NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 5083
2002-09-18

GRASAS Y ACEITES ANIMALES Y VEGETALES. DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE ISMEROS TRANS DE CIDOS GRASOS EN GRASAS Y ACEITES VEGETALES. MTODO DE CROMATOGRAFA DE GASES

E:

ANIMAL AND VEGETABLE FATS AND OILS. DETERMINATION OF THE CONTENT OF TRANS FATTY ACID ISOMERS OF VEGETABLE FATS AND OILS- GAS CHROMATOGRAPHIC METHOD.

CORRESPONDENCIA:

esta norma es una adopcin idntica (IDT) por traduccin de la ISO/FDIS 15304:2001 determinacin de ismeros trans; grasa; alimentacin; grasa vegetal; grasa animal; aceite vegetal; aceite animal; grasas y aceites.

DESCRIPTORES:

I.C.S.: 67.200.10
Editada por el Instituto Colombiano de Normas Tcnicas y Certificacin (ICONTEC) Apartado 14237 Bogot, D.C. Tel. 6078888 Fax 2221435

Prohibida su reproduccin

Editada 2002-10-07

PRLOGO

El Instituto Colombiano de Normas Tcnicas y Certificacin, ICONTEC, es el organismo nacional de normalizacin, segn el Decreto 2269 de 1993. ICONTEC es una entidad de carcter privado, sin nimo de lucro, cuya Misin es fundamental para brindar soporte y desarrollo al productor y proteccin al consumidor. Colabora con el sector gubernamental y apoya al sector privado del pas, para lograr ventajas competitivas en los mercados interno y externo. La representacin de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalizacin Tcnica est garantizada por los Comits Tcnicos y el perodo de Consulta Pblica, este ltimo caracterizado por la participacin del pblico en general. La NTC 5083 fue ratificada por el Consejo Directivo del 2002-09-18. Esta norma est sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en todo momento a las necesidades y exigencias actuales. A continuacin se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a travs de su participacin en el Comit Tcnico 311501 Aceites y grasas vegetales y animales comestibles. ACEGRASAS S.A. ASINAL LTDA. CARULLA VIVERO S.A. COMESTIBLES RICOS FEDEPALMA FBRICA DE GRASAS Y PRODUCTOS QUMICOS S.A. GRASCO GRASAS S.A. LLOREDA S.A. SANTANDEREANA DE ACEITES SOCIEDAD INDUSTRIAL DE GRASAS VEGETALES UNILEVER ANDINA UNIVERSIDAD JORGE TADEO LOZANO

Adems de las anteriores, en Consulta Pblica el Proyecto se puso a consideracin de las siguientes empresas:

ACEITES Y GRASAS VEGETALES S.A. ASOCIACIN NACIONAL DE INDUSTRIALES- ANDI COMESTIBLES RICO COMPAA NACIONAL DE CHOCOLATES S.A. COMPAA NACIONAL DE LEVADURAS S.A. CORPORACIN COLOMBIA INTERNACIONAL DISA S.A. FABRICA DE ACEITES Y MARGARINAS DEL MAGDALENA

FABRICA DE GRASAS Y PRODUCTOS QUMICOS S.A. FABRICAS UNIDAS DE ACEITES Y GRASAS VEGETALES FIRMENICH S.A. INDUSTRIAS ALIMENTICIAS NOEL - ZENU S.A. INDUSTRIAS DEL MAZ S.A. INSTITUTO NACIONAL DE VIGILANCIA DE MEDICAMENTOS Y ALIMENTOS - INVIMA IVONNE BERNIER LABORATORIO LTDA. IBLAB LUCTA GRANCOLOMBIANA LTDA.

MERCADEO DE ALIMENTOS DE COLOMBIA S.A. MINISTERIO DE AGRICULTURA MINISTERIO DE DESARROLLO ECONMICO MINISTERIO DE SALUD NESTL DE COLOMBIA

NULAB LTDA SGS COLOMBIA S.A. SOCIEDAD INDUSTRIAL DE GRASAS VEGETALES SUPERINTENDENCIA DE INDUSTRIA Y COMERCIO UNIVERSIDAD INCCA DE COLOMBIA UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

ICONTEC cuenta con un Centro de Informacin que pone a disposicin de los interesados normas internacionales, regionales y nacionales. DIRECCIN DE NORMALIZACIN

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GRASAS Y ACEITES ANIMALES Y VEGETALES. DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE ISMEROS TRANS DE CIDOS GRASOS EN GRASAS Y ACEITES VEGETALES. MTODO DE CROMATOGRAFA DE GASES

1.

