UNIVERCIADAD NACIONAL DE HUANCAVELICA

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE AGROINDUSTRIAS

TEMA

EXTRACCIN DE PROTENAS ANIMAL

CTEDRA CATEDRTICO ALUMNA

: PROCESOS AGROINDUSTRIALES II : Ing. Abel A. ESTEBAN PONCE : CUICAPUSA QUISPE PEDRO

Acobamba - Huancavelica

INTRODUCCIN

Las protenas son necesarias para todos procesos de obtencin de energa requerida par a la alimentacin y el desarrollo de la persona. existen muchas clasificaciones de las protenas, dependiendo de su estructura, funcin, solubilidad, forma, etc., pero una clasificacin general para estas, las divide en: globulares y fibrosas, las primeras son de forma esfrica o parecida a sta, contienen en su estructura hlices y hebras , adems de estructuras no repetitivas (asas y giros) las cuales les proporcionan diseos compactos con funciones particulares, son solubles en agua; algunos ejemplos son: la insulina, albmina, globulinas plasmticas y numerosas enzimas. Las protenas fibrosas son de forma alargada, su armazn es una repeticin de elementos de estructura secundaria (hlices y hebras), stas le confieren la forma de fibras cilndricas observables al microscopio, son de baja solubilidad en agua, dentro de stas se encuentran la queratina, miosina, colgeno y fibrina Las enzimas o las protenas producidas por los microorganismos pueden ser intracelulares, periplsmicas o secretadas al medio de cultivo. Para enzimas extracelulares, el grado de purificacin requerido es mnimo y los procesos a gran escala pueden rendir toneladas de producto proteico. Muchas de estas son producidas a partir de cepas silvestres de microorganismos. Sin embargo, en la produccin de protenas para uso en el campo del diagnstico clnico y para aplicaciones teraputicas, la ingeniera gentica y proteica est comenzada a jugar un papel muy importante da a da. La ingeniera gentica adems de permitir enormes incrementos del rendimiento, ha permitido la transferencia del material gentico de animales a bacterias. De esta forma, esos productos slo disponibles en pequeas cantidades en los tejidos animales pueden ser producidos ahora en cantidades virtualmente ilimitadas a partir de bacterias crecidas de forma muy sencilla.

I.

MARCO TEORICO. 1.1. Proteina. Las protenas son macromolculas formadas por cadenas lineales de aminocidos. El nombre protena proviene de la palabra griega ("prota"), que significa "lo primero" o del dios Proteo, por la cantidad de formas que pueden tomar. Las protenas desempean un papel fundamental en los seres vivos y son las biomolculas ms verstiles y ms diversas. Realizan una enorme cantidad de funciones diferentes, entre las que destacan: Estructural (colgeno y queratina) Reguladora (insulina y hormona del crecimiento), Transportadora (hemoglobina), Defensiva (anticuerpos), enzimtica (sacarasa y pepsina), Contrctil (actina y miosina).

Las protenas de todo ser vivo estn determinadas mayoritariamente por su gentica (con excepcin de algunos pptidos antimicrobianos de sntesis no ribosomal), es decir, la informacin gentica determina en gran medida qu protenas tiene una clula, un tejido y un organismo. Las protenas se sintetizan dependiendo de cmo se encuentren regulados los genes que las codifican. Por lo tanto, son susceptibles a seales o factores externos. El conjunto de las protenas expresadas en una circunstancia determinada es denominado proteosoma. 1.1.1. Caractersticas. Los prtidos o protenas son biopolmeros, es decir, estn constituidas por gran nmero de unidades estructurales simples repetitivas (monmeros). Debido a su gran tamao, cuando estas molculas se dispersan en un disolvente adecuado, forman siempre dispersiones coloidales, con caractersticas que las diferencian de las disoluciones de molculas ms pequeas. Por hidrlisis, las molculas de protena se escinden en numerosos compuestos relativamente simples, de masa molecular pequea, que son las unidades fundamentales constituyentes de la macromolcula. Estas unidades son los aminocidos, de los cuales existen veinte especies diferentes y que se unen entre s mediante enlaces peptdicos. Cientos y miles de estos aminocidos pueden participar en la formacin de la gran molcula polimrica de una protena. Las protenas son largas cadenas de aminocidos unidas por enlaces peptdicos entre el grupo carboxilo (-COOH) y el grupo amino (-NH2) de residuos de aminocido adyacentes. La secuencia de aminocidos en una protena est codificada en su gen (una porcin de ADN) mediante el cdigo gentico.

