DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD HIPOGLUCEMIANTE DEL -NAFTOL TIUREA BENZALDEHDO EN RATAS WISTAR.

Mara Cecilia Euan Kantn, Rub Viridiana Garca Ruiz, Benita Dolores Koyoc Naal, Anglica I. vera Mndez. INTRODUCCIN La diabetes es una enfermedad en la que el organismo no produce insulina o no la utiliza adecuadamente. La insulina es una hormona necesaria para transformar el azcar, el almidn y otros alimentos en la energa que necesitamos para nuestra vida cotidiana. Aunque tanto los factores genticos como medioambientales, tales como la obesidad y la falta de ejercicio, parecen desempear roles importante, la causa de la diabetes contina siendo un misterio. (4) La diabetes mellitus ha aumentado 30 por ciento en Mxico en las ltimas dos dcadas a causa del notable incremento de obesidad y sobrepeso en la poblacin, segn datos de la Secretara de Salud (SSA). (5) La diabetes puede conducir a complicaciones graves y muerte prematura pero las personas con este padecimiento pueden tomar medidas para controlar la enfermedad y disminuir el riesgo de complicaciones (2) Hay varios tipos de diabetes: tipo 1, o la Diabetes Juvenil; diabetes gestacional ( se manifiesta en mujeres embarazadas); pre-diabetes (niveles de glucosa en la sangre mayores que los normales pero no lo suficientemente altos como para diagnosticar diabetes); tipo 2 (lo mas comn en adultos, y ahora est manifestando en los nios con problemas de obesidad). (2) Los pacientes con diabetes de tipo1 requieren tratamiento de mantenimiento crnico con insulina.(4); para el tratamiento de la diabetes tipo 2 se usan frmacos

como por ejemplos las biguanidas, sulfonilureas, inhibidor de la -glucosidasa. Etc.(13). Los hipoglucemiantes pueden tienen varios efectos adversos como son el aumento y perdida de peso, anorexia, diarrea, nausea, exantemas alrgicos. Debido ala gran prevalencia de las complicaciones de este padecimiento en muchos pacientes, se ha dado un gran inters en la nueva bsqueda de agentes hipoglucemicos orales, que tengan menores efectos adversos a menor precio.(13) En el presente trabajo evaluamos una nueva molcula -naftoltiureabensaldehido sintetizada por el Dr. Lauro Figueroa Valverde. OBJETIVO GENERAL: Determinar si existe un efecto hipoglucemiante del - naftol tiurea benzaldehdo en ratas diabticas inducidas con aluxan y con base a esto proponerlo o no como un frmaco eficaz y con menores efectos adversos.

OBJETIVOS PARTICULARES: Identificar si el frmaco de -naftol tiurea benzaldehdo tiene efecto teraputico como hipoglucemiante Conocer con base a los resultados el comportamiento de -naftol tiurea benzaldehdo utilizando los controles de metformina y glibenclamida. PROBLEMTICA: La diabetes mellitus ha aumentado 30 por ciento en Mxico en las ltimas dos dcadas a causa del notable incremento de obesidad y sobrepeso en la poblacin, segn datos de la Secretara de Salud.(14) La diabetes tipo 2 asociadas al exceso de grasa corporal. En un reciente informe de la OMS se destacan diversas cifras de prevalencia de diabetes tipo 2 en Amrica Latina y el Caribe. Los hipoglucemiantes orales son los utilizados para la diabetes tipo 2 que no consiguen descender la concentracin de azcar en sangre a travs de la dieta y la actividad fsica, pero no son eficaces en personas con diabetes tipo 1, entre las cuales estn la metformina y la glibenclamida que a pesar de ser buenos hipoglucemiantes.(4)

JUSTIFICACION: En el presente trabajo se evalo el efecto hipoglucemiante del -naftol tiurea benzaldehdo el cual fue elaborado por el Dr. Lauro Figueroa Valverde para poder conocer la eficacia de este nuevo frmaco comparado con los de la canasta bsica.

