INS Parasitos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO PARA EL DIAGNSTICO DE LOS PARSITOS INTESTINALES DEL HOMBRE
Serie de Normas Tcnicas N 37 Lima - 2003
Serie de Normas Tcnicas N 37 Lima - 2003
MINISTERIO DE SALUD Ministro Dr. Fernando Carbone Campoverde Viceministro Econ. Carlos Rodrguez Cervantes INSTITUTO NACIONAL DE SALUD Jefe Dr. Luis Fernando Llanos Zavalaga Subjefe Dra. Ada Cecilia Palacios Ramrez Centro Nacional de Salud Pblica Dra. Susana Zurita Macalup Directora General Centro Nacional de Alimentacin y Nutricin Dr. Napolen Chvez Villanueva Director General Centro Nacional de Control de Calidad Dra. Rosa Guevara Ormeo Directora General Centro Nacional de Produccin de Biolgicos Q. F. Ricardo Valera Snchez Director General
Subcomit Editor Instituto Nacional de Salud Presidente Dra. Ada Palacios Ramrez Secretario Tcnico Dr. Csar Cabezas Snchez
Miembros Dr. Jorge Alarcn Villaverde Q.F. Zulema Arvalo Chong Dr. Jorge Barnaby Rodrguez Dr. Zuo Burstein Alva Lic. Ivn Gmez-Snchez Prieto Dra. Ivonne Guerrero Alva Dr. Alfredo Guilln Oneeglio Dr. Csar Nquira Velarde Dr. Enrique Prez Ramos Lic. Margarita Rodrguez Gutarra Dr. Vctor Surez Moreno Dr. Jorge Zegarra Berndt Editor Dr. Leonid Lecca Garca
Portada: Frontis del local central del Instituto Nacional de Salud.
MPR-CNSP-015
Instituto Nacional de Salud
Manual de procedimientos de laboratorio para el diagnstico de los parsitos intestinales del hombre
ELABORACIN: Mara Beltrn Fabin de Estrada Biloga Laboratorio de Enteroparsitos Divisin de Parasitologa Centro Nacional de Salud Pblica Instituto Nacional de Salud Ral Tello Casanova Mdico, Doctor en Medicina Ex miembro del Laboratorio de Enteroparsitos Divisin de Parasitologa Centro Nacional de Salud Pblica Instituto Nacional de Salud Csar Nquira Velarde Mdico, Doctor en Medicina Divisin de Parasitologa Centro Nacional de Salud Pblica Instituto Nacional de Salud
MPR-CNSP-015 I Instituto Nacional de Salud
Colaboradores: Eduardo Ayala Sulca Bilogo Laboratorio de Zoonosis Divisin de Parasitologa Centro Nacional de Salud Pblica Instituto Nacional de Salud Rosalina Reyes Bocanegra Tecnlogo Medico Laboratorio de Zoonosis Divisin de Parasitologa Centro Nacional de Salud Pblica Instituto Nacional de Salud Sonia Medina Alvarez Tcnico de Laboratorio Laboratorio de Zoonosis Divisin de Parasitologa hecha por el Centro de Documentacin e Informacin del Catalogacin Centro Nacional de Salud Pblica Instituto Nacional de Salud Beltrn Fabin de Estrada, Mara ; Tello Casanova, Ral ; Nquira Velarde, Csar Manual de procedimientos de laboratorio para el diagnstico de los parsitos intestinales del hombre / Elaborado por Mara Beltrn Fabin de Estrada ; Ral Tello Casanova y Csar Nquira Velarde. Lima : Ministerio de Salud, Instituto Nacional de Salud, 2003. 90 p. : 30 cm. (Serie de Normas Tcnicas; 37)
INS
1. PARASITOSIS INTESTINALES /diagnstico 2. TECNICAS Y PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO /normas I. Beltrn Fabin de Estrada, Mara II. Tello Casanova, Ral III. Nquira Velarde, Csar IV. Instituto Nacional de Salud (Per) V. Per. Ministerio de Salud
ISBN 9972 857 26 3 (O.C.) ISBN 9972 857 35 2 (N37) ISSN 1607 4904 Hecho el Depsito Legal N 1501152003-1288 Ministerio de Salud, 2003 Av. Salaverry cuadra 8 s/n, Jess Mara, Lima, Per Telf.: 431-0410 Instituto Nacional de Salud, 2003 Cpac Yupanqui 1400, Jess Mara, Lima, Per Telf.: 471-9920 Fax 471-0179 e-mail: postmaster@ins.gob.pe Pgina Web: www.ins.gob.pe Publicacin aprobada con R.J. N 171-2003-J-OPD/INS Se autoriza su reproduccin total o parcial siempre y cuando se cite la fuente.
MPR-CNSP-015
II
CONTENIDO INTRODUCCIN SECCIN 1: 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 SECCIN 2: 2.1 2.2 SECCIN 3: 3.1 3.2 SECCIN 4: 4.1 4.2 4.3 4.4

V 1 1 1 1 1 2 5 5 5 6 6 7 8 8 8 9 9
GENERALIDADES Objetivo Campo de aplicacin Responsabilidades Documentos de referencia Definiciones y abreviaturas

MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD Responsabilidades Campo de aplicacin

OBTENCIN DE LA MUESTRA Condiciones generales Muestra para el examen parasitolgico

ENVO Y TRANSPORTE DE LA MUESTRA Objetivo Condiciones especficas Procedimiento Rechazo de una muestra

SECCIN 5: 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 SECCIN 6: 6.1 6.2 SECCIN 7: 7.1 7.2 7.3
MPR-CNSP-015
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO PARA EL DIAGNSTICO PARSITOLGICO - HECES Examen directo macroscpico Examen directo microscpico Mtodos de concentracin Mtodo cuantitativo de Kato - Katz (anlisis cuantitativo = hpg) Mtodos de coloracin para protozoarios Mtodos de coloracin para helmintos Fijadores y/o conservadores

10 10 11 12 23 26 34 37 42 42 44 48 48 49 50
CULTIVOS PARASITOLGICOS Medios de cultivo para protozoos Mtodos de desarrollo para helmintos

EXAMEN DE SECRECIONES Y/O FLUIDOS Esputo Aspirados, secreciones o jugo duodenal Secrecin, fluido y contenido intestinal

III
SECCIN 8: 8.1 8.2 8.3 8.4 8.5 SECCIN 9: 9.1 9.2 SECCIN 10: 10.1 10.2 10.3 10.4 BIBLIOGRAFA ANEXOS ANEXO A: ANEXO B: ANEXO C: ANEXO D:
DIAGNSTICO DE Enterobius vermicularis POR EL MTODO DE GRAHAM (CINTA ADHESIVA TRANSPARENTE) Fundamento Materiales Procedimiento Observacin Resultado

51 51 51 51 51 51 53 53 53 54 54 54 54 55 56
EXAMEN DE BIOPSIAS Biopsias del tubo digestivo Recomendaciones

RESULTADOS Generalidades Resultado positivo Resultado negativo Formato para entrega de resultados

PRINCIPALES PARSITOS INTESTINALES DEL HOMBRE ALGORITMOS PARA EL EXAMEN PARASITOLGICO PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES

57 63 66
CLAVES DE IDENTIFICACIN DE LOS PROTOZOARIOS (AMEBAS Y FLAGELADOS) Y HELMINTOS

73 78
ANEXO E: ANEXO F:
ELEMENTOS QUE SE PUEDEN CONFUNDIR CON PARSITOS INTESTINALES
REGISTRO DE LOS PARSITOS INTESTINALES EN EL LABORATORIO POR MES Y POR AO

82 85
ANEXO G: ANEXO H:
FICHA PARA EL ESTUDIO DEL CULTIVO DE Entamoela histolytica (cepa)
PARSITOS NO INTESTINALES: Paragonimus y Fasciola (Distomatosis pulmonar y heptica)

86 89
ANEXO I:
MICROMETRA
MPR-CNSP-015
IV
INTRODUCCIN
Dentro de los problemas de salud pblica que el pas debe enfrentar, una en especial ha elevado su tasa de prevalencia convirtindose en una grave dificultad en sectores de menores recursos, se trata del parasitismo intestinal, problema que agrava ms an la ya golpeada salud de la poblacin. La presencia de factores desfavorables para la salud de la comunidad como el fecalismo, el deficiente saneamiento ambiental, la pobreza y el bajo nivel educativo, permiten la presencia y expansin del parasitismo intestinal, preferentemente en el grupo etreo de menor edad. Los parsitos intestinales. son protozoos o helmintos que en sus estadios evolutivos pueden encontrarse en las heces, secreciones, fluidos y frotis perianal de las personas. Estos parsitos afectan el desarrollo intelectual y nutricional de esta poblacin convirtindose en otro factor en contra de su economa. Para el estudio de las parasitosis intestinales existe la necesidad de contar con un manual para el diagnstico oportuno y preciso de estas infecciones, el cual nos permita tomar las acciones correctivas inmediatas ya sea de tratarniento con medicacin adecuada o capacitacin en prevencin e higiene. El Instituto Nacional de Salud, a travs de la Divisin de Parasitologia, ha elaborado el presente manual con la finalidad de brindar una herramienta til en el proceso de acondicionamiento de los procedimientos de laboratorio. El "Manual de Procedimientos para el Diagnstico de Laboratorio de los parsitos Intestinales del Hombre" elaborado por el Laboratorio de Enteroparsitos del Centro Nacional de Salud Pblica, es una compilacin de los mtodos ms usados y tiles para el diagnstico de las parasitosis intestinales, que pueden realizarse en los laboratorios de la Red Nacional de Laboratorios en Salud Pblica del pas, as como en aquellos laboratorios con infraestructura, equipos e instrumental mnimos. Este manual detalla los procedimientos ms apropiados para el diagnstico de los enteroparsitos descritos en nuestro medio y se espera que sea una ayuda inmediata y sencilla para el personal tcnico y profesional de los laboratorios locales, intermedios y regionales de la Red Nacional de Laboratorios en Salud Pblica del pas.
MPR-CNSP-015
SECCIN 1 GENERALIDADES 1.1 OBJETIVO Establecer los procedimientos normativos para realizar el diagnstico parasitolgico de las infecciones y/o enfermedades producidas por los parsitos intestinales. 1.2 CAMPO DE APLICACIN Se aplica en laboratorios de establecimientos de salud del sistema de la Red Nacional de Laboratorios en Salud Pblica. 1.3 1.3.1 RESPONSABILIDADES El Centro Nacional de Salud Pblica (CNSP), a travs de su Direccin Ejecutiva de Laboratorios de Referencia, es responsable de autorizar el diseo, elaboracin, revisin y actualizacin del presente manual, de acuerdo a los procedimientos aprobados por el Instituto Nacional de Salud. Los directores de los establecimientos de salud son responsables de autorizar, proporcionar los recursos necesarios y designar al personal responsable para la aplicacin de las disposiciones contenidas en el presente manual. El personal de los establecimientos de salud es responsable de planificar, organizar, ejecutar, capacitar y controlar sus acciones, de acuerdo a las disposiciones contenidas en este manual. Los jefes o responsables de los laboratorios deben asegurar el control de calidad interno, la idoneidad del personal, equipos, materiales y reactivos, la mejor utilizacin del recurso humano y la distribucin de los ambientes e instalaciones. El personal profesional, tcnico/operativo y auxiliar son responsables de seguir las especificaciones contenidas en el presente manual y aplicar los procedimientos indicados. Culminado los procedimientos de laboratorio, el personal encargado del manejo de muestras biolgicas, as como el director del establecimiento, son responsables de la neutralizacin y/o eliminacin de los desechos en lugares apropiados. DOCUMENTOS DE REFERENCIA Instituto Nacional de Salud. Gua de procedimientos diagnsticos de las parasitosis intestinales. Lima: INS; 1998. Instituto Nacional de Salud. Manual de procedimientos de laboratorio para la obtencin y envo de muestras (I). Segunda Edicin. Lima: INS, 1997. Serie de Normas Tcnicas N 15.
1 Instituto Nacional de Salud
1.3.2
1.3.3
1.3.4
1.3.5
1.3.6
1.4 1.4.1
1.4.2
MPR-CNSP-015
1.4.3
Instituto Nacional de Salud. Normas de bioseguridad. Segunda Edicin: Lima: INS; 1997. Serie de Normas Tcnicas N 18. Instituto Nacional de Salud. Manual de laboratorio del nivel local. Lima: INS; 1993. DEFINICIONES Y ABREVIATURAS AFA: fijador conteniendo alcohol, formol y cido actico. antgeno: sustancia generalmente de naturaleza proteica, capaz de provocar una respuesta del sistema inmunitario. anticuerpo: inmunoglobulina que es capaz de reaccionar con antgenos y provocar su neutralizacin o modificacin. aplicador: trozo de madera tipo bajalenguas. bioseguridad: conjunto de medidas de proteccin contra cualquier tipo de accin que ponga en peligro la salud del ser humano. CI: cdigo internacional. cpsula ovgera: vescula que contiene huevos. cstode: gusano o helminto platelminto de forma acintada. centrifugacin: sedimentacin del contenido de una suspensin mediante la fuerza centrfuga. colorante vital: colorante que permite ver la estructura interna del parsito vivo. copro-antgeno: antgeno presente en las heces. cristal de Charcot - Leyden: cristales de protenas provenientes de los grnulos de eosinfilos, que se destruyen en el intestino. diafanizar: aclarar para facilitar la visualizacin microscpica diagnstico parasitolgico: demostracin directa o indirecta de alguna forma o estadio evolutivo del parsito. enteroparsito: parsito que tiene por hbitat el tubo digestivo, especialmente el intestino. espora: esporoquiste aislado. esporoquiste: quiste con cubierta definida que contiene esporozotos
1.4.4 1.5 1.5.1 1.5.2
1.5.3
1.5.4 1.5.5
1.5.6 1.5.7 1.5.8 1.5.9 1.5.10 1.5.11 1.5.12
1.5.13 1.5.14
1.5.15 1.5.16 1.5.17

