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Ingeniera en Industrias Alimentarias

Cultivando la ciencia para cosechar el futuro

Profesionista con valor


INSTITUTO TECNOLGICO SUPERIOR DE CIUDAD SERDN CARRERA: INGENIERA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

MICROBIOLOGIA REPORTE PRACTICA 1 EMPACADO DE MATERIAL Y ESTERILIZACION POR CALOR DOCENTE: MTRA. MARIA DEL ROSARIO BERNABE SALAS

ALUMNAS: MARIEL RENDON JIMENEZ 11CS0 MARIA ALEJANDRA RAMIREZ ANDRADE 11CS0 JENNIFER GISELLE DE DIEGO ROMERO 11CS0049

CUARTO SEMESTRE
CIUDAD SERDN, PUE.

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Prctica 1 EMPACADO DE MATERIAL Y ESTERILIZACIN POR CALOR INTRODUCCION
La esterilizacin es el proceso de eliminacin de toda forma de vida, incluidas las esporas. La esterilizacin es un trmino absoluto que implica prdida de la viabilidad o eliminacin de todos los microorganismos contenidos en un objeto o sustancia, acondicionando de tal modo que impida su posterior contaminacin. Existen diferentes mtodos de esterilizacin, estos pueden ser mtodos qumicos, mecnicos o fsicos. Los mtodos qumicos incluyen el uso de xido de etileno, aldehdos y perxido de hidrgeno, los mecnicos la microfiltracin y dentro de los fsicos tenemos el empleo de calor y radiaciones ionizantes y UV.

OBJETIVO
El alumno aprender el procedimiento para empacar diversos materiales de uso en microbiologa as como las ventajas y desventajas de los procedimientos de esterilizacin por calor seco y calor hmedo.

FUNDAMENTO
A) CALOR HMEDO.- La temperatura elevada, combinada con una humedad elevada, es uno de los mtodos ms efectivos para matar microorganismos. El calor hmedo mata a los microorganismos coagulando sus protenas. Es mucho ms rpido y efectivo que el calor seco. El vapor a presin proporciona temperaturas por encima de las que se pueden obtener al hervir. Tiene la ventaja de un calentamiento rpido, as como penetracin rpida y abundante humedad.. El aparato a esterilizar que utiliza vapor de agua a presin regulada se denomina autoclave. Consta de una cmara de doble pared que se llena de vapor saturado libre de aire y se mantiene a la temperatura indicada y a la presin establecida durante un periodo de tiempo determinado. Generalmente el autoclave funciona a una presin de 15 libras/ pulgada cuadrada a 121C ( 249F). El tiempo de funcionamiento para lograr la esterilidad depende de la naturaleza del material que se va a esterilizar, del tipo de envase y del volumen del material. Una temperatura de l00C es la suficiente para matar a todas las formas bacterianas en 2 o 3 minutos, excepto a las esporas, para matar a estas se requiere una temperatura de 121C durante 15 minutos y a una presin de 15 libras.

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Este mtodo es adecuado para esterilizar aparatos que tienen hule, jeringas que contienen metal, para medios de cultivo que contienen un azcar especial dextrosa. El autoclave se puede sustituir por la olla de presin.

B) CALOR SECO.- En este tipo de esterilizacin existe una destruccin de los microorganismos oxidando sus constituyentes qumicos, desnaturalizando las protenas y los cidos nucleicos de las clulas as como fragmentando las membranas celulares. Para materiales que deben permanecer secos como ciertos instrumentos de vidrio de laboratorio tales como: cajas de Petri, pipetas, as como aceites, polvos ( por ser impermeables al vapor), los materiales que no se pueden esterilizar por calor seco son: Material textil (algodn, sedas, lino, etc.), gomas y materiales sintticos. Todo material que se altere a la temperatura de trabajo se dispone de hornos elctricos por los que circula aire caliente, en vista de que el calor es menos eficaz en materiales secos, se acostumbra a aplicar una temperatura de 160C a 170C durante una hora o ms. Para materiales de vidrio de laboratorio es suficiente una exposicin de dos horas de duracin a 160C ( 320 F) para que quede esterilizado. Otras formas tiles de calor seco incluyen incineracin para objetos que deben ser destruidos y flameados por pasaje de agujas o pequeos instrumentos a travs de la llama de un mechero Bunsen