Marco terico. Diabetes mellitus La diabetes mellitus (DM) es un grupo de enfermedades metablicas caracterizadas por hiperglucemia, resultante de la alteracin de la secrecin de insulina, la accin de la insulina, o ambas. La hiperglucemia crnica de la DM se asocia con el dao a largo plazo, la disfuncin y la falla orgnica, especialmente ojos, riones, nervios, corazn y vasos sanguneos. Varios procesos patognicos estn involucrados en el desarrollo de la DM, desde la destruccin autoinmune de las clulas del pncreas con la consecuente deficiencia de insulina hasta las anomalas que provocan resistencia a la accin de la insulina. La base de las anomalas del metabolismo de los carbohidratos, las grasas y las protenas en la DM es la accin deficiente de la insulina sobre los tejidos diana. La deficiente accin de la insulina proviene de su secrecin inadecuada y/o la disminucin de la respuesta de los tejidos a la insulina en uno o ms puntos en la compleja va de la accin hormonal. El deterioro de la secrecin de insulina y los defectos de la accin insulnica suelen coexistir en el mismo paciente, y no est establecido cul de las anormalidades es la causa principal de la hiperglucemia, si es que actan por s solas. (2) La hiperglucemia marcada se manifiesta por poliuria, polidipsia, prdida de peso, a veces con polifagia y visin borrosa. La hiperglucemia crnica tambin puede acompaarse de alteracin del crecimiento y susceptibilidad a ciertas infecciones. Las consecuencias agudas de la DM no controlada que ponen en peligro la vida son la hiperglucemia con cetoacidosis o el sndrome hiperosmolar no cetsico.

Las complicaciones a largo plazo son la retinopata, la nefropata, el riesgo de neuropata perifrica, articulaciones de Charcot y neuropata autonmica gastrointestinales, genitourinarios y cardiovasculares,

causante de sntomas

adems de disfuncin sexual.(4)

Diabetes Mellitus tipo 1 Caracterizada por una destruccin de las clulas beta pancreticas, deficiencia absoluta de insulina, tendencia a la cetoacidosis y necesidad de tratamiento con insulina para vivir (insulinodependientes). Se distinguen dos sub-grupos: Diabetes autoinmune: con marcadores positivos en un 85-95% de los casos, anticuerpos anti islotes (ICAs), antiGADs (decarboxilasa del ac. Glutmico) y anti tirosina fosfatasas IA2 e IA2 . Esta forma tambin se asocia a genes HLA. Diabetes idioptica: Con igual comportamiento metablico, pero sin

asociacin con marcadores de autoinmunidad ni de HLA.(6)

Esta forma de diabetes, que representa solo el 5-10% de las personas con diabetes, previamente abarcaba los trminos diabetes insulinodependiente, diabetes tipo 1 o diabetes de comienzo juvenil, resulta de la destruccin autoinmune de las clulas del pncreas. (5) En esta forma de diabetes, la tasa de destruccin de las clulas es muy variable, siendo rpida en algunos individuos (principalmente los lactantes y los nios) y lenta en otros (principalmente los adultos). Algunos pacientes, especialmente los nios y los adolescentes, pueden presentar cetoacidosis como primera manifestacin de la enfermedad. Otros tienen hiperglucemia moderada en ayunas que puede virar con rapidez a la hiperglucemia grave y/o la cetoacidosis, en presencia de infeccin. Y otros, especialmente los adultos, pueden retener una funcin residual de las clulas suficiente, lo que permite prevenir la

cetoacidosis durante muchos aos; estas personas finalmente se convierten en insulinodependientes y estn en riesgo de cetoacidosis. En esta ltima etapa de la enfermedad, la secrecin de insulina es escasa o nula y se manifiesta por niveles bajos o indetectables del pptido C en el plasma. La diabetes mediada por

inmunidad suele ocurrir en la niez y la adolescencia pero puede ocurrir a cualquier edad, incluso en la octava o novena dcadas de la vida. (5)

Diabetes Mellitus tipo 2 Caracterizada por insulina-resistencia y deficiencia (no absoluta) de insulina. Es un grupo heterogneo de pacientes, la mayora obesos y/o con distribucin de grasa predominantemente abdominal, con fuerte predisposicin gentica no bien definida (multignica). Con niveles de insulina plasmtica normal o elevada, sin tendencia a la acidosis, responden a dieta e hipoglucemiantes orales, aunque muchos con el tiempo requieren de insulina para su control, pero ella no es indispensable para preservar la vida (insulina-requirentes).(1) Esta diabetes, que representa el 90-95% de las personas con diabetes, conocida como diabetes no insulinodependiente, diabetes tipo 2, o diabetes de comienzo en el adulto, incluye a las personas con resistencia a la insulina y generalmente tiene deficiencia relativa (no absoluta) de insulina. Al menos al comienzo, y con frecuencia durante toda su vida, estas personas no necesitan tratamiento con insulina para sobrevivir. (2) Probablemente hay muchas causas de este tipo de diabetes. Aunque la etiologa especfica no se conoce, no hay destruccin inmunolgica de las clulas y los pacientes no tienen ninguna de las otras causas de diabetes. La mayora de estos pacientes son obesos, y la obesidad por s misma causa cierto grado de resistencia a la insulina. Los pacientes que no son obesos segn los criterios tradicionales pueden tener un porcentaje mayor de grasa corporal distribuida principalmente en la regin abdominal. (9)

