NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 4229
1997-08-27*

MTODO DE ENSAYO PARA DETERMINAR LA BIODEGRADABILIDAD DEL ALQUILBENCENO SULFONATO DE SODIO

E:

STANDARD TEST METHOD FOR BIODEGRADABILITY OF ALKYLBENZENE SULFONATE

CORRESPONDENCIA:

esta norma es idntica (IDT) a la norma ASTM D2667:1995 (Reapproved 2008) Copyrigth ASTM International. 100 Barr Harbor Drive, West Conshohocken, PA 19429, USA. alquilbenceno sulfonato; biodegradabilidad; detergente.

DESCRIPTORES:

I.C.S.: 71.100.40
Editada por el Instituto Colombiano de Normas Tcnicas y Certificacin (ICONTEC) Apartado 14237 Bogot, D.C. - Tel. (571) 6078888 - Fax (571) 2221435

Prohibida su reproduccin

*Reaprobada 2009-10-21 Editada 2009-10-30

PRLOGO

El Instituto Colombiano de Normas Tcnicas y Certificacin, ICONTEC, es el organismo nacional de normalizacin, segn el Decreto 2269 de 1993. ICONTEC es una entidad de carcter privado, sin nimo de lucro, cuya Misin es fundamental para brindar soporte y desarrollo al productor y proteccin al consumidor. Colabora con el sector gubernamental y apoya al sector privado del pas, para lograr ventajas competitivas en los mercados interno y externo. La representacin de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalizacin Tcnica est garantizada por los Comits Tcnicos y el perodo de Consulta Pblica, este ltimo caracterizado por la participacin del pblico en general. La NTC 4229 fue ratificada por el Consejo Directivo de 1997-08-27. Esta norma est sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en todo momento a las necesidades y exigencias actuales. A continuacin se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a travs de su participacin en el Comit Tcnico 80 Jabones y detergentes (anteriormente 352302). DETERGENTES LTDA. INSTITUTO NACIONAL DE VIGILANCIA DE MEDICAMENTOS Y ALIMENTOS INVIMAINEXTRA S.A. UNILEVER ANDINA S.A.

Adems de las anteriores, en Consulta Pblica el Proyecto se puso a consideracin de las siguientes empresas: ALFA ANALJA AZUL K S.A. BASF QUMICA COLOMBIANA S.A. COMPAA QUMICA BORDEN S.A. COLGATE PALMOLIVE CIA FABRICATO TEJICNDOR S.A. INDUSTRIAS ATLANTIS DE COLOMBIA S.A. JABONERA ARJONA LTDA. JABONERA DEL CARIBE S.A. JABONERAS HADA S.A. JOHNSON Y JOHNSON DE COLOMBIA LLOREDA GRASAS S.A. LA JOYA S.A.

La NTC 4229 fue reaprobada por el Consejo Directivo el 2004-07-28. A continuacin se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta primera reaprobacin a travs de su participacin en el comit 80 Jabones y detergentes. AMWAY COLOMBIA AZUL K S.A. CLOROX DE COLOMBIA S.A. COLGATE PALMOLIVE CA. DETERGENTES S.A. INSTITUTO NACIONAL DE VIGILANCIA DE MEDICAMENTOS Y ALIMENTOS INVIMAJABONES EL TIGRE Y ROCA LTDA.

NATURES SUNSHINE PRODUCTS DE COLOMBIA S.A. PREBEL S.A. -AVON-

PROCTER & GAMBLE COLOMBIA LTDA. QUIRUMDICAS S.A. REFISAL S.A. UNILEVER ANDINA S.A.

Adems de las anteriores, el proyecto se puso a consideracin de las siguientes empresas a travs de su participacin en Consulta Pblica de reaprobacin. ACCYTEC ANALIZAR LTDA. ASOCIACIN NACIONAL DE INDUSTRIALES -ANDIAUDITEMOS EU BASF QUMICA COLOMBIANA S.A. CENTRO NACIONAL DE PRODUCCIN MS LIMPIA CIBA ESPECIALIDADES QUMICAS COMPROIND LTDA COSMTICOS YANBAL DISPROALQUMICOS LTDA. DISTRIBUIDORA FULLER LTDA. ESPOQUMICA S.A. FULLER ASEO Y MANTENIMIENTO LTDA. HADA S.A. HENKEL COLOMBIANA S.A. INAPET S.A.C. I. INDUSTRIAS CORY S.A. INDUSTRIAS FROTEX S.A. JABONERA ARJONA LTDA. LABORASTORIOS SMART S.A. LLOREDA S.A. MINISTERIO DE AMBIENTE, VIVIENDA Y DESARROLLO TERRITORIAL MINISTERIO DE COMERCIO, INDUSTRIA Y TURISMO MINISTERIO DE PROTECCIN SOCIAL NATURAL SYSTEMS INTERNATIONAL S.A. NULAB LTDA RECKITT & COLEMAN COLOMBIA S.A. SUPERINTENDENCIA DE INDUSTRIA Y COMERCIO TECNOQUIMICAS S.A. UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

La NTC 4229 fue reaprobada por el Consejo Directivo el 2009-10-21. A continuacin se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta segunda reaprobacin a travs de su participacin en el comit 80 Jabones y detergentes. AZUL K S.A. BRINSA S.A. CASA LUKER S.A. CLARIANT S.A. CLOROX DE COLOMBIA S.A. COGNIS DE COLOMBIA S.A. COLGATE PALMOLIVE Y CA DEL5BIODEGRADABLES FARBEN S.A. HURTADO ASOCIADOS Y CA LTDA. INSTITUTO NACIONAL DE VIGILANCIA DE MEDICAMENTOS Y ALIMENTOS -INVIMAIVONNE BERNIER LABORATORIO LTDA. JABONES EL TIGRE Y ROCA S.A. JOHNSON DIVERSEY COLOMBIA LTDA. LABORATORIO BIOINDUSTRIAL CIALI TEJADA INTERNATIONAL TRADE LTDA. URIGO LTDA.

Adems de las anteriores, el proyecto se puso a consideracin de las siguientes empresas a travs de su participacin en Consulta Pblica de segunda reaprobacin. AMWAY COLOMBIA S.A. ASOCIACIN COLOMBIANA DE CIENCIA Y TECNOLOGA COSMTICA -AACYTECASOCIACIN NACIONAL DE INDUSTRIALES -ANDICIBA ESPECIALIDADES QUMICAS S.A.

C.I. DISAN S.A. CLEAN SHESTER DE COLOMBIA LTDACLOROX DE COLOMBIA S.A. COLOMBIA INDUSTRIAL AUTOMOTRIZ LTDA. CIAL DETERGENTES LTDA. DISPROALQUMICOS LTDA. DISTRIBUIDORA FULLER LTDA. ESPOQUMICA S.A. FULLER ASEO Y MANTENIMIENTO LTDA. GRASAS Y DERIVADOS S.A. HADA S.A. HENKEL COLOMBIANA S.A. INAPET S.A.C. I. INDUSTRIAS CORY S.A. INDUSTRIAS DEL MAZ S.A. INDUSTRIAS FROTEX S.A. INDUSTRIAS FULLER PINTO S.A. JABONERA ARJONA LTDA.

JOHNSON Y JOHNSON DE COLOMBIA S.A. LLOREDA S.A. MINISTERIO DE AMBIENTE, VIVIENDA Y DESARROLLO TERRITORIAL MINISTERIO DE COMERCIO, INDUSTRIA Y TURISMO MINISTERIO DE PROTECCIN SOCIAL PREBEL S.A (AVON) PROCTER & GAMBLE COLOMBIA LTDA. QUIRUMDICAS S.A. RECKITT & COLEMAN COLOMBIA S.A. SC JOHNSON & SON COLOMBIANA S.A. TECNIMICRO LABORATORIO DE ANALISIS LTDA. TECNOQUIMICAS S.A. UNILEVER ANDINA (COLOMBIA) S.A. UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

ICONTEC cuenta con un Centro de Informacin que pone a disposicin de los interesados normas internacionales, regionales y nacionales y otros documentos relacionados.

