INTRODUCCIN La fosforilacin oxidativa se refiere a la sntesis qumica de ATP impulsada por el proceso exergnico de transferencia de electrones desde el NADH

al O 2 Es una serie de reducciones y oxidaciones cuyo resultado neto es la reoxidacin del NADH a NAD+ y la reduccin del oxgeno a agua. Este proceso es catalizado por la cadena respiratoria, y es aqu donde la energa de oxidacin de sustratos es utilizada para la sntesis de ATP La mayor parte del ATP sintetizado por los organismos aerbicos es consecuencia de la fosforilacin oxidativa, que ocurre en la mitocondria. La fosforilacin oxidativa comienza con la entrada de e- en la cadena respiratoria. COMPARTAMENTALIZACIN Par poder entender las oxidaciones biolgicas, necesitamos conocer dos cosas fundamentales, la qumica de las reacciones de oxidacion-reduccion, as como la biologa celular de la mitocondria. Debido a que es en esta donde se llevan a cabo las reacciones que se han estado mencionando. La mitocondria esta formada por cuatro subregiones diferentes: la membrana externa, la membrana interna, el espacio intermembrana y la matriz localizada dentro de la membrana interna. Esta est muy plegada, formando as crestas que se proyectan hacia el interior de la mitocondria. Es en las mitocondrias donde se encuentran las enzimas de la cadena respiratoria, las del ciclo del acido ctrico y las de la oxidacin de los cidos grasos. La fosforilacion oxidativa tiene lugar en la membrana interna mitocondrial

Las protenas respiratorias estn unidas a la membrana interna, la densidad de las crestas esta relacionada con la actividad respiratoria de la clula. Estos procesos generan transportadores electrnicos reducidos,

fundamentalmente NADH. Que se reoxida, con la produccin simultanea de ATP, por enzimas de la cadena respiratoria. Unidas a la membrana interna podemos encontrar las protenas transportadoras, principalmente citocromos, que forman la cadena respiratoria. Se ensamblan en cinco complejos multiproteicos, denominados I, II, III, IV. El complejo I y el II reciben electrones de la oxidacin de NADH y lo pasan a un transportador electrnico lipdico, la coenzima Q. el complejo III oxida la forma reducida de la coenzima Q y reduce, al mismo tiempo, al citocromo c. el complejo IV acopla la oxidacin del citocromo c con la reduccin del O2 a agua. IMPORTANCIA Es el proceso metablico final (catabolismo) de la respiracin celular, tras la gluclisis y el ciclo del cido ctrico. En los organismos aerbicos la fosforilacin oxidativa es la principal fuente de ATP, generando de 26 a 30 molculas de este, que se forman cuando la glucosa se oxida completamente a CO2 H2O.

CMO SE LLEVA A CABO? El orden en el flujo de los electrones en la cadena respiratoria depende del potencial xido-reductor de cada uno de los sistemas, pues siempre fluirn los electrones hacia el compuesto con mayor potencial redox.

Los componentes de la ETC en los organismos eucariotas se encuentran en la membrana mitocondrial interna, los cuales se encuentran organizados en 4 complejos. El complejo I (Deshidrogenasa de NADH): Cataliza la transferencia de electrones de NADH a la UQ. El NADH proviene del ciclo de Krebs y de la oxidacin de cidos grasos. Este complejo contiene FMN y 7 ncleos hierro- azufre (Intermediarios), la funcin de este complejo consiste en que el NADH reduce el FMN a FMNH2, se transfieren los electrones de uno en uno del FMNH2 al ncleo hierro-azufre, como consecuencia del transporte de electrones de un ncleo a otro los electrones se ceden a la UQ. El complejo II (Deshidrogenasa de succinato): Se compone de la enzima deshidrogenasa de succinato y de 2 Ferredoxinas, este complejo es un mediador de electrones del succinato a la UQ. El sitio de oxidacin del succinato se encuentra en la ferredoxina ms grande, la cual contiene un