Rara vez ocurre cetoacidosis en forma espontnea sino que suele ir asociada al estrs de otra enfermedad como una infeccin. Durante muchos aos puede

quedar sin diagnstico porque la hiperglucemia se desarrolla gradualmente y en las primeras etapas muchas veces no es lo suficientemente grave como para que el paciente note cualquiera de los sntomas clsicos de la diabetes. Sin embargo, tienen mayor riesgo de desarrollar complicaciones macro y microvasculares. La secrecin de insulina es deficiente y no alcanza a compensar la resistencia a la insulina, la cual puede mejorar bajando de peso y/o haciendo el tratamiento farmacolgico de la hiperglucemia, pero rara vez se recupera la normalidad. El riesgo de desarrollar esta forma de diabetes aumenta con la edad, la obesidad y la falta de actividad fsica. Se presenta con mayor frecuencia en las mujeres con DMG previa y en los individuos con hipertensin o dislipemia; su frecuencia vara en diferentes subgrupos raciales y tnicos. A menudo se asocia con una fuerte predisposicin gentica, ms que la DM tipo 1 autoinmune. Sin embargo, su gentica es compleja y no est claramente definida.(2)

Diabetes gestacional: Se caracteriza por hiperglicemia, que aparece en el curso del embarazo. Se asocia a mayor riesgo en el embarazo y parto y de presentar diabetes clnica (60% despus de 15 aos). La diabetes, gestacional puede desaparecer al trmino del embarazo o persistir como intolerancia a la glucosa o diabetes clnica. (6) Intolerancia a la glucosa y glicemia de ayuna alterada: La Intolerancia a la glucosa se caracteriza por una respuesta anormal a una sobrecarga de glucosa suministrada por va oral. Este estado se asocia a mayor prevalencia de patologa cardiovascular y a riesgo de desarrollar diabetes clnica (5-15% por ao).(9)

Glicemia de ayuno alterada se caracteriza por el hallazgo de una glicemia de ayuno entre 100 y 125 mg/dl. Su identificacin sugiere el realizar una prueba de sobrecarga de glucosa oral, para la clasificacin definitiva. Farmacologa

La insulina y los hipoglucemiantes orales, son un grupo de drogas de utilidad en el tratamiento de la diabetes mellitus. El tratamiento de la diabetes es complejo e incluye medidas teraputicas, farmacolgicas y no farmacolgicas. La sntesis de la insulina, se lleva a cabo en los islotes de Langerhans, del pncreas. En el islote, se han distinguido, por lo menos cuatro tipos celulares: clulas alfa: secretoras del glucagon pancretico; clulas beta: productoras de insulina; clulas D: secretoras de la somatostatina pancretica, que inhibe a la hormona del crecimiento, la secrecin de insulina, glucagon, renina, gastrina, secretina, pepsina, y colecistoquinina. La somatostatina, tambin se produce en hipotlamo, cerebro, mdula, ganglios, y mucosa gastrointestinal. Clulas PP: secretoras del polipptido pancretico. (12)

La insulina se sintetiza en los ribosomas del retculo endoplsmico rugoso de las clulas beta de los islotes, como preproinsulina, que tiene 109 aminoacidos. Este precursor pierde enzimticamente algunos aminocidos, y se transforma en proinsulina de 83 aminocidos de cadena nica en espiral. La proinsulina, se transforma en insulina en el aparato de Golgi de las clulas beta, por un

proceso enzimtico,

178 dando lugar a la insulina y a un pptido conector o

pptido C, de 32 aminocidos, que se acumula en grnulos secretorios ligados al Golgi, en el citoplasma celular. Los grnulos que contienen cantidades equimoleculares de insulina y pptido C, son liberados por emiocitosis, con participacin del calcio como activador de los microtbulos y K, y Zn. La proinsulina posee una serie de acciones similares a la insulina. El pptido C, en

cambio carece de acciones, desconocindose su rol fisiolgico. Tanto la proinsulina (en pequeas cantidades), como el pptido C, circulan en el plasma sanguneo. La insulina circula en plasma formando dmeros o hexmeros, los que se separan en molculas individuales para activar el receptor. En general, todos los agentes que activan el AMPc intracelular, ya sea por activacin de la adenilciclasa, o por inhibicin de la fosfoditerasa (sulfonilureas, teofilina), estimulan la secrecin de insulina.(13) Existen diversos preparados de insulina los cuales varan de acuerdo con el inicio de accin, periodo necesario para el efecto mximo y duracin de la accin. De esta manera estos productos se clasifican en tres grupos: 1)insulina de corta y rpida accin. 2) insulina de accin intermedia. 3) insulina de accin prolongada.

