DESCRIPCIN BIOQUMICA DE LAS PROTENAS: reacciones de color para aminocidos, destinado a la identificacin de sus propiedades moleculares.

Junior lvarez Ortega1, Enrique Dvila Ochoa1, y Elkin Monterrosa Berrio1

RESUMEN Los aminocidos forman la estructura primaria de las protenas, y existen diferentes mtodos o pruebas, que mediante serie de reacciones especficas, propias de cada reaccin, permitan identificar aminocidos con propiedades diferentes. Los aminocidos se clasifican, esencialmente, segn la estructura de su cadena lateral, es decir, la estructura de la cadena lateral va a determinar qu tipo de aminocido es, y las propiedades qumicas que posee. En las pruebas se utilizaron diferentes reactivos que intervinieron en cada una de las reacciones de diferentes pruebas de identificacin. La prueba xantoproteica identifica aminocidos con grupos bencnicos en su cadena lateral, como la tirosina o el triptfano, que generan tincin amarilla al reaccionar con el cido ntrico o anaranjada al reaccionar con un lcali durante la neutralizacin, este ltimo confirma la prueba. La prueba de Ehrlich identifica a los aminocidos con grupos aromticos que reaccionaron con el cido Sulfanlico y nitrito de Sodio. La prueba de Hopkins- cole identifica protenas que contenga
triptfano en su estructura, es decir, la prueba identifica el triptfano es por eso que solo se experiment con el triptfano y no con otros aminocidos. La prueba de azufre reducido busca identificar a sustancias con azufre en su estructura, que mediante diferentes pasos permite separar el azufre y formar una sal. La prueba de Sakaguchi identifica el grupo guanido o guanodino, el cual se encuentra en la arginina, por ende es una prueba para identificar arginina en una sustancia.

Palabras Claves: Reactivo, solucin, soluto, aminocidos, protenas, hidrxido de sodio, cido ntrico hidrxido de amonio, cido clorhdrico, formaldehido, cido sulfrico.

Estudiantes de medicina, III semestre, participantes del Experimento Bioqumica # 1

INTRODUCCION

Un aminocido es una molcula orgnica con un grupo amino (-NH2) y un grupo carboxilo (COOH). Los aminocidos ms frecuentes y de mayor inters son aquellos que forman parte de las protenas. Dos aminocidos se combinan en una reaccin de condensacin entre el grupo amino de uno y el carboxilo del otro, liberndose una molcula de agua y formando un enlace amida que se denomina enlace peptdico; estos dos "residuos" de aminocido forman un dipptido. Si se une un tercer aminocido se forma un tripptido y as, sucesivamente, hasta formar un polipptido. Esta reaccin tiene lugar de manera natural dentro de las clulas, en los ribosomas. Todos los aminocidos componentes de las protenas son L-alfa-aminocidos. Esto significa que el grupo amino est unido al carbono contiguo al grupo carboxilo (carbono alfa) o, dicho de otro modo, que tanto el carboxilo como el amino estn unidos al mismo carbono; adems, a este carbono alfa se unen un hidrgeno y una cadena (habitualmente denominada cadena lateral o radical R) de estructura variable, que determina la identidad y las propiedades de cada uno de los diferentes aminocidos. Existen cientos de radicales por lo que se conocen cientos de aminocidos diferentes, pero slo 20 (actualmente se consideran 22, los ltimos fueron descubiertos en el ao 2002) forman parte de las protenas y tienen codones especficos en el cdigo gentico. Existen muchas formas de clasificar los aminocidos; las dos que se presentan a continuacin son las ms comunes.

