Variáveis microbiológicas indicam qualidade do solo

DISSERTAO
VARIVEIS MICROBIOLGICAS COMO INDICADORAS DA QUALIDADE DO SOLO SOB DIFERENTES USOS

LUISA DITZEL FACCI
Campinas, SP 2008
INSTITUTO AGRONMICO CURSO DE PS-GRADUAO EM AGRICULTURA TROPICAL E SUBTROPICAL
VARIVEIS MICROBIOLGICAS COMO INDICADORAS DA QUALIDADE DO SOLO SOB DIFERENTES USOS
LUISA DITZEL FACCI
Orientadora: Sueli dos Santos Freitas Co-orientadora: Isabella Clerici De Maria
Dissertao submetida como requisito parcial para obteno do grau de Mestre em Agricultura Tropical e Subtropical rea de Concentrao em Gesto de Recursos Agroambientais.
Campinas, SP Abril 2008
Ao meu pai Mauro e minha me Ana Lcia, cujo exemplo, dedicao e amor estimulam cada passo da minha vida, DEDICO
Ao meu noivo Rodrigo, s minhas irms Paula e Andria por todo carinho, incentivo e companheirismo, OFEREO
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AGRADECIMENTOS - A Deus; - minha orientadora Dra. Sueli dos Santos Freitas, pela orientao, confiana, pelos valiosos conselhos e ensinamentos; - Dra. Isabella Clerici De Maria, pelo auxlio na realizao deste trabalho, pela ateno e amizade; - Dra. Adriana Parada Dias da Silveira, pelos ensinamentos, ateno e companheirismo; - minha amiga Flvia Cristina Simes de Barros, pela amizade, companheirismo, ensinamentos e dados experimentais, deixo aqui registrada minha admirao; - Ao pesquisador Alisson Chiorato, pelos conselhos, pela ateno e orientao nas anlises multivariadas; - tcnica Rosana Gierts Gonalves pelos valiosos ensinamentos e amizade; - Aos colegas e amigos de Laboratrio Ana Flvia, Nbia, Rafaela, Matheus, Leandro, Carlos, Dona Lo, Luiz Guilherme e as pesquisadoras Vanessa, Valria e Sara. - Aos funcionrios da Microbiologia e Qualidade do solo (especialmente Nilza e Sandra) pela amizade; - Aos funcionrios e professores da Ps-Graduao do Instituto Agronmico pela amizade e ateno; - Aos funcionrios da Conservao do Solo do Instituto Agronmico pelo auxlio com as amostragens; - Aos meus pais Mauro Oswin Facci e Ana Lcia Ditzel Facci, por todo o apoio, incentivo e amor, sem eles nada disso seria concreto; - s minhas irms Paula e Andria pelo estmulo, companheirismo e carinho; - coordenao do Curso de Ps-graduao em Agricultura Tropical e Subtropical pela oportunidade de realizao do curso; - Flavia, Mariana, Vanessa e Ana Lcia pelo companheirismo, amizade e conselhos. Essas meninas se tornaram indispensveis no meu dia-a-dia; - Aos colegas da Ps-graduao, em especial Carlos, Laura, Juliano, Rafael, Thabata; - FAPESP pelo apoio financeiro e pela bolsa de estudo concedida; - Ao meu noivo Rodrigo Periotto, pelo amor, compreenso carinho e companheirismo, e a seus familiares, por torcerem sempre por ns; - E a todas as pessoas que participaram ou contriburam para esse trabalho. iii
"Quando pensamos que sabemos todas as respostas, vem a vida e muda todas as perguntas." Desconhecido
O papel dos infinitamente pequenos infinitamente grande. Louis Pasteur
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SUMRIO RESUMO................................................................................................................. 1 INTRODUO.................................................................................................... 2 REVISO DE LITERATURA............................................................................. 2.1 A Prtica Agrcola.............................................................................................. 2.2 Qualidade do Solo.............................................................................................. 2.3 Indicadores de Qualidade................................................................................... 2.4 Indicadores de Biolgicos.................................................................................. 2.5 Anlise Multivariada.......................................................................................... 3 MATERIAL E MTODOS.................................................................................. 3.1 Caracterizao das reas Experimentais........................................................... 3.2 Amostragem e Preparo das Amostras................................................................ 3.3 Variveis Microbiolgicas Analisadas............................................................... 3.3.1 Quantificao de microrganismos amonificadores......................................... 3.3.2 Quantificao de Microrganismos celulolticos.............................................. 3.3.3 Carbono da biomassa microbiana (CBM)....................................................... 3.3.4 Liberao de CO2............................................................................................ 3.3.5 Quociente metablico..................................................................................... 3.3.6 Atividade da enzima celulase.......................................................................... 3.3.7 Atividade da enzima protease......................................................................... 3.3.8 Atividade da enzima urease............................................................................ 3.4 Anlise Estatstica.............................................................................................. 4 RESULTADOS E DISCUSSO.......................................................................... 4.1 Microbiota.......................................................................................................... 4.1.1 Quantificao de microrganismos amonificadores......................................... 4.1.2 Quantificao de microrganismos celulolticos.............................................. 4.1.3 Carbono da biomassa microbiana................................................................... 4.1.4 Liberao de CO2 ........................................................................................... 4.1.5 Quociente metablico..................................................................................... 4.1.6 Atividade da enzima celulase.......................................................................... 4.1.7 Atividade da enzima protease......................................................................... 4.1.8 Atividade da enzima urease........................................................................... vii 01 03 03 04 05 07 09 12 12 13 14 14 14 15 15 15 16 16 17 18 20 20 20 23 25 28 31 33 36 38
ABSTRACT............................................................................................................. viii
4.2 ndices de Qualidade.......................................................................................... 4.2.1 ndices obtidos considerando as pocas de amostragem nas trs profundidades avaliadas........................................................................................... 4.2.1.1 Incio da cultura de vero............................................................................. 4.2.1.2 Florescimento da cultura de vero............................................................... 4.2.1.3 Incio da cultura de inverno......................................................................... 4.2.1.4 Florescimento da cultura de inverno............................................................ 4.2.2 ndices obtidos considerando as profundidades avaliadas.............................. 4.2.2.1 Primeira profundidade.................................................................................. 4.2.2.2 Segunda profundidade.................................................................................. 4.2.2.3 Terceira profundidade.................................................................................. 4.3 Comparao entre os ndices Obtidos nas Anlises Estatsticas........................ 5 CONCLUSES.................................................................................................... 6 REFERNCIAS.................................................................................................... 7 ANEXOS.............................................................................................................. 7.1 Anexo 1.............................................................................................................. 7.2 Anexo 2.............................................................................................................. 7.3 Anexo 3.............................................................................................................. 7.4 Anexo 4.............................................................................................................. 7.5 Anexo 5.............................................................................................................. 7.6 Anexo 6.............................................................................................................. 7.7 Anexo 7.............................................................................................................. 7.8 Anexo 8.............................................................................................................. 7.9 Anexo 9.............................................................................................................. 7.10 Anexo10........................................................................................................... 7.11 Anexo 11.......................................................................................................... 7.12 Anexo 12..........................................................................................................
41 41 41 46 52 56 61 61 63 64 69 73 74 84 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95
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FACCI, Luisa Ditzel. Variveis microbiolgicas como indicadoras da qualidade do solo sob diferentes usos. 2008. 95f. Dissertao (Mestrado em Gesto de Recursos Agroambientais) Ps-graduao IAC.
RESUMO A avaliao da qualidade do solo uma ferramenta importante para monitorar a sua degradao bem como planejar a implantao de prticas sustentveis de manejo. A natureza dinmica dos microrganismos faz deles indicadores potencialmente sensveis nessa avaliao. O objetivo deste estudo foi definir entre as variveis microbiolgicas nmero de microrganismos amonificadores e celulolticos, carbono da biomassa microbiana, liberao de CO2, quociente metablico (qCO2), atividade das enzimas celulase, protease e urease, quais as mais adequadas a serem utilizadas como indicadoras de qualidade do solo, a partir da anlise de um conjunto de dados coletados durante trs anos agrcolas (2002/2003, 2003/2004, 2004/2005). Todos os dados foram provenientes de um experimento em campo instalado num Latossolo Vermelho eutrofrrico, no Instituto Agronmico, em Campinas - SP. O delineamento experimental foi inteiramente casualisado. Amostras de solo foram coletadas em trs profundidades (0-10, 10-20 e 20-40 cm), em reas contguas, sob plantio direto e convencional com culturas de soja, aveia e triticale, e sob mata nativa e seringueira. As amostragens foram feitas nas pocas correspondentes ao incio e ao florescimento de cada cultura, com quatro repeties de cada tratamento. amostragens. Foram totalizadas 12 Os dados foram submetidos anlise de varincia com mdias
comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade, considerando trs fatores: uso, poca de amostragem e profundidade do solo, alm dos blocos. Tambm foi feita a anlise dos dados por meio de estatstica multivariada de componentes principais, em que foram consideradas as pocas e profundidades de amostragem. Dentre as variveis microbiolgicas estudadas, o carbono da biomassa microbiana, a liberao de CO2 e as enzimas protease e urease foram as mais sensveis s alteraes no solo, no sendo detectado um ndice nico capaz de descrever e quantificar a microbiota em todos os usos, pocas e profundidades. Assim, a utilizao de um conjunto de variveis indicadoras mostrou-se promissora na definio da qualidade do solo. Palavras-chave: biomassa microbiana, manejo de solo, qualidade do solo, anlise de componentes principais, enzimas.
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FACCI, Luisa Ditzel. Microbial activity as indicator of soil quality under different uses. 2008. 95f. Dissertao (Mestrado em Gesto de Recursos Agroambientais) Ps-graduao IAC.
ABSTRACT The evaluation of the quality of the soil is an important tool to track their degradation as well as planning the implementation of sustainable management practices. The dynamic nature of microorganisms makes them potentially sensitive indicators in this evaluation. The objective of this study was to define between microbiological variables numbers of amonifiers and cellulolitycs microorganisms, microbial biomass carbon, CO2 release, metabolic quotient, activity of the enzymes cellulase, protease and urease, which are the most appropriate to be used as indicators of quality of soil, from the analysis of a data set collected during three years (2002/2003, 2003/2004, 2004/2005). All data were from a field experiment installed in a eutroferric Red Latosol in the Agronomic Institute, in Campinas, SP. The experimental delineation was a randomized complete block. Soil samples were collected at three depths (0-10, 10-20 and 20-40 cm), in the contiguous areas, under direct and conventional tillage with crops of soybeans, oats and triticale, and under native vegetation and rubber tree. The samples were taken in times corresponding to the beginning and the blossoming of each culture, with four replicates of each treatment. Twelve samples had been totalized. The data had been submitted to the analysis of variance with averages compared for the test of Tukey 5% of probability, considering three factors: use, time of sampling and depth, beyond the blocks. Also the analyses of the data was done through multivariate statistic of principal components, in which of them were considered the times and the depth of sampling. Among the microbiological variables studied, the microbial carbon, the CO2 release and the protease and urease enzymes were the most sensitive to changes in the soil, not being detected an unique index capable to describe and quantify the microbial biomass in all the uses, times and depths. Thus, the use of a set of variables indicators proved to be promising in the definition of soil quality. Key-words: microbial biomass, soil management, quality indices, main component analysis, enzymes.
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1 INTRODUO
Mundialmente, o efeito das atividades agrcolas na degradao dos recursos naturais, como aqueles causados pelo desmatamento, eroso do solo e uso de agroqumicos, bastante evidente, devendo ser evitado ou, pelo menos, monitorado e combatido. A garantia do no esgotamento do solo requer a implantao de um modelo de desenvolvimento que seja sustentvel. Depara-se, ento, com o desafio de se viabilizar um sistema de produo com uso racional dos recursos naturais, criando novos paradigmas na agricultura baseados na sustentabilidade. A agricultura sustentvel engloba vrias correntes de idias, bem como procedimentos, e tem como objetivo permanente a proteo dos recursos naturais, a manuteno e o aumento da produtividade, a reduo dos riscos e a promoo econmica e social, garantindo boa qualidade de vida para o presente e o futuro. Para que se viabilize uma agricultura sustentvel, h necessidade de se satisfazer o produtor com demonstraes de custos/benefcios ao longo do tempo: diminuio dos altos riscos decorrentes da irregularidade do clima, produes mais estveis, menos gastos por tonelada produzida, conservao do solo e da gua. O exemplo mais marcante tem sido o sistema plantio direto, cuja significativa expanso nos ltimos anos, decorrente do efeito demonstrativo dos custos/benefcios de sua prtica, faz dele o melhor exemplo de agricultura sustentvel no Brasil. Nessa forma de manejo, o solo perturbado o mnimo possvel em sua estrutura fsica e caractersticas biolgicas, em oposio ao plantio convencional, caracterizado por processos que acabam por acelerar a degradao dos solos. A qualidade do solo o resultado de contnuos processos de degradao e conservao e representa a contnua capacidade do solo de funcionar como um ecossistema vital. Um balano nico de componentes qumicos, fsicos e biolgicos (incluindo microrganismos) contribui para a manuteno da qualidade do solo (NILSEN & WINDING, 2002). Os microrganismos do solo e suas comunidades esto continuamente mudando e se adaptando s alteraes ambientais. A dinmica natural desse grupo faz deles indicadores potencialmente sensveis para se avaliar as mudanas no solo resultantes de diferentes prticas e sistemas de manejo. 1
O desafio identificar parmetros do solo mensurveis que possam ser usados para avaliar as prticas de manejo do solo para um dado local. Como o nmero possvel de indicadores microbiolgicos amplo, a anlise multivariada surge como importante alternativa em estudos dessa natureza. Entender e conhecer a qualidade do solo possibilita manej-lo de maneira responsvel, de modo a otimizar seu uso no presente, sem compromet-lo no futuro. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar as variveis liberao de CO2, carbono da biomassa microbiana, quociente metablico, nmero de microrganismos celulolticos e amonificadores, atividade das enzimas celulase, protease e urease de modo a definir quais dessas variveis so mais adequadas a serem utilizadas como indicadoras de qualidade do solo.
2 REVISO DE LITERATURA Em seu estado natural, o solo encontra-se coberto pela vegetao, que o protege da eroso e contribui para manter o equilbrio entre os fatores de sua formao e aqueles que provocam sua degradao. O rompimento dessa relao provoca alteraes fsicas, qumicas e biolgicas, as quais se no forem adequadamente monitoradas e controladas, levam queda de produtividade e degradao do ecossistema (SIQUEIRA et al., 1994). 2.1 A Prtica Agrcola A agricultura passa por um momento de grande transformao: novos conceitos so discutidos e tentativamente aplicados aos agrossistemas como forma de reverter o processo de degradao ao qual tm sido submetidos os solos agrcolas em todo o mundo (COLOZZI FILHO et al., 1999). A partir da dcada de 60, a prtica da agricultura convencional promoveu o cultivo intensivo do solo, causando desmatamento e desprotegendo-o dos danos causados pela eroso. e produtores. Atualmente, as prticas agrcolas que melhoram a sustentabilidade e a qualidade do solo tm recebido crescente ateno dos pesquisadores Foram desenvolvidos sistemas de manejo caracterizados pela considervel quantidade de resduos vegetais sobre ou prximo superfcie, protegendo contra a eroso e minimizando as necessidades do solo para o plantio (BRADY & WEIL, 2002). O manejo conhecido como plantio direto caracterizado pelo no-revolvimento do solo e pela manuteno de restos culturais sobre a superfcie. Ele considerado um sistema de manejo mais adequado s condies tropicais e subtropicais, com reflexos diretos sobre a reduo de custos de produo e aumento da rentabilidade, alm de promover a manuteno ou, at mesmo, o aumento da matria orgnica. ROLDN et al. (2007) verificaram que o sistema plantio direto pode ser considerado eficiente para alcanar a agricultura sustentvel em condies subtropicais devido ao aumento da qualidade fsica e bioqumica do solo e ao seqestro de carbono. Estudos tm mostrado que a adoo do sistema de plantio direto afeta as propriedades fsicas (KARLEN et al., 1994; KUSHWAHA et al., 2001; PEIXOTO et al., 2006), qumicas (DORAN, 1980; ANGERS et al., 1993; EKENLER & TABATABAI, 2003) e
biolgicas (ALVAREZ et al., 1998; MATSUOKA et al., 2003; FRANCHINI et al., 2007) do solo, sendo que, na maioria das vezes, as modificaes so favorveis (BRADY & WEIL, 2002). A quantidade e a qualidade dos resduos vegetais nos sistemas produtivos provocam alteraes na composio da comunidade microbiana, influenciando sua taxa de decomposio. Nesse sentindo, os sistemas de manejo do solo atuam diretamente na persistncia dos resduos no solo, no tamanho da biomassa microbiana e, conseqentemente, na sustentabilidade dos ecossistemas (KARLEN et al., 1994; MERCANTE et al., 2004). 2.2 Qualidade do Solo O solo um corpo dinmico, vivo e natural que determina muitas funes fundamentais nos ecossistemas terrestres. Os componentes do solo incluem a matria mineral inorgnica (areia, sedimentos e partculas de argila), matria orgnica, gua, gases, e organismos vivos e h um contnuo intercmbio de molculas e ons entre as fases slida, lquida e gasosa que so mediados pelos processos fsicos, qumicos e biolgicos (DORAN et al., 1994). Segundo FAGERIA (2002), esses processos, somado ao aspecto ecolgico, classificam o solo quanto a sua qualidade e determinam a produtividade da cultura. O conceito de qualidade do solo relativamente novo, com grandes controvrsias e no to bem definido na percepo cientfica (PIERZYNSKI et al, 2000). Os termos qualidade do solo e sade do solo so freqentemente usados como sinnimos na linguagem popular e na literatura cientfica (HARRIS et al., 1994; WARKENTIN, 1995; BRADY & WEIL, 2002). DORAN & PARKIN (1994) definiram a qualidade do solo como a capacidade em funcionar dentro do ecossistema para sustentar a produtividade biolgica, manter a qualidade ambiental e promover a sade das plantas. LARSON & PIERCE (1994) afirmam que a qualidade est ligada especificamente habilidade de funcionar como meio para crescimento das plantas, regular o fluxo e o armazenamento da gua no meio ambiente e como tampo ambiental. Portanto, avaliar a qualidade do solo necessrio para definir e manejar os recursos disponveis (SEYBOLD et al., 1997), evitando, assim, prticas que danifiquem e afetem negativamente sua capacidade de funcionamento (PIERZYNSKI et al., 2000).
No Brasil, estudos referentes ao assunto, bem como o uso do termo qualidade do solo, ainda so incipientes. FRANCHINI et al. (2007), estudando o monitoramento da qualidade do solo em diversos sistemas de manejo e rotao de culturas em um experimento de campo instalado na regio sul do Brasil, verificaram a importncia do plantio direto e da incluso de leguminosas na rotao de culturas para a conservao da matria orgnica nos trpicos, favorecendo a qualidade do solo. FIALHO et al. (2006), avaliando reas sob vegetao natural e cultivos de bananeiras na Chapada do Apodi (CE), encontraram que o uso agrcola causa alteraes ambientais que reduzem a biomassa e a atividade microbiana, tendo como conseqncia a reduo de sua qualidade, quando comparado rea sob mata natural. Dessa forma, a avaliao da qualidade do solo deve englobar o estudo de algumas de suas propriedades que so consideradas como atributos indicadores (DORAN & PARKIN, 1994). 2.3 Indicadores de Qualidade O solo tem propriedades qumicas, biolgicas e fsicas que interagem de maneira complexa, determinando sua qualidade e capacidade de uso. Dessa forma, ainda que sua qualidade no possa ser medida diretamente, pode ser inferida a partir das mudanas avaliadas nos seus atributos ou nos atributos do ecossistema, conhecidos como indicadores (SEYBOLD et al., 1997). Os indicadores devem fornecer algumas medidas da capacidade do solo de funcionar respeitando a vegetao e a produtividade biolgica, a qualidade ambiental e a sade humana e animal. Eles tambm devem ser usados para medir mudanas no funcionamento do solo ou limitaes do ecossistema (SEYBOLD et al., 1997), ser compreensveis e teis para o agricultor e, preferencialmente, de fcil e barata mensurao (DORAN & ZEISS, 2000). DORAN & PARKIN (1994) definiram que indicadores de qualidade devem integrar processos do ecossistema e propriedades fsicas, qumicas e biolgicas; serem sensveis s variaes de manejo e clima e aplicveis s condies de campo e quando possvel, serem compatveis com fontes de dados existentes. ISLAM & WEIL (2000) dividiram os indicadores em trs grandes grupos: os efmeros, cujas alteraes ocorrem em curto espao de tempo ou so modificados pelas prticas de cultivo, tais como: umidade do solo, densidade, pH, disponibilidade de