Tipo/Duracin de Accin Accin rpida Regular

Nombre

Humulin R Regular llentin Novolin R Lispro Humalog Semilenta Semilente llentin Accin intermedia NPH llentin I Bovina/porcina 1 - 2 NPH Insulina NPH Bovina 1,5 Humulin N DNA 1-2 recombinante Lenta Novolin N Semisinttica 1,5 Lente llentin Bovina/porcina 1 - 3 I DNA 1-3 Humulin L recombinante NPH 70%/30% Novolin L Semisinttica 2,5

Inicio (Horas) DNA 0,5 recombinante 0,5 Bovina/porcina 0,5 - 1 Semisinttica Sinttica 0,25 Bovina/porcina 1 - 3

Fuente

Pico (Horas) 2-5 2-5 2-4 0,5 -1,5 2-8 6 - 12 4 - 12 6 - 12 4 - 12 6 - 12 6 - 12 7 - 15

Duracin (Horas) 8 8 5-7 2-5 12 - 16 18 - 24 24 18 - 24 24 18 - 24 18 - 24 22

Humulin 70/30 Accin prolongada Protamina, PZI (Zn zinc llentin I protamina) Ultralente Ultralenta llentin I Humulin U Glargina Optisulin

DNA recombinante Bovina/porcina Bovina/porcina Biosinttica

0,5 4-8 4-8 4-6

4-8 14 - 24 18 - 24 8 - 20

24 36 o ms 28 - 36 24 - 28

DNA recombinante

1-2

no tiene

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HIPOGLUCEMIANTES ORALES CARACTERISTICAS FARMACOLOGICAS. Los hipoglucemiantes orales abarcan cuatro familias de drogas bien definidas:

Sulfonilureas Biguanidas Inhibidores de las a - glucosidasas Tiazolidinedionas

Sulfonilureas: El mecanismo de accin de estas drogas comprende efectos pancreticos y extrapancreticos. Los primeros incluyen un aumento de la estimulacin a las clulas del pncreas para la liberacin de insulina, este efecto se produce por un bloqueo de la bomba K-ATPasa lo que se traduce en una despolarizacin prolongada de la membrana celular, con el consiguiente ingreso del Ca++ extracelular provocando la liberacin de la insulina de los grnulos secretorios hacia el torrente sanguneo. Al comienzo del tratamiento los niveles de insulina en sangre se elevan y la glucemia desciende, en tanto que con la administracin crnica de sulfonilureas, los valores de insulina disminuyen hasta cifras pre-tratamiento, y se conservan valores reducidos de glucosa en plasma, el mecanismo ntimo de este proceso se desconoce en la actualidad, pero se supone que se debe a un aumento de la sensibilidad de los tejidos diana a la accin de la insulina, debido a la normalizacin de la glucemia y al predominio de los efectos extrapancreticos Los efectos extrapancreticos comprenden fundamentalmente un aumento de