Segn las propiedades de su cadena: Neutros polares, polares o hidrfilos: serina (Ser, S), treonina (Thr, T), cistena (Cys, C), glutamina (Gln, Q), asparagina (Asn, N), tirosina (Tyr, Y) y glicina (Gly, G). Neutros no polares, apolares o hidrfobos: alanina (Ala, A), valina (Val, V), leucina (Leu, L), isoleucina (Ile, I), metionina (Met, M), prolina (Pro, P), fenilalanina (Phe, F) y triptfano (Trp, W). Con carga negativa, o cidos: cido asprtico (Asp, D) y cido glutmico (Glu, E). Con carga positiva, o bsicos: lisina (Lys, K), arginina (Arg, R) e histidina (His, H). Aromticos: fenilalanina (Phe, F), tirosina (Tyr, Y) y triptfano (Trp, W) (ya incluidos en los grupos neutros polares y neutros no polares). Las propiedades de estos aminocidos determinan muchas de sus propiedades y reacciones frente a otros compuestos y biomoleculas, tal es el caso de los aminocidos aromticos, los cuales por ejemplo al reaccionar con cido ntrico se crean nitroderivados que cambian el color del aminocido permitiendo detectar la presencia de grupos aromticos en los mismos, est entre otras reacciones pueden llevarse a cabo para deteccin de grupos funcionales, o especficos en los aminocidos, principalmente aquellos que afectan sus propiedades qumicas y se ubican en sus cadenas laterales.

MATERIALES Y METODOS

Materiales y reactivos Instrumentos

Tubos de ensayo Gradilla Beakers Mechero Soporte Universal Aro Metlico Rejilla de asbesto Pinzas Hielo Llama

una de sus pruebas, con el uso de reacciones de identificacin cromtica, es decir, el uso de colorantes determinados por reactivos, que resalte por medio de colores las propiedades de las protenas, y ms especficamente de los aminocidos. Se realizaron cinco tipos de prueba para determinar las propiedades qumicas, de cinco aminocidos. Estas fueron las siguientes: 1. Prueba xantoproteica: es un mtodo que se utiliza para determinar protenas solubles en una solucin, empleando cido ntrico concentrado que da origen a compuestos nitroderivados de color amarillo o anaranjado2. Esta prueba va a determinar cul o cules de los aminocidos (presentes en protenas) utilizados, poseen propiedades qumicas aromticas, es decir, cuales poseen un grupo aromtico en su estructura; y luego se neutraliza con un lcali. Para este experimento se agregaron 2ml de solucin de aminocidos (entre ellas Tirosina, Histidina y Triptfano3) en un tubo de ensayo y se procedi a agregar 1ml de cido ntrico (HNO3), luego se calent lentamente en bao de mara 4 . Y posteriormente la solucin, se retir del calor y se aadieron 8 gotas de Hidrxido de Amonio (NH4OH), un lcali.

Reactivos Aminocidos: o Histidina (al 2%) o Tirosina (al 2%) o Triptfano (al 2%) o Cistena (al 2%) o Arginina (al 2%) Reactivos y soluciones o cido ntrico (HNO3) o Hidrxido de Amonio (NH4OH) o cido Sulfanlico 0.5% (C6H7NO3S) en cido Clorhdrico (HCl) (al 2%) o Agua (H2O) o cido Sulfrico (H2SO4) o Hidrxido de Sodio (NaOH 6N) o Acetato de Plomo (CH3COOPb) o Hipoclorito de Sodio (NaClO) o Naftol o Nitrito de sodio (NaNO2)

Mtodo y diseo del experimento

El experimento tuvo como mtodo la determinacin de tipo cualitativa, en cada

Por lo cual esta reaccin permite reconocer la presencia de Tirosina, Fenilalanina y Triptfano 3 En tubos de ensayo separados, es decir, cada solucin de aminocidos en su respectivo recipiente. 4 Se us para su calentamiento un trpode, un mechero de bunsen, un beaker de 800ml y 600ml de agua