nutrientes; os permanentes, que so inerentes ao solo, tais como: profundidade, camadas restritivas, textura, mineralogia; e, entre estes, esto os indicadores intermedirios, que demonstram uma crtica influncia da capacidade do solo em desempenhar suas funes, tais como: agregao, biomassa microbiana, quociente respiratrio, carbono orgnico total e ativo. Para esses autores, os indicadores intermedirios so os de maior importncia para integrarem um ndice de qualidade do solo. Muitos modelos tm sido usados para permitir uma estimativa quantitativa da qualidade do solo. Muitos desses modelos valorizam a qualidade do solo pela avaliao de suas funes chaves, as quais so quantificadas usando os parmetros fsicos, qumicos e biolgicos (Tabela 1). Esses sistemas tm mostrado o potencial de diferenciao de qualidade do solo em reas que receberam regimes de manejo agricultveis contrastantes (GLOVER et al., 2000). Tabela 1 Principais indicadores fsicos, qumicos e biolgicos e suas relaes com a qualidade do solo.
Indicadores Matria orgnica do solo Fsicos Estrutura do solo Infiltrao e densidade do solo Capacidade de reteno de umidade Qumicos pH Condutividade eltrica Contedo de N, P e K Biolgicos Biomassa Microbiana Mineralizao de nutrientes (N, P e S) Respirao do solo Fixao biolgica de N2 Atividade enzimtica do solo Atividade microbiana e reposio de nutrientes. Produtividade do solo e potencial de suprimento de nutrientes. Atividade microbiana. Potencial de suprimento de N para as plantas. Atividade microbiana e cataltica do solo. Atividade biolgica e disponibilidade de nutrientes. Crescimento vegetal e atividade microbiana. Disponibilidade de nutrientes para as plantas. Reteno e transporte de gua e nutrientes. Movimento de gua e porosidade do solo. Armazenamento e disponibilidade de gua. Relao com a qualidade do solo Fertilidade, estrutura e estabilidade do solo.
Fonte: Arajo & Monteiro, 2007 (adaptado de Doran & Parkin, 1994).
2.4 Indicadores Biolgicos A avaliao de atributos biolgicos do solo adequada maioria dos critrios para a seleo de um indicador de qualidade (DORAN & ZEISS, 2000). A capacidade de responder rapidamente a mudanas no ambiente do solo derivadas das alteraes no manejo justifica o uso de microrganismos e processos microbiolgicos como indicadores de qualidade do solo (KENNEDY & PAPENDICK, 1995). Os atributos microbiolgicos tm sido amplamente discutidos na literatura como indicadores de qualidade (CARTER, 1986; SPARLING, 1992; ANGERS et al., 1993; KENNEDY & PAPENDICK, 1995, TRINDADE et al., 2000; TTOLA & CHAER, 2002; MATSUOKA et al., 2003; COSTA et al., 2006; FRANCHINI et al., 2007, ARAJO & MONTEIRO, 2007). A utilizao de todos os indicadores microbiolgicos disponveis num programa de monitoramento seria invivel. Ao invs disso, um minimum data set (MDS) ou nmero mnimo de indicadores deve ser determinado. Os critrios para a seleo de indicadores relacionam-se, principalmente, com sua utilidade em definir processos do ecossistema. Experimentos com o uso de indicadores microbiolgicos no monitoramento de solos tambm so realizados em alguns pases europeus (Tabela 2), onde os indicadores mais comumente usados so a biomassa microbiana e a respirao (NIELSEN & WINDING, 2002). Tabela 2. Nmero mnimo de indicadores (MDS) microbiolgicos utilizados em alguns programas de monitoramento de solos europeus.
Programa de monitoramento Alemanha MDS Respirao do solo Biomassa microbiana Quociente metablico Enzimas do solo Biomassa microbiana Sua Respirao do solo Nitrognio potencialmente mineralizvel
Continua Tabela 2. Nmero mnimo de indicadores (MDS) microbiolgicos utilizados em alguns programas de monitoramento de solos europeus (Continuao).
Programa de monitoramento Repblica Theca MDS Biomassa microbiana Respirao do solo Nitrognio mineralizvel, nitrificao Enzimas do solo (celulase e catalase) Biomassa microbiana Reino Unido Respirao do solo Diversidade microbiana Rhizobium Biomassa microbiana ustria Enzimas do solo Nitrificao
Fontes: NIELSEN & WINDING, 2002 (adaptado).
A biomassa microbiana definida como a parte viva da matria orgnica do solo, incluindo bactrias, actinomicetos, fungos, protozorios, algas e macrofauna. Excluindo-se razes de plantas e animais do solo maiores do que 5,10 m, a biomassa microbiana corresponde em mdia, de 2 a 5% do C orgnico do solo (JENKINSON & LADD, 1981) e de 1 a 5% do N total do solo (SMITH & PAUL, 1990). A manuteno da produtividade dos ecossistemas agrcolas e florestais depende, em grande parte, do processo de transformao da matria orgnica e, por conseguinte, da biomassa microbiana do solo. Esta representa um importante componente ecolgico, porque responsvel pela decomposio e mineralizao dos resduos vegetais do solo, utilizando esses materiais como fonte de nutrientes e energia para a formao e o desenvolvimento de suas clulas, bem como para a sntese de substncias orgnicas no solo (GAMA-RODRIGUES, 1999). O fato de muitos microrganismos utilizarem a frao disponvel da matria orgnica torna-os sensveis a mudanas em sua qualidade. Assim, a biomassa
microbiana tem sido proposta como um indicador do estado e das mudanas da matria orgnica total do solo (TTOLA & CHAER, 2002). A determinao da liberao de CO2 do solo (C-CO2) tem sido usada para avaliar a atividade geral da biomassa, destacando-se a influncia do clima, as propriedades fsicas e qumicas do solo e as prticas agrcolas (GAMA-RODRIGUES, 1999). A atividade dos organismos considerada um atributo positivo para a qualidade do solo, sendo a respirao um indicador sensvel da decomposio de resduos, do giro metablico do carbono orgnico do solo e de distrbios do ecossistema (PAUL et al., 1999). A taxa de respirao por unidade de biomassa microbiana, ou quociente metablico (qCO2) importante em estudos que avaliam o efeito das condies ambientais sobre a atividade microbiana do solo (ANDERSON & DOMSCH, 1993). O qCO2 refere-se quantidade de CO2 incorporada por grama de biomassa em um determinado tempo. As enzimas do solo so mediadoras diretas no catabolismo biolgico do solo orgnico e dos componentes minerais (NIELSEN & WINDING, 2002), por isso tm sido sugeridas como potenciais indicadoras da qualidade do solo. Parmetros como atividade de microrganismos celulolticos e atividade de microrganismos amonificadores tambm podem ser usados para o entendimento e o eventual manejo da microbiota do solo (DE-POLLI & GUERRA, 1999). Assim, o estudo da biomassa microbiana e da sua atividade, alm de auxiliar na avaliao e no estabelecimento de um novo equilbrio biodinmico do solo, fornece subsdios para o planejamento do uso do solo (DANDRA et al., 2002). Como o nmero possvel de indicadores muito grande, a aplicao de ndices de qualidade e o uso de anlise estatstica multivariada podem ajudar na interpretao dos resultados (BARETTA, 2007). 2.5 Anlise Multivariada A avaliao dos possveis indicadores de qualidade do solo e sua efetiva identificao so complicadas pela multiplicidade dos fatores fsicos, qumicos e biolgicos que controlam os processos biogeoqumicos e suas variaes no tempo, espao e intensidade (DORAN et al., 1994). Dessa maneira, tcnicas estatsticas tm
sido aplicadas para identificar e quantificar os indicadores que causam influncia significativa sobre os resultados dos experimentos. A estatstica multivariada uma tcnica cada vez mais popular usada para analisar conjuntos complexos de dados (TABACHNICK & FIDELL, 2007). A anlise dos componentes principais (ACP) uma tcnica que transforma um conjunto grande de variveis originais em um conjunto menor de variveis (componentes principais), as quais so combinaes lineares dos valores originais, representando a maior variabilidade do conjunto de dados iniciais (NIELSEN & WINDING, 2002). Os componentes principais so ordenados, com o primeiro O nmero de componentes componente extraindo a maior variabilidade e o ltimo componente, a menor variabilidade (TABACHNICK & FIDELL, 2007). principais que se deve analisar depende do percentual de variabilidade que explicado por cada componente principal. A representao grfica dos dados ajuda na interpretao dos resultados. Essa ferramenta simplifica a interpretao de um grande nmero de dados e pode ser usada no desenvolvimento de um ndice de qualidade do solo, alm de distinguir as reas em funo do manejo do solo e determinar quais so os parmetros mais importantes para caracteriz-las (SENA et al., 2002). LEONARDO (2003) utilizou a anlise dos componentes principais para avaliar o uso sustentvel da microbacia hidrogrfica do Rio Passo Cue (Paran) por meio de indicadores de qualidade de solo e gua. O quociente metablico foi o indicador microbiolgico que melhor se prestou para a diferenciao das prticas agrcolas. SILVEIRA et al. (2004) trabalhando com atributos microbiolgicos e bioqumicos como indicadores da recuperao de reas degradadas, no sul de Minas Gerais, empregaram a anlise dos componentes principais. O uso dessa ferramenta permitiu concluir que os atributos estudados (densidade de fungos e bactrias, microrganismos solubilizadores de fosfato, carbono da biomassa, atividades microbianas e pH) foram considerados bons indicadores da recuperao de solos de reas degradadas. Alm disso, permitiu comprovar que a recuperao dessas reas est fortemente limitada por parmetros microbiolgicos e bioqumicos do solo. CAMPOS et al. (2007), tambm utilizando a anlise dos componentes principais (ACP), verificaram se as modificaes na utilizao do solo no Mxico afetaram sua qualidade e identificaram quais os indicadores so os melhores representantes da variabilidade dos dados originais. Os dois primeiros componentes explicaram 62% da 10
varincia total dos dados e as variveis relacionadas dentre elas, o quociente metablico e o carbono da biomassa microbiana foram identificadas como potenciais indicadores para monitoramento da qualidade do solo. ACOSTA-MARTNEZ et al. (2007), em Akron, EUA, compararam as comunidades microbianas e a atividade enzimtica em uma rea de campo nativo e em reas de pesquisa com pastagem e diferentes cultivos estabelecidos por quinze anos. A anlise dos componentes principais foi utilizada para comparar a composio da atividade microbiana nos sistemas nativos (pasto nativo e pastagem) e as diferentes rotaes estudadas. A ACP dos cidos graxos esterificados (FAME) apontou uma mudana na estrutura da comunidade microbiana com grandes populaes de fungos nas pastagens, campos e rotaes de cultura com intensidade de 100 e 67%, quando comparado com ao plantio convencional (com a cultura de trigo no inverno). BARETTA (2007), em estudo realizado em reas com Araucria angustifolia no Estado de So Paulo, analisou por meio de tcnicas de anlise multivariada, a possibilidade de utilizao de alguns grupos da fauna edfica e das variveis ambientais como indicadores da qualidade do solo. Verificou-se que as diferentes tcnicas de anlises multivariadas, entre elas, a ACP, so importantes ferramentas no estudo de indicadores de qualidade do solo em reas com araucria e que o carbono da biomassa microbiana e a liberao de CO2 foram os melhores indicadores entre os atributos microbiolgicos. SENA et al. (2002) asseguram que os pesquisadores da rea de solos precisam se aperfeioar a respeito de mtodos multivariados, os quais, comparados com mtodos univariados e bivariados, ampliam a capacidade de extrao e interpretao de dados das anlises. Dessa maneira, a anlise das componentes principais torna-se uma ferramenta de grande valor na determinao de ndices de qualidade do solo.
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3 MATERIAL E MTODOS
3.1 Caracterizao das reas Experimentais O trabalho foi realizado em campos localizados no Centro Experimental Central do Instituto Agronmico (IAC), em Campinas, que se localiza na latitude 229 Sul e longitude 471 Oeste, com altitude entre 600 e 720 m. O clima da regio, segundo a classificao de Kppen (Critchfield, 1960), do tipo Cwa, definido como tropical mido com estao chuvosa distinta no vero e seco no inverno, com temperatura mdia anual de 20,5C. A precipitao mdia anual de 1.400 mm, com a distribuio de chuvas de 76% de outubro a maro. O solo das reas experimentais um Latossolo Vermelho eutrofrrico, segundo classificao EMBRAPA (1999), e de textura argilosa. Foram selecionados trs tipos de uso do solo para as anlises: mata, cultivo perene e cultivo de gros (anual), em plantio direto e em plantio convencional. A mata um fragmento de vegetao nativa perturbada, com manchas de mata mesfila semidecdua. O cultivo perene um jardim clonal de seringueiras, com rvores plantadas no incio da dcada de 1950, que recebe como tratos culturais apenas o controle de plantas espontneas que nascem sob as rvores, mantidas apenas como reserva para emprego em enxertia e, eventualmente, para retirada de ltex. Esses dois tratamentos representam um sistema menos perturbado em relao ao sistema cultivo de gros, sendo a rea de seringueira um sistema mais homogneo que a mata, mas tambm com pouca mobilizao do solo ao longo do tempo. A rea de cultivo de gros vem sendo utilizada com tal finalidade desde 1985 com experimentos de manejo do solo incluindo sistemas convencionais e conservacionistas. No ano de 2001 a rea foi arada e gradeada, sendo instalado um experimento comparando sistema convencional e sistema plantio direto. Para o plantio convencional o solo arado a 20-25 - cm de profundidade e, em seguida, recebe uma a duas gradagens leve. As parcelas sob plantio direto no tem revolvimento para o preparo do solo e so aplicados herbicidas de pr e ps-emergncia nas culturas visando formao da palhada que caracteriza o sistema. O experimento vem sendo cultivado desde ento com soja como cultura de vero e aveia (2003 e 2005) ou triticale (2004) como culturas de inverno no decorrer do perodo de trs anos avaliados.
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A instalao do experimento seguiu o delineamento experimental inteiramente casualisado. A tabela 3 apresenta os dados de fertilidade do solo dos quatro tratamentos no incio deste trabalho. Tabela 3 Atributos qumicos de fertilidade do solo nas reas amostradas (camadas 020 cm). Data de amostragem: outubro de 2002.
MO(1) Tratamento Mata Seringueira PD PC
(2) (3)
pH
P mg/dm
3
Ca
Mg
H+Al
3
S.B.
CTC
V % 86 36 39 41
g/dm 73 38 27 28
----------------------mmolc/dm ------------------------2,7 2,2 3,1 2,8 118 24 15 16 20 7 5 6 21 61 37 36 141,8 34,7 23,8 25,0 163,4 96,4 61,1 61,4
6 4 4 4
19 73 29 27
(1) Sistema IAC de anlise de solo (RAIJ et al., 2001): Matria orgnica (MO) medida pela oxidao com dicromato e determinao por colorimetria; pH em extrato aquoso com soluo de CaCl2; P, K, Ca, Mg extrados por resina; H+Al por meio da leitura de pH SMP. (2) Plantio direto; (3) Plantio convencional.
3.2 Amostragem e Preparo das Amostras Amostras de solo foram retiradas em trs camadas, 0-10, 10-20 e 20-40 cm, na entrelinha das culturas, e, na mata e na seringueira, tentou-se amostrar o mais longe possvel das razes, de modo a minimizar o efeito da rizosfera. As amostragens foram feitas nas pocas correspondentes ao incio e ao florescimento de cada cultura, com quatro repeties de cada tratamento. subamostras. Cada amostra foi composta por cinco Foram totalizadas 12 amostragens, o que correspondeu a trs anos
agrcolas. A tabela 4 d informaes mais detalhadas sobre as amostragens. Tabela 4 pocas de amostragem e uso do solo. Ms/ano de amostragem 11/2002 02/2003 05/2003 08/2003 11/2003 poca de amostragem Incio da cultura de vero Florescimento da cultura de vero Incio da cultura de inverno Florescimento da cultura de inverno Incio da cultura de vero Cultura Soja Soja Aveia Aveia Soja
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continua Tabela 4 pocas de amostragem e uso do solo (continuao).
Ms/ano de amostragem 02/2004 05/2004 07/2004 12/2004 03/2005 06/2005 10/2005
poca de amostragem Florescimento da cultura de vero Incio da cultura de inverno Florescimento da cultura de inverno Incio da cultura de vero Florescimento da cultura de vero Incio da cultura de inverno Florescimento da cultura de inverno
Cultura Soja Triticale Triticale Soja Soja Aveia Aveia
Depois de coletadas, as amostras foram acondicionadas em sacos plsticos e transportadas para o laboratrio, onde foram mantidas sob refrigerao (4C) at serem analisadas. Para as anlises, as amostras foram homogeneizadas e a umidade ajustada para 50 a 60% da capacidade de campo. 3.3 Variveis Microbiolgicas Analisadas 3.3.1 Quantificao de microrganismos amonificadores Os microrganismos amonificadores foram quantificados pelo mtodo do nmero mais provvel (NMP), de acordo com SARATCHANDRA (1978). Foram utilizadas diluies de 10-4 a 10-9 para o solo, e alquotas foram transferidas para tubos com meio de cultura adequado, contendo indicador. A incubao foi feita por 5 dias a 28C e os meios dos tubos com crescimento positivo demonstraram mudana de cor laranja para rosa, devido elevao do valor do pH acima de 7,0 pelo indicador vermelho de fenol. 3.3.2 Quantificao de microrganismos celulolticos A quantificao de microrganismos celulolticos tambm foi feita pelo mtodo do nmero mais provvel (NMP), de acordo com SARATCHANDRA (1978). As diluies de solo utilizadas foram de 10-3 a 10-7. A presena dos microrganismos foi evidenciada aps 2 semanas de incubao a 28C, pela degradao das tiras de papel de filtro adicionadas ao meio de cultura (PRAMER & SCHMIDT, 1964).
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3.3.3 Carbono da biomassa microbiana (CBM) O carbono da biomassa microbiana foi determinado pelo mtodo da fumigaoextrao (VANCE et al., 1987). No mtodo de fumigao-extrao, a amostra de solo foi dividida em duas subamostras. Uma delas foi fumigada com clorofrmio, eliminando-se os microrganismos vivos e a outra foi mantida ao natural. As amostras fumigadas com clorofrmio livre de etanol foram incubadas por um perodo de 5 dias a uma temperatura de 27C 2C. Extraiu-se o carbono das duas subamostras em soluo aquosa de sulfato de potssio a 0,5 mol L-1 (as amostras foram agitadas por 30 minutos em agitador horizontal, com posterior filtrao em papel de filtro Whatman No.42). Aps a extrao, os extratos de solo foram submetidos digesto por dicromato de potssio e foram congelados a -15C para posterior determinao do carbono. Pela diferena entre o volume excedente do dicromato das amostras, fumigadas e no fumigadas, foi calculado o carbono extrado. Para clculo do C da biomassa microbiana foi usado um fator de correo, Kc, de 0,38. Os resultados finais foram expressos em micrograma de C por grama de solo seco (g g-1 de C). 3.3.4 Liberao de CO2 Para a quantificao da liberao de CO2 (respirao) pelos microrganismos do solo foi utilizado o mtodo de ALEF (1995). As amostras foram mantidas em frascos hermticos, contendo em seu interior Erlenmeyer com soluo de NaOH em concentrao adequada e conhecida. Essa soluo reage com o CO2 liberado pelo solo, que deve provir, em sua maior parte, da atividade respiratria dos microrganismos do solo, formando Na2CO3. Esses frascos hermticos foram incubados a 28C por 5 dias. Foi feita a avaliao da quantidade de CO2 liberada pela quantidade de NaOH utilizada (2 NaOH + CO2 Na2CO3 + H2O). Para essa anlise, foram adicionados 1 mL de cloreto de brio a 50% e 3 gotas de fenolftalena e, em seguida, foi feita a titulao com HCl 1 N. Os resultados foram expressos em microgramas de CO2 por grama de solo seco a cada dia (g g-1dia-1). 3.3.5 Quociente metablico O quociente metablico (qCO2) uma relao entre o CO2 liberado e o carbono da biomassa microbiana e usado como indicador da eficincia da comunidade
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microbiana em incorporar carbono prpria biomassa (ANDERSON & DOMSH, 1989). Assim, quanto maior o ndice, menos eficiente seria a comunidade microbiana em ao, j que mais dixido de carbono perdido para a atmosfera para incorporar uma unidade de carbono biomassa. Os resultados foram expressos em g CO2 g CBM-1dia-1. 3.3.6 Atividade da enzima celulase A determinao da atividade da celulase foi feita conforme HOPE & BURNS (1987). O mtodo baseia-se na determinao de acares redutores liberados aps a incubao do solo com avicel por 16 h a 40C. Por este mtodo, a celulase total estimada. Para a avaliao da atividade da celulase adicionou-se 1 g de solo em tubo de ensaio juntamente com 5 mL de tampo acetato (0,1 mol L-1) e 0,5 g de celulose microcristalina. Os tubos foram incubados por 24 h a 40C, em banho maria. Aps incubao as amostras foram centrifugadas por 10 minutos a cerca de 25000 g para obteno do sobrenadante, a partir do qual foi obtido a atividade da celulase. O controle com solo foi feito adicionando-se o avicel aps a incubao e imediatamente antes da centrifugao. Para determinao dos acares redutores, um volume de 1 mL do sobrenadante foi tranferido para tubos de ensaio, juntamente com 1 mL de soluo de sulfato de sdio (1,26 mol L-1). Os tubos foram tampados com bolinhas de vidro e levados ao banho maria por 20 minutos a 100C. Adicionou-se 1 mL de soluo de arsenato-molibdato de amnio (0,23 mol L-1) e, finalmente, a mistura foi diluda com 3 mL de gua destilada e a absorbncia medida em comprimento de onda de 520 nm. Os valores de atividade da celulase foram obtidos em curva de calibrao construda a partir de uma soluo de monohidrato de glicose (79 g mL-1): 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9 e 1,0 mL. Os acares redutores foram relacionados com os valores de absorbncia obtidos em comprimento de onda de 520 nm. Os resultados foram expressos em g por grama de solo seco em 24 horas (g g-1dia-1). 3.3.7 Atividade da enzima protease A enzima protease teve sua atividade determinada pelo mtodo descrito por LADD & BUTLER (1972). Esse mtodo mede a liberao de aminocidos aps a incubao do solo com caseinato de sdio (2%), por 2 h e a 50C, utilizando-se o reagente de Folin Ciocalteau. O substrato utilizado foi a casena, uma fonte de composto nitrogenado. A atividade proteoltica nas amostras foi determinada pela