DIRECCIN DE NORMALIZACIN

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NTC 4229

CONTENIDO

Pgina 1. OBJETO .......................................................................................................................1

2. 2.1

REFERENCIAS NORMATIVAS ...................................................................................1 NORMAS ASTM...........................................................................................................1

3.

RESUMEN DEL MTODO DE ENSAYO.....................................................................2

4.

IMPORTANCIA Y USO ................................................................................................2

ENSAYO PRESUNTIVO (CULTIVO CON AGITACIN) 5. 5.1 APARATO ....................................................................................................................2 MQUINA DE AGITACIN..........................................................................................2

6. 6.1 6.2 6.3

REACTIVOS Y MATERIALES .....................................................................................3 PUREZA DEL AGUA ...................................................................................................3 MEDIO BSICO ...........................................................................................................3 CULTIVO MICROBIANO..............................................................................................4

7.

NORMALIZACIN .......................................................................................................4

8. 8.1 8.2 8.3 8.4

PROCEDIMEINTO........................................................................................................4 ADICIN DE TENSIOACTIVO AL MEDIO BSICO ...................................................4 INOCULACIN.............................................................................................................5 INCUBACIN ...............................................................................................................5 ADAPTACIN (ACLIMATACIN)...............................................................................5

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8.5

ANLISIS .....................................................................................................................5

9.

CLCULO ....................................................................................................................5

10. 10.1 10.2 10.3

PRECISIN Y SESGO .................................................................................................6 RESUMEN ....................................................................................................................6 ENFOQUE ESTADSTICO USADO .............................................................................6 RESULTADOS .............................................................................................................7

Tabla 1. Fuentes de variabilidad ...........................................................................................7 Tabla 2. Precisin y sesgo del tensioactivo eliminado, porcentaje...................................8

ENSAYO DE CONFIRMACIN 11. 11.1 APARATO ....................................................................................................................9 CMARAS DE AERACIN .........................................................................................9

12. 12.1 12.2 12.3 12.4

REATIVOS Y MATERIALES......................................................................................10 LODO ACTIVADO......................................................................................................10 SOLUCIN MADRE (STOCK) DE AGUA RESIDUAL SINTTICA:.........................10 DESESPUMANTE DE SILICONA..............................................................................10 AIRE COMPRIMIDO...................................................................................................10

13. 13.1 13.2 13.3

CALIBRACIN Y NORMALIZACIN........................................................................11 BLANCOS DE CONTROL .........................................................................................11 TENSIOACTIVO DE CONTROL INTERNO ...............................................................11 VALIDACIN..............................................................................................................11

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14.

PROCEDIMIENTO......................................................................................................11

14.1 14.2 14.3 14.4 14.5

CMARA DE AERACIN..........................................................................................11 AERACIN Y SEDIMENTACIN ..............................................................................11 DESESPUMANTE ......................................................................................................11 CUIDADO DE LA CMARA ......................................................................................11 SUMINISTRO INICIAL DE LOS TENSIOACTIVOS DE ENSAYO AL LODO FRESCO....................................................................................................12 RUTINA DIARIA .........................................................................................................12 ANLISIS DEL TENSIOACTIVO (MBAS) .................................................................13 ANLISIS DEL PH DEL EFLUENTE.........................................................................13 ANLISIS DE LOS SLIDOS EN SUSPENSIN .....................................................13

14.6 14.7 14.8 14.9

14.10 DETERMINACIN DEL NDICE DE VOLUMEN DE LODO (OPCIONAL)................14 14.11 DURACIN DEL ENSAYO ........................................................................................14

15. 15.1 15.2 15.3

CLCULO ..................................................................................................................14 ELIMINACIN DEL TENSIOACTIVO ........................................................................14 OPERACIN DE NIVEL.............................................................................................14 NDICE DEL VOLUMEN DE LODO ...........................................................................15

16.

PRECISIN Y SESGO ...............................................................................................15

17.

PALABRAS CLAVE...................................................................................................15

DOCUMENTO DE REFERENCIA..........................................................................................25

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Pgina

ANEXO A (Normativo)............................................................................................................16

APNDICES (Informativos) ....................................................................................................18

Figura 1. Cmara de aeracin semicontinua de lodo activado ..........................................9

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MTODO DE ENSAYO PARA DETERMINAR LA BIODEGRADABILIDAD DEL ALQUILBENCENO SULFONATO

1.

OBJETO

1.1 Este mtodo de ensayo1 determina el grado de biodegradabilidad de los alquilbenceno sulfonatos. El mtodo sirve como un ndice de la aptitud del sulfonato para el uso general como tensioactivo. 1.2 En general, este mtodo de ensayo distingue entre sulfonatos cuyas cadenas laterales alqulicas son lineales y aquellos que tienen cadenas ramificadas, puesto que los primeros son ms fcilmente biodegradables. Si se tiene que examinar el alquilbenceno sulfonato en productos completamente formulados, ste se debe extraer mediante el mtodo que se menciona en el Anexo A.1. (En el Apndice X.1 se pueden ver los datos). 1.3 Esta norma no considera todos los aspectos de seguridad, si existen, relacionados con su uso. El usuario de esta norma es responsable de establecer los procedimientos apropiados en cuanto a seguridad y salud y, antes del uso, determinar la aplicabilidad de limitaciones reglamentarias. Existen hojas de datos de seguridad de los reactivos y materiales; antes de su uso, conviene revisarlas con el fin de prevenir riesgos.

2. 2.1

REFERENCIAS NORMATIVAS NORMAS ASTM

ASTM D1293, Standard Test Method for pH of Water. ASTM D2330, Test Method for Methylene Blue Active Substances. ASTM E1298, Guide for Determination of Purity, Impurities, and Contaminants in Biological Drug Products. ASTM E1625, Test Method for Determining Biodegradability of Organic Chemicals in SemiContinuous Activated Sludge (SCAS).
1

Este mtodo de ensayo se basa en el documento A Procedure and Standards for the Determination of the Biodegradability of Alkyl Benzene Sulfonate and Linear Alkylate Sulfonate (Un procedimiento y normas para la determinacin de la biodegradabilidad del alquil benceno sulfonato y del alquilsulfonato lineal), del comit sobre mtodos de ensayo de biodegradacin de the Soap and the Detergent Association), Journal of the American Oil Chemists' Society. Vol 42, 1965, p. 986.

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3.

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RESUMEN DEL MTODO DE ENSAYO

3.1 La muestra se somete, primero, a un ensayo presuntivo mantenindola en un cultivo con agitacin. Cuando sea necesario, se puede someter la muestra a un ensayo de confirmacin basado en un tratamiento semicontinuo con lodo activado. 3.2 En el ensayo presuntivo, se inoculan microorganismos en un frasco que contenga un medio de crecimiento microbiano definido qumicamente (medio bsico) y el tensioactivo que se va a ensayar. La aeracin se logra agitando continuamente el frasco. A continuacin de dos transferencias adaptativas, se determina la biodegradacin mediante la medicin de la reduccin en el contenido de tensioactivo durante el perodo de ensayo. 3.3 En el ensayo de confirmacin se usa lodo activado obtenido de una planta de tratamiento de aguas residuales. El lodo, el tensioactivo que se va a ensayar y un agua residual sinttica, usada como una fuente de energa para los microorganismos del lodo, se colocan, todos, en una cmara de aeracin diseada especialmente. Se somete la mezcla a aeracin durante 23 h, se deja reposar y se elimina el material flotante. A continuacin, se completa de nuevo el volumen del lodo remanente en la cmara de aeracin con tensioactivo fresco y agua residual sinttica, y se repite el ciclo. La biodegradacin se determina mediante la reduccin en el contenido de tensioactivo durante cada ciclo.

