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MTODOS DE ESTERILIZACIN Los microbios se eliminan, inhiben o matan por medio de agentes fsicos o agentes qumicos, otros incluyen

los agentes mecnicos. Los mtodos de esterilizacin comprenden entonces, todos los procedimientos fsicos, mecnicos y qumicos que se emplean para destruir grmenes patgenos. Los mas utilizados en la actualidad son los mtodos fsicos (calor, radiaciones, filtracin, centrifugacin) y los mtodos qumicos (agente qumico)
EBULLICIN TYNDALIZACION PASTEURIZACIN VAPOR A PRESIN (AUTOCLAVE) FLAMEADO INCINERACIN HORNO PASTEUR (AIRE CALIENTE) RADIACIONES IONIZANTES RAYOS GAMMA RAYOS X RAYOS ULTRAVIOLETA

CALOR HMEDO

CALOR SECO FSICOS

RADIACIONES MTODOS DE ESTERILIZACIN MECNICOS

FILTRACIN SEDIMENTACIN OXIDO DE ETILENO OTROS

QUMICOS

GASES

1.- MTODOS FSICOS. 1.1.- Calor Hmedo. La utilizacin del calor y su eficacia depende de dos factores: el tiempo de exposicin y la temperatura. Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la accin del calor. El calor provoca desnaturalizacin de protenas, fusin y desorganizacin de las membranas y/o procesos oxidantes irreversibles en los microorganismos. El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas. Estos efectos se deben principalmente a dos razones: 1) El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras biolgicas son producidas por reacciones que eliminan agua y 2) El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho ms elevado que el aire. Ventajas del calor hmedo: -Rpido calentamiento y penetracin -Destruccin de bacterias y esporas en corto tiempo -No deja residuos txicos -Hay un bajo deterioro del material expuesto -Econmico

Desventajas: -No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua -Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos Procedimientos: a) Ebullicin: Se requiere un recipiente con agua. Es la aplicacin del calor mediante la ebullicin del agua a presin atmosfrica (100 oC). Mediante este mtodo se esterilizan inyectadoras, agujas e instrumentos de ciruga menor. No es confiable en su totalidad este mtodo por cuanto quedan las esporas b) Tyndalizacin: Esterilizacin por accin discontinua del vapor de agua a una temperatura de 100 oC en varias sesiones. Se basa en el principio de Tyndal. Las bacterias que resisten una sesin de calefaccin, hecha en determinadas condiciones, pueden ser destruidas cuando la misma operacin se repite con intervalos separados y en varias sesiones. Se efecta por medio del autoclave de Chamberland, dejando abierta la vlvula de escape, o sea funcionando a la presin normal. Puede tambin realizarse a temperaturas ms bajas, 56 u 80 ocupara evitar la descomposicin de las sustancias a esterilizar, por las temperaturas elevadas. c) Pasteurizacin: Es la aplicacin de una temperatura inferior a 110 oC durante 30 minutos. La aplicacin del calor va seguida de un rpido enfriamiento. Se usa para prevenir las infecciones de origen lcteo y retasar la descomposicin de la leche, ya que las bacterias de la leche no forman esporas (bacilo tuberculoso, salmonella, estreptococo y brucela) d) Vapor a presin (autoclave): Se realiza la esterilizacin por el vapor de agua a presin. El modelo ms usado es el de Chamberland. Esteriliza a 120 a una atmsfera de presin (estas condiciones pueden variar) y se deja el material durante 20 a 30 minutos. El vapor a presin proporciona temperaturas altas con penetracin y humedad en abundancia que facilitan la coagulacin de las protenas. Equipo: Consta de una caldera de cobre, sostenida por una camisa externa metlica, que en la parte inferior recibe calor por combustin de gas o por una resistencia elctrica, esta se cierra en la parte superior por una tapa de bronce. Esta tapa posee tres orificios, uno para el manmetro, otro para el escape de vapor en forma de robinete y el tercero, para una vlvula de seguridad que funciona por contrapeso o a resorte. Funcionamiento: Se coloca agua en la caldera, procurando que su nivel no alcance a los objetos que se disponen sobre una rejilla de metal. Se cierra asegurando la tapa, sin ajustar los bulones y se da calor, dejando abierta la vlvula de escape hasta que todo el aire se desaloje y comience la salida de vapor en forma de chorro continuo y abundante. 1.2.- Calor Seco. El calor seco produce desecacin de la clula, es esto txicos por niveles elevados de electrolitos, fusin de membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que estn en contacto con stos. La accin destructiva del calor sobre protenas y lpidos requiere mayor temperatura cuando el material est seco o la actividad de agua del medio es baja. Ventajas del calor seco: -No es corrosivo para metales e instrumentos. -Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no voltiles.