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adio de 5 mL de tampo tris (0,05 mol L-1 6,05 de tris hidroximetilaminometano em 1000 mL de gua destilada pH 8,1); e 5 mL de soluo de caseinato de sdio (2%) em um tubo de ensaio contendo 1 g de solo. A suspenso foi incubada por 2 h a 50C em banho maria. No final da incubao, adicionaram-se 5 mL de soluo de cido tricloroactico (15%). O controle com solo foi feito adicionando-se 5 mL de soluo de caseinato de sdio (2%) no fim da incubao e imediatamente antes da adio de soluo de cido tricloroactico (15%). As amostras de solo foram centrifugadas por 10 minutos a 155000 g. Adicionaram-se 7,5 mL de reagente alcalino (0,47 mol L-1) - 1000 mL de carbonato de sdio, 20 mL de sulfato de cobre e 20 mL de tartarato de sdio e potssio 5 mL do sobrenadante e incubaram-se as amostras por 15 minutos em temperatura ambiente. Aps a adio de 5 mL do reagente de Folin Ciocalteau (33%), as suspenses foram filtradas em papel de filtro Whatmann n.42 e a absorbncia medida aps 1 h. Realizou-se uma curva padro a partir de 1, 2, 3, 4 e 5 mL de soluo de tirosina (500 g mL-1) adicionaram-se 5 mL de soluo de caseinato de sdio (2%) e tampo tris (0,05 mol L-1) at completar o volume de 10 mL e, finalmente, 5 mL de soluo de cido tricloroactico (15%). Os valores de atividade foram obtidos aps 1 h, por leitura da absorbncia em comprimento de onda de 700 nm. Os resultados foram expressos em g por grama de solo seco em 2 horas (g g-12h-1). 3.3.8 Atividade da enzima urease A atividade da urease foi determinada pelo mtodo descrito por TABATABAI & BREMNER (1972), que se baseia na formao de amnia aps a incubao das amostras de solo com uma soluo de uria o substrato da urease durante duas horas. Colocaram-se 5 g de solo em tubo de ensaio, adicionaram-se 0,2 mL de tolueno e 9 mL de tampo tris (0,05 mol L-1) e 1 mL de soluo de uria (0,2 mol L-1). Os volumes foram misturados e incubados por 2 horas a 37 C em banho maria. Em seguida, adicionaram-se 35 mL de soluo de cloreto de potssio (2,5 mol L-1), as amostras foram agitadas e o volume completado para 50 mL pela adio de soluo de cloreto de potssio (2,5 mol L-1). O controle foi feito adicionando-se soluo de uria (0,2 mol L-1) aps a incubao e adio de 35 mL de soluo de cloreto de potssio (2,5 mol L-1). As suspenses foram filtradas e a partir desse extrato procedeu-se determinao da amnia liberada, transferindo-se 20 mL desse extrato para um tudo de ensaio juntamente com 0,2 g de xido de magnsio. Colocaram-se previamente 5 mL da
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soluo de cido brico com indicadores (0,32 mol L-1) em Erlenmeyer, que receberam as amostras at serem obtidos 30 mL do destilado. O volume destilado foi titulado com soluo de cido sulfrico 0,005 mol L-1. Um mililitro de soluo de cido sulfrico 0,005 mol L-1 equivalente a 70 g NH4 N. Os resultados foram expressos em micrograma de NH4 N por grama de solo seco, em duas horas (g g-12h-1).
3.4 Anlise Estatstica As avaliaes das oito variveis microbiolgicas nas pocas de incio e florescimento das culturas de vero e inverno, durante trs anos, considerando os quatro manejos e as trs profundidades analisadas, resultaram em um conjunto de dados. Esses dados foram submetidos anlise de varincia e as mdias foram comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. estatstico Sisvar (FERREIRA, 2000). Utilizou-se o programa As variveis nmeros de microrganismos
amonificadores e celulolticos foram transformadas em log x e o quociente metablico foi transformado em x+1. No foram avaliadas as interaes entre os manejos, pocas e profundidades analisados, pois o objetivo era a escolha de indicadores microbiolgicos. As variveis microbiolgicas capazes de diferirem entre os tratamentos considerados foram sugeridas como possveis indicadoras da qualidade do solo, uma vez que so capazes de detectar mudanas, sejam estas relacionadas ao uso, clima ou profundidade, mostrando-se sensveis aos fenmenos que ocorrem no solo. Os mesmos dados foram submetidos a uma anlise multivariada (anlise de componentes principais). Os valores usados nesta anlise estatstica corresponderam s mdias das quatro repeties de cada tratamento. A tabulao destes dados encontra-se em anexo. Foi utilizado o programa computacional Genes (CRUZ, 2001). Na anlise de componentes principais (ACP), o primeiro componente principal explica o maior grau de variabilidade, que vai diminuindo para cada componente medida que sua ordem aumenta (CP 2, CP 3...). TABACHNICK & FIDELL (2007) relataram que, se o pesquisador est interessado em demonstrar somente fatores irrefutveis, o mnimo possvel de componentes dever ser retido. Segundo a mesma fonte, s variveis com coeficiente de 0,32 ou acima devem ser interpretadas e a partir disso, a escolha das variveis a serem interpretadas definida pela preferncia do pesquisador. Os autovalores (raiz), nas tabelas, representam o peso de cada varivel sobre o eixo, dando uma indicao direta da contribuio relativa de cada eixo para a
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explicao da varincia total dos dados. Os coeficientes modulares apontam qual o grau de importncia de cada varivel. Dessa maneira, para a obteno das variveis indicadoras, ou seja, que se mostraram mais sensveis aos tratamentos utilizados, foi retida a varivel de maior coeficiente no CP1 em cada uma das trs camadas, considerando as anlises para obteno dos ndices partir das pocas de amostragem nas trs profundidades. Nas anlises em que s as profundidades foram consideradas, retiveram-se os componentes que explicassem aproximadamente 60% da varincia total dos dados. A partir da, a varivel de maior coeficiente dentro de cada CP retido foi selecionada, constituindo o conjunto mnimo de dados para cada uma das trs profundidades avaliadas. Foi feita ainda uma estimativa da freqncia com que as variveis com coeficiente 0,32, conforme proposto por TABACHNICK & FIDELL (2007), apareceram no CP 1, permitindo avaliar o nmero de vezes que a varivel esteve relacionada com o componente que explica a maior varincia dos dados e, dessa forma, mostrou-se mais sensvel s modificaes ocorridas no solo. Os resultados encontrados utilizando-se a anlise multivariada (ACP) foram confrontados com os resultados obtidos pela anlise de varincia, buscando encontrar as variveis microbiolgicas que se mostraram boas indicadoras da qualidade do solo para ambas anlises estatsticas.
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4 RESULTADOS E DISCUSSO
4.1 Microbiota 4.1.1 Quantificao de microrganismos amonificadores O nmero de microrganismos amonificadores diferiu entre os usos, pocas e profundidades de amostragem (Figura 1). Dentre os usos, a mata teve mdia com valores maiores que os demais. Quando se estuda a comunidade microbiana e sua atividade em solos de mata, espera-se encontrar, de modo geral, valores relativamente maiores quando comparados a solos com outro tipo de vegetao e mesmo em solos sob culturas, j que a microbiota favorecida pela maior diversidade florstica e pela cobertura vegetal, que propicia maior acmulo de matria orgnica (Tabela 3) fornecendo maior quantidade de nutrientes para o desenvolvimento da comunidade microbiana (BANDICK & DICK, 1999). Outro fator considervel a presena de grande quantidade de razes, j que a mata um sistema com pouca interveno humana. De acordo com CARDOSO & FREITAS (1992), o nmero de microrganismos na rizosfera muito maior que o de microrganismos em solo no rizosfrico devido maior concentrao de compostos orgnicos oriundos da raiz, que favorecem o crescimento de microrganismos. MELLONI et al. (2001) tambm observaram os maiores valores em ecossistema de mata, quando comparado com uma rea de campo cerrado, apesar de no haver diferena significativa entre os microrganismos amonificadores. No solo, o desenvolvimento dos microrganismos depende da disponibilidade de matria orgnica, umidade, temperatura, nutrientes, pH e presena de microrganismos parasitas e antagonistas (GAMA-RODRIGUES, 1999). Talvez um ou mais desses fatores possa ter estimulado eficientemente os microrganismos no florescimento do inverno, uma vez que essa poca apresentou a maior comunidade amonificadora. Devese considerar tambm que uma grande variedade de microrganismos amonificantes atua nesse nicho, e talvez os fatores caractersticos dessa poca tenham exercido um efeito positivo nas comunidades microbianas amonificadoras presentes. CATTELAN & VIDOR (1990), em experimento de campo no Rio Grande do Sul, observaram que as variaes climticas exerceram maior efeito sobre a flutuao da microbiota do solo, verificando-se uma tendncia de estmulo em pocas de boa
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disponibilidade hdrica e temperaturas amenas incio de agosto ao incio novembro perodo correspondente s coletas do florescimento de inverno no presente trabalho. No Estado de So Paulo, a disponibilidade hdrica no caracterstica do perodo aqui denominado florescimento do inverno, uma vez que aqui incluiu os meses de junho a setembro; entretanto, o incio de setembro caracterizado pelo princpio das chuvas e a elevao das temperaturas. Deve-se considerar tambm o aporte de substrato orgnico via resduos da cultura de vero, que a soja, com baixa relao C/N. No mesmo estudo, verificou-se que a biomassa e a comunidade microbiana tiveram valores maiores na camada superficial, o que est de acordo com os valores mostrados na figura 1.
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200 180 160
(A)
N amonificadores (n. 106)
140 120 100 80 60 40 20 0
b b
Mata
Seringueira Usos
Plantio direto
Plantio convencional
200 180
(B)
160 140 120 100 80 60 40 20 0
b b b
Incio vero
Florescimento vero
Incio inverno
Florescimento inverno
pocas de amostragem
200 180 160
(C) a
140 120 100 80 60 40 20 0
0-10 cm
10-20 cm Profundidades
20-40 cm
Figura 1 - Quantificao de microrganismos amonificadores no decorrer de trs anos agrcolas em funo dos usos (A), pocas de amostragem (B) e profundidades (C) do solo. Dados originais; para anlise de varincia os dados foram transformados em log x. Letras iguais no diferem entre si pelo teste de Tukey a 5%. 22
4.1.2 Quantificao de microrganismos celulolticos No decorrer dos trs anos agrcolas analisados, verificou-se que os nmeros de microrganismos celulolticos no foram influenciados pelo uso do solo (Figura 2). MELLONI et al. (2001), avaliando a comunidade microbiana na regio de Minas Gerais, tambm no encontraram diferenas significativas entre as reas de mata ciliar e de campo cerrado para o nmero de microrganismos celulolticos. Quando se observam as pocas de amostragem, os nmeros de microrganismos mostraram-se distintos nas duas primeiras pocas analisadas (incio e florescimento do vero) e no diferiram entre si nas pocas de inverno. Os maiores valores foram encontrados no incio da cultura de vero. CASTRO et al. (1993), avaliando a atividade de microrganismos do solo em sistemas de manejo, verificaram maiores nmeros de microrganismos celulolticos no momento do preparo do solo para a cultura de vero, mas somente quando considerado o sistema de plantio direto. Considerando a profundidade, os nmeros de microrganismos diferiram entre si, nas trs camadas. Os maiores valores observados na superfcie confirmam novamente os dados encontrados por CATTELAN & VIDOR (1990), em cujo trabalho se observou que a profundidade 0-5 cm estimulou a comunidade e a atividade microbianas.
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(A)
8000 7000
N celulolticos (n.102)
6000 5000 4000 3000 2000 1000 0
Mata
Seringueira Usos
Plantio direto
8000 7000
(B)
6000 5000 4000 3000 2000 1000 0
b c Florescimento inverno
c Incio vero Florescimento vero Incio inverno
pocas de amostragem
8000 7000
(C)
6000 5000 4000 3000 2000 1000 0
b c
0-10 cm
20-40 cm
Figura 2 - Quantificao de microrganismos celulolticos no decorrer de trs anos agrcolas em funo dos usos (A), pocas de amostragem (B) e profundidades (C) do solo. Dados originais; para anlise de varincia os dados foram transformados em log x. Letras iguais no diferem entre si pelo teste de Tukey a 5%.
24
4.1.3 Carbono da biomassa microbiana O solo da mata apresentou o maior valor de carbono microbiano (Figura 3). O maior aporte de material orgnico incorporado ao solo (Tabela 3), principalmente via depsito de plantas, implicou um maior acmulo de carbono pela biomassa microbiana e, conseqentemente, melhores condies de desenvolvimento da microbiota. Os dados encontrados por MATSUOKA et al. (2003) confirmam as condies mais favorveis em reas sob vegetao nativa. Segundo esses autores, a diversidade florstica das reas nativas e a presena da vegetao durante todo o ano influenciam a produo (quantidade) e qualidade da serrapilheira. O somatrio desses fatores contribuiria para a ocorrncia de maiores nveis de biomassa microbiana nessas reas, comparativamente s reas de cultivo. As amostras de solo sob plantio direto e convencional no diferiram da seringueira e nem mesmo entre si. O fato de a biomassa microbiana ser sensvel s alteraes nas formas de carbono orgnico do solo devido s mudanas no manejo ou uso do solo sugeriria alguma diferena estatstica significativa. Porm, esse resultado no foi verificado. Segundo POWLSON et al. (1987), depois que uma alterao induzida, a biomassa sofre flutuaes at atingir um novo equilbrio. No entanto, importante considerar que as reas sob os plantios direto e convencional envolvidas neste trabalho j possuem mais de sete anos e a comunidade microbiana pode estar adaptada s condies do solo, acarretando menores flutuaes na biomassa para alcanar um novo equilbrio. Esse fato explica a ausncia de diferenas significativas entre os plantios direto e convencional e entre esses dois tratamentos e a rea sob seringueira, onde se espera que o solo esteja sob condio mais estvel, j com equilbrio da microbiota. Os valores mais elevados dos teores de C microbiano implicam maior imobilizao temporria de nutrientes e, conseqentemente, em menores perdas de nutrientes no sistema solo-planta (MERCANTE et al., 2004). Atualmente h diversos trabalhos envolvendo o estudo do carbono da biomassa microbiana em variedades de cultivo, ecossistemas de cerrado e em solos com rea degradada (ROLDAN et al., 2007; BALOTTA et al., 2003; CONCEIO et al., 2005; VARGAS & SCHOLLES, 2000; OLIVEIRA et al., 2001; PEREZ et al., 2004; VASQUES-MURRIETA et al., 2006). De maneira geral, os teores de carbono da biomassa microbiana (CBM) comentados nesses artigos mantiveram-se maiores na camada superficial do solo (at 10 cm de
25
profundidade), independentemente das caractersticas das reas estudadas, aspecto que se repetiu no presente estudo. As maiores concentraes nas camadas mais superficiais podem ser explicadas pelo acmulo de resduos vegetais na superfcie, da matria orgnica biodegradvel e de carbono orgnico do solo. Nas reas em que houve preparo do solo, ao longo do tempo, h ainda, uma interferncia na quantidade de carbono orgnico total e na sua distribuio ao longo do perfil (GERALDES et al., 1995). Isso no foi observado no presente trabalho para nenhuma das variveis comentadas at agora: nmeros de microrganismos amonificadores e celulolticos e carbono da biomassa microbiana. A incorporao de material ao solo pelo plantio convencional poderia ter induzido aumento nas quantidades de microrganismos em comparao com os outros usos do solo, particularmente no plantio direto, no qual a mesma cultura mantida, mas sem incorporao de matria vegetal em profundidade. Considerando as pocas de amostragem, as pocas de inverno diferiram entre si e das pocas de amostragem de vero. DEBOSZ et al. (1999), com o objetivo de determinar a extenso das variaes temporais num perodo de dois anos em algumas variveis microbiolgicas, entre elas o CBM, observaram que houve variao de acordo com as pocas, as quais poderiam ser associadas com fatores ambientais (como temperatura e umidade, por exemplo) e crescimento das culturas e no devido a diferenas pelo estmulo da matria orgnica. Os maiores valores nas amostragens ocorridas no vero nos fazem supor que algumas caractersticas associadas a essa estao, tais como maiores temperaturas e umidade, e a cultura, com distinto padro de exsudao radicular, influenciaram a microbiota, resultando em maiores teores de CBM. Os valores de carbono da biomassa microbiana diferiram entre si quando consideradas as profundidades, com os maiores valores observados na superfcie. ZAMORA et al. (2005), com o objetivo de avaliar as mudanas na biomassa microbiana e na atividade enzimtica influenciadas pelo efeito de diferentes sistemas de rotao de culturas na Venezuela, verificaram que os parmetros biolgicos entre eles, o carbono da biomassa microbiana foram mais influenciados na camada superficial (0-10 cm) e diminuram significativamente com a profundidade do solo. GLOVER et al. (2000), DANDRA et al. (2002) e MATSUOKA et al. (2003) tambm verificaram a influncia da profundidade no carbono da biomassa microbiana.
26
(A)
800 700 600
a b b b
CBM (g C g-1solo)
500 400 300 200 100 0
Mata
Seringueira Usos
Plantio direto
(B)
800 700
CBM (g C g-1 solo)
600 500 400 300 200 100 0
b c
Incio vero
Florescimento vero
Incio inverno
pocas de amostragem
800 700 600
(C) a b c
CBM (g C g-1 solo)
500 400 300 200 100 0
0-10 cm
20-40 cm
Figura 3 - Teores de carbono da biomassa microbiana no decorrer de trs anos agrcolas em funo dos usos (A), pocas de amostragem (B) e profundidades (C) do solo. Letras iguais no diferem entre si pelo teste de Tukey a 5%.
27
4.1.4 Liberao de CO2 Com base nos resultados da figura 4, verificou-se que as maiores perdas de CCO2 por atividade microbiana ocorreram na mata e na seringueira. A maior liberao de CO2 nos solos em condies naturais isto , sem ao antrpica pode ser funo da constante incorporao de resduos, com acmulo de matria orgnica em fraes lbeis, promovendo uma alta atividade biolgica sobre esse material, liberando CO2. CATELLAN & VIDOR (1990) avaliando os efeitos de fatores ambientais sobre a biomassa e atividade microbiana, tambm verificaram a maior liberao de CO2 no campo nativo. Verificaram que os sistemas que promovem boa cobertura vegetal apresentaram maior biomassa, em oposio aos sistemas com solo descoberto, onde houve menores biomassa e liberao de CO2. Os menores valores de liberao de CO2 no presente trabalho foram verificados no plantio convencional, manejo em que os resduos vegetais so incorporados ao solo. Entretanto, essa incorporao de resduos deve ter estimulado os microrganismos devido mais rpida disponibilizao de nutrientes, fazendo com que o plantio convencional e o direto no diferissem entre si, apesar das diferenas no uso do solo (Tabela 3). Os valores da liberao de CO2 nas diferentes pocas de amostragem avaliadas no apresentaram diferenas estatsticas. CATELLAN & VIDOR (1990), num experimento de campo conduzido durante um ano com as seqncias culturais aveia/milho; aveia + vica/milho + caupi; siratro; guandu + milho, pangola, alm de uma rea de pastagem nativa de gramneas e um solo descoberto avaliaram a atividade microbiana do solo verificando que as amostras obtidas no inverno apresentaram menores valores de respirao basal que as do vero. BALOTA et al. (1998), num experimento de campo conduzido durante 3 anos em solo submetido s sucesses de culturas trigo/soja e trigo/milho, preparado pelo sistema convencional e direto, observaram a mesma tendncia. Para VARGAS & SCHOLLES (2000) os microrganismos so muito sensveis e podem ser influenciados pelos fatores biticos e abiticos. Segundo SANTOS & CAMARGO (1999), dentre as variveis climticas, a precipitao pluvial e a temperatura so as que exercem maior influncia. PEA et al. (2005) utilizando a respirao microbiana como indicadora de qualidade do solo em ecossistema florestal, no encontraram variaes na atividade microbiana nas camadas superficiais do solo, ao longo das estaes do ano. Segundo os autores, a avaliao da produo de CO2 em laboratrio dificulta a avaliao do efeito estacional, pois no
28
procedimento analtico, a temperatura mantida constante.
Segundo BROOKES
(1995), citado por FORTES NETO et al. (2007), quando a respirao microbiana determinada em amostras de solo coletadas no campo, situao verificada no presente estudo, essas amostras esto sob influncia das condies climticas do momento da coleta, o que poder proporcionar acentuadas variaes nos resultados. Avaliando o efeito da profundidade do solo, observa-se que as taxas de liberao de CO2 decrescem de acordo com a profundidade. De acordo com VARGAS & SCHOLLES (2000), as diferenas nas atividades do perfil do solo refletem a distribuio dos resduos vegetais, o que foi confirmado pelos resultados. Esse efeito, no entanto, no foi evidenciado para os nmeros de microrganismos amonificadores, que no diferiram entre as camadas 10-20 e 20-40 cm.
29
(A)
50 45 40
(g CO2 g-1dia-1)
35 30 25 20 15 10 5 0
CO2
b c
Mata
Seringueira Usos
Plantio direto
(B)
50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0
dia-1)
(g C-CO2 g
CO2
-1
Incio vero
Florescimento vero
Incio inverno
pocas de amostragem
(C)
50 45
(g C-CO2 g dia )
40 35 30 25 20 15 10 5 0
CO2
-1
-1
b c
0-10 cm
20-40 cm
Figura 4 - Liberao de CO2 no decorrer de trs anos agrcolas em funo dos usos (A), pocas de amostragem (B) e profundidades (C) do solo. Letras iguais no diferem entre si pelo teste de Tukey a 5%. 30
4.1.5 Quociente metablico O quociente metablico (qCO2) no diferiu entre os usos (Figura 5). De acordo com ANDERSON & DOMSCH (1993), o quociente metablico tem a funo de um possvel indicador de estresse ambiental, sendo que altos valores corresponderiam necessidade de uma alta demanda de energia da comunidade microbiana para sua manuteno (situao de estresse). Segundo SPARLING (1997), citado por NIELSEN & WINDING (2002), deve-se ter cuidado quando se interpreta o qCO2, uma vez que um alto quociente pode inferir estresse, um ecossistema imaturo ou uma maior oferta de substrato para a respirao. LEONARDO (2003), avaliando o uso sustentvel de uma microbacia, na regio do Paran, observou pela anlise dos componentes principais, que os solos nos dois fragmentos florestais tidos como testemunhas encontravam-se com sua microbiota em condies mais estressantes do que a rea de soja que vem sendo cultivada h onze anos sob o sistema de plantio direto com rotao de culturas. Em contrapartida, DANDRA et al. (2002), analisando alteraes em atributos biolgicos na adoo de sistemas de manejo em reas sob cerrado nativo, em um experimento de campo, observaram que o qCO2 no diferiu entre o cerrado nativo e os diferentes sistemas de manejo estudados. De maneira semelhante, CASTILLO & JOERGENSEN (2001), estudando os efeitos de manejos ecolgicos e convencionais nos indicadores qumicos e biolgicos de qualidade na Nicargua, no verificaram efeito significativo do sistema de manejo nos valores do quociente metablico. No houve diferenas estatsticas quando considerada as pocas de amostragem e as profundidades. O alto coeficiente de variao pode ter sido o responsvel por esses resultados. Em estudos de Microbiologia do Solo, so relativamente comuns coeficientes de variao mais altos, pelo nmero de fatores que pode influenciar os microrganismos. Tratando-se de um experimento de campo, esse efeito pode ser ainda mais pronunciado. MERCANTE et al. (2004), avaliando no decorrer de trs safras de vero e inverno (anos 2001, 2002 e 2003) a influncia de diferentes tipos de manejo na biomassa microbiana, verificaram semelhantes qCO2 entre os diferentes sistemas, exceto na safra de vero 2002-2003, com o sistema sob pastagem contnua obtendo maior valor.
31
(A)
0,100
Quociente metablico (g CO2 g CBM-1dia-1)
0,080 0,060 0,040 0,020 0,000
a a
Mata
Seringueira Usos (B)
Plantio direto
0,100 0,080 0,060 0,040 0,020
a
0,000
a Florescimento vero Incio inverno Florescimento inverno
Incio vero
pocas de amostragem (C)