4.

IMPORTANCIA Y USO

4.1 Este mtodo de ensayo est diseado para determinar si el sulfonato ensayado se elimina suficientemente mediante los mtodos habituales de tratamiento de aguas residuales por el efluente que se descarga en forma segura al ambiente sin tratamiento adicional. 4.2 Si la reduccin del tensioactivo en el ensayo presuntivo es igual al 90 % mayor, se considera que el material es biodegradable sin ensayo adicional. 4.3 Si la reduccin del tensioactivo en el ensayo presuntivo est entre el 80 % y el 90 %, el material debe someterse a un ensayo confirmativo. 4.4 Si la reduccin del tensioactivo en el ensayo presuntivo es menor que el 80 %, se considera que el material no es biodegradable. 4.5 Si es necesario efectuar el ensayo de confirmacin, la reduccin del tensioactivo en este ensayo debe ser al menos del 90 % para que el material se considere adecuadamente biodegradable. 4.6 En el Apndice X, literal X.4, se puede encontrar un ejemplo de datos procedentes de los ensayos presuntivo y de confirmacin.

ENSAYO PRESUNTIVO (CULTIVO CON AGITACIN) 5. 5.1 APARATO MQUINA DE AGITACIN

Se debe usar un agitador alternativo que opere aproximadamente a 128 recorridos de 51 mm/min a 101,6 mm/min (2 pulgadas/min a 4 pulgadas/min) o un agitador giratorio que opere de 225 r/min a 2

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250 r/min con una amplitud de 25 mm a 51 mm (1 pulgada a 2 pulgadas). (Se pueden usar otros agitadores, si es posible demostrar que hay una aeracin equivalente).

6. 6.1

REACTIVOS Y MATERIALES PUREZA DEL AGUA

En este ensayo se puede usar agua destilada o desionizada, que debe estar libre de materiales bacteriostticos. El agua producida por la condensacin de vapor en muchos casos contiene aminas que son inhibidoras del crecimiento microbiano. 6.2 6.2.1 MEDIO BSICO La composicin del medio bsico debe ser como sigue: NH4Cl K2HPO4 MgSO4 7H2O KCl FeSO4 7H2O Extracto de levadura Agua 3,0 g 1,0 g 0,25 g 0,25 g 0,002 g 0,30 g 1,0 L

6.2.2 El medio bsico se puede preparar as: se disuelve en forma secuencial el NH4Cl, K2HPO4, KCl y el FeSO4, en aproximadamente 800 ml de agua, y se ajusta el pH a 7,2 0,2 con una solucin diluida de cido clorhdrico o hidrxido de sodio. El extracto de levadura y el MgSO4 disueltos en 200 ml de agua se agregan despus, con agitacin, a la solucin anterior. Alternativamente, el medio se puede preparar con soluciones patrn adecuadas de las sales, pero el pH se debe ajustar antes de agregar el MgSO4. En cualquier caso, el extracto de levadura se debe agregar en forma seca inmediatamente antes del uso. Es importante usar el medio bsico inmediatamente despus de la preparacin para evitar el crecimiento bacteriano. El medio bsico se debe suministrar en uno de los siguientes matraces Erlenmeyer: 500 ml en un matraz de 1 L; 1 000 ml en un matraz de 2 L; y 1 500 ml en un matraz de 4 L.
NOTA 1 Los matraces de 1 L y de 2 L se adaptan mejor a un agitador giratorio; el matraz de 4 L a un agitador reciprocante . NOTA 2 El pH del medio se debe verificar antes del uso y ajustar a un pH entre 6,8 y 7,2, si es necesario.

6.2.3 Los matraces se deben proteger con tapones de algodn o elementos equivalentes, para reducir la contaminacin y la evaporacin.

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6.3 6.3.1 CULTIVO MICROBIANO Fuente

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El inoculante microbiano se puede obtener de alguna de las siguientes fuentes: 6.3.1.1 Fuentes naturales (suelo, agua de ro/lago, agua residual, lodo activado, efluente secundario, etc.). 6.3.1.2 Cultivos de laboratorio (lodo activado, caeras, etc.). 6.3.2 Mantenimiento del cultivo

Si se desea, el cultivo se puede mantener como un cultivo en un frasco de agitacin mediante transferencias semanales en el medio bsico ms 10 mg/L de alquil sulfonato lineal (LAS). Para cada transferencia semanal se usar 1 ml de cultivo de 7 d por cada 100 ml de medio fresco.

7.

NORMALIZACIN

7.1 Como un control sobre el cultivo y las condiciones de ensayo usadas, la corrida total es invlida si con una muestra de referencia apropiada de alquilsulfonato lineal se obtiene una eliminacin menor del 90 %, segn se evala mediante la prdida de sustancia activa con azul de metileno (MBAS).

8. 8.1

PROCEDIMIENTO ADICIN DE TENSIOACTIVO AL MEDIO BSICO

8.1.1 Se agregan 10 mg/L de tensioactivo (base activa) a los matraces que contienen el medio bsico. Si se usan soluciones tensioactivas patrn, se debe confirmar la estabilidad durante el almacenamiento. 8.1.2 Para cada tensioactivo que se est ensayando se usa: un frasco, ms un frasco de control para el LAS, controles adicionales si se desea (vase la nota 3), y un blanco que contenga todos los componentes del medio bsico, pero sin tensioactivo.
NOTA 3 Por medio de la Agencia de Proteccin Ambiental (EPA) se puede obtener una muestra de LAS de referencia que cumpla las normas de biodegradabilidad de los ensayos presuntivo y de confirmacin. Esta muestra es un compuesto de varios productos disponibles comercialmente, el cual se considera tpico (desde el punto de vista de la biodegradabilidad) de los tensioactivos LAS de uso comercial. Se sugiere efectuar un ensayo de control con este material, siempre que se vayan a realizar determinaciones de biodegradabilidad de los tensioactivos. Los valores de biodegradacin para la norma de LAS de EPA se anotan en los datos acompaantes de la EPA. En el Apndice X, literal X.2 se puede encontrar un anlisis ms completo y reciente. NOTA 4 Si se falla repetidamente en alcanzar los valores de biodegradacin prescritos para el control del tensioactivo (LAS), esto indica que las condiciones son desfavorables para la actividad microbiana normal o que existe un problema analtico. Tales problemas deben ser investigados por un microbilogo experimentado o por un qumico analtico.

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8.2 INOCULACIN

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Se inoculan los frascos con el cultivo descrito en el numeral 6.3. Se usa el mismo cultivo para todos los frascos incluido el de control y el blanco. Se usa 1 ml de inoculante por cada 100 ml de medio bsico contenido en el frasco. 8.3 INCUBACIN

Se colocan tanto los frascos que contengan el medio bsico, como el tensioactivo, y el inoculante en una mquina de agitacin que produzca una aeracin aceptable y se mezcla para la biodegradacin. Se mantiene la temperatura de los contenidos de los frascos a 25 C 3 C, se mide el pH del medio y, si es necesario, se ajusta el pH al comienzo de cada perodo de incubacin, a pH entre 6 y 8. 8.4 ADAPTACIN (aclimatacin)

Antes de comenzar el ensayo de biodegradacin, se efectan dos transferencias de aclimatacin de 72 h, desde los frascos mencionados en el numeral 8.3 y de acuerdo con la siguiente figura que describe la secuencia entre los numerales 8.2, 8.3 y 8.4. 8.5 ANLISIS (vase la norma ASTM D2330, Mtodo de ensayo)

NOTA 5 Es importante seguir exactamente el mtodo de ensayo descrito en la norma ASTM D2330, porque se sabe que con este mtodo se eliminan los efectos de iones de interferencia que podran estar presentes.

