Analyses microbiologiques de l'eau l'hpital

Dr. Dominique Blanc, MER, PD

Laboratoire d'pidmiologie
Service de Mdecine prventive hospitalire

Leau lhpital

Consommation par patient: 750 - 1000 litres par jour

Consommation domestique par personne: 150 200 litres par jour

Les diffrentes eaux et leur utilisations

Eaux potables Eaux techniques Eaux striles conditionnes Eaux bactriologiquement matrises

Eaux potables (froide et chaude)

Types
Eau du rseau dadduction

Utilisation
Alimentation humaine, hygine corporelle, lavage des mains, soins: douche propratoire, lavage gastrique, lavement et goutte--goutte rectal, pltre Alimentation humaine Alimentation humaine

Eaux conditionnes en bouteilles Eaux des fontaines rfrigres

Eaux techniques
Type
eau pour la climatisation eau pour la production de glace Eau des tours de refroidissement

Utilisation
Humidification de l'air. Glace alimentaire et non alimentaire Refroidissement de l'air ou de systme

Eaux striles conditionnes

Conforme lessai de strilit (Pharmacope)

Type
eau purifie (bidistille) strile

Utilisation
Destines aux soins et la production de mdicaments non injectables Prparation des mdicaments injectables Utilise la pharmacie

eau strile qualit injectable eau strile pour prparation des injectables

Eaux bactriologiquement matrises

Eau Eau Eau Eau Eau purifie hautement purifie de dialyse de rinage des fibroscopes pour la strilisation centrale

Eau purifie
Pharmacope Europenne: eau utilise pour la fabrication de mdicaments non striles Norme: <102 germes arobies msophiles revivifiables /ml

Eau hautement purifie

Pharmacope Europenne: eau utilise pour la fabrication de mdicaments non striles lorsqu'une eau de qualit leve est ncessaire Norme: <10 germes arobies msophiles revivifiables / 100 ml

Eau pour dilution des solutions concentres pour hmodialyse

Pharmacope Europenne (6.0)

Nombre de germes arobies viables totaux: <102 microorganismes/ml

= eau purifie !

European Best Practice Guidelines for Haemodialysis

Eau hautement purifie Recommande pour:
Hmodialyse conventionnelle Hmodialyse conventionnelle haut flux

Obligatoire:
Hmofiltration en ligne
Nephrol Dial Transplant 2002, 17 (suppl 7):45-62

Eau de rinage des L/D, norme 15883-1

chap. 6.4.2.4: Effectuer un dnombrement de la flore bactrienne msophile arobie viable
Filtration sur membrane dun chantillon de min. 100 ml deau de rinage finale Pas de quantit minimale admissible !!! Le but est de suivre les tendances de la biocontamination et de dfinir ses propres niveaux d'actions

Eau de rinage final des L/D dendoscopes thermolabiles - norme 15883-4

chap. 4.9.2.3 et 6.3

<10 cfu/ 100 ml de bactries msophile arobie viable Absence de Pseudomonas aeruginosa / 100 ml Absence de Legionella / 100 ml Absence de Mycobacteria / 100 ml

Surveillance microbiologique des eaux l'hpital

Type d'eau Eau purifie Recherche Germes totaux Normes Pha. Eur. Pha. Eur. Pha. Eur. Euro. guideline Euro. guideline Norme ISO 15883-4 Rec. OFSP Rec. OFSP

Eau hautement purifie Germes totaux Eaux pour dialyse conventionnelle Eaux pour hmodiafiltration Germes totaux Germes totaux

Eau de rinage des L/D Germes totaux, Pseudomonas, fibroscopes lgionelles, mycobactries Eau potable Eau des tours de refroidissement Lgionelles Lgionelles

Comment mesurer le nombre de germes ?

Quelques notions de microbiologie

Enumration des germes

Compte cultivable ou revivifiable Viable, cultivable

Viable, non cultivable Compte viable Morte Compte total

Mthodes de dnombrement
Culture : une particule donne naissance une colonie: ufc (ou cfu) Viable, cultivable

Viable, non cultivable Colorations biochimiques Morte Microscopie

Germe viable non cultivable

Mtabolisme de la bactrie trop diffrent de celui quelle devrait utiliser dans le milieu de culture (stress) Pas de croissance sur le milieu de culture (manque
facteur de croissance)

Pas de croissance dans les conditions de culture (T , air, dure ) Influence sur le dnombrement des germes!!!

Temprature et croissance bactrienne

Psychrophiles: 10 C (-5 15 C) Psychrotrophes: 25 C (035 C) Msophiles: 35 C (20 40 C) Thermophiles: 45-50 C

Effet du milieu, de la mthode densemencement et de la dure dincubation sur le dnombrement de germes totaux dans leau minrale

10'000 1'000 100 10

Incubation 2 versus 5 j: 10 X Milieux KAB versus R2A: 100 X

Milieu R2A, mthode talement Milieu R2A, mthode incorporation Milieu KAB, mthode incorporation

Korsholm et Sogaard, 1987, Zbl Bakt. Hyg. B. 185:112

Croissance des germes: fonction des conditions de culture

Composition du milieu (pauvre, riche..) Temprature dincubation Atmosphre dincubation Dure dincubation

Enumration des germes

Aucune mthode ne permet de dfinir une mesure absolue Cette mesure relative est un indicateur Comme tout indicateur, c'est sa variation au cours du temps qu'il faut suivre Ncessite que le laboratoire utilise toujours la mme mthode

Biofilm
Assemblage d'organismes microscopiques (bactries, algues, protozoaires) attachs une surface, dans une matrice de polymres produite par l'organisme lui-mme. Formation de biofilm: sur n'importe quelle surface qui est expose un liquide non strile (environnement, industrie, mdecine...)