0,100
0,080 0,060 0,040 0,020
a a
0,000
0-10 cm
20-40 cm
Figura 5 - Quociente metablico no decorrer de trs anos agrcolas em funo dos usos (A), pocas de amostragem (B) e profundidades (C) do solo. Dados originais; para a anlise de varincia os dados foram transformados em x+1. Letras iguais no diferem entre si pelo teste de Tukey a 5%. 32
4.1.6 Atividade da enzima celulase Enzimas so mediadoras diretas do catabolismo dos componentes minerais e orgnicos do solo. Sendo assim, a compreenso de sua atuao permite um Muitos trabalhos entendimento estimado das importantes reaes dos processos que ocorrem no solo (DICK et al.,1996, citados por NIELSEN & WINDING, 2002). utilizam a enzima celulase como varivel nos estudos. Analisando os dados apresentados na figura 6, observa-se que no houve diferenas significativas entre os usos, diferentemente dos resultados encontrados por MARCHIORI JNIOR & MELO (1999). Esses autores verificaram em rea sob pastagem por 25 anos, atividades de celulase 47 e 74% maiores do que as encontradas no solo sob mata natural, para as profundidades 0-10 e 10-20 cm, respectivamente. Tal resultado foi atribudo entrada de substrato enriquecido em celulose no agrossistema, causando a sntese de novas molculas de celulase e resultando nas diferenas significativas encontradas. No presente estudo, a presena de material celulsico em alguns tratamentos no foi suficiente para estimular a microbiota do solo. Considerando as pocas de amostragem (Figura 6), a atividade da enzima celulase foi estimulada no florescimento da cultura de inverno. Esperava-se o maior nmero de microrganismos celulolticos nessa mesma poca, o que no foi observado. De acordo com a figura 2, o incio da cultura de vero apontou o maior nmero de celulolticos e as pocas de inverno, os menores. Os dados sugerem que diversos fatores influenciem essas variveis e que a resposta de ambas a esses fatores seja diferente, embora no haja teste de correlao para comprovar tal afirmao. As amostragens de vero para a atividade enzimtica no diferiram entre si. UHLIRVA et al. (2005), avaliando a transformao microbiana da matria orgnica em solos de vegetao de altitude submetidos a diferentes manejos um com arao e gradagem da cultura, outro caracterizado pela manuteno dos resduos da cultura na superfcie e um terceiro sem tratamento durante cinco anos, observaram que a decomposio da celulose e sua taxa de mineralizao possuem uma alta variabilidade temporal; entretanto, o efeito do tipo de manejo foi significativo. Os autores verificaram que as taxas de mineralizao e decomposio da celulose foram maiores nas reas sem incorporao dos resduos culturais e sem tratamento, o que no foi verificado no presente trabalho, uma vez que no houve diferenas significativas entre os manejos. utilizam enzimas para avaliao dos efeitos do manejo no solo, porm, poucos deles
33
Analisando a profundidade, a atividade enzimtica diminuiu com as camadas mais profundas de solo. Esse resultado era esperado devido maior oferta de resduos vegetais, ricos em celulose, na superfcie. O nico tratamento em que se pode supor alguma influncia sobre as camadas mais profundas o plantio convencional, onde ocorre revolvimento do solo. O nmero de microrganismos celulolticos tambm decresceu de acordo com a profundidade (Figura 2).
34
(A)
250
Atividade de celulase (g g-124h-1)
200 150 100 50 0
a a
Mata
Seringueira Usos
(B)
Plantio direto
250
200
a ab b b
150 100 50 0
Incio vero
Florescimento vero
Incio inverno
pocas de amostragem
(C)
250
a b c
200
150
100
50
0-10 cm
20-40 cm
Figura 6. Atividade da enzima celulase no decorrer de trs anos agrcolas em funo dos usos (A), pocas de amostragem (B) e profundidades (C) do solo. Letras iguais no diferem entre si pelo teste de Tukey a 5%.
35
4.1.7 Atividade da enzima protease A atividade de enzimas, de maneira geral, afetada pela natureza da cobertura vegetal (DEBOSZ et al., 1999; SICARDI et al., 2004; ROLDN et al., 2007). Segundo SINSABAUGH (1994), a avaliao de enzimas oferece as vantagens da sensibilidade, especificidade e facilidade. Os dados referentes atividade da protease em relao aos usos do solo mostraram que a mata diferiu dos demais, que no diferiram entre si. A maior diversidade de resduos vegetais e tambm o maior volume de ambiente rizosfrico da mata devem ter sido, mais uma vez, responsveis pelo resultado. Era esperado que o plantio direto e o plantio convencional diferissem entre si devido a maneira como os resduos vegetais da cultura anterior so dispostos no solo. GARCIA & NAHAS (2007), avaliando a biomassa e atividades microbianas em solo sob pastagem com diferentes lotaes de ovinos, observaram que todas as variveis microbianas, entre elas a enzima protease, diminuram sua atividade com o aumento da profundidade do solo. De acordo com os mesmos autores, o solo da camada superficial (0-10 cm) tende a acumular matria orgnica e nutrientes, resultando em aumento da biomassa e atividade microbianas. A mesma profundidade foi apontada por SILVA & MELO (2004) como sendo a de maior atividade proteoltica. Avaliando a atividade enzimtica e as pocas de amostragem, verifica-se que houve algum estmulo aos microrganismos proteolticos no incio da cultura de vero. Em contrapartida, o florescimento de inverno teve a menor atividade enzimtica. WICK et al. (2002), avaliando as variaes temporais de indicadores microbiolgicos e bioqumicos em solos de diferentes qualidades na Nigria, constataram que a atividade da protease flutuou acentuadamente durante o curso do ano e exibiu pronunciada diferena entre as estaes.
36
(A)
1400
Atividade de protease (g g-1 2h-1)
1200 1000 800 600 400 200 0
a b b b
Mata
Seringueira Usos
Plantio direto
(B)
1400 1200
Atividade de protease (g g-1 2h-1)
1000 800 600 400 200 0
b Incio vero Florescimento vero
c Florescimento inverno
Incio inverno
pocas de amostragem
(C)
1400 1200
Atividade de protease (g g-12h-1)
1000 800 600 400 200 0
a b
0-10 cm
20-40 cm
Figura 7 - Atividade da enzima protease no decorrer de trs anos agrcolas em funo dos usos (A), pocas de amostragem (B) e profundidades (C) do solo. Letras iguais no diferem entre si pelo teste de Tukey a 5%. 37
4.1.8 Atividade da enzima urease Os microrganismos esto diretamente envolvidos nos ciclos dos nutrientes no solo. O processo de mineralizao do nitrognio resultante da degradao de formas orgnica do elemento, decorrente da atividade desses microrganismos, desempenhando assim um importante papel no ciclo do nitrognio. A quantificao da enzima urease pode fornecer uma indicao do potencial do solo em converter nitrognio orgnico em mineral, dando incio ao processo de mineralizao do nitrognio. A mata manteve os maiores valores para a atividade da urease dentre todos os usos do solo avaliados. A oferta de maior quantidade e, principalmente, de diversidade de substratos potencialmente mineralizveis na mata deve ter favorecido os microrganismos (BANDICK & DICK, 1999). mudanas de qualidade atravs de ZHANG et al. (2006), avaliando qumicas, bioqumicas e propriedades
microbiolgicas em reas degradadas na China, tambm encontraram as maiores atividades de urease em solos sem interferncia antrpica. BANDICK & DICK (1999) verificaram que a enzima urease mostrou boa separao entre os tratamentos, fato que no foi verificado nestes resultados (Figura 8), uma vez que o plantio direto e o convencional no diferiram entre si. Talvez, novamente o efeito na atividade enzimtica s seja verificado quando se analisa a profundidade. A camada 10-20 no diferiu das camadas 0-10 e 20-40 cm, diferentes entre si. O plantio convencional, caracterizado pelo revolvimento do solo, pode ter estimulado os microrganismos na camada intermediria. Ainda assim, a camada 0-10 cm mostrou os maiores valores da enzima urease, concordando com os dados encontrados por GARCIA & NAHAS (2007). VALPASSOS et al. (2007), avaliando a recuperao das propriedades microbiolgicas do solo, tambm observaram maior atividade da urease em reas menos degradadas. Nessas reas havia uma maior quantidade de carbono orgnico e maior nmero de microrganismos, existindo uma correlao positiva com a atividade enzimtica. Quando se considera o nmero de microrganismos amonificadores tambm envolvidos na ciclagem do nitrognio no presente estudo (Figura 1), recordase que os maiores nmeros tambm correspondiam profundidade 0-10 cm de solo. Avaliando as pocas de amostragem, verificou-se que o incio da cultura de vero foi a poca com maior atividade enzimtica (Figura 8). Segundo CAMARGO et al. (1999), a quantidade de N-mineralizado em um determinado perodo depende de
38
fatores como temperatura, umidade, aerao, quantidade e natureza do material orgnico presente. Assim, algum ou alguns desses fatores deve ter influenciado a atividade dos microrganismos ureolticos nesse perodo. O nmero de microrganismos amonificadores (Figura 1), ao contrrio da atividade enzimtica, foi maior no florescimento da cultura de inverno. A variedade dos microrganismos atuantes nesse nicho um fator importante a ser considerado. NIELSEN & WINDING (2002) afirmam que a grande variedade de microrganismos amonificadores torna as perturbaes menos sensveis quando se analisam medidas relacionadas ao ciclo do nitrognio.
39
(A)
6000 5000 4000 3000 2000 1000 0
Atividade de urease (g g-1 2h-1)
a b b b
Mata
Seringueira Usos
Plantio direto
(B)
6000 5000
4000 3000 2000 1000 0
Incio vero
Florescimento Incio inverno Florescimento vero inverno pocas de amostragem