1.1.2. Funciones. Las protenas ocupan un lugar de mxima importancia entre las molculas constituyentes de los seres vivos (biomolculas). Prcticamente todos los procesos biolgicos dependen de la presencia o la actividad de este tipo de molculas. Bastan algunos ejemplos para dar idea de la variedad y trascendencia de las funciones que desempean. Son protenas: Casi todas las enzimas, catalizadores de reacciones qumicas en organismos vivientes; Muchas hormonas, reguladores de actividades celulares; La hemoglobina y otras molculas con funciones de transporte en la sangre; Los anticuerpos, encargados de acciones de defensa natural contra infecciones o agentes extraos; Los receptores de las clulas, a los cuales se fijan molculas capaces de desencadenar una respuesta determinada; La actina y la miosina, responsables finales del acortamiento del msculo durante la contraccin; El colgeno, integrante de fibras altamente resistentes en tejidos de sostn. 1.1.3. Clasificacin de las protenas.

1.2. Protenas de origen animal. Las protenas de origen animal, tambin llamadas "protenas completas", contienen los nueve aminocidos esenciales en la cantidad y proporcin adecuados para cubrir las necesidades del organismo que varan con la edad y las diferentes etapas de desarrollo. Los alimentos que contienen protenas de origen animal son variados y cada uno tiene sus funciones principales en el organismo del ser humano. La parte del cuerpo del animal que contenga protena es el msculo, es decir, la carne y no los huesos o ninguna grasa. Los alimentos que contienen protenas de origen animal son necesarios para satisfacer las necesidades de los seres humanos. Fuentes alimentarias de protenas de origen animal y de alto valor biolgico. carne pescado huevo leche y derivados

1.2.1. Alimentos marinos: Pescados grasos y blancos y todo tipo de mariscos. El factor ms importante para determinar el valor nutricional de un alimento fuente de protenas es su contenido y disponibilidad de los aminocidos esenciales. Para obtener este valor, el alimento se compara con la leche materna, que por su riqueza se toma como referencia. De esta manera, las protenas presentes en la leche materna y el huevo, por ejemplo, tienen un puntaje de 100; las presentes en carnes, pescado o leche de vaca, obtienen una calificacin de 75 puntos y as sucesivamente. 1.2.2. El pollo: la carne blanca por excelencia.

Por su accesibilidad, versatilidad y exquisito sabor, la carne de pollo es prcticamente imprescindible en nuestra dieta diaria. Es una excelente fuente de protenas de alto valor biolgico, fcil de digerir y dependiendo de la pieza, aporta cantidades variables de grasa y en consecuencia, de colesterol. La pechuga se considera la pieza menos grasa del pollo, mientras que los muslos y la piel son las de mayor contenido graso.

La carne de pollo es adems fuente de diversas vitaminas (B1, B2, B3, B6 y cido flico); fsforo, hierro y potasio.

Aunque lo conocemos de toda la vida, no por esto podemos fiarnos. La carne de pollo se estropea fcilmente, mxime en tiempos de suministro escaso de energa elctrica y altas temperaturas ambientales. Una vez descongelado, el pollo debe cocinarse a ms tardar al da siguiente y consumirse de inmediato, tomando la precaucin de que la carne est perfectamente cocida. 1.2.3. Carne de res: la reina "roja".

La carne de res es un alimento muy nutritivo, aunque su valor nutricional especfico vara de acuerdo con la alimentacin, la edad del animal y el corte de la carne. Su consumo resulta en una excelente fuente de protenas de alto valor biolgico, cantidades moderadas de vitaminas y riqueza en hierro de fcil absorcin.

Aunque depende mucho del corte que se trate, es una carne que en general aporta grasa y colesterol por lo que se recomienda no excederse en su consumo. La carne de res pierde nutrientes durante su preparacin: ms cantidad cuando se hierve que cuando se asa o fre. Los cortes blandos son ideales para preparar a la plancha, a la parrilla o al horno, pero es igualmente importante controlar la temperatura y tiempo para evitar perder la jugosidad, la terneza y su valor nutritivo. 1.2.4. El Huevo: un alimento casi perfecto.

El huevo aporta 15 gramos de protena por cada 100, conteniendo una proporcin ptima de todos los aminocidos esenciales por lo que se considera como protena patrn o de referencia para evaluar la calidad proteica de otros productos.