Desventajas: -Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a la baja penetracin del calor. Entre los mtodos que utilizan el calor seco como medio de esterilizacin se destacan: a). Flameado: Consiste en la exposicin directa del instrumento a una flama en forma directa por poco tiempo con el mechero de Bunsen. b). Incineracin: Consiste en someter el material contaminado a altas temperaturas en hornos especiales para reducirlo prcticamente a cenizas. Su fin es evitar el vertido de material de alto riesgo en la basura. c). Estufa (Horno Pasteur de aire caliente) Por medio de las estufas de doble cmara, el aire caliente generado por una resistencia, circula por la cavidad principal y por el espacio entre ambas cmaras, a temperatura de 170 C para el instrumental metlico y a 140 C para el contenido de los tambores. Se mantiene una temperatura estable mediante termostatos de metal, que al dilatarse por el calor, cortan el circuito elctrico. 1.3.- Radiaciones. La accin de las radiaciones del tipo de radiacin y el tiempo de exposicin. a). Radiaciones ionizantes: Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos nucleicos, estructuras proteicas y lipdicas, y componentes esenciales para la viabilidad de los microorganismos, dando lugar a mutaciones en los microorganismos que los incapacitan metablicamente para producir una enzima esencial y sobreviniendo la muerte bacteriana. Las radiaciones tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales termolbiles (termosensibles) como jeringas descartables, sondas, etc. Se utilizan a escala industrial por sus costos. b). Rayos Gamma: Su empleo esta basado en los conocimientos sobre la energa atmica. Este tipo de esterilizacin se aplica a productos o materiales termolbiles y de gran importancia en el campo industrial. Puede esterilizar antibiticos, vacunas, alimentos, etc. c). Rayos X: Penetran bien, pero requieren mucha energa, son pocos operativos para su empleo masivo, su uso es muy costoso, por lo tanto son muy poco usados con fines de esterilizacin d). Rayos Ultravioletas: Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos. El ADN absorbe una longitud de onda de 2600 y libera energa ocasionado rearreglo de enlaces qumicos son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies, se utilizan para la esterilizacin en quirfanos. 1.4.- Mecnicos. a). Filtracin: En la filtracin se usan membranas filtrantes con poros de un tamao determinado. El tamao del poro depender del uso al que se va a someter la muestra. Los filtros que se utilizan pueden no retener virus o micoplasmas, estos ltimos estn en el lmite de separacin segn el dimetro de poro que se utilice. La filtracin se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones termolbiles. Su usa para esterilizar aceites, algunos tipos de pomadas, soluciones oftlmicas, soluciones intravenosas, drogas diagnsticas, radiofrmacos, medios para cultivos celulares, y soluciones de antibiticos y vitaminas. Este mtodo es til para identificar microorganismos en muestras de agua potable y otras sustancias. Tambin l aire puede ser sometido a una limpieza

exhaustiva provocando su paso a travs de materiales capaces de retener los microorganismos y partculas en suspensin Tipos de filtros: 1.- Filtros profundos o Filtros de profundidad: Consisten de un material fibroso o granular prensado, plegado, activado, o pegado dentro de los canales de flujo. En este tipo de filtros la retencin de las partculas se produce por una combinacin de absorcin y de retencin mecnica en la matriz. 2.- Membranas filtrantes: Tienen una estructura continua, y la retencin se debe principalmente al tamao de la partcula. Partculas ms pequeas al tamao del poro quedan retenidas en la matriza del filtro debido a efectos electrostticos. 3.- Filtros de huella de nucleacin (Nucleoporo): Son pelculas muy delgadas de policarbonato que son perforadas por un tratamiento conjunto con radiacin y sustancias qumicas. Son filtros con orificios muy regulares que atraviesan la membrana verticalmente. Funcionan como tamices, evitando el paso de toda partcula con un tamao mayor al del poro. b). Sedimentacin: Es un mtodo por el cual los microorganismos son eliminados de depsitos hdricos. Se fundamenta e el hecho de que la densidad de muchas bacterias es algo mayor de 1.0; en consecuencia, se depositan en el fondo del recipiente que las contiene quedando el lquido sobrenadamente no estril del todo, pero su poblacin microbiana disminuye notablemente. En el laboratorio la sedimentacin se acelera por centrifugacin. Es utilizado este mtodo para identificar microorganismos en muestras de agua potable y otras sustancias. 2.- MTODOS QUMICOS. Estos mtodos provocan la perdida de viabilidad de los microorganismos. a). Oxido de etileno: Es un agente alquilante que se une a compuestos con hidrgenos lbiles como los que tienen grupos carboxilos, amino, sulfhidrilos, hidroxilos, etc. Es utilizado en la esterilizacin gaseosa, generalmente en la industria farmacutica. Destruye todos los microorganismos incluso virus; es un agente microbiano de amplio espectro, destruye la bacteria en estado vegetativo, incluyendo al bacilo de la tuberculosis, las esporas y los virus. Sirve para esterilizar material termosensibles como el descartable (goma, plstico, papel, etc.), equipos electrnicos, bombas cardiorrespiratorias, metal, etc. Es muy peligroso por ser altamente inflamable y explosivo, y adems cancerigeno. -Otros: b). Aldehdos: Son agentes alquilantes que actan sobre las protenas, provocando una modificacin irreversible en enzimas e inhiben la actividad enzimtica. Estos compuestos destruyen las esporas. c). Glutaraldehdo: Consiste en preparar una solucin alcalina al 2% y sumergir el material a esterilizar de 20 a 30 minutos, y luego un enjuague de 10 minutos. Este mtodo tiene la ventaja de ser rpido y ser el nico esterilizante efectivo fro. Puede esterilizar plstico, goma, vidrio, metal, etc. d) Formaldehdo: Se utilizan las pastillas de paraformaldehido, las cuales pueden disponerse en el fondo de una caja envueltas en gasa o algodn, que despus pueden ser expuesta al calor para una rpida esterilizacin (accin del

