Jael Aguilar Badillo Captulo 1 Introduccin a la microbiologa

La microbiologa trata de las clulas vivas y de su funcionamiento. Estudia los microorganismos, especialmente a las bacterias y clulas con una enorme importancia bsica y aplicada. De un modo u otro, los microorganismos influyen en todas las formas vivas de la Tierra y por tanto, la ciencia de la microbiologa tiene una gran trascendencia. La microbiologa proporciona algunas de las herramientas de investigacin ms adecuadas para estudiar la naturaleza de los procesos vitales. Los microorganismos desempean una funcin destacada en la fertilidad del suelo y en la produccin de animales domsticos, adems procesos industriales y biotecnolgicos a gran escala, como la produccin de antibiticos o de protenas humanas, se basan en la utilizacin de microorganismos.

Los microorganismos como clulas

La clula es la unidad de vida fundamental. Una clula es una entidad aislada de otras clulas por una membrana celular que contiene diversos compuestos y estructuras subcelulares. La membrana celular es la barrera que separa el interior de la clula del exterior. Dentro de la membrana celular se encuentran las diversas estructuras y componentes que hacen posible que la clula funcione. Son estructuras clave el nuclolo, donde se guarda la informacin gentica, el ADN necesario para hacer nuevas clulas y el citoplasma, donde se encuntrala maquinaria para el crecimiento y otras funciones celulares. Todas las clulas estn formadas por 4 tipos de componentes qumicos: protenas, acidos nucleicos, lpidos y polisacridos. De alguna forma, la primera clula debi originarse a partir de algo no celular, algo anterior a la clula, una estructura pre-celular. Todos los organismos celulares son estructuras altamente organizadas que muestran alguna forma de metabolismo, reproduccin, diferenciacin proceso por el que se forman nuevas sustancias o estructuras.

En realidad, las clulas son mquinas qumicas y sistemas codificados, y el enlace entre estos dos atributos es el crecimiento.

Los microorganismos y sus ambientes naturales

En la naturaleza, las clulas viven asociadas a otras en conjuntos llamados poblaciones, tales poblaciones se componen de grupos de clulas relacionadas, que generalmente derivan de una nica clula parental por divisiones celulares parentales. El lugar donde vive una poblacin microbiana en un determinado ambiente se denomina hbitat. En muchos casos las poblaciones interaccionan y cooperan en sus funciones nutricionales como los productos de desecho derivados de las actividades metablicas de algunas clulas sirviendo como nutrientes para otras. Las propiedades de un ecosistema estn controladas en gran parte por todas las actividades microbianas. Los organismos obtienen los nutrientes del medio para sus procesos metablicos y lo usan para formar nuevas clulas, al mismo tiempo, los organismos eliminan al medio los productos de desecho de su metabolismo. Clculos detallados sobre el nmero total de clulas microbianas en la tierra indican que este nmero es del orden 5x1030 clulas. La cantidad total de carbono que est presente en este nmero tan grande de clulas tan pequeas equivale al de todas las plantas de la Tierra, mientras que el contenido total de nitrgeno y fsforo en estas clulas en 10 veces mayor que la de toda la biomasa vegetal. Por lo tanto las clulas procariontes por pequeas que se vean, constituyen la mayor porcin de biomasa sobre la Tierra y son reservas de nutrientes esenciales.

El impacto de los microorganismos sobre el hombre

Los microorganismos hoy en da aun constituyen serias amenazas para la existencia humana, no obstante hay que destacar que la mayor parte de los microorganismos no son perjudiciales para el hombre. De hecho, la gran mayora son en realidad beneficiosos y llevan a cabo procesos de enorme valor para la sociedad. Los sistemas de agricultura dependen de las actividades microbianas ya que reducen la necesidad de fertilizantes costosos para las plantas.