FAD unido de manera covalente, la enzima deshidrogenasa de Acetil CoA transfiere los electrones de la matriz de la membrana a la UQ. El complejo III (Complejo de citocromo bc1): Contiene un ncleo hierroazufre y tres subunidades de citocromos (Cyt bL, Cyt bH y Cyt c1), la funcin de este complejo consiste en transferir electrones de UQH 2 al Cyt c, este es un transportador mvil que se encuentra unido a la cara externa de la membrana mitocondrial interna, a esto se le denomina ciclo Q, donde cada NADH2 dona 2 electrones de uno en uno al Cyt c, el primero se transfiere de UQH2 a Fe-S (Ferredoxina) y de esta se transfiere al Cyt c1 y de este al Cyt c, el segundo electrn se transporta de UQH2 al Cyt bL y de este a Cyt bH y luego es donado a la semiquinona UQ, en resumen por cada par de electrones que se transportan en el complejo III se reducen 2 molculas de Cyt c, se liberan 4 protones a la membrana interna y se regenera una molcula de UQH2 a partir de una UQ- . El complejo IV (Oxidasa de Cyt): cataliza la reduccin de 4 electrones de O2 a H2O. Este contiene los Cyt a y a3 y 3 iones de Cu. Dos de estos iones de Cu forman CuA/ CuA, el hem a3 y CuB forman otro ncleo Fe-Cu. Cada centro recibe electrones uno a la vez, lo cual sucede as: Los electrones pasan del Cyt c al centro Cu-Cu y de este al Cyt a y posteriormente de este al centro Fe-Cu y por ltimo a O2. 4 electrones y 4 protones son expulsados a la matriz y se forman 2 molculas de agua: O2 + 4H + 4e2H2O

*Se sintetizan aproximadamente 2.5 molculas de ATP por cada par de electrones que se transfieren entre NADH y O2 y de la transferencia de cada par donado por el FADH2 que se produce en la oxidacin del succinato resultan alrededor de 1.5 molculas de ATP.

CMO SE LLEVA A CABO? Los protones se impulsan desde la matriz mitocondrial hacia el espacio intermembrana gracias al mecanismo de transporte de electrones. La energa resultante de este proceso se utiliza para crear un potencial elctrico y un gradiente de protones, debido a que la membrana interna es impermeable a los protones, estos solo pueden pasar a travs de ella mediante conductos especficos. El flujo de protones a travs de la sintasa de ATP produce la sntesis de ATP.

SNTESIS DE ATP
Requiere 4 protones

3 de ellos se utilizan para sintetizar ATP

1 se utiliza para transportar el ATP desde el espacio intermembrana hacia la matriz mitocondrial a travs de la membrana interna

*La sintasa de ATP tiene tres sitios catalticos en las subunidades b, estos sitios son O (abierto e inactivo), T (apretado y activo), L (laxo e inactivo), el proceso de formacin es el siguiente: ADP + Pi se unen a un sitio L

Producen un cambio conformacional de L a T impulsado por la rotacin del eje central dentro del hexmero (120)

Se sintetiza ATP

Cuando este eje sigue girando se transforma en un sitio O que es el encargado de liberar el ATP

*El ATP solo se libera cuando se encuentra unido ADP + Pi en la unidad adyacente en la conformacin T.

NADH- ubiquinona oxidorreductasa (complejo I) Esta enzima cataliza la oxidacin del NADH, que pierde dos electrones, y la subsiguiente reduccin de la coenzima Q10 o ubiquinona (representada como Q, abajo en la ecuacin), una quinona liposoluble presente en la membrana mitocondrial:

El inicio de la reaccin, y de la totalidad de la cadena de transporte de electrones, comienza por la unin de la molcula de NADH al complejo I y la donacin de dos electrones. Los electrones ingresan al complejo I a travs de un grupo prosttico unido al complejo, flavn mononucletido (FMN). El agregado de electrones al FMN lo convierte en su forma reducida, FMNH2. Los electrones son luego transferidos a travs de una serie de centros hierro-azufre: el segundo tipo de grupo prosttico presente en el complejo. Existen tanto centros [2Fe2S] como [4Fe4S] en el complejo I.

Succinato-Q oxidorreductasa (complejo II) La enzima succinato-Q oxidorreductasa, tambin conocida como complejo II o sucinato deshidrogenasa, es el segundo punto de entrada en la cadena de transporte de electrones. Es inusual debido a que esta enzima es la nica que forma parte de los procesos del ciclo de Krebs y de la cadena de transporte de electrones. El complejo II consiste en cuatro subunidades de protenas y contiene unida como cofactor la Dinucletido de Flavina (FAD), centros hierro-azufre, y un grupo hem que no participa en la transferencia de electrones hacia la coenzima Q, pero que se cree es importante en disminuir la produccin de especies reactivas del oxgeno. Oxida el succinato a fumarato y reduce la ubiquinona. Debido a que esta reaccin libera menos energa que la oxidacin de NADH, el complejo II no

transporta electrones a travs de la membrana y no contribuye al gradiente de protones.

Flavoprotena de transporte de electrones Q oxidorreductasa La Flavoprotena de transporte de electrones ubiquinona oxidorreductasa (oxidorreductasa ETF-Q), tambin conocida como Flavoprotena de transporte de electrones deshidrogenasa, es el tercer punto de entrada a la cadena de transporte de electrones. Es una enzima que acepta electrones de la Flavoprotena de transferencia de electrones en la matriz mitocondrial, y utiliza estos electrones para reducir ubiquinona. Esta enzima contiene una flavina y un centro [4Fe4S], pero, a diferencia de otros complejos respiratorios, se une a la superficie de la membrana y no atraviesa la bicapa lipdica.

