ESCOLA UNIVERSITRIA VASCO DA GAMA

Mestrado Integrado em Medicina Veterinria

Eficcia Vacinal na Preveno de Mastites

Joo Diogo Pereia Coimbra, 2011

ESCOLA UNIVERSITRIA VASCO DA GAMA

Mestrado Integrado em Medicina Veterinria

Eficcia Vacinal na Preveno de Mastites

Coimbra, 2011

Autor Joo Diogo Pereira Aluno do Mestrado Integrado em Medicina Veterinria na EUVG

Orientador Interno Dr. Paulo Pinto Carneiro (Docente da EUVG)

Orientador Externo Dr. Antnio lvaro Dias Lopes (Mdico Veterinrio)

Dissertao Final do Mestrado Integrado em Medicina Veterinria apresentada Escola Universitria Vasco da Gama

As doutrinas apresentadas no presente trabalho so da inteira responsabilidade do autor

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Resumo:
As mastites em bovinos leiteiros so hoje em dia, um dos maiores flagelos da explorao leiteira destes animais. Apesar do grande nmero de agentes etiolgicos, levarem aos diferentes tipos de mastites, inclusive na mastite subclnica, que reside o princpio do problema, com as penalizaes do ponto de vista econmico, que comeam primariamente na qualidade do leite, atravs das elevadas CCS, no refugo animal, nos elevados custos teraputicos, bem como, abrindo portas a outras patologias, ou aumentando a severidade e cronicidade da patologia em questo. Tanto em Portugal, como no resto do mundo, a luta diria com uma crise mundial, leva constante procura de uma maximizao de rendimentos na pecuria e outros sectores, assim sendo, o aumento da qualidade do leite e a eliminao de resduos no produto final, levam a que a preveno seja o tratamento de eleio. Deste modo, sabendo da casustica global de mastites em exploraes de vacas leiteiras, optou-se por fazer um estudo, da prevalncia de agentes etiolgicos, da reduo de CCS, numa explorao da regio centro em Portugal, com um efectivo de 1300 vacas, entrando no estudo 307 bovinos em lactao, que foram vacinados uns com STARTVAC e outras sem qualquer administrao vacinal, que serviram de grupo controlo dentro de cada protocolo. Os resultados obtidos surgiram tal como esperado, com uma maior diminuio de CCS nos animais vacinados, surgindo somente um resultado duvidoso num dos protocolos, bem como, tomouse conhecimento da prevalncia dos agentes etiolgicos na explorao em questo. Estes resultados foram obtidos atravs da anlise mensal da CCS, da anlise do tanque do leite por PCR, bem como, pelo isolamento bacteriano atravs da recolha de amostras de leite.

Palavras-chave: Mastites, CCS, administrao vacinal, STARTVAC

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Abstract:
The mastitis in dairy cattle is, nowadays, one of the greatest scourges of these dairy animals. Despite the large number of etiologic agents that lead to different types of mastitis, is in the subclinical mastitis that lies the principle of the problem, with the penalties in terms of economics, starting primarily in the quality of milk through the high somatic cells count in animal waste, the high costs of treatment, as well as the fact that it opens doors to other pathologies, or increases the severity and chronicity of the pathology in question. Both in Portugal and the rest of the world, the daily struggle with global crisis leads to constant search for a maximization of income in farming and other sectors. Therefore, increased milk quality and waste disposal in the final product lead to prevention as the treatment of election. Thus, knowing the casuistry overall mastitis of dairy cows on farms, we chose to do a study of etiological agents, the reductions of SCC, in a field of the central region in Portugal, with a herd of 1300 cows, being 307 lactating cattle that were vaccinated, some with STARTVAC and others without any vaccine administration, which served as a control group within each protocol. The results came as expected, with a greater reduction in SCC in vaccinated animals, appearing only an uncertain outcome in one of the protocols. Also became aware of the prevalence of etiological agents on the holding that is concerned. These results were obtained by monthly analysis of SCC, as well as analysis of the tank of milk by PCR and by bacterial isolation by collecting milk samples.

Key words: mastitis, SCC, vaccine administration, STARTVAC

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Dedicatria:
Aos meus pais, Dionsio e Beatriz, pela oportunidade dada, o esforo realizado, o amor sempre presente, fundamentais neste trajecto e no meu projecto chamado vida. Ao meu irmo Srgio, por ser simplesmente quem e quem para mim, Sandra por acreditar sempre, pela fora e ao Salvador, meu afilhado, pois serve de inspirao a todos ns. minha av Jj, sem dvida, uma segunda me. Por ltimo, a algum muito especial que recentemente entrou na minha vida e fez com que tudo comeasse a rumar a bom porto.

Agradecimentos:

Mais uma vez agradeo a quem dediquei, pelo bvio e porque no so as palavras, que nos fazem dizer tudo, mas que fazem dizer algo mais para alm de cada gesto, por isso, o meu bem haja ao meus Pais, Irmo, Cunhada, Avs e Cat. Aos meus tios Rosa e Armnio, que sem dvida, sempre acreditaram em mim. Agradecer ao Dr. Antnio lvaro Lopes, ao Dr. Fernando Monteiro, Socivete, por me abrirem as portas da Medicina Veterinria, pela amizade, o apoio, os conhecimentos e por sempre se disponibilizarem a ajudar-me em tudo. Ao Dr. Paulo Carneiro, porque sei que no fcil, ter-me como Orientando e obrigado pela ajuda e crena neste projecto. Aos meus amigos de Coimbra, aos que esto, aos que partiram, no so necessrios nomes, queles que sabem o que a amizade, companheirismo, entreajuda e toda uma vida partilhada nesta cidade. M.Rito L por me abrir as portas daquela explorao, ao Sr. Rito, ao Engenheiro Hugo, a todos os empregados pela disponibilidade, pacincia e infindvel ajuda, a todas as horas. Aos meus amigos/irmos de sempre, ao Joo, Lili, Costa, Vasco, Nuno, Porky, Pipo, Cludia, Calcinha, todos eles e claro, ao Anibal e nossa casa Bells bar. Aos produtores da Socivete, a uma famlia que se cria com alguns deles e que me deram nimo e sagacidade para passar mais esta barreira. A todos os que de alguma forma, tornaram isto possvel. Por ltimo, mas no menos importante, ao Dr. Tiago Salvado, da Hipra, fundamental na realizao deste trabalho, o meu bem haja! , acho que no vou conseguir retribuir a ajuda prestada e o conhecimento partilhado.
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ndice

1. Introduo .......................................................................................................... 1 2. Reviso Bibliogrfica......................................................................................... 2

2.1. 2.2. 2.3. 2.4. A Glndula Mamria .............................................................................................. 2 Mecanismos de Defesa do bere......................................................................... 4 Patogenia das Mastites ......................................................................................... 7 Resposta Inflamatria ........................................................................................... 8

3. Mastite................................................................................................................. 9
3.1. 3.2. 3.3. Mastite clnica........................................................................................................ 9 Mastite subclinica ................................................................................................10 Mastite de Vero...................................................................................................11

4. Factores Predisponentes ................................................................................ 12 5. Etiologia das mastites ..................................................................................... 17

5.1. Agentes etiolgicos .............................................................................................19
Staphylococcus aureus .............................................................................................. 22 Estafilococos coagulase negativos (SCN) ................................................................ 24 Streptococcus uberis .................................................................................................. 25 Bacillus spp .................................................................................................................. 26 Streptococcus dysgalactiae ....................................................................................... 26 Coliformes .................................................................................................................... 27 Escherichia coli ....................................................................................................... 29 Klebsiella .................................................................................................................. 30 Enterococcus spp. ...................................................................................................... 30 Proteus spp. ................................................................................................................. 31 5.1.1. 5.1.2. 5.1.3. 5.1.4. 5.1.5. 5.1.6. 5.1.6.1. 5.1.6.2. 5.1.7. 5.1.8.

6. Deteco e Diagnstico de Mastites .............................................................. 32

6.1. Deteco de Mamites ...........................................................................................32
Contagem de Clulas Somticas ............................................................................... 32 Culturas Bacteriolgicas ............................................................................................ 33 Anlise do Leite do Tanque por PCR ........................................................................ 35 Teste Californiano de Mamites (TCM) ....................................................................... 36 Conductividade elctrica ............................................................................................ 36 NAGase ......................................................................................................................... 37 6.1.1. 6.1.2. 6.1.3. 6.1.4. 6.1.5. 6.1.6.

6.1.7. 6.1.8.

Deteco de anticorpos no leite ................................................................................ 37 Teor Microbiano Total (TMT) ...................................................................................... 37

7. Importncia Econmica das Mastites ............................................................ 38 8. Vacinao ......................................................................................................... 39 9. Eficcia vacinal na preveno de mastites .................................................... 42
9.1. 9.2. Objectivos .............................................................................................................42 Material e Mtodos ...............................................................................................43
Amostragem ................................................................................................................. 43 Descrio da explorao ............................................................................................ 43 Vacina ........................................................................................................................... 46 Descrio das substncias activas:................................................................................... 46 Mecanismo de Proteco: ................................................................................................. 47 Protocolos vacinais: ........................................................................................................... 48 Anlise de dados ......................................................................................................... 49 Contagem de clulas somticas ................................................................................ 49 Recolha de amostras e Identificao dos agentes etiolgicos .............................. 50

9.2.1. 9.2.2. 9.2.3. a) b) c) 9.2.4. 9.2.5. 9.2.6.

9.3. 9.4.

Procedimentos .....................................................................................................50 Resultados ............................................................................................................53

Resultados do Grupo 1 ............................................................................................... 53 Resultados do Grupo 2 ............................................................................................... 55 Resultados do Grupo 3 ............................................................................................... 57 Resultados da anlise do tanque por PCR ............................................................... 59

9.4.1. 9.4.2. 9.4.3. 9.4.4.

10. Discusso ......................................................................................................... 60 11. Consideraes finais........................................................................................ 64 12. Bibliografia ...................................................................................................... 666

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ndice de esquemas

Pg.

Esquema 1. Mecanismo de proteco da vacina Startvac.47 Esquema 2. Diviso do efectivo de vacas do estudo.....51 Esquema 3. Diviso de animais e datas de vacinao dos diferentes protocolos.52

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ndice de figuras

Pg.

Figura 1. Anatomia do bere e teto.2 Figura 2. A estrutura suspensa do bere..3 Figura 3. Principais defesas locais do teto ...6 Figura 4. Modificaes do comprimento e forma do teto durante a ordenha.7 Figura 5. Principais factores envolvidos do desenvolvimento de mastites em explorao de bovinos leiteiros....12 Figura 6. Procedimentos para a anlise do leite do tanque por PCR ..35 Figura 7. Protocolo clssico...48 Figura 8. Protocolo a varrer49

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ndice de grfico

Pg.

Grfico 1. Prevalncias de bactrias no Grupo 154 Grfico 2. Variao de CCS no Grupo 1.55 Grfico 3: Prevalncias de bactrias no Grupo 256 Grfico 4. Variao de CCS no Grupo 2.57 Grfico 5: Prevalncias de bactrias no Grupo 358 Grfico 6. Variao de CCS no Grupo 3 ....59

ndice de tabelas

Pg.

Tabela 1. Relao entre a diminuio de produo e o aumento das clulas somticas8 Tabela 2: Caractersticas da mastite clnica ...10 Tabela 3. Principais factores individuais predisponentes ao aparecimento de mastites .13 Tabela 4. Principais factores ambientais predisponentes ao aparecimento de mastites.14 Tabela 5. Principais factores de maneio e higiene da ordenha predisponentes a mastites.15 Tabela 6. Factores patognicos que predispem ao aparecimento de mastites.16 Tabela 7. Principais microrganismos contagiosos e ambientais 17 Tabela 8. Prevalncia de diferentes bactrias causadoras de mastites .......18 Tabela 9. Mastites Bovinas Contagiosas19 Tabela 10. Mastites Bovinas Ambientais...20 Tabela 11. Outras Mastites Bovinas.21 Tabela 12. Nmero de infeces intra-mamrias ....33 Tabela 13. Comparao entre bacteriologia convencional e a anlise de tanque por PCR .36 Tabela 14. Diferenas entre vacinas vivas e vacinas inactivadas...40 Tabela 15. Vantagens e desvantagens do Protocolo clssico..48 Tabela 16. Vantagens e desvantagens do Protocolo a varrer.....................49 Tabela 17. Percentagem de mastites clnicas e mdia em dias de proteco no Grupo 1 ...53 Tabela 18.Percentagem de cura de mastites no Grupo 1...54 Tabela 19. Percentagem de mastites clnicas no Grupo 2.........55 Tabela 20.Percentagem de cura de mastites no Grupo 2..........56 Tabela 21. Percentagem de mastites clnicas no Grupo 3... ..57 Tabela 22.Percentagem de cura de mastites no Grupo 3...58

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Lista de Abreviaturas

CCS/SCC: Contagem de clulas somtica / Somatic cell count SCN: Estafilococos coagulase negativo ml: mililitro DEL: Dias em Leite C: Grau Celsius PMN: polimorfonucleares neutrfilos TCM: Teste Californiano de Mamites PCR: Polymerase Chain Reaction

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1. Introduo
Numa era em que a produo leiteira encarada cada vez mais como uma actividade empresarial e industrial e em que as exigncias do consumidor e do mercado, so cada vez mais acentuadas, a preveno de doenas com impacto na produo leiteira da explorao, como o caso da mastite, pressiona a que cada vez mais, seja necessrio uma aco preventiva, de modo a no por em risco o prprio sucesso da explorao, tanto pelo peso que tem a nvel de sade pblica, bem como, como da sade do efectivo leiteiro (Teixeira et al., 2008). A mastite ou mamite, caracteriza-se pela inflamao da glndula mamria. Segundo, Rebhun (1999), esta patologia considera-se como a que maiores prejuzos econmicos acarretam explorao leiteira, tanto pela reduo da quantidade e qualidade do leite, sendo que, pode inclusive ocorrer a perda total da capacidade secretora da glndula mamria. Esta patologia, tem na sua origem, principalmente, a penetrao de microrganismos atravs do canal do teto atingindo o bere, aqui e com etiologia variada, ocorre infeco quando existe uma carga microbiana excessiva, ou ento, a vaca apresenta as defesas da glndula mamria diminudas. Estes agentes responsveis pelo desenvolvimento de mastites, pode ser classificados de ambientais ou contagiosos, segundo o ponto de vista epidemiolgico (Teixeira et al., 2008). Por outro lado, de referir, que as mastites apresentam-se em duas diferentes formas, clnicas e subclnicas, sendo necessrio em ambos os casos, um rigoroso e precoce diagnstico, de modo a evitar que se danifique o tecido mamrio (Ribeiro et al., 2003). Neste sentido, surgem armas como a CCS, TCM, Isolamento e Identificao bacteriana, Anlise do tanque por PCR, Teste de condutividade elctrica, entre outros, que sendo ou de realizao laboratorial, ou in situ na explorao, ajudam na anlise da produo leiteira (Ribeiro et al., 2003). A par do desenvolvimento das vacas modernas, surge um aumento da sensibilidade contraco de mastites, sendo que, a ideia de salubridade leiteira, leva a um rigoroso maneio, de higiene, teraputico, profiltico e acima de tudo, a dispensa de muito trabalho e tempo, de modo a traar o correcto maneio da explorao, acentando neste pilar, o sucesso da explorao (Teixeira et al., 2008). Posto isto, surge ento como apoio a um maneio cuidado e preocupado, uma vacina contra mastites, de modo a prevenir o aparecimento destas, vindo reforar a imunidade destes animais, de modo, obter-se um leite de melhor qualidade, com menos resduos teraputicos, eliminando taxas de refugo e numa globalidade aumentando a vida da explora o leiteira e da vaca em si.

2. Reviso Bibliogrfica
2.1. A Glndula Mamria

A glndula mamria, tambm denominada de bere (Getty et al. 1986), consiste num conjunto de quatro glndulas de origem drmico considerada como uma glndula sudorpara modificada e coberta externamente por uma pele suave ao tacto, coberta de finos cabelos excepto nos tetos. Divide-se em quatro glndulas independentes possuindo cada uma delas um teto (Teixeira et al., 2008). Cada quarto composto pela cisterna do teto, cisterna da glndula, ductos galactforos e tecido glandular (Lvesque, 2004) Implantada na face externa da parede abdominal, a Glndula mamria, possui como limite craneal, a regio umbilical, enquanto, o limite caudal estende-se at aos membros posteriores. Encontra-se dividido longitudinalmente em duas metades simtricas possuindo cada uma delas, glndulas denominadas de quartos, anteriores e posteriores (Schummer et al., 1981), sem passagem do leite de um quarto para o outro, funcionando como unidades funcionais independentes. O teto um plexo venoso erctil e o seu orifcio est fechado por um esfncter constitudo por tecido muscular (Teixeira et al., 2008). A extremidade livre do teto comunica com o exterior e o responsvel pela sada do leite, sendo nesta estrutura onde termina a ntima unio de todos os tecidos da glndula mamria por meio de tecido conjuntivo (Hibbitt et al., 1992).