(C)
6000 5000
4000 3000 2000 1000 0
a ab b
0-10 cm
20-40 cm
Figura 8 - Atividade da enzima urease no decorrer de trs anos agrcolas em funo dos usos (A), pocas de amostragem (B) e profundidades (C) do solo. Letras iguais no diferem entre si pelo teste de Tukey a 5%.
40
4.2 ndices de Qualidade O uso da estatstica multivariada, mais especificamente da anlise dos componentes principais (ACP), teve por objetivo avaliar o potencial de cada varivel microbiolgica como indicadora da qualidade do solo.
4.2.1 ndices obtidos considerando as pocas de amostragem nas trs profundidades avaliadas 4.2.1.1 Inicio da cultura de vero O primeiro componente sempre o mais importante. No incio da cultura de vero, o primeiro componente explicou 42,6% da varincia total dos dados na profundidade 0-10 cm (Tabela 5), 36,8% na profundidade 10-20 cm (Tabela 7) e 42,3% na profundidade 20-40 cm (Tabela 9). Essa porcentagem sugere uma boa sntese do conjunto de dados originais, justificando a prioridade dada ao primeiro componente principal quando se considera a seleo de indicadores para se analisar a qualidade do solo. Observando os valores modulares dos coeficientes, pode-se verificar a varivel mais significativa na formao do componente principal (CP) e conseqentemente dos ndices de qualidade. Dessa maneira, na tabela 6, o quociente metablico apresentou o maior coeficiente (0,51), justificando sua reteno como indicador de qualidade na profundidade 0-10 cm, no incio da cultura de vero. novamente ao quociente metablico (-0,52). Tabela 5. Estimativas dos autovalores associados aos componentes principais, juntamente com sua importncia relativa (raiz %) e acumulada, referente s variveis microbiolgicas avaliadas na profundidade 0-10 cm, nas amostragens do incio da cultura de vero e independentemente do uso do solo.
Componente 1 2 3 Raiz 3,4068909 1,6954562 1,2013938 Raiz (%) 42,5861357 21,1932026 15,0174221 Acumulada (%) 42,5861357 63,7793383 78,7967604
Nas tabelas 8 e 10
respectivamente, os maiores coeficientes corresponderam enzima urease (-0,52) e o
41
Tabela 6. Coeficientes associados a cada varivel microbiolgica avaliada na profundidade 0-10 cm durante a definio dos componentes principais, no incio da cultura de vero e independentemente do uso do solo.
Varivel Amonificadores Celulolticos Carbono da biomassa Respirao Quociente metablico Celulase Protease Urease Componente 1 -0,1354 -0,1518 -0,1177 0,4579 0,5119* 0,4582 -0,2141 0,4661
*Valor em negrito se refere a varivel com o maior coeficiente associado ao primeiro componente principal.
Figura 9 - Projeo dos componentes principais 1, 2 e 3 (com respectivamente 43%, 21% e 15% da variao explicadas) retidos na anlise das oito variveis microbiolgicas no incio da cultura de vero, profundidade 0-10 cm. Legenda: letras M, S, C e D correspondem aos tratamentos mata, seringueira, convencional e plantio direto; nmeros 3, 4 e 5 correspondem s amostragens em 2003, 2004 e 2005, respectivamente.
42
Tabela 7. Estimativas dos autovalores associados aos componentes principais, juntamente com sua importncia relativa (raiz %) e acumulada, referente s variveis microbiolgicas avaliadas na profundidade 10-20 cm, nas amostragens do incio da cultura de vero e independentemente do uso do solo.
Varivel Amonificadores Celulolticos Carbono da biomassa Respirao Quociente metablico Celulase Protease Urease Componente 1 0,3991 0,104 -0,2376 -0,0488 -0,4293 -0,2103 0,5171 -0,5246*
*Valores em negrito se refere a varivel com o maior coeficiente associado ao primeiro componente principal.
Tabela 9. Estimativas dos autovalores associados aos componentes principais, juntamente com sua importncia relativa (raiz %) e acumulada, referente s variveis microbiolgicas avaliadas na profundidade 20-40 cm, nas amostragens do incio da cultura de vero e independentemente do uso do solo.
43
Varivel Amonificadores Celulolticos Carbono da biomassa Respirao Quociente metablico Celulase Protease Urease Componente 1 0,3158 -0,2322 -0,3951 0,4341 0,5276* 0,1249 -0,3128 0,3319
Figura 10 - Projeo dos componentes principais 1, 2 e 3 (com respectivamente 37%, 26% e 18% da variao explicadas) retidos na anlise das oito variveis microbiolgicas no incio da cultura de vero, profundidade 10-20 cm. Legenda: letras M, S, C e D correspondem aos tratamentos mata, seringueira, convencional e plantio direto; nmeros 3, 4 e 5 correspondem s amostragens em 2003, 2004 e 2005, respectivamente.
44
Figura 11 - Projeo dos componentes principais 1, 2 e 3 (com respectivamente 42%, 20% e 15% da variao explicadas) retidos na anlise das oito variveis microbiolgicas no incio da cultura de vero, profundidade 20-40 cm. Legenda: letras M, S, C e D correspondem aos tratamentos mata, seringueira, convencional e plantio direto; nmeros 3, 4 e 5 correspondem s amostragens em 2003, 2004 e 2005, respectivamente. Considerando a poca correspondente ao incio da cultura de vero (Tabelas 5 a 10), verifica-se que a anlise dos componentes principais (ACP) apontou, dentre as oito variveis disponveis, o quociente metablico (qCO2) e a enzima urease como os descritores mais sugestivos para se avaliar a qualidade do solo. Ambas as variveis se mostraram mais sensveis s modificaes ocorridas nos ambientes estudados. Estudos tm identificado o qCO2 como uma varivel sensvel para detectar a mudana de qualidade de solo (PANKHURST, 2002; LEONARDO, 2003; MERCANTE et al., 2004; CARVALHO, 2005; FIALHO et al., 2006). ISLAM & WEIL (2000) afirmaram que a melhoria da qualidade do solo diminui o quociente, ou seja, o qCO2 negativamente correlacionado com a qualidade do solo sendo, portanto, um indicador do seu estresse, distrbio ou desequilbrio funcional. De acordo com TTOLA & CHAER (2002), a taxa de respirao por unidade de biomassa microbiana (qCO2) seria uma varivel de interpretao aparentemente mais indicada para apontar as mudanas ocorridas no solo e a sua qualidade. S se deve ficar atento na adoo do qCO2 como ndice de qualidade, no momento da sua interpretao, uma vez que um alto quociente pode inferir trs interpretaes: stress, um ecossistema imaturo ou mais
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substrato respirvel (SPARLING,1997, citado por NIELSEN & WINDING, 2002), sendo necessrio parcimnia na interpretao dos resultados. O qCO2 adotado como indicador no programa de monitoramento da qualidade do solo na Alemanha (NIELSEN & WINDING, 2002). As enzimas tm sido sugeridas como potenciais indicadores biolgicos da qualidade do solo. A enzima urease participante direta do ciclo do nitrognio, contribuindo para a disponibilizao de N-inorgnico no solo. CARVALHO (2005), estudando atributos bioqumicos como indicadores da qualidade do solo, verificou que a enzima urease serviu como indicadora do potencial de funcionalidade dos ecossistemas e, aliada aos demais atributos biolgicos, tornou-se uma boa indicadora de qualidade do solo. ZHANG et al. (2006), analisando propriedades qumicas, bioqumicas e microbiolgicas do solo, verificaram que as propriedades microbiolgicas incluindo a enzima urease - so mais sensveis s modificaes causadas no solo degradao e declnio da vegetao. Porm, para as enzimas em geral, necessrio cuidado com a manuteno das caractersticas do local de amostragem, obteno, preparo e armazenamento das amostras, inibio de atividade microbiana, concentrao de substrato, pH do meio, tempo de incubao das amostras (DICK, 1994). O descuido com um desses itens pode ocasionar uma interpretao errnea do ndice de qualidade, prejudicando sua funcionalidade. 4.2.1.2 Florescimento da cultura de vero Ao se realizar a ACP para as variveis microbiolgicas na poca do florescimento da cultura de vero, verifica-se que, sozinho, o CP 1 conseguiu explicar 36% da variao dos dados na primeira profundidade, 39% na segunda profundidade e 30% na terceira profundidade (Tabelas 11,13 e 15 respectivamente). Avaliando os coeficientes do CP 1, dentro das trs profundidades na devida ordem (Tabelas 12, 14 e 16), a enzima urease (0,52), o carbono da biomassa microbiana (0,50) e o nmero de microrganismos amonificadores (0,57) foram as variveis mais significativas na formao do CP.
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Tabela 11. Estimativas dos autovalores associados aos componentes principais, juntamente com sua importncia relativa (raiz %) e acumulada, referente s variveis microbiolgicas avaliadas na profundidade 0-10 cm, nas amostragens do florescimento da cultura de vero e independentemente do uso do solo.
Tabela 12. Coeficientes associados a cada varivel microbiolgica avaliada na profundidade 0-10 cm durante a definio dos componentes principais, no florescimento da cultura de vero e independentemente do uso do solo.
Varivel Amonificadores Celulolticos Carbono da biomassa Respirao Quociente metablico Celulase Protease Urease Componente 1 0,481 -0,1052 -0,0263 0,5082 -0,1177 -0,0045 0,4518 0,5297*
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Varivel Amonificadores Celulolticos Carbono da biomassa Respirao Quociente metablico Celulase Protease Urease Componente 1 0,4628 0,0917 0,5072* 0,4617 -0,1575 0,0424 -0,1941 0,4926
Varivel Amonificadores Celulolticos Carbono da biomassa Respirao Quociente metablico Celulase Protease Urease Componente 1 0,5704* 0,0386 0,4978 0,4303 0,1918 0,3566 -0,1905 -0,2
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Figura 12 - Projeo dos componentes principais 1, 2 e 3 (com respectivamente 36%, 26% e 17% da variao explicadas) retidos na anlise das oito variveis microbiolgicas no florescimento da cultura de vero, profundidade 0-10 cm. Legenda: letras M, S, C e D correspondem aos tratamentos mata, seringueira, convencional e plantio direto; nmeros 3, 4 e 5 correspondem s amostragens em 2003, 2004 e 2005, respectivamente.
Figura 13 - Projeo dos componentes principais 1, 2 e 3 (com respectivamente 39%, 26% e 20% da variao explicadas) retidos na anlise das oito variveis microbiolgicas no florescimento da cultura de vero, profundidade 10-20 cm. Legenda: letras M, S, C e D correspondem aos tratamentos mata, seringueira, convencional e plantio direto; nmeros 3, 4 e 5 correspondem s amostragens em 2003, 2004 e 2005, respectivamente.
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Figura 14 - Projeo dos componentes principais 1, 2 e 3 (com respectivamente 30%, 24% e 19% da variao explicadas) retidos na anlise das oito variveis microbiolgicas no florescimento da cultura de vero, profundidade 20-40 cm. Legenda: letras M, S, C e D correspondem aos tratamentos mata, seringueira, convencional e plantio direto; nmeros 3, 4 e 5 correspondem s amostragens em 2003, 2004 e 2005, respectivamente. O carbono da biomassa microbiana tem sido proposto como um indicador para as condies do solo. As mudanas significativas dessa varivel podem ser detectadas muito antes que as alteraes na matria orgnica possam ser percebidas, possibilitando a correo do problema antes que a perda da qualidade do solo seja mais severa (TTOLA & CHAER, 2002). ROLDN et al. (2007), avaliando indicadores de sustentabilidade em solos com prticas conservacionistas, verificaram que o CBM um indicador sensvel da qualidade do solo. FRANCHINI et al. (2007) apontaram os parmetros associados com a atividade biolgica, entre eles o CBM, como sendo indicadores rpidos e sensveis de efeitos do manejo no solo, demonstrando sua utilidade como indicadores de qualidade nos trpicos. BARETTA (2007), estudando reas de Araucaria angustifolia no Estado de So Paulo, verificou que o CBM foi um dos melhores indicadores de qualidade. VASQUES-MURRIETA (2006), fazendo uso da ACP, verificou que o CBM tambm uma varivel sensvel quando se avaliam solos contaminados com metais pesados. Segundo LARSON & PIERCE (1994), as taxas de mudana da biomassa microbiana podem indicar, em longo tempo, a qualidade do solo. Dessa forma, a
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avaliao da biomassa microbiana por mtodos diretos ou indiretos de determinao, est includa no minimum data set dos programas de monitoramento da Alemanha, Holanda, Sua, Repblica Checa, entre outros (NIELSEN & WINDING, 2002). Vrios trabalhos mostraram a eficincia da CBM em indicar aspectos da qualidade do solo, funcionando assim, como um ndice de qualidade eficaz (ISLAM & WEIL, 2000; PANKHURST et al., 2002; DANDRA et al, 2002; MATSUOKA et al., 2003; SILVEIRA et al., 2004; CONCEIO et al., 2005; COSTA et al., 2006). A enzima urease novamente foi apontada como ndice de qualidade, porm agora, na poca do florescimento da cultura de vero. O nmero de microrganismos amonificadores foi o terceiro dos indicadores de qualidade do solo sugeridos para a poca em questo. Segundo MELLONI (2007) a contagem de microrganismos simples e rpida, porm insensvel a mudanas rpidas nas comunidades microbianas, alm de avaliar uma pequena poro da comunidade total de microrganismos do solo. Ainda assim, segundo o mesmo autor, tais microrganismos so um dos indicadores disponveis mais sensveis e teis em classificar sistemas degradados e contaminados. De acordo com MELLONI et al. (2001), os microrganismos esto diretamente envolvidos nos ciclos dos nutrientes no solo e a quantificao de grupos importantes d indicao de como os processos esto ocorrendo. Entretanto, avaliando as caractersticas biolgicas do solo sob mata ciliar e campo cerrado, esses autores encontraram baixa sensibilidade destes microrganismos em discriminar esses sistemas. A diversidade microbiana est inclusa em muitos programas de monitoramento da qualidade do solo em pases europeus. Apesar do importante papel dos microrganismos e seus processos na recuperao de reas degradadas, so poucos os estudos que relacionam a qualidade do solo com atributos microbiolgicos, especificamente com a diversidade microbiana (MELLONI, 2007). Esses atributos podem atuar como indicadores microbiolgicos por mostrarem a estabilidade da comunidade e descrever a dinmica ecolgica de uma comunidade e os impactos de estresse naquela comunidade. Considerando que a amonificao ou degradao dos compostos nitrogenados orgnicos o passo limitante da mineralizao feita por uma grande diversidade de microrganismos amonificadores e que sua quantificao nos solos fornece um indicativo do processo de mineralizao do nitrognio e do ciclo desse elemento (MELLONI et al., 2001), a incluso dessa varivel como indicadora de qualidade pode 51
ser uma ferramenta eficiente quando combinada com outras variveis indicadoras, aspecto verificado neste estudo. 4.2.1.3 Incio da cultura de inverno A poca em questo teve 32% da variao dos dados explicados pelo CP 1 na profundidade 0-10 cm, 45% na profundidade 10-20 cm e 34% na profundidade 20-40 cm (Tabelas 17, 19 e 21). Analisando os coeficientes, a varivel mais importante na formao do CP 1, dentro da primeira profundidade (Tabela 18) foi o quociente metablico (-0,52). Na profundidade intermediria (10-20 cm), a respirao (0,49) assumiu essa condio (Tabela 20) e por fim, na camada 20-40 cm, o carbono da biomassa (0,57) apresentou o maior coeficiente (Tabela 22). Tabela 17. Estimativas dos autovalores associados aos componentes principais, juntamente com sua importncia relativa (raiz %) e acumulada, referente s variveis microbiolgicas avaliadas na profundidade 0-10 cm, nas amostragens do incio da cultura de inverno e independentemente do uso do solo.
Tabela 18. Coeficientes associados a cada varivel microbiolgica avaliada na profundidade 0-10 cm durante a definio dos componentes principais, no incio da cultura de inverno e independentemente do uso do solo.
Varivel Amonificadores Celulolticos Carbono da biomassa Respirao Quociente metablico Celulase Protease Urease Componente 1 0,3987 0,4627 -0,1857 0,2184 -0,5258* 0,271 -0,3745 -0,3568
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Tabela 19. Estimativas dos autovalores associados aos componentes principais, juntamente com sua importncia relativa (raiz %) e acumulada, referente s variveis microbiolgicas avaliadas na profundidade 10-20 cm, nas amostragens do incio da cultura de inverno e independentemente do uso do solo.
Varivel Amonificadores Celulolticos Carbono da biomassa Respirao Quociente metablico Celulase Protease Urease Componente 1 0,3618 0,3241 0,4777 0,4974* 0,2312 0,0967 0,2504 0,4038
*Valores em negrito se refere a varivel com o maior coeficiente associado ao primeiro componente principal.
Tabela 21. Estimativas dos autovalores associados aos componentes principais, juntamente com sua importncia relativa (raiz %) e acumulada, referente s variveis microbiolgicas avaliadas na profundidade 20-40 cm, nas amostragens do incio da cultura de inverno e independentemente do uso do solo.
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Varivel Amonificadores Celulolticos Carbono da biomassa Respirao Quociente metablico Celulase Protease Urease Componente 1 0,5663 -0,1961 0,5746* -0,1207 -0,5079 -0,0545 -0,0706 0,1739
Figura 15 - Projeo dos componentes principais 1, 2 e 3 (com respectivamente 32%, 24% e 17% da variao explicadas) retidos na anlise das oito variveis microbiolgicas no incio da cultura de inverno, profundidade 0-10 cm. Legenda: letras M, S, C e D correspondem aos tratamentos mata, seringueira, convencional e plantio direto; nmeros 3, 4 e 5 correspondem s amostragens em 2003, 2004 e 2005, respectivamente.
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Figura 16 - Projeo dos componentes principais 1, 2 e 3 (com respectivamente 45%, 23% e 14% da variao explicadas) retidos na anlise das oito variveis microbiolgicas no incio da cultura de inverno, profundidade 10-20 cm. Legenda: letras M, S, C e D correspondem aos tratamentos mata, seringueira, convencional e plantio direto; nmeros 3, 4 e 5 correspondem s amostragens em 2003, 2004 e 2005, respectivamente.
Figura 17 - Projeo dos componentes principais 1, 2 e 3 (com respectivamente 34%, 24% e 16% da variao explicadas) na anlise das oito variveis microbiolgicas no incio da cultura de inverno, profundidade 20-40 cm. Legenda: letras M, S, C e D correspondem aos tratamentos mata, seringueira, convencional e plantio direto; nmeros 3, 4 e 5 correspondem s amostragens em 2003, 2004 e 2005, respectivamente. 55
A adoo da biomassa e do quociente metablico como indicadores de qualidade j foi discutida anteriormente como sendo eficiente na indicao de modificaes ocorridas no solo. A liberao de CO2 ou respirao do solo a oxidao da matria orgnica a CO2 pelos microrganismos aerbios, ocupando uma posio importante no ciclo do carbono nos ecossistemas terrestres. Sua avaliao a tcnica mais freqente para quantificar a atividade microbiana. A atividade dos organismos considerada um atributo positivo para a qualidade do solo, sendo a respirao um atributo sensvel da decomposio de resduos, do giro metablico do carbono orgnico do solo e de distrbios do ecossistema (PAUL et al., 1999). A respirao includa na maioria dos programas de monitoramento do solo em pases europeus (NIELSEN & WINDING, 2002). No Brasil, CONCEIO et al. (2005), PEA et al., (2005), COSTA et al., (2006) e FRANCHINI et al., (2007), verificaram que a liberao de CO2 foi um bom indicador de qualidade do solo. TRINDADE et al. (2000), avaliando a degradao ou recuperao de uma rea sob minerao de ferro, verificaram que a respirao foi capaz de distinguir os estados de perturbao ou recuperao de reas de diferentes reas estudadas. Nos resultados de todas as variveis microbiolgicas avaliadas no presente trabalho, a respirao foi a que se mostrou mais sensvel em relao aos manejos, uma vez que houve trs diferenas significativas: a mata, a seringueira e as reas sob ao antrpica, que no diferiram entre si. Porm, importante cautela na interpretao dos dados da respirao para que seja alcanada a eficincia do indicador. ISLAM & WEIL (2000) verificaram que altas taxas de respirao podem indicar tanto um distrbio ecolgico - como incorporao de resduos como um alto nvel de produtividade do ecossistema. Segundo ALEF (1995), essa varivel tambm altamente influenciada pela temperatura, composio do solo, disponibilidade de nutrientes e estrutura do solo, o que dobra os cuidados exigidos em experimentos de campo. 4.2.1.4 Florescimento da cultura de inverno O primeiro CP na profundidade 0-10 cm, no florescimento da cultura de inverno, explicou sozinho 44% da variao total dos dados (Tabela 23). Avaliando os coeficientes (Tabela 24), a enzima urease (0,50) foi a varivel que apresentou o maior valor. Tanto para a profundidade 10-20 cm quanto para a 20-40 cm, o CP 1 explicou 56