2. Prueba de Ehrlich: de composicin (pdimetilaminobenzaldehdo al 10% en HCl concentrado.) que reacciona con un buen nmero de compuestos orgnicos tales como indoles, aminas aromticas y compuestos ureicos para dar complejos coloreados. Para este experimento agregaron 2ml de solucin de aminocido (Histidina o Tirosina) y agregar 1ml de cido Sulfanlico 0.5% en HCl 2%, luego colocar en bao de hielo por un tiempo de 3 minutos y luego adicionar 1ml de NaNO2 0.5% y 2 ml de NH4OH. 3. Prueba de Hopkins-Cole: La reaccin de Hopkins cole se usa principalmente para identificar en una sustancia o una protena la presencia de un aminocido especfico, el triptfano. Para este experimento agregaron 2ml de solucin de aminocido (Histidina o Tirosina) y agregar 1ml de nitrito de sodio y luego se le agregan ocho gotas de cido sulfanilico

4. Prueba de Azufre reducido: Para este experimento agregaron 2ml de solucin de aminocido (Cistena) y agregar 2 ml de NaOH 6N y 1 ml CH3COOPb, colocar en un bao de hielo durante 5 minutos y por ultimo aadir ocho gotas de hipoclorito de sodio. 5. Prueba de Sakaguchi: Es una reaccin de los compuestos que contengan grupo guanido o guanodino. De ah que se d una indicacin de la presencia de arginina libre de protenas que contengan arginina. La prueba consiste en tratar la muestra con alfa-naftol e hipoclorito de sodio, con lo cual se desarrollara un color rojo intenso. El desarrollo del color se altera o se previene por completo por la presencia de amino, histidina o triptfano. La arginina libre de la prueba positiva. Para este experimento agregaron 2ml de solucin de aminocido (Arginina) y agregar 0.5ml de NaOH6 N y 1 ml de naftol, colocar en un bao de hielo durante 5 minutos y por ultimo aadir ocho gotas de hipoclorito de sodio.

RESULTADOS

PRUEBA XANTOPROTEICA

Sustancia: Histidina 2% La histidina es un aminocido transparente al cual se le agreg cido ntrico, ni en el momento de la aplicacin, ni tiempo despus mostro cambio apreciable en su color, al momento de mezclar los componentes las solucin libera calor, por lo tanto es una reaccin exotrmica. Cabe resaltar que apreciando detenidamente la solucin se observaron dos fases una densa de lquido claro y otra sobrenadante de lquido turbio y aceitoso ambas de color transparente. Al cabo de la aplicacin de calor, la solucin continu con ese mismo estado, no hubo cambio de calor ni mucho menos despus de agregarles las 8 gotas de hidrxido de amonio Color inicial: Transparente Color final: Transparente Observacin: No hubo cambio

le adicion el cido ntrico; con la diferencia de que al momento de mezclarse las sustancias, se gener un color ocre dorado, y cre una reaccin exotrmica. Luego con la adicin de calor la solucin cambio de color a un naranja claro, y tras el aadido de hidrxido de amonio reaccion creando una nube espesa sobre la solucin y en su color no hubo ningn cambio. Color inicial: Blanco o semitransparente Color final: Naranja claro Observacin: Hubo cambio de color

Fig. 2 Sustancia: Tirosina 2% La tirosina es un aminocido liquido con partculas slidas que forma cristales y que generalmente presenta un color blanquecino5, se clasifica como un aminocido no esencial en los mamferos ya que su sntesis se produce a partir de la hidroxilacin de otro aminocido: la fenilalanina. Se considera un aminocido polar y protonable. 6 En la reaccin con el cido ntrico la solucin cambi a un color amarrillo parecido al aceite de oliva, y tras el calentamiento el color de la sustancia cambio a un verde limn y
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Fig. 1 Sustancia: Triptfano 2% El triptfano es un aminocido de color blancuzco con grumos blancos, se clasifica entre los aminocidos apolares, tambin llamados hidrfobos. Y al igual que el anterior proceso, se

Aunque tambin puede ser incoloro Aunque normalmente se clasifica como aminocido hidrofbico a causa de su anillo aromtico.

luego de que se terminara el ltimo pas de la prueba, el cual era agregar el NH4OH, la solucin cambio de color nuevamente a un miel claro. Color inicial: Blanco Color final: Miel claro Observacin: Hubieron diversos cambios de color (De amarillo a verde y de este ltimo, a color miel)