Figura1. Anatomia do bere e teto (Adaptado Blowey & Edmondson, 2000)

Geralmente os quartos leiteiros posteriores, so ligeiramente maiores e produzem 60% do leite, cabendo os restantes 40% aos anteriores (Getty et al., 1986). Segundo Teixeira e col. (2008), a produo de leite da responsabilidade das clulas epiteliais alveolares que delimitam os alvolos, alojando-se nos lbulos mamrios, os quais drenam o leite, atravs da contraco muscular das clulas mioepiteliais por estmulo da ocitocina, impelindo o leite dos alvolos para os ductos, destes flui at cisterna do bere e posteriormente, para a cisterna do teto, prosseguindo finalmente at ao teto. O relaxamento do esfncter do teto ou a ejeco do leite e abertura do esfncter, deve-se presso exercida nesta estrutura, que leva ao estmulo dos receptores neuronais presentes na pele dos tetos, os quais, imitem um sinal nervoso directamente ao hipotlamo, onde se produzem as hormonas percursoras da ocitocina. De referir ainda, que esta hormona tambm leva ao engurgitamento dos vasos linfticos interligados, que fazem com que o teto se mantenha rgido, evitando o colapso da cisterna do teto. Outros estmulos relacionados com a sala de ordenha tambm podem induzir a libertao desta hormona (Bruckmaier & Bloom, 1998; Hamann, 2000). Segundo Blowey e col (1999), este processo pode ser inibido pela aco da adrenalina, pelo que se torna fundamental reduzir o stress na sala de ordenha para se obter um adequado fluxo de leite. A conformao dos tetos (tamanho, posio e tenso do esfncter) deve ser a correcta, de modo, a uma ordenha mais eficiente (Blowey et al, 1999). O teto e particularmente o canal do teto, tm funes muito relevantes na preveno de infeces no bere (Teixeira et al, 2008). O tamanho do bere varia entre animais e consoante a fase do ciclo produtivo, sendo que pode atingir um peso de at 75 kg numa vaca adulta, sendo necessrio um possante sistema de suspenso para suster esta estrutura. Os ligamentos responsveis pelo suporte do bere so: os ligamentos superficiais laterais, os ligamentos profundos laterais e os ligamentos mdios (Blowey et al., 1999). Os ligamentos mdios so formados por fibras elsticas, enquanto os ligamentos laterais so formados por tecido conjuntivo com baixa elasticidade.

Figura 2. A estrutura suspensa do bere (Adaptado do The Bovine Udder and Mastitis, ed Sandholm et al. 1995)

A intensa e massiva produo de leite nos dias de hoje, torna fundamental uma boa irrigao para haver o fornecimento dos nutrientes necessrios produo, levando a que, para cada litro de leite possam ser necessrios 400 litros de sangue (280ml de fluxo de sangue/segundo). O aporte sanguneo da responsabilidade da veia mamria, tomando contornos tortuosos em grandes produtoras (Blowey et al., 1999). A artria mamria irrigada pela pudenda externa e perineal e ramifica-se por todo o tecido da glndula mamria (Teixeira et al, 2008). A circulao linftica numerosa e drena sobretudo nos gnglios linfticos mamrios (Getty et al., 1986). Segundo Davidson e Staberfelt (2007), a sntese de leite do controlo da prolactina, produzida pela pituitria, embora a secreo contnua de leite nas vacas se deva a uma complexa interaco de esterides, tiroxina e somatotropina.

2.2.

Mecanismos de Defesa do bere

As agresses a que o teto e principalmente o seu esfncter esto constantemente submetidos, so factores predisponentes para o surgimento de mastites (Teixeira et al., 2008). Alm de muitas excepes, como por exemplo tuberculose e leptospirose, as mastites desenvolvem-se atravs da entrada de agentes pelo canal do teto. A vaca tem defesas locais muito eficazes capazes de reduzir o risco de entrada de agentes susceptveis de infeco da glndula mamria. Para alm disto, ainda possui a capacidade de superar infeces que penetraram com sucesso as defesas do canal do teto (Blowey & Edmondson, 2000). A primeira barreira invaso por bactrias a pele que recobre todo o bere, pois o seu epitlio estratificado queratinizado e a presena de cidos gordos com caractersticas bacteriostticas nesta camada, no permitem o crescimento bacteriano desmedido (Teixeira et al., 2008). O canal do teto, consiste na segunda linha de defesa, pois tambm ele composto por uma camada de epiderme queratinizada semelhante da pele, que so mais activas quando o msculo do esfncter leva ao encerramento do canal. O fechamento do canal do teto atravs das contraces do esfncter, das pregas interdigitantes para uma perfeita cooptao e a camada de lpidos hidrofbicos, garante que no se forme uma coluna contnua de leite residual que podia servir de pavio para a entrada de bactrias. A roseta de Furstenberg, no lado interno do canal do teto, um anel de linfcitos que detectam a invaso bacteriana e estimula a resposta imune. De referir que, o canal do teto demora entre 20 a 30 minutos a fechar totalmente, de modo a proteger os tetos de contaminaes, sendo recomendado que os animais no se deitem nos 30 minutos seguintes sada da ordenha (Blowey & Edmondson, 2000).

Quando os microrganismos vencem estas duas linhas e atingem a cisterna do bere, existem outros mecanismos de defesa locais que entram em aco (Blowey et al, 1999). So eles: Lactoferrina: esta glicoprotena presente no leite e nas secrees da glndula mamria das vacas (Plate et al, 2009), participa na resposta inata da glndula mamria, atravs da sua ligao ao ferro em circulao, de modo a, no disponibiliz-lo para o crescimento bacteriano, bem como, a sua natureza catinica funciona como actividade microbiana (Lacasse et al, 2008). A lactoferrina tem ainda um efeito anti-inflamatrio, pois pode minimizar os efeitos oxidativos resultantes de um processo inflamatrio (Biggs, 2009). Lactoperoxidase: uma enzima com poder oxidante sobre determinadas estruturas da parede celular das bactrias, serve como bactericida em Gram negativas e bacteriosttica na generalidade das Gram positivas (Sordillo et al., 1997). Este componente antimicrobiano natural do leite, quando em presena de perxido de hidrognio (produzido pelas prprias bactrias), ou tiocianato (varia com a alimentao, leguminosas e plantas do gnero Brsica), capaz de inibir o crescimento bacteriano (Blowey et al., 1999). Lisozimas: so enzimas que inibem o crescimento ou destroem as bactrias Gram positivas, provenientes do sangue, ou sintetizadas na glndula mamria. No decorrer da inflamao pensa-se que sejam os leuccitos os responsveis pela sua produo (Biggs, 2009). Sistema do complemento: consiste num conjunto de protenas que, quando activadas desenvolvem uma cascata de reaces de modo a neutralizar a inflamao (Teixeira et al, 2008). Reconhecem e destroem microrganismos, iniciam e potenciam a resposta dos anticorpos e desagregam complexos de precipitados antignio-anticorpo (Korhonen, Marnila & Gill, 2000). Sabe-se que o complemento tem um efeito importante na fagocitose de Streptococcus spp. e bactericida para E. coli (Biggs, 2009). Citoquinas: as citoquinas so produzidas por clulas do sistema imunitrio e fazem a sinalizao de protenas, de modo a chamar neutrfilos e acelerar a involuo precoce da glndula mamria, na rea de inflamao (Biggs, 2009). Imunoglobulinas: a sua funo principal consiste na marcao/opsonizao das bactrias, antes de serem destrudas pelos macrfagos e linfcitos (Blowey et al., 1999). Clulas somticas: a presena destas clulas do sistema imunitrio, como neutrfilos e macrfagos, esto presentes no leite e colostro e segregam componentes imunes no leite, tais como, citoquinas, pptidos e protenas antimicrobianas (Stelwagen et al, 2008).

Figura 3: Principais defesas locais do teto (Hibbitt et al., 1992).

2.3.

Patogenia das Mastites

As agresses a que o teto e principalmente o seu esfncter esto constantemente submetidos, so factores predisponentes para o surgimento de mastites. Considerando a exposio sujidade e bactrias a que esto sujeitos os beres, particularmente na poro apical dos tetos, surpreendente que as mastites nas vacas leiteiras no sejam mais comuns (Blowey & Edmondson, 2000) Alm de muitas excepes, como por exemplo tuberculose e leptospirose, as mastites so criadas por infeces atravs da entrada de agentes pelo canal do teto. A vaca tem defesas locais muito eficazes, capazes de reduzir o risco de entrada de agentes susceptveis de infeco da glndula mamria. Para alm disto, ainda possui a capacidade de superar infeces que penetraram com sucesso as defesas do canal do teto (Teixeira et al., 2008). No entanto, o desenvolvimento de uma mastite pode ser dividido em trs fases: invaso, infeco e inflamao (Blowey et al., 1999). Segundo Blowey (1999) e Teixeira (2008), na 1 fase, a invaso, consiste na entrada do microrganismo no canal do teto, que pode ocorrer entre ou mesmo durante a ordenha. Este estdio encontra-se relacionado com a higiene da ordenha, grau de leso e tnus do esfncter, manuteno da mquina de ordenha e utilizao de substncias antimicrobianas.

Figura 4. Modificaes do comprimento e forma do teto durante a ordenha (Adaptado de Blowey & Edmondson, 2000). A fase seguinte, a infeco propriamente dita, caracterizada pela reproduo do agente no canal do teto, na cisterna do teto ou na cisterna do bere. O crescente crescimento pode mesmo atingir os alvolos galactforos. As bactrias envolvidas, a sua capacidade de replicao, de aderir ao epitlio e a resposta do sistema imunitrio, tanto a nvel celular, como outras respostas, so influentes nesta fase (Blowey et al., 1999). Por ltimo, a inflamao, sucede atravs de uma cascata de acontecimentos, com a chamada de leuccitos da corrente sangunea para os alvolos, de modo a, neutralizar as bactrias, surgindo depois os farrapos/grumos pela formao de aglomerados entre leuccitos e tecido danificado, bactrias e protenas, podem ser responsveis pela diminuio da produo leiteira.

2.4.

Resposta Inflamatria

A mastite exerce grande influncia na composio e caractersticas fsico-qumicas do leite, sendo acompanhada por aumento da contagem de clulas somticas (CCS), clulas estas, de origem sangunea, como leuccitos e clulas do epitlio secretor. Os leuccitos mobilizam-se do sangue, devido alterao da permeabilidade capilar, por aumento do aporte sanguneo na rea afectada (Radostitis et al., 2007). Na vaca saudvel as clulas somticas presentes no leite so, macrfagos (66% - 88%), Llinfcitos (10 %- 27%), neutrfilos (< 11%) e clulas epiteliais ( 0% - 7%). Em caso de inflamao, aumentam os valores de leuccitos, maioritariamente neutrfilos provenientes do sangue e representando 90% das clulas leucocitrias. A chamada de leuccitos, deve-se tambm, a componentes bactericidas, como endotoxinas produzidas por microrganismos, que sinalizam a infeco, se a resposta for rpida, h mobilizao de neutrfilos, do sangue para a glndula mamria e eliminam estes estmulos, caso contrrio, provoca danos nos tecidos glandulares e consequente diminuio da secreo do leite (Radostitis et al., 2007). Segundo Radostitis e col (2007), no perodo de infeco, as clulas variam de valores normais de 100 000 cl./ml para 1 000 000 cl./ml, em poucas horas e diminuindo a produo como mencionado na tabela seguinte.

Tabela 1: Relao entre a diminuio de produo e o aumento das clulas somticas (Delaval, n/d)

CCS no leite (cl./ml)

Diminuio da produo

Perda na produo por vaca/lactao

100 000 200 000 300 000 400 000 500 000 600 000 700 000 1 000 000

3% 6% 7% 8% 9% 10% 11% 12%

210 Kg 420 Kg 490 Kg 560 Kg 630 Kg 700 Kg 770 Kg 870 Kg

3. Mastite
A Mastite uma inflamao parenquimatosa da glndula mamria, independentemente da sua etiologia, caracterizando-se por alteraes fsicas e qumicas, tanto no leite, como por, alteraes patolgicas na glndula mamria (Radostits et al., 2000). As alteraes mais importantes no leite, incluem descolorao, cogulos (farrapos) e presena de um grande nmero de leuccitos (Radostits et al., 2000). No entanto, tambm h alterao na composio do leite, diminuindo a e casena, a lactoalbumina, a -lactoglobulina, a lactose e o potssio e aumentando a albumina srica, as imunoglobulinas, o sdio e o cloro (Mller, 2002). Em relao s alteraes da glndula mamria, apresenta regra geral, dor, inchao, calor e edema (Radostits et al., 2000). a doena mais importante em animais de produo leiteira (Unnerstad et al., 2009), de origem multifactorial (Anaya-lpez et al., 2006) e afecta com maior frequncia as primparas (Waller et al., 2009). Segundo Blowey e Edmondson (2004), do ponto de vista clnico, a mastite comummente distinguida segundo as suas caractersticas, mastite clnica, quando a infeco no bere visvel (ex.: farrapos no leite, inchao, edema,etc); mastite subclnica, quando, por outro lado, a infeco do bere no exacerba mudanas externas. Existem tambm as mastites de Vero, diferentes do ponto de vista epidemiolgico (Rebhun et al., 1999)

3.1.

Mastite clnica

Segundo Ribeiro e col. (2003), a mastite clnica apresenta sinais evidentes de inflamao, tais como edema, aumento da temperatura, endurecimento e dor. Tambm o leite pode encontrar-se anormal, podendo apresentar cogulos, flocos, ps e variao na cor (Blowey & Edmondson, 2004). Cogulos, farrapos e Flocos que, regra geral, acompanham as alteraes de cor do leite, indicam sempre inflamao, mesmo que existentes em pequena quantidade (Blood et al, 1999). Os farrapos no passam de aglomerados de detritos celulares, leuccitos, fibrina e outras protenas (Lvesque, 2004). O significado clnico das variaes de colorao que podem dever-se a sangue ou aquosidade, s tm significado clnico, quando esta alterao permanece em dez ou mais jactos de leite (Rebhun, 1999). Segundo Smith (2002), a mastite clnica pode ser aguda, aguda gangrenosa e crnica, tal como indicado na tabela 2.

Tabela 2. Caractersticas da mastite clnica (Smith, 2002). Classificao clnica Aguda Caractersticas Rpido surgimento dos sinais clnicos Dor

Edema do bere e endurecido

Sinais sistmicos: anorexia, depresso e febre Secreo lctea: flocos, cogulos, aspecto seroso, aquoso ou purulento

Aguda gangrenosa

Raro

Sinais clnicos comuns: anorexia, desidratao, depresso, febre e toxmia

Alterao da cor da glndula: Inicialmente vermelhe, volumosa e quente e posteriormente frio com reas azuladas Secreo lctea: aquosa e sanguinolenta

Crnica

Sem exibio de sinais clnicos em perodo longo bere com formaes endurecidas palpao Secreo lctea: flocos, cogulos ou fibrina

3.2.

Mastite subclnica

a mastite responsvel pelo maior prejuzo econmico na explorao leiteira e curiosamente sem alteraes visveis no bere ou leite, no entanto, com alteraes na composio do leite e presena de organismos patognicos (Bexiga et al., 2005). Existe uma pequena inflamao da glndula mamria no observvel visualmente, mantendo-se o leite e o quarto afectado com uma aparncia normal (Lvesque, 2004). A denominao de mastite subclnica, tem consistncia em resultados de contagem de clulas somticas dentro de valores considerados anormais, ou seja, aumentando, segundo a norma estabelecida, por exemplo, a Unio Europeia exige que todo o leite tenha menos de 400.000 clulas/ml de modo a garantir que no exista nenhuma penalidade ao preo do leite (Blowey et al, 2004). Bem como se demonstram pela presena de microrganismos no leite atravs da cultura microbiolgica (Lvesque, 2004). Com o decorrer do tempo, estas mastites, resultam em fibrose, inefectividade dos quartos afectados e aumento de volume da glndula mamria (Smith, 2002). A mastite subclinica, pode ser indetectvel, sem o uso de testes de diagnstico aplicados ao leite/secrees (Blowey et al, 2004). Sendo os exames microbiolgicos, mtodos qumicos indirectos e contagem de clulas somticas, essenciais no diagnstico desta patologia (Brito et al., 1997).

10

Os agentes patognicos mais comummente associados a este tipo de mastite, so maioritariamente, estafilococos coagulase positivos e negativos, coliformes e estreptococus ambientais (Fox, 2009).

3.3.

Mastite de Vero

Tal como referido por Blowey e col. (1999), a mastite de Vero, tem etiologia e epidemiologia especfica das outras mastites. E uma mastite aguda, supurativa que afecta vacas no lactantes, multparas ou primparas (Fox, 2009). Os microrganismos associados so. Actynomyces pyogenes, Peptococcus indolicus,

Streptococcus dysgalactiae, Bacteroides nodosus e Fusobacterium necrophorum. A transmisso deve-se a um vector, uma mosca, Hydrotoea irritans, que parasita comummente os quartos anteriores da vaca, onde o acesso mais fcil (Blowey et al., 1999; Fox, 2009; McDoougall et al., 2009). Clinicamente, observa-se aumento de volume e da temperatura do bere, dor e secreo lctea com cogulos e odor nauseabundo e caracterstico, posteriormente com endotoxmia pode levar a aborto. A mastite pode ser benigna, sem sinais clnicos no perodo seco e tornando-se visvel no psparto e apresentando um teto espessado, com um ncleo fibroso (Blowey et al., 1999).