En mamferos, esta ruta metablica es importante en la beta oxidacin de cidos grasos y el catabolismo de aminocidos y colinas, al aceptar electrones de mltiples acetil-CoA deshidrogenasas. En plantas, la oxidorreductasa ETF-Q tambin es importante en la respuesta que permite la supervivencia por extensos periodos de oscuridad.

Q-citocromo c oxidorreductasa (complejo III) La Q-citocromo c oxidorreductasa tambin conocida como citocromo c reductasa, complejo del citocromo bc1, o simplemente complejo III. En mamferos, esta enzima es un dmero, con cada subunidad del complejo conteniendo once subunidades de protenas, un centro hierro-azufre [2Fe-2S] y tres citocromos: un

citocromo c1 y dos citocromos b. Un citocromo es un tipo de protena de transferencia de electrones que contiene la menos un grupo hem. Los tomos de hierro dentro del grupo hem del complejo III alternan entre sus estados de oxidacin reducido (+2) y oxidado (+3) mientras los electrones son transferidos a travs de la protena. La reaccin catalizada por el complejo III es la oxidacin de una molcula de ubiquinol y la reduccin de dos molculas de citocromo c, una protena hem libremente asociada con la mitocondria. A diferencia de la coenzima Q, que transporta dos electrones, el citocromo c transporta solo uno.

Citocromo c oxidasa (complejo IV) La citocromo c oxidasa, tambin conocida como complejo IV, es el complejo final de protenas en la cadena de transporte de electrones. En mamferos esta enzima posee una estructura extremadamente compleja y contiene trece subunidades, dos grupos hem, as como mltiples iones metlicos como cofactores en todas, tres tomos de cobre, uno de magnesio y uno de zinc. Esta enzima media la reaccin final en la cadena de transporte de electrones y los transfiere al oxgeno, mientras bombea protones a travs de la membrana. El aceptor de electrones final es el oxgeno, llamado tambin aceptor terminal de electrones, el cual es reducido a agua en este paso. Tanto el bombeo directo de protones y la consumicin de protones de la matriz en la reduccin de oxgeno contribuyen al gradiente de protones. La reaccin catalizada es la oxidacin de citocromo c y la reduccin de oxgeno:

Hasta antes de ingresar a la "cadena respiratoria" tenamos un total de 4 ATPs, 10 NADHs y 2 FADHs. Si tomamos en cuenta que cada NADH equivale a 3 ATPs y cada FADH equivale a 2 ATPs, tendramos la siguiente sumatoria: 4 ATPs (de la gluclisis y formacin de Acetil CoA) + 30 ATPs (provenientes de los NADHs) + 4 ATPs (provenientes de los FADHs). Con un total de 38 ATPs como producto del metabolismo energtico de una molcula de glucosa.

Inhibidores de la Fosforilacin Oxidativa

Nombre

Funcin inhibidor del transporte de e inhibidor del transporte de e inhibidor del transporte de e inhibidor del transporte de e de inhibidor del transporte de e inhibidor del transporte de e

Sitio de Accin

Rotenona

Complejo I

Amital

Complejo I

Antimicina A

Complejo III

Cianuro

Complejo IV

Monxido Carbono

Complejo IV

Azida

Complejo IV

2,4,-dinitrofenol

Agente desacoplante

Transportador transmembrana de H+ Transportador transmembrana de H+ Fraccin OSCP de la sintasa de ATP

Pentaclorofenol

Agente desacoplante

Oligomicina

Inhibe la sintasa de ATP

CORRELACIN CLNICA El dficit de Citocromo C Oxidasa o Dficit de COX puede ser localizado, esto es limitarse slo al tejido de los msculos esquelticos o puede ser sistmico o generalizado afectando a diferentes rganos, como corazn, rin, hgado, cerebro y tejido conectivo. El dficit de Citocromo C Oxidasa pertenece a las llamadas enfermedades mitocondriales que son un conjunto de enfermedades cuya etiopatogenia se basa en las anomalas del metabolismo oxidativo mitocondrial. La mitocondria es el nico organelo celular que posee un DNA circular propio, capaz de ser codificado y claramente distinto del cdigo gentico nuclear. No existen mecanismos de reparacin ni cdigo degenerado para el DNA mitocondrial y adems su ndice de mutacin es mucho mayor. El vulo materno es el que aporta casi la totalidad de las mitocondrias al embrin, por lo que estas enfermedades, que afectan por igual a los dos sexos, son de herencia materna. La cadena respiratoria es un conjunto de vas metablicas cuyo punto final es la obtencin de energa, en forma de ATP. Est compuesta por cuatro unidades o complejos funcionales, situados en la membrana interna de la mitocondria; de los cuales el complejo IV, es el llamado citocromo C-oxidasa o COX. Como en todas las enfermedades mitocondriales existe una gran variabilidad de cuadros clnicos, que dependen de la edad de inicio de los sntomas, de la distribucin del defecto en los diferentes tejidos, del grado de afectacin de los mismos y del tiempo de evolucin de la enfermedad. El dficit de Citocromo C Oxidasa, presenta durante el periodo neonatal cuatro cuadros clnicos preponderantes: 1.- Hipotona neonatal. 2.- Deterioro neurolgico.