gas formaldehdo). Tambin pueden ser usadas en Estufas de Formol, que son cajas de doble fondo, en donde se colocan las pastillas y se calienta hasta los 60 C y pueden esterilizar materiales de ltex, goma, plsticos, etc. Las pastillas de formalina a temperatura ambiente esterilizan en 36 hs. e). Esterilizacin por gas-plasma de Perxido de Hidrgeno: Es proceso de esterilizacin a baja temperatura la cual consta en la transmisin de perxido de hidrgeno en fase plasma (estado entre lquido y gas), que ejerce la accin biocida. Posee como ventajas: No deja ningn residuo txico. Se convierte en agua y oxgeno al final del proceso. El material no precisa aireacin. El ciclo de esterilizacin dura entre 54 y 75 minutos. Desventajas: No se pueden esterilizar objetos que contengan celulosa, algodn, lquidos, humedad, madera o instrumental con lmenes largos y estrechos. Es el mtodo de esterilizacin ms caro de entre los descritos. 3. AGENTES QUMICOS ESTERILIZANTES los agentes qumicos esterilizantes que destruyen patgenos suelen denominarse desinfectantes, los cuales en su gran mayora son txicos para el ser humano; sin embargo, son tiles para destruir microorganismos en el medio humano o animal. Los agentes desinfectantes que pueden aplicarse tpicamente en la superficie corporal se les designa con el nombre de antisptico. Alcoholes Iodo Antispticos Agentes catinicos, aninicos y anfteros rgano Mercuriales Colorantes Cloro y Compuestos clorados Desinfectantes y/o sterilizantes Aldehdos Oxido de Etileno Compuestos Fenlicos

Acidos y Alcalis

4. FACTORES QUE AFECTAN A LOS DESINFECTANTES. Los factores que se estudian influyen en la capacidad de los desinfectantes qumicos para actuar sobre os microorganismos, as como la duracin de esta accin.
CONCENTRACIN TIEMPO TEMPERATURA PH ESTADO DE VIDA Y CLASE DE MICRO ORGANISMO Existen en los microorganismos algunas variaciones en la susceptibilidad, se clasifican en los tres grupos: GRUPO A: Formas vegetativas y virus con cubierta que se destruyen fcilmente con los productos. GRUPO B: Los ms difciles de destruir, GRUPO C: Esporas bacterianas y virus resistentes, entre ellos los que causan la hepatitis. DETERIORO DEL DESINFECTANTE Siempre deben reemplazarse depuse del segundo dia ya que se deterioran progresivamente

Varia de un microorganismo a otro y de un desinfectante a otro; uno demasiado concentrado puede originar la coagulacin en la superficie de las materias orgnicas e impide la penetracin del producto en el interior de la bacteria y puede ser irritante, corrosivo y costoso. Por el contrario, un producto es menos activo cuanto ms diluido est. Es imprescindible emplear las concentraciones recomendadas.

La desinfeccin es un proceso gradual que requiere tiempo para consolidarse, el desinfectante ha de permanecer en contacto con el material contaminado el tiempo suficiente para que sea efectivo.