11

4. Factores Predisponentes
A origem das mastites considerada multifactorial, apesar das origens fsicas, qumicas, microbiolgicas ou fisiolgicas. (Teixeira et al., 2008)

Figura 5: Principais factores envolvidos do desenvolvimento de mastites em explorao de bovinos leiteiros (Teixeira et al., 2008)

Segundo Radostits e col. (2000), os factores predisponentes de uma forma geral, dividem-se em: Factor de risco do prprio animal (individuais), factores de risco ambientais, factores de risco patognicos e econmicos, como se demonstra na tabela 3:

12

Tabela 3. Principais factores individuais predisponentes ao aparecimento de mastites

Prevalncia da infeco aumenta com a idade (Radostits et al., 2000). Vacas com mais de dois partos, com maior risco de mastites pois as primparas no

Idade e Lactaes

passam pelo perodo seco (Reyes & Mellado, 1994). Vacas plurparas, com altos nveis de imunoglobulibnas no colostro, possuem menor incidncia de mastites (Leitner et al., 2008). Quartos posteriores com mais casos de mastites que os quartos anteriores

Quartos

(Adkinson et al., 1993). Morfologia e condio fsica dos tectos, sujeitos a traumas, agresses fsicas/qumicas (Radostits et al., 2000). A maior parte das novas infeces ocorrem durante o perodo seco e no inicio da

Fase da Lactao

lactao, principalmente por agentes ambientais (Radostits et al., 2000). Nas novilhas prevalncia da infeco no ltimo trimestre de gesta o, alguns dias antes do parto e acentuada descida no ps-parto (Radostits et al., 2000). Vacas de alta produo com maior predisposio, devido a maior remoo de queratina por maior produo de leite e tambm a relao desta com um maior aumento do canal do teto (Paulrud, 2005)

Produo de Leite Factores Predisponentes

Vacas altas produtoras, com predisposio a balano energtico negativo, consequentemente, levam ao aparecimento de doenas (ORourke, 2009). Deficincias nutricionais resultam numa reduo de resposta do sistema imunitrio (Biggs, 2009).

Individuais

Dietas suplantadas com anti-oxidantes como Selnio, beta-carotenos, vitamina E, C e A, diminui a incidncia e durao de mamites clincas (Radostits et al., 2000; Smith

Nutrio

et al, 1997; Lvesque 2004). Essenciais para a patncia do Sistema imunitrio, so os micronutrientes Cobre e Zinco (Sordillo et al, 1997) Tambm de ter em conta que uma dieta bem ajustada, revela-se numa consistncia de fezes que permite uma diminuio da contaminao fecal dos tetos diminuindo as mastites ambientais (Biggs, 2009). Efectivos com baixas contagens de CSS tm maiores prevalncias de aparecimento de mastites (Radostits et al., 2000). Embora sem estudos efectuados de comparao entre raas, tem-se verificado

Contagem clulas somtica

de

Raa

maior incidncia de mastites em vacas de raa Holstein Frsia, sem conhecimento se este facto se deve a questes de maneio (Radostits et al., 2000). Seleco das vacas, no que toca a resistncia a mastites, centra-se nas caractersticas do bere e tetos, pela sua relao com as defesas primrias da glndula mamria (Pighetti, 2006).

Seleco Gentica

Estudos sugerem que tetos afunilados tm menor incidncia a mastites comparando com os cilndricos, por outro lado, tetos pontiagudos so propcios a leses no orifcio dos tetos e conseguintes mastites, enquanto vacas com beres grandes e pendulares tambm possuem maior prevalncia a esta patologia (Lvesque, 2004). Por exemplo, Reteno placentria, leses, feridas nos tetos, lceras da sola aumentam a incidncia de mastites (Radostits et al., 2000).

Outras doenas

13

Tabela 4. Principais factores ambientais predisponentes ao aparecimento de mastites

Em climas temperados a incidncia de mastites maior na Primavera e Inverno, quando

Estao do Ano

as vacas passam longos perodos estabulados, enquanto, nos tropicais e sub-tropicais no Inverno e Primavera, pelo aumento da humidade (Radostits et al., 2000). Aumento da CSS em temperaturas e humidades elevadas, e diminuio em temperaturas

Temperatura, Humidade e Ventilao

e humidades baixas (Gilson, Smith & Ely, 2004). Vacas estabuladas com aumento do aparecimento de mastites por coliformes em pocas de elevada precipitao pelo aumentos das humidades na explorao que favorece estes agentes (Radostits et al., 2000). As vacas perdem 55 litros de gua/dia (respirao, transpirao, urina e fezes), uma adequada ventilao, reduz a o aumento de humidade a valores de menor desenvolvimento bacteriano (Blowey, 1999). Alguns insectos so vectores de alguns agentes patognicos (Staphylococcus. aureus e

Existncia de Insectos

Arcanobacterium pyogenes) e disseminam de animal para animal (Lvesque, 2004) As mastites de Vero (j referidas anteriormente) possuem como vector principial uma mosca Hydrotea irritans (Biggs, 2009). As camas de material inorgnico (areia), apesar de possurem menor capacidade absortiva possuem tambm menor capacidade para desenvolvimento de agentes patognicos e possvel abrasividade dos tetos, contrariamente s de material orgnico (palha, serradura, aparas de madeira e papel), que so materiais com boa absoro, confortveis, mas capazes de desenvolver estes agentes (Endres, 2008).

Factores Predisponentes

Camas Ambientais

Segundo Smith e Hogan (2006), a serradura so uma perigosa fonte de coliformes, principalmente se armazenada hmida, bem como a palha que ainda permite desenvolvimento de Streptococcus e Enterococcus. As camas tm que possuir uma equilibrada relao entre, conforto, custo e higiene, pois o no uso por parte das vacas, levar a aumento de stress e incentivando a deitarem-se em zonas sujas (Blowey, 1999). Instalaes amplas e adequadas, ao conforto, densidade animal. Segundo Blowey (1999), os cubculos devem ser confortveis, tendo o comprimento e largura adequada para acomodar a vaca, permitir os movimentos da cabea e pescoo necessrios para se levantar e que permitam defecar no corredor e no na cama (em mdia, 1,15m de largura e 2,4m de comprimento). Terra, calcrio ou areia pode ser usado nos cubculos, no entanto, pela sua difcil limpeza, acumula-se urina na zona traseira da cama, levando ao desenvolvimento de mastites (Blowey, 1999). Densidade animal, um factor importante, no conforto e bem-estar animal, pois em exploraes sobrelotadas, vacas so obrigadas a deitarem-se mais cedo ps-ordenha, devido competio pelos cubculos e um menor tempo de descanso, logo, aumenta o factor stress e maior predisposio a mastites (Fregonesi, Tucker e Weary, 2007). A higiene dos tetos, est intimamente relacionada com a taxa de mastites (Biggs, 2009). Higiene do bere e pernas associada a mastites subclinicas (Ruegg, 2003). O maneio e a higiene do ambiente, relacionam-se muito entre eles e tambm com, a

Estbulos

Higiene

densidade animal, camas e frequncia de limpeza, sendo que, existem escalas de higiene (1 a 4), contabiliza o grau de sujidade, bere, patas, garupa e flanco, quando atinge grande contaminao no flanco e garupa, temos rea de descanso contaminada, camas pobres e m gesto de limpeza (Lvesque, 2004). Vacas no peri-parto, talvez por diminuio da resposta imunitria, esto mais propcias a

Maternidades

desenvolvimento de mastites, da a necessidade de grandes cuidados de higiene nas maternidades o mais limpas possvel, ou ainda em box prpria (Blowey, 1999).

14

Tabela 5. Principais factores de maneio e higiene da ordenha predisponentes a mastites Uso de luvas pelo ordenhador
O uso de luvas, diminui significativamente o aparecimento de mastites, pois a superfcie das mos de difcil desinfeco e pode transmitir bactrias como, Staphylococcis aureus, Streptococcus agalactiae e SCN (Biggs, 2009). Na lavagem dos tetos deve-se usar hipoclorito (250 ppm) ou iodo (60 ppm), juntamente com gua corrente quente. Somente deve ser realizada aos tetos e no ao bere inteiro, pois a escorrncia de gua para os tetos, pode contamin-los. essencial

Lavagem e Limpeza dos tetos

a limpeza e secagem posterior (Blowey, 1999). A limpeza do teto deve ser feita com um toalhete de papel ou pano (se lavado, desinfectado e seco entre ordenhas), por vaca (Blowey, 1999). H quem aconselhe que se rape os plos da cauda e do bere, para diminuir a contaminao e diminuir o tempo de preparao para a ordenha (Biggs, 2009). O pr-dipping tem como objectivo diminuir a carga bacteriana, existente nos tetos, antes da colocao das tetinas. O teto deve mergulhar-se pelo menos durante 30 segundos nesta soluo e depois cuidadosamente com um pano ou papel, remover o excesso, de bactrias, material orgnico e desinfectantes (Biggs. 2009). Este procedimento beneficia na deteco de mastites, no reflexo da descida do leite, retira leite acumulado, bem como, remove a maioria das bactrias que se fixaram na ordenha anterior, reduzindo o nmero de microrganismos presentes no leite (Fuhrman, 2002). O mais rpido possvel, aps o preparo dos tetos e de modo a coincidir com a libertao de ocitocina, coincidindo com um intervalo temporal entre 1 e 2 minutos (Biggs, 2009).

Desinfeco dos tetos pr-ordenha (pr-dipping) Remoo dos primeiros jactos de leite Maneio e Higiene da Ordenha Factores Predisponentes

Colocao das tetinas

Neste processo, deve haver o mnimo de entrada de ar, para os nveis de vcuo se manterem estveis, assim como, as tetinas devem ficar devidamente alinhadas, para no haver desconforto e desacoplamento das mesmas (Biggs, 1999) O uso de desinfectantes de tetos, ps-ordenha, elimina a maioria das bactrias que se encontram na extremidade e na pele dos tetos. Devem permanecer entre 2 a 3 h nos tetos, e baseiam-se nos seguintes compostos: hipoclorito, iodforo, clorexidina,

Desinfeco dos tetos ps-ordenha (ps-dipping)

compostos amnia quaternria ou cido dodecil benzeno sulfnico, juntando um plastificante e emoliente como glicerina, mantendo a pele suave e formando uma barreira protectora. Para obter uma maior proteco, o uso de dipp, mais seguro que o spray, cobrindo no mnimo 2/3 do teto, reduz em 50% as novas infeces e em 14% em vacas j infectadas (Blowey, 1999). Grandes quantidades de leite no bere, devido a sub-ordenha, levam a um aumento

Leite residual

da probabilidade de desenvolvimento de mastites, bem como, podem levar a leses dos tetos e bere consequente infeco(Biggs, 2009). A sub-ordenha, influncia na incidncia de mastites, na medida, que leva multiplicao de bactrias entre ordenhas (Edmondson, 2001). Essencial na reduo das disseminaes de mastites, primeiras as vacas recmparidas, alta-produo at s de baixa-produo, vacas com elevadas CCS e finalmente, vacas com mastite e em tratamento (Biggs, 2009). Vacarias que ordenham 3 vezes por dia, apresentam menor incidncia de mastites, significativa diminuio de CCS que as que ordenham duas vezes (Biggs, 2009). O canal do teto, mantm-se aberto entre 20 a 30 minutos, ps-ordenha, sendo essencial que as vacas se mantenham em estao durante esse perodo, de modo a evitar os riscos de entrada de microrganismos, devendo o alimento ser disponibilizado aps a ordenha (Lvesque, 2004).

Ordem da ordenha

Frequncia da ordenha Horrio da distribuio de alimentos

15

Tabela 6. Factores patognicos que predispem ao aparecimento de mastites A Mastite causada por vrios agentes patognicos, sendo Factores Predisponentes mais frequentes as bactrias, mas surgem tambm como causa, leveduras, micoplasmas, vrus e algas (Teixeira et al., 2008). Patognicos Os agentes patognicos, para o seu desenvolvimento, necessitam de mecanismos, com vista, capacidade em sobreviver no meio ambiente, factores de virulncia (capacidade de colonizao e produo de toxinas) e da sua susceptibilidade a agentes antimicrobianos (Radostits et al., 2000).

16

5. Etiologia das mastites

Embora existam fungos, algas, vrus que provocam mastites, os microrganismos predominantes so de origem bacteriana existindo mais de 200 diferentes tipos de organismos (Teixeira et al., 2008). Segundo Rebhun (1999), para simplificar um tpico to complexo, necessrio dividir-se em mastites contagiosas e ambientais, sendo que numa generalidade, nas mastites contagiosas o organismo coloniza a glndula mamria propagando-se atravs da mquina de ordenha e ordenhador e tendo como reservatrio o bere infectado, no entanto, no segundo caso, os agentes ambientais, tm o seu reservatrio no meio ambiente, tetos, bere da vaca e apesar de serem menos frequentes so mais resistentes a antibioterapia.

Tabela 7. Principais microrganismos contagiosos e ambientais (Rebhun 1999)

Microrganismos contagiosos

Microrganismos ambientais

Staphylococcus aureus Streptococcus agalactiae Streptococcus dysgalactiae Corynebacterium bovis Mycoplasma spp.

Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Enterobacter aerogene Serratia sp. Proteus sp. Pseudomonas sp. Estafilococos ambientais Fungos e leveduras Algas

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A prevalncia destes agentes fica descrita na tabela 8, aps alguns estudos realizados por diferentes autores:

Tabela 8. Prevalncia de diferentes bactrias causadoras de mastites. Marco Microrganismo Isolado (1990) Nilsson (1994) Ortega (2000) Ericson (2002/03) Bexiga (2005)

Staphylococcus aureus Sth. coagulase negativo Streptococcus agalactiae Streptococcus uberis Streptococcus Dysgalactiae Outros estreptococos Total de Str. no Agalactiae Coliformes

5,88% 12,94% 9,41% 8,24% 7,00%

21,6% 4,2% 0,5% 15,3% 13,5%

16,40% 11,90% 3,50% 5,70% 4,80%

21,3% 6,2% 0,6% 11,1% 15,6%

7,8% 18,1% 13,9% 7,4% 2,8%

12,94% 28,28%

0,8% 29,6%

15,90% 26,40%

0,9% 27,6%

7,4% 17,6%

20,00%

19,8%

6,84%

21,8%

7,9%

Segundo o tipo de Patogenia, tambm se classificam os agentes, em agentes maiores ou menores, sendo que os maiores consideram -se os que provocam um impacto considervel na sade da vaca, na qualidade do leite e na produtividade, como por exemplo: Streptococcus agalactiae, Staphylococcus aureus, Streptococcus uberis, Streptococcus dysgalactiae, coliformes, Pseudomonas spp., e ainda, micoplasma, prototecas e leveduras (Zadoks & Fitzpatrick, 2009). Os agentes menores so aqueles que colonizam a pele do bere e considerados parte da flora bacteriana do bere, podem estar associados a elevadas CCS, incluem-se SCN e Corynebacterium bovis, estes agentes tm a capacidade de proteger a glndula mamria contra outras infeces por agentes maiores, j que produzem substncias anti-bacterianas, capazes de inibir a competitividade destes agentes (Biggs, 2009).

18

5.1.

Agentes etiolgicos

Tal como referido anteriormente, os agentes responsveis pela mastite, podem ser contagiosos ou ambientais, sendo que neste captulo apresenta-se uma breve introduo a todos eles, desenvolvendo posteriormente, aqueles que foram fundamentais neste estudo, assim sendo:

a) Agentes contagiosos: Os agentes abaixo descritos, atingem a glndula mamria atravs do canal do teto. Adaptam-se facilmente glndula mamria, provocando infeces subclnicas que podem durar de semanas a anos, ou clnicas intermitentes. Estes agentes so libertados no leite dos quartos infectados, transmitindo-se aos outros quartos ou vacas praticamente sempre durante a ordenha (Biggs, 2009).

Tabela 9. Mastites Bovinas Contagiosas

Mastites Bovinas Contagiosas

Agente etiolgico Streptococcus agalactiae Principais fontes de infeco beres infectados da (parasita glndula Tipo de mastite -Subclnica clnicos. -Elevada CCS e diminuio da produo de leite. Staphylococcus aureus beres infectados, canal do teto e leses da pele do teto -Subclnicas e crnicas. -Por vezes gangrenosa com episdios

obrigatrio mamria)

periaguda. Mycoplasma spp. beres infectados, trato -Surtos de mastites clncas que resistem aos antibiticos. -Diminuio da produo de leite. Corynobacterium bovis beres infectados, pele e canal do teto Clnica e subclnica.

respiratrio e trato urogenital

b) Agentes ambientais: Os mais frequentes so as bactrias coliformes e os Streptococcus spp, excepto o Streptococcus agalactiae. A forma de acesso glndula mamria idntica aos agentes contagiosos, atravs do canal do teto, tendo, no entanto, a sua origem no ambiente onde a vaca se encontra. A infeco pode ocorrer a qualquer momento da vida da vaca, necessitando apenas de contacto com estes agentes, desde o intervalo entre ordenhas, durante o perodo seco, antes do primeiro parto em novilhas, ou mesmo durante a ordenha. A maior incidncia de novas infeces causadas por agentes ambientais ocorre normalmente

19

durante o perodo de secagem e no periparto. Normalmente a sua sintomatologia clnica (Biggs, 2009).

