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MICROBIOLOGIA REPORTE PRACTICA 1 EMPACADO DE MATERIAL Y ESTERILIZACION POR CALOR DOCENTE: MTRA. MARIA DEL ROSARIO BERNABE SALAS
ALUMNAS: MARIEL RENDON JIMENEZ 11CS0 MARIA ALEJANDRA RAMIREZ ANDRADE 11CS0 JENNIFER GISELLE DE DIEGO ROMERO 11CS0049
CUARTO SEMESTRE
CIUDAD SERDN, PUE.
OBJETIVO
El alumno aprender el procedimiento para empacar diversos materiales de uso en microbiologa as como las ventajas y desventajas de los procedimientos de esterilizacin por calor seco y calor hmedo.
FUNDAMENTO
A) CALOR HMEDO.- La temperatura elevada, combinada con una humedad elevada, es uno de los mtodos ms efectivos para matar microorganismos. El calor hmedo mata a los microorganismos coagulando sus protenas. Es mucho ms rpido y efectivo que el calor seco. El vapor a presin proporciona temperaturas por encima de las que se pueden obtener al hervir. Tiene la ventaja de un calentamiento rpido, as como penetracin rpida y abundante humedad.. El aparato a esterilizar que utiliza vapor de agua a presin regulada se denomina autoclave. Consta de una cmara de doble pared que se llena de vapor saturado libre de aire y se mantiene a la temperatura indicada y a la presin establecida durante un periodo de tiempo determinado. Generalmente el autoclave funciona a una presin de 15 libras/ pulgada cuadrada a 121C ( 249F). El tiempo de funcionamiento para lograr la esterilidad depende de la naturaleza del material que se va a esterilizar, del tipo de envase y del volumen del material. Una temperatura de l00C es la suficiente para matar a todas las formas bacterianas en 2 o 3 minutos, excepto a las esporas, para matar a estas se requiere una temperatura de 121C durante 15 minutos y a una presin de 15 libras.
B) CALOR SECO.- En este tipo de esterilizacin existe una destruccin de los microorganismos oxidando sus constituyentes qumicos, desnaturalizando las protenas y los cidos nucleicos de las clulas as como fragmentando las membranas celulares. Para materiales que deben permanecer secos como ciertos instrumentos de vidrio de laboratorio tales como: cajas de Petri, pipetas, as como aceites, polvos ( por ser impermeables al vapor), los materiales que no se pueden esterilizar por calor seco son: Material textil (algodn, sedas, lino, etc.), gomas y materiales sintticos. Todo material que se altere a la temperatura de trabajo se dispone de hornos elctricos por los que circula aire caliente, en vista de que el calor es menos eficaz en materiales secos, se acostumbra a aplicar una temperatura de 160C a 170C durante una hora o ms. Para materiales de vidrio de laboratorio es suficiente una exposicin de dos horas de duracin a 160C ( 320 F) para que quede esterilizado. Otras formas tiles de calor seco incluyen incineracin para objetos que deben ser destruidos y flameados por pasaje de agujas o pequeos instrumentos a travs de la llama de un mechero Bunsen
MATERIAL Y EQUIPO
1 Matraz Erlenmeryer 250ml 4 Tubos de ensaye 1 Pipeta de 1 ml 4 Cajas Petri Papel Estraza Algodn Escobillones Servitoallas Reloj Termmetro Autoclave u olla de presin Horno a 170C
REACTIVOS
Agua destilada Detergente Extran Agua de la llave
Prepare la solucin de Extran al 2% en agua si existe una suciedad normal, al 5% si la suciedad es muy acentuada y al 20% si la suciedad es muy persistente. Coloque el material sucio en un traste y deje reposar entre 2 y 24 horas. Si se quiere acelerar la reaccin es conveniente hervir la solucin. Despus del tiempo requerido saque del bao, enjuague con agua corriente y despus con agua destilada. Secar al aire o estufa.
EMPACADO DEL MATERIAL 1. Lava el material de laboratorio, principalmente la cristalera con detergente Extran o Alkox (Fcilmente se contamina con esporas difciles de eliminar) enjuaga con abundante agua de la llave y enseguida con agua destilada. 2. Secar el material utilizando papel absorbente para acelerar el secado 3. Empaca el material correctamente
A) CAJAS DE PETRI Corta el papel estraza, en forma de rectngulos adecuados para la cantidad de 2 a 3 cajas. Colcalas en la parte central y envulvelas segn te indique tu profesor.:Se toman los extremos de papel y se unen, se hace un nuevo doblez recargando ligeramente en la caja para marcarlo, Los extremos se doblan en forma triangular .Ya en forma triangular se doblan hacia atrs quedando listas para esterilizar.