35% da varincia total (Tabelas 25 e 27). Os maiores coeficientes nestas profundidades (Tabelas 26 e 28) foram respectivamente a respirao (0,54) e a enzima protease (0,54). Tabela 23. Estimativas dos autovalores associados aos componentes principais, juntamente com sua importncia relativa (raiz %) e acumulada, referente s variveis microbiolgicas avaliadas na profundidade 0-10 cm, nas amostragens do florescimento da cultura de inverno e independentemente do uso do solo.
Tabela 24. Coeficientes associados a cada varivel microbiolgica avaliada na profundidade 0-10 cm durante a definio dos componentes principais, no florescimento da cultura de inverno e independentemente do uso do solo.
Varivel Amonificadores Celulolticos Carbono da biomassa Respirao Quociente metablico Celulase Protease Urease Componente 1 0,4302 -0,0254 0,3569 0,4498 -0,1265 0,0862 0,4517 0,5071*
Tabela 25. Estimativas dos autovalores associados aos componentes principais, juntamente com sua importncia relativa (raiz %) e acumulada, referente s variveis microbiolgicas avaliadas na profundidade 10-20 cm, nas amostragens do florescimento da cultura de inverno e independentemente do uso do solo.
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Tabela 26. Coeficientes associados a cada varivel microbiolgica avaliada na profundidade 10-20 cm durante a definio dos componentes principais, no florescimento da cultura de inverno e independentemente do uso do solo.
Varivel Componente 1 Amonificadores 0,0048 Celulolticos -0,2977 Carbono da biomassa 0,2787 Respirao 0,5468* Quociente metablico -0,1459 Celulase -0,0443 Protease 0,485 Urease 0,5256 *Valor em negrito se refere a varivel com o maior coeficiente associado ao primeiro componente principal.
Tabela 27. Estimativas dos autovalores associados aos componentes principais, juntamente com sua importncia relativa (raiz %) e acumulada, referente s variveis microbiolgicas avaliadas na profundidade 20-40 cm, nas amostragens do florescimento da cultura de inverno e independentemente do uso do solo.
Tabela 28. Coeficientes associados a cada varivel microbiolgica avaliada na profundidade 20-40 cm durante a definio dos componentes principais, no florescimento da cultura de inverno e independentemente do manejo.
Varivel Amonificadores Celulolticos Carbono da biomassa Respirao Quociente metablico Celulase Protease Urease Componente 1 -0,2503 -0,1643 -0,0304 0,5217 0,3084 -0,2467 0,5418* 0,4333
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Figura 18 - Projeo dos componentes principais 1, 2 e 3 (com respectivamente 44%, 19% e 15% da variao explicadas) retidos na anlise das oito variveis microbiolgicas no florescimento da cultura de inverno, profundidade 0-10 cm. Legenda: letras M, S, C e D correspondem aos tratamentos mata, seringueira, convencional e plantio direto; nmeros 3, 4 e 5 correspondem s amostragens em 2003, 2004 e 2005, respectivamente.
Figura 19 - Projeo dos componentes principais 1, 2 e 3 (com respectivamente 35%, 25% e 19% da variao explicadas) retidos na anlise das oito variveis microbiolgicas no florescimento da cultura de inverno, profundidade 10-20 cm. Legenda: letras M, S, C e D correspondem aos tratamentos mata, seringueira, convencional e plantio direto; nmeros 3, 4 e 5 correspondem s amostragens em 2003, 2004 e 2005, respectivamente. 59
Figura 20 - Projeo dos componentes principais 1, 2 e 3 (com respectivamente 35%, 25% e 16% da variao explicadas) retidos na anlise das oito variveis microbiolgicas no florescimento da cultura de inverno, profundidade 20-40 cm. Legenda: letras M, S, C e D correspondem aos tratamentos mata, seringueira, convencional e plantio direto; nmeros 3, 4 e 5 correspondem s amostragens em 2003, 2004 e 2005, respectivamente.
A respirao mostrou-se novamente um ndice eficiente, porm agora no florescimento da cultura de inverno. A enzima urease, que foi uma das variveis indicativas da qualidade do solo propostas nas pocas de vero (incio e florescimento) tambm, um dos ndices apontados para a avaliao do solo no florescimento da cultura de inverno. A enzima protease, junto com as duas variveis anteriores, fechou o conjunto de variveis apontadas como indicadoras de qualidade no perodo em questo. A hidrlise de protenas um importante passo no ciclo do nitrognio do solo e essencial para a manuteno da fertilidade do solo. WICK et al. (2002), em estudo usando diferentes solos, verificaram que os parmetros utilizados, entre eles a enzima protease, foram indicadores sensveis e teis na qualidade do solo. Como j foi dito, as enzimas esto presentes nos programas de monitoramento da qualidade do solo de diversos pases europeus, e a ustria utiliza, entre outras, a enzima protease. A sensibilidade caracterstica das variveis enzimticas requer cuidados; entretanto, de acordo com TTOLA & CHAER (2002), os procedimentos para a determinao de enzimas so relativamente simples quando comparados com os
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procedimentos analticos realizados para a quantificao de nutrientes em uma anlise de solo de rotina. 4.2.2 ndices obtidos considerando as profundidades avaliadas 4.2.2.1 Primeira profundidade O primeiro CP na profundidade 0-10 cm, explicou 24% da variao (Tabela 29). O coeficiente de maior valor desse componente, de acordo com a tabela 30, corresponde varivel quociente metablico (0,65). O segundo e o terceiro CPs explicaram respectivamente 18% e 17% da varincia, com a respirao (0,62) CP 2 - e a enzima protease (0,52) CP 3 apresentando os maiores coeficientes. Tabela 29. Estimativas dos autovalores associados aos componentes principais, juntamente com sua importncia relativa (raiz %) e acumulada, referente s variveis microbiolgicas avaliadas na profundidade 0-10 cm, no decorrer de trs anos agrcolas e independentemente do uso do solo.
Considerando que os componentes 1, 2 e 3 explicam a variao de 59% da varincia total dos dados originais e que os componentes seguintes explicam varincias com valores desconsiderveis, sugerem-se como ndices de qualidade, em relao a uma profundidade de 0-10 cm de solo, o quociente metablico, a respirao e a enzima protease (Tabela 30). As trs variveis sugeridas j foram comentadas em itens anteriores.
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Tabela 30. Coeficientes associados a cada varivel microbiolgica avaliada na profundidade 0-10 cm durante a definio dos componentes principais e independentemente do uso do solo.
Varivel Amonificadores Celulolticos Carbono da biomassa Respirao Quociente metablico Celulase Protease Urease Componente 1 -0,0856 0,0776 -0,0959 -0,0112 0,6564* 0,4132 0,0001 0,6129 Componente 2 0,5877 -0,2841 0,0496 0,626** 0,0705 0,2015 -0,3585 -0,0741 Componente 3 0,3344 0,4122 0,5109 0,2424 -0,0132 -0,2391 0,526*** 0,2541
*Valores em negrito se referem a varivel com o maior coeficiente associado ao *primeiro, **segundo e ***terceiro componentes principais.
Figura 21 - Projeo dos componentes principais 1, 2 e 3 (com respectivamente 24%, 18% e 17% da variao explicadas) retidos na anlise das oito variveis microbiolgicas. Os pontos representam os tratamentos mata, seringueira, plantio direto e convencional - com seus respectivos anos de amostragem- 2002, 2003, 2004, 2005 dentro da profundidade 0-10 cm.
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4.2.2.2 Segunda profundidade Analisando a profundidade 10-20 cm, independentemente da poca de amostragem, o CP 1 foi responsvel por 30% da variao total dos dados. O CP 2 reteve 19% e o CP 3, 14% (Tabela 31). O CP 1 teve o carbono da biomassa microbiana (0,52) como varivel mais significativa na formao do componente (Tabela 32). No CP 2 e 3, os maiores valores corresponderam ao quociente metablico (0,47) e a enzima urease (0,71). Os trs componentes com suas respectivas variveis explicam 63% da varincia total, permitindo reduzir o nmero de variveis indicadoras de qualidade do solo para os trs ndices em questo. As variveis apontadas j foram discutidas. Tabela 31. Estimativas dos autovalores associados aos componentes principais, juntamente com sua importncia relativa (raiz %) e acumulada, referente s variveis microbiolgicas avaliadas na profundidade 10-20 cm, no decorrer de trs anos agrcolas e independentemente do uso do solo.
Varivel Amonificadores Celulolticos Carbono da biomassa Respirao Quociente metablico Celulase Protease Urease Componente 1 0,3 0,3085 0,5261* 0,5032 -0,2567 -0,2321 0,3082 0,2646 Componente 2 0,2893 -0,2207 0,358 0,3474 0,4787** 0,4673 -0,401 -0,1017 Componente 3 -0,5672 0,1435 0,0414 0,0721 0,3475 0,1198 -0,0164 0,7179***
*Valores em negrito se referem a varivel com o maior coeficiente associado ao *primeiro, **segundo e ***terceiro componentes principais.
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Figura 22 - Projeo dos componentes principais 1, 2 e 3 (com respectivamente 30%, 19% e 14% da variao explicadas) retidos na anlise das oito variveis microbiolgicas. Os pontos representam os tratamentos mata, seringueira, plantio direto e convencional - com seus respectivos anos de amostragem- 2002, 2003, 2004, 2005 dentro da profundidade 10-20 cm. 4.2.2.3 Terceira profundidade O CP 1, considerando a profundidade 20-40 cm, explicou 20% da variao total dos dados. O CP 2 17%, o CP 3 13%, o CP 4 13% (Tabela 33), totalizando 62% da varincia at o quarto componente. As variveis mais significativas na formao dos CPs 1, 2, 3 e 4 corresponderam respectivamente ao quociente metablico (-0,59), nmero de microrganismos amonificadores (0,63), a enzima celulase (0,75) e a liberao de CO2 (-0,57), sendo ento sugeridas como ndices de qualidade (Tabela 34). Tabela 33. Estimativas dos autovalores associados aos componentes principais, juntamente com sua importncia relativa (raiz %) e acumulada, referente s variveis microbiolgicas avaliadas na profundidade 20-40 cm, no decorrer de trs anos agrcolas e independentemente do uso do solo.
Componente 1 2 3 4 Raiz 1,5777261 1,3715463 1,0351209 1,0116574 Raiz (%) 19,7215767 17,1443292 12,9390109 12,645718 Acumulada (%) 19,7215767 36,8659058 49,8049167 62,4506347
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Varivel Amonificadores Celulolticos Carbono da biomassa Respirao Quociente metablico Celulase Protease Urease Componente 1 0,119 0,4426 0,3228 -0,2726 -0,5951* -0,1753 0,3811 0,2853 Componente 2 0,634** -0,3189 0,5205 0,1657 -0,1691 -0,0745 -0,1749 -0,365 Componente 3 -0,0052 0,0952 0,1067 0,1874 0,0339 0,7502*** 0,5466 -0,2857 Componente 4 -0,203 -0,3379 -0,5739**** -0,1434 -0,1112 -0,2363 0,3134 -0,5729
*Valores em negrito se referem a varivel com o maior coeficiente associado ao *primeiro, **segundo, ***terceiro e **** quarto componentes principais.
As celulases so responsveis pela hidrlise da celulose, sendo de extrema importncia na ciclagem do carbono. BANDICK & DICK (1999), estudando os efeitos do manejo na atividade das enzimas, observaram que, embora as enzimas indubitavelmente estejam ligadas s funes crticas dos ciclos dos nutrientes no solo, seu papel na determinao da sade do solo menos claro. Os autores afirmaram que as enzimas podem ser mais teis no monitoramento das tendncias (positivas ou negativas) do solo, eliminando problemas como variaes climticas e adicionando a vantagem de serem indicadoras precoces das transformaes devido aos usos do solo. BALOTA et al. (2004) investigaram a atividade de algumas enzimas, entre elas a celulase, sob sistemas de manejo convencional, direto e rotao de culturas e observaram que a atividade enzimtica do solo um indicador sensvel de alteraes na qualidade, promovidas pelo manejo. De acordo com SINSABAUGH et al.(1993) e NANNIPIERI et al. (2002), citados por TAN et al. (2008), a atividade enzimtica pode integrar informaes sobre o tamanho e atividade das comunidades microbianas e propriedades fsicas e qumicas do solo, podendo ser usada tambm como um eficiente indicador de fertilidade. Dentre os pases europeus que adotam a atividade enzimtica, especificamente a celulase, nos programas de monitoramento de solo, est a Repblica Tcheca (NIELSEN & WINDING, 2002). Os procedimentos relativamente simples e rpidos, possibilitando a incluso nas anlises de rotina (DICK, 1994), somada sensibilidade enzimtica no fornecimento de informaes sobre mudanas nas funes-chave do solo, tornam as enzimas potenciais indicadoras de qualidade, destacando-se aqui a enzima celulase.
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Os demais indicadores de qualidade apontados na terceira profundidade foram discutidos anteriormente.
Figura 23 - Projeo dos componentes principais 1, 2 e 3 (com respectivamente 20%, 17% e 13% da variao explicadas) retidos na anlise das oito variveis microbiolgicas. Os pontos representam os tratamentos mata, seringueira, plantio direto e convencional - com seus respectivos anos de amostragem- 2002, 2003, 2004, 2005 dentro da profundidade 20-40 cm. Ao analisar os dados, verificou-se atravs da utilizao da ACP a obteno de ndices de acordo com as pocas de amostragem e profundidades avaliadas. Este trabalho avalia dados provenientes de um experimento de campo num perodo de trs anos agrcolas. No decorrer desse perodo clara a quantidade de fatores distintos (temperatura, umidade, disponibilidade hdrica, diferenas de manejos, material orgnico, entre outros) atuando sobre o solo e sobre a microbiota propriamente dita. De acordo com HALVORSON (1997), citado por NIELSEN & WINDING (2002), de maneira geral, os componentes do solo (por exemplo, a atividade microbiana, a umidade do solo e os nutrientes solveis) que so dependentes da variao climtica, so tambm, geralmente, sujeitos a uma alta variabilidade espacial. Essa variabilidade, segundo NIELSEN & WINDING (2002), dificulta a habilidade de quantificar as populaes microbianas e os processos no solo. No entanto, freqentes amostragens
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(STENBERG, 1999, citado por TTOLA & CHAER, 2002) e o aumento no nmero de indicadores na avaliao da qualidade podem amenizar variabilidades (MELLONI, 2007). A compilao dos dados referente aos anos agrcolas 2002/2003, 2003/2004 e 2004/2005 e sua posterior anlise permitiram verificar que a cada perodo ou seja, cada poca com suas respectivas caractersticas foram obtidos descritores mais sensveis, portanto mais eficientes na utilizao como ndices de qualidade para aquele perodo. Um resultado similar foi encontrado nas anlises das profundidades. Porm, vale ressaltar que os ndices obtidos a partir das pocas de amostragem, tambm levam o fator profundidade em considerao, o que no verificado nos ndices obtidos somente a partir da profundidade, onde a poca de coleta, com suas peculiaridades climticas, no foi considerada. Essa questo sugere que os ndices apontados de acordo com a poca sejam mais eficientes, por englobar dois itens determinantes: clima e profundidade. Observando as figuras 9 a 23, verifica-se que no houve agrupamentos relevantes entre os usos do solo (com seus respectivos anos de amostragem) nas pocas e profundidades estudadas. THEODORO et al. (2003), relacionando as mudanas nas caractersticas qumicas, fsicas e microbiolgicas de um Latossolo Vermelho distrfico ao longo de um ano, sob agrossistemas de produo de caf orgnico, em converso e convencional, em relao a um fragmento de mata nativa, visualizaram por meio da relao entre os CP 1 e CP 2, o agrupamento da mata e dos diferentes sistemas do cafeeiro, em resposta s formas de manejo adotadas. LEONARDO (2003), avaliando o uso sustentvel de uma microbacia hidrogrfica do estado do Paran, fez uso da ACP para avaliar os atributos biolgicos do solo e observou a separao de reas estudadas. O autor verificou que o CP 1 agrupou reas qualitativamente semelhantes (reas de plantio direto, cultivo mnimo e sob fragmento florestal de Latossolo Roxo), com menores valores mdios desses atributos em comparao com a rea de fragmento florestal da Terra Roxa Estruturada. BARETTA et al (2007), avaliando o potencial da diversidade de famlias de colmbolos como indicadores de qualidade do solo em reas com Araucaria angustifolia, verificaram atravs da ACP que as diferentes reas com araucria no foram separadas pelos atributos qumicos e microbiolgicos do solo, resultado similar ao encontrado no presente trabalho, em que no houve separao dos usos do solo.
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Supe-se que os fatores climticos promoveram mudanas mais acentuadas na microbiota do solo, enquanto que as alteraes causadas pelo uso do mesmo, sejam apontadas pelos microrganismos a longo prazo. De acordo com ALEXANDER (1977), em um ambiente to complexo quanto o solo onde fatores qumicos e fsicos interagem continuamente, influenciando as condies de temperatura, umidade, aerao, entre outras, podemos perceber que a comunidade microbiana presente regida fortemente por estas, afetando sobremaneira a composio microbiana, tanto qualitativamente quanto quantitativamente. Dessa forma, variveis microbiolgicas so influenciadas, de maneira geral, pelos fatores que interferem no solo. A identificao de diferentes indicadores de qualidade a cada poca e profundidade estudadas confirma a sensibilidade dos microrganismos no solo. Considerando a profundidade, diversos trabalhos constataram sua capacidade de amenizar os efeitos dos tratamentos feitos na superfcie (CATTELAN & VIDOR, 1990; VARGAS & SCHOLLES, 2000; ZAMORA et al., 2005; GARCIA & NAHAS, 2007). Essa caracterstica tambm foi verificada nesse trabalho. Para indicao dos ndices de qualidade levando em conta as profundidades, na camada 20-40 cm de solo (Tabela 31), foi necessrio reter at o quarto componente principal para alcanar 60-70% da explicao total dos dados. Assim, o nmero de indicadores de qualidade apontados nos 20-40 cm de solo foi maior que nas camadas 010 e 10-20 cm. Os menores efeitos nessa profundidade acarretam respostas menos significativas da atividade microbiana, surgindo ento, a necessidade de um quarto indicador para verificar as possveis alteraes. Nas anlises de varincia, quando analisados o efeito das pocas de amostragem e da profundidade na microbiota do solo tambm se confirmaram de maneira geral, a sensibilidade dos microrganismos aos fatores climticos e a caracterstica da profundidade em reduzir o efeito do tratamento. TRASAR-CEPEDA et al. (1998), estudando um ndice de qualidade associando propriedades biolgicas e bioqumicas em solos nativos da Espanha, tambm verificaram que as propriedades biolgicas dos solos estudados variaram amplamente com a sazonalidade e com a profundidade. De acordo com NANNIPIERI (1994), a variabilidade dentro e entre as estaes um importante fator a ser considerado na interpretao das medidas da atividade enzimtica. Segundo o autor, qualquer comparao entre diferentes tratamentos de solo deve ser feita no mesmo perodo.
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4.3 Comparao entre os ndices Obtidos nas Anlises Estatsticas Os dados obtidos com a quantificao das oito variveis microbiolgicas durante os trs anos agrcolas avaliados, analisados pelo teste de comparao de mdias - Tukey (5%) indicaram que os fatores usos, pocas de amostragem e profundidades do solo influenciaram a microbiota do solo, como era esperado. Diversos trabalhos associaram variveis microbiolgicas como boas ou no indicadoras de qualidade do solo pela comparao de mdias dos dados (BALOTA et al., 1998; DANDRA et al., 2002; PANKHURST et al., 2002; BALOTA et al., 2004; CONCEIO et al., 2005; PEA et al., 2005; FIALHO et al., 2006; FRANCHINI et al., 2007). Nos resultados deste trabalho, a comparao de mdias apontou as variveis nmero de microrganismos celulolticos, carbono da biomassa microbiana e as enzimas protease e celulase como boas indicadoras para efeitos de poca de amostragem. No caso da profundidade, as variveis mais sensveis foram nmero de microrganismos celulolticos, respirao, CBM, e enzimas celulase e protease. A liberao de CO2 foi a varivel que exibiu maiores diferenas entre os usos do solo. Analisando esses dados, observou-se que o CBM, as enzimas celulase e protease e o nmero de microrganismos celulolticos foram ao mesmo tempo sensveis s pocas e s profundidades. J a liberao de CO2 se mostrou sensvel para diferentes usos e profundidades do solo. Ambas variveis - enzima celulase e o nmero de microrganismos celulolticos - esto relacionadas ao ciclo do carbono do solo. A quantificao dos microrganismos celulolticos j foi apontada por SICARDI et al. (2004) como uma varivel sensvel na indicao de modificaes. Entretanto, LARSON & PIERCE (1994) afirmaram que, como os atributos do solo esto interrelacionados, geralmente um deles pode ser mais vantajoso que o outro na incluso do minimum data set (MDS). No caso, a enzima celulase assumiu essa posio, possuindo procedimentos relativamente simples e rpidos, o que possibilita a incluso em anlises de rotina. Assim, de acordo com os resultados de comparao de mdias, as variveis mais adequadas a serem utilizadas como indicadoras de qualidade do solo so CBM, as enzimas celulase e protease e a liberao de CO2. No entanto, segundo MELLONI (2007) importante considerar que a quantificao microbiana da qualidade do solo gera muitos dados microbiolgicos e 69