Es completo, saludable y asequible y no merece la mala fama que por aos tuvo al atribursele una capacidad sobresaliente para aumentar el colesterol. En lo que se refiere a otros nutrientes, en el huevo destacan las vitaminas A, D, E y del grupo B y minerales como el fsforo, hierro, sodio, zinc y selenio. 1.2.5. La proteina de la leche.

Casena: La Casena (del latn caseus, queso) es una fosfoprotena (un tipo de protena conjugada o hetereoprotena) presente en la leche y en algunos de sus derivados (productos fermentados como el yogur o el queso). En la leche, se encuentra en su fase soluble asociada al calcio (fosfato de calcio) en un complejo que se le ha denominado caseingeno. La casena representa cerca del 77 al 82 % de las protenas presentes en la leche y el 2.7 % en la composicin de la leche lquida. Lista de alimentos que contienen protenas de origen animal: Alimentos Carne (100 gr.) Pechuga de pollo asada Muslo de pollo asado Pollo hervido Pollo frito Muslo de pavo Pavo asado Pechuga de pavo Codorniz Perdiz Pato Faisan Gramos de Protena 26 23 29 18 21 29 22 25 25 16 24

A) Ternera Contiene la mitad de grasas que la carne magra de vaca y la misma cantidad de vitaminas y minerales. Su carne corresponde a las reses ms jvenes (entre 3 y 6 meses) y es ms rosada y clara que la de la vaca, con una textura fina y ligeramente hmeda. Por su delicado sabor se aconseja que sea cocinada al horno o la parrilla, dorndola a fuego lento, y acompaarla de guarniciones suaves, su sabor suele mejorar si se sazona con especias como el estragn, el tomillo o el laurel. Es importante evitar la carne de apariencia seca o color pardusco, y consumirla antes de las 24 horas despus de haberla comprado. La carne de ternera contiene cantidades importantes de folatos, calcio, esencial para la formacin de las estructuras seas; zinc, necesario para la reparacin de los tejidos; vitamina C, que favorece la proteccin de las mucosas y ayuda a cicatrizar heridas; y vitaminas del complejo B, necesarias para el buen funcionamiento del sistema nervioso. Su consumo tambin es importante para la formacin de glbulos rojos y para la prevencin de la anemia. B) Cordero La carne del cordero tambin resulta una fuente importante de vitaminas del complejo B, zinc y hierro de fcil absorcin.

Sin duda alguna la mejor parte del cordero para su consumo desde el punto de vista nutritivo es la pierna, ya que es el corte con menor contenido en grasa, aunque hay que mencionar que la paletilla es ms sabrosa, y al igual que la ternera la forma ms sana de cocinarlo es asado o a la parrilla. A la hora de comprarlo, debemos tener en cuenta que el color que debe tener una carne de cordero de calidad es caf rosceo, teniendo en cuenta que en verano es algo ms oscuro. Resulta conveniente recordar tambin que las carnes crudas deben almacenarse en la rejilla ms baja de la nevera y a una temperatura que no supere los 5 grados centgrados.

II.

METODODO DE EXTRACCION DE PROTEINAS. 2.1. Mtodos de rotura celular y extraccin de protenas. El primer paso en el aislamiento de una protena es la rotura celular, para posteriormente poder extraer la protena con un tampn adecuado. El mtodo de rotura a elegir depende de las caractersticas mecnicas del tejido o clulas de donde se va a aislar la protena, as como de su localizacin. Entre los distintos mtodos ellos estn: 2.1.1. Lisis celular. Vlido para clulas sin pared celular como las clulas de tejidos animales, pero no es suficiente para clulas vegetales o bacterias. Consiste en suspender las clulas en una solucin hipotnica (ms diluida que el interior celular). Debido a la diferencia osmtica el agua difunde al interior de la clula, causando su hinchamiento y rotura.

2.1.2. Destruccin mecnica. Entre estos mtodos se encuentran la homogenizacin (hacer pasar las clulas entre un tubo y un pistn de vidrio que ajustan casi totalmente); moler en un mortero con arena o almina; molino con perlas de vidrio, la prensa de French (que hace

pasar las clulas a gran velocidad a travs de un pequeo orificio), la sonicacin (someter las clulas a vibraciones de ultrasonido).