OBJETO

Esta norma especifica el mtodo de cromatografa de gases utilizando columnas capilares para determinar el contenido de los ismeros trans de los cidos grasos de los aceites y grasas vegetales. El mtodo est especialmente diseado para evaluar, mediante procedimiento de cromatografa de gases (CG), el nivel de ismeros trans formados durante la refinacin (a alta temperatura), o la hidrogenacin de aceites o grasas vegetales. El mtodo tambin se puede usar para determinar todos los otros cidos grasos; (Ejemplo: obtener la composicin total de los cidos grasos, mono-insaturados y poli-insaturados) de la misma muestra.
NOTA 1 El contenido de ismeros trans obtenido por este mtodo puede no concordar con el contenido de ismeros trans obtenido usando otros mtodos NOTA 2 Durante la refinacin (a alta temperatura) (desacidificacin y desodorizacin), slo se forman ismeros geomtricos de los cidos grasos mono y poli-insaturados; es decir el o los dobles enlaces permanecen en la misma posicin natural . Durante la hidrogenacin se forman ismeros tanto posicionales como geomtricos. NOTA 3 Con algunos ismeros cis y trans especficos, formados durante la hidrogenacin, es posible la coelusin. En esta forma se podra afectar la exactitud del resultado. Usualmente, el nivel de estos ismeros en aceites y grasas parcialmente hidrogenadas es insignificante.

2.

REFERENCIAS NORMATIVAS

Los siguientes documentos normativos referenciados son indispensables para la aplicacin de este documento normativo. Para referencias fechadas, se aplica nicamente la edicin citada. Para referencias no fechadas, se aplica la ltima edicin del documento normativo referenciado (incluida cualquier correccin). NTC 5033:2002, Grasas y aceites animales y vegetales. Preparacin de la muestra para el ensayo. (ISO 661:1989) NTC 4967:2001, Grasas y aceites animales y vegetales. Preparacin de esteres metlicos de cidos grasos. (ISO 5509:2000) 1

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3. TRMINOS Y DEFINICIONES

NTC 5083

Para el propsito de esta norma, las siguientes son las definiciones que aplican: 3.1 contenido de ismeros trans de cidos grasos (temperatura alta) en aceites y grasas refinados suma de C18:1 trans, C18:2 trans y C18:3 trans de steres metilados de cidos grasos, expresados cmo fraccin de masa de todos los steres metilados de cidos grasos. 3.2 contenido de ismeros trans de cidos grasos de aceites y grasas parcialmente hidrogenados suma de todos los dobles enlaces trans, contenidos en los steres metilados de cidos grasos, expresados como fraccin de masa de todos los steres metilados de cidos grasos.
NOTA El contenido de ismeros trans de cidos grasos, se expresa en porcentaje.

4.

PRINCIPIO

Los cidos grasos metilados de la muestra se separan en una columna capilar con una fase estacionaria de alta polaridad, de acuerdo a la longitud de su cadena hidrocarbonada, el grado de (in)saturacin, la geometra y posicin de los dobles enlaces. 5. REACTIVOS Y MATERIALES

Use solamente reactivos de grado analtico reconocidos, a menos de que se especifiquen otros. 5.1 GAS TRANSPORTADOR

Preferiblemente helio o hidrgeno, o nitrgeno, de calidad para cromatografa de gases con trampas adecuadas para la remocin de humedad y oxigeno. ADVERTENCIA Si se usa slo hidrgeno en las columnas capilares, se puede duplicar la velocidad del anlisis (en comparacin con helio) pero es peligroso. Existen dispositivos de seguridad disponibles y convenientes para ser colocados en el equipo. 5.2 Material de Referencia Certificado (MRC), BCR 162 (mezcla de soya y maz), Comunidad Europea - Oficina de Referencia de la Comunidad.
NOTA Pueden usarse otros estndares de calibracin de proveedores con reputacin conocida, tales como Supelco, Larodan, Nuchek y sigma. Posiblemente estndares diferentes sean necesarios para otros aceites hidrogenados (luricos , no luricos y de palma).

6.

EQUIPOS

Equipo normal de laboratorio y, en particular, el siguiente: 6.1 Cromatgrafo de gases, equipado con un sistema de inyeccin capilar (preferiblemente en modo SPLIT, con una tasa de divisin aproximada de 1:100) y detector de Ionizacin de llama (FID). 2

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6.2 Columna capilar, con fase estacionaria de alta polaridad (Ej.: CP - Sil 881), SP-23402), BPX-703) o fases de alta polaridad ciano-propilo, como SP-2380 SP-2560) las cuales pueden dar una resolucin similar entre varios de los ismeros geomtricos. EJEMPLO DE LAS DIMENSIONES: Pelcula CP - Sil 88, 50 m x 0, 25 mm i.d, 0,20 m Pelcula SP-2340, 60 m x 0,25 mm i.d. 0,20 m Pelcula BPX-70, 50 m x 0,22 mm i.d. 0,25 m El usuario deber definir las condiciones ptimas, siguiendo las instrucciones del numeral 10.3 (Vase el Anexo A). Estas clases de columnas y ejemplos de productos comerciales estn disponibles en el mercado. 7. MUESTREO

