcoolique et ne ncessitant pas dagent rducteur. Le complexe [CuCl(SIMes)(4,7-dichloro1,10-phnanthroline)] est celui qui prsente le plus davantages : il peut tre obtenu facilement pour tre conserv et ne soxyde pas en prsence dair. De plus, sa synthse a p tre ralise lchelle du multigramme (Pauline Labeaume, stagiaire BTS).
133
V.3. Toxicit du complexe cuivre(I)-NHC contre les cellules tumorales humaines, arrt du cycle cellulaire, apoptose et induction de la coupure de lADN
Beaucoup de complexes de cuivre prsentant des activits anticancreuses ragissent avec loxygne via une raction de type Fenton pour mener la coupure des brins de lADN. Il sagit entre autre des complexes cuivre-blomycine, cuivre-bisphnanthroline et de leurs analogues clip-phen dj prsents dans la partie bibliographique (I.2). Ces complexes o le cuivre est ltat doxydation +2 ncessitent tous la prsence dun agent rducteur pour former lespce cuivre(I) implique dans le mcanisme de coupure. Nous avons postul que le complexe [CuCl(SIMes)] pouvait constituer une alternative. En effet, le cuivre se trouve dj ltat doxydation +1, ce qui devrait lamener pouvoir former tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 des radicaux oxygns sans rduction pralable. Le complexe est stable en lui-mme mais, comme nous lavons suppos dans la partie prcdente, lintervention de ligands azots donneurs peut dclencher, en augmentant la densit lectronique sur le mtal, la formation de radicaux libres oxygnes. Les bases nucliques pouvant tre considres comme des ligands donneurs azots, nous devrions pouvoir induire des coupures de lADN bicatnaire.
V.3.1 Toxicit du complexe cuivre(I)-NHC

Dans un premier temps, leffet du complexe [CuCl(SIMes)] sur la croissance cellulaire ont t analyss sur diffrents modles de cancers humains (KB : carcinome oral, HL60 : leucmie, MCF-7 et MCF-7R : cancer du sein, LNCaP : cancer de la prostate). Les rsultats, obtenus au laboratoire GReD et au centre propre du CNRS Gif-sur-Yvette sont compars ceux obtenus avec le cisplatine que nous considrons comme la mtallodrogue de rfrence. La figure 132 et le tableau 11 prsentent les rsultats des IC50 du cisplatine et du [CuCl(SIMes)].195
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Figure 132. Comparaison des IC50 du cisplatine et du [CuCl(SIMes)] sur diffrentes lignes cellulaires. 195
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Lignes cellulaires KB HL60 MCF-7R MCF-7 LNCaP
Cisplatine 2.2 0.2 6.78 0.08 4.49 0.03 10.4 0.2 2.9 0.1
[CuCl(SIMes)] 0.12 0.01 0.04 0.01 0.38 0.03 0.075 0.002 0.43 0.01
Tableau 11. Valeurs des IC50 (M) pour le cisplatine et le [CuCl(SIMes)] sur diffrents modles de cancer humain. 195
Le complexe [CuCl(SIMes)] prsente dune manire gnrale une plus grande cytotoxicit que le cisplatine. Ceci est illustr par une augmentation de la cytotoxicit dun facteur 140 et 150 pour les lignes HL60 et MCF-7 respectivement. De plus, on peut noter que le complexe [CuCl(SIMes)] prsente une cytotoxicit infrieure au micromolaire, concentration comparable aux valeurs trouves dans la littrature pour les complexes de cuivre [CuI/II(phen)2] et Cu(Clip-phen).196 Ensuite, au sein du laboratoire GReD, il a t men une investigation pour mettre en vidence la nature des effets sur la ligne MCF-7 (cancer du sein) induits par le complexe 91, toujours en comparaison avec ceux du cisplatine. Plusieurs paramtres ont t suivis pour tudier la progression du cycle cellulaire, notamment lexpression des rgulateurs de la phase G1 : la protine P21 et de la cycline D1. Leffet apoptotique a t analys en suivant lexpression des protines P53 (enzyme impliqu dans la rgulation du cycle, lapoptose et la rparation de lADN) et PARP (enzyme du noyau reconnaissant les coupures de lADN). La figure 133 prsente les rsultats des western blot.
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Cisplatine
[CuCl(SIMes)]
Figure 133. Analyse comparative des western blots de 91 et du cisplatine dans les cellules MCF7 : a) effet sur la phase G1, b) effet sur lapoptose. 195
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Leffet du [CuCl(SIMes)] sur le cycle cellulaire est mis en vidence par laccumulation dosedpendante de P21 tandis que lexpression de la cycline D1 est fortement diminue. Ces deux effets indiquent un arrt du cycle en phase G1 qui intervient des concentrations 10 fois plus faibles que celles observes pour le cisplatine. Afin de vrifier que le mode daction de [CuCl(SIMes)] sur le cylce cellulaire diffre de celui du cisplatine, la phosphorylation de la protine kinase cdc2 (pcdc2) qui est un marqueur dun arrt en phase G2 a t suivie dans les cellules. Pour le cisplatine, on observe la production dose-dpendante de pcdc2, contrairement au [CuCl(SIMes)] o cette expression nest pas mis en vidence. Ces rsultats nous ont permis dfinitivement dcarter un arrt du cycle en phase G2 dans le cas du [CuCl(SIMes)].195 En considrant les effets des deux complexes sur lapoptose, on remarque que seul le cisplatine induit une accumulation de P53 dans la cellule, les deux complexes sont capables dinduire une coupure protolique de PARP en son fragment inactif caractristique (85 KDa). Le [CuCl(SIMes)] induit une coupure de PARP a des concentrations 10 fois infrieures que celles mesures pour le cisplatine. En conclusion, lensemble des rsultats montre que [CuCl(SIMes)] et le cisplatine ont des mcanismes cytotoxiques diffrents.
136
V.3.2 Induction de la coupure de lADN par le complexe cuivre(I)NHC in vitro.

Tout dabord, le complexe [CuCl(SIMes)] a fait lobjet dune tude de ractivit avec des nuclosides isols (A, G, T) dans un mlange DMSO-d6/D2O (1 :1). Nous navons not aucune raction entre ces nuclosides isols et le mtallo-carbne. De mme aucune raction na t constate vis--vis de notre hairpin qui reste intacte aprs un contact prolong avec le complexe. Enfin, pour dterminer si lADN est une cible possible des metallocarbnes, nous avons examin la gnotoxicit in vitro sur le plasmide surenroul pcDNA4TO de certains complexes synthtiss selon les mthodes reportes dans la littrature 197 et prsents dans la figure 134.
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N N N CuCl [CuCl(SIMes)] 91 N N N AgCl [AgCl(SIMes)] 101
Cl Pd Cl
N N
N Cu N
N , PF6 N
[PdCl2(IMes)2] 102
[Cu(SIMes)2]PF6 103
Figure 134. Complexes mtallo-carbne pour ltude de gnotoxicit in vitro.
Des expriences de relaxation du plasmide surenroul en prsence de mtallocarbnes ont t ralises dans un mlange eau/DMSO (9/1 v/v). Les rsultats sont compars ceux obtenus dans le cas du cisplatine, qui est connu pour induire une relaxation. La figure 135 prsente les rsultats du gel dlectrophorse qui permet didentifier les diffrentes formes du plasmide (surenroul, relax, ouverte et linaire). La ligne 1 correspond au contrle plasmide surenroul. Ligne 2 correspond la forme linaire du plasmide obtenue aprs action de lendonuclase BamH1. La ligne 3 correspond laction du cisplatine. Les lignes 4, 5, 6, 7 correspondent respectivement laction des complexes 91, 101, 102 et 103.195
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Forme ouverte Forme relaxe Forme linaire Forme surenroule