2.1.3. Congelacin-descongelacin. La rotura se produce al someter las clulas a un cambio brusco de temperatura, congelando primero a 196 C (con nitrgeno lquido) y pasndolas rpidamente a temperatura ambiente (25 C).

Tras la rotura o bien, si se requiere, durante el proceso de rotura, se utilizan tampones de extraccin para solubilizar las protenas. Pueden utilizarse como tales disoluciones acuosas de tampones especficos para protenas solubles o bien que contengan adems detergentes si se pretende purificar protenas asociadas a membranas, si bien en este caso hay que cuidar que la enzima no se desnaturalice. Una vez que la protena se ha extrado de su entorno natural est expuesta a muchos agentes que pueden daarla. Los cambios bruscos de pH, cidos y bases fuertes, temperaturas extremas y la accin de las proteasas (enzimas que hidrolizan los enlaces peptdicos) son los principales factores que pueden, desnaturalizar las protenas. Para evitar o minimizar estos factores la manipulacin de las protenas durante el proceso de purificacin suele llevarse a cabo en disoluciones tamponadas, a bajas temperaturas (4C) y se procura que el proceso sea lo ms corto posible, adems en ocasiones es necesario aadir el tampn de extraccin agentes protectores de grupos funcionales especficos de la protena o bien inhibidores de proteasas. El resultado de todos estos tratamientos es un lisado u homogenado que contiene una mezcla de enzimas, membranas y clulas rotas. Esta preparacin se somete a centrifugacin (10.000 15.000 rpm) para eliminar

los restos celulares y separar, el sobrenadante, que contiene las protenas solubles, del precipitado que adems de restos celulares tambin contienen protenas asociadas a membranas y que para solubilizarlas requiere un tratamiento adicional con detergentes. En cualquier caso, la fase soluble (con o sin detergente) constituye el extracto crudo donde se encuentra la protena de inters objeto de la purificacin. A la hora de centrifugar hay que tener en cuenta que la centrfuga sea refrigerada, balancear los tubos y asegurarse siempre que los rotores estn fijos. Para purificar una protena es imprescindible tener un mtodo para detectar cuantitativamente su presencia. Es deseable que este mtodo sea especfico y Fcil de llevar a cabo. En este sentido es mucho ms cmodo trabajar con enzimas, pues se detectaran mediante su ensayo de actividad, en caso de purificar protenas no enzimticas, se requieren mtodos de seleccin ms especficos. 2.2. Mtodos cromatogrficos para separacin de protenas. Las separaciones cromatogrficas se basan en las diferencias de carga, tamao o afinidad de las diferentes protenas. Uno de los mtodos ms habitualmente utilizados para la separacin de protenas es la cromatografa en columna, aunque tambin existe la cromatografa en papel y en placa. La columna est rellena con un material slido con las caractersticas qumicas adecuadas (fase estacionaria), y una solucin tamponada se hace pasar a travs de la columna (fase mvil). El extracto crudo se aplica en la parte superior de la columna y va poco a poco entrando en la columna con la fase mvil. Cada protena migrar a distinta velocidad segn su grado de afinidad por la fase estacionaria. Generalmente estas cromatografas se realizan de una forma semiautomtica, la fase mvil se hace pasar a la columna a travs de una bomba peristltica y un colector de fracciones va recogiendo el eluyente que sale de columna. Este colector hace que el tubo vaya cambiando cada cierto nmero de gotas o de volumen. Despus hay que localizar en que tuvo o tubos est la protena que se pretende purificar. Existen distintos tipos de cromatografas en tres ellos: La filtracin o exclusin molecular La cromatografa de intercambio inico La cromatografa hidrofbica La cromatografa de afinidad 2.2.1. Filtracin en gel o cromatografa de exclusin molecular. La fase estacionaria est constituida por partculas de polmeros de diferente porosidad. La separacin se basa en el Tamao de las partculas. Las protenas ms grandes que no pueden penetrar en los poros de Las partculas de la matriz de filtracin son Meluidas con ms rapidez que las protenas ms pequeas que penetran por los poros de las partculas y siguen un camino ms tortuoso y ms largo. El tamao de los poros internos depende de la naturaleza del polmero en cuestin, y permite la entrada a protenas por Debajo de un determinado peso molecular.

2.2.2.