MPR-CNSP-015
1.5.18 1.5.19 1.5.20 1.5.21
estrbila: porcin del cuerpo de las tenias o cstodes formadas por una cadena de progltidos. fijacin: conservacin de la estructura del parsito. heces: mezcla de productos de excrecin y secrecin que se eliminan por el intestino. helminto: ser pluricelular con exoesqueleto flexible, ausencia de apndices y con movimientos reptantes. hpg: nmero de huevos por gramo de heces. huevo: producto de la fecundacin con potencialidad de desarrollar un nuevo ser. herida: prdida de piel y potencial puerta de entrada de agentes patgenos. invasivo(a): agente infectante que tiene capacidad de invadir tejidos. larva: estadio evolutivo de algunos seres vivos como los helmintos y los artrpodos en quienes an no se han desarrollado los aparatos genitales. MIF: fijador que contiene merthiolate, yodo y formol. montar: colocar el espcimen entre lmina y laminilla con blsamo de Canad para su conservacin permanente. nemtode: gusano o helminto de forma cilndrica. neutralizar: incorporacin de un agente qumico a la muestra biolgica capaz de eliminar todo agente vivo. ooquiste: quiste que contiene el huevo o cigote. organolptico: caractersticas orgnicas de una sustancia (consistencia, color, olor, etc). PAF: fijador y/o conservador conteniendo fenol, alcohol y formol para muestras con parsitos, sobre todo protozoarios. PVA: alcohol polivinlico, fijador para conservar los parsitos en muestras fecales. parsito: ser vivo de escala zoolgica inferior que vive a expensas de otro de escala superior. patogenicidad: capacidad de producir dao. protozoario: ser unicelular.
1.5.22 1.5.23 1.5.24 1.5.25 1.5.26
1.5.27 1.5.28
1.5.29 1.5.30
1.5.31 1.5.32 1.5.33
1.5.34 1.5.35 1.5.36 1.5.37