A altas temperaturas se incrementa la accin bacteriana. La mayora se llevan a temperatura ambiente.

En la interaccin de los desinfectantes con los microorganismos es importante la acidez y la alcalinidad del medio, y pueden aumentar o disminuir su accin. Para cada producto debe considerarse por separado la accin del pH

ACCESIBILIDAD DE LAS BACTERIAS Para que el producto sea efectivo debe alcanzar la clula bacteriana; de no hacerlo su utilizacin es intil. Mecanismo de Accin: 1.- Absorcin superficial por coloides proteicos Unin del producto a grupos activos de las protenas extraas2.-

NUMERO DE BACTERIAS A ELIMINAR A mayor numero se debe incrementar el tiempo de exposicin

PRESENCIA DE SUSTANCIAS EXTRAAS La tierra, sangre y pus pueden reaccionar con algunos desinfectantes y disminuir su capacidad para interactuar con los microorganismos. Debe limpiarse bien el rea que se ha de desinfectar

EXPOSICIN ADECUADA Se debe asegurar que todas las reas a desinfectar tengan una exposicin adecuada al producto (envases cerrados)

5.- PRINCIPALES GRUPOS DE DESINFECTANTES QUMICOS FENOL Y SUS DERIVADOS El fenol es un producto tambin llamado cido carblico, es completamente toxico para los tejidos, es corrosivo y de olor desagradable. En soluciones diluidas es eficaz en la piel y no daa los tejidos si su exposicin es menor a una hora CRESOLES Se obtienen de la destilacin del carbn. Se pueden mezclar con jabones sin perder su efectividad germicida HEXACLOROFENO Es eficaz contra estafilococos y estreptococos, se puede mezclar con jabones, no es irritante para la piel y deja una pelcula protectora en la piel despus de su aplicacin. Es bactericida a altas concentraciones y bacteriosttico a bajas concentraciones. Estos productos se emplean ampliamente en hospitales y clnicas. Por los posibles daos al cerebro (absorcin y paso al torrente sanguneo) su uso se ha restringido un poco.

SOLVENTES ORGNICOS Incluye el tolueno y los alcoholes. Su accin es alterar la estructura y funcin de las membranas plasmticas y desnaturalizar protenas. El cloroformo y el tolueno son empleados como aditivos en soluciones que se desean mantener libres de

METALES PESADOS Causan dao a os microorganismos, ya que actan desnaturalizndolos al combinarse con las protenas celulares. Los mas efectivos son el mercurio (mercuriocromo y mertiolate), plata (nitrito de plata) y cobre (sales)

DETERGENTES Los jabones reducen la tensin superficial en incrementan el poder humectante del agua, el agua jabonosa tiene la propiedad de emulsionar y dispensar aceites y polvo, los microorganismos son atrapados por el jabn y arrastrados por el

COLORANTES Son empleados para la tincin de bacterias o indicadores, por su actividad bacteriosttica y bactericida tienen aplicabilidad en medicina. Hay dos clases de compuestos colorantes que tienen especial inters como agentes antimicrobianos y son

grmenes. Los alcoholes corresponden a los desinfectantes y antispticos, son eficaces contra clulas bacterianas vegetativas, pero no son eficaces contra las esporas. Tienen los alcoholes accin limpiadora al remover los lpidos acumulados

HALGENOS: el cloro y el yodo se emplean como antispticos y desinfectantes el cloro es germicida inespecfico potente, de accin rpida, el Yodo tiene propiedades esporicidas, fungidas y antivirales importantes, se presume que involucra la halogenizacin de las unidades de tirosina de las enzimas y otras protenas para su actividad por una parte, y liberando oxgeno por otra produciendo la oxidacin de los constituyentes celulares de los microorganismos.

agua

los colorantes del trifenilmetano y algunos derivados de la acridina. En el laboratorio, os colorantes se emplean para la identificacin de bacterias. En el campo de la medicina se les usa en el tratamiento de las quemaduras y heridas, en aplicaciones oftlmicas, as como en irrigaciones de la vejiga

6.- EVALUACIN DE LOS DESINFECTANTES Y ANTISPTICOS: El mtodo oficial para evaluar un desinfectante es el mtodo de coeficiente de fenol. Este mtodo compara la eficacia de los desinfectantes a probar contra la del fenol para cepas bacterianas de Salmonella Typhi, Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa. Las condiciones de esterilizacin de este mtodo son descritas en el procedimiento oficial y deben ser obedecidas para obtener resultados vlidos. 7.- PRECAUCIONES CON LOS DESINFECTANTES Todas las soluciones deben ser preparadas por personal especializado y en un ambiente adecuado. Las soluciones de desinfectantes deben ser estriles y manipularse aspticamente. Los frascos deben ser de vidrio con tapn antirreflujo. Debidamente esterilizado antes de introducir la solucin. Los tapones de corcho no deben utilizarse, pues son permeables a los grmenes. Todos los frascos debern ser debidamente identificados en su superficie.