Tambin tienen gran importancia agrcola, los microorganismos que son esenciales en el proceso digestivo de los rumiantes, que poseen un rgano digestivo llamado rumen, donde los microorganismos realizan el proceso digestivo. En el suelo y en el agua los microorganismos convierten el carbono, nitrgeno y azufre en formas asimilables por las plantas. En lo que respecta a la energa, los microorganismos desempean una funcin clave, la mayor parte del gas natural es un producto bacteriano, derivado de ls actividades de las bacterias metanogeticas. Los microorganismos fostotrofos pueden utilizar la luz como fuente de energa para la produccin de biomasa, es decir energa en forma de organismos vivos. Produccin de biocombustibles como el metano y el etanol es gracias a las actividades degradativos de los microorganismos. La biotecnologa implica el uso de microorganismos en procesos industriales a gran escala, utilizando por lo general microorganismos modificados genticamente y capaces de sintetizar productos especficos de elevado valor comercial. Por ejemplo, la insulina humana, puede ser producida microbiolgicamente a partir del gen de la insulina humana expresado en un microorganismo.

Races histricas de la microbiologa

El descubrimiento de los microorganismos est relacionado con la invencin del microscopio. La primera persona que vio a los microorganismos con detalle fue Antonie van Leewenhock quien en 1684 utilizo microscopios simples fabricados por el mismo. La microbiologa no se desarroll como ciencia hasta las mejoras en microscopia, que permitieron una mejor observacin de las bacterias y se idearon tcnicas bsicas de laboratorio para el estudio de microorganismos. En 1850 Cohn se interes en la microscopia para estudiar el crecimiento y la divisin de las clulas vegetales. Su inters por la microscopia lo llev primero al estudio de plantas unicelulares, las algas y ms tarde a bacterias fotosintticas. Cohn se interes especialmente por las bacterias resistentes al calor, lo que lo llev a descubrir el gnero Bacillus y el proceso de formacin de esporas. Las endosporas bacterianas son estructuras muy resistentes al calor.

Cohn describi el ciclo de vida completo del Bacillus y descubri que las clulas vegetativas, pero no las endosporas, podan morir mediante ebullicin. Cohn contribuyo con el desarrollo de la bacteriologa aportando las bases experimentales de clasificacin de bacterias. El adversario ms ferviente de la generacin espontnea fue Pasteur cuyo trabajo sobre este problema fue el ms riguroso y convincente. Pasteur demostr que en aire haba estructuras que se parecan mucho a los microorganismos encontrados en el material putrefacto. Descubri que el aire normal contiene continuamente una diversidad de clulas microbianas que son indistinguibles de las que se encuentran en mucha mayor cantidad en los materiales en putrefaccin. Pasteur consigui muchos otros xitos en microbiologa y medicina, entre los principales destaca el desarrollo de vacunas para enfermedades como el carbunco, el clera aviar y la rabia. Koch y la teora microbiana de las enfermedades infecciosas Koch estudio el carbunco, enfermedad causada por una bacteria formadora de endosporas, Bacillus anthracis y la sangre de una animal con carbunco est llena de clulas de esta gran bacteriana. Mediante cuidadosos estudios de microscopia, Koch puso de manifiesto que la bacteria estaba siempre presente en la sangre de los animales enfermos. Sin embargo, la mera asociacin de la bacteria con la enfermedad no demostraba que la bacteria fuera la causa de la enfermedad, por el contrario, podra ser un efecto de la enfermedad. Koch demostr que era posible tomar una pequea cantidad de sangre de un ratn enfermo, inyectarla en un segundo ratn y provocar en este la enfermedad y la muerte. Koch demostr que la sangre del animal enfermo contenia gran cantidad de la bacteria formadora de endosporas. Tambin demostr que la bacteria poda ser cultivada en caldos nutritivos fuera del animal y que incluso, la bacteria poda causar la enfermedad aun cuando se reinoculaba a un animal. Postulados de Koch 1. El organismo debe estar siempre presente en los animales que sufran la enfermedad y ni en individuos sanos. 2. El organismo debe cultivarse en cultivo axenico o puro fuera del cuerpo del animal.