Rpartition des germes dans un volume d'eau

Culture de laboratoire

Prlvement d'environnement

Charge faible en microorganismes: Filtration sur membrane

Volume: 10 ml 1000 ml Dposez la membrane sur la surface dune plaque glose Dnombrez les colonies qui se sont dveloppes

Pharmacope Europenne

Charge moyenne en microorganismes:

Dnombrement sur plaques par talement en surface

Volume: 0.1 0.2 ml talez lchantillon sur le milieu glos Si ncessaire, diluez lchantillon afin dobtenir un nombre prsum <300 colonies.

Pharmacope Europenne

Quel volume d'eau analyser ?

Volume 200 l 20 ml 100 ml 200 ml 1
0.005
Seuil Pha Eur Eau hautement purifie Seuils CHUV Seuil Pha Eur Eau purifie

1 2 1 10 10 20
0.05 0.1

10 20 100

100 200 400 500

100 200 400

0.5 1 2 5 10 20 100 1000

cfu/ml

cfu/plaque

1 2

20

200

EN ISO 19458 Qualit de leau: Echantillonnage pour analyse microbiologique

Plan et points de prlvements

Reprsentatifs de toute la variation gographique et temporelle Lhtrognit du systme doit tre prise en considration
Ex. les point dun rseau ne sont pas quivalents car il peut exister des culs-de-sac et des sections o le dbit est rduit

Quelle eau analyser ?

Eau de ville
(100 cfu/ml)

Dialysat frais Eau purifie

Filtre

Dialysat utilis Concentr

Dialyseur

(osmose inverse, filtration etc.)

Traitement

Patient

Technique de prlvement
EN ISO 19458 Qualit de leau: chantillonnage pour analyse microbiologique

Formation du personnel effectuant les prlvements Flacons de prlvements: propres et striles

(si rutilis: attention ce que le processus de lavage/dsinfection ne laisse pas des rsidus de dsinfectants)

Technique de prlvement
EN ISO 19458 Qualit de leau: chantillonnage pour analyse microbiologique

Prlvement un robinet:
Type deau Eau dans le rseau principal Eau telle quelle parvient au robinet Eau telle quelle est utilise Retirer les accessoires et les inserts Oui Oui Non Dsinfecter Rincer

Oui Oui Non

Oui Non (bref) Non

Dsinfection: flambage, solution alcoolique ou chlore Rinage: abondant (???) ou bref pour annuler les effets de la dsinfection du robinet

Technique de prlvement
EN ISO 19458 Qualit de leau: chantillonnage pour analyse microbiologique

Prlvement un robinet:
Veiller ce que les chantillons soient prlevs de faon aseptique avec des mains propres ou en utilisant des gants striles (dsinfection des mains et port de gants non strile), en protgeant lchantillon contre les courants dair et les claboussures Pendant le remplissage, le bouchon du flacon ne doit pas entrer en contact avec aucun lment (doigts, sol, poche, dents) Laisser un volume dair dans le flacon de sorte permettre lagitation approprie avant lanalyse Fermer le flacon immdiatement. Ne pas utiliser cet chantillon deau pour la mesure de la T ou autre paramtre mesur sur site

Formulaire de prlvement
EN ISO 19458 Qualit de leau: chantillonnage pour analyse microbiologique

Identifier et tiqueter le flacon de manire unique Remplir le formulaire de prlvement avant ou immdiatement aprs le prlvement
Nom et adresse du client Liste des paramtres analyser Date, heure et site du prlvement Nom de la personne ayant prlev lchantillon Nature de lchantillon Objectif de lanalyse (choix des mthodes) Autres si ncessaires (T , )

Transport et conservation
EN ISO 19458 Qualit de leau: chantillonnage pour analyse microbiologique

Transport
Protger les prlvements contre les rayonnements solaires (effet de strilisation) Rfrigrer les chantillons (mais pas les congeler! ->mort de >99% des cellules)
Si la microflore se multiplie: la vitesse de multiplication est dautant plus grande que la T est leve Si la microflore est en train de mourir, la raction est acclre lorsque la T augmente

Dlai
Plus le dlai est long entre le prlvement et lanalyse en laboratoire, plus la fiabilit des rsultats est diminue < 8h. (le jour mme)

Frquence des tests

Ex. Qualit de leau de rinage final des L/D dendoscopes thermolabiles (ISO 15883-4)

Bactries msophiles arobies viables:

Avant la mise en production Rgulirement aprs la mise en production:
Chaque semaine jusqu ce quil ait t tabli que la qualit de leau est rgulire, puis des intervalles plus tendus

P.aeruginosa, Legionella et mycobacteria

Avant la mise en production Au moins annuellement