Figure 135. Gel dlectrophorse (1% agarose) prsentant laction du cisplatine et des complexes 91, 101, 102 et 103 sur le plasmide surenroul pcDNA4TO. 1) contrle plasmide surenroul, 2) plasmide linaris par BamHI, 3) action du cisplatine, 4) action du complexe 91, 5) action complexe 101, 6) action du complexe 102, 7) action du complexe 103.
Au regard des rsultats obtenus, le complexe [CuCl(SIMes)] a une activit sur lADN plasmidique en permettant la relaxation de celui-ci sous sa forme circulaire ouverte. Par contre, on note une absence de ractivit pour les complexes contenant de largent ou du palladium. De plus, lactivit de coupure est absente pour le complexe homoleptique tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 [CuCl(SIMes)2]PF6 ce qui semble indiquer la ncessit dune stchiomtrie cuivre-ligand 1 :1. Il est important de noter que les ractions de coupure ont lieu en prsence de DMSO, alors que ce dernier est un scanvenger de radicaux hydroxyles. Les coupures ntant pas inhibes, nous pouvons liminer un processus passant par la formation de radicaux hydroxyles diffusables. Pour dterminer limplication dautres radicaux libres dans la raction nous avons ralis la mme exprience en prsence dun inhibiteur de loxygne singulet (lazoture de sodium) et galement en prsence de rducteurs (lacide ascorbique et le gluthation). Les rsultats seront compars ceux obtenus avec le complexe cuivre phnanthroline. La figure 136 prsente le gel dlectrophorse obtenu aprs incubation du complexe mtallique 91 avec le plasmide surenroul selon diffrentes conditions et temps de raction. La ligne 1 correspond au contrle plasmide surenroul (blanc). En ligne 2 la forme linaire est obtenue aprs action de lendonuclase BamH1. Les lignes 3 et 4 et correspondent laction de [CuCl(SIMes)] sur le plasmide pendant respectivement 3 et 24 heures. La ligne 5 correspond laction de [CuCl(SIMes)] sur le plasmide en prsence de linhibiteur de 1O2 NaN3. Les lignes 6 et 7 correspondent laction de 91 sur le plasmide pendant 3 heures en prsence dacide ascorbique et de glutathion (GSH) respectivement. La ligne 8 correspond laction du complexe [Cu(phen)]2+ en prsence de GSH avec le plasmide pendant 3 heures. Enfin, les lignes 9 et 10 correspondent laction du complexe 91 sur le plasmide en prsence de GSH pendant respectivement 24 et 48 heures.195
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Forme ouverte Forme linaire Forme surenroule
Figure 136. Expriences comparatives de la coupure oxydative du plasmide pcDNA4TO par le complexe [Cu(phen)]2+ et le complexe [CuCl(SIMes)]. 1) contrle plasmide surenroul, 2) plasmide linaris par BamHI, 3) [CuCl(SIMes)] 3h, 4) [CuCl(SIMes)] 24h, 5) [CuCl(SIMes)]+ NaN3, 6) [CuCl(SIMes)] + acide ascorbique 3h, 7) [CuCl(SIMes)] + GSH 3h , 8) [Cu(phen)2]2+ + GSH 3h, 9) [CuCl(SIMes)] + GSH 24h, 10) [CuCl(SIMes)] +GSH 48h.
La comparaison des lignes 3 et 4 montre que le phnomne de relaxation en forme circulaire ouverte peut tre constat ds 3h de raction et se poursuit par la suite. Par contre, cette coupure est totalement inhibe par la prsence dazoture de sodium (ligne 5). A linverse, la raction de coupure peut tre fortement acclre par la prsence dagents rducteurs, acide tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 ascorbique et GSH, puisque les lignes 6 et 7 nous montrent la prsence dune forme circulaire ouverte ds 3h. A titre de comparaison, la ligne 8 montre un phnomne comparable en utilisant le couple [Cu(Phen)2]2+ / glutathion, avec la formation dune bande supplmentaire, sans doute assimilable une forme linarise. Le mme phnomne est observ pour le complexe [CuCl(SIMes)] avec des temps suprieurs de 24 et 48 heures (respectivement lignes 9 et 10) Ces expriences nous confirment que le complexe [CuCl(SIMes)] est capable de fonctionner sans lintervention dagent rducteur. Sa ractivit est plus lente que celle du complexe [Cu(Phen)2]2+ rduit, mais elle conduit nanmoins en 24h la conversion totale de la forme surenroule en forme circulaire ouverte. Linhibition du processus par lazoture de sodium laisse penser que loxygne singulet peut tre un intermdiaire dans le processus ractionnel (ou que lazoture se lie au centre mtallique en modifiant son acitivit. Etant donn quaucune raction nest note sur notre hairpin, il semble probable que la structuration en double hlice de lADN est un pr-requis pour la raction de coupure. Ceci est galement observ dans le cas des complexes de phnanthroline o lhtrocycle joue le rle dintercalant.
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V.4. Conclusion
Dans ce dernier chapitre, nous nous sommes intresss au complexe [CuCl(SIMes)], connu comme un catalyseur efficace pour la CuAAC. Dans un premier temps, nous avons ralis un criblage dactivit de celui-ci en prsence de diffrents additifs (htroaromatiques azots). Deux ligands se sont rvls tre efficaces : la 1,10-phnanthroline et la 4,7-dichloro-1,10phnanthroline. Dans un deuxime temps, nous avons valu la cytoxicit et le mode daction du complexe sur les cellules cancreuses. Le mode daction est apparu trs diffrent de celui du cisplatine. Enfin, nous avons tudi lintraction du complexe [CuCl(SIMes)] avec lADN. Ce dernier possde la capacit dinduire une coupure de lADN, sans la prsence de rducteur. Cependant son activit est apparue plus faible que dans le cas du complexe Cu-cuivre tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 phnanthroline rduit.
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CONCLUSIONS ET PERSPECTIVES
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Lune des motivations initiales de ce projet a t dutiliser la raction de CuAAC comme outil pour la synthse de ligands 1,2,3-triazole afin dobtenir de nouveaux complexes de platine(II) aux proprits potentiellement diffrentes de celles du cisplatine. Nous avons opt pour une fonctionnalisation de lunit triazole avec diffrentes chanes comportant des groupements aromatiques susceptibles de sintercaler entre les bases de lADN. Nous avons galement utilis un espaceur aliphatique ou comportant des fonctions ammonium pour relier deux units triazoles pour lobtention de complexes binuclaires. La premire partie de nos travaux (chapitre II) sinscrit donc dans ce contexte puisquelle nous a permis de mieux comprendre et doptimiser les tapes cl de la synthse impliquant la raction de CuAAC pour diffrentes familles de composs. Nous avons russi suivre notre ligne directrice de dpart pour lensemble de nos synthses : nous avons utilis des ractions tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 simples et efficaces ne ncessitant pas de purification par chromatographie. La deuxime partie de nos travaux (chapitre III) a concern la synthse des complexes. Nous avons ralis la complexation du platine par nos ligands, en utilisant le sel K2PtCl4. Malheureusement les complexes neutres forms se sont avrs tre insoluble dans leau et peu soluble dans des solvants organiques. Les analyses RMN nont donc pu tre ralises et la structure des complexes na pu tre lucide. Les diffrentes stratgies employes pour obtenir des complexes cationiques solubles dans leau, nont pas men, dune manire gnrale, la formation de produit unique. Trois complexes mtalliques ont nanmoins t obtenus et caractriss en vue de ltude de leur interaction avec lADN. Dautre part, la prsence dunits ammonium sur le pont espaceur entre les deux units triazoles sest rvle insuffisante pour donner une solubilit aqueuse suffisante aux complexes binuclaires. Une fonctionnalisation de la partie triazole par des groupements hydrosolubles pourrait tre envisage afin dobtenir des complexes plus facilement analysables. Le troisime point cl de nos travaux a donc port sur linteraction des complexes de platine et de palladium avec lADN. Les tudes de mtallation de la guanosine par les complexes clicks platin et palladi ont permis de valider la formation dadduits sur lazote N7 des guanines. Les analyses RMN et de spectromtrie de masse ont confirm la formation de complexes de stoechiomtrie 1:2 (mtal : guanosine). Les tests de ractivit avec un plasmide surenroul ont permis de valider la fixation des complexes sur lADN bicatnaire, entranant la relaxation du plasmide de manire similaire au cisplatine.
141
Enfin, ltude mene sur les structures ADN en pingle cheveux, avait pour objectif de dterminer la nature des adduits du platine. Le complexe 1 semble former majoritairement du mono-adduits alors que son driv aqua, plus ractif, forme de multiples produits indtermins ce jour. Il resterait dterminer la prsence de pontage inter- ou intra-brins.
Le travail ralis en parallle sur les diffrents aspects ractionnels du complexe [CuCl(SIMes)], nous a permis, dans un premier temps, damliorer le sytme catalytique par laddition de ligands azots donneurs, notamment des ligands bidentes de type phnanthroline. Les diffrentes tudes ralises en diversifiant les substrats ont permis dvaluer lefficacit du systme sur une large gamme de produits. Les tudes concernant lactivit biologique du [CuCl(SIMes)], montrent que ce dernier a une plus grande cytotoxicit que le cisplatine. De plus, on peut noter que le complexe prsente une tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 cytotoxicit importante associe une valeur dIC50 infrieure au micromolaire. Les investigations menes pour comprendre la nature des effets de [CuCl(SIMes)] sur la ligne MCF-7 permis de mettre en vidence un arrt du cycle cellulaire en phase G1, contrairement au cisplatine induisant un arrt en phase G2. Concernant leffet du complexe sur linduction de lapoptose, les rsultats montrent, encore une fois, un mcanisme diffrent de cellui du cisplatine. Nos derniers travaux ont port sur linteraction des mtallo-carbnes avec lADN. Il apparait que le [CuCl(SIMes)] est capable dinduire une cassure de lADN diffrente de celle du cisplatine. Des tests raliss, afin de mettre en vidence un mcanisme daction, ont montrs une coupure de lADN par un mcanisme radicalaire similaire au complexe [Cu(Phen)]+. En perspective lensemble des tudes biologiques ralises avec le complexe [CuCl(SIMes)], il serait intressant dapprofondir le mcanisme daction et de dterminer la cible cellulaire de ce dernier. Cet objectif reste actuellement ltude au laboratoire ainsi quun travail sur la vectorisation des complexes Cu(I)-NHC afin de mieux cibler les cellules cancreuses.
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PARTIE EXPERIMENTALE
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1) Gnralits
Les points de fusion (PF) ont t dtermins sur un microscope plaque chauffante REICHTER et ne sont pas corrigs.
Les spectres infrarouges (IR) ont t raliss sur un appareil SHIMADZU FTIR-8400S quip dun module ATR (chantillons utiliss pur). Les chantillons sont dposs purs sur un cristal de germanium. Les nombres donde () sont exprims en cm-1.
Les chromatogrammes HPLC ont t raliss sur un appareil DIONEX (TTC-100, pompes P580) 25 C coupl un dtecteur UVD340U. Les sparations ont t ralises en phase inverse avec une colonne ACCLAIM 120 (C18, 5 m, 120 , 4,6 x 250 mm) pour les tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 nuclosides et une colonne Nucleosil (C18, 5 m, 120 , 4,6 x 100 mm) pour lanalyse des hairpins. La purification par HPLC prparative a t effectue sur un appareil VARIAN (pompe Prestar 218), coupl avec un dtecteur barettes de diodes VARIAN ProStar 355RI. Les sparations en HPLC praparative sont ralises avec une colonne inverse (C18, 8 m, 250 x 41,4 mm). Les spectres de masse sont raliss en mode lectrospray positif (ESI+) sur un spectromtre Qtof-micro WATERS (3000V) en utilisant une calibration interne (H3PO4). Les spectres de masse haute rsolution (ESI-HR-MS) sont raliss avec une calibration externe (leucine encphaline m/z = 556,2771) pour des chantillons de bas poids molculaire. Dans le cas de spectres de masse coupls une chromatographie liquide (LC-MS), les sparations HPLC sont ralises en phase inverse sur un systme ALLIANCE WATERS (colonne C18, 5 m, 100 mm x 2,1 mm) coupl un dtecteur barettes de diodes. Les spectres de Rsonance Magntique Nuclaire (RMN) ont t enregistrs sur un spectromtre BRUKER AVANCE 400 (1H : 400 MHz, 13C : 100 MHz) ou BRUKER AVANCE 500. Les dplacements chimiques () sont exprims en parties par million (ppm), en prenant pour rfrence le signal rsiduel du solvant deutr utilis, qui est prcis dans chaque cas. Les constantes de couplage (J) sont exprimes en hertz (HZ).
Les Analyses Elmentaires (AE) ont t ralises sur un analyseur lmentaire Thermo Finnigan EA112, quip dune colonne chromatographique Porapak. Les lments doss sont