Tabela 10. Mastites Bovinas Ambientais

Mastites Bovinas Ambientais

Agente etiolgico Gram-negativos Coliformes (E.coli, Klebsiella Material orgnico das camas (serrim), fezes e solo Solo e gua gua e camas hmidas Crnica com episdios clnicos Crnica com episdios clnicos (subaguda) Pasteurella spp. Trato respiratrio superior Clnica (aguda) com secreo mamria amarelada, espessa e viscosa, sanguinolenta. Proteus spp. Camas, comedouros e gua Crnica agudos. Gram-positivos Streptococcus dysgalactiae Ambiente, beres infectados, pele e extremidade do teto Subclnica com episdios ou casos clnicos por vezes, Clnica, periaguda (toxmia) Principais fontes de infeco Tipo de mastite

spp., Enterobacter spp.) Serratia spp. Pseudomonas aeruginosa

clnicos agudos ou subagudos. Podem tornar-se crnicas.

Streptococcus uberis

Ambiente e beres infectados

Subclnica

com

episdios

clnicos agudos ou subagudos. Podem tornar-se crnicas. Enterococcus spp No conhecida Espordicas

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c) Outros agentes menos frequentes:

Tabela 11. Outras Mastites Bovinas

Outras Mastites Bovinas

Agente etiolgico SCN Principais fontes de infeco Microflora natural da pele do teto Arcanobacterium pyogenes Secrees purulentas (teto, Clnica com secreo purulenta espessa e odor ptrido. Por vezes gangrenosa Norcardia spp. Preparaes teraputicas e Clnica com formao e de Tipo de mastite Subclnica

trato genital). Oportunistas.

utenslios contaminados

granulomas purulenta

secreo

Leveduras e Fungos

Preparaes cnulas contaminadas e

teraputicas, seringas

Crnicas espessas

com

secrees com

amareladas

aumentos de CCS teraputicas Clnicas, subclnicas e crnicas

Prototheca spp.

Preparaes contaminadas

Bacillus spp.

Preparaes

teraputicas

Clnica, por vezes gangrenosa

utenslios contaminados

21

5.1.1.

Staphylococcus aureus

o agente mais agressivo dos microrganismos contagiosos, afectando geralmente animais jovens (Blood et al., 1991), capazes de produzir uma infeco crnica e profunda das glndulas mamrias (Rebhun, 1999). O S. aureus, origina uma grande preocupao com a sua circulao dentro da explorao leiteira, uma vez que, altamente contagioso, com grande habilidade em persistir no efectivo e altamente resistente a antibiticos. As mamites causadas por S. aureus so na sua maioria de carcter crnico e natureza subclinica, com mastites clnicas intermitentes (Biggs, 2009).

Caractersticas gerais e laboratoriais: So microrganismos esfricos de 0,5 a 1,2 m de dimetro, podem estar agrupados ou isolados, no esporulados, geralmente sem cpsula, anaerbios facultativos, no mveis e com metabolismo fermentativo. Cresce em placas de agar sangue ou ainda numa meio selectivo como Baird Parker, colnias de 3-4 mm de cor amarelada e geralmente hemolticas, cocos Grampositivos, catalase e coagulase positivos (havendo coagulase negativos) (Biggs, 2009).

Factores de virulncia: Assumem mais importncia as hemolisinas, leucocidinas, enterotoxinas, toxinas relativas ao choque txico e formao de biofilme, que muitas vezes leva necrose do tecido mamrio. Os factores de virulncia deste agente devem-se capacidade deste, em invadir os tecidos auxiliados pela excreo da coagulase que converte fibrinognio a fibrina, favorecendo a invaso dos tecidos (Blood et al., 1991). Segundo Radostitis e col (2000), este agente produz, 3 hemolisinas (,,), sendo a e a , verdadeiras toxinas. Na maioria dos isolamentos em vacas, houve produo de toxinas ou uma combinao entre as duas, levando a leses nas clulas epiteliais da glndula mamria, que potencia os danos por parte da toxina e aumentando a aderncia do S. aureus s clulas epiteliais da glndula mamria e sua proliferao. Ainda de referir a produo leucocidina que tem capacidade de inactivar neutrfilos. Produz penicilases o que faz com que seja resistente a antibiticos beta-lactmicos, inibindo a sua aco.

Epidemiologia: Este microrganismo no um habitante permanente da glndula mamria, o seu reservatrio principal, o quarto infectado e o sistema de ordenha (embora as estirpes isoladas nestes dois pontos sejam diferentes), podendo ocorrer colonizao da pele, cascos, bere, tonsilas, entre outros (Blood et al., 1991). Segundo Rebhun (1999), as primparas infectam-se, aquando da ingesto de leite mamtico quando ainda vitelas e por picada de mosca (espcie Haematobia irritans).

22

Factores de risco: A prevalncia da infeco deve-se: introduo de vacas portadoras, inadequada desinfeco ps-ordenha, m higiene na preparao dos tetos, transmisso atravs das tetinas, mau diagnstico de casos clnicos, tratamento inadequado, mau desenho e funcionamento da sala de ordenha, m limpeza da mesma, inadequado tratamento das vacas secas e m poltica de refugo (Biggs, 2009).

Patogenicidade e Sintomatologia: Relatos de Smith (2002), consideram as infeces como crnicas, subclnicas, com exacerbao espordica, havendo fibrose e formao de abcessos. Na situao hiperaguda, surge gangrena no bere quando no incio de lactao, em outros estados, como no perodo seco, ou numa fase tardia da lactao, temos situaes crnicas e agudas, sem envolvimento sistmico. Assim sendo, inicialmente, existe uma proliferao bacteriana nos ductos colectores e alvolos, na forma aguda bloqueiam-se os ductos por deposio de fibrina. A forma crnica, exacerba menos inflamao, sendo que o epitlio dos ductos substitudo por tecido conjuntivo e consequente atrofia (Blood et al., 1991). As infeces subclnicas, caracterizam-se por inespecificidade de sinais, alteraes no leite (cogulos, flocos) tornando-se semelhante a pus que aumentando a consistncia com o decorrer da patologia (Rebhun, 1999; Smith 2002). Nas vacas no perodo ps-parto comum, a mastite gangrenosa, esta forma tem origem nas -toxinas, sendo altamente fatal, pois com o surgimento da gangrena agravam os sinais de toxmia (41/42C febre, taquicardia, anorexia, depresso profunda e atonia ruminal) (Rebhun, 1999; Blood et al., 1991). Surge no quarto afectado, uma evidente separao entre tecido afectado e so, pois fica duro e de cor azulada, presena de lquido sanguinolento na secreo lctea e por vezes gs em algumas glndulas (Rebhun, 1991).

23

5.1.2.

Estafilococos coagulase negativos (SCN)

Ainda sem papel bem elucidado como agente de mamites, segundo Piepers e col. (2009), existem j autores como, Taponen e col. (2009), que consideram estes agentes uma causa importante de mastites. Segundo Taponen e col. (2009), foram j isolados mais de 10 espcies, so considerados agentes menores, devido sua patogenicidade (baixa ou ausente). So agentes comensais, normalmente encontram-se na pele dos tetos e do bere, sendo que algumas espcies tm a capacidade de colonizar o canal teto.

Caractersticas gerais e laboratoriais: Estes agentes crescem em agr sangue, formando colnias brancas de 3 a 4 mm, normalmente no hemolticas. So cocos Gram-positivos, sendo catalase positivos e negativos coagulase (Biggs, 2009).

Factores de virulncia: No se sabe muito bem o mecanismo que desenvolve a infeco, mas acontece frequentemente no incio da lactao, no se sabendo ao certo o porqu de acontecer deste modo, bem como da cura espontnea, julgando que tenha a ver com a ordenha (Taponen & Pyrl 2007). Ainda segundo os mesmos autores, tambm se desconhece o porqu, de umas mastites serem mais persistentes, tendo a ver com diferentes espcies, diferentes factores de virulncia e/ou uma adaptao ao ambiente.

Epidemiologia: So frequentemente isolados na pele, pex e canal do teto e tal como os S. aureus esto localizados em zonas extra-mamrias (Taponen et al., 2009). Alguns autores consideram os SCN como causa primria de infeces em primparas, estando o agente em maior prevalncia, nesta faixa etria (Pyrl et al., 2009). Deste modo o S.chromogenes a espcie mais encontradas nas primparas e a infeco d-se no incio da lactao, enquanto, o S. simulens, aparece com maior prevalncia em animais com vrias lactaes. a bactria mais prevalente em vacarias de alta produo, em que j se instaurou um plano de controlo com agentes maiores (Lvesque, 2004).

Patogenicidade e Sintomatologia: Podem originar infeces persistentes com aumento de CCS, levando a alteraes da glndula mamria e diminuio da produo de leite. Normalmente as mastites originadas, so subclnicas ou clnicas moderadas, com sinais clnicos ligeiros, aumento do bere, alterao no aspecto do leite e baixas CSS (Taponene & Pyrl, 2007).

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5.1.3.

Streptococcus uberis

Considerado at h poucos anos como um agente ambiental, pela associao a camas de palha, constata-se hoje em dia, que algumas estirpes so agentes por contgio. A infeco intramamria por S. uberis mais comum no perodo seco e o surgimento de casos clnicos d-se geralmente no incio da lactao (Biggs, 2009).

Caractersticas gerais e laboratoriais: Cocos com 0,8 a 1m, agrupam-se em cadeias, anaerbios facultativos, imveis e alguns apresentam cpsula. Este agente cresce em agr sangue, Edwards e Mcconkey, formando colnias de 1 a 2mm, lisas, translcidas e convexas, so no hemolticos ou parcialmente alfa-hemolticos, Gram positivos e catalase negativos (Biggs, 2009).

Factores de virulncia: O S. uberis um agente capaz de resisitir fagocitose dos neutrfilos e produz hemolisinas (estreptolisinas O e S). Catabolizam protenas como a casena para libertar aminocidos para a sua nutrio, multiplicando-se de forma exponencial e dificilmente eliminado apenas com a ordenha (Biggs, 2009). Incluem protenas da matriz celular e uma protena SUAM (Streptococcus uberis adhesian molcule), que permite a sua ligao lactoferrina (Santos et al., 2007).

Epidemiologia: Este agente bastante resistente a baixas temperaturas, para alm de ser encontrado nas camas, tambm pode ser isolado, no solo, boca, vulva, tetos, pele do abdmen e fezes de vaca (Tyler & Cullor, 2008). A infeco por este agente mais comum durante os meses frios, devido aos danos infligidos na prpria pele (Blood et al., 1991). Algumas vacas persistentemente infectadas, eliminam um grande nmero de microrganismos pelas fezes, da uma grande quantidade coincidir a sua existncia com as camas de palha, sendo que, consoante o material, maior o nmero de agentes encontrados, da camas de serradura, apresentarem um menor nmero de S. uberis, da o problema da maternidade com camas de palha (Radostitis et al., 2000). Segundo Biggs, (2009), as estirpes ambientais afectam vacas secas e novilhas, por outro lado, as contagiosas, afectam vacas em lactao, assim como, a existncia de vrias estirpes na vacaria induz a contaminao ambiental, enquanto a existncia de uma s estirpe, indica agente contagioso.

Patogenicidade e Sintomatologia: Tem a capacidade de causar mastites clnica ou subclnicas com aumento de CSS, podendo tornar-se crnicas. Mastites provocadas por este

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agente, originam quartos quentes, duros e inchados, a vaca pode apresentar temperaturas elevadas por 24 horas, mas sem graves sinais de doena (Blowey, 1999). As infeces permanecem subclnicas durante longos perodos temporais e na ausncia de tratamento, levam a grandes perdas na produo de leite (Rebhun, 1999).

5.1.4.

Bacillus spp

Caractersticas gerais e laboratoriais: este agente assemelha-se a bastonetes, so Gram positivos, podem ser aerbios restritos ou facultativos (Biggs, 2009). Factores de virulncia: As espcies do gnero Bacillus spp produzem endsporos que possuem a capacidade de ficar latentes por vrios anos. Ainda possuem uma cpsula antifagocitica de natureza proteica e um antignio proteico que induz produo de anticorpos neutralizantes, bem como, formao de um factor letal (Biggs, 2009). Epidemiologia: So responsveis por contaminar o ambiente encontrando-se na gua, solo, p, ar, fezes, vegetao, feridas e abcessos (Biggs, 2009). Tambm segundo o mesmo autor, a contaminao d-se por mau tratamento mamrio durante a secagem (cnulas contaminadas) ou por incorrecta desinfeco dos tetos neste tratamento.

Patogenicidade e Sintomatologia: Algumas espcies, causam mastites gangrenosas muito graves, outras por sua vez, causam mastites moderadas com espessamento crnico do quarto afectado e pode ascender vagina, decorrendo uma diminuio de fertilidade com endometrite (Blowey, 1999).

5.1.5.

Streptococcus dysgalactiae

Considerado, por alguns autores, como um agente ambiental com alguma transmisso por contgio (Biggs, 2009), outros como, Blowey (1999) consideram o Str. dysgalactiae somente como um agente contagioso. Semelhante ao St. aureus e ao Str. agalactiae, mas com a particularidade de sobreviver tanto na glndula como no ambiente do estbulo e classificando-se como agente simultaneamente ambiental e contagioso (Teixeira et al., 2008).

Caracteristicas gerais e laboratoriais: So esfricos ou ovides de 0,8 a 1 m de dimetro, anaerbios facultativos, imveis e alguns com cpsulas. Crescem em agar sangue e em agar Edwards, formando colnias com 1 a 2 mm, regulares, translcidas e convexas. Estas colnias so duras, no viscosas e empurram-se atravs do agar. Regra geral, so alfahemolticas, catalase negativos, Gram-positivos e pertencentes ao grupo C de Lancefield (Biggs, 2009).

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Factores de virulncia: Segundo Radostitis e col. (2000), existem diferentes sertipos e cada um com diversos factores anti-fagocticos, nos quais esto includos a protena M-like, 2-macrobulinas, cpsula e fibronectina. Estes agentes ainda incluem nestes factores a hialuronidase e a fibrinolisina.

Epidemiologia: Este agente transmite-se maioritariamente, pelo contacto dos tetos com as fezes, solo ou camas contaminadas, ou ento onde a preparao da ordenha deficiente (Biggs, 2009). Segundo Tyler e Cullor (2002), esta bactria encontrada no ambiente e mantm.se no ambiente por um longo perodo de tempo. De acordo com Radostitis e col. (2002), este agente foi isolado na boca, amgdalas e vagina das vacas, assim os animais podem infectar os tetos quando os lambem. Pensa-se que seja esta a razo para o isolamento em novilhas e vacas secas (Teixeira et al., 2008). Surgem regra geral no inicio da lactao, devido infeco durante o perodo seco e tendem a durar por um ms (Lvesque, 2004).

Factores de Risco: Mau funcionamento da mquina de ordenha que leva a dano dos tetos, ms condies dos tetos, alojamento inapropriado, negligncia das prticas de higiene e danos fsicos nos tetos e tratamento inadequado no perodo seco (Biggs, 2009).

Patogenicidade e Sintomatologia: Os casos clnicos da responsabilidade deste agente so de fcil tratamento, havendo no entanto, infeces persistentes, que resultam num aumento de CCS e nestes casos pode levar a infeces por contgio (Biggs, 2009). Clinicamente caracteriza-se com uma evoluo aguda, com anorxia e pirxia, alm de sinais locais, bem como, anormalidades no leite (Blood et al., 1991). Este agente, tambm isolado nos casos das mastites de Vero (Biggs, 2009). Segundo Lvesque (2004), apesar de algum dos casos de mastites provocados por este agente terem cura espontnea, aconselhvel o tratamento com antibiticos nos casos clnicos. O tratamento realizado durante o perodo seco, regra geral eficaz e previne novas infeces no incio da secagem.

5.1.6.

Coliformes

Este grupo de agentes tem na sua origem no trato intestinal e encontram-se no estrume, que contamina, camas, solos e gua (Lvesque, 2004). So microrganismos, muito importantes na etiologia destas afeces. So agentes ambientais e oportunistas (Blood et al., 1991). Como bactrias mais representativas, no grupo dos coliformes e causadoras de mastites, encontramos a Escherichia coli, Klebsiella sp, Serratia, Citrobacter e Enterobacter sp (Blowey, 1999).

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Caractersticas gerais e laboratoriais: Estes agentes desenvolvem-se em agar sangue ou meios selectivos como McConkey, formando colnias cinzentas claras, com dimenses de 25 mm, podem ser hemolticas ou no, Gram negativas. Relativamente aos fermentadores de lactose (Escherichia coli, Klebsiella sp, Serratia, Citrobacter e Enterobacter sp), originam colnias cor-de-rosa em placas de meio McConkey (Biggs, 2009).

Factores de virulncia: Aps a invaso do canal do teto, desencadeiam-se os normais mecanismos de defesa do bere, a rpida destruio das bactrias pelos neutrfilos conduz libertao de uma endotoxina lipopolissacrida presente nas paredes destas bactrias desencadeando uma reaco inflamatria mais forte e mais evidente, que se manifesta de forma sistmica e pode conduzir morte dos animais (Rebhun, 1999).