MATERIAL Y EQUIPO
1 Matraz Erlenmeryer 250ml 4 Tubos de ensaye 1 Pipeta de 1 ml 4 Cajas Petri Papel Estraza Algodn Escobillones Servitoallas Reloj Termmetro Autoclave u olla de presin Horno a 170C

REACTIVOS
Agua destilada Detergente Extran Agua de la llave

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PROCEDIMIENTO
LAVADO

Prepare la solucin de Extran al 2% en agua si existe una suciedad normal, al 5% si la suciedad es muy acentuada y al 20% si la suciedad es muy persistente. Coloque el material sucio en un traste y deje reposar entre 2 y 24 horas. Si se quiere acelerar la reaccin es conveniente hervir la solucin. Despus del tiempo requerido saque del bao, enjuague con agua corriente y despus con agua destilada. Secar al aire o estufa.
EMPACADO DEL MATERIAL 1. Lava el material de laboratorio, principalmente la cristalera con detergente Extran o Alkox (Fcilmente se contamina con esporas difciles de eliminar) enjuaga con abundante agua de la llave y enseguida con agua destilada. 2. Secar el material utilizando papel absorbente para acelerar el secado 3. Empaca el material correctamente

A) CAJAS DE PETRI Corta el papel estraza, en forma de rectngulos adecuados para la cantidad de 2 a 3 cajas. Colcalas en la parte central y envulvelas segn te indique tu profesor.:Se toman los extremos de papel y se unen, se hace un nuevo doblez recargando ligeramente en la caja para marcarlo, Los extremos se doblan en forma triangular .Ya en forma triangular se doblan hacia atrs quedando listas para esterilizar.
B) PIPETAS Introduce una pequea porcin de algodn en el cuello de la pipeta, procurando que quede lo suficientemente apretada. Con tiras de papel de 3 cm de ancho envulvelas, comenzando por la punta y en forma de espiral gira hacia arriba hasta el final de la pipeta. C) TUBOS DE ENSAYE. Se toma el tubo con la mano izquierda y con la derecha el tapn de algodn. Coloca algodn en la boca del tubo a 1/5 parte de la longitud del mismo procurando que quede bien apretado, depostalos en recipientes adecuados, tpalos con papel estraza y talos. D) MATRACES.

Tapa el cuello del matraz con algodn, lo suficientemente apretado para evitar que se destape (se tapa en la misma forma que el tubo). Como proteccin coloca un gorrito de papel estraza y talo con cinta.

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E) MATERIAL METLICO El asa de platino, tijeras, bistur, material quirrgico no es necesario empacarlo para su esterilizacin.

ESTERILIZACIN POR CALOR SECO

1. Las normas de Procedimiento de la Institucin establecern las condiciones de trabajo segn la carga, volumen, peso, resistencia trmica del material. Es imprescindible respetar los parmetros obtenidos en la validacin del procedimiento. La temperatura de esterilizacin por calor seco deber estar entre 160C a 170 C. y el tiempo de aplicacin ser de una hora o ms. 2. El material a esterilizar se deber cargar con el esterilizador fro, teniendo en cuenta las siguientes recomendaciones: cada unidad deber quedar separada de las vecinas Los materiales no debern estar en contacto con las paredes, piso y techo del esterilizador. La carga del esterilizador ser homognea y no deber superar el 80% de la capacidad total de la cmara 3. Colocar el material dentro del esterilizador. Encender el Esterilizador, verificar que los instrumentos de control de ciclo, tiempo (2 horas) y temperatura( 170C) se encuentren en la posicin correcta. Esperar hasta que los instrumentos de medicin alcancen la temperatura seleccionada para el ciclo. 4. Cuando se alcance la temperatura seleccionada, se comenzar a descontar el tiempo de esterilizacin. Cumplido el tiempo de exposicin se apagar el esterilizador. La descarga del esterilizador se efectuar una vez que el material se haya enfriado. 5. Durante el ciclo de esterilizacin no deber abrirse la puerta del esterilizador porque ello implicara abortar el ciclo, debiendo en este caso recomenzarlo, adems de que el cambio de temperatura rompera la cristalera.