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C, H, N. Les rsultats sont fournis avec une prcision absolue de 0,2 % et sont valids pour deux essais minimum. Ces analyses ont t ralises par le service de Microanalyse de Vandoeuvre-les-Nancy (UMR 7565, Universit Henri Poincar, Nancy). Les analyses sur gel dlectrophorse ont t ralises sur un appareil RunOne Systme EMBI TEC (voltage : 50 V).
2) Procdures gnrales
Procdure gnrale dacylation des amines A une solution damine (10 mmol ; 1 quiv.) dans un mlange H2O/AcOEt 1/1 v/v (50 mL) 0C (bain de glace) est ajout NaOH (10 mmol ; 1 quiv.), puis, goutte-goutte du chlorure tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 dacyle (10 mmol ; 1 quiv.). Aprs une heure dagitation temprature ambiante, les phases sont spares et la phase aqueuse est extraite par de lactate dthyle (2 x 20 mL). Les phases organiques rassembles sont laves successivement par une solution aqueuse de soude 1M (2 x 30 mL), de leau (2 x 30 mL) et HCl aqueux 1M (2 x 30 mL). La phase organique est sche sur MgSO4, filtre et vapore sous vide. Le produit est obtenu sous la forme dun solide suffisament pur pour tre utilis sans purification supplmentaire.
Procdure gnrale de la prparation des azotures A une solution dhalognure dalkyle (5,0 mmol ; 1 quiv.) dans un mlange eau/thanol 9/1 v/v (10 mL) sont additionn successivement temprature ambiante : du chlorure dammonium (20 mmol ; 4 quiv.), de liodure de sodium (10 mol%) et de lazoture de sodium (25 mmol ; 5 quiv.). Le mlange est agit pendant 24h 80C, puis, aprs retour temprature ambiante, extrait par de lactate dthyle (3 x 20 mL). Les phases organiques combines sont laves par leau (2 x 20 mL), sches sur MgSO 4, filtres et vapores sous pression rduite. Le produit est obtenu sous la forme dun solide.
Procdure gnrale de la cycloaddition 1,3-dipolaire (CuAAC) Procdure a A une solution dazoture (1,0 mmol ; 1 quiv.) dans un mlange eau/tBuOH 1/1 v/v (3 mL) sont ajouts, temprature ambiante, lalcyne (1,0 mmol ; 1 quiv.), puis une solution de CuSO4/THPTA 0,1 M (100 L ; 0,01 mmol ; 1 mol %) et enfin une solution dacide
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ascorbique 0,1M (300 L ; 0,03 mmol ; 3 mol %). Aprs 12 heures, le mlange est vapor sous vide, puis repris dans lthanol (5 mL) avant addition de HCl concentr. Le prcipit form est filtr sous pression rduite, lav avec de lthanol (3 mL), puis avec de lther (3 mL) pour obtenir le chlorhydrate du 1,2,3-triazole attendu.
Procdure b A une solution dazoture (1,0 mmol ; 1 quiv.) dans un mlange eau/tBuOH 1/1 v/v (3 mL) sont ajouts, temprature ambiante, lalcyne (1 mmol ; 1 quiv.), puis une solution de CuSO4/THPTA 0,1 M (100 L ; 0,01 mmol ; 1 mol %) puis une solution dacide ascorbique 0,1M (300 L ; 0,03 mmol ; 3 mol %). Aprs 12 heures, le mlange est filtr sous pression rduite, lav avec de leau (3 mL), puis avec de lther (3 mL) pour obtenir le 1,2,3-triazole attendu. tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Procdure c A une solution dazoture (1,0 mmol ; 1 quiv.) dans 3 mL de mthanol est ajout lalcyne (1,0 mmol ; 1 quiv.), puis le [CuCl(SIMes)(phenCl2)] sous forme solide (2 mol %). Aprs 12 heures, le mlange est vapor sous vide, puis repris dans lthanol (5 mL) avant addition de HCl concentr. Le prcipit form est filtr sous pression rduite, lav avec de lthanol (3 mL), puis avec de lther (3 mL) pour obtenir le chlorhydrate du 1,2,3-triazole attendu avec une puret satisfaisante.
Procdure gnrale pour la prparation des complexes de platine A une solution de K2PtCl4 (0,15 mmol ; 1 quiv. ou 0,30 mmol ; 2 quiv.: selon si le complexe voulu est mono- ou binuclaire) dans 800 L deau distille est ajout goutte-goutte une solution de chlorhydrate du triazole ou du bis-triazole (0,15 mmol ; 1 quiv.) dans leau distille (800 L) et basifie avec une solution aqueuse de KOH 1M (0,15 mmol ; 1 quiv. par chlorhydrate). Le mlange est agit temprature ambiante et dans lobscurit pendant 12 heures. Le prcipit est filtr sous pression rduite, lav avec de leau (5 mL), puis avec de lthanol (5 mL) et de lther pour obtenir le complexe de platine(II) sous la forme dun solide.
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Procdures gnrales pour les tests de ractivit des complexes avec le plasmide surenroul. Tests avec les complexes de platine Les solutions de complexes de platine et du cisplatine (3.10-4 M) sont prpares respectivement dans le DMF et leau. 1 L de chaque solution est additionn 1,4 g de plasmide pcDNA4T0 en prsence de 30 L de NaClO4 (10-3 M). Aprs 24 h dincubation 37 C, les chantilons sont analyss sur gel dagarose 1% et rvls avec du BET sous lampe UV. Tests avec les mtallo-NHC Les solutions mres de mtallo-NHC (3.10-4 M) sont prpares dans le DMSO. 1 L de chaque solution est additionn 1,6 g de plasmide pcDNA4T0 en prsence de 30 L dune tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 solution aqueuse de NaClO4 (10-3 M). Aprs 24 h dincubation 37 C, les chantilons sont analyss sur gel dagarose 1% et rvls avec du BET sous lampe UV. Les concentrations en inhibiteur et agent rducteur sont NaN 3 : 0,1 M ; acide ascorbique : 2,5.10-5 M ; GSH : 10-4 M. Pour la rfrence [Cu(phen)2]+ , la concentration en CuSO4 est de 10 -5 M et en phnanthroline de 10-4 M. Procdures gnrales pour les tests de ractivit des complexes avec lADN structur en pingle cheveux ( hairpin ) Annlation de lADN, structuration en pingle cheveux Avant de procder au test de mtallation, lADN doit tre structur en pingle cheveux par hybridation du brin autocomplmentaire. 20 L dune solution dADN 0,86 mM dans leau sont placs pendant 5 minutes dans un bain marie 90 C pour raliser une dnaturation. Enfin, lchantillon est laiss temprature ambiante pendant 2 heures. La renaturation se fait doucement afin de favoriser le repliement de la boucle sur elle mme. Tests avec les complexes de platine Les solutions de complexe de platine 1 (2.10-2 M) et du cisplatine (2.10-3 M) sont prpares respectivement dans le DMF et leau. 1 L de la solution de 1 et 10 L de la solution de cisplatine sont additionns 17,2 nmoles dhairpin en prsence de 100 L de NaClO4 (10.10-3 M). Aprs 24 h dincubation temprature ambiante, on additionne 100 L dune solution sature de NaCl. Les echantillons sont ensuite analyss par HPLC.
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Tests avec les complexes aqua de platine Le complexe aqua de 1 est prpar dans 2,5 mL deau partir de 1 (25,0 mg ; 0,055 mmol ; 1 quiv.) et dAgNO3 (19,0 mg ; 0,11 mmol ; 2 quiv.). Le complexe aqua driv du cisplatine est prpar dans 5 mL deau partir du cisplatine (35,0 mg ; 0,11 mmol ; 1 quiv.) et dAgNO3 (37,0 mg ; 0,22 mmol ; 2 quiv.). Les ractions se font temprature ambiante sur 2 jours et lobscurit. Le chlorure dargent form est filtr laide dun filtre Millipore. Les filtrats, contenant les complexes aqua sont directement utiliss pour ragir avec lHairpin. 1 L des solutions (2.10-2 M) des complexes aqua est additionn 17,2 nmoles dhairpin en prsence de 100 L de NaClO4 (10.10-3 M). Aprs 24 h dincubation temprature ambiante, on additionne 100 L dune solution sature de NaCl. Les echantillons sont ensuite analyss par HPLC. tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
2) Produits obtenus
O N H (5) Cl
2-Chloro-N-phnylactamide (C8H8ClNO) M = 169.61 g/mol
Le compos 5 est obtenu en appliquant la procdure gnrale dacylation des amines en utilisant laniline (1,000 g ; 10,73 mmol), et le chlorure de chloroactyle (1,210 g ; 10,73 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide blanc (1,450 g ; 8,56 mmol) avec un rendement de 80 %. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) : 8.30 (s, 1H, NH), 7.54 (d, J = 7.9 Hz, 2H, HAr), 7.35 (dd, J = 7.9 Hz, J = 7.4 Hz, 2H, HAr), 7.16 (t, J = 7.4 Hz, 1H, HAr), 4.16 (s, 2H, CH2). RMN 13C (400 MHz, CDCl3) : 163.8, 136.6, 129.0, 125.1, 120.1, 42.8. IR (, cm-1, ATR) : 3267, 3207, 3144, 3101, 1668, 1612, 1558, 1249, 856, 754. PF: 136-137 C (littrature: 134-137 C) Donnes en accord avec celles de la littrature.198
147
__________________________________________
O N H (6) Cl
Anilide de lacide 4-chloro-butyrique (C10H12ClNO) M = 197.66 g/mol
Le compos 6 est obtenu en appliquant la procdure gnrale dacylation des amines en utilisant laniline (1,000 g ; 10,73 mmol) et le chlorure de 4-chlorobutyryle (1,510 g ; 10,73 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide blanc (1,818 g ; 9,15 mmol) avec un rendement de 85 %. tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 RMN 1H (400 MHz, CDCl3) : 8.00 (s, 1H, NH), 7.50 (d, J = 7.7 Hz, 1H, HAr), 7.28 (dd, J = 7.7 Hz, J = 7.4 Hz, 2H, HAr), 7.09 (t, J = 7.4 Hz, 2H, HAr), 3.59 (t, J = 6.2 Hz, 2H, CH2), 2.51 (t, J = 7.1 Hz, 2H, CH2), 2.15 (tt, J = 6.2 Hz, J = 7.1 Hz, 2H, CH2). RMN 13C (400 MHz, CDCl3) : 170.4, 137.6, 128.8, 124.3, 120.0, 44.3, 33.9, 27.9. IR (, cm-1, ATR) : 3323, 2821, 1666, 1600, 1535, 1176, 746. PF: 64-66 C (littrature: 69-70C) Donnes en accord avec celles de la littrature.199 __________________________________________
O N H (7) Br
Anilide de lacide 6-bromo-hexanoque (C12H16BrNO) M = 270.17 g/mol
Le compos 7 est obtenu en appliquant la procdure gnrale dacylation des amines en utilisant laniline (1,000 g ; 10,73 mmol) et le chlorure de 6-bromo hexanoyle (2,290 g ; 10,73 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide blanc (2,200 g ; 8,21 mmol) avec un rendement de 76 %. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) : 7.76 (s, 1H, NH), 7.51 (d, J = 7.9 Hz, 2H, HAr ), 7.29 (dd, J = 7.4 Hz, J = 7.9 Hz 2H, HAr), 7.09 (t, J = 7.4 Hz, 1H, HAr), 3.37 (t, J = 6.7 Hz, 2H, CH2 ),
148
2.34 (t, J = 7.5 Hz, 2H, CH2), 1.85 (tt, J = 6.7 Hz, J = 7.7 Hz 2H, CH2), 1.72 (tt, J = 7.5 Hz, J = 7.7 Hz 2H, CH2), 1.53-1.43 (tt, J = 7.7 Hz, J = 7.7 Hz 2H, CH2). RMN 243.6. IR (, cm-1, ATR) : 3336, 2939, 1664, 1597, 1523, 1438, 1247, 754, 727. PF : 82-83 C (littrature: 84-86 C) Donnes en accord avec celles de la littrature.200 __________________________________________
O N H Cl (8)
13
C (400 MHz, CDCl3) : 171.3, 137.8, 128.8, 124.2, 119.9, 37.2, 33.5, 32.3, 27.6,
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
2,4,6-Trimthylanilide de lacide chloroactique (C11H14ClO) M = 211.69 g/mol
Le compos 8 est obtenu en appliquant la procdure gnrale dacylation des amines en utilisant la 2,4,6-trimthyl-phnylamine (1,000 g ; 7,39 mmol) et le chlorure de chloroactyle (0,834 g ; 7,39 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide blanc (1,097 g ; 5,18 mmol) avec un rendement de 70 %. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) : 7.82 (s, 1H, NH), 6.90 (s, 2H, HAr), 4.20 (s, 2H, CH2), 2.27 (s, 3H, CH3), 2.18 (s, 6H, CH3). RMN 13C (400 MHz, CDCl3) : 164.6, 137.5, 135.0, 130.0, 129.0, 42.7, 20.9, 18.1. IR (, cm-1, ATR) 3230, 3039, 2920, 1670, 1539, 1240, 844, 709. PF : 181-182 C (littrature: 178-179 C) Donnes en accord avec celles de la littrature.201 __________________________________________
H N HN (9) O
Cl
2-Chloro-N-[2-(1H-indol-3-yl-thyl]actamide (C12H13ClN2O) M = 236.70 g/mol
149
Le compos 9 est obtenu en appliquant la procdure gnrale dacylation des amines en utilisant : la tryptamine (0,480 g ; 3,00 mmol) et le chlorure de chloroactyle (0,339 g ; 3,00 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide violet (0,427 g ; 1,80 mmol) avec un rendement de 60 %. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 10.81 (s, 1H, NHindole), 8.30 (s, 1H, NHamide), 7.53 (d, J = 7.7 Hz, 1H, HAr ), 7.33 (d, J = 8.0 Hz, 1H, HAr ), 7.15 (s, 1H, HAr), 7.06 (dd, J = 7.7 Hz, J = 7.0 Hz, 1H, HAr), 6.98 (dd, J = 8.0 Hz, J = 7.0 Hz, 1H, HAr), 4.08 (s, 2H, CH2-Cl), 3.41-3.35 (m, 2H, CH2), 2.84 (t, J = 7.4 Hz, 2H, CH2). RMN
13
C (400 MHz, DMSO-d6) : 165.8, 136.2, 127.2, 122.7, 120.9, 118.3, 118.2, 111.5,
111.4, 42.7, 39.9, 24.9. IR (, cm-1, ATR) : 3308, 1654, 1637, 1456, 1261, 1097, 1006, 925, 773, 740. tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 HR-MS : m/z calcul pour [C12H13ClON2+Na]+ 259.0614 ; trouv 259.0617 (1.1 ppm). PF: 91-92 C (littrature : 92-93 C) Donnes en accord avec celles de la littrature.202 __________________________________________
O N H (10) Cl
2-Chloro-N-naphthaln-1-yl-actamide (C12H10ClNO) M = 219.67 g/mol
Le compos 10 est obtenu en appliquant la procdure gnrale dacylation des amines en utilisant : la 1-naphthylamine (1,000 g ; 6,98 mmol) et le chlorure de chloroactyle (0,788 g ; 6,98 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide rose (1,105 g ; 4,99 mmol) avec un rendement de 71 %. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) : 8.77 (s, 1H, NH), 7.97 (d, J = 7.5 Hz, 1H, HAr), 7.92 7.83 (m, 2H, HAr), 7.74 (d, J = 8.2 Hz, 1H, HAr), 7.60 7.47 (m, 3H, HAr), 4.33 (s, 2H, CH2). RMN
13
C (400 MHz, CDCl3) : 164.3, 134.0, 131.0, 128.8, 126.9, 126.6, 126.4, 126.1.