Epidemiologia: Normalmente a infeco ocorre aps o parto e no incio da lactao (Lvesque, 2004). A incidncia destas infeces tem aumentado com o passar dos anos, sendo mais prevalente, em exploraes em que foram debeladas as mastites por estreptococos e estafilococos e exploraes com baixas CCS (Blood et al., 1991). Estas afeces em exploraes com grande prevalncia, podem inclusive, levar morte de animais do efectivo (Rebhun, 1999). Sem grande relevncia, no na transmisso vaca para vaca, que se faz a disseminao destes agentes, mas sim nos factores de maneio, como os procedimentos sanitrios antes da ordenha, ou mesmo, qualquer objecto, mos de manipuladores, tetinas de ordenha, entre outros, que estejam conspurcados com fezes dos animais e entrem em contacto com o bere da vaca, pois estas bactrias fazem parte da flora normal do intestino da vaca (Smith, 2002). A incidncia das mastites por coliformes, tem um maior aumento no Vero, pois o calor e a humidade favorecem o desenvolvimento deste grupo, sendo que, no perodo ps-parto que devido a uma supresso da imunidade, que mais incidem estes casos, embora tambm, a ocorrncia de desordens metablicas potenciem o aparecimento destas mastites (Rebhun, 1999). As vacas secas raramente desenvolvem mastites por coliformes, no entanto, encontram-se sujeitas imediatamente antes da secagem e anterior ao parto, devido s baixas concentraes de lactoferrina, que competem juntamente com os coliformes, pelo ferro disponvel durante estes dois perodos mencionados (Blood et al., 1991). Quando se atinge um nmero aumentado de bactrias, estas invadem o conduto secretor e o quarto, suprimindo os mecanismos de defesa, sendo que a multiplicao bacteriana extremamente intensa nas primeiras 16 horas (Rebhun, 1999). Por vezes, o nmero de bactrias baixo ou ausente, apesar de surgirem sinais clnicos de mamite, pelo que pode haver ausncia de crescimento de bactrias nas culturas microbiolgicas (Lvesque, 2004).

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Factores de Risco: Segundo Radostitis e col. (2000), vacas com baixas CCS, vacas que se encontram em vacarias com baixas incidncias de Streptococcus e Staphylococcus e o sndrome da vaca cada (por contacto do bere/tetos com fezes/cama), so factores de risco para o aparecimento de estes agentes. Patogenicidade e Sintomatologia: A infeco subclnica comum, regra geral de curta durao, quando o seu desenvolvimento leva a mastite clnica, a severidade moderada e atingindo casos com alguma gravidade (Lvesque, 2004). As mastites clnicas caracterizam-se pela alterao do leite (aguado e com tonalidade amarelada), devido produo das endotoxinas por parte das bactrias, rapidamente se verificam sinais como: inflamao do bere, febre e sinais sistmicos devido toxmia. Os coliformes podem levar prpria morte da vaca em apenas 6 a 8 horas aps a sintomatologia clnica. No entanto, regra geral a vaca recupera em 24 a 48h. Por vezes, o nmero de bactrias baixo ou ausente, apesar de surgirem sinais clnicos de mastite, pelo que pode haver ausncia de crescimento de bactrias nas culturas microbiolgicas (Lvesque, 2004).

5.1.6.1. Escherichia coli

um dos principais agentes patognicos espalhado por todo o mundo e o agente ambiental de maior prevalncia nas exploraes, da o responsvel por maior parte das mastites (Biggs, 2009).

Factores de virulncia: So associados a este agente, consoante os diferentes sertipos, factores de virulncias tais como: adesinas, as toxinas, a parede celular, a cpsula e a resistncia ao sistema imunitrio. Os lipopolissacridos (LPS) da parede, chamados de endotoxinas, que so libertados quando o sistema imunitrio destri as bactrias invasoras, provocam grandes alteraes na permeabilidade e aumentam as clulas somticas na glndula mamria do leite, resultando em edema, depresso, toxmia e outros sinais severos de mastites (Ribeiro et al., 2008).

Epidemiologia: Esta bactria encontra-se presente nas fezes, solo e camas. A prevalncia deste agente aumenta com, dfices de higiene, m ventilao e sobrelotao animal, sendo que, as suas infeces so oportunistas e de curta durao (Biggs, 2009). Ainda segundo o autor referenciado acima, tm sido reportados casos de mastites crnicas, sem sinais aparentes, contaminadas e eliminando a bactria persistentemente. Biggs (2009), diz-nos ainda que, estas mastites podem ocorrer em mais do que um quarto, mas por ser agente ambiental, com maior frequncia que se atingem os quartos posteriores.

Patogenicidade e Sintomatologia: A reaco inflamatria cinge-se aos quartos afectados, com aumento da temperatura, rubor e uma produo de leite com aspecto aquoso. Esta

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reaco pode desenvolver-se originando, um quadro sistmico resultante da toxmia, podendo levar a morte em casos hiperagudos (Blood et al., 1991). As vacas que somente desenvolvem reaco inflamatria, sofrem um aumento transitrio na CCS, enquanto, as vacas com mastites clnicas, denotam o o quarto, quente, duro e inchado, com leite aquoso ou seroso (Biggs, 2009). Segundo Biggs (2009), tm sido reportados casos de mastites crnicas, sem sinais aparentes, contaminadas e eliminando a bactria.

5.1.6.2. Klebsiella

Identificada h j bastante tempo como agente de mastites, esta bactria pertence famlia das Enterobacteriaceae. Tem sido causa de surtos de mastites, em diferentes pases (Ribeiro et al., 2008). Factores de virulncia: Semelhantes a E. coli, no que origem da sintomatologia diz respeito, toxmia, por absoro da endotoxina.

Epidemiologia: Esta bactria reponsvel principalmente por mastites nas primeiras duas semanas de lactao, sofrendo a glndula mamria, alteraes semelhantes aquelas provocadas por E.coli (Ribeiro et al., 2008). A prevalncia deste agente encontra-se, regra geral, associado a camas de serradura, sendo potenciado pelo armazenamento desta, em locais hmidos e quentes (Blowey, 1999). Ainda assim, possvel encontrar este agente, na comida, gua, nos membros posteriores das vacas e pele dos tetos. Em alguns surtos tem havido transmisso por contgio (Biggs, 2009). Patogenicidade e Sintomatologia: No que a mastites clnicas diz respeito, a vaca pode apresentar, sinais sistmicos como: pirxia (41C), polipneia, anorexia, estase ruminal, tremores, taquicardia e depresso (Ribeiro et al., 2008). Segundo Henton (2004), nas mastites hiper-agudas por absoro de endotoxina, os quartos infectados, apresentam-se quentes, dolorosos, inchados, extremidades dos tetos frias e descoradas (vermelhas ou azul escuras) e com linfonodos mamrios aumentados.

5.1.7.

Enterococcus spp.

Pertencem flora intestinal normal das vacas, podem ser agentes ambientais oportunistas que causam mastites (Metzger, 2008). Segundo Metzger (2008), E. faecium foi o agente mais isolado na glndula mamria e em camas, sendo que tambm j foram isolados com alguma regularidade E. faecalis e E. casseliflavus.

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No se conhece muito bem, o mecanismo deste agente, da a necessidade que ao saber que se trata de um agente ambiental, em fazer prevalecer na vacaria uma boa higiene, de modo a controlar as mastites por este agente

5.1.8.

Proteus spp.

Segundo Biggs (2009), este agente referido na maior parte das vezes como contaminante e no tanto como causa de mastite. Epidemiologia: O Proteus spp., frequentemente encontrado nas camas, na comida, na gua e leite e exala um cheiro bastante caracterstico (Biggs, 2009). Patogenicidade e Sintomatologia: Responsvel por mastites crnicas ou casos clnicos agudos (Biggs, 2009)

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6. Deteco e Diagnstico de Mastites

A mastite constitui um risco potencial para outras vacas, assim como, afecta a qualidade do leite, sendo as suas alteraes dependentes do agente patognico e da resposta inflamatria (Pyrl, 2003). A inspeco visual e a palpao do bere no requerem mais tempo na ordenha, sendo somente necessrio, ter ateno para sinais de inflamao da glndula mamria, como, inchao, dor, rubor do quarto (Lvesque, 2004). Em caso de ausncia de sinais fsicos de inflamao do bere, a melhor maneira de deteco de mastites, rejeitando os primeiros jactos para um copo de fundo preto, no entanto considerada uma tarefa morosa. Outra hiptese, mas de menos eficcia mas com alguma utilidade a rejeio dos primeiros jactos para o cho (detecta facilmente cogulos) (Blowey, 1999). A anlise bacteriolgica no realizada, de forma rotineira para identificao de mastites clnicas (Pyrl, 2003). Os indicadores de inflamao podem ser determinados atravs de utilizao de tcnicas rpidas e fiveis (Blood et al., 1991). Existem alguns teste que podem ser realizados na explorao, bem como, outros que realizados em laboratrio, de maior certeza, que nos indicam se estamos perante um problema de mastites e complementando a habitual e tradicional inspeco e palpao do bere (Teixeira et al., 2008).

6.1.

Deteco de Mamites
6.1.1. Contagem de Clulas Somticas

A contagem de clulas somticas representa o melhor mtodo na deteco de mastites subclnicas (Blood et al., 1991). Foi na dcada de 60, que este mtodo foi utilizado pela primeira vez (Green et al., 2004). Segundo Pyrl (2003), as clulas somticas que se encontram no leite, so as clulas da linha branca e clulas epiteliais, oriundas da descamao. Considerando que 1 a 11% so neutrfilos, 66 a 88% macrfagos, 10 a 17% linfcitos e por fim de 0 a 7% de clulas epiteliais. Por outro lado e segundo Smith e col. (2002), 75 % das clulas somticas so leuccitos e 25% sero clulas epiteliais. Quando se desenvolve a infeco, os macrfagos possuem um papel preponderante no desenrolar do processo inflamatrio. Aps a invaso e colonizao por parte do agente patognico,

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os macrfagos do inicio resposta inflamatria atraindo neutrfilos para o local lesado visando a destruio do agente patognico, que na constituio do leite mamtico, consiste em mais de 200000 clulas/ml (Rebhun, 1999; Smith et al., 2002). Segundo Pyrl (2003), contagens celulares abaixo das 100000 clulas/ml, so indicativos de bere saudvel, assim como, acima das 200000 clulas/ml indicam mastite. Autores como Rebhun (1999), referem que as perdas econmicas na explorao leiteira, surgem em contagens de clulas somticas, que atingem as 500000 clulas/ml, sendo que, deste modo, as mastites subclnicas esto associadas a graves perdas econmicas. No que a contagens celulares de tanque diz respeito, valores acima das 500000 clulas, significam que mais de metade dos animais do efectivo, se encontram afectados (Rebhun, 1999). Diversos factores fisiolgicos afectam a CCS, tal como, poca do ano, idade das vacas, nmero do efectivo, fase de lactao, entre outros (Blowey et al., 1999; Rebhun, 1999). Como por exemplo: as contagens celulares, ps-parto, so elevadas, diminuindo 4 a 5 dias depois, at valores normais; no trmino da lactao tambm apresentam contagens mais elevadas; o aumento do nmero de ordenhas diminui a contagem de clulas somticas, bem como, a realizao da ordenha da tarde leva a um aumento das CCS pela menor diluio devido ao intervalo mais curto de ordenha; outro exemplo ainda, o aparecimento de doena sbita, que leva a diminuio drstica de produo e contagem de clulas da amostra elevadas. No entanto, segundo Pyrl (2003), estudos mostraram que os efeitos fisiolgicos afectam muito pouco estas contagens em vacas saudveis, assim sendo, este mtodo de diagnstico pode ser utilizado, para detectar mastites numa fase precoce ps parto.

6.1.2.

Culturas Bacteriolgicas

Estas culturas so comummente usadas como diagnstico para resolver os problemas de mastites, uma vez que o conhecimento etiolgico destas afeces, permite discernir, acerca da causa e preveno da transmisso destas afeces (Lam et al., 2009). Segundo um estudo elaborado pelo autor acima referido, 40 % das infeces intra-mamrias nunca expressaram sinais clnicos, dependendo do agente. Tabela 12. Nmero de infeces intra-mamrias (Lam et al., 2009)

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Este meio de diagnstico recomenda-se na aquisio de uma vaca, antes do tratamento de uma mamite clnica, na existncia de mamites subclnicas, nas vacas recm-paridas e para resolver problemas particulares da vacaria (Lvesque, 2004). A colheita do leite pode ser feita nos quatro tetos em conjunto, mas recomendvel, individualmente, permitindo identificar qual os tetos afectados, indicando para tratamento, somente o teto afectado (Radostitis et al., 2007). Por outro lado, tambm possvel, fazer a colheita no tanque, o que de certa forma, pode ter origem, no s da glndula mamria afectada, mas tambm das superfcies dos tetos, dos beres e de outras fontes ambientais. A colheita do leite do tanque tem principalmente o objectivo de identificar agentes contagiosos. O nmero de microrganismos presentes na amostra, varia com o nmero de vacas, com a produo de leite e gravidade da infeco, so testes de baixa sensibilidade, mas de elevada especificidade (Radostitis et al., 2007). De salientar, que o leite do tanque pode contaminar-se com agentes patognicos ambientais devido a m higiene da ordenha, resultando em contaminao do tanque com pele, camas, esterco ou gua contendo microrganismos. Assim apesar dos agentes etiolgicos provirem de infeces intramamrias, existe tambm, a diluio que est sujeita a amostra, infeces latentes, excreo intermitente dos agentes e a recolha de uma s amostra, leva-nos a obter uma cultura obtida atravs do leite de tanque, com baixa sensibilidade (Lam et al., 2009). No controlo da qualidade do leite, necessrio identificar quais os animais responsveis pelas alteraes do leite no tanque, tornando necessrio identificar as vacas problemas e proceder ao seu tratamento. O conhecimento dos agentes responsveis pelas mastites, torna-se fundamental para o protocolo teraputico, e desenvolvimento de programas de controlo. A colheita das amostras deve ser feita de modo a reduzir ao mximo a contaminao exterior. A ponta do teto deve ser limpa com algodo e lcool a 70%, aps a limpeza comum a que todos os tetos so submetidos antes da ordenha. Os primeiros 2 ou 3 jactos de leite devem ser descartados, uma vez que as clulas e bactrias que apresentam apenas reflectem a contaminao do canal do teto, e no o leite da glndula mamria em geral (Radostits et al., 2000). O frasco de colheita deve ser estril e imediatamente refrigerado aps a colheita. A obteno de resultados por parte das amostras tambm tem em conta o surgimento de resultados dbios, como os falsos positivos e os falsos negativos, sendo que os primeiros obtm-se quando existe contaminao do leite por m higiene e os segundos por mau acondicionamento da amostra, por presena de leuccitos e/ou antibiticos no leite que podem destruir ou inibir o crescimento dos agentes patognicos. Por outro lado, microrganismos como o Mycoplasma, requerem meios especiais de cultura, assim como, a E. coli, pode j no se encontrar na amostra quando recolhido o leite (Lvesque, 2004). Segundo Biggs (2009), como raramente se encontram mais de trs agentes por infeco, quando isto acontece, est convencionado que a amostra se considera contaminada. Ao longo de vrios anos e de modo a aumentar a percentagem de identificao de microrganismos, tm-se desenvolvido vrios mtodos, como, incubao de uma pr-cultura,

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congelamento de pr-cultura, aumento dos volumes de inoculao de uma placa e PCR (Lam et al., 2009).

6.1.3.

Anlise do Leite do Tanque por PCR

A anlise do leite do tanque por PCR Polymerase Chain Reaction, surge como alternativa microbiologia convencional para determinar a presena de agentes contagiosos e ambientais e causadores de mastites ao nvel da explorao. O PCR um processo de ampliao de DNA, realizado em laboratrio de forma controlada e guiada. O DNA alvo de cada agente semelhante mas as diferenas so detectadas por PCR. Uma das formas mais rpidas, menos dispendiosas, com menos logstica, utilizao de cartes FTA, tal como no STARTCHECK. Estes cartes tm por base uma matriz celulosa com reagentes qumicos impregnados, inocula-se a amostra numa determinada zona (no centro de um crculo previamente determinado), que mantm o DNA intacto, ligado e protegido de ataque externo, apesar de que, os reagentes re-hidratam e atacam as membranas, paredes e cpsulas de uma forma selectiva.Este diagnstico segue diferentes passos, de acordo com a figura 6.

Figura 6: Procedimentos para a anlise do leite do tanque por PCR

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Tabela 13. Comparao entre bacteriologia convencional e a anlise de tanque por PCR

Este tipo de diagnstico, exige correlao entre contagens bacterianas (microbiologia) e contagens semiquantitativas do PCR, uma ferramenta vlida para avaliar os agentes dominantes ao nvel de uma explorao, bem como, til para ultrapassar as limitaes dos mtodos convencionais e pode ser utilizado como mtodo de rastreio efectivo.

6.1.4.

Teste Californiano de Mamites (TCM)

O TCM o nico mtodo fivel para avaliar as mastites subclnicas de uma forma facilmente exequvel (Ruegg, 2003). Este indicador de inflamao da glndula mamria baseia-se na quantidade de clulas somticas presentes no leite. Este teste consiste numa reaco qumica em que se junta ao leite um reagente (Teepol + Bromocresol prpura). O contacto do reagente especfico com as clulas somticas origina a formao de uma gelatina provocada pela aglutinao das protenas. uma prova bastante til e rpida, que tem como principal desvantagem a subjectividade na interpretao da viscosidade da amostra analisada, de acordo com, a intensidade da reaco, esta pode ser classificada de negativa (0), leve (+), moderada (++) e intensa (+++) (Ribeiro et al., 2003). No entanto segundo outros autores a classificao pode ser de 1 a 5, em que 1 negativa, de 2-5 a reaco inflamatria crescente (Teixeira et al., 2008).

6.1.5.

Condutividade elctrica

uma prova de utilizao recente nas salas de ordenha. A prova baseia-se no princpio em que o aumento da condutividade elctrica do leite directamente proporcional ao aumento da inflamao do bere e da CCS. O aumento dos ies sdio e cloro e a diminuio do clcio e outros constituintes do leite so caractersticos do leite mamtico. Os dados obtidos a partir deste teste

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devero ser analisados frequentemente e deve-se ter em conta que este no substitui nenhuma das outras provas, pelo que um complemento a estas (Teixeira et al., 2008).