los receptores de insulina en monocitos, eritrocitos y adipocitos (Olefsky y Reaven, 1976); aumentan el efecto de la insulina y el nmero de transportadores para dicha hormona (Jacobs y col., 1989); producen inhibicin de la gluconeognesis heptica (Blumenthal, 1977) y aumento del consumo de glucosa a nivel perifrico. La va de administracin es la oral. La absorcin de todas, excepto glimepirida se altera con la presencia de alimentos en el tubo digestivo por lo cual se recomienda, para las de accin corta, la administracin de la droga 30 minutos antes de las comidas. Las sulfonilureas circulan unidas en forma variable (70-99 %) a protenas plasmticas, principalmente la albmina El metabolismo es fundamentalmente heptico, excepto la cloropropamida que s metaboliza escasamente (menos del 1%); la excrecin es fundamentalmente renal, excepto la gliquidona que se elimina por va biliar. Los efectos adversos de estos frmacos son poco frecuentes (menos del 4%) 2. De todos ellos el ms severo es la hipoglucemia (mortalidad 10%), que se presenta ms frecuentemente en los ancianos, pacientes con insuficiencia renal o heptica o en aquellos tratados con cloropropamida. Este efecto tambin puede ser desencadenado por falta de ingesta, sobredosis, historia de insuficiencia renal, o ejercicios intensos.6. 7 Las sulfonilureas pueden producir adems trastornos gastrointestinales (nauseas, vmitos, diarreas), reacciones hematolgicas (agranulocitosis, anemia aplstica, aplasia medular, anemia hemoltica y prpura trombocitopnica), trastornos hepticos, reacciones disulfirmicas (mas frecuentemente con cloropropamida), efectos teratognicos (por atravesar fcilmente la barrera placentaria), por ltimo, producen hiponatremia al potenciar los efectos de la hormona antidiurtica. La principal indicacin de la sulfonilureas la constituyen los pacientes diabticos no insulino-dependiente (DMNID) que no respondan al tratamiento diettico. Las contraindicaciones son diabetes insulino-dependiente, acidosis y/o coma diabtico, infecciones graves, ciruga mayor, adelgazamiento, diabetes secundaria a pancreatectoma, embarazo, lactancia, insuficiencia renal, insuficiencia heptica. Biguanidas Dentro de esta familia de frmacos, se encuentra la metformina. El mecanismo de accin fundamental es la inhibicin de la gluconeognesis heptica y el incremento de la gluclisis anaerbica, con la consiguiente elevacin de alanina,

10

glicerol y cido lctico. Otro mecanismo implicado es la disminucin de la absorcin intestinal de glucosa. La metformina se administra por va oral, se absorbe en el intestino delgado. Su V es de 1.3 - 4.5 horas. La droga no se une a las protenas plasmticas y se excreta sin cambios por la orina. Dentro de los efectos adversos los ms frecuentes son de tipo gastrointestinal (20 % de los pacientes), estos incluyen diarreas (30%)5, nauseas, vmitos, anorexia y sabor metlico. El efecto adverso de mayor riesgo es la acidosis lctica, que alcanza una mortalidad de hasta el 50 %3, con una incidencia menor al 0,1/1000 pacientes/ao. Las principales interacciones farmacolgicas se presentan con la cimetidina y con el alcohol. En el primer caso se produce una competencia con la excrecin renal, por lo que aumenta la concentracin de metformina y debe ajustarse la dosis. En el segundo caso se potencia el efecto hiperlactacidmico por lo cual debe evitarse la administracin conjunta. Su principal indicacin la constituyen los pacientes con DMNID y obesidad, que no responden a la dieta ni al ejercicio fsico. Se las puede utilizar sola o combinada con sulfonilureas o insulina. Las contraindicaciones son similares a las de las sulfonilureas, pero se agregan enfermedad cardiovascular grave, ulcera G-D, deficiencia de Vit.B 12, hierro y cido flico. Inhibidores de la a - glucosidasas: El mecanismo de accin fundamental es la inhibicin reversible y competitiva de las a - glucosidasas en el borde en cepillo de la mucosa intestinal, produciendo el retraso en la absorcin de los hidratos de carbono complejos, con la consiguiente reduccin del pico mximo de glucemia postprandial. Su utilizacin es ms eficaz cuando se realiza conjuntamente a una dieta rica en fibras y reducido en glucosa y sacarosa. Los efectos adversos ms frecuentes incluyen malabsorcin, flatulencia, meteorismo (21-32%), cuando se administra como monodroga no se presenta hipoglucemia. Constituyen contraindicaciones para su utilizacin las enfermedades intestinales crnicas, el embarazo, lactancia, cirrosis heptica, insuficiencia renal con niveles de creatinina superiores a 2 mg/dl.

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Su principal indicacin la constituyen pacientes con DMNID con valores de glucemia basales entre 140-180 mg/dl y glucemias postprandiales elevadas (entre 180-250 mg/dl), o aquellos casos en que exista contraindicacin para el uso de sulfonilureas o metformina.

NOMBRE DEL COMPUESTO SULFONILUREAS ACETOHEXAMIDA CLORPROPAMIDA TOLAZAMIDA TOLBUTAMIDA SEGUNDA GENERACION GLIBENCLAMIDA (GLIBURRIDA) GLICLACIDA GLIPENTIDA GLIPICIDA GLIQUIDONA TERCERA GENERACION GLIMEPIRIDA ANALOGOS DEMENGLITINIDAS REPAGLINIDA NATEGLINIDA BIGUANIDAS METFORMINA BUTFORMINA INHIBIDORES DE LAS ACARBOSA MIGLITOL GLITAZONAS ROSIGLITOZONA PIOGLITOZONA