El muestreo no es parte de los mtodos especificados en esta norma. La NTC 217 (ISO 5555) [1], contiene el mtodo de muestreo recomendado. Es importante que el laboratorio reciba una muestra que sea realmente representativa y que no se haya daado o modificado durante el transporte o el almacenamiento. 8. PREPARACIN DE LA MUESTRA DE ENSAYO

Se prepara la muestra de la ensayo de acuerdo con la NTC 5033, Grasas y aceites animales y vegetales. Preparacin de la muestra para ensayo. Se debe homogenizar la muestra antes de tomar la porcin de ensayo, igualmente las muestras slidas se deben fundir para asegurar una muestra apropiada. 9. PREPARACIN DE LOS STERES METLICOS

Se preparan los steres metlicos de los cidos grasos de la muestra de ensayo de acuerdo con la NTC 4967, Grasas y aceites animales y vegetales. Preparacin de esteres metlicos de cidos grasos.
NOTA Tambin se pueden usar los mtodos especificados en el Mtodo Oficial Ce 2-66 [2] de AOCS IUPAC 2.301 [3].

Para la determinacin de los ismeros trans, en aceite de oliva virgen, es recomendable el mtodo de la trans esterificacin de acuerdo con la NTC 4967 (ISO 5509), para evitar algn calentamiento de las muestras.
1)

Se puede obtener en Chrompack, Middleburg, Pases Bajos. Se puede obtener en Supelco, Bellafonte, PA, USA. Se puede obtener en SGE , Inc., Austin, Texas, USA.

2)

3)

Esta informacin se proporciona para conveniencia de los usuarios de esta norma y no constituye un aval de estos productos por parte de ICONTEC

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10. 10.1 PROCEDIMIENTO GENERALIDADES

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Junto con el anlisis de la muestra de ensayo se analiza una muestra blanco de n-heptano y una muestra de referencia MRC 5.2 10.2 CONDICIONES DE LA CG

10.2.1 Se ajusta el cromatgrafo de gases en una de las combinaciones de temperatura y columna recomendadas, descritas en la Tabla 1. Se mide la velocidad lineal del gas transportador, como se indica en la tabla, con una tasa de divisin de aproximadamente 1:100. Vase en el Anexo B los cromatogramas tpicos obtenidos con las condiciones indicadas en la Tabla 1.
Tabla 1. Condiciones de CG recomendadas para la identificacin y cuantificacin de ismeros trans en muestras de aceite vegetal refinado e hidrogenado Parmetro Fase estacionaria Condiciones de temperatura C Presin en la Cabeza de la columna kPa Velocidad lineal del gas de arrastrre (helio), cm/s SP 2340 Isotermica 192 125 15 Condiciones optimas propuestas CP
TM

SiL 88

BPX 70 Isotrmica 198 155 17

Isotermica 175 130 19

10.2.2 La temperatura del puerto de inyeccin y del detector debe ser de 250 C. 10.3 VERIFICACIN DEL COMPORTAMIENTO

Se inyectan de 0,5 l a 1,0 l de los steres metlicos (en una concentracin aproximada de 7 mg/ml en n-heptano) de la muestra de ensayo en el cromatgrafo de gases. Se compara el resultado de una clase de muestra similar con el ejemplo de los cromatogramas (vase el Anexo B). Si la separacin obtenida no es idntica al ejemplo de los cromatogramas, es posible que sea necesario cambiar levemente la temperatura del horno. Se aumenta o se disminuye la temperatura del horno por pasos subsecuentes de 1 C hasta obtener buena separacin. Estas pequeas modificaciones pueden ser necesarias para ajustar diferencias de lote entre columnas y el control de temperatura del instrumento y generalmente, estn dentro de un rango de slo unos pocos grados (ms o menos) del valor indicado. El pico C20:1 cis eluir primero, con respecto del cido linolnico C18:3 9cis, 12cis, 15cis (ccc) si se aumenta la temperatura del horno [4].
NOTA Las propiedades de la fase estacionaria BPX-70 son algo diferentes, dando como resultado la elucin del pico C20:1 cis despus del pico C18:3 9cis, 12cis, 15cis, en estas condiciones (comparar el Anexo A).