6.1.6.

NAGase

A NAGase ou N-acetil -glucuronidase, uma enzima intracelular, lisossomal que se liberta no leite, oriunda dos neutrfilos durante a fagocitose e lise celular de algumas clulas epiteliais, encontrando-se aumentada aquando da infeco da glndula mamria. Estudos demonstraram que a avaliao desta enzima um mtodo fivel na deteco de mamites, existindo boa correlao entre os teores de NAGase e a contagem de clulas somticas (Teixeira et al., 2008).

6.1.7.

Deteco de anticorpos no leite

Este mtodo consiste numa prova de ELISA (Enzym Linked Immuno Sorbent Assay) que detecta anticorpos no leite. Particularmente desenvolvida para identificar mastites por St. aureus, esta prova tem a desvantagem de poder dar origem a presena de falsos positivos pois a presena de anticorpos no leite permanece para alm do trmino da mastite (Teixeira et al., 2008).

6.1.8.

Teor Microbiano Total (TMT)

O TMT tambm uma medida de avaliao da qualidade do leite e da incidncia de mastites na explorao. Conjugando os dados provenientes deste teste com outros, pode-se aferir sobre a higiene da ordenha e estado hgio-sanitrio dos animais (Teixeira et al., 2008).

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7. Importncia Econmica das Mastites

Segundo Ribeiro e col. (2003), a mastite a patologia com maior importncia econmica no seio de uma explorao leiteira, sendo que as perdas resultam tanto de mastites clnicas como de mastites subclnicas. Para alm, dos impactos de uma doena, do seu tratamento e eliminao da mesma da explorao, certos parmetros, como a diminuio da produo so imediatamente visveis pelo produtor, para alm de perdas, como sejam os custos adicionais de tratamento. As perdas resultantes das mastites tm a ver com custos que se encontram, directa ou indirectamente, relacionados com a circulao da patologia na explorao. Estes custos advm de forma directa pela perda da produo leiteira e os gastos na teraputica e seus frmacos. Enquanto que, os custos que se geram indirectamente fazem meno diminuio da produo leiteira, durante a restante lactao por leses na glndula, penalizaes por aumento no nmero de clulas somticas e alterao dos parmetros quantitativos (protena e gordura), necessidade de aumento de mo de obra para tratamentos e cuidados adicionais, maiores percentagens de refugo e reposio, vacas de refugo com menor peso da carcaa, maior intervalo entre partos (menos nascimentos), bem como, reduo do potencial gentico e mortes (Blowey et al.; 2003).

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8. Vacinao
A vacinao o mtodo mais eficaz e econmico de controlar a maior parte das doenas dos animais domsticos. Os objectivos da vacinao, so estimular o sistema imunitrio, prevenir a disseminao de antignios e aumentar a performance produtiva dos animais. A vacinao no erradica o agente infeccioso, mas activa a resposta imunitria, de modo, a obter uma resposta capaz de induzir proteco frente aos efeitos dos agentes infecciosos envolvidos. Comparativamente, imunidade passiva, a resposta no to rpida, mas mais duradoura, pela produo de clulas de memria, por parte do sistema imunitrio. Este mtodo, consiste na administrao de um antignio ao animal, na forma de toxide (exotoxina bacteriana inactivada), bacterina (estrutura perifrica de uma bactria) ou vrus, servindo estes para o desencadear da resposta imunitria primria, de modo que, quando o animal contacte novamente com o agente infeccioso, haja uma resposta com produo rpida de anti-corpos para debelar a doena, resposta imunitria secundria (Tizard, 2008). Segundo o mesmo autor, Tizard (2008), uma vacina deve, idealmente: estimular clulas apresentadoras de antignios conduzindo libertao de mediadores de resposta imunitria, estimular linfcitos B e T (Thelper e Tcitotxicos) fornecendo um pool de memria, estimular clulas T para diferentes eptopos e garantir a persistncia do antignio no tecido linfide de modo a produzir uma resposta prolongada. No que produo animal diz respeito, o objectivo principal da vacinao, no aumentar as defesas individuais, mas sim do colectivo da explorao, de modo a aumentar as performances produtivas e sempre segundo a relao eficcia vacinal/custo/benefcio. Relativamente aos tipos de vacinas, num programa vacinal, essencial a escolha do tipo de vacina, dois dos pr-requisitos de uma vacina ideal , a elevada virulncia e ausncia de efeitos adversos, no entanto, so ambos incompatveis. Assim sendo, a segurana animal e a eficcia para o animal, que ditam a escolha da mesma (Tizard, 2008). As vacinas classificam-se consoante a imunidade que conferem, em vivas e inactivadas e relativamente valncia, em monovalentes e polivalentes. No que imunidades se refere temos: Vacinas vivas: Consistem na administrao de antignio igual ou semelhante ao agente etiolgico, havendo prolongada persistncia no tecido linfide e produo elevada de anticorpos. Sendo suficiente para haver resposta imunitria efectiva, uma nica administrao dos agentes vivos. Agentes estes que sofrem processo de atenuao de modo a reduzir a virulncia (Tizard, 2008). Os animais vacinados, devem ser separados dos no vacinados, durante algumas semanas, de modo a no disseminar a doena (Radostitis et al.,2002). Vacinas inactivadas: So vacinas mais seguras, consistem na administrao de antignio previamente inactivado (por calor ou inactivao qumica). Actuam como antignios endgenos e estimulam o sistema hormonal, embora seja sempre necessrio um reforo,

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bem como doses mais elevadas e revacinaes mais frequentes (Tizard, 2008). A potenciao destas vacinas, tambm fruto dos adjuvantes, os quais induzem a produo de clulas pr-estimulatrias pelas clulas apresentadoras de antignios, retardam a libertao de antignio no organismo, prolongando e aumentando a resposta (Tizard, 2008). Alguns adjuvantes podem levar a reaces adversas no local de inoculao, toxicidade sistmica ou reaces de hipersensibilidade.

Tabela 14. Diferenas entre vacinas vivas e vacinas inactivadas (Tizard, 2008)

Relativamente valncia das vacinas: Vacinas monovalentes: protegem apenas contra um agente etiolgico, recomendadas em situaes em que h conhecimento do agente, possuindo uma resposta menos intensa, mas mais especfica, do que, a causada pela vacinas polivalentes (Stillwell & Matos 2004); Vacinas polivalentes: conferem proteco contra vrios agentes, de uso mais frequente, pelos factores econmicos, de maneio e logstica da pesquisa de agentes na prtica de campo. Nunca esquecendo que a maioria das patologias que afectam bovinos, se caracteriza pela actuao sinrgica de vrios microrganismos (sndromes ou complexos) (Stillwell & Matos 2004). No entanto, segundo Tizard (2008), apesar de diminurem o nmero de contenes efectuadas, os custos associados profilaxia, tem a desvantagem de aumentar o risco de

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reaces adversas, sendo tambm desaconselhvel, nos casos em que se pretende proteco somente para um agente.

41

9. Eficcia vacinal na preveno de mastites

9.1. Objectivos

A circulao de Mastites na explorao leiteira, um dos maiores problemas, sanitrios e econmicos, uma vez que, so as responsveis pelas maiores quebras de produo, consequentemente, levando a grandes perdas econmicas que podem comprometer o sucesso da explorao, devendo por estes factores, tornar-se a sua preveno, uma prioridade de qualquer bovinicultor de leite. Do ponto de vista da sade pblica, sobretudo quando relacionados com a presena de resduos e disseminao de resistncias bacterianas aos antibiticos, foi recomendado em 2001, pela Organizao Mundial de Sade, a reduo e o uso racional de antibiticos em bovinos leiteiros. Desta forma, a profilaxia, toma especial relevo no que neste assunto diz respeito, uma vez que, possibilita diminuio do uso tanto em frequncia, como em quantidade da antibioterapia. Tambm, no atenuar do aparecimento de mastites, por meio da vacinao, permite menores alteraes no leite produzido na explorao, perfazendo ento, um maior sucesso econmico e funcional, sem refugo tanto do leite, como de animais. Por outro lado, tambm de ter em conta que o conhecimento prvio do agente etiolgico que desenvolve a casustica de mastites numa explorao fundamental, na medida, que devido multietiologia das mastites, nem todas as vacinas, fornecem o pavio para a imun idade necessria, a todos os agentes etiolgicos que circulam nas diversas exploraes leiteiras. Os objectivos deste ensaio foram os seguintes: Diminuio da incidncia de infeco intra-mamria; Diminuio da severidade dos sintomas; Diminuio da contagem de clulas somticas; Aumento da taxa de cura; Aumento da produo de leite; Diminuio de tratamentos; Melhorar a eficcia dos tratamentos.

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9.2.

Material e Mtodos
9.2.1. Amostragem

O trabalho experimental realizado, consistiu na vacinao de parte do efectivo da explorao de bovinos leiteiros da M.Rito L , entre 25 de Outubro de 2010 e 04 Maio de 2011. Entraram neste ensaio 307 bovinos, administrando a vacina Startvac
da.

do Laboratrio Hipra, a animais que se

seleccionaram, consoante o seu estado reprodutivo, sanitrio e produtivo, de modo a ser possvel seguir os dois diferentes protocolos vacinais estipulados pela vacina, atravs de trs grupos de animais de teste, que eram homogneos entre si e heterogneos quando comparados com os outros protocolos, sendo que cada um destes grupos, possua animais no vacinados formando um grupo controlo.

9.2.2.

Descrio da explorao
da.

Situada no concelho de Idanha-a-Nova, em plena Beira Baixa, M. Rito L , uma explorao de bovinos de leite de larga dimenso, cujas instalaes se situam na Herdade Couto dos Carris. Esta explorao, caracteriza-se pela produo de leite, com posterior venda do leite produzido, para um dos lderes de mercado, a Danone, com fbrica sita em Castelo Branco. Actualmente o efectivo desta explorao, ronda os 1300 animais de raa, Holstein Frsia, sendo que, apesar de na sua maioria serem animais j nascidos nesta explorao, no incio da sua concepo, foram adquiridos animais na Holanda, Alemanha e Itlia. O efectivo em lactao, constitui em mdia os 467 animais, apresentando uma mdia diria de leite de 11000 litros e previso de produo aos 305 dias de aproximadamente 8106 litros (mdia dos 6 meses em que foi realizado o estudo).

Instalaes e equipamentos: A explorao constituda por um conjunto de quatro silos e oito pavilhes, seis deles

albergando os animais que formam o efectivo da explorao e os outros dois para armazenamento de alimentos e outros (serradura, etc), bem como, da maquinaria necessria ao normal funcionamento da vacaria. importante referir, que dos seis pavilhes que servem de albergue aos animais, em quatro deles, que servem de estbulos s vacas em produo, novilhas gestantes e vacas recmparidas, as vacas so estabuladas em modo fechado, em vrios parques que apresentam duas filas de cubculos paralelos centrais, cabea com cabea e as camas so constitudas por um tapete de borracha coberto por um material impermevel, revestido na parte inferior com regularidade com uma camada de serradura. O pavimento constitudo por piso betonado com

43

acabamentos rugosos, para uma boa aderncia, e a sua limpeza realizada atravs do sistema onda de gua, quando as vacas se encontram no ordenho. As vacas em produo dividem-se pelos diferentes parques consoante a sua produo e nmero de lactaes. Para alm destes parques existem ainda oito parques sem piso betonado, sem cubculos, onde funcionam, a maternidade principal, a maternidade secundria (em casos de sobrelotao da principal), enfermaria e parques para as novilhas de recria, cujo piso, revestido primariamente por uma camada de serradura e posteriormente por uma camada de palha. Existe ainda um dos pavilhes da explorao que se divide em dois parques em modo semiaberto, sem cubculos, alojando vacas multparas no perodo seco, com o revestimento do piso, semelhante ao anterior. ainda necessrio referir, que todos os parques tm acesso a bebedouros, bem como a comedouros do tipo corredores lisos de modo a uma fcil limpeza e repartio do alimento. Por ltimo, o oitavo pavilho, utilizado como viteleiro, podendo encontrar-se iglos desmontveis e de fcil limpeza, divididos por dois parques, funcionando como estbulo dos vitelos desmamados. Na M.Rito L , existem duas salas de ordenha mecnica em espinha, com uma capacidade de 24 vacas cada. A recolha do leite segue para os cinco tanques de refrigerao, sendo que um destes tanques, somente armazena o leite das vacas com CCS acima das 400000 clulas/ml. Aps as ordenhas, so sujeitas a pedilvios, quando se dirigem para o seu estbulo. De referir que esta explorao est concebida, com sala de inseminao (conservao, preparao do smen) e de um gabinete tcnico, onde realizada toda a gesto da explorao, reprodutiva, produtiva e veterinria e armazenamento de todo o material veterinrio. Neste gabinete, encontra-se o crebro da explorao, provido da tecnologia necessria implementao do sistema informtico Alpro, que apresenta as informaes recebidas por meio de sensor electromagntico, presente no colar dos animais que j tenham parido pelo menos uma vez, neste programa, que se origina a base de dados, com os tratamentos, exames efectuados, produo, movimentos entre parques, bem como, outras informaes necessrias na gesto diria da vacaria. De referir, que com a cada vez maior preocupao ambiental, esta explorao provida de uma ETAR, cujo tratamento realizado atravs do mtodo de lagunagem (separao dos resduos slidos dos lquidos), os produtos finais do tratamento servem, no caso dos resduos slidos, de fertilizantes da explorao e no caso dos lquidos so reutilizados, no j referido sistema de onda de gua para limpeza dos pavimentos dos parques.
da.

44

Maneio do efectivo:

Comeando pelos vitelos, o maneio consiste primariamente, na transferncia dos mesmos, para o viteleiro, dispostos cada um no seu iglo , efectuando-se a limpeza e desinfeco do umbigo e fornecidos aproximadamente quatro litros de colostro provenientes do banco de colostro congelado existente na explorao, mantendo-se esta alimentao por dois dias, e duas vezes a cada dia. Posteriormente, passam a ser alimentados, com leite de substituio e/ou vacas do parque de recm-paridas, at atingirem o ms de idade, altura em que se efectua o desmame. No desmame, seguem para parques colectivos, consoante o sexo, permanecem dois meses e realiza-se ento a descorna das vitelas e machos de substituio e castrao dos restantes, que seguiram para um parque de engorda e posterior venda. Os animais de substituio, seguem para parques, que se homogenezam consoante a condio corporal, at por volta dos 14 aos 18 meses, passando para o parque de novilhas para serem inseminadas. No que ao efectivo adulto diz respeito, as vacas em lactao so ordenhadas trs vezes por dia, s 5h, 11h e 16h, sendo que a ordem de ordenha, comea pelos parques de alta produo, mdia e baixa produo, finalizando nos de vacas recm-paridas e vacas com descargas celulares elevadas. Durante o ordenho, as vacas so sujeitas a pr e ps-dipping (imerso dos tetos em soluo desinfectante, antes e ps-ordenho), sendo que aps o pr-dipping, realizada uma secagem posterior atravs do uso de toalhetes, bem como, a remoo dos primeiros jactos de leite. Aps o ordenho, a alimentao j se encontra disposio das vacas, de modo a manterem-se em estao, no conspurcando os tetos, enquanto o canal do teto contnua aberto. A base da alimentao, composta por palha, silagem de milho, feno de luzerna e alimentos concentrados, que so balanceados, atravs do uso da mquina misturadora UNIFEED equilibrando a dieta consoante o estado produtivo e reprodutivo dos animais. O maneio reprodutivo, consiste essencialmente na reproduo por meio do mtodo de I.A. e monta natural pois permanecem tambm nos parques, alguns touros de modo, a complementar, alguma falha reprodutiva ps-inseminao. O maneio em si comea nos 30 dias ps-parto, com a realizao de um exame ginecolgico, de modo a analisar ciclicidade do animal, involuo crvico-uterina e a presena de patologias ps-parto, mediante a palpao trans-rectal e vaginoscopia. Nas novilhas, a deteco de cios realizada por observao visual, enquanto nas vacas em lactao realizada pelos registos dirios do sensor electromagntico presente nos colares. O diagnstico de gestao realiza-se 30 dias ps I.A., mediante palpao rectal. Regra geral, ao stimo ms de gestao feita a secagem das vacas, aps a qual, so transferidas para parques onde so mantidas, consoante a condio corporal. Posteriormente e nos 15 dias prvios previso do parto, so mudadas para a maternidade, aqui que se verifica a vigilncia, assistncia ao parto e futuras complicaes no periparto. Aps o parto, passam ao parque das recm-paridas onde permanecem 10 dias, sendo que aqui h uma monitorizao semanal, de patologias associadas ao periparto, DAD e DAE, metrites, retenes placentrias, laminites, hipocalcmia, etc, de modo a atempar com a maior brevidade o seu tratamento.

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9.2.3.