125.6, 120.5, 120.1, 43.2. IR (, cm-1, ATR) : 3255, 3051, 1664, 1556, 1506, 1398, 1348, 813, 790, 769. PF : 163-164 C (littrature : 155-157 C)
150
Donnes en accord avec celles de la littrature.203 __________________________________________
O N H (11) Br
Naphthaln-1-ylamide de lacide 6-bromohexanoque (C16H18BrNO) M = 320.22 g/mol
Le compos 11 est obtenu en appliquant la procdure gnrale dacylation des amines en utilisant la 1-naphthylamine (1,000 g ; 6,98 mmol) et le chlorure de 6-bromohexanoyle (1,490 tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 g ; 6,98 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide rose (2,078 g ; 6,49 mmol) avec un rendement de 93 %. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) : 8.03 (s, 1H, NH), 7.83-7.78 (m, 2H, HAr), 7.69-7.63 (m, 2H, HAr), 7.48-7.40 (m, 2H, HAr), 7.38-7.33 (m, 1H, HAr), 3.33 (t, J = 6.7 Hz, 2H, CH2), 2.33 (t, J = 7.5 Hz, 2H, CH2), 1.77 (tt, J = 6.7 Hz, J = 7.5 Hz, 2H, CH2), 1.69 1.58 (m, 2H, CH2), 1.43 1.35 (m, 2H, CH2). RMN
13
C (400 MHz, CDCl3) : 172.0, 133.9, 132.2, 128.4, 127.6, 126.0, 125.9, 125.8,
125.4, 121.6, 121.1, 36.7, 33.6, 32.2, 27.6, 24.7. IR (, cm-1, ATR) : 3240, 3055, 1653, 1541, 1504, 783, 761. HR-MS : m/z calcul pour [C16H18BrNO+H]+ 320.0650 ; trouv 320.0649 (-0.3 ppm). PF : 89-90 C. __________________________________________
O N H (12) N3
2-Azido-N-phnyl-actamide (C8H8N4O) Mw = 176.18 g/mol
Le compos 12 est synthtis en suivant la procdure gnrale de la prparation des azotures au dpart de 5 (1,000 g ; 5,89 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide blanc (0,850 g ; 4,82 mmol) avec un rendement de 81 %.
151
RMN 1H (400 MHz, CDCl3) : 8.19 (s, 1H, NH), 7.52 (d, J = 7.9 Hz, 2H, HAr), 7.32 (dd, J = 7.9 Hz, J = 7.4Hz, 2H, HAr), 7.14 (t, J = 7.4 Hz, 1H, HAr), 4.06 (s, 2H, CH2). RMN 13C (400 MHz, CDCl3) : 164.7, 136.6, 128.9, 124.9, 120.1, 52.7. IR (, cm-1, ATR) : 3265, 3207, 3142, 3090, 2104, 1674, 1602, 1552, 1301, 1255, 754. Donnes en accord avec celles de la littrature.204 __________________________________________
O N H (13) N3
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
2-Azido-N-(2,4,6-trimthyl-phnyl)-actamide (C11H14N4O) M = 218.26 g/mol
Le compos 13 est synthtis en suivant la procdure gnrale de la prparation des azotures au dpart de 8 (1,120 g ; 5,29 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide blanc (0,877 g ; 4,02 mmol) avec un rendement de 75 %. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) : 7.56 (s, 1H, NH), 6.90 (s, 2H, HAr), 4.17 (s, 2H, CH2), 2.26 (s, 3H, CH3), 2,17 (s, 6H, CH3). RMN 13C (100 MHz, CDCl3) : 165.2, 137.3, 134.8, 130.0, 128.9, 52.5, 20.8, 18.0. IR (, cm-1, ATR) : 3228, 3043, 2106, 1666, 1541, 1483, 1249, 854. Donnes en accord avec celles de la littrature.201 __________________________________________
O N H (14) N3
Anilide de lacide 6-azido-hexanoque (C12H16N4O) M = 232.28 g/mol
Le compos 14 est synthtis en suivant la procdure gnrale de la prparation des azotures au dpart de 7 (1,000 g ; 3,70 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide beige (0,657 g ; 2,82 mmol) avec un rendement de 76 %.
152
RMN 1H (400 MHz, CDCl3) : 7.8 (s, 1H, NH), 7.51 (d, J = 8.0 Hz, 2H, HAr), 7.28 (dd, J = 8.0 Hz, J = 7.4 Hz, 2H, HAr), 7.08 (t, J = 7.4 Hz, 1H, HAr), 3.23 (t, J = 6.8 Hz, 2H, CH2), 2.34 (t, J = 7.5 Hz, 2H, CH2), 1.71 (tt, J = 7.7 Hz, J = 6.8 Hz, 2H, CH2), 1.58 (tt, J = 7.5 Hz, J = 7.7 Hz, 2H, CH2), 1.5 1.3 (tt, J = 7.7 Hz, J = 7.7 Hz, 2H, CH2). RMN 24.9. IR (, cm-1, ATR) 3302, 2941, 2864, 2094, 1666, 1602, 1552, 1440, 1315, 785. HR-MS : m/z calcul pour [C12H16N4O+Na]+ 255.1222 ; trouv 255.1211 (-4.2 ppm). __________________________________________
13
C (100 MHz, CDCl3) : 171.2, 137.8, 128.8, 124.1, 119.9, 51.1, 37.2, 28.4, 26.2,
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
O N H (15) N3
2-Azido-N-naphthaln-1-yl-actamide (C12H10N4O) M = 226.23 g/mol
Le compos 15 est synthtis en suivant la procdure gnrale de la prparation des azotures au dpart de 10 (1,000 g ; 4,53 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide rose (0,796 g ; 3,50 mmol) avec un rendement de 77 %. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) : 8.53 (s, 1H, NH), 7.98 (d, J = 7.5 Hz, 1H, HAr), 7.89 (d, J = 7.5 Hz, 1H, HAr), 7.84 (d, J = 8.2 Hz, 1H, HAr), 7.73 (d, J = 8.2 Hz, 1H, HAr), 7.60 7.46 (m, 3H, HAr), 4.29 (s, 2H, CH2). RMN
13
C (100 MHz, CDCl3) : 165.1, 133.9, 131.1, 128.6, 126.8, 126.4, 126.1, 126.0,
125.5, 120.5, 120.3, 52.9. IR (, cm-1, ATR) : 3282, 3055, 2094, 1656, 1546, 1504, 1253, 798, 775. Donnes en accord avec celles de la littrature.204 __________________________________________
H N HN O (16)
N3
2-Azido-N-[2-(1H-indol-3yl-thyl]actamide (C12H13N5O) M = 243.26 g/mol
153
Le compos 16 est synthtis en suivant la procdure gnrale de la prparation des azotures au dpart de 9 (0,350 g ; 1,47 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide beige (0,321 g ; 1,32 mmol) avec un rendement de 90 %. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 10.81 (s, 1H, NHindole), 8.20 (s, 1H, NHamide), 7.53 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.15 (s, 1H), 7.06 (dd, J = 8.0 Hz, J = 7.3 Hz, 1H), 6.98 (dd, J = 7.3 Hz, J = 8.0 Hz, 1H), 3.80 (s, 2H, CH2-N3), 3,41-3,35 (m, 2H, CH2), 2.84 (t, J = 7.4 Hz, J = 7.3 Hz, 2H, CH2). RMN
13
C (100 MHz, DMSO-d6) : 167.1, 136.2, 127.2, 122.7, 120.9, 118.3, 118.2, 111.5,
111.4, 50.9, 39.6, 25.0. IR (, cm-1, ATR) : 3390, 3281, 2119, 1653, 1640, 1543, 1457, 1423, 1286, 1224, 1096, tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 1000, 802, 739. HR-MS : m/z calcul pour [C12H13ON5+H]+ 244.1198 ; trouv 244.1198 (-0.1 ppm). __________________________________________
O N H (17) N3
Naphthaln-1-ylamide de lacide 6-Azido-hexanoque du (C16H18N4O) M = 282.34 g/mol
Le compos 17 est synthtis en suivant la procdure gnrale de la prparation des azotures au dpart de 11 (1,000 g ; 3,12 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide rose (0,825 g ; 2,92 mmol) avec un rendement de 93 %. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) : 8.0 (s, 1H, NH), 7.8 (t, J = 8.0 Hz, 2H, HAr), 7.70 (d, J = 7.3 Hz, 1H, HAr), 7,65 (d, J = 8.0 Hz, 1H, HAr), 7.49 7.31 (m, 3H, HAr), 3.18 (t, J = 6.6 Hz, 2H, CH2), 2.34 (t, J = 7.3 Hz, 2H, CH2), 1.72 1.61 (m, 2H, CH2), 1.58 1.46 (m, 2H, CH2), 1.41- 1.29 (m, 2H, CH2). RMN 13C (100 MHz, CDCl3) 172.0, 134.1, 132.4, 128.6, 127.7, 126.1, 125.9, 125.9, 125.5, 121.7, 121.1, 51.2, 36.9, 28.5, 26.3, 25.2. IR (, cm-1, ATR) 3284, 3051, 2939, 2862, 2085, 1653, 1535, 1273, 785. HR-MS : m/z calcul pour [C16H18N4O+H]+ 283.1559 ; trouv 283.1552 (-2.4 ppm).
154
__________________________________________
N N O (18) N NH2.HCl
H N
2-(4-Aminomthyl-[1,2,3]triazole-1-yl)-N-phnyl-actamide (C11H14ClN5O) M = 267.11g/mol
Le compos 18 est obtenu selon la procdure gnrale de la CuAAC (Procdure a) au dpart de 12 (0,200 g ; 1,13 mmol) et de la propargylamine (0,063 g ; 1,13 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide blanc (0,230 g ; 0,86 mmol) avec un rendement de 75 %. tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 10.79 (s, 1H, NH), 8.46 (s, 2H, NH2), 8.23 (s, 1H, Htriazole), 7.62 7.08 (m, 5H, HAr), 5.42 (s, 2H, CH2), 4.14 (s, 2H, CH2). RMN 13C (100 MHz, DMSO-d6) : 164.0, 139.9, 138.5, 128.4, 126.0, 123.7, 119.2, 53.3, 33.9. IR (, cm-1, ATR) : 3267, 3205, 3120, 3076, 3001, 1676, 1604, 1556, 1261, 866, 756. HR-MS : m/z calcul pour [C11H13N5O+H]+ 232.1198 ; trouv 232.1192 (-2.7 ppm) ; __________________________________________
H N O (19) N
N NH2.HCl
Chlorhydrate de lanilide de lacide 6-(4-aminomthyl-[1,2,3]triazole-1-yl)-hexanoque (C15H22ClN5O) M = 323.82 g/mol
Le compos 19 est obtenu selon la procdure gnrale de la CuAAC (Procdure a) au dpart de 14 (0,150 g ; 0,65 mmol) et de la propargylamine (0,036 g ; 0,65 mmol). On obtient le compos attendu sous forme dun solide beige (0,089 g ; 0,27 mmol) avec un rendement de 42 %. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) : 10.00 (s, 1H, NH), 8.44 (s, 3H, NH3), 8.18 (s, 1H, Htriazole), 7.60 (d, J = 7.9 Hz, 2H, HAr), 7.27 (dd, J = 7.9 Hz, J = 7.3 Hz 2H, HAr), 7.00 (t, J = 7.3 Hz, 1H, HAr), 4.40 (t, J = 7.0 Hz, 2H, CH2), 4.08 (s, 2H, CH2), 2.30 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.83 (tt, J
155
= 7.0 Hz, J = 7.5 Hz, 2H, CH2), 1.61 (tt, J = 7.3 Hz, J = 7.5 Hz, 2H, CH2), 1.25 (tt, J = 7.5 Hz, J = 7.5 Hz, 2H, CH2). RMN 13C (100 MHz, CDCl3) : 171.0, 140.0, 139.3, 128.5, 124.3, 122.8, 119.0, 49.2, 36.0, 33.8, 29.5, 25.4, 24.4. IR (, cm-1, ATR) 3263, 3126, 2999, 2939, 2901, 2872, 1654, 1599, 1541, 1500, 1444, 1161, 756. HR-MS : m/z calcul pour [C15H21N5O+H]+ 288.1824 ; trouv 288.1814 (-3.6 ppm). __________________________________________
H N
N N O (20) N NH2.HCl
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Chlorhydrate du 2-(4-aminomthyl-[1, 2, 3]triazole-1-yl)-N-(2,4,6-trimthyl-phnyl)-actamide (C14H20ClN5O) M = 309.79 g/mol
Le compos 20 est obtenu selon la procdure gnrale de la CuAAC (Procdure a) au dpart de 13 (0,150 g ; 0,68 mmol) et de la propargylamine (0,038 g ; 0,68 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide blanc (0,128 g ; 0,41 mmol) avec un rendement de 60 %. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 9.97 (s, 1H, NH), 8.54 (s, 3H, NH3), 8.24 (s, 1H, Htriazole), 6.87 (s, 2H, HAr), 5.45 (s, 2H, CH2), 4.12 (s, 2H, CH2), 3.68 (s, 2H, NH2), 2.21 (s, 3H, CH3), 2.11 (s, 6H, CH3). RMN
13
C (100 MHz, DMSO-d6) : 163.9, 139.9, 135.6, 134.7, 131.6, 128.3, 125.9, 51.6,
33.8, 20,4, 18,3. IR (, cm-1, ATR) : 3281, 3130, 3014, 1670, 1529, 1236, 848. HR-MS : m/z calcul pour [C14H19N5O+H]+ 274.1668 ; trouv 274.1673 (1.9 ppm).
__________________________________________
156
H N HN (21) O
N N NH2.HCl
Chlorhydrate du 2-(4-aminomthyl-[1,2,3]triazole-1-yl)-N-[2-(1H-indol-3-yl)-thyl]-actamide (C15H20Cl2N6O) M = 371.26g/mol
Le compos 21 est obtenu selon la procdure gnrale de la CuAAC (Procdure a) au dpart de 16 (0,122 g ; 0,50 mmol) et de la propargylamine (0,028 g ; 0.50 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide beige (0,100 g ; 0,27 mmol) avec un rendement de 53 %. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 10.88 (s, 1H, NHindole), 8.59 (s, 1H, Htriazole), 8.44 (s, 2H, tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 NH2), 8.15 (s, 1H, NHamide), 7.52 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.17 (s, 1H), 7.06 (dd, J = 8.0 Hz, J = 7.5 Hz, 1H) 6.97 (t, J = 7.9 Hz, J = 7.5 Hz, 1H), 5.15 (s, 2H, CH2), 4.13 (s, 2H, CH2), 3.49-3.26 (m, 2H, CH2), 2.86 (t, J = 7.1 Hz, 2H, CH2). RMN
13
C (100 MHz, DMSO-d6) : 165.1, 144.3, 139.9, 136.2, 127.1, 125.9, 122.8, 120.9,
118.3, 118.2, 111.4, 51.8, 33.9, 31.3, 25.0. IR (, cm-1, ATR) : 3392, 3272, 3068, 3002, 2937, 1676, 1655, 1573, 1457, 1424, 1374, 1225, 1147, 1094, 1057, 874, 799, 739. HR-MS : m/z calcul pour [C15H18ON6+H]+ 299.1620 ; trouv 299.1617 (-1.1 ppm). __________________________________________
H N O
N N N NH2.HCl (22)
Chlorhydrate du 2-(4-aminomthyl-[1,2,3]triazole-1-yl)-N-naphthaln-1-yl-actamide (C15H16ClN5O) M = 317.77 g/mol
Le compos 22 est obtenu selon la procdure gnrale de la CuAAC (Procdure a) au dpart de 15 (0,200g ; 0,88 mmol) et de la propargylamine (0,049 g ; 0,88 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide rose (0,190 g ; 0,60 mmol) avec un rendement de 67 %.
157
RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 10.69 (s, 1H, NH), 8.32 (s, 1H, Htriazole), 8.27 (d, J = 7.5 Hz, 1H, HAr), 7.95 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 8.0 Hz, 1H, HAr), 7.70 (d, J = 7.3 Hz, 1H, HAr), 7.65-7.54 (m, 2H, HAr), 7.54-7.46 (m, 1H, HAr), 5.64 (s, 2H, CH2), 4.3-4.1 (slargi, 2H, CH2). RMN
13
C (100 MHz, DMSO-d6) 165.1, 140.4, 133.7, 132.8, 128.1, 127.6, 126.1, 126.01,
125.7, 125.5, 122.8, 121.5, 52.2, 34,0. IR (, cm-1, film) 3254, 3221, 3119, 3045, 1676, 1546, 802, 773. HR-MS : m/z calcul pour [C15H15N5O+H]+ 282.1355 ; trouv 282.1365 (3.6 ppm). __________________________________________
H N
N N O N NH2.HCl
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
(23)
Chlorhydrate du naphthaln-1-ylamide de lacide 6-(4-aminomthyl-[1,2,3]triazole-1-yl)hexanoque (C19H24ClN5O) M = 373.88 g/mol
Le compos 23 est obtenu selon la procdure gnrale de la CuAAC (Procdure a) au dpart de 17 (0,150g ; 0,53 mmol) et de la propargylamine (0,029 g ; 0,53 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide rose (0,094 g ; 0,25 mmol) avec un rendement de 47 %. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 9.97 (s, 1H, NH), 8.50 (s, 3H, NH3), 8.21 (s, 1H, Htriazole), 8.05 (d, J = 7.1 Hz,1H, HAr), 7.92 (d, J = 6.6 Hz, 1H, HAr), 7.75 (d, J = 7.9 Hz, 1H, HAr), 7.65 (d, J = 6.7 Hz, 1H, HAr), 7.58 7.43 (m, 3H, HAr), 4.43 (t, J = 7.0 Hz, 2H, CH2), 4.08 (s, 2H, CH2), 2.30 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 1.88 (tt, J = 7.0 Hz, J = 7.5 Hz ,2H, CH2 ), 1.69 (tt, J = 7.3 Hz, J = 7.5 Hz 2H, CH2), 1.35 (tt, J = 7.5 Hz, J = 7.5 Hz, 2H, CH2). RMN