8.5.1 Para seguir el curso de la biodegradacin, se toman muestras de los frascos agitados para el anlisis. Las muestras se deben tomar durante el ensayo de 8 d en el momento cero (inmediatamente despus de la inoculacin y el mezclado del contenido de los frascos) y en los das sptimo y octavo. Para asegurar una concentracin inicial adecuada, se aconseja usar muestras tomadas en el momento cero de las dos transferencias adaptativas. Salvo que los anlisis se efecten en forma inmediata, para la preservacin de cualquier muestra (momento 0 a los 7 d u 8 d), se debe adicionar 1 ml de formaldehdo/100 ml de muestra. Cuando se use preservante, ste se debe agregar a todas las muestras incluido el blanco; luego, las muestras se almacenan a 4 C. 8.5.2 Puesto que el resultado analtico de la muestra del blanco se utiliza para corregir los resultados de los otros frascos, se debe usar el mismo tamao de muestra (o factor de dilucin) para el blanco y las otras muestras.

9.

CLCULO

9.1 Se calcula la concentracin neta de tensioactivo al restar los valores analizados del blanco con respecto a los valores analizados para los otros frascos. 9.2 Se calcula la eliminacin porcentual a partir de la reduccin en la concentracin del tensioactivo como sigue:
Eliminacin porcentual (Da x) = [((So - Bo) - (Sx - Bx))/(So - Bo)] x 100
en donde

So y Sx

anlisis de los cultivos del tensioactivo de ensayo anlisis de los cultivos de los blancos, en los das 0 y x, expresados como concentraciones de MBAS, mg/L.

Bo y Bx =

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9.3 El resultado del ensayo se debe calcular como el promedio de las eliminaciones porcentuales de los das sptimo y octavo.

10. 10.1

PRECISIN Y SESGO RESUMEN

Para determinar la reproducibilidad de los mtodos y la mejor estimacin de la eliminacin porcentual verdadera, se utilizaron anlisis estadsticos. Mediante el uso de estos procedimientos estadsticos para cada tensioactivo, se calcularon lmites de confianza alrededor de la eliminacin porcentual verdadera y lmites inferiores de tolerancia para los resultados individuales. 10.2 ENFOQUE ESTADSTICO USADO

10.2.1 Durante un perodo de 15 meses, se efectuaron tres experimentos colaborativos. El propsito de cada experimento fue suministrar unidades duplicadas dentro de cada corrida y corridas duplicadas para cada laboratorio. Adicionalmente, en el primer experimento se obtuvieron anlisis duplicados para cada unidad. As pues, se investigaron cuatro niveles de fuentes de variabilidad: de laboratorio a laboratorio, de corrida a corrida dentro de laboratorios, de unidad a unidad dentro de corridas, y de anlisis a anlisis dentro de unidades. 10.2.2 Puesto que no todos los laboratorios participantes tenan las instalaciones para llevar a cabo todo el programa de ensayos, el anlisis estadstico se efectu a partir del nmero variable de grados de libertad en el diseo experimental. Los resultados del ensayo en cada nivel de variabilidad se promediaron para obtener el promedio correspondiente al siguiente nivel superior; por ejemplo, la gran media aritmtica es el promedio de las medias aritmticas de los laboratorios, en lugar del promedio de las corridas individuales o de las medias aritmticas de las unidades. Se cree que cualquier ligera prdida en precisin de los lmites de confianza es de menos importancia que el sesgo indebido de los resultados, cuando unos pocos laboratorios presentan una gran proporcin de las determinaciones. 10.2.3 Con base en el primer conjunto de datos se observ que la variabilidad se increment a medida que disminuy el porcentaje de eliminaciones, y que la distribucin de los resultados present sesgo hacia los valores porcentuales de eliminacin menores. Como un paso de estabilizacin de la varianza, antes del anlisis se les aplic a los datos la transformacin de la raz cuadrada atribuida a Yates y comentada por Barlett2. La transformacin usada fue:
X = (100 - Y + Z) en donde: Y Z = = valor porcentual observado de eliminacin valor pequeo.

Puesto que todos los clculos se hicieron por computador, se explor un intervalo de valores de Z desde 0 hasta 2,0. Se encontr que para Z = 0,1 se estabiliz con xito la varianza. En el estado transformado se encontr que la poblacin se aproximaba a la normalidad. 10.2.4 Despus de la transformacin, se determinaron las medias y se efectu un anlisis de la varianza a fin de estimar los componentes de la varianza para las fuentes antes mencionadas.

Barlett, M.S., "The Use of transformation," Biometrics, Vol 3, No. 1, marzo de 1947, pp. 39-52.

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Mediante estas estadsticas se calcularon lmites de confianza alrededor de la eliminacin porcentual real y lmites inferiores de tolerancia para los resultados individuales. 10.3 RESULTADOS

10.3.1 Componentes de la varianza Durante el trabajo previo, el anlisis de los componentes de la varianza indic que no se necesitaba anlisis duplicado y, entonces, para el resto del estudio slo se efectu un anlisis sencillo. Considerando las otras fuentes de variabilidad, las variaciones de laboratorio a laboratorio fueron significativamente mayores que la variacin entre corridas en el mismo laboratorio. En la Tabla 1 se resume la importancia relativa de las fuentes de variabilidad. Estos datos son varianzas reunidas de cinco materiales de LAS.
Tabla 1. Fuentes de variabilidad Frasco con agitacin Fuente de variacin Varianza Laboratorio a laboratorio Corrida a corrida Unidad a unidad Total para determinacin nica
A

Semicontinua Varianza 0,204 5 0,042 5 0,003 3 0,250 3 Grados de libertad 10 39 36 A 20

Grados de libertad 14 66 97 A 31

0,1928 0,0585 0,0120 0,2633

Media aritmtica armnica

10.3.2 Lmites de confianza y tolerancia En la Tabla 2 se presentan las medias y los lmites obtenidos. El lmite inferior de tolerancia es aquel valor por encima del cual se espera que est el 95,0 % de los resultados de determinaciones individuales (con una confianza del 95 %).

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Tabla 2. Precisin y sesgo del tensioactivo eliminado, porcentaje Ensayo del frasco con agitacin Ensayo semicontinuo Nmero de repeticiones 52 86 43 Media aritmtica 97,4 98,3 58,2 Lmites de confianza del 95 % 95,9 a 98,6 97,1 a 99,2 46,5 a 69,9 Lmites inferiores de toleranciaA 92,3 93,9 9,4 Nmero de laboratorios 7 11 12 Nmero de repeticiones 27 43 12

Muestra

Media aritmtica 93,5 95,6 21,5

Lmites de confianza del 95 % 92,1 a 94,8 94,5 a 96,5 14,0 a 29,0

Lmites inferiores de toleranciaA 86,8 89,7 0

Nmero de laboratorios 11 15 13

LAS compuesto 1-1 LAS 3S Lote 3 de ABS Desconocidas: A B C

A

94,5 90,0 94,0

92,2 a 96,5 87,2 a 92,5 91,3 a 96,1

88,2 82,0 87,4

7 8 7

23 25 25

97,5 94,5 97,4

95,6 a 98,8 92,8 a 96,0 95,0 a 99,1

92,5 87,8 92,4

4 5 4

11 15 10

El 95 % de los resultados individuales debe estar por encima de este valor (confianza del 95 %).