DOSIS DE INICIO

DOSIS MAXIMA

DURACION DE EFECTO

125 125 50 500 2,5-5 40 2,5 -5 2,5-5 15-30 1

2.500 500 1.000 3.000 15 320 20 20 120 8

8-24 24-48 12-24 6-12 12-24 10-15 4-6 12-24 8-10 24

0,5-1 30-60 850 200 -GLUCOSIDASAS 25 25 4 15

12 180 2.550 400 300 300 8 45

2-4 2-4 12 12 4 4 24 24

TABLA 2.PERFIL DE ACCION DE LOS HIPOGLUCIMIANTES (GARCIA-BARRADO, et AL 2005)

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SULFORILUREAS ANALOGOS DE MEGLITINIDAS BIGUANIDAS 60-70 (3,3-3,9) 1,5-2 INHIBIDORES DE LAS 20-30 (1,1- 1,7) 0,7- 1 GLUCOSIDASAS GLITAZONAS 40-65 (2,2- 3,6) 1 -1,5 TABLA 3. EFICACIA TERAPEUTICA DE LOS HIPOGLUCEMIANTES ORALES.DATOS PROCEDENTES DE ENSAYOS CLINICOS (GARCIA-BARRADO, et AL 2005)

REDUCCION DE GLUCEMIA PLASMATICA BASAL mg/dl (MMOL/L) 60-70 (3,3-3,9) 56-62 (3,1-3,4)

REDUCCION DE HEMOGLOBINA GLUCOSILADA HbA1c(%) 1,5-2 1,7 1,9

La diabetes espontanea entre los animales es relativamente comn. El primer caso fue descrito en 1851 en un primate esta enfermedad se presenta en una gran variedad de especies, entre las que se encuentrn los perros, gatos , caballos, ganado, cerdos, ovejas, y en algunos especies. En general, los sndromes hiperglucemicos en roedores de laboratorio pueden ser subdivididos en tres grupos. En el primero, la obesidad predominante y la es la caracterstica

hiperglucemia severa no se presenta. En el segundo , la

obesidad y la hiperglucemia se encuentra frecuentemente asociados; sin embargo, no se onserva deficiencia de insulina, a pesar de la perdida de peso y la cetoacidosisi. El tercer4 grupo comprende a los animales en los que presenta la diabetes con una evidente deficiencia de insulina, aunque no padecen cetoacidosis. DIABETES INDUCIDA La induccin de la diabetes se ha logrado por medio de diversas tcnicas experimentales. En 1889, von Mering y Minkowski produjeron diabetes

experimental en perros mediante la remocin quirrgica del pncreas. Desde entonces, la pancreatectomia total se usa en muchas especies, con el propsito de crear modelos experimentales. En carnvoros como el perro y el gato se

13

presenta un sndrome diabtico clnicamente inestable. En omnvoros y herbvoros como conejos, cabras, cerdos, ovinos, monos, aves, y peces solo se presenta un estado diabtico caracterizado por glucosuria moderado y cetonuria variable.(3) INDUCCION QUIMICA El uso de agentes qumicos para producir diabetes, permite realizar estudios

detallados de los eventos bioqumicos y morfolgicos que ocurren durante y despus de la induccin de un estado diabetes. Existen varias clases de agentes qumicos. Los primeros son sustancias con citotoxicidad especfica que destruyen alas clulas del pncreas y causan un estado de deficiencia primaria de insulina. El segundo lo constituyen agentes que actan sobre las clulas pero no la destruyen. Una tercera clase incrementa los requerimientos endgenos de insulina, debilitan al pncreas y como consecuencia se produce la diabetes. Este ultimo grupo incluye a las hormonas antagonistas de la insulina, anticuerpos antiinsulina y algunos agentes quelatos, en particular del zinc.(8) Los agentes mas utilizados son la aloxana y el estreptozotocina. Estos compuestos en dosis diabeto gnicas actan especficamente sobre las clulas beta. Aloxana Aunque desde hace muchos aos se conoce la actividad diabetogenicos de esta sustancia, el mecanismo de accin es aun desconocido. Algunas evidencias indican que el efecto de la aloxana es mediado por una interaccin a nivel de la membrana en la clula . Otros estudios en los que se ha utilizado aloxana marcada con 14C revelan que hay una alta afinidad de la sustancia por la membrana celular, 10 cual puede explicar, en parte, la necrosis selectiva observada en las clulas del islote pancretico. (7) Se hace notar que ciertos azucares pueden proteger a un animal contra los efectos de la aloxana. La glucosa y en menor grado la fructosa y la manosa,