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Si se ajusta adecuadamente el sistema CG, la separacin obtenida deber permitir la identificacin de la pequea cantidad del ismero C18:1 11cis al lado del pico C18:1 9cis en aceites refinados (a alta temperatura); Ejemplo: aceite de soya. Los dos ismeros C18:1 cis debern estar claramente separados (vase el Anexo B).
NOTA Los aceites marinos hidrogenados pueden dar lugar a un rango de ismeros trans muchos mas amplio, lo cual hace que la identificacin y la cuantificacin sea mas difcil.

El ismero natural C20:1 cis deber estar colocado exactamente en el centro del ismero C18:3: trans (tcc) y el pico C18:3 ccc (cido linolnico) en los aceites refinados (a alta temperatura). Si la separacin es suficiente para esta clase de anlisis, en los aceites refinados (a alta temperatura) deber observarse un pequeo pico del ismero C18:1 trans, dos ismeros C18:2 aproximadamente del mismo tamao y cuatro ismeros C18:3 trans (algunas veces cinco). En los aceites y grasas parcialmente hidrogenadas, la separacin de los ismeros C18:1 13 trans y el C18:1 9cis deber ser visible en el cromatograma. Esto es necesario para una divisin exacta del pico entre cis y trans (ver el Anexo B ). El ismero C18:1 13 trans siempre eluye con el isomero C18:1 14 trans. por esta razn el pico para estos dos ismeros podr ser identificado como C18:1 (13 +14) trans. 10.4 IDENTIFICACIN DEL PICO

En los aceites y grasas refinadas (a alta temperatura), la cantidad de ismeros trans es limitada, puesto que slo se forman ismeros geomtricos con los mismos enlaces en la misma posicin natural. Estos ismeros especficos son para la clase C18 de cidos grasos: C18:1 9trans, C18:2 9cis12trans y C18:2 9trans12cis y para los ismeros C18:3 el tct, cct ctc tcc 9,12,15 (en algunas muestras los ismeros C18:2 9trans12tras y C18:3 ttc tambin se encuentran en cantidades muy pequeas). En los aceites y grasas parcialmente hidrogenadas, se identifican los ismeros que contienen dobles enlaces trans, utilizando el concepto de longitud equivalente de cadena (ECL) [5, 6]. Para la identificacin exacta del pico con este sistema, es necesario determinar los valores ECL despus de calibrar adecuadamente con estndares de ismeros cis y trans de cidos grasos disponibles.4) (Vase tambin el Anexo C). La primera muestra de una serie de anlisis, es siempre un blanco (n-heptano). No se deben detectar picos al correr el blanco. Esta prueba se repite cada diez muestras. Por cada serie de anlisis (Ejemplo: metilacin de un lote) se analiza no menos de una muestra de referencia (vase el numeral 5.2), para verificar el comportamiento de la metilacin y del anlisis CG. los cidos grasos metilados del material de referencia (vase el numeral 5.2) son inyectados despus de cada serie de diez muestras. 11. 11.1 CLCULOS GENERALIDADES

Se calcula la fraccin relativa del rea de cada componente, determinando el rea corregida del respectivo pico, con respecto a la suma de las reas corregidas de todos los picos. La correccin es necesaria para compensar la respuesta FID de cada componente.
4)

Los estndares de ismeros de cidos grasos se pueden obtener de muchos proveedores de qumicos (Ejemplo: Nu-Check Prep Inc., U.S.; Sigma, U.S. Larodan, Suecia).

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Para determinar los factores de correccin individuales use el material de referencia BCR 162 (vase el numeral 5.2). 11.2 CLCULO DEL FACTOR DE RESPUESTA FID

Se calcula el factor de respuesta FID de cada componente x, con la siguiente ecuacin:

Fx =

(n x 1)Ac

Mx

de donde Fx Mx nx Ac es el factor de respuesta FID del componente x; es la masa molecular relativa del componente x; es el nmero de tomos de carbono del cido graso metilado del componente x; es la masa atmica relativa del carbono (Ac = 12,01)

En este caso el calculo obtenido corresponde a un factor de respuesta terico 11.3 CLCULO DEL FACTOR DE CORRECCIN FID

Se calcula el factor de correccin FID de cada componente, con la siguiente ecuacin:

fx =

Fx Fr

de donde fx Fx Fr es el factor de correccin del componente x; es el factor de respuesta FID del componente x; es el factor de respuesta FID para C16:0 (Fr = 1,407).

El factor de respuesta FID para C16:0 (Fr = 1,407) se toma como factor de referencia (fx = 1,00). Todos los dems factores de respuesta FID corregidos que se usen para el clculo se relacionan con este valor. Por ejemplo: el factor de respuesta corregido para C10:0 ser 1,10. Vase la lista de factores FID en el Anexo D. 11.4 CLCULO DE LA FRACCIN DE MASA RELATIVA

Se calcula la fraccin de masa relativa para cada componente, con la siguiente ecuacin:

wx =

Ax x f x x 100 % At

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de donde wx Ax At fx 11.5

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es la fraccin de masa relativa del componente x, en porcentaje por rea de pico; es el rea de pico que corresponde al componente x, en unidades de rea; es la suma de las reas corregidas de todos los picos, excluyendo el pico del solvente, en unidades de rea; es el factor de correccin del componente x.