MPR-CNSP-015
1.5.38
progltide: segmento o anillo de la estrbila de las tenias o cstodes y que puede ser inmaduro, maduro o grvido, segn el estado de desarrollo de sus aparatos genitales. quiste: forma de resistencia de los protozoos, los cuales se rodean de una membrana dura e impermeable. solucin sobresaturada: solucin en la cual el soluto est en su mxima concentracin. trofozoto: forma vegetativa, libre y en movimiento de los protozoos. tremtode: gusano aplanado o platelminto, que presenta su cuerpo indivisible.
1.5.39
1.5.40 1.5.41 1.5.42
MPR-CNSP-015
SECCIN 2 MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD 2.1 RESPONSABILIDADES El personal involucrado en los diferentes procesos para el diagnstico parasitolgico de las infecciones y/o enfermedades deben cumplir los requisitos y aplicar las medidas establecidas en el Manual de Normas de Bioseguridad (Serie de Normas Tcnicas N 18), editado por el Instituto Nacional de Salud. 2.2 CAMPO DE APLICACIN Se deben cumplir y controlar las medidas necesarias, en especial las siguientes: 2.2.1 2.2.1.1 2.2.1.2 2.2.2 2.2.2.1 2.2.3 2.2.3.1 2.2.4 2.2.4.1 2.2.5 2.2.5.1 Del personal Manipular con guantes la obtencin, recepcin y tratamiento de las muestras frescas. Descartar rpidamente el material fresco, o fijar (en caso de conservacin). Tipos de agentes Considerar como material de alto peligro las muestras frescas y de pacientes con VIH. La vestimenta Vestir siempre mandil dentro del laboratorio y quitrselo para transitar por otras reas. rea de examen de las muestras Debe ser una sola dentro del laboratorio. Envo de muestras al laboratorio El nico material fresco que se puede enviar de un laboratorio a otro laboratorio es el cultivo, el resto debe fijarse para su envo. En casos de accidentes El laboratorio Neutralizacin y eliminacin del material biolgico La descontaminacin debe ser en cada laboratorio y debe eliminarse o lavarse el material sucio.
2.2.6 2.2.7 2.2.8 2.2.8.1
MPR-CNSP-015
SECCIN 3 OBTENCIN DE LA MUESTRA 3.1 3.1.1 CONDICIONES GENERALES Los parsitos intestinales del hombre son protozoarios y/o helmintos, llamados comnmente gusanos intestinales (Anexo A). Estos helmintos o gusanos pueden ser cilndricos (nemtodes), anillados o segmentados (cstodes). Para observar los trofozotos, quistes u ooquistes de los protozoarios, as como las larvas y huevos de helmintos, se debe usar un microscopio; en cambio, la mayor parte de los gusanos o helmintos adultos son macroscpicos y su morfologa puede estudiarse directamente, con ayuda de un estereoscopio o una lupa. Los protozoarios intestinales eliminan con las heces sus formas evolutivas (trofozoto, quiste, ooquiste y espora), segn la especie involucrada. Los helmintos intestinales adultos (progltidos de Taenia sp., Enterobius vermicularis y Ascaris lumbricoides) pueden salir al exterior espontneamente o despus del tratamiento. Los gusanos intestinales se eliminan con las heces. Los mtodos de diagnstico de los parsitos intestinales pueden ser: directo o por concentracin de los elementos parasitarios que se eliminan en las heces. En las heces podemos encontrar formas adultas y microscpicas (huevos, larvas, trofozoitos, quistes, ooquistes y esporas) de los parsitos intestinales; por ello, es importante obtener una buena muestra fecal, as como la conservacin ptima del espcimen. La muestra debe ser obtenida (entre 3 y 6 gramos) lo ms fresca posible (mximo 90 minutos, si se busca Entamoeba histolytica), y depositada en un frasco de boca ancha con tapa rosca y rotulada correctamente con los datos de identificacin. La muestra debe obtenerse antes del uso de medicamentos antiparasitarios, o hasta 2 a 5 das despus de su administracin. Las heces depositadas en el suelo no son las recomendadas para el diagnstico, debido a que pueden contaminarse con formas biolgicas, como por ejemplo: larvas similares a los enteroparsitos del hombre, larvas de nemtodes, huevos de caros o insectos, etc. Si el paciente no es regular en la evacuacin de sus deposiciones y ha evacuado en la noche anterior al examen, se recomienda guardar la muestra en una refrigeradora o en un lugar fresco no expuesto a la luz solar, para que no se alteren las formas parasitarias. Cuando la muestra va a demorar en llegar al laboratorio varias horas o das, se recomienda adicionarle lquido fijador y/o conservador (PAF, PVA, formalina 10%, SAF, acetato de sodio, etc.).
3.1.2
3.1.3
3.1.4
3.1.5 3.1.6
3.1.7
3.1.8
3.1.9
3.1.10
3.1.11
MPR-CNSP-015
3.1.12
En algunos parasitismos relacionados al parasitismo intestinal, es necesario el examen de bilis, esputo, secrecin, biopsia, tejido de necropsia o frotis perianal. MUESTRA PARA EXAMEN PARASITOLGICO Comprende las siguientes muestras: heces, bilis o jugo duodenal, esputo, secrecin, biopsia o preparaciones histolgicas, siendo heces, la ms frecuente.
3.2
3.2.1 3.2.1.1 a. b. c.
Heces Caractersticas de la muestra Recipiente o contenedor: boca ancha, con tapa rosca. Cantidad : 3 - 6 g Condiciones ptimas: No estar mezclado con orina, que no exista el antecedente de haber ingerido bario u otros productos de contraste, y llevar la muestra al laboratorio en corto tiempo (de 2 - 4 horas de su obtencin). Registro de datos Se debe consignar la siguiente informacin: Nombre, edad, sexo, ocupacin, sntomas y signos, fecha de inicio de sntomas y diagnstico presuntivo.
3.2.1.2
3.2.1.3 a.
Procesamiento de la muestra Debe realizarse lo antes posible y en un lugar apropiado (que no le llegue la luz directa). Las muestras diarreicas y las que contienen sangre, deben examinarse en forma macroscpica y microscpica apenas lleguen al laboratorio. Se aplicar la metodologa correspondiente (Anexo B). Los reactivos y colorantes empleados en el procesamiento deben estar en envases adecuados, mantenerse fuera de los rayos del sol o luz, etiquetados (con nombre y fecha de preparacin), sometidos a un control peridico y con una preparacin proporcional a la demanda (Anexo C). Reporte de resultados Escribir el nombre completo de los parsitos, indicando el estadio evolutivo y su densidad en la muestra (Seccin 10).
b. c.
3.2.1.4
MPR-CNSP-015
SECCIN 4 ENVO Y TRANSPORTE DE LA MUESTRA 4.1 OBJETIVO Describir el procedimiento y condiciones para el envo y transporte de las muestras al laboratorio 4.2 CONDICIONES ESPECFICAS Las muestras deben mantenerse en un ambiente fresco y lejos de la luz solar, se deben evitar las temperaturas extremas o el desecamiento, deben contener cantidades ptimas y estar en frascos o contenedores rotulados y con soluciones conservadoras (Tabla N1). Tabla N 1. Condiciones del envo de la muestra segn el tipo y tiempo de demora en llegar al laboratorio para el diagnstico parasitolgico.
TIPO DE MUESTRA TIEMPO QUE DEMORA EN LLEGAR AL LABORATORIO 24 HORAS < 24 HORAS T ambiente PAF, SAF, Formalina 10% AGENTES PARASITARIOS
Esputo, secrecin biliar
Paragonimus, Fasciola, Giardia. Giardia, Strongyloides, Paragonimus, Fasciola, Ancylostoma o Necator, Microsporidia y otros. Enterobius, Ascaris, Taenia y otros. E.vermicularis. E. histolytica, otros (segn el tejido) Ascaris, Trichuris, Diphyllobothrium, Taenia, Paragonimus y Fasciola, etc. E. histolytica, Giardia, Paragonimus, Fasciola y otros . E. histolytica, Giardia, Cryptosporidium, Enterocytozoon, Encephalitozoon y otros.
Contenido duodenal
T ambiente
PAF, Formalina 10%
Frots perianal Secrecin vaginal Tejidos
T ambiente T ambiente 4 C T ambiente 4 C
T ambiente Frotis en lmina Formol 10% Nemtodes en alcohol 70%, Cstodes y Tremtodes en formol 10% Hielo seco o congelador PAF, PVA, Formalina 10%, Cary blair, Bicromato de potasio al 2,5%, MIF
Helmintos Suero
Heces
T ambiente
Cerrar hermticamente. Indicar la posicin. Datos del paciente. Escribir: Frgil, Material Biolgico. Sealar la T a mantener. Fecha.
Figura N 1. Requisitos para la remisin de la muestra de heces
MPR-CNSP-015
4.3 4.3.1 4.3.2 4.3.3 4.3.4 4.3.5
PROCEDIMIENTO Colocar la muestra elegida en un envase apropiado, rotulado correctamente y en un recipiente secundario (podra ser de plstico u otro material resistente a roturas) (Figura N 1). Enviar la muestra al laboratorio lo antes posible; en caso fuera fresca, dentro de las 2 a 4 horas de obtenida. Si el envo de la muestra va a demorar ms de un da en llegar al laboratorio, debe guardarse en un fijador conservador, aplicando las medidas de bioseguridad correspondientes (Tabla N 1). Si se enviara la muestra a otro laboratorio, el personal responsable del envo debe eligir la forma apropiada para la ptima conservacin de sta. Cuando la muestra no rene las condiciones o cantidades ptimas para los anlisis, as como los datos, se recomienda establecer contacto con la persona responsable para efectuar las correcciones respectivas. RECHAZO DE UNA MUESTRA Es importante controlar cada hoja de pedido y verificar si tiene toda la informacin (etiquetado). De no cumplirse ello, se debe establecer contacto con la persona responsable para efectuar las correcciones necesarias. Los criterios para rechazar una muestra son los siguientes: No indicar el tipo de muestra o procedencia. No indicar el examen requerido. Demora en el envo al laboratorio. Muestra sin rotular o mal rotulada. Muestra que presente evidencia de haber sido derramada. Recipiente o contenedor inapropiado. Muestra con contaminacin. Muestra escasa o seca en el hisopo o contenedor. Presencia de una sola muestra, a pesar de la presencia de varias rdenes. Volumen o cantidad inadecuada. En casos de rechazar una muestra, el personal de laboratorio debe explicar al solicitante las observaciones y motivos en la ficha de solicitud de diagnstico. Si no fuera posible la obtencin de otra muestra, revisar nuevamente los exmenes realizados. Tener en cuenta el examen parasitolgico por macroscopa.
4.4 4.4.1
4.4.2 4.4.2.1 4.4.2.2 4.4.2.3 4.4.2.4 4.4.2.5 4.4.2.6 4.4.2.7 4.4.2.8 4.4.2.9 4.4.2.10 4.4.3
4.4.4
MPR-CNSP-015
SECCIN 5 PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO PARA EL DIAGNSTICO PARASITOLGICO - HECES 5.1 5.1.1 EXAMEN DIRECTO MACROSCPICO Fundamento. Permite observar directamente las caractersticas morfolgicas de los parsitos adultos, enteros o fraccionados, as como los cambios en las caractersticas organolpticas de las heces eliminadas, (color, presencia de sangre y/o moco, consistencia, etc.). 5.1.2 5.1.2.1 5.1.2.2 5.1.2.3 5.1.2.4 5.1.3 5.1.3.1 5.1.3.2 5.1.4 Materiales. Suero fisiolgico (Anexo C). Aplicador (bajalengua). Pinza de metal. Coladera de plstico o malla metlica. Procedimiento. Agregar suero fisiolgico en cantidad suficiente para homogeneizar la muestra. En caso de presencia de parsitos adultos, tamizar o colar la muestra. Observacin. Observar las caractersticas organolpticas de las heces, tiles para la ayuda diagnstica (consistencia, color, presencia de moco, sangre, alimento sin digerir), as como la presencia de gusanos cilndricos, anillados o aplanados (enteros o parte de ellos) (Figura N 2).
Figura N 2. Ascaris lumbricoides macho adulto (der.) y progltido grvido de Taenia solium (4X) (izq.), coloracin: Tionina
MPR-CNSP-015
10
5.1.5
Resultado. En caso que la muestra no sea normal, es decir, contenga informacin til para el diagnstico (ejemplo: presencia de glbulos rojos, fibras musculares no digeridas, mucus, etc.), se debe adicionar al informe del examen parasitolgico las caractersticas macroscpicas de las heces.
5.2 5.2.1.
EXAMEN DIRECTO MICROSCPICO Fundamento. Buscar, principalmente en muestras frescas, la presencia de formas evolutivas mviles de parsitos de tamao microscpico (trofozotos, quistes de protozoos: Entamoeba histolytica, Giardia lamblia, Balantidium coli, etc.; as como larvas o huevos de helmintos: Strongyloides stercoralis, Ancylostoma duodenale, Necator americanus, Trichostrongylus sp., Paragonimus, Fasciola, etc.).
5.2.2 5.2.2.1 5.2.2.2 5.2.2.3 5.2.2.4 5.2.2.5 5.2.2.6 5.2.2.7 5.2.2.8 5.2.2.9
Materiales (Figura N 3) Lminas portaobjetos. Laminillas cubreobjetos. Aplicador de vidrio o madera. Microscopio ptico. Marcador de vidrio. Suero fisiolgico (Anexo C). Solucin de lugol (Anexo C). Verde brillante (Anexo C). Rojo neutro (Anexo C).
Figura N 3. Materiales para la aplicacin del mtodo directo: lminas, laminillas, aplicador, solucin salina y lugol
MPR-CNSP-015
11
5.2.3 5.2.3.1
Procedimiento. Colocar en un extremo de la lmina portaobjeto una gota de suero fisiolgico y, con ayuda de un aplicador, agregar 1 a 2 mg de materia fecal, emulsionarla y cubrirla con una laminilla cubreobjeto. Colocar en el otro extremo de la lmina portaobjeto, una gota de lugol y proceder a la aplicacin de la muestra fecal como en el prrafo anterior. Con el suero fisiolgico, los trofozotos y quistes de los protozoarios se observan en forma natural, y con lugol, las estructuras internas, ncleos y vacuolas. En algunos casos, se recomienda el uso de colorantes vitales, debido a que no alteran la actividad del trofozoto. Los ms usados son verde brillante 0,2% y rojo neutro 0,01%. Observacin (Figura N 4) Observar al microscopio a 10X 40X. No es aconsejable usar objetivo de inmersin (100X), pues se puede ensuciar el microscopio. Recorrer la lmina siguiendo un sentido direccional, ejemplo: de derecha a izquierda, o de arriba a abajo. Resultado En un formato y en el cuaderno de registro correspondiente, se anotar el nombre de la especie del parsito y su estado evolutivo, indicando la densidad (nmero de formas parasitarias por campo microscpico) expresado en cruces (Seccin 10).
5.2.3.2
5.2.3.3
5.2.3.4
5.2.4 5.2.4.1
5.2.4.2
5.2.5
Figura N 4. Trofozoito de Giardia lamblia con solucin lugol (200X)
5.3
MTODOS DE CONCENTRACIN Los trofozotos, quistes, ooquistes, larvas y huevos, pueden concentrarse por diversos procedimientos, lo cual permite corroborar el hallazgo del mtodo directo y conocer la intensidad del enteroparasitismo. Estos procedimientos de concentracin pueden ser: flotacin, sedimentacin, o por combinacin de
MPR-CNSP-015
12