ESTERILIZACIN POR CALOR HMEDO

1. Lava el material que te proporcione tu profesor con mezclas adecuadas como extran o mezcla crmica con concentraciones adecuadas tomando en cuenta lo sucio del material, seca en estufa o en forma manual con papel absorbente y empcalo. Tenlo listo para su esterilizacin.

2. Coloca el agua necesaria en la autoclave u olla de presin hasta la marca e introduce unas gradillas metlicas que servirn de base al material a esterilizar. Coloca el material a esterilizar dentro de la autoclave u olla de presin, evitando que el material toque las paredes.

3. Cierra la autoclave u olla de presin, cuidando de dejar abierta la vlvula de salida de vapor que ayudar a expulsar el aire contenido dentro y que ste es desplazado por el vapor que se produce, si el aire no fue eliminado totalmente de la autoclave, el manmetro aumentar a 15 libras. Pero la

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temperatura no habr alcanzado los 12lC. Por esto se debe medir el tiempo cuando la temperatura llegue a l12C. 4. Cierra la vlvula cuando el vapor sea continuo. La temperatura de l05C indica que est libre de aire. Vigila el termmetro. Cuando vaya en 120C, mantenla durante 15 minutos para que se efecte la esterilizacin (15 libras de presin). Transcurrido este tiempo se corta la fuente de calor 5. Deja enfriar hasta que el manmetro marque cero. Abre la vlvula de salida de vapor, para expulsar el vapor restante. Abre el autoclave y retira el material 6. Si el material no est en estado lquido la vlvula se puede abrir rpido a la salida de vapor, pero si est en estado lquido la rpida prdida de presin las hace hervir o bien saltar los tapones. Por lo tanto se espera unos minutos a que se enfre perfectamente

OBSERVACIONES
Realiza los dibujos correspondientes del procedimiento de empacado que realizaste para cada tipo de material de laboratorio. As mismo dibuja el horno en donde realizaste la esterilizacin por calor seco.

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CUESTIONARIO
1. Por qu antes de una esterilizacin es necesario lavar y desinfectar el material? Una de las razones por la cual se debe lavar el material antes de la esterilizacin es para asegurar la eliminacin de la materia orgnica. Tambin para destruir y eliminar carga microbiana o grmenes que puedan estar presentes en los materiales a esterilizar, mediante agentes de naturaleza qumica (desinfectantes), con el fin de disminuir el nmero de formas vegetativas a niveles mnimos. 2. Qu finalidad tiene el empacado antes de la esterilizacin? La finalidad que tiene el empacado antes de la esterilizacin es impedir el ingreso de microorganismos al interior, sellar de forma completa para evitar la contaminacin del material, soportar la traccin y manipulacin habitual sin producir deterioro y hacer permeable el mtodo de esterilizacin deseado 3. Qu finalidad tienen los tapones de algodn que se colocan en los extremos de las pipetas y de los matraces Erlenmeyer? Pueden ser de corcho, algodn, entre otros y su finalidad es principalmente para tapar envases y proteger el medio de cultivo. 4. Qu desventaja tiene el utilizar la esterilizacin por calor seco en este laboratorio? Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a la baja penetracin del calor. 5. Cmo acta la esterilizacin por calor seco en los microorganismos? Destruye los microorganismos por efectos de oxidacin, desnaturalizando las protenas y los cidos nucleicos de las clulas as como fragmentando las membranas celulares. El calor seco produce desecacin de la clula, esto es txico por niveles elevados de electrolitos y fusin de membranas, residuos que quedan adheridos al objeto estril. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que estn en contacto con stos. 6. A qu temperatura y cunto tiempo tendrs que emplear para esterilizar por calor seco el material de laboratorio para asegurar la destruccin de microorganismos patgenos y esporas? Se debe tener en cuenta el ciclo total que incluye calentar el horno a la temperatura correcta, el mismo proceso de esterilizar y el perodo de enfriar suele tardar dos veces el tiempo que aqu se menciona temperatura 170 C 160 C 150 C 140 C Tiempo 1 hr 2 hr 2.5 hr 3 hr