3. Cuando dicho cultivo e inocula a un animal susceptible, debe iniciar en l los sntomas caractersticos de la enfermedad. 4. l organismo debe aislarse nuevamente de estos animales experimentales y cultivarse nuevamente en el laboratorio, tras lo cual debe mostrar las mismas propiedades que el microorganismo original. Los postulados de Koch permitieron demostrar que organismos especficos originan enfermedades especficas, adems que impulsaron el desarrollo de la microbiologa haciendo hincapi en la importancia de la utilizacin de los cultivos en el laboratorio. El mayor logro de Koch en la bacteriologa mdica est relacionado con la tuberculosis, desde el principio de su estudio sobre la tuberculosis , el objetivo de Koch fue detectar el agente causante de la enfermedad y para ello empleo todos los mtodos que haba desarrollado previamente: microscopia, tincin de tejidos, aislamiento en cultivo puro e inoculacin en animales. Koch diseo un procedimiento para teir M.tuberculosis en muestras de tejidos usando azul de metileno alcalino y un segundo colorante que tea solo el tejido. Este mtodo fue el precursor de la tincin de Ziehl-Nielson usada hoy para teir bacterias.

Diversidad microbiana y nacimiento de la microbiologa molecular

La aportacin de Beijerink fue la formulacin del concepto de cultivo de enriquecimiento, en vez de aislar a los microorganismos de la naturaleza de un modo no selectivo, propuso seleccionar microorganismos especficos a partir de muestras naturales mediante el uso de medios de cultivos especficos y condiciones de incubacin que favorecan el crecimiento de un solo tipo de microorganismos relacionados fisiolgicamente. Usando este mtodo aisl los primeros cultivos puros de muchos microorganismos del suelo y del agua. Winogradsky postulo el concepto de quimiolitotrofia, es decir la oxidacin de compuestos inorgnicos acoplada a la liberacin de energa utilizable. Usando un mtodo de enriquecimiento tambin aisl la primera bacteria fijadora de nitrgeno y desarroll el concepto de fijacin bacteriana de N2.

PREGUNTA 1-Qu beneficios brindan los microorganismos a la agricultura y a la ganadera?

2-Qu biocombustibles son producidos por microorganismos? 3-Con que fin la biotecnologa emplea el uso de microorganismos?

RESPUESTA En la agricultura los microorganismos sirven como fijadores del nitrgeno atmosfrico, mientras que con el ganado algunos microorganismos ubicados en el rgano rumen ayudan en el proceso digestivo del animal. Biocombustibles como el etanol y el metan. Con el fin de sintetizar productos de elevado valor comercial, por ejemplo la insulina humana, producida microbiolgicamente a partir del gen de la insulina humana expresado en un microorganismo. El gas natural es un producto derivado de las actividades de las bacterias metanogeticas. Convierten el nitrgeno, el carbono y el azufre en formas asimibles para las plantasDescubri el gnero Bacillus y el proceso de formacin de esporas. Adems que aporto las bases experimentales de clasificacin de bacterias. Desarrollo vacunas para enfermedades como el corbunco, el clera aviar y la rabia. Antonie van Leeuwenhock Permitieron demostrar que organismos especficos originan enfermedades especficas, adems de demostrar la importancia de la utilizacin de medios de cultivo en el laboratorio. Es la oxidacin de compuestos inorgnicos acoplada a la liberacin de energa utilizable.

4-Qu tipo de bacterias producen gas natural? 5-Qu funcin desempean los microorganismos en el suelo y en el agua? 6-Cul fue la principal aportacin de Cohn?

7-Menciona algunas de las vacunas que desarrollo Pasteur. 8-Quin fue la primera persona en observar a los microorganismos? 9-Qu demostraron los postulados de Kock?

10-Qu quiere decir el concepto de quimiolitotrofia?