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ENSAYO DE CONFIRMACIN (LODO ACTIVADO SEMICONTINUO)

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11. 11.1

APARATO CMARAS DE AERACIN (vase la Figura 1)

11.1.1 Construccin Se debe usar tubera de metil metacrilato con dimetro interno de 83 mm (3 1/4 de pulgada). El extremo inferior debe ser ahusado en 30 con respecto a la vertical hasta un hemisferio de 13 mm (1/2 pulgada) en la parte baja. Se localiza la parte baja de una abertura con dimetro de 25,4 mm (1 pulgada) para la insercin del tubo de suministro de aire, a 25,4 mm, por encima de la unin de la pared vertical y la ahusada. La longitud total de la cmara de aeracin debe ser al menos de 600 mm (24 pulgadas). Para facilitar el muestreo se puede ubicar un orificio opcional de drenaje en el nivel de 500 ml. Las unidades se dejan abiertas hacia la atmsfera. Como una alternativa al metil metacrilato se puede usar vidrio.

83 mm (31 4 pulgadas)

6,4 mm (1 4 de pulgada) o mayor Aprox. 22 mm (7 8 de pulgada) 610 mm (24 pulgadas) Tapn de caucho
Dispositivo opcional 25,4 mm con orificio (1 pulgada) perforado para drenaje al nivel 500 ml

Orificio con dimetro de 25,4 mm (1 pulgada) centrado en la cmara

8 mm 2 mm 65 mm (29 16 pulgadas) 30

25,4 mm (1 pulgada)

Figura 1. Cmara de aeracin semicontinua de lodo activado

Inoculacin Incubar 1 Medio + tensioactivo 72 h con agitacin 1 2 Medio fresco + tensioactivo Adaptacin Ensayo de biodegradacin 1 ml / 100 ml Incubar 72 h con agitacin 2 3 1 ml / 100 ml

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11.1.2 Montaje

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Las unidades se montan perpendicularmente. 11.1.3 Muestreo La muestra se toma, opcionalmente, mediante sifn, a travs de la parte superior de la unidad o mediante un tubo de drenaje al nivel de 500 ml. 11.1.4 Suministro de aire Se usa un tubo capilar con dimetro externo de 8 mm y dimetro interno de 2 mm. El extremo del tubo capilar se localiza a 7 mm (1/4 de pulgada), con respecto a la parte baja de la cmara de aeracin.

12. 12.1

REACTIVOS Y MATERIALES LODO ACTIVADO

Para los ensayos iniciales se recoge lodo activado de una planta de agua residual que trate principalmente residuos domsticos. Los slidos en suspensin se ajustan mediante dilucin con agua del grifo del acueducto municipal a 2 500 mg/L para iniciar el ensayo. Si se desea, se puede usar lodo aclimatado en laboratorio (esto es, aclimatado al agua residual sinttica y al programa de suministro). Los slidos en suspensin del caldo mezclado se deben mantener a 2 500 mg/L 500 mg/L mediante eliminacin de los slidos, segn sea necesario, durante el ensayo. Si los slidos en suspensin del caldo mezclado disminuyen por debajo de 2 500 mg/L, es posible que se requiera espesar ms el lodo (Vase la norma ASTM E1625 para el espesamiento de los slidos suspendidos del lodo). 12.2 SOLUCIN MADRE (STOCK) DE AGUA RESIDUAL SINTTICA: glucosa caldo nutriente extracto de carne fosfato cido de potasio sulfato amnico 13,0 g 13,0 g 13,0 g 13,0 g 2,5 g

Se debe completar 1 L con agua del grifo del acueducto; a continuacin se disuelve mediante calentamiento hasta un poco menos del punto de ebullicin. Se almacena en un refrigerador a menos de 7 C. Se elimina la solucin madre si aparece evidencia de crecimiento biolgico (turbiedad a simple vista - se debe confirmar con un microscopio, si se desea).

12.3 12.4

DESESPUMANTE DE SILICONA AIRE COMPRIMIDO

Se filtra a travs de lana de vidrio u otro medio para eliminar la contaminacin (aceite, etc.). 10

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13. 13.1

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CALIBRACIN Y NORMALIZACIN BLANCOS DE CONTROL

Con cada corrida se mantiene un blanco, as como para las otras unidades de ensayo, pero sin tensioactivo. (Los anlisis del tensioactivo sobre los afluentes y los efluentes de esta unidad se restan de los de las unidades de ensayo). 13.2 TENSIOACTIVO DE CONTROL INTERNO

Con cada corrida se incluye una unidad de suministro de LAS como un control en cuanto a la aptitud del lodo y de las condiciones de operacin. 13.3 VALIDACIN

13.3.1 Para cada tensioactivo, el resultado es invlido si no se cumplen las condiciones de operacin de nivel (vase el numeral 15.2). 13.3.2 Como un control sobre el lodo y las condiciones de operacin, los resultados de la corrida total son invlidos si el resultado para el LAS (vase la Nota 3) no se cumple.

14. 14.1

PROCEDIMIENTO CMARA DE AERACIN

14.1.1 Volumen del lquido de operacin, 1 500 ml. 14.1.2 Efluente y volumen de suministro, 1 000 ml diariamente (se retiran 500 ml de lodo reposado y lquido en la unidad despus del efluente). 14.1.3 Velocidad del aire, se debe mantener a 500 ml/min (1 pie3/h). 14.1.4 Temperatura, se debe mantener a 25 C 3 C. 14.2 AERACIN Y SEDIMENTACIN

El perodo de aeracin debe ser en promedio de 23 h/d, con desviaciones individuales no mayores de 1 h. El perodo de sedimentacin debe ser de al menos 1/2 h. 14.3 DESESPUMANTE

Si hay exceso de espuma, se usa una cantidad mnima de desespumante de silicona para mantener la espuma dentro de la unidad. 14.4 CUIDADO DE LA CMARA

Para evitar la acumulacin de slidos y de tensioactivo sobre el lquido, las paredes de la unidad se deben limpiar peridicamente. Para cada unidad se debe mantener un raspador o cepillo por separado, a fin de reducir la contaminacin cruzada. Inmediatamente despus del suministro, se deben raspar y enjuagar los residuos slidos que se adhieran a las paredes de la cmara; y raspar posteriormente segn sea necesario, pero no durante las ltimas 8 h del ciclo.

11

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14.5

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SUMINISTRO INICIAL DE LOS TENSIOACTIVOS DE ENSAYO AL LODO FRESCO

Si el lodo no se aclimata al tensioactivo de ensayo, se debe usar el siguiente programa de suministro incremental de tensioactivo: Da 0: Da 1: Da 2: Da 3: Da 4: Se suministra 4 mg/L de tensioactivo. Se suministra 8 mg/L de tensioactivo. Se suministra 12 mg/L de tensioactivo. Se suministra 16 mg/L de tensioactivo. Se suministra 20 mg/L de tensioactivo y se continua diariamente durante todo el ensayo.