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cuando se administran antes de la aloxan, pueden prevenir o aminorar la subsecuente hiperglucemia. El efecto protector de estos carbohidratos se relaciona con propiedades estreo especficas, logrndose un mejor efecto con los anmeros .(7) Otros aspectos importantes en la ausencia de respuesta del cuye a la administracin de aloxana. Se ha encontrado que las clulas beta de este animal carecen de zinc; pueden ser que la interferencia con el metabolismo de este oligoelemento sea importante para el mecanismo de accin de la aloxana.(6) En ocasiones no se produce diabetes con la administracin de aloxana en animales que normalmente desarrollan esta respuesta, aun cuando esta se utilice en dosis recomendables, debido al uso de preparaciones envejecidas que se han mantenido almacenadas en periodos de cinco aos o mas. Tambin pueden ocasionar falla renal y muerte antes de que se presenten cambios en la glucemia. Esto se atribuye a contaminantes que resultan de su oxidacin. Estreptozotocina La estreptozotocina es una sustancia relativamente selectiva para las clulas beta, que en ciertas especies causan diabetes permanente. La fijacin a la membrana, a semejanza con la aloxana, es el primer evento en el proceso patolgico. Algunas evidencias indican que la toxicidad de la estreptozotocina esta mediada por el reconocimiento especifico de algunos receptores sobre la clula beta. Se cree que provoca un decremento en los niveles del dinucletido de nicotinamina y adenina (NAD), ya que puede disminuir tanto su sntesis como incrementar su hidrolisis. La nicotinamida protege a los animales contra la citotoxicidad tanto de estreptozotocina como de aloxana.(2) Empero, los efectos de esta ultima pueden ser prevenidos por algunos carbohidratos la 3-o-metilglucosa es la mas efectiva.

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A partir de esta informacin, se puede concluir que la diabetes espontanea es mas frecuente en los roedores (rata), por lo que se consideran modelos idneos para el estudio de la historia natural de la enfermedad. La aloxan y la estreptozotocina son los agentes diabetogenicos mas usados debido a su accin selectiva sobre las clulas del pncreas. La induccin diferentes especies; la rata, del sndrome diabtico varia entre las una respuesta mas uniforme,

muestra

preferentemente de este modelo experimental.(3)

METODOLOGIA Material:

Cnulas Jeringas de insulina Tiras reactivas para glucosa Glucmetro the one touch ultra Lancetas Basculas granataria Vaso precipit de 50 ml Balanza analtica Esptula agitador magntico

FARMACOS: Aloxan sdico Glibenclamida Metformina B-naftol-tiurea-benzadehido

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INDUCCIN DE DIABETES:

Antes de utilizar las ratas se indujo diabetes con el aloxan a 6 ratas adulta (hembra y machos),con un peso de 120 a 300 gr las que son criadas en el laboratorio de investigacin FQCI-LAB007 en la facultad de ciencias qumicas biolgicas de la universidad autnoma de Campeche. Para la induccin, se pesa cada rata para saber la dosis adecuadas del aloxan por va intraperitonial; el cual es 150 ml/k .al conocer estese realiza los clculos y se inyecta a cada rata.5 ml del aloxan a dosis adecuada.

DISEO EXPERIMENTAL La investigacin se llevo a cabo baja las normas de uso y manejo de animales de laboratorio, segn lo declarado por la norma oficial mexicana ( NOM-062-ZOO-1999)

El experimento se llevo acabo en dos partes una donde se administro dosis distintas a cada rata y es como sigue:

Numero de Dosis ratas

metformina

glibenclamida

b-naftoltuierabezaldehido

1 2 3 4 5

600ul/kg 300mg/kg 300ul/kg 300ul/kg 600ul/kg x

X X X

Para la segunda parte del experimento se dieron dosis iguales de b-naftoltiurea-benzaldehdo.

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PROCEDIMIENTO:

Transcurrido las 24 horas de la induccin de diabetes se checaron las ratas para ver si ya eran diabticas. 1-se pesaron las ratas. 2-se tomo la muestra de sangre mediante una puncin en la cola. 3-se midi los niveles de glucosa en el plasma con un glucmetro (the one touch ultra). 4-al saber que las ratas eran hiperglucemias se le administro por via oral el frmaco con jeringa de insulina 1 ml sin aguja. 5-al a ver transcurrido 24 hrs.se volvi a pesar, medir la glucosa y administrar el frmaco anotando los resultados. 6-en el transcurso de la investigacin se observo que hubieron cambios en las ratas: peso, sangrado de la nariz y signo de estrs. Al final del periodo las ratas siguen siendo observadas.