CLCULO DEL CONTENIDO DE ISMEROS TRANS DE LOS CIDOS GRASOS

11.5.1 Aceites y grasas refinadas (a alta temperatura) Se calcula el contenido de ismeros trans de los cidos grasos de grasas y aceites refinados (a alta temperatura), como la suma de las fracciones relativas de esteres metlicos de los cidos grasos C18:1 trans, C18:2 trans y C18:3 trans (el mximo nmero posible de picos que puedan formarse son: C18:1 trans (1pico), C18:2 trans (2 picos) y C18:3 trans (4 picos) )y se reporta el resultado al 0,01 % ms cercano (fraccin relativa de rea), por reas de pico. 11.5.2 Aceites y grasas parcialmente hidrogenadas Se calcula el contenido de ismeros trans de los aceites y grasas parcialmente hidrogenadas, como la suma todos los componentes que contengan doble unin, con respecto de todos los componentes. Se reporta el resultado al 0,1 % ms cercano, por reas de pico.

12. 12.1

PRECISIN ENSAYOS ENTRE LABORATORIOS

Los detalles de las pruebas interlaboratorios para precisin del mtodo estn resumidos en el Anexo D. Es posible que los valores derivados de estos ensayos entre laboratorios no sean aplicables a rangos de concentracin y matrices distintos de las indicadas.
NOTA Algunos aceites parcialmente hidrogenados pueden tener niveles de cidos grasos trans por fuera de los rangos obtenidos en las pruebas interlaboratorios.

12.2

REPETIBILIDAD

La diferencia absoluta entre los resultados de dos ensayos individuales, independientes, obtenidos con el mismo mtodo y con idntico material de ensayo, en el mismo laboratorio, por el mismo operador, con el mismo equipo, en un intervalo de tiempo corto, no superar, en ms de 5 % de los casos, el valor r indicado o derivado de la Tabla 2. 12.3 REPRODUCIBILIDAD

La diferencia absoluta entre los resultados de dos ensayos individuales, obtenidos con el mismo mtodo y con idntico material de ensayo, en distintos laboratorios, por diferentes operadores, con distintos equipos, no superar, en ms de 5 % de los casos, el valor de R indicado o derivado de la Tabla 2.

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Tabla 2. Lmite de repetibilidad (r) y lmite de reproducibilidad (R) Muestra Aceite de semilla de girasol Aceite de soya Aceite de colza Contenido promedio de cidos grasos trans 0,34 0,78 1,09 (r) % (fraccin de masa) 0,08 0,13 0,13 R % (fraccin de masa) 0,21 0,31 0,40

12.4

REPORTE DEL ENSAYO

El reporte del ensayo deber especificar:

toda la informacin necesaria para la completa identificacin de la muestra; el mtodo de muestreo utilizado, si fuera conocido; el mtodo de ensayo utilizado, con referencia a esta norma todos los detalles operativos no especificados en esta norma, o considerados opcionales, as como los detalles de cualquier incidente ocurrido al ensayar el mtodo, lo cual pudiera afectar el o los resultados de el ensayo; los resultados obtenidos con el ensayo; si se ha verificado la repetibilidad, los resultados definitivos citados.

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ANEXO A (Informativo)

OPTIMAS CONDICIONES

Ejemplos de cromatogramas tpicos obtenidos en las condiciones recomendadas Vase las Figuras A.1 a A.3

C18:0

9c 10c 11c >12c

Identificacin del pico 1 trans monoenico 2 cis - monoenico Figura A.1. Condiciones ptimas para una columna BPX-70, a 198 C (isotrmica) muestra BO35

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< 111

C18:0 12 t

2
13 t

9c 10 c 11 c 12 c

>14 t

13 c >14 c

Identificacin del pico 1 trans monoenico 2 cis - monoenico

Figura A.2. Condiciones Optimas para una columna de CP-Sil 88, a 175 C (isotrmica) muestra BO35

10

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C18:0

9c/10c

11c 12c >13c

Identificacin del pico 1 trans monoenico 2 cis - monoenico

Figura A.3. Condiciones ptimas para una columna SP-2340, a 192 C (isotermica) muestra BO35

11

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ANEXO B (Informativo)

EJEMPLOS DE CROMATOGRAMAS TPICOS OBTENIDOS BAJO CONDICIONES RECOMENDADAS

Vase las Figuras B.1. a B.5.