Captulo 4 Estructura y funcin celular Microscopia y morfologa celular

Como los edificios, las clulas se construyen por la unin de pequeos elementos que crean estructuras ms complejas, como es el caso de los monmeros que se emplean para construir macromolculas, que a la vez forman estructuras ms complejas con funciones definidas, como los ribosomas, las membranas, paredes celulares, etc.

Microscopa ptica
Para un anlisis de los microorganismos se puede utilizar el microscopio ptico que se usa para observar clulas intactas, mientras que con un microscopio electrnico se pueden observar estructuras internas o detalles de las superficies celulares. Los microscopios utilizan lentes para aumentar la imagen de una clula de tal modo que se pueden observar detalles estructurales, se puede aumentar la imagen un sinfn de veces pero no se puede aumentar la resolucin que se encuentra limitada por las propiedades fsicas de la luz. El microscopio ptico compuesto En la actualidad existen varios tipos de microscopios pticos: de campo claro, contraste de fases, campo obscuro y fluorescencia. Siendo el de campo claro el ms empleado en los cursos bsicos de biologa y microbiologa, ya que se compone de dos series de lentes que funcionan en conjunto para producir la imagen. La imagen que se observa con este microscopio se debe a la diferencia de contraste que existe entre ellas y el medio que las rodea, y esta diferencia de contraste es debido a que las clulas absorben la luz en diferente grado. Aumento y resolucin El lmite de un microscopio ptico es de 1500 veces el aumento, que est predispuesto de la resolucin de los lentes que lo componen. La resolucin es una funcin de la longitud de la luz y la apertura numrica que es una medida de la captacin de la luz por el lente.

La mayora de los microscopios utilizados en microbiologa poseen oculares que aumentan de 10 a 15 veces y objetivos que aumentan entre 10 a 100 veces. Tinciones: incremento del contraste para microscopia de campo claro Se pueden utilizar colorantes para teir a las clulas y facilitar su observacin, estos colorantes son compuestos orgnicos y cada tipo de colorante tiene una cierta afinidad por algunos componentes celulares. Estos colorantes estn casi siempre cargados con cationes que se combinan con algunos componentes celulares cargados negativamente. Entre estos colorantes se pueden mencionar el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Existen tinciones de tipo diferenciales ya que no tie del mismo modo a todas las clulas, este tipo de tincin se utiliza en bacteriologa, conocido como tincin de Gram, ya que logra la clasificacin de las bacterias en dos grandes grupos: Gram positivas (color morado) y Gram negativas (color rojo), esto se debe a diferencias en la pared celular de las bacterias. Microscopios de contraste de fases, campo obscuro y fluorescencia El microscopio de contraste de fase se dise bajo el hecho de que las clulas poseen un ndice de refraccin distinto al del medio que las rodea, y por lo tanto desvan la luz. La luz que logra pasar a travs de la muestra sufre un cierto retardo, que es amplificado por un anillo especial que cumple con el objetivo de formar una imagen obscura sobre un fondo brillante. En el microscopio de campo obscuro la luz es dispersada por la muestra y por lo tanto los microorganismos se observan brillantes sobre un fondo obscuro. En estos microscopios la resolucin es lo bastante alta y gracias a esto pueden observarse con ellos objetos difcilmente percibidos por los microscopios de campo claro o de contraste de fases. En el caso del microscopio de fluorescencia, es utilizado para la visualizacin de muestras capaces de emitir fluorescencia. Esta fluorescencia puede ser debida a que determinadas clulas poseen sustancias fluorescentes naturales como la clorofila u otros componentes fluorescentes o bien por el hecho de haber sido tratadas con un colorante fluorescente.

Imagen tridimensional: microscopia de contraste de interferencia, fuerza atmica y confocal

Una de las limitaciones de los tipos de microscopia mencionados es el hecho de que las imgenes que se obtienen son bidimensionales.