13
C (100 MHz, DMSO-d6) 171.7, 140.0, 133.6, 128.0, 127.7, 125.9, 125.7, 125.5,
125.0, 124.3, 122.7, 121.6, 49.3, 35.6, 33.8, 29.6, 25.5, 24.6. IR (, cm-1, ATR) 3286, 3124, 2943, 2864, 1658, 1521, 1502, 775. HR-MS : m/z calcul pour [C19H23N5O+H]+ 338.1981 ; trouv 338.1990 (2.7 ppm). __________________________________________
158
N N N OH (24) O
Acide 1-Benzyl-1H-[1, 2, 3] triazole-4-carboxylique (C10H9N3O) M = 203.20 g/mol
Le compos 24 est obtenu selon la procdure gnrale de la CuAAC (Procdure b) au dpart de lazoture de benzyle (0,200 g ; 1,50 mmol) et de lacide propiolique (0,105 g ; 1,50 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide blanc (0,216 g ; 1,06 mmol) avec un rendement de 71 %. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 13.11 (s, 1H, OH), 8,78 (s, 1H, Htriazole), 7,42 7,28 (m, 5H, HAr), 5.65 (s, 2H, CH2). tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 RMN 13C (100 MHz, DMSO-d6) : 161.9, 140.2, 135.8, 129.3, 129.1, 128.5, 128.3, 53.3; IR (, cm-1, ATR) 3115, 1681, 1253, 1234, 1051, 715. PF :191-192 C (198-200C) Donnes en accord avec celles de la littrature.205 __________________________________________
H N O (25) O
N N N OH
Acide 1-(Naphthaln-1-ylcarbamoylmthyl)-1H-[1,2,3]triazol-4-carboxylique (C15H12N4O3) M = 296.28 g/mol
Le compos 25 est obtenu selon la procdure gnrale de la CuAAC (Procdure b) au dpart de 11 (0,200 g ; 0,88 mmol) et de lacide propiolique (0,062 g ; 0,88 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide blanc (0,210 g ; 0,71 mmol) avec un rendement de 80 %. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 13.14 (s, 1H, OH), 10.47 (s, 1H, NH), 8.75 (s, 1H, Htriazole), 8.17 (d, J = 7.7 Hz, 1H , HAr), 7.96 (d, J = 7,5 Hz, 1H, HAr), 7.80 (d, J = 7.9 Hz, 1H, HAr), 7.71 (d, J = 7.1 Hz, 1H, HAr), 7.65 7.46 (m, 3H, HAr), 5.61 (s, 2H, CH2).
159
13
RMN
C (100 MHz, DMSO-d6) : 164.8, 161.7, 139.5, 133.7, 132.6, 130.7, 128.2, 127.5,
126.2, 126.0, 125.7, 125.5, 122.6, 121.5, 52.1. IR (, cm-1, film) : 3300, 3134, 1693, 1674, 1535, 1437, 1244, 804, 775. HR-MS : m/z calcul pour [C15H12N4O3-H]+ 295.0831 ; trouv 295.0836 (1.6 ppm). PF : 225-227 C. __________________________________________
H N O (26) O
N N N OH
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Acide 1-[-5-(Naphthaln-1-ylcarbamoyl)-pentyl]-1H-[1,2,3] triazol-4-carboxylique (C19H20N4O3) M = 352.39 g/mol
Le compos 26 est obtenu selon la procdure gnrale de la CuAAC (Procdure b) au dpart de 13 (0,200 g ; 0,71 mmol) et de lacide propiolique (0,050 g ; 0,71 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide blanc (0,159 g ; 0,42 mmol) avec un rendement de 60 %. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 13.06 (s, 1H, OH), 9.85 (s, 1H, NH), 8.72 (s, 1H, Htriazole), 8.02 (d, J = 5.9 Hz, 1H, HAr), 7.92 (d, J = 6.4 Hz, 1H, HAr), 7.74 (d, J = 7.1 Hz, 1H, HAr), 7.64 (d, J = 5.7 Hz, 1H, HAr), 7.57-7.43 (m, 3H, HAr) 4.44 (m, 2H, CH2), 2.40 (m, 2H, CH2), 1.92 (m, 2H, CH2), 1.69 (m, 2H, CH2), 1.33 (m, 2H, CH2). RMN
13
C (100 MHz, CDCl3) 171.7, 161.7, 139.6, 133.6, 128.8, 128.0 ; 127.7 ;
125.9, 125.7, 125.5, 125.0, 124.7, 122.7, 121.7, 49.5, 35.6, 29.3, 25.4, 24.7. IR (, cm-1, ATR) : 3368, 3286, 3126, 2561, 1693, 1656, 1529, 1240, 1045, 781. HR-MS : m/z calcul pour [C19H20N4O3+Na]+ 375.1433 ; trouv 375.1440 (1.8 ppm). PF : > 230 C. __________________________________________
N3 (27)
Azoture de benzyle (C7H7N3) M = 133.15 g/mol
160
A une suspension de chlorure de benzyle (10,000 g ; 79,00 mmol ; 1 quiv.) dans 20 mL deau sont ajouts succssivement lazoture de sodium (5,500 g ; 85,00 mmol ; 1,1 equiv.) puis le chlorure dammonium (5,00 g ; 93,00 mmol ; 1,2 quiv.) sous agitation. Le mlange est ensuite chauff 70 C pendant 48 heures. Aprs retour temprature ambiante, le mlange est extrait dans lther (3 x 20 mL), les phases organiques sont rassembles et sches avec du sulfate de magnsium, filtres et vapores sous pression rduites pour obtenir 27, liquide incolore (10,20 g ; 76,60 mmol) avec un rendement de 97 %. RMN 1H (CDCl3) : 7.27-7.38 (m, 5H, HAr), 4.35 (s, 2H, CH2). RMN 13C (CDCl3) : 54.6, 128.1-128.7 (6 C). Donnes en accord avec celles de la littrature.206 tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 __________________________________________
N N N NH2.HCl (28)
Chlorhydrate de la C-(1-benzyl-1H-[1,2,3]triazol-4-yl)mthylamine (C10H15ClN4) M = 224.69 g/mol
Le compos 28 est obtenu selon la procdure gnrale de la CuAAC (Procdure a) au dpart de lazoture de benzyle 27 (3,000 g ; 22,52 mmol) et de la propargylamine (1,240 g ; 22,52 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide blanc (3,730 g ; 16,6 mmol) avec un rendement de 74 %. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 8.53 (s, 3H, NH3), 8.26 (s, 1H, Htriazole), 7.45-7.25 (m, 5H, HAr), 5.65 (s, 2H, CH2), 4.07 (s, 2H, CH2). RMN 13C (100 MHz, DMSO-d6) : 140.5, 135.9, 128.7, 128.2, 128.0, 124.6, 52.8, 33.8. IR (, cm-1, ATR) : 3282, 3066, 2999, 2569, 1654, 1587, 1496, 1460, 1226, 1178, 1141, 1087, 1055, 1030, 873, 717. HR-MS : m/z calcul pour [C11H14N4+H]+ 203.1297 ; trouv 203.1286 (5.0 ppm). Donnes en accord avec celles de la littrature.163
161
__________________________________________
N (29)
H.HCl N
Chlorhydrate de la (1-benzyl-1H-[1,2,3]triazol-4-ylmthyl)-mthylamine (C11H15ClN4) M = 238.72 g/mol
Le compos 29 est obtenu selon la procdure gnrale de la CuAAC (Procdure a) en utilisant lazoture de benzyle 27 (0,200 g ; 1,50 mmol) et la N-mthylpropargylamine (0,104 g ; 1,50 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide beige (0,151 g ; 0,63 tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 mmol) avec un rendement de 42 %. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 9.41 (s, 2H, NH2), 8.32 (s, 1H, Htriazole), 7.41 7.28 (m, 5H, HAr), 5.66 (s, 2H, CH2), 4.19 (s, 2H, CH2), 2.52 (s, 3H, CH3). RMN 31.7. IR (, cm-1, ATR) : 3132, 2939, 2777, 2422, 1450, 1045, 719. HR-MS : m/z calcul pour [C11H14N4+H]+ 203.1297 ; trouv 203.1286 (5.3 ppm). __________________________________________
N N
13
C (100 MHz, DMSO-d6) : 138.7, 135.8, 128.7, 128.2, 127.9, 125.7, 52.8, 42.2,
.HCl N
(30)
Chlorhydrate de la (1-Benzyl-1H-[1,2,3]triazol-4-ylmthyl)-dimthylamine (C12H17ClN4) M = 252.74 g/mol
Le compos 28 est obtenu selon la procdure gnrale de la CuAAC (Procdure a) en utilisant lazoture de benzyle 27 (0,400 g ; 3,00 mmol) et la dimthyl-prop-2-ynylamine (0,257 g ; 3,00 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide beige (0,478 g ; 1,89 mmol) avec un rendement de 63 %. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 8.39 (s, 1H, Htriazole), 7.41 7.30 (m, 5H, HAr), 5.67 (s, 2H, CH2), 4,36 (s, 2H, CH2), 2.69 (s, 6H, CH3). 162
13
RMN 41.2.
C (100 MHz, DMSO-d6) : 137.0, 135.7, 128.7, 128.1, 127.9, 127.1, 52.9, 50.1,
IR (, cm-1, film) : 3128, 3010, 2987, 2576, 2519, 2463, 1458, 1224, 1051, 721. HR-MS : m/z calcul pour [C12H16N4+H]+ 217.1453 ; trouv 217.1458 (2.2 ppm). __________________________________________
H2N N H (31)
N1-prop-2-ynyl-thane-1,2 diamine (C5H10N2) M = 98.15 g/mol
A une solution de bromohydrate de 2-bromo-thanamine (0,500 g ; 2,44 mmol ; 1,0 quiv.) tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 dans leau (1,5ml) est ajout la propargylamine (0,269 g ; 4,88 mmol ; 2,0 quiv.). Le mlange est mis reflux pendant 3 heures. Aprs raction et retour temprature ambiante, on additionne NaOH (0,195 g ; 4,88 mmol ; 2,0 quiv.), puis on vapore leau sous vide. Le mlange est repris dans leau, puis vapor une nouvelle fois pour liminer lexcs de propargylamine. Le produit 31 est conserv tel quel en vue dune raction de CuAAC. __________________________________________
2HCl N N N H2N H N
(32)
Dichlorhydrate de la N1-(1-benzyl-1H-[1,2,3]triazol-4-ylmthyl-thane-1,2diamine) (C12H19Cl2N5) M = 304.22 g/mol
Le compos 32 est obtenu selon la procdure gnrale de la CuAAC (Procdure a) au dpart de 27 (1,300 g ; 9,76 mmol) et de 31 brut (0,470 g ; 9,76 mmol). On obtient le compos attendu aprs une recristallisation dans lthanol sous la forme dun solide beige (1,150 g ; 3,78 mmol) avec un rendement de 39 %.
RMN 1H (400 MHz, D2O) 8.21 (s, 1H, Htriazole), 7.45 7.38 (m, 5H, HAr), 5.66 (s, 2H, CH2), 4.48 (s, 2H, CH2), 3.46 (d, J = 6.4 Hz, 2H, CH2), 3.43 (d, J = 6.4 Hz, 2H, CH2). RMN 13C (100 MHz, D2O) 137.6, 134.5, 129.1, 128.8, 128.2, 126.6, 54.0, 43.5, 41.8, 35.0.
163
IR (, cm-1, film) 3105, 3063, 2941, 2897, 2735, 2696, 2578, 2414,1602, 1521, 1450, 1024, 721. HR-MS : m/z calcul pour [C12H17N5+H]+ 232.1562 ; trouv 232.1543 (-8.3 ppm). __________________________________________
N (33)
N3
2-Azidomthylpyridine (C6H6N4) M = 134.14 g/mol
A une solution de 2-chloromthylpyridine (3.280 g ; 20,00 mmol ; 1,0 quiv.) dans 6 ml de DMF sont additionns successivement temprature ambiante : le 18-crown-6 (5 mg), tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 liodure de sodium (100 mg), la diisopropylthylamine (3,4 mL) et lazoture de sodium (1,560 g ; 24,00 mmol ; 1,2 quiv.). Aprs 24 heures dagitation temprature ambiante, le mlange est dilu dans lactate dthyle (50 mL). La phase organique est lave avec une solution de NaCl/NaOH (pH > 10) (3 x 50 mL), puis avec une solution sature de NH4Cl (50 mL). La phase organique est sche sur MgSO4, filtre et vapore sous pression rduite pour obtenir le compos 33, liquide incolore (2,153 g ; 16,00 mmol) avec un rendement de 80 %. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) : 8.57 (d, J = 4.6 Hz, 1H, HAr), 7.71-7.66 (m, 1H, HAr), 7.277.26 (m, 1H, HAr), 7.23-7.19 (m, 1H, HAr), 4.45 (s, 2H, CH2). RMN 13C (100 MHz, CDCl3) : 167.1, 155.7, 149.6, 137.0, 122.9, 121.9, 55.6. IR (, cm-1, ATR) 3067, 3005, 2098, 1676, 1591, 1473, 1437, 1341, 1272, 1149, 1048, 966, 886, 754. Donnes en accord avec celles de la littrature.132 __________________________________________
N N N (34) N
2-((4-Phnyl-1H-1,2,3-triazol-1-yl)mthyl)pyridine (C14H12N4) M = 236.27 g/mol
164
A une solution de 33 (0,134 g ; 1,00 mmol, 1,0 quiv.) dans le tert-butanol, sont ajouts successivement, le phnylactylne (0,102 g ; 1,0 mmol ; 1,0 quiv.), puis lactate de cuivre(II) (11 mg ; 60 mol ; 5 mol %). Aprs 24 heures, le tert-butanol est vapor sous pression rduite, le mlange est repris dans leau puis extrait dans le dichlormthane (2 x 10 ml). Les phases organiques sont rassembles et laves avec une solution sature de NH4Cl, et de NaCl sature et seches sur MgSO4 avant leur vaporation sous pression rduite. Le compos 34, est obtenu sous la forme dun solide beige clair (0.224 g ; 0.95 mmol) avec un rendement de 95 %. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 8.66 (s, 1H, Htriazole), 8.56 (d, J = 4.6 Hz, 1 H, HAr), 7.887.81 (m, 3H, HAr), 7.45-7.42 (m, 2H, HAr), 7.37-7.31 (m, 3H, HAr), 5.76 (s, 2H, CH2). RMN tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
13
C (100 MHz, DMSO-d6) : 154.9, 149.4, 146.4, 137.3, 130.6, 128.7, 127.8, 125.1,
123.2, 122.2, 122.1, 54.5. IR (, cm-1, ATR) : 3122, 3093, 3046, 1698, 1591, 1481, 1438, 1223, 1192, 1078, 1049, 768. Donnes en accord avec celles de la littrature.132 __________________________________________
N3 (35)
N3
1,4-Diazidobutane (C6H12N6) M = 168.20 g/mol
A une solution de 1,4-dibromobutane (4,320 g ; 20,0 mmol, 1 quiv.) dans lactonitrile (50mL) sont additionns le bromure de ttrabutylammonium (1.32 g ; 4.0 mmol ; 0,2 quiv.), le NaI (200 mg), puis NaN3 (6,500 g ; 100,00 mmol ; 5 quiv.). Le mlange est agit 85C pendant 12 heures. Le mlange est vapor sous vide et repris dans leau (20 mL) puis extrait dans lther (4 x 20 mL). La phase organique est sche sur MgSO4, filtre et vapor pour obtenir 35, liquide incolore (2,550 g ; 18,22 mmol) avec un rendement de 91 %. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) : 3.22 (t, J = 6.2 Hz, 4H, CH2), 1.68 (quint, J = 3.5 Hz, 4H, CH2). RMN 13C (100 MHz, CDCl3) : 51.1, 26.3. IR (, cm-1, ATR) : 2940, 2873, 2092, 1465, 1350, 1256, 730. Donnes en accord avec celles de la littrature.207
165
__________________________________________
N3 (36) N3
1, 6-Diazidohexane (C6H12N6) M = 168.20 g/mol
Le compos 36 est obtenu selon la procdure prcdemment dcrite pour 35 au dpart du 1,6dibromo-hexane (1,500 g ; 6,14 mmol) et NaN3 (2,000 g ; 30,70 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun liquide incolore (0,800 g ; 4,75 mmol) avec un rendement de 77 %. tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 RMN 1H (400 MHz, CDCl3) : 3.15 (t, J = 6.9 Hz, 4H, CH2), 1.52 1.46 (m, 4H, CH2), 1.32 1.27 (m, 4H, CH2). RMN 13C (100 MHz, CDCl3) : 50.8, 28.3, 25.87. IR (, cm-1, ATR) : 2939, 2862, 2090, 1456, 1348, 1284, 1257, 729. Donnes en accord avec celles de la littrature. 207 __________________________________________