C18:1 9 cis

C18:1 11 cis

C18:0

C18:2 9 cis, 12 cis

C18:1 12 cis

C18:1 trans

C18:1 cis

C18:2 trans

C18:2 cis

C18:3 trans

NOTA Se obtuvo con una columna CP-Sil 88 de 50 m x 0.25 mm x 0,20 m (Chrompack) a 175 C (isotrmica). Las reas de retencin de los ismeros cis y trans de los cidos grasos estn indicadas en el cromatograma.

Figura B.1. Cromatograma de steres metlicos de una muestra de aceite de soya parcialmente hidrogenado

12

C20:1 cis

C20:0

C18:3 9 cis, 12 cis, 15 cis

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C18:0

C18:1 12 cis

C18:1 12 cis

C18:1 trans C18:1 cis

C18:2 trans

C18:2 cis

C18:3 trans

NOTA Se obtuvo con una columna SP-2340 de 60 m x 0,25 mm x 0,20 m (Supelco) a 190 C (isotrmica). El cromatograma muestra las reas de retencin de los ismeros cis y trans de los cidos grasos

Figura B.2. Cromatograma de steres metlicos de una muestra de aceite de soya parcialmente hidrogenado

13

C20:1 cis

C20:0

C18:3 9 cis, 12 cis, 15 cis

C18:1 11 cis

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C18:1 9 cis

C18:0

C18:1 12 cis

C18:2 9 cis, 12 cis

C18:1 9 cis, 12 cis, 15 cis

C18:1 11 cis

C18:1 trans C18:1 cis

C18:2 trans

C18:2 cis

C18:3 trans

NOTA Se obtuvo con una columna BPX-70 de 50 m x 0,22 mm x 0,25 m (SGE) a 198 C (isotrmica). El cromatograma muestra las reas de retencin de los ismeros cis y trans de los cidos grasos

Figura B.3. Cromatograma de steres metlicos de una muestra de aceite de soya parcialmente hidrogenado

14

C20:1 1 cis

C20:0

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C18:2 9 cis, 12 cis

C18:1 9 cis

C18:1 11 cis

C18:2 trans isomers

C18:3 trans isomers

C18:0

C18:1 trans

NOTA Se obtuvo con una columna CP-Sil 88 de 50 m x 0,25 mm x 0,20 m (Chrompack) a 175 C (isotrmica). Los ismeros trans de los cidos grasos estn sombreados.

Figura B.4. Cromatograma de steres metlicos de una muestra de aceite de colza refinado fsicamente

15

C20:0

C20:1

C18:3 9 cis, 12 cis, 15 cis

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C18:2 9 cis, 12 cis

C18:1 9 cis

C18:1 11 cis

C18:2 trans isomers

C18:3 trans isomers

C18:0

C18:3 9 cis, 12 cis, 15 cis

C18:1 trans

NOTA Se obtuvo con una columna BPX-70 de 50 m x 0,22 mm x 0,25 m (SGE) a 198 C (isotrmica). Los ismeros trans de los cidos grasos estn sombreados.

Figura B.5. Cromatograma de steres metlicos de una muestra de aceite de colza refinado a alta temperatura

16

C20:0

C20:1

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ANEXO C (Informativo)

VALORES DE LONGITUD EQUIVALENTE DE CADENA (ECL)

Ismero 18 6 cis 7 cis 9 cis 10 cis 11 cis 12 cis 13 cis 15 cis C18:1

SP 2340 192 C

Fase estacionaria y Temperatura CP-Sil 88 175 C 18,58 18,58 18,66 18,74 18,80 18,87 19,00

BPX-70 198 C

18,46 18,53

6 trans 7trans 9 trans 10 trans 11 trans 12 trans 13 trans 15 trans 9c12c 19,62 9c12t 19,40 C18:2 9t12c 19,48 9t12t 19,26 12c15c 6c9c12c 9t12t15t 9t12c15t 20,23 C18:3 9c12c15t 20,35 9c12t15c 9t12c15c 20,57 9c12c15c 20,68 NOTA 1 Determinado en Unilever Research Vlaardingen para los ismeros de tres altas fases polares estacionarias en las condiciones ptimas propuestas. NOTA 2 Los datos de literatura se encuentran en las referencias [5] y [6].