Microscopia de contraste de interferencia diferencial Este tipo de microscopia utiliza la luz polarizada, que pasa a travs de un prisma que genera dos haces diferentes de luz, los cuales atraviesan a la muestra y entran en el lente del objetivo. Al combinarse los dos haces de luz y gracias a diferencias en el ndice de refraccin de las sustancias que cada has ha atravesado, crea como resultado un efecto de interferencia, que intensifica diferencias sutiles de la estructura celular y se tiene como resultado una apariencia tridimensional. Microscopia de fuerza atmica Con este mtodo de microscopia se emplea el uso de una fina aguja como sonda que se aproxima a la muestra a analizar, de modo que se establecen fuerzas atmicas de repulsin entre la sonda y la muestra. Cuando la muestra se mueve de tanto forma horizontal como de forma vertical, la sonda reproduce los valles y las colinas de la muestra, registrando las interacciones con la superficie, estas seales se registran en una serie de detectores que generan informacin digital a una computadora, la cual produce una imagen. Microscopia confocal La microscopa confocal de barrido con lser se basa en un microscopio computarizado que acopla una fuente de luz lser a un microscopio ptico, dicha tcnica permite producir imgenes digitales tridimensionales de microorganismos y de otras muestras biolgicas. En la microscopia confocal un rayo lser se refleja en un espejo que se dirige a un sistema de barrido y luego a un sistema de precisin que ajusta el plano de foco del rayo a una determinada capa vertical dentro de la muestra.

Microscopia electrnica
Estos equipos de utilizan habitualmente para el estudio detallado de estructuras celulares. El microscopio electrnico de transmisin utiliza electrones y lentes electromagnticas que se opera en todo momento al alto vaco. Con este microscopio se pueden observar estructuras moleculares tales como las protenas y cidos nucleicos. Debido a que el uso de electrones hace a este equipo un poco deficiente para la apreciacin directa de la clula. Par ello se emple la tcnica de cortes ultrafinos a fin de poder visualizar las muestras. Para la obtencin de un mayor contraste las muestras se tien mediante tratamientos con compuestos como por ejemplo el cido smico, permanganato, sales de uranio o de lantano, o plomo ya que estos compuestos poseen electrones pesados logran desviar los electrones y aumentan el contraste. Microscopia electrnica de bariido Mediante este microscopio la muestra a analizar es recubierta con una capa de algn metal pesado, el haz de electrones barre la superficie de la muestra y los electrones desviados son recogidos y proyectados sobre un pantalla para producir una imagen. Pregunta 1-Qu es la resolucin en un microscopio? Respuesta Es una propiedad que permite observar dos puntos adyacentes como puntos separados. 2-Por qu se producen las diferencias Porque las clulas absorben la luz en de contraste en la clula? diferentes grados con respecto al medio que los rodea. 3-Qu son los colorantes? Son compuestos orgnicos que tienen afinidad por determinados componentes celulares, que estn cargados con cationes que se combinan fuertemente con constituyentes celulares cargados negativamente. 4-A qu se deben las diferencias en la Se deben a diferencias en la estructura tincin de Gram en las bacterias? de la pared celular de las bacterias. 5-en que se basa la microscopia de Se basa en el hecho de que las clulas contraste de fase? poseen un ndice de refraccin diferente al medio y por tanto, desvan los rayos de la luz que las atraviesa. 6-Con que tipo de microorganismos se Con microorganismos que poseen emplea el uso del microscopio de sustancias fluorescentes naturales fluorescencia? como la clorofila.

7-Por qu se emplea la microscopia de interferencia diferencial? 8-En qu se basa la microscopia confocal de barrido con lser? 9-Qu permite la microscopia de fuerza atmica? 10-Cmo se denominan a las fotografas obtenidas por los microscopios electrnicos?

Por su capacidad de generar imgenes que ponen de manifiesto estructuras celulares internas. En un microscopio computarizado que acopla una fuente de luz lser a un microscopio ptico. Permite la observacin de muestras vivas e hidratadas. Micrografas electrnicas.