14.6

RUTINA DIARIA

14.6.1 Si es necesario, se elimina suficiente lquido mezclado o lodo espeso para mantener los slidos en suspensin entre 2 000 mg/L y 3 000 mg/L (vase el numeral 12.1). 14.6.2 Se detiene la aeracin para permitir la decantacin durante 30 min. 14.6.3 Se lee el volumen de lodo decantado durante los 30 min (vase el numeral 14.10). Este paso es opcional. 14.6.4 Se retiran 1 000 ml superiores (efluente) para anlisis posterior, y se dejan 500 ml de lodo sedimentado y lquido en la cmara de aeracin. 14.6.5 Se reanuda la aeracin. 14.6.6 Se agrega un suministro de 1 000 ml a la cmara; la composicin objetivo del suministro es: Glucosa, caldo nutriente, extracto de carne, y fosfato: Sulfato amnico: Tensioactivo: (o cero para el blanco) 130 mg/L cada una 25 mg/L 20 mg/L

14.6.7 Cuando se necesite el anlisis del afluente (vase el numeral 14.7), se combinan los siguientes ingredientes: 10 ml de solucin madre de agua residual sinttica (vase el numeral 12.2); 20 mg de tensioactivo (si se usa la solucin madre, se debe confirmar la estabilidad durante el almacenamiento); agua del grifo para completar el volumen (un total de 1 000 ml). 14.6.8 Cuando no se necesite el anlisis del afluente, se agrega lo siguientes ingredientes directamente a la cmara: 12

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10 ml de solucin sinttica de material residual (vase el numeral 12.2); 20 mg de tensioactivo; agua del grifo para completar el volumen (un total de 1 000 ml). 14.6.9 Se limpian las paredes de la cmara de aeracin (vase el numeral 14.4). 14.6.10 Se toma la muestra, si se requiere, para los slidos en suspensin (vase el numeral 14.9) 2 h a 3 h despus del suministro. 14.7 ANLISIS DEL TENSIOACTIVO (MBAS)

(Vase la norma ASTM D2330) 14.7.1 Muestras 14.7.1.1 Afluente para cada unidad incluido el blanco (vase el numeral 14.6.7). 14.7.1.2 Efluente no filtrado procedente de cada unidad incluido el blanco (vase el numeral 14.6.4). 14.7.2 Frecuencia 14.7.2.1 Afluente En cada uno de los 5 d, sin incluir el perodo acumulado incremental de tensioactivo (vase el numeral 14.5). Al menos tres de las muestras de afluente deben ser del perodo de la operacin del nivel (vase el numeral 15.2). 14.7.2.2 Efluente Diariamente. 14.7.3 Preservacin de la muestra Las muestras se preservan con una solucin de formaldehdo al 37 % por cada 100 ml de muestra, y se almacenan a 4 C, salvo que los anlisis se efecten inmediatamente despus del muestreo. 14.7.4 Anlisis del blanco Puesto que el resultado analtico de la unidad con el blanco se usa para convertir los resultados de las otras unidades, para el blanco se debe usar el mismo tamao de muestra (o factor de dilucin) que el usado para las otras muestras. 14.8 ANLISIS DEL pH DEL EFLUENTE

(Opcional) (Vase el Apndice X, literal X.3). Se determina el pH del efluente no filtrado. 14.9 ANLISIS DE LOS SLIDOS EN SUSPENSIN

(Vase el Apndice X, literal X.3). 13

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14.9.1 Se toma una muestra del lquido mezclado 2 h a 3 h despus del suministro. Se raspan las paredes en el trmino de 30 min antes del muestreo. Para eliminar la posible estratificacin del lodo, se incrementa temporalmente el flujo de aire 2 min a 5 min antes del muestreo. 14.9.2 Se toman las muestras a intervalos de 3 d a 4 d. 14.10 DETERMINACIN DEL NDICE DE VOLUMEN DE LODO (Opcional) (Vase el Apndice X, literal X.3): 14.10.1 Se determina en los mismos das que en el caso de los slidos sedimentados. 14.10.2 Se observa el volumen de lodo sedimentado en la unidad despus de un tiempo de sedimentacin de 30 min. 14.11 DURACIN DEL ENSAYO El tiempo mnimo requerido para ensayar un nuevo tensioactivo es de 15 d, como sigue: 5 d para la acumulacin incremental del tensioactivo (vase el numeral 14.5); 3 d para el equilibrio en 20 mg/L de tensioactivo; 7 d para la operacin de nivel, segn se define ms adelante (vase el numeral 15.2);

15. 15.1

CLCULO ELIMINACIN DEL TENSIOACTIVO

15.1.1 Se calculan diariamente las eliminaciones porcentuales de tensioactivo, comenzando con el cuarto da en el cual el tensioactivo alimentado es de 20 mg/L:
Eliminacin (Da x), % = [(Si - Se)/Si ] x 100 en donde Si = Se = promedio de cinco anlisis de afluentes corregidos mediante la sustraccin del anlisis del afluente correspondiente al blanco, y anlisis del efluente menos el anlisis del efluente del blanco para ese da.

15.1.2 El resultado del ensayo es la eliminacin porcentual promedio durante un perodo de 7 d de la operacin de nivel segn se define en el numeral 15.2. 15.2 OPERACIN DE NIVEL

La operacin de nivel se determina separadamente para cada unidad y se define como un perodo de 7 d durante el cual la diferencia en la eliminacin porcentual en 2 d consecutivos cualesquiera no es mayor del 5 %, y la diferencia en la eliminacin porcentual promedio para los primeros 3 d y el promedio para los ltimos 3 d no es mayor del 3 %. Salvo que los anlisis se efecten inmediatamente, para la preservacin de cualquier muestra se debe agregar 1 ml de formaldehdo/100 ml de muestra. Cuando se use preservante, se debe agregar a todas las muestras incluyendo la del blanco.

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15.3

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NDICE DEL VOLUMEN DE LODO (vase la Nota 6)

(4)

ndice del volumen de lodo = volumen sedimentado en ml despus de 30 min/slidos en suspensin en mg/L x 667

NOTA 6 Se usa el factor 667 porque el volumen total que se est sedimentando es de 1 500 ml. Este clculo da el mismo resultado que el mtodo presentado en el Apndice X, literal X.3.

16. 16.1

PRECISIN Y SESGO Vase la seccin 10.

17.

PALABRAS CLAVE

17.1 Alquilbenceno sulfonato; biodegradabilidad; ensayo de confirmacin; ensayo presuntivo; lodo activado semicontinuo; cultivo agitado.

15

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ANEXO A (Normativo)

A.1

EXTRACCIN DE ALQUILBENCENO PRODUCTOS DETERGENTES

SULFONATO

(ABS)

PARTIR

DE

A.1.1 El mtodo recomendado para la extraccin del tensioactivo a partir del producto se basa en el documento: Contaminacin por detergentes - Determinacin de la biodegradabilidad de agentes tensioactivos aninicos sintticos, publicado por la Organizacin para la Cooperacin y el Desarrollo Econmico (OECD)3. Se especifica una amplia variedad de condiciones, segn el producto considerado; pero la relacin de producto:agua:isopropanol no es crtica, siempre que la fase acuosa contenga al menos 70 g de carbonato de potasio anhidro por 100 ml durante el procedimiento de extraccin. Esto asegura que se complete el enriquecimiento del isopropanol y el ABS a partir de la fase acuosa. A.1.2 La recuperacin del tensioactivo a partir del producto debe ser mayor del 90 % m/m, y es necesario determinar el contenido de tensioactivo aninico del producto si ste se desconoce. Este valor y la concentracin en la solucin madre del material de tensioactivo usado en los ensayos de biodegradabilidad se puede determinar mediante titulacin con una solucin estndar del tensioactivo catinico Hiamina. A.1.3 Las cantidades de producto, agua e isopropanol, usadas en la extraccin varan segn el tipo de producto y el contenido de tensioactivo. A continuacin se da el procedimiento general, aunque es posible que en cada caso sea necesario establecerlas. A.1.4 La cantidad de la muestra de polvo usada debe ser suficiente para dar aproximadamente 1 g de tensioactivo. La cantidad se pesa en un vaso de precipitacin seco de 250 ml, y se agrega el volumen apropiado de agua de grado reactivo para producir una pasta delgada. Se adiciona un agitador magntico a la muestra y sta se coloca sobre una placa de agitacin. Se ajusta la velocidad del agitador de forma que el lquido se agite sin salpicadura. En un vaso de precipitacin seco de 50 ml se pesa la masa requerida de carbonato de potasio anhidro, y sta se agrega gradualmente al lquido agitado. La mezcla se agita durante 10 min, y a continuacin se agrega una cantidad apropiada de isopropanol. En esta etapa la mezcla tiende a engrosarse, y puede ser necesario incrementar la velocidad del agitador para evitar la separacin de la fase orgnica. Despus de algunos minutos, la viscosidad de la mezcla disminuye de nuevo, y en este punto es necesario reducir la velocidad del agitador para evitar la salpicadura. La mezcla se agita durante un perodo total de al menos 30 min, comenzando en el momento en que se agrega el isopropanol. La mezcla se filtra en un papel de filtro Whatman No. 541, mediante un embudo de Bchner, y se lava con una porcin adicional de isopropanol. El filtrado se transfiere con cuidado a una tolva de separacin de 250 ml, se lava el recipiente del Bchner con pequeas cantidades de isopropanol. A.1.5 Se separan las fases, y el extracto alcohlico se transfiere a un vaso de precipitacin de 100 ml de peso conocido. La tolva de separacin se lava con isopropanol y las lavazas se agregan al extracto. El extracto se evapora hasta la sequedad en un bao de vapor, pasando un chorro de nitrgeno suavemente sobre la superficie del lquido. El extracto se seca hasta un peso constante, esto es, hasta que dos pesadas sucesivas difieran apenas en menos de 0,1 g.