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Fig.1 administracin va peritoneal de aloxan

fig.2 toma de muestras por puncin en la cola

Fig.3 medicin de glucosa

fig.4 administracin del frmaco.

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PROYECTO

DOSIFICACION DE ALOXAN 150 ML/KG

ADMINISTRAIN DE ALOXAN
POR VIA INTRAPERITONIAL

RATAS SANAS Control negativo

PESADO

SI
DIABETICO

NO

PESADO

ADMINISTRACION NUEVO DE ALOXAN

ADMINISTRACION DEL FARMACO VIA ORAL

MEDICION DE GLUCOSA

Control positivo

B-NAFTOLBENZALDEHIDO

glibenclamida metformina

GLUCOSA ESTABLE

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Resultados. Datos. Experimento 1. Dosis 300microlitros Das 1 2 3 4 5 6 Rata 1 335 600 600 600 508 455 Rata 2 292 108 108 99 144 77

Dosis 600microlitros. Rata 7 Das glucosa 1 361 2 600 3 600 4 600 5 320 6 600

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700 600 500 Glucosa mg/dL 400 300 200 100 0 1 2 3 4 5 6 7 b-naftol tiurea benzaldehido 300 micro litros b-naftol tiurea benzaldehido 600 microlitros

tiempo (dias)

Grafica 1. En esta grafica se observa el efecto hipoglucemiante del -naftol tiurea benzaldehdo a diferente dosis. Como se observo el -naftol tiurea benzaldehdo tiene efectos a dosis mnimas ya que a dosis mayores no tiene efectos pues el frmaco descendi los niveles de glucosa de 527mg/dl a 266mg/dl en el caso del de menor dosis y el de mayor de 577mg/dl a 600mg/dl.

Experimento 2. Das 1 2 3 4 5 6 7 Glucosa(mg/dl) 544 329 436 436 339 417 377 Peso (gr) 145 146 185 160 163 170 170

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600

500

400 glucosa mg/dl

300

b-naftol tiureabenzaldehido

200

100

0 145 146 185 160 163 170 170

PESO gr

Grafica 2. En esta grafica se aprecia la relacin de los niveles de glucosa con el peso. Se puede observar que con este frmaco mientras los niveles de glucosa estn elevados el peso estar disminuido y mientras este disminuya este aumentara, por lo que es una relacin inversamente proporcional.

Das 1 2 3 4 5 6 7

-naftol tirea benzaldehdo 251 214 139 139 234 206 307

Metformina 450 380 367 234 270 224 202

Glibenclamida 490 310 268 198 198 198 198

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600

500

400 Glucosa mg/dL -naftol tirea benzaldehido 300 metformina glibenclamida 200

100

0 1 2 3 4 5 6 7

TIEMPO (dias)

Grafica 3. En esta grafica se compara el efecto hipoglucemiante de la Glibenclamida y la Metformina con el -naftol tiurea benzaldehdo. Como se puede observar el efecto de este nuevo frmaco es similar a la Metformina porque muestra un descenso de los niveles de glucosa de manera lenta no rpida como la Metformina por lo que podemos decir que esta al igual que la Metformina puede servir para el tratamiento de la diabetes tipo 2.

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Discusin. La induccin de la diabetes fue con una inyeccin intraperitoneal de aloxan ya que esta es directa y efectiva para las clulas del pncreas respetando las clulas alfa y delta, adems se ha observado que los animales con este tipo de diabetes, han tenido complicaciones similares a las que se producen en la diabetes humana. Los resultados mostraron que los niveles de glucosa disminuan en ratas diabticas por la administracin del frmaco -naftol tiurea benzaldehdo dependiente de la dosis esto se corrobora porque con una dosis menor se observa una disminucin lenta de los niveles de glucosa compara con dosis mayores que no presentan efectos hipoglucemiantes, adems este frmaco aumenta el peso conforme se desciende los niveles de glucosa. Los efectos del -naftol tiurea benzaldehdo es similar a los resultados presentados por la Metformina ya que los niveles de glucosa en este frmaco disminuyen lentamente como en este frmaco.

Conclusin. Con base a los resultados obtenidos se determino que el -naftol tiurea benzaldehdo tiene efecto hipoglucemico en las ratas diabticas trabajadas, que comparado con los frmacos de la canasta bsica se observo efecto similar, con base a la disminucin de glucosa, a la Metformina Este efecto fue retardo por lo que su tratamiento para su uso ser largo y a dosis empleadas sern bajas.

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