18,68 18,76 18,49

18,41 18,42 18,46 18,28 18,49 18,52 18,57 18,61 18,66 19,63 19,14 19,40 18,94 19,49 19,02 19,20 18,69 19,92 20,28 20,04 20,26 19,42 20,36 19,61 20,53 19,51 20,56 19,82 20,67 19,93 cidos grasos ms importantes, en las

17

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ANEXO D (Informativo)

FACTORES DE RESPUESTA FID Y FACTORES DE CORRECCIN FID

Esteres metilados a (nx 1) 8x) de cidos grasos Mx a No de carbono 4:0 102,13 4 6:0 130,19 6 8:0 158,24 8 9:0 172,27 9 10:0 186,30 10 11:0 200,32 11 12:0 214,35 12 13:0 228,37 13 14:0 242,40 14 15:0 256,42 15 16:0 270,46 16 17:0 284,49 17 18:0 298,52 18 19:0 312,52 19 20:0 326,57 20 21:0 340,57 21 22:0 354,62 22 23:0 368,62 23 24:0 382,68 34 a Mx es la masa molecular relativa del componente x;
nx

Fx

fx

21,126 1,807 1,647 1,594 1,551 1,516 1,487 1,463 1,442 1,423 1,407 1,393 1,381 1,370 1,360 1,350 1,342 1,334 1,328

1,51 1,28 1,17 1,13 1,10 1,08 1,06 1,04 1,02 1,01 1,00(referencia) 0,99 0,98 0,97 0,97 0,96 0,95 0,95 0,94

es la cantidad de tomos de carbono de los cidos grasos metlicos del componente x; es el factor FID del componente x; es el factor de correccin del componente x.

Fx fx

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ANEXO E (Informativo)

RESULTADOS DE LAS ENSAYOS ENTRE LABORATORIOS

En 1995 se estableci la precisin del mtodo con un ensayo entre laboratorios, conducida de acuerdo con las normas ISO 5725-1, ISO 5725-2 (7 Y 8) y NEN 6303 (9). Participaron 60 Laboratorios. En este ensayo se aceptaron los resultados de 38 laboratorios. Se han investigado seis muestras (ciegas) con duplicados de aceite de semilla de girasol, de soya y de colza. (vase la Tabla E.1) Se public un reporte del ensayo (ver referencia [10]).
NOTA Algunas grasas parcialmente hidrogenadas pueden tener niveles de cidos grasos trans en exceso del rango obtenido de la prueba interlaboratorio.

Tabla E.1. Resultados de pruebas interlaboratorio Muestra Parmetro Nmero de laboratorios retenidos luego de eliminar los datos anormales Nmero de observaciones retenidas luego de eliminar los datos anormales Promedio del contenido de ismeros trans de los cidos grasos, % (por masa) Repetibilidad de la desviacin estndar (Sr), % (por masa) Repetibilidad relativa de la desviacin estndar , % Lmite de repetibilidad (r) r = 2,8 Sr , % (por masa) Reporducibilidad de la desviacin estndar (Sr), % (por masa) Reproducibilidad relativa de la desviacin estndar, % Lmite de reproducibilidad (R) R= 2,8 Sr, % (por masa) Aceite de semilla de girasol 38 144 0,34 0,029 8,64 0,08 0,077 22,64 0,21 Aceite de soya 38 147 0,78 0,045 5,85 0,13 0,109 14,07 0,31 Aceite de colza 37 143 1,09 0,047 4,34 0,13 0,143 13,14 0,40

En 1999, una investigacin de Unilever Vlaadingen en cooperacin con el instituto para estudios interlaboratorios, organizaron un estudio interlaboratorio internacional, para la determinacin de ismeros trans de cidos grasos, en varios tipos de aceites comestibles. En este interlaboratorio participaron 62 laboratorios en 29 pases diferentes: 57 laboratorios enviaron sus resultados. De acuerdo a la ISO 5725-2 , se uso el mtodo de nivel uniforme, para calcular los lmites de repetibilidad y reproducibilidad. Se investigaron seis muestras por duplicado para los aceites de semilla de girasol, el aceite de colza y el aceite de oliva (vanse las Tablas del Anexo E).

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Tabla E.2. Resultados de pruebas interlaboratorio en aceite de semillas de girasol Aceite de semillas de girasol Total de trans trans trans ismeros C18:1 C18:1 C18:1 trans 51 612 0,154 0,009 5,80 0,025 0,030 19,25 0,083 30 360 0,033 0,007 21,65 0,020 0,013 38,96 0,036 50 600 0,205 0,015 7,49 0,043 0,048 23,17 0,133

Parmetro

Nmero de laboratorios retenidos luego de eliminar los datos 39 anormales Nmero de observaciones retenidas luego de eliminar los 468 datos anormales Promedio del contenido de ismeros trans de los cidos 0,029 grasos, % (por masa) Repetibilidad de la desviacin estndar (Sr), % (por masa) 0,005 Repetibilidad relativa de la desviacin estndar , % Lmite de repetibilidad (r) r = 2,8 Sr , % (por masa) Reporducibilidad de la desviacin estndar (Sr), % (por masa) Reproducibilidad relativa de la desviacin estndar, % Lmite de reproducibilidad (R) R= 2,8 Sr, % (por masa) 18,47 0,015 0,014 46,80 0,038