Publicaciones de la OECD, 2 rue Andre-Pascal, Paris-16e, No. 29.651. Depot Legal 2296, 1972.

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A.1.6 El contenido de ABS del extracto se determina mediante titulacin difsica con solucin Hiamina estndar, mediante indicador en mezcla de bromuro de dimidio y azul de disulfina (vase el Anexo A, literal A.2), y se calcula el peso de tensioactivo extrado a partir del producto. Ahora bien, ste debe ser mayor del 90 % para tener seguridad de que el material extrado es representativo del tensioactivo contenido en el producto. A.1.7 La solucin madre de tensioactivo en reserva usada en los ensayos de biodegradabilidad se prepara disolviendo un peso adecuado de extracto en 1 L de agua de grado reactivo, y el contenido de tensioactivo tambin se determina mediante titulacin con Hiamina.

A.2

DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE ABS CONCENTRACIN DE ABS EN LA SOLUCIN MADRE

DEL

PRODUCTO

A.2.1 El procedimiento de titulacin usado para determinar el contenido de ABS del producto y la concentracin del ABS en la solucin de reserva es un mtodo estndar usado para la determinacin de tensioactivos aninicos en soluciones acuosas. Los tensioactivos aninicos se determinan mediante titulacin con soluciones normalizadas del tensioactivo catinico, Hiamina 1622. Se usa una titulacin de dos fases (cloroformo/agua) y un sistema de indicador mezclado (esto es, bromuro de dimidio/azul de disulfina).

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APNDICES (Informativos)

X.1

DATOS DE EXTRACCIN
Tabla X.1.1 Extraccin de LAS a partir de productos formulados Mtodo de OECD para extraccin de isopropanolA,B Producto A 300 1 250 1 050 2 250 750 39,0 39,4 101,0 B 300 1 250 1 050 2 250 750 53,7 54,1 100,7 CC 350 ... 315 525 175 34,7 34,5 99,4 D 300 1 250 1 050 2 250 750 48,6 48,9 100,6 E 300 1 250 1 050 2 250 750 60,0 56,7 94,5 F 200 1 000 700 1 500 500 48,0 47,2 98,3

Peso de producto, g Volumen de agua, ml Peso de K2CO3, g Volumen de isopropanol 1ra extraccin, ml ra Volumen de isopropanol 2 extraccin, ml Peso calculado de LAS, g Peso de LAS recuperado, g LAS recuperado,
A

Direccin de Medio Ambiente de OECD, Mtodo propuesto para la determinacin de la biodegradabilidad de tensioactivos usados en detergentes sintticos, Paris 1976, Seccin 5.1.2, pp 20-23. Resultados obtenidos con dos extracciones con IPA, Laboratorio de Ensayo - Centro de Investigacin del Agua, Medmenham, Reino Unido. Producto lquido.

Tabla X.1.2. Extraccin de LAS a partir de productos formulados Mtodo de OECD para extraccin de isopropanol Producto Peso de producto, g Volumen de agua, ml Peso de K2CO3, g Volumen de isopropanol 1ra extraccin, ml Volumen de isopropanol 2 extraccin, ml Peso calculado de LAS, g Peso de LAS recuperado, g LAS recuperado,
A ra A,B

A 20 ... 14 30 ... 2,02 1,83 90,5

BC 20 ... 14 30 ... 2,01 1,81 90,1 20 ... 14 30 ...

CC 10 50 35 50 ...

D 10 50 35 75 ...

E 10 50 35 50

... 1,98 2,15 108,4

2,00 1,83 91,4

1,93 1,91 98,8

2,24 2,35 105,2

Direccin de Medio Ambiente de OECD, Mtodo propuesto para la determinacin de la biodegradabilidad de tensioactivos usados en detergentes sintticos, Paris 1976, Seccin 5.1.2, pp 20-23. Resultados obtenidos con extraccin individual con IPA, Laboratorio de Ensayo - Unilever Research Port Sunlight Laboratory, Merseyside, Reino Unido. Producto lquido.

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Tabla X.1.3. Extraccin de LAS a partir de productos formulados Mtodo de OECD para extraccin de isopropanolA,B Producto Peso de producto, g Volumen de agua, ml Peso de K2CO3, g Volumen de isopropanol 1a extraccin, ml Volumen de isopropanol 2a extraccin, ml Peso calculado de LAS, g Peso de LAS recuperado, g LAS recuperado, %
A

AC 350 ... 315 525 175 35,2 35,2 100,0

B 300 1 500 1 050 2 250 750 36,3 34,7 95,6

C 200 1 000 700 1 500 500 44,8 44,5 99,3

D 200 1 000 700 1 500 500 39,7 38,9 98,0

Direccin de Medio Ambiente de OECD, Mtodo propuesto para la determinacin de la biodegradabilidad de tensioactivos usados en detergentes sintticos, Paris 1976, Seccin 5.1.2, pp 20-23. Resultados obtenidos con dos extracciones con IPA, Laboratorio de Ensayo - Unilever Research Port Sunlight Laboratory, Merseyside, Reino Unido. Producto lquido.

X.2

BIODEGRADACIN4 Y DATOS REFERENCIA DE LAS DE EPA

ANALTICOS5

SOBRE

LA

SOLUCIN

DE

Tabla X.2.1. Resultados de este mtodo de ensayo (Ensayo presuntivo-cultivo de agitacin) sobre el lote 0990 de la muestra de referencia de LAS de EPA, peso molecular promedio 342; 6,03 % de activo Concentracin medida t0, mg activo/L Solucin de referencia LAS de EPA 25,46 97,3 96,3 96,8

Sustancia de ensayo

Da 7 de eliminacin, %

Da 8 de eliminacin, %

Promedio de eliminacin, %

Tabla X.2.2. Resultados de este mtodo de ensayo (Ensayo de confirmacin - Lodo activado semicontinuo) sobre lote 0990 de muestra de referencia LAS de EPA, peso molecular promedio 342, % activo 6,03 Sustancia de ensayo Solucin de referencia LAS de EPA % de MBAS eliminado 99,6

4 5

Realizado por Roy F. Weston Inc. Fate and Effects Laboratory, 254 Welsh Pool Road, Lionville, PA 19341-1345. Realizado por Industrial Testing Laboratories, Inc., 2350 S. Seventh St., St Louis, MO 63104-4296.