8.- MTODOS DE ESTERILIZACIN UTILIZADOS EN EL HOSPITAL UNIVERSITARIO DE CARACAS. Los mtodos de esterilizacin utilizados en el rea hospitalaria tendrn como fin eliminar o inhibir los microorganismos patgenos, van a comprender estos mtodos todos los procedimientos fsicos qumicos. 8.1.- MTODOS FSICOS. 8.1.1 Calor Hmedo. La utilizacin del calor hmedo, sobre todo el mtodo de la Ebullicin (recipiente con agua a presin atmosfrica de 100 oC) y la Tyndalizacin (esterilizacin por accin discontinua del vapor de agua a una temperatura de 100 oC en varias sesiones) dej de utilizarse desde hace mucho tiempo en el rea hospitalaria, sobre todo por los nuevos avances en tcnicas de esterilizacin y desinfeccin. Del mtodo del calor hmedo solo se utiliza en el rea hospitalaria el vapor a presin a travs del autoclave (esterilizacin por el vapor de agua a presin que esteriliza a 120 a una atmsfera de presin dejando el material durante 20 a 30 minutos). Se utiliza por ser un mtodo rpido y efectivo ya que el vapor a presin proporciona temperaturas altas con penetracin y humedad en abundancia que facilitan la coagulacin de las protenas de los microorganismos. 8.1.2.- Calor Seco. El calor seco tambin es de poco uso en el rea hospitalaria, sobre todo por el hecho de que requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo y debido a la baja penetracin del calor.

Entre los mtodos que utilizan el calor seco como medio de esterilizacin el flameado an se utilizan en el Hospital Universitario, sobre todo en los laboratorios y en las tomas de muestra para hemocultivos (flameado de la punta de la inyectadora antes de vaciar el contenido en el medio de cultivo). Durante un tiempo de utiliz para flamear las agujas en la aplicacin de vacunas, debido al auge de las inyectadoras desechables sta practica se elimin.

8.1.3.- Radiaciones. Las radiaciones en el rea hospitalaria son utilizadas, pero no con fines de esterilizacin 8.1.4.- Mecnicos. El mtodo de la filtracin solo es utilizado en el rea de laboratorios de microbiologa del hospital. La sedimentacin tambin es utilizada en el rea de laboratorio, sobre todo por medio de la centrifugacin. 8.2.- MTODOS QUMICOS. En el Hospital Universitario se utilizan los gases para esterilizar, en especfico el Oxido de etileno, que como se dijo antes, es un agente alquilante. Se utiliza por su efectividad ya que destruye todos los microorganismos, por ser un agente microbiano de amplio espectro, destruye la bacteria en estado vegetativo, incluyendo las esporas y los virus. Se utiliza para esterilizar material termosensibles como el descartable (goma, plstico, papel, etc.), equipos electrnicos, bombas cardiorrespiratorias, metal, etc. del rea quirrgica del Hospital. Su uso est restringido al rea de quirfanos por su peligrosidad (es inflamable, explosivo, cancerigeno y corrosivo. El oxido de etileno provoca la perdida de viabilidad de los microorganismos. 8.3. AGENTES QUMICOS ESTERILIZANTES En el rea hospitalaria del Clnico Universitario se utilizan desinfectantes (cloro, detergentes, jabones) y antispticos (alcohol, yodo, gerdex, povidine), con el fin de destruir agentes patgenos. Los alcoholes corresponden a los desinfectantes y antispticos, son eficaces contra clulas bacterianas vegetativas, pero no son eficaces contra las esporas. Tienen los alcoholes accin limpiadora al remover los lpidos acumulados. El povidine es una mezcla de jabn y yodo, es eficaz como antisptico. El cloro y el yodo se emplean como antispticos y desinfectantes el cloro es germicida inespecfico potente, de accin rpida, el Yodo tiene propiedades esporicidas, fungidas y antivirales importantes, se presume que involucra la halogenizacin de las unidades de tirosina de las enzimas y otras protenas para su actividad por una parte. Los jabones reducen la tensin superficial en incrementan el poder humectante del agua, el agua jabonosa tiene la propiedad de emulsionar y dispensar aceites y polvo, los microorganismos son atrapados por el jabn y arrastrados por el agua

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