ambos mtodos. La eleccin de cada procedimiento depender de las facilidades del laboratorio, el adiestramiento del personal, la procedencia de la muestra (zona geogrfica), el conocimiento de la prevalencia de los parsitos (zona costea, andina y selvtica o rea rural o urbana), y la especie del parsito que se desea investigar. 5.3.1 5.3.1.1 a. Mtodos de concentracin por sedimentacin. Tcnica de la sedimentacin espontnea en tubo (Tcnica de concentracin por sedimentacin, sin centrifugacin): Fundamento. Se basa en la gravidez que presentan todas las formas parasitarias para sedimentar espontneamente en un medio menos denso y adecuado como la solucin fisiolgica. En este mtodo es posible la deteccin de quistes, trofozotos de protozoarios, huevos y larvas de helmintos. b. Materiales. c. Tubos de vidrio o plstico de 13 x 100, 16 x 150, o tubos de 50 mL de capacidad que terminen en forma cnica. Lminas portaobjetos. Laminillas de celofn recortadas adecuadamente (22 x 22 mm 22 x 30 mm.). Solucin fisiolgica (Anexo C). Pipetas de vidrio o plstico. Agua destilada, hervida o de lluvia. Gasa recortada en piezas de 9 x 9 cm.
Procedimiento. Tomar una porcin de heces (1 - 2 g) y homogeneizar con suero fisiolgico en un tubo limpio o en el mismo recipiente en que se encuentra la muestra. Colocar una gasa, hundindola en la abertura del tubo y sujetndola con una liga alrededor de ella. Filtrar el homogeneizado a travs de la gasa, llenando el tubo hasta la cuarta parte de su contenido. Agregar suero fisiolgico hasta 1 cm por debajo del borde del tubo. Ocluir la abertura del tubo con una tapa, parafilm o celofn. Agitar enrgicamente el tubo por 15 segundos aproximadamente. Dejar en reposo de 30 a 45 minutos. En caso que el sobrenadante est muy turbio, eliminarlo y repetir la misma operacin con solucin fisiolgica o agua filtrada.
MPR-CNSP-015
d.
Aspirar la parte media del tubo con una pipeta y colocar 1 2 gotas en una lmina portaobjeto. Aspirar el fondo del sedimento con una pipeta y depositar 1 2 gotas del aspirado en los extremos de la otra lmina portaobjeto. Agregar 1 2 gotas de solucin lugol a una de las preparaciones. Cubrir ambas preparaciones con las laminillas de celofn y observar al microscopio
Observacin. Examinar primero la preparacin con solucin fisiolgica para observar formas mviles y de menor peso especfico (trofozotos, quistes y larvas) y luego la preparacin con lugol para observar sus estructuras internas, de estos y de otros parsitos de mayor peso especfico (huevos, larvas).
e.
Resultado. Informar la presencia de las formas evolutivas de los parsitos (Seccin 10).
5.3.1.2
Mtodo de sedimentacin rpida (TSR, MSR) (Concentracin por sedimentacin sin centrifugacin) (Lumbreras y col. 1962):
Figura N 5. Materiales para la aplicacin del mtodo de sedimentacin rpida: vasos, gasa, pipeta de transferencia, desinfectada, etc.
a.
Fundamento. Se basa en la gravidez de los huevos que, por su tamao y peso sedimentan rpidamente cuando se suspenden en agua.
b.
Materiales Copa o vaso de vidrio o plstico, cnico de 150 a 200 mL. Coladera de malla metlica o plstico. Placas Petri o lunas de reloj. Aplicador de madera (1/3 de bajalengua).
MPR-CNSP-015
c.
Pipeta Pasteur. Gasa. Agua corriente filtrada. Microscopio.
Procedimiento Homogeneizar 3 a 6 g de heces con unos 10 a 20 mL de agua filtrada Colocar la coladera y dos capas de gasa en la abertura del vaso y a travs de ella, filtrar la muestra. Retirar la coladera y llenar la copa con agua filtrada hasta 1 cm. debajo del borde, esto es 15 a 20 veces el volumen de la muestra. Dejar sedimentar la muestra durante 30 minutos. Decantar las 2/3 partes del contenido del vaso y agregar nuevamente agua. Repetir los pasos anteriores cada 5 a 10 minutos por 3 a 4 veces, hasta que el sobrenadante quede limpio. Transferir el sedimento a una placa petri o luna de reloj, por incorporacin o con ayuda de una pipeta Pasteur. Observar al estereoscopio o microscopio, a menor aumento.
d.
Observacin Observar la presencia de huevos. Este mtodo es especialmente til para la bsqueda de Fasciola hepatica, Paragonimus sp. y nemtodes como Ascaris lumbricoides (huevo fecundado o no fecundado), Trichuris trichiura, Hymenolepis nana, Diphyllobothrium pacificum, etc. (Anexo A).
Figura N 6. Huevos oprculados de Paragonimus peruvianus (izq.) y Fasciola hepatica (der.) en muestra fresca
MPR-CNSP-015
15
e.
Resultado. Informar de la presencia de huevos o larvas de parsitos (Seccin 10).
5.3.1.3 a.
Tcnica de Faust: Mtodo de sedimentacin y flotacin por centrifugacin con sulfato de zinc al 33,3% y densidad 1180: Fundamento Se basa en que los quistes y/o huevos de los parsitos flotan en la superficie por ser de menor densidad que el sulfato de zinc a 33,3%, cuya densidad es 1180. Es til para la bsqueda de quistes y/o huevos de parsitos y excepcionalmente se observan larvas. Se recomienda controlar la densidad del sulfato de zinc y usar agua filtrada para el lavado previo de la muestra.
b.
Materiales. Gradilla para tubos de ensayo. Tubos de prueba 15 x 150. Tubos de prueba 13 x 100. Lminas portaobjetos. Laminillas cubreobjetos. Embudo pequeo de vidrio. Bajalengua o bagueta. Gasa. Sulfato de zinc 33,3%, densidad 1,180 (Anexo C). Solucin de lugol (Anexo C).
c.
Procedimiento. Colocar 1 a 2 g de la muestra de heces en el tubo de prueba 13 x 100 o 15 x 150 y agregar de 7 a 10 mL de agua filtrada o destilada. Realizar una buena homogeneizacin con ayuda del bajalengua o bagueta. Colocar en el tubo, un embudo con dos capas de gasa y filtrar la muestra homogeneizada hasta alcanzar 1 cm por debajo del borde del tubo (opcional). Retirar el embudo y centrifugar de 2 000 a 2 500 r.p.m. de 2 a 3 minutos (opcional). Decantar el sobrenadante, adicionar agua al sedimento, homogeneizar y repetir la centrifugacin 1 2 veces, hasta que el sobrenadante se observe limpio. Eliminar el sobrenadante y agregar la solucin de sulfato de zinc (3-4 mL), homogeneizar y completar con la misma solucin hasta 1 cm del borde del tubo.
MPR-CNSP-015
d.
Centrifugar de 1 a 2 minutos de 2 000 a 2 500 r.p.m. Colocar el tubo en la gradilla y agregar, con ayuda de un gotero, la solucin de sulfato de zinc hasta formar un menisco en la boca del tubo. Colocar una laminilla cubreobjeto sobre el menisco y dejar en reposo de 5 a 6 minutos. Depositar una gota de solucin lugol en la lmina portaobjeto. Retirar la laminilla cubreobjeto, colocarla sobre la gota de lugol o con asa de Kolle colocar 3 4 asadas en la lmina y cubrir con una laminilla cubreobjeto y observar al microscopio.
Lectura. Se observan principalmente quistes y huevos de parsitos.
e.
Resultado. Informar el nombre y estadio evolutivo encontrado, as como la cantidad de elementos observados por campo (Seccin 10).
5.3.2 5.3.2.1 a.
Mtodos de concentracin por flotacin. Sheather Sugar: Mtodo de concentracin por flotacin con centrifugacin en una solucin de azcar: Fundamento. Se basa en la flotacin de quistes, ooquistes y huevos de parsitos en una solucin de azcar que posee mayor densidad que ellos. Esta tcnica es til para la concentracin de quistes y ooquistes de protozoos y huevos de helmintos y se usa como mtodo preferencial en el diagnstico de los coccidios: Cryptosporidium, Cyclospora, Isospora, etc.
b.
Materiales. Tubos de ensayo 13 x 100. Lminas portaobjetos. Laminilla cubreobjetos. Aplicador. Solucin saturada de azcar (Anexo C). Asa de platino. Gradilla para tubos de ensayo. Suero fisiolgico (Anexo C). Embudo de vidrio. Gasa.
17
MPR-CNSP-015
c.
Procedimiento. Homogeneizar 1 a 2 g de materia fecal en suero fisiolgico. Colocar un embudo de vidrio con una gasa doblada en la abertura del tubo de ensayo y filtrar el material homogeneizado. Centrifugar el tubo con el material homogeneizado a 1 500 r.p.m. durante 2 a 5 minutos. Eliminar el sobrenadante, y agregar la solucin de azcar hasta 1 cm del borde del tubo, agitar hasta disolver el sedimento, centrifugar como en el paso anterior, completar con la solucin de azcar hasta el borde y esperar de 2 a 5 minutos la formacin de un menisco. Con la ayuda del asa de platino, tomar una muestra de la superficie del menisco y colocarla en una lmina portaobjeto, agregar lugol, cubrir con una laminilla y observar al microscopio. En el caso de observar coccidios, de la superficie del preparado, tomar con la asa de platino o con una pinza curva, una muestra para preparar un frotis para teir por el mtodo de Ziehl-Neelsen modificado.
d.
Observacin. Esta tcnica es apropiada para la observacin y registro de ooquistes de Isospora, Cryptosporidium, Cyclospora y Sarcocystis.
e.
Resultado. Informar la presencia de las formas evolutivas de los parsitos encontrados y su cantidad, expresado en cruces (Seccin 10).
5.3.2.2
Mtodo de Parodi Alcaraz (Mtodo de concentracin por flotacin sin centrifugacin, en solucin sobresaturada de azcar): Fundamento. Se basa en la propiedad que tienen los quistes y/o huevos de flotar en la superficie de una solucin saturada de azcar, debido a su menor densidad. El mtodo es til para la deteccin de quistes de protozoarios y huevos de helmintos.
a.
b.
Materiales Tubos de 13 x 100 15 x 150. Lminas portaobjetos. Laminillas cubreobjetos. Solucin saturada de azcar (azcar rubia) (Anexo C). Formol.
MPR-CNSP-015
18
c.
Aplicador de madera (1/3 de baja lengua). Solucin de lugol (Anexo C).
Procedimiento. Colocar 1 a 2 g de heces en el tubo de ensayo. Agregar 3 a 5 mL de la solucin sobresaturada de azcar y homogeneizar con un aplicador. Completar el contenido del tubo con la misma solucin de azcar hasta formar un menisco. Dejar en reposo por 30 minutos. Colocar en contacto con el menisco, una laminilla cubreobjeto que permitir la adherencia por viscosidad de los quistes y huevos. Colocar en la lmina portaobjeto una gota de solucin de lugol. Retirar la laminilla con sumo cuidado, colocarla sobre la lmina portaobjeto y examinar al microscopio.
d.
Lectura. Es conveniente la observacin inmediata a 10X y 40X, pues los quistes y/o huevos suelen deformarse si la densidad de la solucin es demasiado alta.
e.
Resultado. Informar los estadios evolutivos de los parsitos encontrados (Seccin 10).
5.3.3 5.3.3.1
Mtodo de Ritchie o de sedimentacin por centrifugacin y flotacin (mixto, con fijador) Fundamento. Se basa en la concentracin de los quistes y huevos por sedimentacin mediante la centrifugacin, con la ayuda de formol y ter para separar y visualizar los elementos parasitarios.
5.3.3.2
Materiales. Gradilla de tubos de ensayo. Tubos de ensayo 13 x 100. Pipetas Pasteur. Lmina portaobjetos. Laminillas cubreobjetos. Hisopos. Solucin de formol 10%.
MPR-CNSP-015
5.3.3.3 I:
Solucin fisiolgica (Anexo C). Eter etlico. Lugol. Bajalengua o bagueta. Microscopio binocular.
Procedimiento (Figura N 7) Colocar en el tubo de ensayo 1 a 2 g de muestra de heces, agregar 8 mL de solucin fisiolgica, homogeneizar y centrifugar a 2 000 r.p.m. por 2 a 3 minutos. Descartar el sobrenadante y repetir varias veces el paso anterior hasta que se observe el sobrenadante limpio. Decantar el sobrenadante, agregar al sedimento 6 mL de solucin de formol al 10%, homogeneizar y dejar reposar 5 minutos, luego de los cuales se agrega 3 mL de ter. Taponar el tubo y agitar cuidadosamente para evitar la salida del material. Eliminar las capas formadas de sobrenadante, de ser necesario, con ayuda de un hisopo. Retirar la tapa, centrifugar el tubo de 2 000 a 3 000 r.p.m. por 3 minutos. Depositar una gota de lugol en la lmina portaobjeto, y con ayuda de una pipeta Pasteur, tomar una porcin del sedimento para mezclarlo con la solucin de lugol. Cubrir con una laminilla cubreobjeto y observar al microscopio.
II: III. IV.
I.
Eter Detritus
II.
III.
IV.
Formalina
N Sedimento
Figura N 7. Aplicacin del mtodo de Ritchie
5.3.3.4
Observacin. Se pueden observar quistes, ooquistes y huevos de los parsitos. Es poco til para observar trofozotos y larvas.
MPR-CNSP-015
20
5.3.3.5
Resultado. Informar el nombre, estadio evolutivo del parsito y la presencia de cristales de Charcot-Leyden (Seccin 10).
5.3.4 5.3.4.1
Mtodo de Baermann (Mtodo de concentracin por migracin) Fundamento Se basa en los tropismos positivos: geotropismo, termotropismo e hidrotropismo de los trofozotos de protozoos y larvas de helmintos. Es til principalmente para Balantidium coli y larvas de Strongyloides stercoralis.
5.3.4.2
Materiales Copas cnicas de 200 a 300 mL. Coladera metlica o rejilla. Pipetas Pasteur. Gasa. Lminas cavadas. Suero fisiolgico (Anexo C).
Figura N 8. Materiales del mtodo de Baermann: Copa de vidrio, pipetas de transferencia, coladera, lminas y laminillas
5.3.4.3
Procedimiento Colocar la coladera o rejilla metlica con la gasa doblada (2 a 3 capas) dentro de la copa (Figura N 8). Colocar sobre la gasa, 4 a 6 g de la muestra de heces en fresco.
MPR-CNSP-015
5.3.4.4
Verter solucin salina a 37C en cantidad suficiente por el borde de la copa. Dejar a temperatura ambiente o en estufa a 28C - 37C de 30 a 50 minutos. Sacar la coladera o rejilla y con ayuda de una pipeta Pasteur obtener 1 mL de sedimento. Colocar el sedimento en una luna de reloj o lmina cavada y observar al microscopio o esteroscopio.
Observacin. Observar trofozotos y larvas en movimiento. En algunas ocasiones se pueden observar formas adultas de E. vermicularis macho. Para una mejor diferenciacin de las larvas de los parsitos, realizar el mtodo de Harada-Mori
Figura N 9. Larvas de Ancylostoma/Necator (100x) en movimiento del mtodo de Baermann
5.3.4.5
5.3.5 5.3.5.1
Mtodo cualitativo: Tcnica de Kato o mtodo de concentracin por tamizado Fundamento. Mtodo que consiste en la diafanizacin o aclaracin de las heces con el uso de glicerina, que permite preparar una capa transparente y observar las formas parasitarias.
5.3.5.2
Materiales. Lminas portaobjeto. Aplicador. Papel celofn (humectante especial), cortado de 2 x 3 cm y sumergidos en una solucin de glicerina por un perodo no menor de 24 horas. Malla metlica, nylon u organza blanca. Solucin glicerinada con verde de malaquita (Anexo C).
MPR-CNSP-015
5.3.5.3
Procedimiento Tamizar 1 g de la muestra de heces a travs de organza, malla metlica o nylon fino Extender el tamizado sobre la lmina portaobjeto y cubrir con una laminilla impregnada en glicerina Comprimir la muestra con el tapn de jebe sobre la laminilla, secar el exceso de glicerina por 30 minutos y observar al microscopio.
5.3.5.4
Observacin Es una tcnica apropiada para la observacin de huevos de helmintos y algunos protozoarios como Isospora belli (Figura N 10).
Figura N 10. Isospora belli con colorante temporal eosina (400x)
5.3.5.5
Resultado Informar los estadios evolutivos de los parsitos encontrados (Seccin 10).
5.4 5.4.1
MTODO CUANTITATIVO DE KATO KATZ (ANLISIS CUANTITATIVO = hpg) Fundamento Se basa en la tcnica de Kato y que permite cuantificar la presencia de huevos de helmintos. Se expresa en nmero de huevos por gramo de heces (hpg).
5.4.2 5.4.2.1 5.4.2.2 5.4.2.3 5.4.2.4 5.4.2.5 5.4.2.6