Cromatografa de intercambio inico. En ella, la columna est rellena con un soporte al que van unidos grupos cargados positivamente (intercambio aninico) o negativamente (intercambio catinico). Estos grupos cargados normalmente estn neutralizados por iones del tampn. Estos iones son reversiblemente reemplazados por las protenas con ms tendencia a unirse al soporte. Las protenas cargadas pueden por lo tanto unirse a intercambiadores catinicos o aninicos dependiendo de su carga neta. Las protenas ms, cargadas se unirn ms fuertemente al intercambiador y por lo tanto sern ms difciles de eluir. La afinidad con la que una protena se une a un intercambiador inico depende de la fuerza inica del medio, debido a la competencia entre los grupos cargados de la protena y los iones de la fase mvil. Una vez pegadas las protenas, para eluirlas (retirarlas) de la columna, se suele ir subiendo la fuerza inica de la fase mvil (aumentando la concentracin de sal, NaCl), de esta forma se eluyen primero las protenas mas dbilmente retenidas y cuando la fuerza inica sea mayor saldrn las protenas ms cargadas y por lo tanto ms retenidas.

2.2.3. Cromatografa hidrofbica. Se trata de un mtodo similar al anterior con la nica diferencia de que la fase estacionaria es apolar (hidrofbica), es decir, la protena se pega al soporte por los resto de aminocidos apolares, cuanto ms residuos de este Filtracin tipo tenga en su superficie, ms apolar ser, ms se retendr en la columna y se eluir ms tarde. En este caso a elusin se realiza aumentando la apolaridad de fase mvil. 2.2.4. Cromatografa de afinidad. Muchas protenas tienen la capacidad de unirse especficamente a ciertas molculas, mediante uniones fuertes, pero no covalentes. En esta tcnica la molcula que se une especficamente a la protena se conoce con el nombre de ligando y se une covalentemente a una matriz inerte. Cuando el extracto con la mezcla de protenas se aplica a la columna, la protena buscada se unir al ligando inmovilizado mientras que las dems saldrn de la columna con el tampn. En este caso tambin se utiliza el incremento de fuerza inica para eluir las protenas.

Todos estos sistemas pueden automatizarse, en base a sistemas cromatogrficos tales como el FPLC, en el que se hace uso de bombas de alta presin (100-400 bares) y columnas con materiales que soportan altas presiones. Este sistema reduce notablemente los tiempos de purificacin y utilizan fases estacionarias con mayor poder de retencin, lo que se incrementa los porcentajes y rendimiento de las purificaciones.

2.3. Mtodos electroforticos. Para comprobar si la protena de inters se ha separado del resto, es decir si la protena est pura, se requieren las tcnicas electroforticas. La electroforesis de protenas se lleva a cabo generalmente en geles de poliacrilamida. Se trata de geles porosos, cuya porosidad se puede regular en funcin de la concentracin de acrilamida. Durante la electroforesis la fuerza que provoca la migracin de las protenas es un campo elctrico, y el gel acta como filtro molecular, ralentizando la migracin de las protenas en funcin de su relacin carga/masa. A diferencia de lo que ocurra en la cromatografa de filtracin, en las electroforesis las protenas mayores son retardadas y se mueven ms lentamente a travs del gel, ay que las va frenando el tamao del poro y las protenas ms pequeas avanzan ms rpidamente.

Las muestras de protena se disuelven en una pequea cantidad de una solucin tampn, que contiene glicerol, que hace que la muestra se site en el fondo del pocillo y un colorante azul (azul de bromofenol) de pequeo peso molecular que nos indica migracin del frente. El tampn de electroforesis cierra el circuito entre el ctodo (+) y el nodo (-). El sistema se conecta a una fuente de alimentacin y las protenas migran hacia el polo positivo, situado en la base del gel. Despus el gel se saca del recipiente que lo contiene y se incuba en presencia del colorante adecuado (azul de Coomassie), que tie por completo el gel. A continuacin se destie con una disolucin de etanol/actico y el gel queda transparente y las bandas de protenas quedan teidas de color azul. (+)

( -)

Existen dos tipos principales de electroforesis, en condiciones Nativas las protenas se separan en funcin de su carga/masa; y en condiciones desnaturalizantes la electroforesis se realiza en presencia de un detergente, el SDS (dodecil sulfato sdico). El SDS es un detergente aninico, que se une a todas las protenas en la misma proporcin formando una especie de micela cargada negativamente. La gran carga negativa del SDS enmascara la carga intrnseca de las protenas, con lo que stas se separan solo en funcin de su masa e independientemente de su carga. El nico inconveniente de esta tcnica es que el SDS desnaturaliza las protenas y las protenas multimricas se separan en sus subunidades. Las electroforesis en SDS adems de permitir calcular el peso molecular de las cadenas polipeptdicas, nos indican las distintas subunidades que posee la protena. Generalmente la protena inters se analizan incluyendo calles con marcadores moleculares, que son protenas de peso molecular conocido que nos permiten determinar el peso molecular de la cadena polipeptdica, como se muestra en la siguiente figura. Metanol 25 %