bioqumicos, o que pode dificultar a interpretao dos reais dados.
A estatstica
multivariada simplifica a interpretao de uma grande quantidade de dados e um recurso importante na indicao de ndices de qualidade do solo (TTOLA & CHAER, 2002; NIELSEN & WINDING, 2002). SENA et al. (2002) afirmam que enquanto os mtodos univariados so apropriados quando s uma varivel medida sistematicamente em vrias amostragens e um melhor entendimento dos processos do ecossistema do solo necessita de um conjunto de vrias propriedades e ferramentas analticas multivariadas. Trabalhos mais recentes tm usado essas ferramentas nas suas anlises (LEONARDO, 2003; SILVEIRA et al., 2004; BARETTA et al., 2007; CAMPOS et al., 2007). Na anlise dos componentes principais realizada com as oito variveis estudadas foram obtidos ndices nas trs profundidades dentro de cada uma das pocas de amostragem estudadas e ndices nas trs profundidades. No incio da cultura de vero, os ndices foram qCO2 e a enzima urease e no florescimento dessa cultura, a enzima urease, o CBM e o nmero de microrganismos amonificadores. Nas culturas de inverno, o qCO2, liberao de CO2 e o CBM foram os ndices do incio da cultura e as enzimas urease e protease e a respirao corresponderam aos ndices do florescimento. Analisando a profundidade, os ndices foram qCO2, liberao de CO2 e enzima protease para a primeira profundidade, CBM, qCO2 e a enzima urease para a segunda e por fim, qCO2, nmero de microrganismos amonificadores, enzimas celulase e liberao de CO2. Com base nessas informaes verificou-se que foram variveis comuns entre os indicadores por pocas e profundidades, o qCO2, as enzimas urease e protease, o CBM, a liberao de CO2 e o nmero de microrganismos amonificadores. Para determinao de um minimum data set com as variveis apontadas pela anlise multivariada, foi considerada novamente a interrelao entre os atributos do solo, julgando assim, o mais vantajoso na incluso do grupo de ndices (LARSON & PIERCE, 1994). O nmero de microrganismos amonificadores e a enzima urease esto relacionados ao ciclo do nitrognio. De acordo com DICK et al. (1996), citados por NIELSEN & WINDING (2002), protocolos fceis e bem documentados so utilizados para avaliao de um grande nmero de enzimas do solo, entre elas, a urease. Isso possibilita uma determinao simples e de custo mais baixo, critrio importante na escolha de indicadores para monitoramento do solo.
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Dessa maneira, o conjunto de ndices obtido pela anlise multivariada para avaliao de qualidade foram: o qCO2, as enzimas urease e protease, o CBM e a liberao de CO2. A reteno das variveis microbiolgicas com coeficiente 0,32, como sugerido por TABACHNICK & FIDEL (2007), no primeiro componente principal das anlises, permitiu ainda, avaliar a freqncia com que esses atributos estiveram relacionados com o componente que explica a maior varincia dos dados, sendo portanto, variveis mais sensveis s alteraes ocorridas no solo (Figura 24). Notou-se que a varivel qCO2 foi apontada como uma indicadora de qualidade eficiente na anlise dos componentes principais; entretanto, na comparao de mdias, no diferiu em nenhum dos fatores estudados. O alto coeficiente de variao pode ter influenciado os resultados. Lembrando que coeficientes mais altos so comuns em estudos de Microbiologia do Solo, ainda mais se tratando de um experimento de campo, e que, o qCO2, resulta de uma razo entre o CO2 liberado e o CBM, variveis que se destacaram nas anlises. A enzima urease foi o atributo com o maior nmero de ocorrncias no primeiro CP das anlises. Esse resultado justifica a incluso dessa varivel s melhores indicadoras de qualidade do solo. Comparando os resultados das duas anlises estatsticas, observou-se que o CBM, a respirao e a enzima protease foram variveis comuns entre os dois mtodos estatsticos empregados. Em acrscimo a essas, est a enzima urease. Na anlise multivariada, pelo menos uma dessas quatro variveis microbiolgicas esteve presente nos CPs 1, quando considerado coeficiente 0,32. Esse resultado sugere que essas quatro variveis so as mais adequadas para serem utilizadas como indicadoras de qualidade do solo. Percebeu-se por ambas anlises estatsticas que as variveis microbiolgicas so indicadoras potenciais de modificaes no solo, e desta maneira, so indispensveis quando se procura avaliar a qualidade do mesmo.
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12 11
Nmero de ocorrncias no CP1
10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 amonificadores celulolticos carbono da biomassa respirao quociente metablico celulase protease urease
Variveis microbiolgicas
Figura 24 Freqncia de ocorrncias das variveis microbiolgicas com coeficiente 0,32 no primeiro componente principal das anlises, independente do uso, poca e profundidade do solo. Ainda h muito a se estudar a respeito dos processos microbianos, estrutura das comunidades e variaes temporais e espaciais no solo. A avaliao da sua qualidade simplesmente uma ferramenta na dinmica das propriedades e processos do solo, sendo til na deteco de mudanas positivas ou negativas causadas no sistema. Enquanto no se dominar o conhecimento dos nveis de atividade biolgica e o funcionamento sustentvel do ecossistema, os primeiros dados obtidos a respeito de indicadores de qualidade j auxiliam no estabelecimento de melhores prticas de manejo e determinao da qualidade do solo. Vale ressaltar que todos os mtodos biolgicos apresentam vantagens e deficincias, recomendando-se serem utilizados em conjunto com outros atributos fsicos e qumicos, j que a funcionalidade e sustentabilidade dos diversos sistemas so governadas pela interao desses atributos (MELLONI, 2007).
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CONCLUSES
a) A microbiota mais sensvel aos fatores climticos e profundidade do que aos usos do solo, e por isso as avaliaes de qualidade devem ser feitas para uma mesma camada de solo e poca de amostragem. b) As variveis microbiolgicas, de maneira geral, possuem potencial como indicadoras da qualidade do solo. c) O carbono da biomassa microbiana, a liberao de CO2 e as enzimas protease e urease so as variveis mais sensveis s alteraes do solo, sendo identificadas pela comparao de mdias e pela anlise multivariada; d) No foi detectado um ndice nico que consiga descrever e quantificar a microbiota do solo em todos os usos, pocas e profundidades do solo; entretanto, a utilizao de um conjunto de variveis promissora.
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ANEXOS
ANEXO 1 Mdias das quatro repeties das oito variveis microbiolgicas na mata, profundidade 0-10 cm, nas pocas de incio e florescimento das culturas de vero e inverno, durante trs anos.
Amostragens(1) Ano 2002 2003 2003 2003 2003 2004 2004 2004 2004 2005 2005 2005
(1) (2)
Variveis microbiolgicas(2) Mata (0-10 cm) NMA nmero . 106 10,77 10,00 234,54 62,37 10,78 39,30 20,60 67,35 10,48 97,49 0,91 0,38 NMC nmero . 102 161,80 13,00 2,06 7,89 5,765 31,65 3,46 7,42 18,70 10,11 0,25 1,15 CO2 g CO2 g-1 dia-1 36,81 57,36 59,04 50,40 78,40 80,07 58,38 62,25 57,60 70,32 86,95 94,75 CBM g C g-1de solo seco 1117,26 711,18 982,80 394,80 703,03 2152,34 570,73 554,07 915,69 726,49 664,55 789,37 qCO2 g C g h-1 0,03 0,06 0,06 0,13 0,71 0,03 0,12 0,12 0,06 0,10 0,13 0,12 AC g.g1dia-1 296,40 221,10 250,80 258,50 395,47 203,75 306,17 201,57 197,50 238,42 195,50 315,52 AP g g-1 2h-1 3183,30 204,30 381,50 118,80 239,77 210,70 224,00 113,67 6126,90 197,90 539,10 123,97 AU g g-1 2h-1 11891,40 1684,70 2074,10 2074,10 21493,70 1807,17 3801,35 2140,40 2289,25 1562,30 1694,25 2007,80
poca ICV FCV ICI FCI ICV FCV ICI FCI ICV FCV ICI FCI
ICV: incio da cultura de vero; FCV: florescimento da cultura de vero; ICI: incio da cultura de inverno; FCI: florescimento da cultura de inverno; NMA: nmero de microrganismos amonificadores; NMC: nmero de microrganismos celulolticos; CO2: respirao; CBM: carbono da biomassa microbiana; qCO2: quociente metablico; AC: atividade de celulase; AP: atividade de protease; AU: atividade de urease.
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ANEXO 2 Mdias das quatro repeties das oito variveis microbiolgicas na seringueira, profundidade 0-10 cm, nas pocas de incio e florescimento das culturas de vero e inverno, durante trs anos.
Variveis microbiolgicas(2) Seringueira (0-10 cm) Ano 2002 2003 2003 2003 2003 2004 2004 2004 2004 2005 2005 2005
(1) (2)
Amostragens(1) poca ICV FCV ICI FCI ICV FCV ICI FCI ICV FCV ICI FCI NMA nmero . 106 19,43 10,74 316,88 18,82 5,76 33,73 12,45 14,73 9,23 20,23 0,38 0,32 NMC nmero . 102 466,85 8,15 2,45 8,78 0,39 18,51 11,22 8,27 9,44 8,72 2,66 0,61 CO2 g CO2 g-1 dia-1 30,10 30,44 34,59 27,97 39,22 41,93 34,54 27,37 34,66 31,62 43,37 28,47
CBM g C g-1de solo seco 984,88 706,40 838,32 156,00 343,28 1592,67 518,9 292,4 629,10 587,10 413,52 411,07
qCO2 g C g h-1 0,031 0,035 0,041 1,01 0,20 0,06 0,14 0,18 0,05 0,05 0,10 0,07
AC g.g1dia-1 174,81 189,90 305,80 237,75 165,97 196,20 448,35 356,12 183,65 183,70 163,12 119,37
AP g g-1 2h-1 1961,90 91,21 182,02 23,41 91,87 65,25 149,12 0 3832,10 117,17 214,92 46,82
AU g g-1 2h-1 5397,20 854,04 1121,23 1117,16 9547,17 1168,87 1156,65 1119,62 1247,40 539,22 1085,80 1114,70
85
ANEXO 3 Mdias das quatro repeties das oito variveis microbiolgicas no solo sob plantio direto, profundidade 0-10 cm, nas pocas de incio e florescimento das culturas de vero e inverno, durante trs anos.
Amostragens(1) Ano 2002 2003 2003 2003 2003 2004 2004 2004 2004 2005 2005 2005
(1) (2)
Variveis microbiolgicas(2) Plantio direto (0-10 cm) NMA nmero . 106 17,84 3,39 198,04 11,22 2,78 48,99 11,88 13,00 10,31 44,03 0,12 0,18 NMC nmero . 102 490,07 615 3,27 23,66 7,44 13,97 23,82 40,43 10,70 0,49 0,54 0,80 CO2 g CO2 g-1 dia-1 16,77 17,62 24,38 13,47 28,82 47,18 12,80 19,85 22,79 27,40 23,52 29,07 CBM g C g de solo seco
-1
qCO2 g C g h-1 0,01 0,03 0,05 0,22 0,07 0,04 0,07 0,07 0,02 0,10 0,11 0,12
AC g.g1dia-1 188,36 226,16 248,36 240,22 182,37 209,52 270,82 304,07 194,35 242,80 225,90 176,37
AP g g-1 2h-1 2273,60 104,76 99,93 57,02 88,32 133,75 33,47 32,80 4458,80 75,77 166,40 81,25
AU g g-1 2h-1 6523,20 482,21 743,98 702,48 12282 644,92 773,07 701,25 763,65 319,50 714,90 703,72
1023,96 618,18 482,16 92,35 517,66 1200,70 190,26 571,55 927,30 248,75 211,52 235,06
86
ANEXO 4 Mdias das quatro repeties das oito variveis microbiolgicas no solo sob plantio convencional, profundidade 0-10 cm, nas pocas de incio e florescimento das culturas de vero e inverno, durante trs anos.
Amostragens(1) Ano 2002 2003 2003 2003 2003 2004 2004 2004 2004 2005 2005 2005
(1) (2)
Variveis microbiolgicas(2) Plantio convencional (0-10 cm) NMA nmero . 106 10,86 3,96 156,07 8,82 2,59 26,85 9,80 8,15 6,73 46,98 0,20 0,22 NMC nmero . 102 100,23 17,61 3,68 18,66 8,42 8,94 17,14 17,99 8,68 1,35 0,55 1,43 CO2 g CO2 g-1 dia-1 24,76 18,33 17,60 15,12 36,57 50,39 14,64 16,82 30,67 23,02 20,95 23,95 CBM g C g de solo seco
-1
qCO2 g C g h-1 0,02 0,02 0,03 0,50 0,14 0,06 0,07 0,08 0,04 0,10 0,07 0,10
AC g.g1dia-1 168,05 202,01 225,62 193,50 140,90 209,72 307,22 279,50 195,20 194,30 144,02 107,50
AP g g-1 2h-1 1072,11 57,41 115,47 54,58 83,12 39,47 95,30 48,60 2061,10 75,35 135,65 60,57
AU g g-1 2h-1 4486,50 614,18 607,46 592,94 8236,80 685,97 477,10 591,67 736,37 542,40 737,82 594,22
988,92 715,72 557,84 101,05 367,52 731,81 217,02 245,04 741,55 228,70 272,17 231,73
ICV: incio da cultura de vero; FCV: florescimento da cultura de vero; ICI: incio da cultura de inverno; FCI: florescimento da cultura de inverno NMA: nmero de microrganismos amonificadores; NMC: nmero de microrganismos celulolticos; CO2: respirao; CBM: carbono da biomassa microbiana; qCO2: quociente metablico; AC: atividade de celulase; AP: atividade de protease; AU: atividade de urease.
87
Amostragens(1) Ano 2002 2003 2003 2003 2003 2004 2004 2004 2004 2005 2005 2005
(1) (2)
Variveis microbiolgicas(2) Mata (10-20 cm) NMA nmero . 106 7,04 8,28 244,57 20,89 5,11 41,03 26,4 22,93 7,96 209,77 0,64 0,26 NMC nmero . 102 211,29 1,55 1,56 5,09 8,99 10,21 7,60 4,97 9,60 1,78 0,79 0,71 CO2 g CO2 g-1 dia-1 18,16 30,37 61,6 28,82 53,82 40,72 25,21 26,12 35,97 31,67 43,32 53,72 CBM g C g de solo seco
-1
qCO2 g C g h-1 0,02 0,04 0,08 0,23 0,12 0,05 0,07 0,10 0,05 0,09 0,11 0,10
AC g.g1dia-1 129,43 162,58 182,95 269,91 120,325 157,825 210,6 317,375 138,55 167,35 155,3 222,45
AP g g-1 2h-1 1349,96 138,80 203,33 60,10 138,22 62,95 82,45 49,67 2561,70 214,82 324,22 70,52
AU g g-1 2h-1 6567,95 1320,96 1170,62 1446,67 11966,80 1776,40 1165,05 1448,90 1169,10 865,52 1176,20 1444,45
1024,64 757,89 717,00 131,73 472,94 1422,69 400,57 266,93 734,93 371,21 407,34 525,88
88
Amostragens(1) Ano 2002 2003 2003 2003 2003 2004 2004 2004 2004 2005 2005 2005
(1) (2)
Variveis microbiolgicas(2) Seringueira (10-20 cm) NMA nmero . 106 16,85 2,19 87,85 14,58 3,17 32,37 10,68 12,97 6,62 24,01 0,34 0,17 NMC nmero . 102 77,75 10,77 1,69 2,92 0,95 7,34 2,34 2,65 4,20 5,32 1,80 0,195 CO2 g CO2 g-1 dia-1 19,37 15,79 19,80 17,42 21,02 28,61 9,83 13,10 20,19 14,27 18,97 13,70 CBM g C g de solo seco
-1
qCO2 g C g h-1 0,02 0,02 0,04 0,32 0,07 0,03 0,05 0,11 0,04 0,03 0,07 0,03
AC g.g1dia-1 125,13 104,46 148,96 131,66 108,07 99,47 177,67 170 142,20 109,45 120,25 93,32
AP g g-1 2h-1 1019,75 0 139,98 24,77 13,82 0 30,87 49,55 2025,65 0 249,10 0
AU g g-1 2h-1 6742,90 683,79 766,71 801,18 12317 805,97 769,62 773,05 1168,70 561,62 763,80 829,32
842,91 646,87 550,67 58,21 334,10 1056,82 155,74 384,10 486,66 540,83 252,69 383,44
89
ANEXO 7 Mdias das quatro repeties das oito variveis microbiolgicas no solo sob plantio direto, profundidade 10-20 cm, nas pocas de incio e florescimento das culturas de vero e inverno, durante trs anos.
Amostragens(1) Ano 2002 2003 2003 2003 2003 2004 2004 2004 2004 2005 2005 2005
(1) (2)
Variveis microbiolgicas(2) Plantio direto (10-20 cm) NMA nmero . 106 9,41 1,27 107,90 5,30 3,32 23,93 17,14 4,39 6,61 32,05 0,12 0,20 NMC nmero . 102 298,05 6,23 2,79 4,14 3,94 30,48 6,36 6,43 17,21 0,62 1,59 1,27 CO2 g CO2 g-1 dia-1 10,12 6,06 11,25 12,71 18,62 23,85 5,79 10,87 14,35 12,50 11,37 15,27 CBM g C g de solo seco
-1
qCO2 g C g h-1 0,01 0,01 0,02 0,15 0,09 0,04 0,04 0,10 0,03 0,07 0,07 0,27
AC g.g1dia-1 158,53 178,92 151,77 264,08 220,30 223,42 222,90 381,62 96,77 134,42 80,65 146,55
AP g g-1 2h-1 362,17 52,68 133,53 26,25 79,95 42,12 126,15 0 644,40 63,25 140,92 52,50
AU g g-1 2h-1 3984,15 572,90 582,57 632,80 7313,90 629,10 592,35 627,35 654,40 516,72 572,80 638,25
939,44 692,81 604,15 90,02 319,54 559,49 193,10 435,25 522,86 195,81 179,76 163,24
90
Amostragens(1) Ano 2002 2003 2003 2003 2003 2004 2004 2004 2004 2005 2005 2005
(1) (2)
Variveis microbiolgicas(2) Plantio convencional (10-20 cm) NMA nmero . 106 12,48 2,60 140,85 15,24 4,19 17,43 10,70 19,50 6,71 59,85 0,21 0,28 NMC nmero . 102 195,15 8,69 3,85 1,43 0,91 26,56 5,80 1,44 13,73 1,01 0,14 1,28 CO2 g CO2 g-1 dia-1 15,37 11,17 13,68 11,34 25,03 26,36 8,30 15,07 20,19 13,40 14,55 20,92 CBM g C g-1de solo seco 2674,08 655,38 636,25 169,26 296,45 996,97 258,07 174,64 593,46 138,17 199,19 236,49 qCO2 g C g h-1 0,02 0,02 0,02 0,11 0,08 0,03 0,07 0,28 0,03 0,10 0,08 0,09 AC g.g1dia-1 149,46 181,63 170,94 249,07 203,22 195,27 216,97 317,12 95,70 168,02 124,92 181,02 AP g g-1 2h-1 889,61 129,34 78,85 12,61 113,17 16,12 63,95 0 1666 242,57 93,75 25,22 AU g g-1 2h-1 6726,50 594,23 574,02 600,50 12588 717,95 561,55 589,97 864,52 470,52 586,50 611,10
ICV: incio da cultura de vero; FCV: florescimento da cultura de vero; ICI: incio da cultura de inverno; FCI: florescimento da cultura de inverno NMA: nmero de microrganismos amonificadores; NMC: nmero de microrganismos celulolticos; CO2: respirao; CBM: carbono da biomassa microbiana; qCO2: quociente metablico; AC: atividade de celulase; AP: atividade de protease; AU: atividade de urease.
91
Amostragens(1) Ano 2002 2003 2003 2003 2003 2004 2004 2004 2004 2005 2005 2005
(1) (2)
Variveis microbiolgicas(2) Mata (20-40 cm) NMA nmero . 106 4,07 6,92 125,84 5,79 3,79 9,98 36,00 5,36 6,55 58,86 0,44 0,21 NMC nmero . 102 69,47 2,09 1,54 7,90 0,24 4,85 4,62 7,58 2,54 7,10 0,14 0,26 CO2 g CO2 g-1 dia-1 15,70 13,86 32,09 26,40 42,45 33,27 19,98 17,17 29,08 22,00 32,32 35,37 CBM g C g de solo seco
-1
qCO2 g C g h-1 0,02 0,03 0,06 0,55 0,20 0,05 0,10 0,17 0,05 0,11 0,15 0,10
AC g.g1dia-1 149,41 136,30 113,42 98,96 111,77 105,77 136,12 107,62 187,05 166,82 90,72 90,30
AP g g-1 2h-1 994,51 1,15 190,32 52,05 41,52 2,30 74,87 49,10 1947,60 0 305,77 55
AU g g-1 2h-1 3279,00 873,18 742,68 817,67 5565,50 1343,10 781,97 817,35 992,57 403,02 703,40 818,00
838,54 601,35 556,32 131,19 305,76 953,40 235,06 421,56 578,61 212,40 217,23 344,81
92
Amostragens(1) Ano 2002 2003 2003 2003 2003 2004 2004 2004 2004 2005 2005 2005
(1) (2)
Variveis microbiolgicas(2) Seringueira (20-40 cm) NMA nmero . 106 7,34 5,94 95,42 7,19 2,89 5,07 9,08 5,60 6,24 19,90 0,20 0,12 NMC nmero . 102 26,53 2,66 1,60 3,11 1,77 1,04 10,68 2,86 1,40 6,71 1,16 0,26 CO2 g CO2 g-1 dia-1 6,32 6,21 15,00 20,51 20,07 23,39 12,32 10,52 13,20 11,00 12,22 8,95 CBM g C g de solo seco
-1
qCO2 g C g h-1 0,01 0,01 0,03 0,23 0,08 0,04 0,06 0,07 0,03 0,02 0,10 0,02
AC g.g1dia-1 166,06 80,23 107,38 95,45 270,15 109,47 168,35 99,75 61,97 51 46,42 91,15
AP g g-1 2h-1 971,30 0 0 0 64 0 0 0 1878,70 0 0 0
AU g g-1 2h-1 3034,50 564,16 588,66 501,77 5518,70 810,75 613,00 502,20 550,32 317,60 564,32 501,35
836,69 439,61 507,26 112,40 298,11 601,08 221,34 168,28 436,33 454,11 116,20 347,78
93
ANEXO 11 Mdias das quatro repeties das oito variveis microbiolgicas no solo sob plantio direto seringueira, profundidade 20-40 cm, nas pocas de incio e florescimento das culturas de vero e inverno, durante trs anos.
Amostragens(1) Ano 2002 2003 2003 2003 2003 2004 2004 2004 2004 2005 2005 2005
(1) (2)
Variveis microbiolgicas(2) Plantio direto (20-40 cm) NMA nmero . 106 14,73 3,10 94,21 8,23 1,19 5,09 5,13 9,05 4,68 50,17 0,11 0,09 NMC nmero . 102 105,37 10,41 3,37 1,72 0,88 2,89 12,29 1,59 1,89 26,40 0,73 734,66 CO2 g CO2 g-1 dia-1 7,46 3,97 7,50 8,97 13,85 22,29 9,17 8,97 10,85 10,35 9,15 11,65 CBM g C g de solo seco
-1
qCO2 g C g h-1 0,01 0,01 0,01 0,26 0,08 0,05 0,13 0,09 0,02 0,09 0,07 0,20
AC g.g1dia-1 56,82 52,68 125,51 179,46 40,77 39,87 212,40 293,37 72,87 65,50 38,62 65,55
AP g g-1 2h-1 378,26 15,12 17,43 0 93,05 30,25 34,87 0 663,47 0 0 0
AU g g-1 2h-1 4416,00 1044,00 989,20 573,87 7810,10 1335,50 836,50 580,52 1023,50 752,45 1141,90 567,25
809,41 768,45 669,74 74,01 317,06 474,54 205,14 258,37 454,56 110,46 121,78 93,50
94
Amostragens(1) Ano 2002 2003 2003 2003 2003 2004 2004 2004 2004 2005 2005 2005
(1) (2)
Variveis microbiolgicas(2) Plantio convencional (20-40 cm) NMA nmero . 106 5,51 1,56 60,31 6,65 1,81 9,90 5,45 6,17 4,29 46,04 0,12 0,07 NMC nmero . 102 35,64 6,14 1,13 0,94 5,09 0,57 7,42 0,86 2,82 8,23 0,24 0,55 CO2 g CO2 g-1 dia-1 12,09 4,81 5,72 11,33 15,36 20,04 8,59 7,15 13,72 7,12 10,75 10,95 CBM g C g de solo seco
-1
qCO2 g C g h-1 0,01 0,01 0,01 0,33 0,12 0,04 0,05 0,11 0,02 0,08 0,09 0,07
AC g.g1dia-1 125,43 83,43 131,50 169,32 190,27 65,17 129,70 198,70 60,60 101,70 133,30 139,95
AP g g-1 2h-1 398,03 0 0 17,36 101,85 0 0 0 694,20 0 0 34,72
AU g g-1 2h-1 2108,10 6088,60 830,28 656,53 3262,80 1607,00 835,45 654,62 953,40 1057,02 825,15 658,45
873,49 592,70 514,64 114,90 189,56 454,78 182,11 537,42 557,47 94,52 146,21 176,76
95