Vacina

(NOTA: todas as informaes relativas Startvac foram fornecidas pelo fabricante)

Neste ensaio, a vacina administrada, foi a STARTVAC dos laboratrios HIPRA, uma vacina inactivada frente a mastites bovinas, tem na sua composio as bactrias Escherichia coli e Staphylococcus aureus. A STARTVAC, uma emulso injectvel, utilizada para fortalecer a imunidade de exploraes de vacas leiteiras, frente a mastites. Est indicada na imunizao de vacas e novilhas, de modo, a reduzir a incidncia de mastites subclnicas e severidade dos sinais clnicos de mastites clnicas causadas por: 1. Coliformes (E.coli e outros coliformes) 2. Staphylococcus (Staph. aureus e SCN)

a) Descrio das substncias activas:

Escherichia coli (J5) inactivada :

A E.coli (J5), carece da enzima Uridina Difosfato Galactose 4-Epimerase, enzima esta que responsvel pela unio do antignio somtico (O-antignio de polissacrido) molcula LPS da parede bacteriana (lpido A). Esta estirpe bacteriana mutante (J5) expe o antignio core de LPS (lipido A), que comum nas bactrias Gram-negativas.

Staphylococcus aureus (SP140) inactivado, expressando o Complexo Antignico associado ao Slime (SAAC)

A produo do SAAC especfica de estirpes de S. aureus caracterizadas fenotipicamente como SP (slime producing) e est involucrada na formao do BIOFILME em placas de microtitulao. O SLIME (=BIOFILME), uma capa extracelular secretada por muitas bactrias, composta de polissacridos, que cobre a parede bacteriana e est fisicamente conectada a ela. A Produo de esta matriz extracelular, define a habilidade das estirpes bacterianas em colonizar os tecidos do hspede e outros biomateriais, participando na adeso intracelular entre bactrias e no posterior desenvolvimento do BIOFILME. Uma vez que, a bactria ao aderir-se s clulas da glndula mamria, cresce, formando colnias, rodeadas por uma grande matriz de exopolissacridos, constituindo o tal BIOFILME, que toma grandes propores, de modo a no ser possvel a sua fagocitose por macrfagos ou neutrfilos, levando a infeces crnicas, a resistncia bacteriana fagocitose, bem como, resistncia a alguns antibiticos.

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b) Mecanismo de Proteco:

Vacinao

Introduo de anticorpos contra os componentes do SAAC presentes na matriz do biofilme produzido pela bactria estafilococica durante a fase inicial da infeco.

Induo de anticorpos frente aos eptopos core do LPS comum nas bactrias Gram-negativas.

Infeco intra-mamria (IMI)

Anticorpos anti-SAAC unem-se matriz inicial dos exopolissacridos antes que o BIOFILME se estabelea.

Anticorpos anti-E.coli J5, unem-se ao antignio core durante a multiplicao das bactrias invasoras, sendo exposto justamente antes de se completar a sntese de LPS.

Fagocitose por parte dos neutrfilos das clulas bacterianas opsonizadas

Eliminao das IMI causados S. aureus e SCN

Eliminao das IMI causadas por E.coli e coliformes.

Esquema 1. Mecanismo de proteco da vacina Startvac

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c) Protocolos vacinais:

1. Protocolo clssico: Administrao de uma dose (2ml) atravs de injeco intramuscular profunda nos msculos da tbua do pescoo, com espao temporal descrito abaixo e seguindo o seguinte esquema: 1 Dose: 45 dias antes do parto 2 Dose: 10 dias antes do parto 3 Dose: 52 dias ps-parto

Figura 7: Protocolo clssico Tabela 15. Vantagens e desvantagens do Protocolo clssico Vantagens Maior eficcia at aos 130 dias ps parto, perodo de maior risco e maior produo, Prolongamento da imunidade (efeito booster) Melhor relao custo/benefcio Mais dias de inoculao Resultados a longo prazo Desvantagens Dificuldade de aplicao/maneio

2. Protocolo a varrer 3 : 3 : 3: Administrao de uma dose (2ml) atravs de injeco intramuscular profunda nos msculos da tbua do pescoo, com o espao temporal descrito abaixo e seguindo o seguinte esquema: 1 Dose: Dia 0 2 Dose: 3 semanas depois 3 Dose: 3 meses depois 4 Dose: 3 meses depois

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Figura 8: Protocolo a varrer

Tabela 16. Vantagens e desvantagens do Protocolo a varrer Vantagens Facilidade de aplicao/maneio Desvantagens Menor eficcia no perodo de maior incidncia de mastites (ps parto apenas 10 20 % dos animais) Soluo em problemas especficos Menos dias de inoculao Resultados a curto prazo Curta durao da imunidade Pior relao custo/benefcio

9.2.4.

Anlise de dados

Em relao anlise de dados, foram construdas bases de dados, com toda a informao recolhida individualmente por cada uma das vacas presentes no estudo, informao essa como: clulas somticas mensais, identificao dos agentes causadores de mastites, data de parto, nmero de lactaes, etc. Posteriormente, aps o acumular de dados, fez-se uma anlise relativamente efectividade da vacina na diminuio da CCS, prevalncia de agentes bacterianos causadores de mastites, entre outras merecedoras de discusso nos resultados deste relatrio. Estas bases de dados, foram construdas em Excel (verso 2007).

9.2.5.

Contagem de clulas somticas

Este meio de diagnstico, teve por base os contrastes leiteiros realizados pela ANABLE, associao que est encarregue mensalmente da realizao das diversas anlises individuais aos animais em produo nesta vacaria. Cedendo mensalmente os seus relatrios, que posteriormente forneciam dados como CCS, extremamente importantes no desenrolar deste ensaio.

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9.2.6.

Recolha de amostras e Identificao dos agentes etiolgicos

A recolha das amostras foi realizada segundo o seguinte procedimento: 1 Identificao dos animais entrada da ordenha 2 Limpeza rotineira realizada segundo a metodologia normal da ordenha, com prdipping e secagem com toalhetes 3 Desinfeco de todos os quartos com algodo embebido em lcool etlico a 70%, com especial cuidado com os esfncteres dos tetos. Sendo utilizado, para cada teto, algodo no usado. Sendo que primariamente, eram desinfectados os tetos mais afastados e posteriormente os mais prximos do operador. De modo a no conspurcar os tetos previamente desinfectados. 4 Recolha da amostra de leite para um frasco apropriado e previamente esterilizado (fornecido pelo laboratrio). A recolha feita equitativamente de todos os quartos leiteiros, seguindo a ordem inversa desinfeco. O frasco colocado num ngulo de 45 em relao ao teto, dando nfase durante a recolha, a cuidados de assepsia. 5 Identificao de cada frasco em concordncia com a vaca correspondente. 6 Amostras refrigeradas e enviadas no prprio dia, para o Laboratrio Servet Talavera, responsveis pelo isolamento e identificao bacteriana. Durante estes procedimentos, foram usadas luvas de ltex descartveis, trocando de luvas de 10 em 10 vacas.

9.3.

Procedimentos

Tal como referido anteriormente, este ensaio foi realizado entre, 25 de Outubro de 2010 e 04 Maio de 2011, tendo sido efectivado na explorao M.Rito L
da.

sita no concelho de Idanha-a-Nova.

O estudo teve por base a vacinao de um efectivo 307 animais, sendo que, foram divididas segundo os diferentes protocolos, e ainda segundo o estado fisiolgico e sanitrio. Formaram-se 3 grupos, sendo o Grupo 1, vacas em que se administrou a vacina, segundo o protocolo clssico, o Grupo 2, o grupo de vacas em que se administrou o protocolo a varrer, se ndo estas, vacas problema (mastites clnicas, elevadas CCS, etc) e finalmente, o Grupo 3 que eram vacas em lactao, s quais foi administrado o protocolo a varrer , em todos os grupos, as vacas estavam sujeitas s mesmas condies de maneio e partilhavam os mesmos estbulos.

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Grupo 1 Vacas vacinadas com o protocolo clssico

Diviso do efectivo de vacas do estudo pelos diferentes Grupos

Grupo 2 Vacas Problema vacinadas com o protocolo a varrer

Grupo 3 Vacas em lactao, vacinadas com o protocolo a varrer

Esquema 2. Diviso do efectivo de vacas do estudo

Em ambos os grupos, houve uma escolha aleatria de animais, aos quais no foi feita a vacinao de modo, a fazer a comparao dos resultados, entre o animal vacinado e o no vacinado, denominando esses animais, dentro de cada grupo como o grupo controlo.

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No esquema seguinte, demonstra-se a diviso de animais, bem como, as datas de vacinao dos diferentes protocolos:

GRUPO 1: Vacinao com o protocolo clssico Efeito no ps-parto Grupo heterogneo (parques diferentes) Vacas com partos entre Outubro de 2010 e Janeiro de 2011

Total de animais: 148 vacas Animais vacinados com Starvac: 78 Grupo Controlo: 60

GRUPO 2: Vacinao com o protocolo a varrer Vacas problema (CCS, crnicas S.aureus, etc) Datas: 1 Dose (0 d.) 25/Outubro/2010 2 Dose (3 s.) 2/Dezembro/2011 3 Dose (3 m.) 1/Abril/2011 (+/-)

Total de animais: 52 vacas Animais vacinados com Starvac: 40 Grupo Controlo: 12

GRUPO 3:

Total de animais:
Vacinao com o protocolo a varrer Vacas em incio de lactao Datas: 1 Dose (0 d.) 25/Outubro/2010 2 Dose (3 s.) 2/Dezembro/2011 3 Dose (3 m.) 28/Maro/2011

107 vacas Animais vacinados com Starvac: 76 Grupo Controlo: 31

Esquema 3. Diviso de animais e datas de vacinao dos diferentes protocolos

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Antes, aps e durante o tempo necessrio ao ensaio, foram feitos registos individuais em Excel (verso 2007), de CCS de cada vaca que entrou neste estudo, desta forma, pretendeu-se avaliar, as diferentes variaes de contagem das mesmas durante a vacinao. Esta CCS e anlise da mesma, serviu para seleco das vacas, s quais seriam feitas, isolamento e identificao bacteriolgica do agente causador de mastite. Foram seleccionadas as vacas com valores de CCS, superiores a 200000 cl./ml, entrando nesta seleco 73 animais, para posterior identificao bacteriolgica, pertencendo 40 vacas ao Grupo 1, 18 vacas ao Grupo 2 e 15 ao Grupo 3. Aps a realizao da vacinao de todos os animais, recolha de dados de CCS, da identificao dos agentes envolvidos nas mastites aps recolha das amostras e da anlise do tanque por PCR, comeou-se a anlise dos mesmos.

9.4.

Resultados

Para melhor compreenso dos resultados, a apresentao dos mesmos com base nas provas realizadas, far-se- a sua demonstrao isoladamente e em relao a cada grupo. Os resultados obtidos foram extrapolados atravs de uma mdia geomtrica, cuja equao :

9.4.1.

Resultados do Grupo 1

Deste modo e relativamente ao Grupo 1, que era formado por vacas com partos entre Outubro de 2010 e Janeiro de 2011, nas quais foram utilizadas o protocolo clssico, obtiveram-se os resultados indicados na tabela abaixo: Tabela 17. Percentagem de mastites clnicas e mdia em dias de proteco no Grupo 1 Grupo 1 Total Animais Mastites Clnicas Percentagem Mdia Geomtrica de proteco sem mastites em DEL Startvac Controlo 78 60 14 5 17,95% 8,33% 59,6 16

Num total de 78 animais vacinados com Startvac, em 138 vacas, pertencendo as restantes ao Controlo, surgiram 14 mastites clnicas no grupo Startvac e 5 no Controlo. Relativamente mdia de DEL sem mastites, verificou-se uma proteco de aproximadamente 60 (59,6) dias sem mastites no

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grupo Startvac e de somente 16 dias, no grupo Controlo tal como indicado na tabela acima. Relativamente percentagem de cura de mastites, tanto clnicas como subclnicas, existiu uma maior percentagem de cura, no grupo vacinado que no grupo no vacinado, 7, 69% e 5%, respectivamente. Tabela 18.Percentagem de cura de mastites no Grupo 1 Grupo 1 Startvac Controlo Total animais 78 60 Cura mastites 6 3 Percentagem 7,69% 5,00%

No que prevalncia dos agentes etiolgicos causadores de mastites diz respeito e de modo a conhecer a flora bacteriana circulante na explorao, foram identificados e quantificados no Grupo 1, em vacas com CCS superiores a 200000 cl./ml, identificaram-se em 44% dos animais Enterococcus spp., em 17% identificaram-se SCN, tambm em 17% dos animais corresponderam a mastites por E.coli e 6% a Streptococcus spp., sendo que, 11% corresponderam a outros agentes e por ltimo, em 17% das amostra no houve crescimento bacteriano e por conseguinte, no houve identificao dos mesmos.

Grupo 1 (Startvac)
17% 11% 17% 6% 5% 44% Enterococcus spp. E. coli Streptococcus spp SCN Outros Nenhum

Grfico 1. Prevalncias de bactrias no Grupo 1 No que anlise de CCS diz respeito, verificou-se que os animais vacinados com STARTVAC, mantiveram em todos os registos mensais desde Agosto de 2010 a Abril de 2011, clulas somticas com valores compreendidos, entre 50000 e 100000 cl./ml J o grupo Controlo que corresponde aos animais no vacinados, obteve sempre valores acima do grupo vacinado com STARTVAC, superando as 100000 cl./ml, logo em Novembro de 2010 continuando-se um aumento progressivo at Janeiro de 2011 onde atingiu aproximadamente as 170000 cl./ml, havendo neste

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ms, um ponto de inflexo, onde comea a diminuir progressivamente, at estabilizar entre Fevereiro e Maro de 2011 em valores prximos s 120000 cl./ml, sendo que tambm no final deste ms, h uma nova diminuio, at valores perto das 75000 cl./ml.

Grfico 2. Variao de CCS no Grupo 1 9.4.2. Resultados do Grupo 2

No que aos resultados do Grupo 2 diz respeito e tendo em conta, que correspondem a vacas problemas onde foi estabelecido o protocolo a varrer, verificou-se que somente surgiram 2 casos de mastites clnicas nas 40 vacas vacinadas com Startvac, correspondendo a 5% dos casos. Tabela 19. Percentagem de mastites clnicas no Grupo 2 Grupo 2 (aps 2 dose) Startvac Controlo 40 12 2 0 5,00% 0,00% Total Animais Mastites Clnicas Percentagem

Tambm no que cura de mastites diz respeito, somente no grupo Startvac, se verificou 7,50% de cura das mesmas.

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Tabela 20.Percentagem de cura de mastites no Grupo 2 Grupo 2 Startvac Controlo Total animais 40 12 Cura mastites 2 0 Percentagem 7,50% 0,00%

Relativamente identificao dos agentes envolvidos no surgimento de mastites neste grupo, verificou-se que 33% corresponderam a mastites desenvolvidas por Streptococcus spp., 33% tm como agente etiolgico o Staphylococcus aureus, 17% por Enterococcus spp. e 17% correspondem a outros agentes.

Grupo 2 (Startvac)
17% 17%

Enterococcus spp Staph. aureus 33%

33%

Streptococcus spp Outros

Grfico 3: Prevalncias de bactrias no Grupo 2 Do ponto de vista da anlise da CCS, denotou-se que no incio dos registos dos valores individuais de CCS, a mdia coincidia no grupo vacinado entre as 200000 e as 450000 cl./ml at data da 1 dose de vacina durante o ms de Outubro de 2010, entre este ms e Novembro de 2010, h uma grande descida at valores prximos das 150000 cl./ml, baixando at perto das 120000 cl./ml, aps a 2 dose da vacina e estabilizando at um mximo de 180000 cl./ml, comeando posteriormente, a partir de Fevereiro de 2011 a diminuir, mesmo antes da 3 dose que foi

administrada em Maro de 2011, chegando em Abril de 2011, a valores muito prximos das 100000 cl./ml. Por outro lado, no grupo Controlo, verificou-se que em Agosto de 2010, as mdias das CCS, encontravam-se abaixo das 100000 cl./ml, subiram at atingir um primeiro pico de valores muito prximos das 300000 cl./ml, andando at Janeiro de 2011, at valores muito similares s 250000 cl./ml, sendo que neste ms, atinge um ponto de inflexo, que leva a um aumento quase exponencial atingindo valores superiores a 450000 cl./ml no ms seguinte, sendo que, no fim do ensaio j se encontravam diminudas at valores prximos das 300000cl./ml.

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Grfico 4. Variao de CCS no Grupo 2

9.4.3.

Resultados do Grupo 3

Na demonstrao dos resultados do Grupo 3, vacas j em lactao s quais foram aplicadas o protocolo a varrer, verificou-se houve uma percentagem maior de mastites clnicas no grupo Startvac em relao ao controlo, sendo os seus valores percentuais de 7,89% e 6,45%, respectivamente. Tabela 21. Percentagem de mastites clnicas no Grupo 3 Grupo 3 (aps 2 dose) Startvac Controlo 76 31 6 2 7,89% 6,45% Total Animais Mastites Clnicas Percentagem

Ainda assim, s se verificou, cura de mastites, tal como indicado na tabela abaixo, no grupo Startvac, em 2, 63% dos animais, no havendo qualquer cura no controlo

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Tabela 22.Percentagem de cura de mastites no Grupo 3 Grupo 3 Startvac Controlo Total animais 76 31 Cura Mastites 1 0 Percentagem 2,63% 0,00%

Neste grupo 3, foram somente trs, os agentes etiolgicos, isolados e identificados, correspondendo em cerca de 56% das vacas com amostra recolhida desenvolveram mastites por Staphilococcus aureus, no entanto, com 22% e atingindo o mesmo valor percentual, surgem os SCN e Enterococcus spp..