MPR-CNSP-015
Materiales (Figura N 11) Lminas portaobjetos 2,5 x 7,5 cm. Papel absorbente (toalla o peridico). Aplicador. Papel de celofn impregnado con glicerina y verde de malaquita (Anexo C). Molde de plstico con perforacin central de 6 mm de diamtro. Malla metlica, nylon u organza de color blanco de 0,09 mm.
LMINA PERFORADA APLICADOR
MALLA, NYLON U ORGANZA
MALLA METLICA
Figura N 11. Materiales del mtodo de Kato - Katz: lmina perforada, aplicador, nylon/organza o malla metlica
5.4.3 5.4.3.1 5.4.3.2 5.4.3.3 5.4.3.4 5.4.3.5 5.4.3.6 5.4.3.7 5.4.4 5.4.4.1 5.4.5 5.4.5.1 5.4.5.2
MPR-CNSP-015
Procedimiento. Con un aplicador (bajalengua) transferir la muestra fecal (0,5-1g) sobre el papel absorbente. Colocar una malla o nylon de 2 x 3 cm. sobre la muestra. Con el aplicador del kit comprimir la malla para tamizar la muestra. Colocar el molde de plstico sobre la lmina portaobjeto y rellenar la perforacin con la muestra tamizada. Levantar el molde dejando el cilindro de la muestra en la lmina portaobjeto. Colocar la laminilla glicerinada con verde de malaquita sobre la muestra y con ayuda de un tapn de jebe presionar sobre la laminilla, buscando extender la muestra. Dejar para la diafanizacin a temperatura ambiente de 30 a 45 minutos. Observacin. Observar los huevos de helmintos, tal como se muestra en la Figura N 12. Resultado. El nmero de huevos encontrados en la lmina se multiplica por k (k= 24), el resultado es el nmero de huevos por gramo de heces (hpg) (Tabla N 2). Deben contarse todos los huevos del preparado.
Figura N 12. Huevos Ancylostoma /Necator y Trichuris trichiura por el mtodo de Kato Katz (400X)
Tabla N 2. Clculo del nmero de huevos por gramo (hpg): Mtodo de Kato - Katz
Nhuevosobservados enlalmina 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 Nhuevosporgramo deheces(hpg) 24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264 288 312 336 360 384 408 432 456 480 504 528 552 576 600 624 648 672 696 720 744 768 792 816 840 864 888 Nhuevosobservados enlalmina 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 Nhuevosporgramo deheces(hpg) 912 936 960 984 1008 1032 1056 1080 1104 1128 1152 1176 1200 1224 1248 1272 1296 1320 1344 1368 1392 1416 1440 1464 1488 1512 1536 1560 1584 1608 1632 1656 1680 1704 1728 1752 1776
MPR-CNSP-015
25
5.4.5.3
En caso de heces lquidas o pastosas, usar los factores de correccin que se incluyen en el kit: k/2 para heces sueltas y K/3 para heces diarreicas. Intensidad de la infeccin (hpg) El Comit de Expertos de la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) clasifica la intensidad de la infeccin por helmintos segn los rangos indicados en la Tabla N 3. Tabla N 3. Intensidad de las infecciones
AGENTES LEVE 1 - 4,999 MODERADA 5,000 - 4999 SEVERA > 50,000
5.4.6 5.4.6.1
A. lumbricoides
T. trichiura
1 - 999
1,000 - 9,999
> 10,000
A. duodenale N. americanus
1 -1,999
2,000 - 3,999
> 4,000
5.5 5.5.1 5.5.1.1
MTODOS DE COLORACIN PARA PROTOZOARIOS Mtodo de Ziehl-Neelsen (modificado para observacin de coccidias: Cryptosporidium y otros) Fundamento. Se basa en el comportamiento cido-resistente de la cubierta de estos parsitos, los cuales se tien de rojo y destacan sobre un fondo verde o azul, dependiendo del colorante de contraste usado.
5.5.1.2
Materiales. Lminas portaobjetos. Laminillas cubreobjetos. Soporte de varillas de vidrio para coloracin de lminas portaobjeto. Estiletes o pinzas punta curva. Fuscina fenicada (Anexo C). Verde de malaquita o azul de metileno acuoso (Anexo C).
MPR-CNSP-015
5.5.1.3
Metanol. Hidrxido de sodio al 4%. Alcohol cido (Anexo C).
Procedimiento. Colocar las lminas portaobjetos sobre el soporte de las varillas de vidrio. Con el estilete o pinza curva hacer un frotis de heces en la lmina portaobjeto y dejar secar. Fijar la lmina con alcohol metlico de 2 a 5 minutos y dejar secar. Agregar hidrxido de sodio sobre el preparado por un minuto, eliminar el exceso y lavar con agua. Cubrir la lmina con la fucsina fenicada (previa agitacin del frasco) por 5 minutos, diluida previamente en agua al tercio (1 mL colorante y 2 mL de agua). Lavar suavemente la lmina portaobjeto con agua corriente. Decolorar con alcohol-cido, cubriendo el portaobjeto por unos segundos hasta quitar el colorante. Lavar suavemente el portaobjeto con agua. Colocar como colorante de contraste verde de malaquita 1% o azul de metileno 1-1,4% durante 5 minutos, diluidas previamente al tercio. Lavar la lmina suavemente con agua corriente y dejar secar a temperatura ambiente. Realizar el montaje con cytoseal, blsamo de Canad o Permount, usar una laminilla cubreobjeto y observar el microscopio.
5.5.1.4
Observacin. Los ooquistes de Cryptosporidium, Isospora y Cyclospora aparecen de un color rojo fucsia sobre un fondo verdoso (con verde de malaquita) o azul (con azul de metileno). En algunos casos, no se colorean bien, pero la refringencia caracterstica permite diferenciarlos (Figura N 13).
Figura N 13. Isospora belli coloreado por Ziehl - Neelsen modificado (400X)
MPR-CNSP-015
27
5.5.1.5
5.5.2 5.5.2.1
Coloracin Gram y coloracin tricrmica (para microsporidios). Fundamento. Se basa en la identificacin de esporas de Enterocytozoon, Encephalitozoon, etc. por la combinacin de las coloraciones Gram y tricrmica.
5.5.2.2
Materiales. Lminas portaobjetos. Laminillas cubreobjetos. Colorante chromotrope (Anexo C). Coloracin Gram (Anexo C). Cristal violeta (Anexo C). Yodo de Gram (Anexo C). Pinza o estilete punta curva. Alcoholes 85% y 95% y xilol. Mechero de alcohol. Microscopio binocular. Placas petri 10 x 150 mm.
5.5.2.3
Procedimiento. Preparar el set de placas petri 10 x 150 mm. Realizar un frotis fino en una lmina o laminilla y dejar secar. Fijar el frotis pasndolo 3 veces por una llama, un segundo de tiempo por vez. Agregar el colorante cristal violeta y esperar 1 minuto. Enjuagar en agua corriente y eliminar totalmente el agua. Adicionar el yodo de Gram por 30 segundos, remover el exceso con el decolorante y enjuagar con agua. Agregar el colorante chromotrope por 5 minutos de 50C a 55C. Pasar por el decolorante (alcohol 90% y cido actico 1%) de 1 a 3 segundos. Pasar por alcohol 95% y por alcohol etlico absoluto por 1 minuto. Pasar un minuto por xilol buscando que la coloracin sea adecuada para visualizar el parsito. Realizar el montaje y observar al microscopio.
MPR-CNSP-015
5.2.4
Observacin. Observar al microscopio a 10X y 40X. Para observar al microscopio a 100X, cubrir con aceite de inmersin. Se observan las esporas de Enterocytozoon, Encephalitozoon, Nosema, etc., que aparecen de un color rosado o rojo tenue o fucsia sobre el fondo verde o azul.
5.2.5
Resultado. Informar los parsitos encontrados (Seccin 10).
5.5.3 5.5.3.1
Coloracin Trichrome (Gomori Wheatley). Fundamento. Permite colorear las estructuras internas de los protozoos para su caracterizacin. Esta tcnica utiliza muestras de heces frescas, preservadas con PVA o fijadas con Schaudinn. Es un mtodo rpido y de utilidad en el estudio de Entamoeba, Giardia, Balantidium, Cyclospora y otros protozoarios.
5.5.3.2
Materiales (Figura N 14) Lminas portaobjetos. Laminillas cubreobjetos. Asa de platino. Estilete curvo o pinza curva . Agua destilada. Tintura de Yodo (Anexo C). Cytoseal o blsamo de Canad. Alcoholes 85%, 90% y 95% y absoluto. Xilol. Colorante chromotrope (Anexo C). Acido actico. Solucin Schaudinn (Anexo C). Frascos coplin o placas Petri.
MPR-CNSP-015
Figura N 14. Materiales para la coloracin tricrmica: colorante, pinza, porta-laminillas (tapn de jebe), laminillas y placas petri
5.5.3.3
Procedimiento. Preparar un set de placas Petri 15 x 150 mm con los reactivos correspondientes, sujetar la laminilla con el porta-laminillas y con el estilete o pinza curva hacer el frotis fino de la muestra sobre la laminilla. Fijar la muestra con solucin Schaudinn por 2 a 5 minutos. Pasar por alcohol 70% con 2 3 gotas de tintura de yodo. Pasar por un minuto por alcohol 70%. Pasar por el colorante chromotrope de 8 a 15 minutos. Pasar por alcohol 90% con cido actico al 1% de 10 a 15 segundos y ver tono de coloracin. Pasar por alcohol 95% y alcohol absoluto durante 3 minutos. Pasar por xilol de 1 a 5 minutos. No debe verse opaco. Realizar el montaje con cytoseal, blsamo de Canad o Permount.
5.5.3.4
Observacin. Observar con objetivo de inmersin 100X. El citoplasma de los parsitos se tien de color verde y el ncleo de color rosado (Figura N 15).
Figura N 15. Trofozotos de Balantidium coli con macroncleo, con coloracin tricrmica (200X). Observar los macroncleos visibles
MPR-CNSP-015
30
5.5.3.5
Resultado. Informar el nombre del parsito y su estadio evolutivo (Seccin 10).
5.5.4 5.5.4.1
Coloracin de May Grnwald. Utilidad. Colorea protozoarios, principalmente flagelados.
5.5.4.2
Materiales. Lminas portaobjetos. Lminillas cubreobjetos. Estilete o pinza curva. Colorante May Grnwald (Anexo C). Alcohol metlico. Blsamo de Canad.
5.5.4.3
Procedimiento. Con la ayuda de un estilete o una pinza curva, realizar el frotis de la muestra fresca en la lmina o laminilla y dejar secar. Fijar el frotis con unas gotas de alcohol metlico, cubriendo la muestra por 5 minutos. Cubrir el frotis con el colorante (diluido al 1/2 1/3 con agua destilada) durante 15 minutos. Lavar con agua corriente y dejar secar. Realizar el montaje con cytoseal o blsamo de Canad y observar al microscopio.
5.5.4.4
Observacin. Observar la lmina con objetivo de inmersin. Los protozoos se observan con su citoplasma de color azul claro y los ncleos de color prpura (Figura N 16).
Figura N 16. Trofozoto de Giardia lamblia coloreado con May Grnwald (1000X)
MPR-CNSP-015
31
5.5.4.5
Resultado. Informar el nombre del parsito y el estadio evolutivo (Seccin 10).
5.5.5 5.5.5.1
Coloracin de hematoxilina frrica de Heidenhain. Utilidad. Colorea protozoarios, principalmente amebas y flagelados.
5.5.5.2
Materiales (Figura N 17) Lminas portaobjetos. Laminillas cubreobjetos. Frasco coplin o placas Petri. Estilete o pinza curva. Colorante de hematoxilina (Anexo C). Cytoseal o blsamo de Canad. Alcoholes 50%, 70%, 85%, 95% y absoluto en placas petri. Solucin Schaudinn (Anexo C). Solucin mordiente de sulfato de fierro y amonio (Anexo C). Tintura de yodo (Anexo C). Solucin fisiolgica (Anexo C). Microscopio binocular.
Figura N 17. Materiales para la realizacin de la coloracin hematoxilina frrica de Heidenhain: colorante, bicloruro de mercurio, porta-laminillas (tapn de jebe), pinza punta curva y placas petri
MPR-CNSP-015
32
5.5.5.3
Procedimiento. Preparar un set de placas petri 100 x 150 mm o el frasco Coplin con los reactivos correspondientes, y con ayuda de un estilete o pinza curva hacer un frotis fino en la lmina o la laminilla, esta ltima sujeta al porta-laminilla. Si la muestra es dura, hacer una emulsin previa en solucin fisiolgica, realizar el frotis y pasar en solucin Schaudinn por 3 a 5 minutos. Pasar por alcohol 70% ms 1 a 2 gotas de tintura de yodo por 5 minutos. Pasar por alcohol 70% y 50% de 5 a 10 minutos cada vez. Pasar por agua corriente por 5 a 10 minutos. Pasar por la solucin mordiente 2% de 5 a 10 minutos y enjuagar con agua corriente. Pasar por colorante por 5 a 10 minutos (1 mL de solucin colorante hematoxilina y 9 mL de agua). Lavar con agua y pasar por una segunda solucin de mordiente al 2% para decolorar, observando la intensidad de la coloracin. Lavar con agua corriente a chorro continuo de 10 a 15 minutos. Deshidratar pasando por alcohol 70%, 85%, 95% y absoluto, de 10 a 15 minutos cada uno. Aclarar con xilol agitando el frotis, montar con cytoseal o blsamo de Canad y observar al microscopio.
5.5.5.4
Observacin. Observar con objetivo de inmersin 1000x. El citoplasma de los parsitos se observan de color azul oscuro y los ncleos de color morado intenso a negruzco (Figura N 18).
Figura N 18. Trofozotos de Giardia lamblia y Chilomastix mesnili, coloreados con hematoxilina frrica de Heidenhain (1000X)
MPR-CNSP-015
33
5.5.5.5
Resultado. Informar el nombre del parsito y el estadio evolutivo (Seccin 10)
5.6 5.6.1 5.6.1.1
MTODOS DE COLORACIN PARA HELMINTOS Coloracin Carmn clorhdrico. Utilidad. Coloracin de estructuras internas de especmenes adultos o segmentos de ste. Se usa de preferencia para el estudio de cstodes y tremtodes, ya que los nemtodes suelen deformarse con el montaje. La muestra debe ser lo ms fresca posible.
5.6.1.2
Materiales (Figura N 19). Lminas portaobjetos. Laminillas cubreobjetos. Pinza de punta fina. Cytoseal o blsamo de Canad. Alcohol 70%, 85%, 95% y absoluto. Creosota de la Haya o xilol. Colorante Carmn (Anexo C). Acido clorhdrico. Agua destilada. Pabilo. Placas petri conteniendo colorante, decolorante, alcoholes de 70%, 85%, 95% y absoluto.
Figura N 19. Materiales para la coloracin Carmn clorhdrico: colorante, especmenes aplanados, placas petri y pinza
MPR-CNSP-015
34
5.6.1.3
Procedimiento. Los progltidos de cstodes y los adultos de tremtodes son lavados y aplanados, colocndolos entre dos lminas, sujetndolos con pabilo o usando pesas sumergindolos en formol al 10%. En caso de estar fijados en formol 10%, se lavan con agua corriente durante 10 a 30 minutos y luego se realiza el aplanamiento del vermex o gusano. Colocar el gusano en alcohol 70% durante 10 a 20 minutos. Pasar por el colorante Carmn durante 5 a 10 minutos. Pasar por alcohol cido controlando la coloracin al estereoscopio. Deshidratar el espcimen pasando por alcohol 85%, 95% y absoluto, durante 10 minutos en cada uno. Pasar por la creosota o xilol, controlando al estereoscopio o microscopio la coloracin apropiada. Secar el exceso de creosota con papel filtro y realizar el montaje con blsamo de Canad.
5.6.1.4
Observacin. La observacin y estudio de la morfologa del ejemplar se realiza macroscpicamente e incluso slo usando el estereomicroscopio (Figura N 20).
Figura N 20. Huevos de Dipylidium caninum en cpsula ovgera paquetes coloreados con Carmn clorhdrico (40X)
5.6.1.5
Resultados. Informar el nombre del parsito y su estadio evolutivo (Seccin 10).
5.6.2 5.6.2.1
Coloracin de Bonilla, Naar y Beloy. Utilidad. Las larvas de los nemtodes absorben el colorante, permitiendo diferenciar sus estructuras internas.
MPR-CNSP-015
35
5.6.2.2
Materiales. Lminas portaobjetos. Laminillas cubreobjetos. Alcohol 25%, 30%, 70%, 85% y 95%. Solucin rojo de Congo (Anexo C). Solucin de salicilato de metilo (Anexo C). Lminas excavadas. Blsamo de Canad o cytoseal. Pipeta Pasteur. Placas Petri 60 x 90 mm conteniendo los alcoholes.
5.6.2.3
Procedimiento Preparar un set de placas Petri 60 x 90 mm conteniendo los reactivos correspondientes y colocar las larvas en alcohol 25% - 30% con unas gotas de solucin de rojo de Congo por 20 a 30 minutos. Controlar por la observacin microscpica el color de las larvas. Deshidratar la muestra, pasndola por alcohol 70%, 85%, 95% y absoluto, de 20 a 30 minutos en cada uno. Colocar en solucin de salicilato de metilo durante 3 minutos. Colocar los especmenes en cytoseal, blsamo de Canad o Permount y observar al microscopio.