PRUEBA DE HOPKINS-COLE

Sustancia: Triptfano 2% Al agregarle a la solucin, el agua destilada ms las gotas de formaldehido se cre un granulo sobrenadante blanco sobre una solucin rojiza, que tena un degradado que se aclaraba hacia el final del tubo de ensayo y luego con el posterior bao de mara, cambio el color de toda la solucin a un color canela oscuro. Conservando su degradante cromtico ms oscuro en el fondo Color inicial: Transparente con grumos blancos Color final: Canela oscuro Observacin: El fondo del tubo de ensayo aun despus del calentamiento permaneci con una coloracin oscura al igual que el sobrenadante

Fig. 3

PRUEBA DE EHRLICH

La prueba de Ehrlich se encarga de identificar la presencia de anillos aromticos fenlicos o nitrogenados en la cadena lateral de los aminocidos se puede identificar mediante la reaccin con cido Sulfanlico y nitrito de Sodio. Sustancia: Histidina y Tirosina 2% En el proceso que se llev a cabo la reaccin de la histidina y la tirosina genero cambios de color, desde el inicial que es el que posee la histidina que es transparente, hasta el color ferroso (gris) que era el color final, de igual manera ocurri con la tirosina exceptuando el hecho de que el color inicial de esta ltima es semitransparente con grumos blancuzcos

Fig. 4

PRUEBA DE AZUFRE REDUCIDO

PRUEBA DE SAKAGUCHI

Sustancia n: Cistena 2% La cistena es un aminocido de color blanco hueso, al agregarle el Hidrxido de sodio ese color pasa a ser transparente, luego al agregarle el acetato de plomo se genera una solucin espesa sobrenadante parecida a la espuma. Color inicial: Blanco Color final: Transparente en la porcin ms densa de la solucin y sustancia espumosa Observacin: Hubieron diversos cambios de color (De blanco a transparente y de este ltimo, a una mezcla heterognea entre una sustancia blanca y transparente)

Sustancia: Arginina 2% A la arginina que es de color transparente se le aadi, hidrxido de sodio que es una sustancia tambin transparente, luego a esta mezcla se le enfra por cinco minutos y se le agrega el alfanaftol que es una solucin rosa ms ocho gotas de hipoclorito de sodio. En la reaccin se crearon dos fases una de color naranja rojizo que se encontr en el sobrenadante y una solucin ms densa de color transparente

ANALISIS DE RESULTADO 1 PRUEBA XANTOPROTEICA

nitrocompuestos de color amarillo, que luego de aadirse un lcali (Base) se torna aun color ms anaranjado. Sustancia: Tirosina 2% Al igual que el triptfano la tirosina es un aminocido aromtico cuya frmula es la siguiente:

En la prueba xantoproteica el cambio de color en ciertos aminocidos es debido a la formacin de un compuesto aromtico nitrado de color amarillo, cuando las protenas son tratadas con cido ntrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas protenas con aminocidos portadores de grupos bencnicos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un lcali vira a un color anaranjado oscuro. Sustancia: Histidina 2% En la histidina no hay cambio de color puesto que este aminocido, no posee en su estructura un grupo benceno, lo que no le brinda a este la propiedad aromtica. En la reaccin del grupo fenilo del aminocido demarca por accin del cido ntrico coloreando la solucin de un amarillo parecido al color miel Sustancia: Triptfano 2% El triptfano es un aminocido cuya frmula es la siguiente:

Aqu se observa que la tirosina posee un grupo fenlico este le da la propiedad de aromtico. Por eso al agregarle el cido ntrico reacciona formando un color ms anaranjado que el formado antes en el triptfano.