N N N (37) NH2.HCl
N N ClH.H2N
Dichlorhydrate de la C-{1-[4-(4-aminomthyl-[1,2,3]triazol-1-yl)-butyl]-1H-[1,2,3]triazol-4-yl}mthylamine (C10H20Cl2N8 ) M = 323.23 g/mol
Le compos 37 est obtenu selon la procdure gnrale de la CuAAC (Procdure a) au dpart de 40 (0,140 g ; 1,00 mmol ; 1 quiv.) et de la propargylamine (0,110 g ; 2,00 mmol ; 2 quiv.). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide jaune ocre (0,291 g ; 0,90 mmol) avec un rendement de 90 %. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 8.54 (slargi, 4H, NH2), 8.21 (s, 2H, Htriazole), 4.44 (m, 4H, CH2), 4.08 (s, 4H, CH2), 1.78 (m, 4H, CH2). RMN 13C (100 MHz, DMSO-d6) : 140.2, 124.5, 48.7, 33.8, 26.8.
166
IR (, cm-1, ATR) : 3124, 3079, 3000, 2950, 1657, 1591, 1499, 1466, 1340, 1224, 1166, 1085, 1054, 966, 847. __________________________________________
N N N (38) NH2.HCl
N N ClH.H2N
Dichlorhydrate de la C-{1-[4-(6-aminomthyl-[1,2,3]triazol-1-yl)-hexyl]-1H-[1,2,3]triazol-4-yl}mthylamine (C12H24Cl2N8 ) M = 351.28 g/mol
Le compos 38 est obtenu selon la procdure gnrale de la CuAAC (Procdure a) au dpart de 36 (0,100 g ; 0,59 mmol ; 1 quiv.) et la propargylamine (0,065 g ; 1,18 mmol ; 2 tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 quiv.).On obtient le compos attendu sous la forme dun solide jaune ocre (0,197 g ; 0,56 mmol) avec un rendement de 94 %. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 8.54 (slargi, 6H, NH3), 8.20 (s, 2H, Htriazole), 4.37 (t, J = 6.0 Hz, 4H, CH2), 4.07 (s, 4H, CH2), 1.80-1.72 (m, 4H, CH2), 1.28-1.20 (m, 4H, CH2). RMN 13C (100 MHz, DMSO-d6) : 140.0, 124.4, 49.3, 33.8, 29.5, 25.1. IR (, cm-1, ATR) : 3126, 3077, 3002, 2930, 1654, 1591, 1498, 1465, 1223, 1163, 1054, 1031, 966, 842.
______________________________________
4 HCl NH2 N N H N N (39) H2N N N HN N
Ttrachlorhydrate de la N1-[1-(6-{-4-[(2-amino-thylamino)-mthyl-[1,2,3]triazol-1-yl}-hexyl)1H-[1,2,3]triazol-4-mthyl]-thane-1,2-diamine (C16H36Cl4N10) M = 510.34 g/mol
Le compos 32 est obtenu selon la procdure gnrale de la CuAAC (Procdure a) au dpart de 36 (0,410 g ; 2,44 mmol ; 1 quiv.) et de 31 brut (0,478 g ; 4,88 mmol, 2 quiv.). On obtient le compos attendu aprs une recristallisation dans le mthanol sous la forme dun solide jaune ocre (0,498 g ; 0,97 mmol) avec un rendement de 40 %.
167
RMN 1H (400 MHz, D2O) : 8.19 (s, 2H, Htriazole), 4.51 (s, 4 H, CH2), 4.45 (t, J = 6.9 Hz, 4H, CH2), 3.55-3.50 (m, 4 H, CH2), 3.47-3.43 (m, 4 H, CH2), 1.91 (m, 4 H, CH2), 1.29 (m, 4 H, CH2). RMN 13C (100 MHz, D2O) : 135.5, 123.7, 47.8, 40.8, 39.16, 32.6, 26.3, 22.15. IR (, cm-1, ATR) : 3128, 2990, 2932, 2738, 2704, 2584, 2531, 2417, 1602, 1522, 1466, 1223, 1161, 1056, 1021, 786. HR-MS : m/z calcul pour [C16H32N10+H]+ 365.2811 ; trouv 365.2817 (2.4 ppm).
______________________________________
N3 N H (41) N3
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Bis-(2-azido-thyl)-amine (C4H9N7) M = 155.16 g/mol
A une solution de chlorhydrate de la bis-(2-chloro-ethyl)-amine (1,000 g ; 5,60 mmol ; 1 quiv.) dans leau (10 mL) sont additionns NH4Cl (1,200 g ; 22,40 mmol ; 4 quiv.), NaN3 (1,820 g ; 28,00 mmol ; 5 quiv.). Le mlange est agit 80C pendant 24 heures. On additionne 10 mL deau et du NaOH jusqu obtenir un pH > 12. Le mlange est extrait dans le chloroforme (5 x 25 mL). Les phases organiques rassembles, sont seches sur MgSO4, filtres et vapores pour obtenir le compos 41, liquide incolore (0,815 g ; 5,25 mmol) avec un rendement de 93 %. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) : 3.41 (t, J = 5.7 Hz, 4H, CH2), 2.80 (t, J = 5.7 Hz, 4H, CH2), 1.38 (slargi, 1 H, NH). RMN 13C (100 MHz, CDCl3) 51.4, 48.2. IR (, cm-1, ATR) : 3323, 2939, 2835, 2096, 1444, 1338, 1284, 1138, 918, 742. Donnes en accord avec celles de la littrature.208
______________________________________
168
ClH.H2N
N N N N H.HCl (42)
N N N
NH2.HCl
Trichlorhydrate de la bis-[2-(4-aminomthyl-[1,2,3]triazol-1yl)-thyl]amine (C10H22Cl3N9) M = 374.70 g/mol
Le compos 42 est obtenu en suivant la procdure gnrale de la CuAAC (Procdure a) au dpart de 41 (0,155 g ; 1,00 mmol ; 1 quiv.) et de la propargylamine (0,110 g ; 2,00 mmol ; 2 quiv.) dans un mlange eau/MeOH 1:1 (3 mL). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide beige (0,256 g ; 0,69 mmol) avec un rendement de 69 %. RMN 1H (400 MHz, D2O) : 8.20 (s, 2H, Htriazole), 4.88 (t, J = 5.7 Hz, 4H, CH2), 4.36 (s, 4H, CH2), 3.77 (t, J = 5.7 Hz, 4H, CH2). RMN 13C (100 MHz, D2O) : 140.1, 126.0, 46.7, 46.1, 33.9. IR (, cm-1, ATR) 3142, 3005, 2949, 2991, 2877, 2837, 2787, 2767, 2457, 1658, 1597, 1512, 1450, 1342, 1238, 1151, 1089, 1043, 1026, 881, 833, 759. HR-MS : m/z calcul pour [C10H19N9+H]+ 266.1842 ; trouv 266.1837 (-1.8 ppm). ______________________________________
HCl Cl N (43) Cl
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Chlorhydrate de la bis-(2-chloro-thyl)-mthylamine (C5H12Cl3N) Mw = 192.51 g/mol
A une solution dacide formique (1,000 g ; 20,00 mmol, 2 quiv.) dans 2 mL dune solution aqueuse 37 % de formaldehyde, est additionn le chlorhydrate de la bis-(2-chloro-thyl)amine (1,794 g ; 10.0 mmol ; 1 quiv.). Le mlange est port reflux 100C pendant 3 heures. Le mlange est vapor sous vide puis repris dans lther, le prcipit blanc obtenu est filtr sous vide pour donner le compos 43, solide blanc (1,762 g ; 9,15 mmol) avec un rendement de 91 %. RMN 1H (400 MHz, D2O) 4.00 (t, J = 5.6 Hz, 4H, CH2), 3.70 (m, 4H, CH2), 3.03 (s, 6H, CH3).
169
RMN 13C (100 MHz, D2O) 56.7, 40.5, 37.2. IR (, cm-1, ATR) : 3383, 3014, 2982, 2638, 2573, 2524, 2495, 2467, 2438, 2391, 1467, 1383, 1309, 1276, 1126, 1057, 979, 950, 912, 779, 742. Donnes en accord avec celles de la littrature.175 ______________________________________
N3 N (44) N3
Bis-(2-azido-thyl)-mthylamine (C5H11N7) M = 169.19 g/mol
Le compos 44 est obtenu selon la procdure prcdemment dcrite pour 41 au dpart de 43 (1,738 g ; 9,00 mmol) et de NaN3 (2,925 g ; 45,00 mmol). On obtient le compos attendu sous tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 la forme dun liquide incolore (1,409 g ; 8,34 mmol) avec un rendement de 92 %. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) : 4.00 (t, J = 6.1 Hz, 4H, CH2), 2.64 (t, J = 6.1 Hz, 4H, CH2), 2,32 (s, 6H, CH3). RMN 13C (100 MHz, CDCl3) : 56.7, 40.5, 37.2. IR (, cm-1, ATR) : 2949, 2804, 2096, 1458, 1348, 1280, 1053, 908, 831, 754.
______________________________________
I
N3 N (45) N3
Iodure de bis-(2-azido-thyl)-dimthylammonium (C6H14IN7) M = 311.13 g/mol
A une solution de 44 (0,800 g ; 4,72 mmol ; 1 quiv.) dans 10 mL de mthanol est ajout liodure de mthyle (3,350 g ; 23,60 mmol ; 5 quiv.). Aprs 48 heures dagitation temprature ambiante, le mlange est vapor pour donner le compos 45 (liquide incolore, 1,468 g ; 4,72 mmol) avec un rendement quantitatif. RMN 1H (400 MHz, D2O) : 4.07 (m, 4H, CH2), 3.75 (t, J = 5.5 Hz, 4H, CH2), 3.31(s, 6H, CH3). RMN 13C (100 MHz, D2O) : 63.1, 52.2, 44.7.
170
______________________________________
Cl
N3 N (46) N3
Chlorure du Bis-(2-azido-thyl)-dimthyl-ammonium (C6H14ClN7) M = 219.68 g/mol
Le compos 45 est pass sur rsine Dowex Marathon (changeuse danions charge en Cl-) pour donner 46, liquide incolore avec un rendement quantitatif. RMN 1H (400 MHz, D2O) : 3.99 (m, 4H, CH2), 3.68 (m, 4H, CH2), 3.24 (s, 6H, CH3) RMN 13C (100 MHz, D2O) : 62.9, 51.9, 44.5. tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 IR (, cm-1, ATR) : 3014, 2945, 2825, 2106, 1479, 1357, 1292, 1251, 1030, 943, 918.
______________________________________
ClH.H2N
N N N
Cl
N (47)
N N N
NH2.HCl
Dichlorhydrate du chlorure de bis-(2-[4-aminomthyl-[1,2,3]triazol-1yl)-thyl]-dimthylammonium (C12H26Cl3N9) M = 402.75 g/mol
Le compos 47 est obtenu en suivant la procdure gnrale de la CuAAC (Procdure a) partir de 46 (0,220 g ; 1,00 mmol ; 1 quiv.) et de la propargylamine (0,116 g ; 2,00 mmol ; 2 quiv.) dans un mlange eau/MeOH 1:1 (4 mL). Le prcipit form est hygroscopique, le mlange est vapor sous pression rduite, pour donner solide beige conserv tel quel. RMN 1H (400 MHz, D2O) : 8.30 (s, 2H, Htriazole), 5.10 (t, J = 6.6 Hz, 4H, CH2), 4.36 (s, 4H, CH2), 4.15 (t, J = 6.6 Hz, 4H, CH2), 3.27 (s, 6H, CH3). RMN 13C (100 MHz, D2O) : 140.5, 126.1, 62.6, 51.5, 43.8, 33.9. HR-MS : m/z calcul pour [C12H24N9]+ 294.2155 ; trouv 294.2146 (-2.9 ppm). ______________________________________
171
HO
N H (51)
OH
3-(3-Hydroxy-propylamino)-propan-1-ol (C6H15NO2) M = 133.19 g/mol
A une solution de 3-amino-propan-1-ol (24,290 g ; 317,00 mmol ; 2,0 quiv.) dans 70 mL deau est additionn le 3-chloro-propan-1-ol (15,000 g ; 158,50 mmol ; 1,0 quiv.). Le
mlange est mis reflux pendant 24 heures. Aprs retour temprature ambiante, on additionne le KOH (13,320 g ; 237,90 mmol ; 1,5 quiv.). Leau est vapore sous vide pour donner une huile pteuse orange qui est filtre sous vide et reprise avec du dichloromthane (5 x 10 mL). La phase organique est sche sur MgSO4, puis vapore sous vide pour donner une huile marron. Lhuile est distille sous pression rduite pour donner 51, liquide incolore (6,340 g ; 47,60 mmol) avec un rendement de 15 %. tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 RMN 1H (100 MHz, CDCl3) : 3.92 (slargi, 2H, OH), 3.58 (t, J = 5.9 Hz, 4H, CH2), 2.65 (t, J = 6.2 Hz, 4H, CH2), 1.59 (tt, J = 6.2 Hz, J = 5.9 Hz, 4H, CH2). RMN 13C (100 MHz, CDCl3) : 61.7, 47.9, 31.5. Donnes en accord avec celles de la littrature.178 ______________________________________
Cl
N H.HCl (52)
Cl
Chlorhydrate de bis-(3-chloro-propyl)-amine (C6H14Cl3N) M = 206.54 g/mol
A une solution de 51 (6,349 g ; 47,66 mmol ; 1,0 quiv.) dans 60 mL de CH2Cl2 distill 0C est ajout par petite quantit le SOCl2 (28,330 g ; 238,12 mmol ; 5,0 quiv.). Le mlange est agit jusqu retour temprature ambiante sur la nuit, puis il est mis reflux (40 C) pendant 2 heures. Aprs retour temprature ambiante, on ajoute doucement 60 mL de MeOH. Le solvant est vapor sous vide, puis on additionne goutte goutte 200 mL dther : le chlorhydrate prcipite. Le prcipit est filtr sous vide, lav avec de lether (2 x 10 mL) pour obtenir le compos 52, solide blanc (8,570 g ; 41,48 mmol) avec un rendement de 87 %. RMN 1H (400 MHz, D2O) : 3.72 (t, J = 6.2 Hz, 4H, CH2), 3.26 (t, J = 7.6 Hz, 4H, CH2), 2.28-2.15 (m, 4H, CH2)
172
RMN 13C (100 MHz, D2O) : 45.4, 41.6, 28.3. IR (, cm-1, ATR) 3412, 2949, 2785, 2766, 2733, 2679, 2615, 2428, 2376, 1591, 1467, 1446, 1311, 1261, 1192, 1053, 1037, 1001, 846, 794. Donnes en accord avec celles de la littrature.178
______________________________________
HCl Cl N Cl (53)
Chlorhydrate de bis-(3-chloro-propyl)-mthylamine (C7H16Cl3N) M = 220.57 g/mol
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Le compos 53 est obtenu selon la procdure prcdemment dcrite pour 43 au dpart de 52 (4,130 g ; 20,00 mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun solide blanc (1,876 g ; 8,50 mmol) avec un rendement de 43 %. RMN 1H (400 MHz, D2O) : 3.73 (t, J = 6.0 Hz, 4H, CH2), 3.46-3.41 (m, 4H, CH2), 2.94 (s, 6H, CH3), 2.32-2.30 (m, 4H, CH2). RMN 13C (100 MHz, D2O) : 53.7, 41.4, 40.0, 26.4. IR (, cm-1, ATR) : 3414, 2964, 2600, 2567, 2540, 2461, 2360, 1489, 1450, 1323, 1288, 955, 788. ______________________________________
N3
N (54)
N3
Bis-(3-azido-propyl)-mthylamine (C7H15N7) M = 197.24 g/mol
Le compos 54 est obtenu selon la procdure prcdemment dcrite pour 41 au dpart de 53 (1,753 g ; 7,94 mmol) et de NaN3 (2,580 g ; 39,70mmol). On obtient le compos attendu sous la forme dun liquide incolore (1,281 g ; 6,17 mmol) avec un rendement de 78 % RMN 1H (400 MHz, D2O) : 3.30 (t, J = 6.7 Hz, 4H, CH2), 2.37 (t, J = 7.0 Hz, 4H, CH2), 2.15 (s, 3H, CH3), 1,69 (tt, J = 6.7 Hz, J = 7.0 Hz, 4H, CH2). RMN 13C (100 MHz, D2O) 54.5, 49.4, 41.8, 26.7.
173
IR (, cm-1, ATR) : 2951, 2798, 2092, 1456, 1352, 1301, 1255, 1145, 1057, 923, 742.
______________________________________
I N3 N (55) N3
Iodure de bis-(3-azido-propyl)-dimthyl-ammonium (C8H18IN7) M = 339.18 g/mol
A une solution de 54 (1,250 g ; 6,33 mmol ; 1,0 quiv.) dans 20 mL de MeOH est ajout liodure de mthyle (4,492 g ; 31,65 mmol ; 5,0 quiv.). Aprs 48 heures dagitation temprature ambiante, le mlange est vapor pour donner le compos 60 en tant que liquide tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 incolore, avec un rendement quantitatif.
______________________________________
Cl N3 N (56) N3
Chlorure de bis-(3-azido-propyl)-dimthyl-ammonium (C8H18ClN7) M = 247.73 g/mol
Le compos 55 est pass sur rsine Dowex Marathon (changeuse danions charge en Cl-) pour donner le compos 61, liquide incolore avec un rendement quantitatif. RMN 1H (400 MHz, D2O) : 3.52 (t, J = 6.6 Hz, 4H, CH2), 3.47-3.42 (m, 4H, CH2), 3.13 (s, 6H, CH3), 2.12 (tt, J = 6.6 Hz, J = 8.1 Hz, 4H, CH2). RMN 13C (100 MHz, D2O) : 61.6, 50.8, 47.8, 21.8. IR (, cm-1, film) : 3018, 2951, 2877, 2100, 1633, 1485, 1359, 1267, 866. _____________________________________