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DISSERTAO

VARIVEIS MICROBIOLGICAS COMO INDICADORAS DA QUALIDADE DO SOLO SOB DIFERENTES USOS

INSTITUTO AGRONMICO CURSO DE PS-GRADUAO EM AGRICULTURA TROPICAL E SUBTROPICAL

VARIVEIS MICROBIOLGICAS COMO INDICADORAS DA QUALIDADE DO SOLO SOB DIFERENTES USOS

LUISA DITZEL FACCI

Orientadora: Sueli dos Santos Freitas Co-orientadora: Isabella Clerici De Maria

Campinas, SP Abril 2008

O papel dos infinitamente pequenos infinitamente grande. Louis Pasteur

continua Tabela 4 pocas de amostragem e uso do solo (continuao).

Ms/ano de amostragem 02/2004 05/2004 07/2004 12/2004 03/2005 06/2005 10/2005

Cultura Soja Triticale Triticale Soja Soja Aveia Aveia

200 180 160

N amonificadores (n. 106)

140 120 100 80 60 40 20 0

N amonificadores (n. 106)

160 140 120 100 80 60 40 20 0

200 180 160

N amonificadores (n. 106)

140 120 100 80 60 40 20 0

6000 5000 4000 3000 2000 1000 0

6000 5000 4000 3000 2000 1000 0

c Incio vero Florescimento vero Incio inverno

6000 5000 4000 3000 2000 1000 0

500 400 300 200 100 0

CBM (g C g-1 solo)

600 500 400 300 200 100 0

800 700 600

CBM (g C g-1 solo)

500 400 300 200 100 0

procedimento analtico, a temperatura mantida constante.

Quociente metablico (g CO2 g CBM-1dia-1)

0,080 0,060 0,040 0,020 0,000

Seringueira Usos (B)

Quociente metablico (g CO2 g CBM-1dia-1)

0,100 0,080 0,060 0,040 0,020

a Florescimento vero Incio inverno Florescimento inverno

pocas de amostragem (C)

Quociente metablico (g CO2 g CBM-1dia-1)

0,080 0,060 0,040 0,020

Atividade de celulase (g g-124h-1)

200 150 100 50 0

Atividade de celulase (g g-124h-1)

Atividade de celulase (g g-124h-1)

Atividade de protease (g g-1 2h-1)

1200 1000 800 600 400 200 0

Atividade de protease (g g-1 2h-1)

1000 800 600 400 200 0

b Incio vero Florescimento vero

Atividade de protease (g g-12h-1)

1000 800 600 400 200 0

Atividade de urease (g g-1 2h-1)

Atividade de urease (g g-1 2h-1)

4000 3000 2000 1000 0

Florescimento Incio inverno Florescimento vero inverno pocas de amostragem

Atividade de urease (g g-1 2h-1)

4000 3000 2000 1000 0

respectivamente, os maiores coeficientes corresponderam enzima urease (-0,52) e o

Os demais indicadores de qualidade apontados na terceira profundidade foram discutidos anteriormente.

bioqumicos, o que pode dificultar a interpretao dos reais dados.

Nmero de ocorrncias no CP1

AP g g-1 2h-1 971,30 0 0 0 64 0 0 0 1878,70 0 0 0

AP g g-1 2h-1 378,26 15,12 17,43 0 93,05 30,25 34,87 0 663,47 0 0 0

AP g g-1 2h-1 398,03 0 0 17,36 101,85 0 0 0 694,20 0 0 34,72