En la calle 1 se encuentran los patrones de peso molecular conocido, en la calle 2 se encuentra la protena sujeta a estudio, de tal manera que se puede hacer una relacin lineal entre el Log del peso molecular de las protenas y la distancia que recorren en el gel (Rf=distancia de la banda/distancia del frente). La siguiente figura nuestra la diferencia entre las electroforesis nativa (NATIVAPAGE) Y la electroforesis desnaturalizante (SDS-PAGE). Como se aprecia en la figura una banda en la Nativa, puede dividirse en varias en SDS, si la protena tiene varias subunidades de distinto peso molecular, o bien en una banda de menor peso molecular, si las subunidades poseen el mismo peso molecular. De la figura se deduce que, la protena est pura (pues solo aparece un banda) y que adems posee 2 subunidades de 15000 g/mol (o lo que es lo mismo 15 kDa) cada una.

III.

EXTRACCIN DE PROTENAS. 3.1. Productos crneos. Homogeneizar 10 g de msculo picado con 100 ml de buffer Tris-HCl 0.03 M conteniendo KCl 0,6 M, pH = 7. Centrifugar (7000 g, 15 min, 4 C) y separar el sobrenadante. Repetir el tratamiento anterior sobre el pellet. Mezclar los dos sobrenadantes: se obtienen las protenas extrables con sal (PES) (protenas miofibrilares y protenas sarcoplsmicas).

3.2. Caso prctico:

3.2.1. OBJETIVO: Extraccin de la casena de una muestra de leche descremada. Reconocimiento de la naturaleza proteica. Identificacin de algunos aminocidos en la protena (Fenilalanina, Tirosina).

3.2.2. MATERIALES: SUSTANCIAS:

Vaso de Bohemia Muestra de leche descremada Termmetro C2H4O2 (cido actico) 2,0M Vidrio de reloj C2H6O (Etanol)

Papel de filtro CuSO4 (Sulfato de Cobre II) 1% Probeta 50 ML NaOH 10% Tubo de ensayo HN03 (c. Ntrico) Pinza Reactivo de Milln

3.2.3. TCNICA: 1. Extraccin de la Casena:

Verter aproximadamente 20 mL de leche descremada en un vaso de Bohemia. Calentar hasta 40C, adicionando por goteo, cido etanoico 2, agitar en forma contina y hasta q no se observe ms precipitacin. Dejar decantar, y pasar el slido obtenido a otro vaso de Bohemia. Disgregar el slido con ayuda de una varilla. Lavar con aproximadamente 20 mL de etanol y dejar decantar. Desechar el lquido y secar el slido entre hojas de papel de filtro. Pasar pequeas fracciones del slido a 3 tubos de ensayo.

2.

Reaccin de caracterizacin:

2.1. Reaccin de Biuret. Agregar sobre la Casena 20 gotas de solucin acuosa al 10% de hidrxido de sodio y 2 gotas de solucin acuosa de sulfato de cobre II.

2.2. Reaccin Xantoproteica. Agregar sobre otra muestra de Casena 10 gotas de cido ntrico concentrado.

2.3.

Reaccin de Milln. Colocar 2 gotas de Reactivo de Milln y si no se observa cambio, calentar suavemente en un mechero.

3.

OBSERVACIONES:

Al realizar la primera reaccin (Reaccin de Biuret) con la Casena observamos que la muestra adopt un color violeta, con

lo que podemos decir que la reaccin dio positiva. Luego, a la segunda muestra de Casena le agregamos cido ntrico (Reaccin Xantoproteica) a la cual se le noto un cambio de color a amarillo, aqu tambin podemos decir que la reaccin dio positivo. Por ltimo, a la tercera muestra de Casena le realizamos la reaccin de Milln, la cual consiste en incorporar Reactivo de Milln a la muestra, en este caso a la Casena, y como observacin notamos que la muestra tomo un color rojo claro y como consecuencia dio positivo a la reaccin de Milln.