174
Cl N N ClH.H2N N N N N N NH2.HCl
(57)
Dichlorydrate du chlorure de bis-(2-[4-aminomthyl-[1,2,3]triazol-1yl)-propyll]-dimthylammonium (C14H30ClN9) M = 430.81 g/mol
Le compos 57 est obtenu en suivant la procdure gnrale de la CuAAC (Procdure a) partir de 56 (0,248 g ; 1,0 mmol ; 1,0 quiv.) et de la propargylamine (0,116 g ; 2,00 mmol ; 2,0 quiv.) dans un mlange eau/MeOH 1/1 v/v (4 mL). Le prcipit form est hygroscopique, le mlange est vapor sous pression rduite, pour donner solide beige tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 conserv tel quel. RMN 1H (400 MHz, D2O) : 8.18 (s, 2H, Htriazole), 4.60 (t, J = 6.6 Hz, 4H, CH2), 4.37 (s, 4H, CH2), 3.45-3.40 (m, 4H, CH2), 3.11 (s, 6H, CH3), 2.43 (tt, J = 6.6 Hz, J = 8.1 Hz, 4H, CH2). RMN 13C (100 MHz, D2O) 140.0, 125.7, 61.0, 50.9, 47.1, 34.0, 22.8. IR (, cm-1, ATR) : 3394, 3122, 2962, 2863, 2627, 23344, 1652, 1606, 1468, 1342, 1225, 1149, 1051, 967, 804. HR-MS : m/z calcul pour [C14H28N9]+ 322.2468 ; trouv 322.2459 (-2,7 ppm). ______________________________________
Br N (60) N Br
Dibromure de 1,3-bis(N,N-dimthylprop-2-ynylammonio)propane (C13H22Br2N2) M = 366.14 g/mol
A une solution de N,N,N,N-tretramthyl-1,3-propanediamine (2,000 g, 15,40 mmol ; 1 quiv.) dans lactonitrile (30 mL) refroidie dans un bain de glace 0C, est ajout goutte-goutte le bromure de propargyle (6,700 g ; 46,00 mmol, 3 quiv.). La solution est maintenue sous agitation pendant une nuit. Le produit prcipite au cours de la raction. Le solide est filtr sous pression rduite et lav avec de lther pour donner le compos attendu 60, solide blanc (3,380 g ; 9.24 mmol) avec un rendement de 60 %.
175
RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 4.60 (d, J = 2.4 Hz, 4H, CH2), 4.12 (t, J = 4.2 Hz, 2H, CH), 3.48 (m, 4H, 4H, CH2), 3.20 (s, 12 H, CH3), 2.32 (m, 2H, CH2). RMN 13C (100 MHz, DMSO-d6) : 82.5, 70.7, 60.1, 55.0, 51.1, 17.3. IR (, cm-1, ATR) : 3427, 3184, 3014, 2968, 2918, 2119, 1475, 1448, 1386, 1176, 1004, 906, 887, 711. AE : Calcul pour C13H22Br2N2 : C, 42.65, H, 6.06, N, 7.65 ; trouv : C, 43.02, H, 6.44, N, 7.35. ______________________________________
Br N N N N N (61) N N N N Br N
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
(C25H34Br2N10) M = 634.41 g/mol
A une solution de 60 (0,184 g ; 0,50 mmol ; 1,0 quiv.) dans 2 mL de tert-BuOH, sont ajouts successivement, le compos 33 (0,135 g ; 1,0 mmol ; 2,0 quiv.), puis lactate de cuivre(II) (10 mg ; 60 mol ; 10 mol %). Aprs 24 heures, le mlange est filtr sous vide, puis lav avec du tert-butanol (3 mL), puis de lether (3 mL). Le produit 61 trs hygroscopique est conserv tel quel. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 8.64 (s, 2H, Htriazole), 8.56 (d, J = 4.6 Hz, 2H, HAr), 7.84 (m, 2H, HAr), 7.37 (m, 4H, HAr), 5.82 (s, 4H, CH2), 4.81 (s, 4H, CH2), 3.46 (m, 4H, CH2), 3.12 (s, 12H, CH3), 2.29 (m, 2H, CH2). RMN 13C (100 MHz, D2O) : 152.7, 148.9, 138.7, 134.9, 129.7, 59.6, 58.0, 55.0, 50.7, 17.1. ______________________________________
N N Cl N Pt Cl NH2 (1)
(C10H12Cl2N4Pt) Mw = 454.21 g/mol
176
Le complexe 1 est obtenu en appliquant la procdure gnrale pour la prparation des complexes de platine en utilisant 28 (50 mg ; 0,22 mmol) et K2PtCl4 (92 mg ; 0,22 mmol). On obtient le complexe sous la forme dun solide beige (65 mg ; 0,14 mmol) avec un rendement de 65 %. RMN 1H (400 MHz, DMF-d7) : 8.46 (s, 1H, Htriazole), 7.35-7.50 (m, 5H, HAr), 5.80 (s, 2H, CH2), 3.53 (s, 2H, CH2). RMN 13C (400 MHz, DMF-d7) : 136.0, 130.1, 129.8, 129.6, 123.6, 56.2, 43.7. Donnes en accord avec celles de la littrature.163 __________________________________
H3N Cl Pt Cl Cl
X = NH4+, 62 X = K+, 63
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
Trichloromonoammineplatinate(II) de potassium K[PtCl 3NH3] M = 375.57 g/mol
A une solution de cisplatine (150 mg ; 0,5 mmol ; 1,0 quiv.) dans leau distille (4 mL) sont additionns 2 mL dune dacide chloridrique concentr. Le mlange est port reflux pendant 9 heures jusqu dispariton totale du cisplatine (solide insoluble jaune). Aprs retour temprature ambiante, le mlange est filtr sur coton et silice afin doter le cisplatine nayant pas ragi. Le filtrat est vapor et repris dans dans lthanol pour obtenir le sel de platine 62 solide orange (146 mg ; 0,41 mmol) avec un rendement de 82 %. IR (, cm-1, ATR) : 3209, 1556, 1410, 1231. Le compos 62 est solubilis dans un minimum deau, puis est pass sur rsine Dowex 50 x 8 (charge en K+) pour donner le sel de platine 63 sous la forme dun solide orange aprs vaporation de leau (rendement quantitatif). IR (, cm-1, ATR) : 3298, 1622, 1548, 1309.
__________________________________________
Cl N Pt Cl NH
N N
70
177
(C11H14Cl2N4Pt) Mw = 482.27 g/mol
Le complexe 70 est synthtis en appliquant la procdure gnrale pour la prparation des complexes de platine en utilisant 29 (50 mg ; 0,21 mmol) et K2PtCl4 (78 mg ; 0,21 mmol). On obtient le complexe sous la forme dun solide beige (38 mg ; 0.08 mmol) avec un rendement de 40 %. IR (, cm-1, ATR) : 3139, 3107, 1589,1495, 1454, 1042, 724. AE : Calcul pour C11H14Cl2N4Pt : C, 28.22, H, 3.01, N, 11.97 ; trouv : C, 28.36, H, 3.11, N, 11.94. __________________________________________
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
N N
H3N N Pt NH3 NH2
2+ 2Cl-
72
(C10H18Cl2N6Pt) Mw = 488.27 g/mol
A une solution de cisplatine (90 mg ; 0.30 mmol ; 1 quiv.) dans leau distille (20 mL) est ajout goutte--goutte une solution de chlorhydrate 28 (67 mg ; 0.30 mmol ; 1 quiv.) dans leau distille (800 L) et basifie avec une solution de KOH 1M (300 L). Le mlange est agit 40 C pendant 5 heures. Il faut rduire le volume ractionnel, afin de faire prcipiter le cisplatine nayant pas ragi. Le cisplatine est filtr laide dun filtre Millipore, et le compos attendu est rcupr dans le filtrat. Celui-ci est vapor pour donner le produit 72 (solide beige) avec un rendement quantitatif. RMN 1H (400 MHz, D2O) : 8.11 (s, 1H, Htriazole), 7.48 (m, 5H, HAr), 5.66 (s, 2H, CH2), 4.09 (s, 2H, CH2). RMN 13C (100 MHz, D2O) : 152.2, 133.5, 129.4, 128.7, 122.8, 55.8, 42.1. HR-MS : m/z calcul pour [C10H18N6Pt]+ 417.1240 ; trouv 417.1235. (-2.5 ppm)
178
_________________________________________
N N Cl N Pd Cl NH2 74
(C10H12Cl2N4Pd) Mw = 365.56 g/mol
A une solution de K2PdCl4 (109 mg ; 0,33 mmol ; 1 quiv.) dans 1.5 mL deau distille est ajout goutte--goutte une solution de 28 (50 mg ; 0,13 mmol ; 1 quiv.) dans leau distille (800 L). Le mlange est agit temprature ambiante et lobscurit pendant 12 heures. Le prcipit est filtr sous pression rduite, lav avec de leau (5 mL), puis avec de lthanol (5 mL) et de lther pour obtenir le complexe de palladium(II) 74, sous la forme dun solide tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011 jaune (104 mg ; 0,284 mmol) avec un rendement de 86 %. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 8.29(s, 1H, Htriazole), 7.40 (m, 5H, HAr), 5.68 (s, 2H, CH2), 5.58 (m, 2H, CH2), 3.68 (m, 2H, NH2). RMN 13C (100 MHz, DMSO-d6) : 152.0, 134.6, 128.8, 128.6, 128.2, 122.3, 54.6, 40.4. IR (, cm-1, ATR) : 3241, 3212, 3109, 1654, 1452, 1254, 1143, 1095, 993, 840, 764, 717. HR-MS : m/z calcul pour [C10H12Cl2lN4Pd-Cl]+ 328.9785 ; trouv 328.9775 (5.1 ppm). AE : Calcul pour C10H12Cl2N4Pd: C, 32.86, H, 3.31, N, 15.33 ; trouv : C, 33.44, H, 4.49, N, 15.56. __________________________________________
N N N Cl Pt N Cl 77
(C14H12Cl2N4Pt) Mw = 502.26 g/ mol
A une solution de K2PtCl4 (87 mg ; 0.21 mmol ; 1 quiv.) dans leau distille (800 L) est ajout goutte goutte une solution de 34 (50 mg ; 0.21 mmol ; 1 quiv.) dans leau distille (800 L). Le mlange est agit temprature ambiante et lobscurit pendant 4 jours. Le prcipit est filtr sous pression rduite, lav avec de leau (5 mL), puis avec de lthanol (5
179
mL) et de lther pour obtenir le complexe de platine(II) 76 (52 mg ; 0.10 mmol) avec un rendement de 50 %. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 8.65 (s, 1H, Htriazole), 8.56 (d, J = 3.7 Hz, HAr), 7.87-7.81 (m, 3H, HAr), 7.46-7.41 (m, 2H, HAr), 7.38-7.30 (m, 3H, HAr), 5.75 (s, 2H, CH2). IR (, cm-1, ATR) : 3078, 2988, 1613, 1474, 1440, 1310, 1277, 1230, 1160, 1088, 1030, 974, 834, 766, 723. Donnes en accord avec celles de la littrature.169 __________________________________________
Cl Pt N N Cl Cl Pt N H2N N Cl NH2
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
(C12H22Cl4N8Pt2) Mw = 810.32 g/mol
Le complexe 79 est obtenu en appliquant la procdure gnrale pour la prparation des complexes de platine en utilisant 38 (50 mg ; 0.145 mmol), KOH 1M (290 L, 2 quiv.) et K2PtCl4 (124 mg ; 0.29 mmol, 2 quiv.). On obtient le complexe sous la forme dun solide marron beige (88 mg ; 0.11 mmol) avec un rendement de 75 %.
AE : Calcul pour C12H22Cl4N8Pt: C, 17.79, H, 2.74, N, 13.83 ; trouv : C, 17.85, H, 2.88, N, 13.87. _________________________________________
Br N N N N Pt Cl Cl N N Br N N N Cl Pt N Cl
86
(C25H34Br2Cl4N10Pt2) Mw =1166.38 g/mol
A une solution de K2PtCl4 (75 mg ; 0,18 mmol ; 2,0 quiv.) dans leau distille (800 l) est ajout goutte goutte une solution 61 (50 mg ; 0,09 mmol ; 1 quiv.) dans leau distille (800
180
L). Le mlange est agit temprature ambiante et lobscurit pendant 6 jours. Le prcipit est filtr sous pression rduite, lav avec de leau (5 mL), puis avec du mthanol (5 mL) et de lther pour obtenir le complexe de platine(II) 86, solide beige (74 mg ; 0.06 mmol) avec un rendement de 70 %. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : 8.57 (s, 2H, Htriazole), 8.51 (d, J = 4.6 Hz, 2H, HAr), 7.82 (m, 2H, HAr), 7.37 (m, 4H, HAr), 5.79 (s, 4H, CH2), 4.73 (s, 4H, CH2), 3.46 (m, 4H, CH2), 3.06 (s, 12H, CH3), 2. 69 (m, 2H, CH2). __________________________________________
2+
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
2 NO3-
N H2N H2N N N H N O N N Pt O H N N N NH2
O HO HO OH HO
O OH OH
(89)
Complexe Pt-guanosine 89 (C30H38N16O16Pt) M = 1073.80 g/mol.
Le complexe de platine 1 (50 mg ; 0,11 mmol ; 1,0 quiv.) est mis sous agitation en prsence de AgNO3 (47,0 mg ; 0,28 mmol ; 2,5 quiv.) dans 2.0 mL de D2O pendant 3 jours labri de la lumire puis le mlange ractionnel est filtr sur une membrane millipore. Le driv diaqua du complexe platin de couleur jaune est mis en raction avec la guanosine (77,9 mg ; 0,28 mmol ; 2,5 quiv.) pendant 24 heures. La suspension est de nouveau filtre sur une membrane Millipore avant de procder la purification de ladduit par HPLC prparative (MeOH/AcONH4 0,1 M 25 :75, pH 5.5, condition isocratique). La fraction contenant ladduit 89 est lyophilise. Le solide blanc est dissous dans 20 mL deau pour tre dessal laide dun membrane de dialyse (cut-off 500).
181
RMN 1H (400 MHz, D2O) : 8.50 (s, 1H, H8), 8.37 (s, 1H, H8), 8.17 (s, 1H, Htriazole), 7.447.38 (m, 3H, HAr), 7.28 (m, 2H, HAr), 5.91(d, J = 4.5 Hz, 1H, H1), 5.90 (d, J = 4.5 Hz, 2H, H1), 5.53 (s, 2H, CH2), 4.61 (t, J = 4.5 Hz, 1H, H2), 4.59 (t, J = 4.5 Hz, 1H, H2), 4.33 (t, J = 4.5 Hz, 1H, H3), 4.29 (t, J = 4.5 Hz, 1H, H3), 4.24-4.17 (m, 4H, H4, H4, CH2-NH2), 3.883.71 (m, 4H, 2H5, 2H5). RMN 195Pt (D2O) : -2502. HR-MS : m/z calcul pour [C30H38N14OPt]2+ 474.6272 ; trouv 474.5974 __________________________________________
2+ 2 NO3-
tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011
N H2N H 2N N N H N O N N Pd O H N N N NH2
O HO HO OH HO
O OH OH
(90)
Complexe Pd-guanosine 90 (C30H38N16O16Pd) M = 985.14 g/mol. Le complexe de palladium 74 (46 mg ; 0,13 mmol ; 1,0 quiv.) est mis sous agitation en prsence de AgNO3 (54 mg ; 0,31 mmol ; 2,4 quiv.) dans 2.5 mL de D2O pendant 2 jours labri de la lumire. Le mlange ractionnel est filtr sur une membrane millipore. Le driv diaqua du complexe palladium, prsent dans le filtrat (solution jaune) est mis en raction avec la guanosine (90 mg ; 0,31 mmol ; 2,5 quiv.) pendant 24 heures. La suspension est de nouveau filtre sur une membrane Millipore avant de procder lanalyse RMN de ladduit Pd-(guanosine)2 90 . RMN 1H (400 MHz, D2O) : 8.46 (s, 1H, H8), 8.31 (s, 1H, H8), 8.07 (s, 1H, Htriazole), 7.307.23 (m, 3H, HAr), 7.10 (m, 2H, HAr), 5.85 (d, J = 4.5 Hz, 1H, H1), 5.83 (d, J = 4.5 Hz, 2H, H1), 5.40 (s, 2H, CH2), 4.57 (t, J = 4.5 Hz, 1H, H2), 4.54 (t, J = 4.5 Hz, 1H, H2), 4.31 (t, J =
182
4.5 Hz, 1H, H3), 4.27 (t, J = 4.5 Hz, 1H, H3), 4.24-4.18 (m, 1H, H4), 4.17-4.14 (m, 1H, H4), 4.12 (s, 2 H, CH2) 3.87-3.68 (m, 4H, 2H5, 2H5). HR-MS : m/z calcul pour [C30H38N14OPd]2+ 430.0965 ; trouv 430.0948.
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REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
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N dordre : DU : 2101