Grupo 3 (Startvac)
22% 22% Enterococcus spp Staph. aureus 56% SCN

Grfico 5: Prevalncias de bactrias no Grupo 3

Relativo CCS, denota-se um traado praticamente semelhante entre o grupo vacinado e o no vacinado, visto que os registos desta contagem at 1 dose de vacina, eram inferiores s 50000 cl./ml em ambos os grupos. No entanto, no grupo Startvac, aps esta 1 dose em Outubro de 2010 houve um aumento progressivo, atingindo em Fevereiro de 2011, as 100000 cl./ml, havendo aqui um ponto de inflexo no grfico, onde se regista uma queda at valores muito prximos das 80000 cl./ml no ms seguinte, alterando-se posteriormente, com subida dos valores das contagens ultrapassando as 100000 cl./ml. No que ao grupo controlo diz respeito os valores mantiveram -se sempre abaixo do grupo vacinado.

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Grfico 6. Variao de CCS no Grupo 3 9.4.4. Resultados da anlise do tanque por PCR

A anlise do tanque por PCR, teve por base os dois tanques existentes na explorao, sendo que o tanque 1 armazena o leite das vacas problema, assim como, de vacas com CCS elevadas, enquanto o tanque 2, armazena leite de vacas consideradas saudveis segundo os registos mensais dos contrastes leiteiros. Assim sendo, os resultados deste meio de diagnstico, consistiram no seguinte, somente no tanque 1 houve presena de agentes bacterianos, sendo que foi positivo para E.coli com DNA bacteriano detectado em moderadas quantidades e tambm para SCN, com DNA bacteriano detectado em pequenas quantidades, tal como se verifica na tabela abaixo.

Diagnstico molecular Tanque 1 Tanque 2

Staphilococcus aureus Neg Neg

Escherichia coli Pos (++) Neg

SCN

Coliformes

Pos (+) Neg

Neg Neg

Comentrio: Neg: DNA bacteriano no foi detectado

Pos (+) : DNA bacteriano foi detectado em pequena quantidade Pos (++) : DNA bacteriano foi detectado em moderadas quantidades Pos (+++) : DNA bacteriano foi detectado em elevada quantidade

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10. Discusso
Hoje em dia as exploraes leiteiras sofrem grandes quebras tanto de produo como de rendimento, provocadas principalmente por mastites. Estas quebras so facilmente perceptveis atravs das variaes de CCS e prevalncias bacterianas na explorao. Apesar de este trabalho ter um nmero significativo de animais em estudo, muitos tiveram que ser retirados do trabalho prtico, uma vez que, ou foram secas, ou morreram sem saber a causa, ou ainda, foram vendidas, no podendo prevalecer e chegar a constataes, dos dados recolhidos at ento. Deste modo e analisando os resultados deste estudo, facilmente perceptvel o porqu da vacinao/profilaxia/preveno do que a mastites diz respeito. Assim sendo, e analisando o Grupo 1, ao qual foi administrado o protocolo clssico, verifica-se claramente, um dos objectivos primrios de uma vacinao contra mastites, uma vez que comparando os resultados, entre o grupo vacinado e no vacinado, foi expressiva a proteco numa das fases em que a vaca se encontra mais susceptvel a afeces, que no perodo peri-parto em que a resposta imunitria se encontra diminuda, sendo que no grupo startvac, conseguiu -se uma mdia geomtrica de quase 60 dias sem mastites ps-parto, ou seja, mesmo que a vaca tenha sido infectada no pr-parto, houve um perodo de 60 dias em que a vacinao protegeu o bere. Sendo que no grupo controlo somente se obteve naturalmente uma defesa do bere, ps -parto, de 16 dias. A importncia destes valores de DEL de proteco sem mastites presentes na tabela 17, remete-nos para a importncia de informar que ambos os animais deste Grupo 1, partilharam uma maternidade com cama de palha, material este muito susceptvel de desenvolver mastites. No que a percentagem de mastites clnicas diz respeito houve aqui um resultado dbio, na medida que fugiu ao esperado, pois houve um maior nmero de casos de mastites clnicas nos animais vacinados (17,95%) quando comparados aos animais no vacinados (8,33%), o que pode resultar, isto de forma emprica claro, que talvez houvesse falha vacinal, pela dificuldade da imposio deste protocolo no normal maneio reprodutivo desta explorao, poderia tambm dever-se a um menor nmero de animais presentes no grupo controlo no sendo significativo para realizar esta comparao, ou ainda, a uma limitao na recolha de dados da explorao, uma vez que no havia at realizao deste estudo, um registo das mastites clnicas da vacaria. ainda de ter em conta, que no Grupo 1, verificou-se um maior nmero de curas de mastites nos animais vacinados, pois apesar de no ser um valor significativo, pois difere somente de cerca de 3 pontos percentuais (de 7,69% para 5%), no entanto, e considerando que se vacinasse o efectivo em produo que em mdia de cerca de 500 animais, uma percentagem de cura de mastites na ordem dos 8%, sem qualquer tipo de tratamento, significaria, menos custo, no uso teraputico de outros frmacos.

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Tambm neste grupo, Grupo 1, verificou-se a tal susceptibilidade inerente ao perodo psparto, uma vez que, como se verificar posteriormente nos outros grupos, fulcral a vacinao contra mastites de modo a complementar um maneio cuidado e preocupado na vacaria, uma vez que, foi neste grupo, em que houve maior nmero de agentes causadores de mastites, sendo identificados atravs das amostras enviadas para o laboratrio, E. coli, Streptococcus uberis, Streptococcus dysgalactiae, SCN e outros, como referido no Grfico 1 que se consideraram como amostra contaminada, todos eles agentes ambientais, agentes estes que incidem mais no perodo ps-parto e incio de lactao. Os agentes identificados, remetem-nos, para problemas com as camas e maneio, uma vez que a vacinao, tal como previsto, surtiu efeito na proteco frente a mastites, no entanto, agentes como Coliformes e Streptococcus uberis, presentes nas camas de palha e serradura, ou ainda, dos outros microrganismos como SCN e outros Strepococcus spp., que se encontram presentes no ambiente e microflora do teto e do bere, remetem para, estas questes ao nvel da higiene na ordenha e das camas. De referir, que a larga percentagem de Isolamentos bacterianos com Enterococcus spp., , segundo alguns autores, uma contaminao da amostra, outros consideram uma mastite espordica, j que este agente faz parte da microflora intestinal normal das vacas, podendo talvez nos indicar, uma massiva contaminao ambiental com este agente, tanto a nvel da ordenha, como de toda a explorao. No que anlise da contagem de clulas somticas diz respeito, mais uma vez se denota o porqu da vacinao neste Grupo 1, sendo que tal como demonstrado no grfico 2, o traado relativo s variaes da CCS do grupo startvac manteve -se sempre abaixo dos animais no vacinados, visto que, nem se verificaram grandes picos com a alterao de estaes do ano, responsveis por diferenas de temperatura, humidades, sendo mais propcio ao aparecimento de mastites no Inverno e Primavera, nem aumento de CCS por elevaes fisiolgicas destas clulas no perodo que se seguiu ao parto ( Outubro 2010 Janeiro 2011), contrariando assim, os resultados do grupo no vacinado, que sofreram picos no rigor do Inverno e na entrada da Primavera. De denotar, que somente a partir de Novembro de 2010, se passou a ordenhar os animais trs vezes por dia, mas mesmo assim, no houve as redues esperadas no grupo controlo pelo aumento de ordenhas, enfatizando ento, a eficcia da vacina, na manuteno de CCS em limiares na ordem das 50000 cl. /ml, que levam a considerar bere saudvel.

Tendo em conta o Grupo 2, s quais se aplicou o protocolo a varrer em vacas problema, ou seja, com mastites crnicas, com elevadas CCS, verificou-se o aparecimento de somente 2 casos mastites clnicas no grupo startvac, o que contraria novamente aquilo que se esperava, uma vez que um dos objectivos era reduo da severidade das mastites, contrariamente ao grupo no

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vacinado, em que no surgiu qualquer caso de mastites clnicas. Este acontecimento, pode dever-se grande diferena entre o nmero de animais do grupo vacinado (40) e o no vacinado (12), sendo a amostra do grupo controlo reduzida quando comparada ao startvac. Analisando a cura de mastites, no Grupo 2 e tal como esperado, somente se verificou uma percentagem de cura, na ordem dos 7,50% nos animais do grupo vacinado, no sendo siginificativo, dado o nmero de casos com que lidamos, uma vez que falamos, num grupo de vacas problema em que todas possuem ou CCS elevadas ou mastites clnicas. Relativamente identificao dos agentes envolvidos em mastites no Grupo 2, foram identificados, Staphylococcus aureus, tal como se esperava, uma vez que, falamos em vacas problema com mastites crnicas e intermitentes, tal como se reconhece neste agente. Os Streptococcus spp., tem espcies como o Streptococcus uberis, que foi isolada e tambm leva a episdios crnicos, sendo o seu habitat ambiente e claro, beres infectados. A identificao de Enterococcus remete-nos para uma mastites com causas ambientais e/ou contaminao na altura da recolha da amostra, tal como sugerem alguns autores, uma vez que no so agentes responsveis por mastites crnicas e exuberantes como as deste Grupo 2. Em relao aos outros agentes identificados tal como referido anteriormente, consideraram-se as amostras contaminadas. Ao analisar as CCS do Grupo 2, nos primeiros registos do grupo startvac registaram -se valores perto das 250000 cl./ml, sendo que chegaram ainda a atingir um pico de 430000 cl./ml, em Setembro de 2010, por outro lado, o grupo controlo, comeou com valores considerados normais na ordem das 100000 cl./ml aumentando gradualmente at Outubro de 2010 onde atingiu valores perto das 300000 cl./ml. No entanto, no grupo startvac j antes da inoculao da 1 d ose da vacina, os valores de CCS do grupo startvac iam diminuindo com o passar do tempo, at valores abaixo dos considerados normais para vacas com elevadas CCS, no entanto, denotou-se uma diminuio acentuada aps a 1 e 2 dose de vacina, sendo que, passam de valores normais para mastites subclinicas, para valores que que apesar das oscilaes representadas no traado do grfico X, nunca ultrapassaram as 200000 cl./ml, baixando ainda at s 130000 cl./ml aps a 3a dose em Maro de 2011. De referir que o grupo no vacinado do Grupo 2, anda praticamente sempre acima das 200000 cl./ml, contrariando o grupo startvac, que a nvel CCS, se comporta como vacas com bere saudvel. Ainda se verfica no grupo controlo, as variaes de clulas somticas com a entrada do Inverno e da Primavera, sendo que aps ultrapassar o valor mdio de 200000 cl./ml em Setembro de 2010, no mais diminui este valor, chegando a atingir em Fevereiro de 2011 as 450000 cl./ml, valor perto das 500000 cl/ml, valor este que nos indica que metade do efectivo se encontra com mastite.

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Ao fazer a comparao entre o grupo vacinado e no vacinado, atravs do traado do Grfico 4, claramente perceptvel, a eficincia da vacina neste Grupo 2. Tendo em conta o Grupo 3, tambm aqui houve maior nmero de mastites clnicas, talvez pelas mesmas razes indicadas no Grupo 2. No que cura de mastites do Grupo 3 diz respeito, tambm se verificou no grupo startvac, apesar de um baixo valor percentual (2,63%), correspondente a apenas uma cura de mastite. No Isolamento e Identificao dos agentes etiolgicos de mastites no Grupo3, de realar a importncia da prevalncia do Staphylococcus aureus, que correspondeu a mais de metade das amostras retiradas, indicando este agente estando continuamente a circular na explorao. Os SCN, tambm assumem importncia, uma vez que houve aqui ou falha vacinal, ou outra causa, de modo a surgirem os casos identificados. Avaliando as CCS do Grupo 3, denota-se que o grupo strartvac comporta sempre um ligeiro aumento do traado, quando comparado com o grupo controlo, no entanto, nunca atingem ambos os traados o valor de 150000 cl./ml. Por ltimo e relativamente anlise por PCR, verificou-se a negatividade para Staphylococcus aureus, contrariando as ltimas identificaes feitas na vacaria, levando um bocado a uma certa contrariedade, quando comparado com os resultados a que temos acesso.

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11. Consideraes finais

A realizao deste estgio intercalar, foi uma mais-valia, tanto a nvel pessoal, profissional, acadmico, uma vez que uma ferramenta necessria, para o melhor exercer de uma to nobre profisso, como a do Mdico Veterinrio. O poder acompanhar um Mdico Veterinrio, bem como, os actos mdico-veterinrios na rea de patologia clnica de animais de produo e rendimento, na rea de sanidade animal e ainda tomar conhecimento daquilo que a realidade econmica dos produtores, abre os horizontes de forma exemplar para um melhor contacto com a realidade diria desta profisso O Mdico Veterinrio, hoje em dia, vive quase sempre limitado, pela fragilidade econmica da maior parte dos produtores portugueses, levando a que cada vez mais, o Mdico Veterinrio de espcies pecurias, tenha que fazer um pouco de outros ramos, sendo o gestor, sendo o nutricionista dos animais a que presta assistncia e um sempre conhecedor do mercado. Com as constantes variaes econmicas do flagelado mercado mundial, na preveno que se traa o futuro e a rentabilidade duma explorao leiteira, neste sentido que foi realizado este estudo, uma vez que, tentou saber-se at que ponto a preveno de mastites seria fundamental para um melhor sucesso da explorao leiteira, visto que, j se conhecem publicados, muitos trabalhos, estudo, ensaios, com o desenvolver do tema de qual o custo monetrio da teraputica de uma mastite, mas poucos, foram realizados, no sentido de conseguir saber a eficincia de uma vacina na preveno de mastites. Posto isto, a pergunta chave deste relatrio ser: A vacina para Mastites eficaz?, a resposta ser SIM, sim pelos resultados apresentados, pela comparao entre um grupo vacinado e um grupo controlo, pela proteco de 60 dias ps -parto quando no perodo peri-parto que mais mastites se contraem e se obteve somente 16 dias no grupo no vacinado, pelas baixas cargas celulares encontradas em quase todos os grupos vacinado e sempre em valores de CCS em que se considera bere saudvel, de denotar que este estudo realizado durante as estaes do ano mais propensas a mastites no se verificando em nenhum dos grupos picos sazonais de elevao de CCS, entre outras razes que realmente demonstram a efectividade desta vacina. No entanto, h necessidade de tambm aqui auto-criticar este estudo, uma vez que teve limitaes fulcrais, pois h que ter em conta, que desde incio, deveramos lidar com animais com estado de lactaes e reproduo semelhantes, pois cerca de 150 animais, tiveram que sair do estudo, ou porque foram para secagem, ou por morte sem ser possvel a identificao da causa (seria importante associar alguma causa a mastite), ou partos em datas dispares em relao s vacinaes pr-parto necessrias no protocolo clssico, ou porque certos vacas j com elevadas cargas celulares, foram para refugo ou vendidas.

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 ainda de referir, que houve tambm algumas limitaes e incapacidades no registo de todas mastites clnicas, pois dever-se-ia fazer os registos de todas elas, muitas dessas vacas que se encontravam no Grupo 2 foram secas, saindo do es tudo. Pois deveria ter sido utilizado um maior nmero ainda de animais como meio de comparao, de modo a podermos falar de um dos objectivos desta vacina, que seria a reduo da severidade da patologia pela administrao da vacina, de modo a obter-se um tratamento menos prolongado, ou evitar o refugo da vaca. Creio tambm, que hoje em dia, dada a prevalncia de agentes ambientais nesta explorao, que segue a linha de muitas das exploraes de vacas leiteiras em Portugal, tambm seria interessante realizar um estudo baseado somente em primparas, estudo esse que se tentou fazer neste estgio, mas pela disparidade na data de partos , no foi possvel achar um grupo homogneo que servisse realmente e com veracidade o objectivo deste trabalho, usando um e outro protocolo. Durante estgio, tambm foram identificados alguns descuidos no que ao maneio de ordenha diz respeito, no entanto, mesmo identificando a o problema que no passava de algo mais do que falha humana, pois existiam em alguns turnos uma ordenha mais descuidada e menos rigorosa, mesmo assim, achou-se por bem no alterar as condies do estudo, pois as condies mantinhamse idnticas para ambos os grupos. Outra falha na realizao deste estudo, foi o no registo de tratamentos administrados, pois nem sempre houve o mesmo acesso aos registos, ou ainda, registo dos mesmos, no podendo discernir-se acerca da relao entre a Startvac e a cura de mastites. Ainda por explicar, ficou a contrariedade entre o Isolamento bacteriano e a Anlise do tanque por PCR, relativamente presena de Staphylococcus aureus. Em suma e seguindo os objectivos deste trabalho, que seriam, comprovar atravs da administao da vacina STARTVAC, que se obteria uma maior proteco peri-parto, uma diminuio da incidncia de mastites, uma diminuio da severidade de mastites, diminuio das CCS, aumento da taxa de cura e melhoria da eficcia dos tratamentos, alguns destes parmetros foram atingidos, no entanto, outros como, taxas de cura, severidades das mastites, melhoria de eficcia de tratamentos, viram a sua anlise limitada devido falta de registos na explorao, bem como, o finalizar o estudo com menos 150 animais do que o que era previsto partida. Concluindo, a vacina STARTVAC, uma excelente ferramenta coadjuvante na luta contra as mastites em vacas leiteiras, no entanto, tambm sempre necessrio um maneio preocupado e cuidadoso com todos os factores predisponentes a mastites, pois falamos em Profilxia e no em Terapia.

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