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Tabla X.2.3. Resultados analticos RFW No.: Descripcin de la muestra: Nmero ITL de laboratorio: Fecha de recoleccin: Fecha recibida (laboratorio) Matriz de muestra: Fecha de preparacin (desulfonacin): Fecha del anlisis: Peso/volumen de la muestra: Volumen de extracto Factor de dilucin Volumen de alcuota para disulfonacin: Volumen final del extracto Volumen de inyeccin: Total de productos orgnicos (1): Trixido de azufre, antes de la hidrlisis (2): Trixido de azufre, despus de la hidrlisis (2): Contenido del activo (3): Distribucin del ismero: C10, % C11, % C12, % C13, % C14, % Longitud de la cadena promedio: Peso molecular promedio: 15,68 38,62 38,81 6,89 0,00 11,37 339,2 Contina... 9403F140-009 Patrn EPA (0990) 244088 Marzo 8, 1994 Marzo 9, 1994 Patrn analtico Marzo 15, 1994 Mayo 13, 1994 1,7196 g 100 ml 1 1 ml 0,5 ml 1 L N.A. 1,46 1,46 6,19

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Tabla X.2.3. (Continuacin) Informe No. 94-03-00993 Cliente: Weston Nmero ITL RFW No. Descripcin de la muestra Datos de disulfonacin Fecha de anlisis (mes/da/ao) Nmero de corrida Nmero de cromatograma Distribucin isomtrica, % C10-5, rea C10-4, rea C10-3, rea C10-2, rea C10-total, % C11-6, rea C11-5, rea C11-4, rea C11-3, rea C11-2, rea C11-total, % C12-6, rea C12-5, rea C12-4, rea C12-3, rea C12-2, rea C12-total, % C13-7,6, rea C13-5, rea C13-4, rea C13-3, rea C13-2, rea C13-total, % C14-7, rea C14-6, rea C14-5, rea C14-4, rea C14-3, rea C14-2, rea C14-total, % Longitud de la cadena promedio Peso molecular rea total 3,352 3,003 3,375 4,937 15,68 3,595 8,112 6,620 7,594 10,207 38,62 7,110 7,320 5,796 7,494 8,580 38,81 1,632 1,291 1,082 1,407 1,033 6,89 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 11,37 339,2 93,54 38,97 39,28 39,88 41,02 43,18 34,29 34,51 36,07 36,06 37,83 29,47 29,62 30,10 31,10 32,87 244088 9403F140-009 Patrn de EPA 3/15/94 5/13/94 19 12 Tiempo de retencin (mn) 24,65 25,07 25,97 27,76

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Tabla X.2.3. (Final)

Informe No. 94-03-00993 Cliente: Weston Nmero ITL RFW No. Descripcin de la muestra Datos de disulfonacin Fecha de anlisis (mes/da/ao) Nmero de corrida Nmero de cromatograma Distribucin isomtrica, % C10-5, rea C10-4, rea C10-3, rea C10-2, rea C10-total, % C11-6, rea C11-5, rea C11-4, rea C11-3, rea C11-2, rea C11-total, % C12-6, rea C12-5, rea C12-4, rea C12-3, rea C12-2, rea C12-total, % C13-7,6, rea C13-5, rea C13-4, rea C13-3, rea C13-2, rea C13-total, % C14-7, rea C14-6, rea C14-5, rea C14-4, rea C14-3, rea C14-2, rea C14-total, % Longitud de la cadena promedio Peso molecular rea total 3,197 2,873 3,191 4,796 14,81 3,585 8,009 6,614 7,622 10,411 38,17 7,340 7,474 5,773 7,764 9,184 39,53 1,789 1,412 1,202 1,537 1,174 7,49 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 11,40 339,6 94,95 244088-2 (duplicado) 9403F140-009 Patrn EPA 3/15/94 5/13/94 18 13 Tiempo de retencin (min) 24,65 25,08 25,98 27,76 29,46 29,62 30,10 31,10 32,87 34,29 34,50 35,07 36,06 37,83 38,97 39,29 39,89 41,03 43,18

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X.3 MTODOS ANALTICOS

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X.3.1 Slidos en suspensin6 X.3.1.1 Aplicabilidad Este mtodo se debe usar para muestras procedentes del ensayo de confirmacin X.3.1.2 Aparato X.3.1.2.1 Plato de aluminio con un fondo perforado, similar a un embudo Bchner, con dimetro interno de 92 mm y altura de 25 mm. X.3.1.2.2 Papel filtro, rpido, cualitativo, dimetro de 90 mm. X.3.1.2.3 Anillo de caucho esponja, dimetro externo de 93 mm, dimetro interno de 75 mm, espesor aproximado de 3 mm. X.3.1.2.4 Embudo Bchner, No. 2A, dimetro interno en el fondo de 93 mm. X.3.1.2.5 Frasco filtrante, tamao de 1 L con tubuladura lateral. X.3.1.3 Procedimiento Se ajusta el papel de filtro en el disco de aluminio y se secan ambos en un horno con temperatura entre 103 C y 105 C, inclusive. Se enfra en un desecador y se pesa. Se humedece el papel de filtro. Se coloca el disco sobre el anillo de caucho en el embudo de Bchner y se aplica aproximadamente 51 cm de Hg (20 pulgadas de Hg) de vaco al frasco. Inmediatamente, se agregan al plato de 20 ml a 100 ml de muestra, lo cual debe dar 0,1 g a 0,4 g de slidos secos. Despus de extraer el agua, se seca el plato y el contenido durante aproximadamente 30 min a una temperatura de entre 103 C a 105 C. Se enfra en el desecador y se pesa. X.3.1.4 Clculo
Slidos en suspensin, mg/L = [(W1 - Wo)/ml de muestra] x 1 000 en donde W1 W0 = = peso seco del disco y del contenido despus del filtrado, y peso seco del disco con el papel de filtro.

X.3.1.5 Desviacin estndar 0,6 mg en una muestra de 100 g. X.3.2 pH (opcional): X.3.2.1 El pH se puede determinar colorimtricamente o mediante la norma ASTM D1293, Mtodos de ensayo. Ensayos para pH de agua, si se desea una mayor exactitud.

Los mtodos para slidos en suspensin y para el ndice de volumen de lodo se adaptaron de los que aparecen en el: Standard Methods for the Examination of Water and Waste Water (12dma ed.), publicada por la American Public Health Association, 1790 Broadway, Nueva York, NY 10019.

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X.3.3 ndice de volumen de lodo9 (Opcional): X.3.3.1 Definicin ndice de volumen de lodo (IVL). Es el volumen ocupado por 1 g de lodo activado despus de la sedimentacin del lquido sometido a aeracin durante 30 min. X.3.3.2 Procedimiento Se toma una muestra de 1 L de la cmara de aeracin; se deja sedimentar durante 30 min en una probeta de 1 000 ml; y se lee el volumen ocupado por el lodo en mililitros. X.3.3.3 Clculo:
IVL = ml de lodo sedimentado x 1 000/(mg/L de slidos en suspensin)

X.4

DATOS DE BIODEGRADACIN PARA UNA MUESTRA TPICA DE LAS

Tabla X.4.1. Biodegradacin de LAS en el ensayo presuntivoA Concentracin inicial Biodegradacin (Da 7), % 9,4 mg/L (MBAS) 93,6 94,7 97,9 96,8 97,9 96,8

Biodegradacin (Da 8), %

Los ejemplos se tomaron de datos de apoyo disponibles en la sede de ASTM.

Tabla X.4.2. Biodegradacin de LAS en ensayo de confirmacinA Muestra de ensayo Pasta de LAS
A

Promedio de biodegradacin, % 97,0

Los ejemplos se tomaron de datos de apoyo disponibles en la sede de ASTM.

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DOCUMENTO DE REFERENCIA

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ASTM INTERNATIONAL, Standard Test Method for Biodegradability of Alkylbenzene Sulfonates. Philadelphia 2008. 8 p. (ASTM D2667-95 (Reapproved 2008)).

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