UNIVERSITE BLAISE PASCAL

ECOLE DOCTORALE DES SCIENCES FONDAMENTALES N 662

Par Aurlien CHEVRY

Complexes click de platine et cuivre-NHC : applications en biologie

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TABLE DES MATIERES

I.3. Complexes de cuivre : coupure oxydative de lADN .......................... 35

II.3. Synthses des ligands bis -triazole ...................................................... 82

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III.3. Prparation des complexes binuclaires de platine ....................... 102

IV.5. Conclusion ........................................................................................ 121

V.4. Conclusion ......................................................................................... 140 CONCLUSIONS ET PERSPECTIVES ...................................................... 141

PARTIE EXPERIMENTALE ..................................................................... 143 REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES .................................................... 185

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Chapitre I : Etude Bibliographique

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Chapitre I :Etude Bibliographique

Thrapies par chlation des mtaux

Domaines dapplication de la chimie inorganique mdicinale

Agents thrapeutiques (Li, Pt, Au, Bi, )

Radio-pharmaceutiques Diagnostique (99mTc) Thrapeutique (186Re)

Figure 1. Domaines dapplication de la chimie inorganique mdicinale.2

Chapitre I :Etude Bibliographique

Co Cu Fe tel-00653371, version 1 - 19 Dec 2011

Tableau 1. Exemple de composs mtalliques activits biologiques.

Chapitre I :Etude Bibliographique

I.2. Complexes de platine : alkylation de lADN

Chapitre I :Etude Bibliographique

NH3 NH3 (NO3)2 + 2 AgCl

Schma 1 . Synthse du cisplatine dcrite par Dhara en 1970.8

Chapitre I :Etude Bibliographique

I.2.2 Cisplatine, chimiothrapie.

I.2.3 Cisplatine, mode daction et ractivit.

Chapitre I :Etude Bibliographique

+ H3N Pt H3N Cl OH2

2+ H3N Pt H3N OH2 OH2

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H3N Plasma [ Cl- ] = 100 mM Cytoplasme [ Cl- ] = 2- 30 mM

Figure 2. Equilibres impliquant le cisplatine en milieu aqueux et en prsence de chlorures.15

Chapitre I :Etude Bibliographique

= site de fixation directe = site de fixation aprs perte de H+ NH2 N3

Figure 4. Natures des adduits du cis platine-ADN.

Chapitre I :Etude Bibliographique

Chapitre I :Etude Bibliographique

I.2.4 Cisplatine, phnomnes de rsistance

Chapitre I :Etude Bibliographique

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Figure 8. Structure du glutathion et exemple dun complexe platine- glutathion.31

Chapitre I :Etude Bibliographique

Reconnaissance de ladduit intabrin-1, 2 Et ouverture partielle de lhlice

Fixation du complexe Protique du MMR

Incision du brin dADN

Complexe Protique du MMR Cycle futile

Excision des nuclotides

Synthse ADN et ligation

ADN double brin intacte