5.6.2.4
Lectura Los especmenes y sus estructuras internas se tien de color rojo.
5.6.2.5
Resultado Informar el nombre del parsito y su estadio evolutivo (ver Seccin 10).
5.6.3 5.6.3.1
Coloracin hematoxilina frrica de Delafield Utilidad Se usa en casos de cstodes y tremtodes. Permiten colorear estructuras internas de especmenes adultas o fragmentadas del mismo.
MPR-CNSP-015
36
5.6.3.2
Materiales Lminas portaobjetos. Laminillas cubreobjetos. Alcohol de 25%, 30%, 70%, 85% y 95%. Hematoxilina frrica. Blsamo de Canad o cytoseal. Pipeta Pasteur. Placas Petri 150 x 100 mm conteniendo los alcoholes.
5.6.3.3
Procedimiento Preparar un set de placas Petri 60 x 90 mm o 100 x 150 mm conteniendo los reactivos correspondientes, dependiendo de los especmenes a colorear. Los tremtodes y cstodes fijados con formol 10% se lavan en agua corriente. Diluir el colorante stock de 8 a 10 gotas en agua destilada y colocar los especmenes (35 mL por placa) por 12 horas. Lavar con agua corriente y pasar por agua (segundos), dependiendo del espcimen. Pasar por alcohol 50%, 30% y 10% por 10 minutos en cada uno y pasar por agua corriente el tiempo necesario para sacar el exceso de colorante. Deshidratar en alcohol 10%, 30%, 50%, 70%, 85%, 95% y 100% cada uno, por 10 minutos. Pasar dos veces por xilol, montar con blsamo de Canad y observar al microscopio.
5.6.3.4
Lectura La observacin de los especmenes se realiza en forma microscpica o con el uso del microscopio estereoscopio.
5.6.3.5
Resultado Informar el nombre del parsito y su estadio evolutivo.
5.7
FIJADORES Y/O CONSERVADORES Los fijadores sirven para preservar protozoarios, sin que se modifiquen las estructuras internas, sobre todo cuando las muestras no pueden ser procesadas inmediatamente.
MPR-CNSP-015
37
5.7.1 5.7.1.1
PAF (phenol-alcohol-formol). Utilidad. Conserva las estructuras de los parsitos (trofozotos, quistes, huevos y larvas), pudindose incluso observarse en semanas o meses (6) sin que haya ocurrido deterioro alguno. Es recomendable mantener el fijador preparado en frascos color caramelo. Adems, permite observar el material al microscopio.
5.7.1.2
Materiales. Fijador PAF (Anexo C). Tionina o azure A (Omethilene azure A ) (Anexo C). Agua destilada. Hisopo. Tubos de centrfuga de 15 mL. Aplicadores. Tritn NE. ter. Embudo de vidrio. Solucin fisiolgica (Anexo C).
5.7.1.3
Procedimiento. La muestra de heces se mezcla con el fijador en un recipiente en la proporcin 1:1.
Para la observacin microscpica: Mezclar bien la muestra fijada en PAF y con ayuda de un embudo y una gasa doblada en un tubo de 15 mL, colar de 3 a 4 mL del material fijado. Agregar solucin salina hasta un volumen de 12 mL y centrifugar a 1800 r.p.m. por 3 minutos. Decantar el sobrenadante y obtener un sedimento de 0,5 mL; si es menor, agregar de la muestra filtrada una cantidad suficiente y volver a centrifugar para obtener el volumen del sedimento deseado. Decantar el sobrenadante y completar 12 mL con solucin fisiolgica, emulsionar con el aplicador y centrifugar a 1800 r.p.m. por 3 minutos. Repetir el centrifugado y lavar de 2 a 3 veces ms. Agregar 2 mL de solucin fisiolgica al sedimento final, emulsionar y obtener una gota del sedimento con una pipeta Pasteur y colocarla en una lmina portaobjetos.
MPR-CNSP-015
38
Agregar una gota del colorante tionina o azure A, cubrir con una laminilla cubreobjetos y examinar al microscopio.
Tambin puede obtenerse una muestra para la observacin microscpica, mediante el siguiente procedimiento: 5.7.1.4 Al sedimento emulsionado y sobrante del procedimiento anterior, agregar 10 mL de solucin fisiolgica y una gota de Triton NE. Mezclar, agregar 2 mL de ter, tapar con un tapn de jebe o de corcho, agitar suavemente y destapar. Centrifugar a 2 000 r.p.m. por 3 minutos, decantar y eliminar los detritus de las paredes del tubo mediante un aplicador cubierto de algodn. Agregar al sedimento 1 2 gotas de solucin fisiolgica, mezclar y obtener del fondo del tubo con una pipeta Pasteur una gota que se colocar en una lmina portaobjeto. Agregar una gota de colorante tionina o azure A, cubrir con una laminilla y observar al microscopio
Observacin. Observar los elementos parasitarios: el citoplasma se ve de color azul y el ncleo azul oscuro.
5.7.1.5
5.7.2 5.7.2.1
PVA (Polivinil alcohol = alcohol polivinlico). Utilidad. Fija y preserva, principalmente los trofozotos y quistes de protozoarios, por tiempo muy prolongado sin modificacin importante de su morfologa.
5.7.2.2
Materiales. Solucin fijadora - conservadora de PVA (Anexo C). Aplicador. Viales de vidrio de 3 a 4 mL. Lminas portaobjetos.
5.7.2.3
Procedimiento. Colocar en una lmina portaobjetos 1 2 mg de muestra, secar el frotis, agregar 2 3 gotas de PVA y secar o guardar hasta por 3 meses para colorearlos, o Agregar al frasco que contiene la muestra v/v 1 a 4 mL. Generalmente se puede preservar por meses y cuando se considere conveniente se realizar la coloracin con Trichrome Gomori Wheatley.
MPR-CNSP-015
5.7.3 5.7.3.1
MIF (merthiolate - yodo - formol). Utilidad. Fija y colorea simultneamente los quistes y huevos de parsitos, permitiendo la observacin inmediata de la muestra.
5.7.3.2
Materiales Solucin MIF (Anexo C). Viales de vidrio de 3 a 4 mL. Aplicador.
5.7.3.3
Procedimiento. Colocar 1 2 mL de la solucin MIF en el vial con ayuda del una pipeta. Para la observacin microscpica, colocar 1 2 mL o su equivalente de la muestra fresca de heces, mezclar y observar al microscopio.
5.7.3.4
Observacin. Observar los parsitos teidos de color amarillo oro.
5.7.3.5
5.7.4 5.7.4.1
Fijadores para preservar y enviar helmintos adultos. Utilidad. Conserva ejemplares adultos para su estudio morfolgico, su preservacin en museos o para contar con muestras de referencia. Los ms usados suelen ser formol al 10%, AFA (cido actico - Formol - Alcohol) o SAF (Acetato sodio - cido actico - formol).
5.7.4.2
Materiales necesarios. Formol 10% (Anexo C). Solucin AFA (Anexo C). Alcohol 70%. Glicerina 5%. Lminas portaobjetos. Pabilo o pesas de metal segn modelo. Frascos boca ancha 150 200 mL. Placas petri 150 x 100 mm y 240 x 200 mm.
MPR-CNSP-015
5.7.4.3 a.
Procedimiento. Coleccin y lavado de los helmintos: Todo espcimen aislado del hospedero debe mantenerse fresco (agua o suero fisiolgico) en un frasco con tapa. Los adultos colectados son lavados varias veces con solucin fisiolgica, para eliminar la mucosidad y otras sustancias adheridas al cuerpo del helminto. Finalmente, se lava con agua para permitir el relajamiento del parsito Calentar a 55C de temperatura, alcohol de 70%, formol 10% AFA, para que con la fijacin los ejemplares queden estirados y pueda observarse sus estructuras internas.
b.
Fijacin: Para una conservacin apropiada usar formol 10% (para cstodes y tremtodes) o una mezcla de alcohol 70% (para nemtodes), ambos con glicerina 5%. Todos los frascos deben ser rotulados, indicando el nombre del parsito, procedencia, localizacin y fecha de coleccin. Para la identificacin, en ocasiones se requiere hacer el aclaramiento con lactofenol (Anexo C).
c.
Aplanamiento: til para cstodes y tremtodes. Se les coloca entre lminas y se las ajusta con el pabilo para favorecer su aplanamiento Se sumerge en formol 10% o AFA de 1 a 3 das, luego del cual se puede colorear o conservar como pieza de museo en formol 10% y glicerina 5%. Los tremtodes como Fasciola y/o Paragonimus pueden prepararse y conservarse siguiendo los pasos dados para los cstodes (Figura N 21).
Figura N 21. Fasciola hepatica adulto despus del aplanamiento
MPR-CNSP-015
41
SECCIN 6 CULTIVOS PARASITOLGICOS Algunos protozoos intestinales del hombre pueden ser cultivados en medios artificiales. Estos cultivos pueden servir como complemento de otros mtodos diagnsticos, con fines de enseanza, para proveer organismos en mayor cantidad para trabajos de investigacin y para preparar los antgenos. Los protozoos cuyo cultivos han demostrado ser tiles para su identificacin son Entamoeba histolytica, Giardia lamblia y Balantidium coli, en tanto, los helmintos que pueden desarrollar parte de su ciclo evolutivo en medios artificiales y sirve como ayuda diagnstica son Ancylostoma o Necator, Strongyloides stercoralis y Trichostrongylus sp. 6.1 MEDIOS DE CULTIVO PARA PROTOZOOS Los medios de cultivo para protozoos ms usados son: medio Pavlova, medio Diamond y medio de Tanabe y Chiba modificado para Entamoeba histolytica. 6.1.1 6.1.1.1 Medio Pavlova. Constituyentes. Fosfato cido de sodio 12 H20 ............................... 8,95 g Fosfato de potasio ................................................. 1,15 g Cloruro de sodio .................................................. 20,00 g Extracto de levadura.............................................. 4,00 g Agua destilada .............................................. 2750,00 mL Adicionar: 1. 37,5 mL de suero de caballo, inactivado a 56C por 30 minutos. 2. 2,75 g de almidn de arroz estril. 3. 1000 UI/mL de penicilina G sdica. 4. 50-100 ug/mL de estreptomicina.
42
MPR-CNSP-015
6.1.2 6.1.2.1
Medio Diamond. Constituyentes. Trypticase BBL ...................................................... 2,00 g Extracto de levadura DIFCO ................................. 1,00 g Maltosa .................................................................. 0,50 g Clorhidrato de L-cistena ....................................... 0,10 g Acido ascrbico ..................................................... 0,02 g Agar ....................................................................... 0,05 g Agua destilada .............................................. 1000,00 mL
6.1.2.2
Procedimiento. Ajustar el pH con hidrxido de sodio 1N a 6,8 7,0, distribuir en cada tubo 9 mL, autoclavar a 120C por 15 minutos y almacenar a 4C hasta su uso (mximo un mes). Agregar a cada tubo en el momento de la siembra, 1 mL de suero sanguneo estril, penicilina G potsica 1000 UI/mL y sulfato de estreptomicina 1 mg/mL. Llevar el registro en una ficha (Anexo G).
6.1.3 6.1.3.1
Medio de Tanabe y Chiba modificado para Entamoeba histolytica. Constituyentes. Agar ....................................................................... 2,00 g Asparagine ............................................................ 2,00 g Solucin Ringer .............................................. 100,00 mL
6.1.3.2
Procedimiento Juntar los constituyentes y disolver en bao mara. Repartir 3 mL en tubos de 15 x 150 mm, autoclavar a 100 C por 30 minutos y dejar solidificar en plano inclinado. Agregar a cada tubo 0,5 a 1 mL de solucin Ringer al que se le ha aadido previamente suero de caballo 1%.
6.1.3.3
Solucin Ringer Cloruro de sodio ................................................... 0,90 g Cloruro de potasio ................................................. 0,42 g Bicloruro de mercurio .......................................... 0,034 g Bicarbonato de sodio ................................... 0,01/0,038 g Glucosa ...................................................... 0,10 o 0,26 g Agua destilada ..................................................... 100 mL Autoclavar a 15 libras de presin por 15 minutos y almacenar a 4C hasta el momento de su uso.
MPR-CNSP-015
43
6.2 6.2.1
MTODOS DE DESARROLLO PARA HELMINTOS Placas de agar. Este mtodo permite incrementar la sensibilidad diagnstica hasta 2,5 veces ms que el mtodo de Baermann.
6.2.1.1
Constituyentes. Agar .......................................................................... 2,00 g Cloruro de sodio ....................................................... 0,50 g Agua destilada ...................................................... 100,00 mL
6.2.1.2
Procedimiento. Mezclar los reactivos, disolver y autoclavar. Repartir en placas petri (o en lminas portaobjetos), dependiendo de la densidad parasitaria, agregar la muestra en el centro de la placa, incubar a 37C de 1 a 9 das y controlar diariamente el desarrollo de larvas.
6.2.2 6.2.2.1
Agar carbn. Constituyentes. Agar .......................................................................... 2,00 g Carbn ...................................................................... 0,50 mg Agua destilada ...................................................... 100,00 mL
6.2.2.2
Procedimiento. Homogeneizar o licuar y repartir en tubos de 13 x 100 mm o placas Petri 10 x 150 mm, inocular la muestra y seguir el mismo procedimiento anterior (Podra utilizar el microcultivo usando el agar en lmina portaobjeto).
6.2.2.3 6.2.3.1
Mtodo de Harada-Mori. Utilidad. Tcnica que permite el desarrollo de huevos a estadios larvales de los nemtodes permitiendo su diferenciacin morfolgica. Es til, principalmente, para la obtencin de larvas rabditiformes y filariformes de anquilostomdeos y estrongiloideos.
6.2.3.2
Materiales. Tubos 13 x 100, 16 x 150 o 16 x 180 mm. Papel filtro. Agua corriente estril.
MPR-CNSP-015
6.2.3.3 a.
Pinza curva con aplicador. Tapn de goma o corcho. Parafilm o cinta adhesiva. Solucin fisiolgica (Anexo C). Alcohol 30%. Formalina 5%.
Procedimiento Preparacin del tubo: Agregar al tubo 1 2 mL de agua destilada o solucin salina (Figura N 22:1). Cortar una tira de papel filtro de 12-15 x 1,5-2 cm dependiendo del dimetro y tamao del tubo (Figura N 22:2). Hacer una muesca en el extremo inferior del papel filtro (Figura N 22:3).
b.
Extendido de la muestra: Con el aplicador, extender la muestra de heces (0,5 a 1 g) sobre la superficie del papel, dejando libre los extremos. Colocar cuidadosamente el papel filtro dentro del tubo, evitando el contacto de las heces con el lquido (Figura N 22:4). Tapar el tubo y rotular con los datos del paciente (Figura N 22:5). Incubar a 27C - 37C por 4 a 10 das (En la selva, a temperatura ambiente).
Figura N 22. Material del mtodo de Harada Mori tubo con tapa y papel filtro con extendido para el desarrollo de las larvas
MPR-CNSP-015
45
6.2.3
Observacin. Durante la incubacin, con ayuda de una lupa o con el microscopio (estereoscopio), se puede observar el desarrollo de larvas en el medio lquido. Para estudiar las larvas se elimina el papel filtro, se toma una gota del lquido del fondo del tubo, se coloca en una lmina portaobjeto o lmina excavada y se observa al microscopio. La diferenciacin morfolgica se har siguiendo la clave (Anexo D y Figuras N 23-25). Las larvas pueden conservarse fijndolas en alcohol 25% 30% o formalina 5%.
Figura N 23. Larvas en Ancylostoma duodenale y Necator americanus (100X) en movimento con colorante temporal eosina y azul de metileno
Ancylostoma/Necator
C E
S. stercoralis
C E
Trichostrongylus sp. Rhabditis sp.