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Como es posible que el calor seco embote los instrumentos afilados o puntiagudos, incluso las agujas, no se debern esterilizar estos objetos a una temperatura que pase 160 grados C.
7. Qu tipo de material se puede esterilizar por calor seco y por qu? Deben ser materiales bsicamente resistentes al calor, para el calor seco la temperatura es mayor hasta 180 grados y el tiempo puede ser mayor una o dos horas dependiendo del material. Estos materiales pueden ser pipetas, cajas de petri, tubos de ensayo, erlenmeyer, entre otros; los cuales son de vidrio refractario. 8. Que tipo de material se puede esterilizar por calor hmedo? Para este caso el material pueden ser sustancias como medios de cultivo, slidos o lquidos (caldos nutritivos). En la esterilizacin con calor hmedo la temperatura es de 121 grados a 3 minutos o 15 o 20 mximo. Es importante no utilizar en el autoclave, materiales que se deterioran frente a altas temperaturas como los plsticos o cauchos 9. A qu condiciones de temperatura y presin se destruyen todas las formas vegetativas? Una de las condiciones para destruir a una forma vegetativa es la temperatura que debe estar a l00C que es lo suficiente para matar a todas las formas bacterianas entre 2 o 3 minutos y la segunda condicin es la presin de 15 libras al cual se somete el microorganismo, a excepcin de las esporas. 10. A qu condiciones de temperatura y presin se destruyen las esporas? La condicin para matar o destruir una espora es la temperatura de 121C durante 15 minutos y la otra condicin es a una presin de 15 libras. 11. Cules son las condiciones necesarias de tiempo y temperatura para esterilizar por calor seco? Se debe tener en cuenta el ciclo total que incluye calentar el horno a la temperatura correcta, el mismo proceso de esterilizar y el perodo de enfriar suele tardar dos veces el tiempo que aqu se menciona temperatura Tiempo 170 C 1 hr 160 C 2 hr 150 C 2.5 hr 140 C 3 hr Como es posible que el calor seco embote los instrumentos afilados o puntiagudos, incluso las agujas, no se debern esterilizar estos objetos a una temperatura que pase 160 grados C. 12. Cules son las condiciones necesarias de tiempo y temperatura para esterilizar por calor hmedo? Del tiempo, temperatura y presin usadas en la esterilizacin depende el xito alcanzado. Generalmente los datos presin y temperatura son fijados, y el nico factor que se vara es el tiempo. Los materiales necesitan diferentes tiempos de esterilizacin dependiendo de su textura, porosidad, y otras caractersticas propias de cada material. Por ejemplo: Los

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siguientes datos han sido tomados para una temperatura de esterilizacin de 250F (121C) a 15-20 PSI. Guantes de Caucho (Hule) 15 minutos, Frascos de Vidrio, Cristalera en General 20 minutos. Cuando se esteriliza se deben hacer paquetes bien cerrados y bien ordenados, para que haya buena penetracin de vapor en el material.
13. Cmo acta la esterilizacin por calor seco en los microorganismos? El calor seco destruye los microorganismos por efectos de oxidacin, desnaturalizando las protenas y los cidos nucleicos de las clulas as como fragmentando las membranas celulares.

El calor seco produce desecacin de la clula, esto es txico por niveles elevados de electrolitos y fusin de membranas, residuos que quedan adheridos al objeto estril. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que estn en contacto con stos.
14. Cmo acta la esterilizacin por calor hmedo en los microorganismos? La esterilizacin por calor hmedo acta en las enzimas desnaturalizndolas rpidamente, al Igual que las membranas celulares y coagulando sus protenas del microorganismo, se deben principalmente a dos razones: El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras biolgicas son producidas por reacciones que eliminan agua. El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho ms elevado que el aire. Adems, el vapor del agua, especialmente si se genera a sobrepresin, es un eficaz transmisor de calor al Interior de la clula microbiana.

15. Qu tipo de esterilizacin es ms recomendable y por qu?

La esterilizacin ms recomendable es por calor hmedo porque hay rpido calentamiento y penetracin, destruye las bacterias y esporas en poco tiempo, no deja residuos txicos, es econmico y hay un bajo deterioro del material.

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CONCLUSIONES
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RECOMENDACIONES
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BIBLIOGRAFIA
BROCK, TH. D: 1998. Biologa de los Microorganismos. Editorial Prentice Hall. USA.

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