Tabla E.3. Resultados de pruebas interlaboratorio en aceite de colza Aceite de semillas de colza Total de trans trans trans ismeros C18:1 C18:1 C18:1 trans 48 576 0,074 0,012 15,93 0,033 0,020 27,03 0,056 47 564 0,406 0,015 3,69 0,042 0,058 14,16 0,161 47 564 0,521 0,027 5,21 0,076 0,081 15,63 0,228

Parmetro

Nmero de laboratorios retenidos luego de eliminar los datos 33 anormales Nmero de observaciones retenidas luego de eliminar los 396 datos anormales Promedio del contenido de ismeros trans de los cidos 0,032 grasos, % (por masa) Repetibilidad de la desviacin estndar (Sr), % (por masa) 0,005 Repetibilidad relativa de la desviacin estndar , % Lmite de repetibilidad (r) r = 2,8 Sr , % (por masa) Reporducibilidad de la desviacin estndar (Sr), % (por masa) Reproducibilidad relativa de la desviacin estndar, % Lmite de reproducibilidad (R) R= 2,8 Sr, % (por masa) 15,63 0,014 0,009 29,02 0,026

Tabla E.4. Resultados de pruebas interlaboratorio en aceite de oliva Aceite de semillas de oliva Total de trans trans trans ismeros C18:1 C18:1 C18:1 trans 36 432 0,021 0,007 34,01 0,020 0,011 51,02 0,030 22 264 0,016 0,005 29,02 0,013 0,009 53,57 0,024 40 480 0,055 0,012 22,08 0,034 0,030 54,55 0,084

Parmetro

Nmero de laboratorios retenidos luego de eliminar los datos 31 anormales Nmero de observaciones retenidas luego de eliminar los 372 datos anormales Promedio del contenido de ismeros trans de los cidos 0,023 grasos, % (por masa) Repetibilidad de la desviacin estndar (Sr), % (por masa) 0,005 Repetibilidad relativa de la desviacin estndar , % Lmite de repetibilidad (r) r = 2,8 Sr , % (por masa) Reporducibilidad de la desviacin estndar (Sr), % (por masa) Reproducibilidad relativa de la desviacin estndar, % Lmite de reproducibilidad (R) R= 2,8 Sr, % (por masa) 23,29 0,015 0,009 40,37 0,026

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BIBLIOGRAFA

[1]

NTC 217 Grasas y aceites animales y vegetales. Muestreo. (ISO 5555, Animal and Vegetatble Fats and Oils, -Sampling) AOCS Oficial Method Ce 2-66: Preparation of Methyl Esters of Long Chain Fatty Acids IUPAC 2 :301: Preparation of the Fatty Acid Methyl Esters. Duchateadu G.S.M.J.E., van oosten H.J. and VASCONCELLOS M.A. Analysis of Cis and Trans Fatty Acid Isomers with Capilary GLC in Hydrogenated and Refined Vegetable Oils. J.Am. Oil Chem. KSoc., 73, 1996, pp 275 282 SCHOLFIELD C.R. Gas Chromatographic Equivalent Chain Lengths of Fatty Acid Methyl Esters on a Silar 10c Glass Capillary Column. J. Am. Oil Chem. Soc., 58,1981,pp 662-663 RATNAYAKE W.M.N. and PELLETIER G. Positional and Geometrical Isomers of Linoleic Acid In Partially Hydrogenated Oils. J. Am. Oil Chem. Soc 69, 1992, pp 95-105 ISO 5725 1 Accuracy (Trueness and Precision) of Measurement Methods and Results Part 1. General Principles and Definitions ISO 5725 2 Accuracy (Trueness and Precision) of Measurement Methods and Results Part 2. Basic Method for Detemination of Repeatability and Reproducibility of Standard Measurement Method NEN 6303, Vegetable and Animaloils and Fats Determination of Repeatability and Reproducibility of Methods of Analysis by Interlaboratory Tests BRUGGEN p.c. VAN, DUCHATEAU G.S.M.J.E. , Mooren, M.M.W. and OOSTEN H.J. Van. Precisiion of Low Tranas Fattyacid Level Dertermination in Refined Oils: Results of a Collaborative Capillary Gas Liquid Chromatography Study. J.Am. Oil Chem. Soc., 75 (4), pp. 483-488

[2] [3] [4]

[5]

[6]

[7]

[8]

[9]

[10]

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DOCUMENTO DE REFERENCIA

NTC 5083

ISO/FDIS 15304:2001, Animal and Vegetable Fats and Oils. Determination of the Content of Trans Fatty Acid Isomers of Vegetable Fats and Oils- Gas Chromatographic Method.

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