C E C E
E: Esfago, I: Intestino; P: Primordio Genital y A: Ano
Figura N 24. Diferenciacin de las larvas rabditiformes: Strongyloides stercoralis, Necator/Ancylostoma, Trichostrongylus y Rhabditis sp
MPR-CNSP-015
46
Strongyloides stercoralis
Necator americanus
Ancylostoma duodenale
N. americanus
A. duodenale
Figura N 25. Diferenciacin de las larvas filariformes: cutcula radiada, forma ovoide de la parte anterior de Necator americanus y Ancylostoma duodenale, Strongyloides stercoralis con cola caracterstica
MPR-CNSP-015
47
6.2.4 6.2.4.1
Mtodo de Harada - Mori modificado por Mara Beltrn Fabin Procedimiento La preparacin del tubo es similar al item 6.3.1.3; pero, adems de la solucin salina o agua, se le adiciona al tubo el colorante vital tionina o verde de malaquita 0,001%. El extendido de la muestra tambin es similar al tem 6.3.1.3.
6.2.4.2
Lectura Las larvas se extraen del fondo del tubo con una pipeta de transferencia y se observan coloreadas y en movimiento (Figura N 26).
Figura N 26. Larvas de Necator americanus en movimiento coloreado con tionina y verde de malaquita (100X). Desarrollo en el mtodo de Harada - Mori modificado por Mara Beltrn Fabin
MPR-CNSP-015
48
SECCIN 7 EXAMEN DE SECRECIONES Y/O FLUIDOS 7.1 7.1.1 ESPUTO Utilidad Los helmintos que realizan el ciclo de Loss suelen ocasionar sintomatologa pulmonar, pudiendo encontrarse en una muestra de esputo. Las larvas de S. stercoralis son las ms frecuentemente observadas en esputo y las heces. Por la posibilidad de encontrar estos elementos parasitarios en el esputo, es necesario conocer los principales mtodos diagnsticos. 7.1.2 7.1.2.1 7.1.2.2 7.1.2.3 7.1.2.4 7.1.2.5 7.1.2.6 7.1.2.7 7.1.2.8 7.1.3 Materiales Lminas portaobjetos. Laminillas cubreobjetos. Vaso cnico o de vidrio de 150 a 200 mL. Coladera o rejilla metlica. Pipetas Pasteur. Solucin de hidrxido de sodio 2% al 4%. Gasa. Microscopio ptico. Obtencin de la muestra Se obtiene por expectoracin en un frasco limpio de boca ancha. 7.1.4 7.1.4.1 Strongyloides stercoralis Procedimiento Usar el mtodo de Baermann, reemplazando nicamente la muestra de heces por la de esputo. Con ayuda de una pipeta Pasteur, obtener el sedimento, colocar en una luna de reloj o placa Petri y observar al estereoscopio o microscopio.
7.1.4.2
Observacin Observar las larvas en movimiento.
MPR-CNSP-015
49
7.1.5 7.1.5.1
Paragonimus spp. Procedimiento: Tcnica AMS III modificada (AMS = American modified service). Agregar al frasco con la muestra (4 a 8 mL) 20 a 30 mL de hidrxido de sodio 2% - 4% y, a travs de un colador con gasa, vaciar a un tubo cnico de 50 mL. Centrifugar a 2500 r.p.m. de 5 a 10 minutos, eliminar el sobrenadante, agregar hidrxido de sodio 2% al sedimento hasta llenar el tubo y dejar en reposo de 45 a 60 minutos. Con ayuda de una pipeta Pasteur, obtener 1 2 gotas de sedimento, colocarlo en una luna de reloj o placa Petri y observar al estereoscopio o microscopio.
7.1.5.2.
Observacin. Observar huevos operculados caracterizados por presentar una cubierta externa ondulada (Figura N 6).
7.2 7.2.1 7.2.1.1
ASPIRADOS, SECRECIONES O JUGO DUODENAL Utilidad. Los parsitos intestinales que tiene por hbitat el duodeno, pueden encontrarse en muestras biliares, obtenidas ya sea por sonda duodenal, por el mtodo de la cuerda encapsulada (Enterotest) o por la cpsula de Beal. Los parsitos intestinales que tienen por hbitat el intestino grueso o delgado, tambin pueden obtenerse a partir de endoscopas gastrointestinales, proctoscopas o colonoscopas. La obtencin del contenido duodenal ha mostrado ser til en la bsqueda de Giardia lamblia, Isospora belli, Strongyloides stercoralis, Ancylostoma o Necator y Fasciola hepatica, cuyos adultos se localizan en las vas biliares. La obtencin de material a travs de endoscopa gastrointestinal es til en la bsqueda de coccidios intestinales, en tanto que las proctoscopas y colonoscopas sirven para la bsqueda de Entamoeba histolytica. Materiales. Para realizar el mtodo de la cuerda encapsulada es necesario: Cuerda encapsulada. Guantes. Vaso de bebida. Papel pH. Placas petri o lunas de reloj. Lminas portaobjetos. Lminas de vidrio cavadas.
7.2.1.2 7.2.1.3
7.2.1.4
7.2.2
MPR-CNSP-015
Laminillas cubreobjetos. Microscopio binocular.
Nota: La obtencin del contenido duodenal o muestra biliar por sonda, requiere la intervencin de personal mdico para la introduccin y retiro de la sonda duodenal. 7.2.3 7.2.3.1 7.2.3.2 Procedimiento. El mtodo de la cuerda encapsulada o Enterotest requiere que el paciente est en ayunas. Un extremo de la cuerda se fija con una cinta adhesiva en la mejilla del paciente y se le hace deglutir la cpsula, en cuyo interior est enrollada una cuerda de nylon, la que se va desenrollando a medida que desciende por el estmago y duodeno. A las 4 5 horas se retira la cuerda, observndose el extremo que lleg al duodeno de color amarillo Se exprime el extremo en una lmina excavada o lmina portaobjeto. El material obtenido por la sonda duodenal se deposita en un tubo de centrfuga. Una pequea porcin se deposita en una lmina excavada o portaobjeto. Examen microscpico. Las gotas de bilis o contenido duodenal depositadas en las lminas excavadas o portaobjetos se observan directamente al estereomicroscopio y/o microscopio y luego con tincin de lugol. Al resto del contenido duodenal obtenido con sonda se le agrega una solucin de hidrxido de sodio 2%, se trasvasa a un tubo de 13 x 100 15 x 150 dependiendo de la cantidad, se mezcla tapando el tubo y, por agitacin se liberan las formas parasitarias del mucus duodenal. Dejar reposar de 30 a 45 minutos, eliminar el sobrenadante y observar el sedimento directamente o con tincin de lugol. Observacin. Se observa al estereoscopio o microscopio. 7.2.6 Resultado. Informar el nombre del parsito y su estadio evolutivo (Seccin 10). 7.3 SECRECIN, FLUIDO Y CONTENIDO INTESTINAL El aspirado del contenido de lesiones intestinales a travs de exmenes endoscpicos (gastrointestinal, proctoscopa o colonoscopa), ciruga y otros, pueden examinarse inmediatamente despus de obtenido mediante observacin directa y en ocasiones en cmara de Foot o en microscopios de platina caliente, como es el caso de las muestras obtenidas por proctoscopa realizadas para la bsqueda de los trofozotos de Entamoeba histolytica.
MPR-CNSP-015 51 Instituto Nacional de Salud
7.2.3.3 7.2.3.4 7.2.3.5 7.2.4 7.2.4.1 7.2.4.2
7.2.4.3 7.2.5
SECCIN 8 DIAGNSTICO DE Enterobius vermicularis POR EL MTODO DE GRAHAM (CINTA ADHESIVA TRANSPARENTE) 8.1 FUNDAMENTO La hembra de Enterobius vermicularis deposita sus huevos en las mrgenes del ano durante la noche. La tcnica de Graham tiene por objeto adherir estos huevos a la cinta adhesiva transparente o cinta scotch, la que se extender posteriormente en una lmina portaobjeto para su observacin microscpica. 8.2 8.2.1 8.2.2 8.2.3 8.2.4 8.3 8.3.1 MATERIALES Lminas portaobjetos desengrasadas. Cinta adhesiva transparente o cinta scotch de 1 pulgada de ancho. Solucin salina o tolueno. Aplicador (bajalengua). PROCEDIMIENTO Extender la cinta adhesiva transparente sobre la superficie de la lmina portaobjeto, adheriendo una porcin pequea a ambos extremos, dejando una lengeta separar la cinta de la lmina portaobjeto cuando se va a tomar la muestra (Figura N 27a). b. a. c.
Figura N 27. Preparacin de la lmina con cinta adhesiva transparente y bajalenguas, envuelto con papel kraft
8.3.2
La obtencin de la muestra se realiza en la noche, 2 a 3 horas despus que el paciente (generalmente nios) est dormido, o a la maana siguiente y sin que se haya realizado el aseo de la regin perianal. El paciente debe estar inclinado exponiendo la regin gltea, se despega la cinta adhesiva levantando la lengeta hasta que quede expuesta la parte adherente y, con ayuda de un bajalengua, se aplica el lado adhesivo (Figura N 28 A). Se adhiere la cinta haciendo toques en la regin perianal en sentido horario o antihorario (Figura N 28B).
8.3.3
8.3.4
MPR-CNSP-015
(A)
(B)
(C)
Figura N 28. Procedimiento de recoleccin de la muestra
8.3.5
Terminada la aplicacin, extender la cinta adhesiva (Figura 28C) y volverla a pegar en la lmina portaobjeto, envolver con el papel y colocar el nombre del paciente. Microscopa de las lminas. En el laboratorio, se desprende la cinta engomada del frotis perianal por un extremo, se agrega solucin de tolueno, hidrxido de sodio 2% o solucin salina, aplicando 1 2 gotas de la sustancia elegida que clarificar la muestra y que permitir una mejor observacin de los huevos y/o adultos de E.vermicularis. Es necesario observar la lmina en su totalidad. En ocasiones, se pueden observar al microscopio, huevos de otros helmintos, principalmente huevos de Taenia sp., Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura entre otros. OBSERVACIN Observar los huevos embrionados o hembra adulta de E. vermicularis.
8.3.6 8.3.6.1
8.3.6.2
8.4
8.5
RESULTADO Informar el nombre del parsito y su estadio evolutivo (Figura N 29).
Figura N 29. Huevos de Enterobius vermicularis (izq.) y Ascaris lumbricoides (der.) obtenidos por el mtodo de Graham (100X)
MPR-CNSP-015
53
SECCIN 9 EXAMEN DE BIOPSIAS 9.1 9.1.1 BIOPSIAS DEL TUBO DIGESTIVO Las biopsias que son tiles para la bsqueda de parsitos son las obtenidas del antro pilrico, duodeno y recto mediante endoscopas. Los parsitos diagnosticados frecuentemente en biopsias del antro-pilrico y del duodeno son Strongyloides stercoralis y Giardia lamblia, menos frecuente es la observacin de coccidias intestinales como Cryptosporidium y Cyclospora. Las biopsias de ulceraciones del intestino grueso muestran Entamoeba histolytica o Balantidium coli. Las piezas operatorias que son objeto de examen histolgico pueden demostrar la presencia de parsitos intestinales, por ejemplo: Enterobius vermicularis adultos en la luz del apndice o Ascaris lumbricoides en una obstruccin mecnica de intestino, vas biliares o conducto pancretico. RECOMENDACIONES La bsqueda de parsitos intestinales en cortes histolgicos obtenidos por biopsia o necropsia no requiere, en general, de tcnicas de coloracin especiales. La coloracin de hematoxilina-eosina es til, aunque generalmente no es posible reconocer la morfologa del parsito, pues el corte microscpico afecta su integridad. Las piezas anatmicas pueden conservarse en formol al 10% para ser usadas como piezas de museo o muestras de referencia.
9.1.2
9.1.3
9.1.4
9.2 9.2.1
9.2.2
9.2.3
MPR-CNSP-015
54
SECCIN 10 RESULTADOS 10.1 10.1.1 GENERALIDADES Los resultados indicarn el(los) mtodo(s) empleado(s), el gnero o la especie del parsito observado y su estadio evolutivo. La densidad parasitaria puede expresarse como el nmero de formas parasitarias observadas por campo de microscopio con objetivo de 10X y 40X. Todo formato de respuesta de resultados debe contener los datos de identificacin: nombre, edad, sexo, fecha, las caractersticas organolpticas de las heces (consistencia, color, presencia de sangre y moco), datos de la observacin microscpica (presencia de leucocitos, eritrocitos, levaduras, fibras musculares no digeridas y parnquima de clulas vegetales en cantidad considerable), ya que esta informacin facilitar un mejor diagnstico clnico. Los resultados obtenidos deben registrarse en un libro de registros del laboratorio. En el caso de los laboratorios de la Red Nacional de Laboratorios de Salud Pblica, siguiendo las normas de control de calidad, el 10% de las muestras deben conservarse en el fijador, siendo mensual, trimestral y anualmente remitidas al laboratorio inmediato en jerarqua para establecer la concordancia de los resultados (Anexo F). Para la vigilancia de las infecciones parasitarias establecida por el Instituto Nacional de Salud llenar las fichas correspondientes (Anexo F). RESULTADO POSITIVO El informe debe contener el nombre del paciente, los agentes observados y su estadio o forma evolutiva: quistes (q), ooquistes (o), trofozotos (t), esporas (e), huevos (h) o larvas (l). La intensidad parasitaria puede expresarse cualitativa o semicuantitativamente: Cualitativamente: Escaso, regular o buena cantidad, segn sea el grado de facilidad o dificultad para ubicarlos. 10.2.2.2 Semicuantitativamente: Contando las formas parasitarias: Si se observan 1 2 elementos en toda la lmina, escribir el nombre del agente y su estadio evolutivo (+) Si se observan de 2 a 5 elementos por campo microscpico 10X 40X.
10.1.2
10.1.3
10.1.4 10.2 10.2.1 10.2.2 10.2.2.1
(++) Si se observan de 6 a 10 elementos por campo microscpico 10X 40X. (+++) Si se observan >10 elementos por campo microscpico 10X 40X. 10.3 10.3.1 RESULTADO NEGATIVO Informar que no se observaron quistes, trofozotos, ni huevos de parsitos.
55
MPR-CNSP-015
10.4
FORMATO PARA ENTREGA DE RESULTADOS
CENTRO NACIONAL DE SALUD PBLICA LABORATORIO DE ENTEROPARSITOS
MINISTERIO DE SALUD INSTITUTO NACIONAL DE SALUD