3.- Miocardiopata y diabetes prenatal. 4.- Afectacin pluritisular con acidosis lctica.

Radicales libres, superxido, catalasa, dismutasas tomos o grupos de tomos que tienen un electrn desapareado, estos recorren nuestro organismo con la finalidad de robar un electrn de las molculas estables para alcanzar as su estabilidad electroqumica, este necesita aparearse, y lo hace con la molcula a la que le ha quitado el electrn, iniciando as una reaccin en cadena que destruye nuestras clulas. COMPARTAMENTALIZACION En humanos existen tres formas de superxido dismutasa. SOD1 se encuentra en el citoplasma, SOD2 en las mitocondrias y SOD3 en el lquido extracelular. La primera es un dmero (consiste en dos subunidades), mientras que las otras son tetrmeros (cuatro subunidades). SOD1 y SOD3 contienen cobre y zinc, mientras que SOD2 tiene manganeso en su centro reactivo. Los genes se encuentran localizados en los cromosomas 21, 6 y 4, respectivamente La SOD protege a la clula de las reacciones dainas del superxido. El anin radical de superxido (O2-) espontneamente dismuta a O2 y perxido de hidrgeno (H2O2) de forma bastante rpida (~105 M-1 s-1 a pH 7). SOD es biolgicamente necesaria porque el superxido reacciona an ms rpido con algunos blancos como el radical de NO, que forma peroxinitrito. Durante el metabolismo aerobio normal se liberan radicales libres. Los sistemas defensivos del organismo incluyen enzimas antioxidantes como la superoxidodismutasa, catalasa y glutation-peroxidasa, que mantienen el equilibrio de la produccin de radicales libres. La porcin principal del cobre en el eritrocito (por lo menos un 80%) se encuentra como constituyente de la enzima superoxidodismutasa (eritrocuprena). Esta

enzima,

tambin

detectada

en

el

hgado

(hepatocuprena)

cerebro

(cerebrocuprena), tiene el papel especfico de proteccin de las clulas, por eliminacin cataltica del in superxido (O2-). El resto del cobre del eritrocito es dializable y se encuentra formando complejos con aminocidos, que mantienen la actividad dismutasa.

SISTEMAS ENZIMTICOS ANTIOXIDANTES CMO SE LLEVA A CABO? Para protegerse del estrs oxidativo, los seres vivos han elaborado varios mecanismos de defensa antioxidante. Estos mecanismos emplean diversas metaloenzimas y molculas antioxidantes. DISMUTASA Las dismutasas de superxido (SOD) son una clase de enzimas que catalizan la formacin de H2O2 y de O2 a partir del radical superxido: 2O2 + 2H+ enzima CATALASA La catalasa es una enzima cuya funcin principal es catalizar la conversin de H2O2 en agua y dioxgeno. (Por cada 2 molculas de H2O2 que se degradan, una se oxida para formar O2 y la otra se reduce a H2O). La catalasa contiene un grupo prosttico hem-Fe (III) con el siguiente mecanismo: Paso 1: H2O2 + Fe (III) Paso 2: H2O2 + O=Fe (IV) enzima enzima H2O + O=Fe (IV) O2 + H2O + Fe (III) enzima enzima H2O2 + O2

BIBLIOGRAFA Stumpfobruening. Doi Bioquimica Fundamental Conn. Ed. Limusa Wiley 4 ed. Mexico D.F. 2001 Jose Laguna y Enrique Pia, Bioquimica, Ed. Manuel Moderno 6 ed., 2007, MEXICO, D.F. Trudy Mackee y Jame R. Mackee, Bioquimica, las bases moleculares de la vida, Ed. Mc graw Hill, 4ed., Mexico, D.F. Hicks J, J. 2001. Bioquimica. 1Edicin. Editorial McGraw-Hill- Interamericana. Mxico D.F