B) PIPETAS Introduce una pequea porcin de algodn en el cuello de la pipeta, procurando que quede lo suficientemente apretada. Con tiras de papel de 3 cm de ancho envulvelas, comenzando por la punta y en forma de espiral gira hacia arriba hasta el final de la pipeta. C) TUBOS DE ENSAYE. Se toma el tubo con la mano izquierda y con la derecha el tapn de algodn. Coloca algodn en la boca del tubo a 1/5 parte de la longitud del mismo procurando que quede bien apretado, depostalos en recipientes adecuados, tpalos con papel estraza y talos. D) MATRACES.
Tapa el cuello del matraz con algodn, lo suficientemente apretado para evitar que se destape (se tapa en la misma forma que el tubo). Como proteccin coloca un gorrito de papel estraza y talo con cinta.
1. Las normas de Procedimiento de la Institucin establecern las condiciones de trabajo segn la carga, volumen, peso, resistencia trmica del material. Es imprescindible respetar los parmetros obtenidos en la validacin del procedimiento. La temperatura de esterilizacin por calor seco deber estar entre 160C a 170 C. y el tiempo de aplicacin ser de una hora o ms. 2. El material a esterilizar se deber cargar con el esterilizador fro, teniendo en cuenta las siguientes recomendaciones: cada unidad deber quedar separada de las vecinas Los materiales no debern estar en contacto con las paredes, piso y techo del esterilizador. La carga del esterilizador ser homognea y no deber superar el 80% de la capacidad total de la cmara 3. Colocar el material dentro del esterilizador. Encender el Esterilizador, verificar que los instrumentos de control de ciclo, tiempo (2 horas) y temperatura( 170C) se encuentren en la posicin correcta. Esperar hasta que los instrumentos de medicin alcancen la temperatura seleccionada para el ciclo. 4. Cuando se alcance la temperatura seleccionada, se comenzar a descontar el tiempo de esterilizacin. Cumplido el tiempo de exposicin se apagar el esterilizador. La descarga del esterilizador se efectuar una vez que el material se haya enfriado. 5. Durante el ciclo de esterilizacin no deber abrirse la puerta del esterilizador porque ello implicara abortar el ciclo, debiendo en este caso recomenzarlo, adems de que el cambio de temperatura rompera la cristalera.
1. Lava el material que te proporcione tu profesor con mezclas adecuadas como extran o mezcla crmica con concentraciones adecuadas tomando en cuenta lo sucio del material, seca en estufa o en forma manual con papel absorbente y empcalo. Tenlo listo para su esterilizacin.
2. Coloca el agua necesaria en la autoclave u olla de presin hasta la marca e introduce unas gradillas metlicas que servirn de base al material a esterilizar. Coloca el material a esterilizar dentro de la autoclave u olla de presin, evitando que el material toque las paredes.
3. Cierra la autoclave u olla de presin, cuidando de dejar abierta la vlvula de salida de vapor que ayudar a expulsar el aire contenido dentro y que ste es desplazado por el vapor que se produce, si el aire no fue eliminado totalmente de la autoclave, el manmetro aumentar a 15 libras. Pero la
OBSERVACIONES
Realiza los dibujos correspondientes del procedimiento de empacado que realizaste para cada tipo de material de laboratorio. As mismo dibuja el horno en donde realizaste la esterilizacin por calor seco.
El calor seco produce desecacin de la clula, esto es txico por niveles elevados de electrolitos y fusin de membranas, residuos que quedan adheridos al objeto estril. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que estn en contacto con stos.
14. Cmo acta la esterilizacin por calor hmedo en los microorganismos? La esterilizacin por calor hmedo acta en las enzimas desnaturalizndolas rpidamente, al Igual que las membranas celulares y coagulando sus protenas del microorganismo, se deben principalmente a dos razones: El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras biolgicas son producidas por reacciones que eliminan agua. El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho ms elevado que el aire. Adems, el vapor del agua, especialmente si se genera a sobrepresin, es un eficaz transmisor de calor al Interior de la clula microbiana.
La esterilizacin ms recomendable es por calor hmedo porque hay rpido calentamiento y penetracin, destruye las bacterias y esporas en poco tiempo, no deja residuos txicos, es econmico y hay un bajo deterioro del material.
RECOMENDACIONES
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BIBLIOGRAFIA
BROCK, TH. D: 1998. Biologa de los Microorganismos. Editorial Prentice Hall. USA.