PRUEBA DE EHRLICH

Cuando se formacin de sales de Diazonio fuertemente coloreadas permitiendo as detectar la presencia de Tirosina e Histidina libres o formando pptido y protenas En el experimento se observ que la solucin se colore de gris debido a la presencia de grupos fenlicos que reaccin con el reactivo y forman el color gris

La estructura de este aminocido contiene un grupo indol7, este grupo lo hace un aminocido aromtico por lo tanto la reaccin debe dar positiva para esta sustancia. Gracias a la nitracin del anillo bencnico presente en este tipo de aminocidos se obtienen
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PRUEBA DE HOPKINS-COLE

Sustancia: Triptfano 2% En la prueba de Hopkins-Cole, el color es debido a la presencia del grupo triptfano, aunque el

El indol es un compuesto orgnico heterocclico, que consiste en un benceno unido a un pirrol

triptfano puro no da la prueba excepto en presencia de trazas de iones frricos o cpricos. En cualquier protena que contenga aminocidos de triptfano, la prueba de Hopkins cole, dar positiva, o inclusive en el aminocido libre existe el cambio de color que es siempre caractersticos por su gradiente rojo - oscuro

NaOH, el cual permite la separacin del azufre de la estructura del aminocido. Al aadir una sal soluble en agua, como lo fue el acetato de plomo, el azufre se combina con el plomo para producir un precipitado de color negro que corresponde a sulfuro de plomo. De todo esto podemos decir que esta reaccin es solo para aquellas sustancias o aminocidos que contengan azufre en su estructura.

PRUEBA DE AZUFRE REDUCIDO

PRUEBA DE SAKAGUCHI

Sustancia: Cistena 2%

Sustancia: Arginina 2% La prueba es positiva para la arginina porque esta presenta a el grupo guanidinio presente en la cadena lateral de la arginina esta cadena reacciona con el alfa - naftol y pierde el grupo imino por oxidacin. La arginina oxidada reaccion con otra molcula de alfa-naftol cuando se le adiciona un compuesto alcalino formando un complejo coloreado rojo.

Para la cistena este tipo de prueba es positiva debido a que estos aminocidos poseen azufre en su estructura. La reaccin se lleva a cabo en un medio alcalino, es decir en presencia de

CONCLUSIN Los aminocidos se pueden clasificar segn la estructura de su cadena lateral, lo que les confieres propiedades que los caracterizan. Existen pruebas que permiten identificar a los aminocidos, como la prueba xantoproteica, la prueba de Ehrlich o la prueba de Hopkins-cole. Cada prueba identifica ciertas propiedades de los aminocidos, lo cual permite clasificarlos. En la prueba xantoproteica se busca identificar los aminocidos que en su estructura presentan grupos aromticos, que al reaccionar con el cido ntrico forman compuestos nitroderivados y as dar positiva la prueba. El triptfano y la tirosina dan positiva esta prueba (tienen grupos aromticos en su estructura), mientras que la histidina da negativa a la prueba. La prueba de Ehrlich identifica a la histidina y a la tirosina, ya que estos aminocidos presentan en su estructura un grupo fenol. La prueba de Hopkins-cole identifica sustancias que presenten en su estructura el aminocido triptfano. La prueba de azufre reducido identifica a loa aminocidos que en su estructura llevan azufre, que en medio alcalino, permite separar el azufre y as identificarlo mediante la reaccin con una sal. La arginina est compuesta por el grupo guanidinio, el cual es
identificado en la prueba. Generalmente la prueba se utiliza para identificar protenas en distintas sustancias, ya que la arginina est presente en la estructura de la mayora de las protenas.

Estas pruebas se utilizaron con una variedad de reactivos e instrumentos, esto debido a la diferente naturaleza de diferentes aminocidos.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Franco, A. G. (2006). Experimentos de Qumica Orgnica. Graff, L. (2007). Anlisis de orina: atlas color. Mexico: Editorial medica Panamerica.
Lol

Kathy. (2011). Laboratorio Kathy. Obtenido de http://kathy-bioquimicaguialaboratorios09.bligoo.es/experiencia-3pruebas-cualitativas-para-aminoacidosy-proteinas#.UUJ71hzNmwg