Dr(a):
INFORME DE RESULTADOS
Establecimiento : CONSULTORIO PARTICULAR Referencia :
BOLETA DE VENTA N. xxx-xxxxxxx
CONSULTORIO PARTICULAR
LIMA
LIMA
LIMA
Fecha recep. INS : Fecha recep. Lab. :
09/12/2002
Mdico solic. : DIVISIN DE PARASITOLOGA
Fecha de emisin :
N Muestra Tipo de Muestra

12-42075-2002 HECES
Paciente
XXX XXX XXXX
Prueba Realizada
DIAGNSTICO DE ENTEROPARSITOS POR MTODO DIRECTO CONCENT.
Resultado
Blastocystis hominis (t) Chilomastix mesnili (t)
12-42220-2002
HECES
XXX XXX XXXX
DIAGNSTICO DE ENTEROPARSITOS POR MTODO DIRECTO CONCENT.
Blastocystis hominis (t) Chilomastix mesnili (t)
t = trofozoitos
Personal responsable
Jefe(a) de Divisin
Jefe(a) de Laboratorio
MPR-CNSP-015
56
BIBLIOGRAFA
Alvarez B. Parasitosis intestinales: aspectos diagnsticos. Ginebra: OMS; 1964. Serie de Informes Tcnicos. Arruda B, Magallhaes E, Freitas N. Manual de tcnicas para histologa normal y patolgica. Sao Paulo: EDART; 1976. Ash L, Orihel T. Parasites: a guide to laboratory procedures and identification. ASCP Press American Society of Clinical Pathologist. Chicago: ASCP; 1967. Atas A, Neghme A. Parasitologa clnica. 3ra. ed.; 1991. Beltrn M. Enteroparsitos. Manual de nivel local. Washington DC: OPS; 1993. Botero D., Restrepo M. Parasitosis humanas. Colombia: CIB; 1990. Instituto Nacional de Salud. Gua de procedimientos diagnsticos de las parasitosis intestinales. Lima: INS; 1998. Instituto Nacional de Salud. Manual de procedimientos de laboratorio para la obtencin y envo de muestras (I). 2da. Ed. Lima: INS, 1997. Serie de Normas Tcnicas N 15. Instituto Nacional de Salud. Normas de bioseguridad. 2da. Ed.: Lima: INS; 1997. Serie de Normas Tcnicas N 18. ISO (International Standard Organization = Cumplimiento de normas del sistema de calidad) 15189. Montevideo: Instituto Uruguayo de Normas Tcnicas; 1993. Moura H. Cram - Chromotrope a new technique that enhances detection of microsporidial spores in clinical samples; 1997. Organizacin Mundial de la Salud. Infecciones Intestinales por protozoos y helmintos. Ginebra: OMS; 1981. Serie Informes Tcnicos. Organizacin Mundial de la Salud. Mtodos bsicos de laboratorio en parasitologa. Ginebra: OMS; 1991. Organizacin Mundial de la Salud. Medios auxiliares para el diagnstico de las parasitosis intestinales. Ginebra: OMS; 1995. Organizacin Panamericana de la Salud. Manual de laboratorio nivel local. Washington: OPS; 1993. Shore L, Lawrence R. Diagnostic Parasitology. Manual of clinical laboratory. C.V Mosby Co.; 1975. Spencer FM, Monroe LS. The color atlas of intestinal parasites. Illinois; Ch Thomas Publisher. Springfield 1961. Suzuki N. Color atlas of helmintology eggs. 3er. ed. Tokio: JAPC; 1986.
MPR-CNSP-015
57
ANEXO A PRINCIPALES PARSITOS INTESTINALES DEL HOMBRE Tabla A1. Protozoarios: formas evolutivas de diagnstico, tipo de muestra y patogenecidad PROTOZOARIOS Formas evolutivas para el diagnstico
Clase Lobosea
Entamoeba histolytica Entamoeba dispar Entamoeba coli Entamoeba hartmanni Entamoeba polecki Endolimax nana Iodamoeba btschlii Blastocystis hominis Trofozotos, quistes Trofozotos, quistes Trofozotos, quistes Trofozotos, quistes Trofozotos, quistes Trofozotos, quistes Trofozotos, quistes Trofozotos Heces Heces Heces Heces Heces Heces Heces Heces s no no no no no no s
Parsitos
Tipo de muestra
Patogenicidad
Clase Zoomastigophorea
Giardia lamblia Trichomonas hominis Enteromonas hominis Retortamonas intestinalis Chilomastix mesnili Dientamoeba fragilis Balantidium coli Trofozotos, quistes Trofozotos Trofozotos, quistes Trofozotos, quistes Trofozotos, quistes Trofozotos, Heces, contenido duodenal Heces Heces Heces Heces Heces Heces s no no no no s s
Clase Ciliata
Trofozotos, quistes Phylum Apicomplexa Clase Sporozoa Isospora belli Cryptosporidium sp. Cyclospora cayetanensis Sarcocystis (bovis-hominis, bovis-canis, suis hominis=Isospora hominis) Ooquistes Ooquistes Ooquistes Heces, contenido duodenal Heces, secreciones Heces, contenido duodenal s s s
Esporoquiste
Heces
Enterocytozoon bieneusi Encephalitozoon sp. Pleistophora
Phylum Microspora Clase Sporozoa Microsporidios Esporas Heces Esporas Heces Esporas Heces, fludos
s s s
MPR-CNSP-015
58
Protozoarios intestinales: Amebas
Figura A1.1. Entamoeba histolytica con 1, 2 y 4 ncleos, coloracin lugol (400X)
Figura A1.2. Trofozoto de Entamoeba histolytica con glbulos rojos (1000X)
Figura A1.3. Trofozoto de Entamoeba histolytica, coloracin lugol (400X)
Figura A1.4. Trofozoto de Entamoeba histolytica con coloracin tricrmica (1000X)
Figura A1.5. Entamoeba coli con solucin salina (izq.) y lugol (der.)
Figura A1.6. Quiste de Endolimax nana con 4 ncleos. Coloracin lugol (izq.), Coloracin MIF (der.)
Figura A1.7 Quiste de Endolimax nana con 4 ncleos con coloracin hematoxilina frrica
Figura A1.8. Iodamoeba btschlii con coloracin tricrmica
Figura. A1.9. Trofozoto de Blastocystis hominis, Coloracin: Azul de metileno (400X).
Fuente: Lminas WHO 1994, Figuras A1.3 y A1.9 fotografas originales.
MPR-CNSP-015
59
Protozoarios intestinales: Flagelados, ciliados y coccidios
Figura A1.10. Quistes de Giardia lamblia, (lugol)
Figura A1.11. Trofozoto de Giardia lamblia, con coloracin tricrmica y hematoxilina frrica (1000x)
Figura A1.12. Trofozoto de Giardia lamblia, con tionina (200x)
Figura A1.13. Trichomonas hominis con coloracin tricrmica (1000x)
Figura A1.14. Quistes y trofozotos de Chilomastix mesnili, Solucin salina (200x)
Figura A1.15. Dientamoeba fragilis, Hematoxilina frrica (1000X)
Figura. A1.16. Quistes y trofozotos de Balantidium coli, coloracin tricrmica (100x)
Figura. A1.17. Isospora belli en formalina
Figura A1.18. Cryptosporidium parvum, coloracin: Ziehl-Neelsen (1000X)
Figura A1.19. Cyclospora cayetanensis con coloracin Ziehl-Neelsen
Figura A1.20. Sarcocystis hominis en formalina 10%
Figura A1.21. Enterocytozoon bieneusi, coloracin Gram-chromotrope
Fuente: Lminas WHO 1994, Figuras A1.11, A1.12, A1.13, A1.14, A1.16 y A1.18 fotografas originales.
MPR-CNSP-015
60
Tabla A2. Helmintos: formas evolutivas de diagnstico, tipo de muestra y patogenicidad HELMINTOS Formas evolutivas para el diagnstico
Phylum Nematoda Clase Aphasmidea Ascaris lumbricoides Ancylostoma duodenale Necator americanus Trichuris trichiura Capillaria sp. Adultos, juveniles, huevos Anquilostomdeos Larvas, huevos Larvas, huevos Huevos Huevos Clase Phasmidea Adultos, huevos, larva rabditiforme Adulto hembra, huevos Huevos, larvas Heces Heces Heces Heces s s s s Heces s
Parsitos
Tipo de muestra
Patogenicidad
Strongyloides stercoralis Enterobius vermicularis Trichostrongylus sp.
Heces, contenido duodenal, esputo Frotis perianal, hisopado anal, heces Heces
s s s
Taenia solium Taenia saginata Diphyllobothrium pacificum Dipylidium caninum Hymenolepis nana Hymenolepis diminuta
Fasciola heptica Paragonimus peruvianus = P. mexicanus Clonorchis sp Schistosoma mansoni Echinostoma sp. Macracanthorhynchus hirudinaceus Meloidogyne sp. Heterodera sp.
Phylum Platyhelminthes Clase Cestoda Fragmentos de Heces, estrbila, progtidos, frotis perianal huevos Fragmentos de Heces, estrbila, progtidos, frotis perianal huevos Adulto, estrbila, Heces progltidos, huevos Estrbila, progltidos, Heces cpsulas ovgeras Huevos Heces Huevos Heces Clase Trematoda Heces, Huevos contenido duodenal, esputo Huevos Esputo, heces Huevos Heces Huevos Heces Huevos Heces Phylum Acanthocephala Huevos, adultos Fitoparsitos Huevos, larvas Huevos, larvas Heces, cirugas o autopsias Heces Heces
s s s s s s
s s s s s
? ?
MPR-CNSP-015
61
Helmintos: Nemtodes
Figura A2.1. Huevo fertilizado de Ascaris lumbricoides
Figura A2.2. Huevo de Ancylostoma duodenale con tionina
Figura A2.3. Huevo de Necator americanus
Figura A2.4. Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura y Ancylostoma/Necator (solucin salina)
Figura A2.5. Necator americanus (N) y Ancylostoma duodenale (A) (larvas filariformes), coloracin tionina (200X)
Figura A2.6. Strongyloides stercoralis en solucin de lugol
Figura A2.7. Huevos de Enterobius vermicularis con eosina (400X)
Figura A2.8. Meloidogyne sp. (arriba) y Enterobius vermicularis (abajo) en solucin salina (400X)
Figura A2.9. Trichostrongylus sp., coloracin verde de malaquita (400X)
Fuente: Lminas WHO 1994, Figuras A2.1, A2.2, A2.3 y las otras fotografas originales.
MPR-CNSP-015
62
Helmintos: Platelmintos (cstodes y tremtodos)
Figura A2.10. Huevo de Taenia sp., coloracin lugol (200X)
Figura A2.11. Huevo de Diphyllobothrium pacificum, coloracin lugol (100X)
Figura A2.12. Huevos de Dipylidium caninum en cpsula ovgera, coloracin eosina (200X)
Figura A2.13. Huevo de Hymenolepis nana con solucin lugol (200X)
Figura A2.14. Huevo de Hymenolepis diminuta con solucin de lugol (400X)
Figura A2.15. Huevos de Fasciola hepatica, solucin salina (200X)
Figura A2.16. Huevos de P. mexicanus = Paragonimus peruvianus (400X)
Figura A2.17. Huevos de Paragonimus peruvianus = P. mexicanus (100X)
Figura A2.18. Clonorchis sinensis con solucin (400X)
Fuente: Fotografas originales.
MPR-CNSP-015
63
ANEXO B
ALGORITMOS PARA EL EXAMEN PARASITOLGICO
ALGORITMO B1 EXAMEN PARASITOLGICO I. Observacin macroscpica: mucus, sangre, especmenes Heces Fluidos: esputo, contenido duodenal Secrecin: biliar
1. MUESTRA
II. Observacin microscpica
2. MTODO DIRECTO
3. MTODOS ESPECIALES E. histolytica G. lamblia Balantidium coli Cultivo Harada - Mori A. duodenale N. americanus S. stercoralis
4. MTODOS DE CONCENTRACIN
TUBO
COPA o VASO AMS III Fluidos Paragonimus
Sedimentacin Solucin salina
Flotacin Sheather sugar Sulfato de zinc
Sedimentacin por flotacin M.Ritchie o Teleman
Sedimentacin rpida Paragonimus Ascaris Fasciola
Baermann Strongyloides Ancylostoma Balantidium
G.lamblia E.histolytica Cryptosporidium sp. S.stercoralis Ancylostoma/Necator
MPR-CNSP-015
64
ALGORITMO B2 MUESTRAS FRESCAS DE HECES
DIARREICAS
LQUIDAS
Sin moco
Con moco
Sin moco
Con moco
Solucin salina y lugol
Positivo
Negativo
Concentracin por sedimentacin
G. lamblia Cryptosporidium sp E. histolytica I. belli B. hominis Cyclospora S. stercoralis Baermann S. stercoralis B. coli
Frotis del sedimento
Ziehl - Neelsen Cryptosporidium
Hematoxilina frrica E.histolytica
Gram-Trichrome Microsporidios
MPR-CNSP-015
65
ALGORITMO B3 MUESTRAS FIJADAS
PAF
MIF
FORMALINA 10%
SAF, SCHAUDINN, PVA
MTODO DIRECTO
MTODO DE CONCENTRACIN
Trofozotos Quistes Ooquistes Huevos Larvas Hematoxilina frrica
COLORACIN: - Quistes y trofozotos de protozoarios
- Trofozotos E. histolytica, G. lamblia, etc.
MPR-CNSP-015
66
ANEXO C
PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES C1 C1.1 C1.1.1 COLORANTES Para Protozoarios Chromotrope Chromotrope 2R .................................................... 0,60 g Verde Brillante ....................................................... 0,30 g Acido fosfotngstico .............................................. 0,70 g Acido actico ...................................................... 1,00 mL Agua destilada ................................................ 100,00 mL C1.1.2 May Grunwald May Grunwald ....................................................... 0,24 g Alcohol absoluto ............................................. 100,00 mL C1.1. 3. Hematoxilina frrica (Solucin Stock) Hematoxilina frrica ............................................... 5,00 g Alcohol 95%.................................................... 100,00 mL Al momento de colorear, mezclar 1 mL de la solucin stock con 9 mL de agua destilada. C1.1.4. Fucsina fenicada (Ziehl Neelsen modificado) Fucsina .................................................................. 4,00 g Fenol...................................................................... 8,00 g Alcohol 95%...................................................... 20,00 mL Tween 80 tergitol ............................................. 1,00 mL Agua destilada .................................................. 80,00 mL Disolver la fucsina con alcohol, mezclar con fenol y adicionar agua destilada. C1.1.5 Verde de malaquita para Cryptosporidium Verde de malaquita .............................................. 1,00 g Alcohol 95%.................................................... 100,00 mL C1.1.6 Azul de metileno Azul de metileno ............................................ 1,00-1,40 g Agua destilada ................................................ 100,00 mL
MPR-CNSP-015
67
C1.2 C1.2.1 1.
Para microsporidios Coloracin Gram Cristal violeta .............................................................. 1% Cristal violeta o violeta de genciana ...................... 1,00 g Agua destilada ................................................ 100,00 mL Solucin de lugol (Yodo de Gram) Yodo ...................................................................... 1,00 g Yoduro de potasio .................................................. 2,00 g Agua destilada ................................................ 300,00 mL Colocar 100 mL de agua y disolver yoduro de potasio en 30 mL de agua, agregar yodo y mezclar hasta que se disuelva, aadir el resto de agua y almacenar en un frasco oscuro.
2.
C1.2.2
Chromotrope 2R Chromotrope 2R ....................................................... 6,00 Verde brillante........................................................ 0,15 g Acido fosfotngstico .............................................. 0,70 g Acido actico glacial .............................................. 3,00 g Agua destilada ................................................ 100,00 mL Mezclar los ingredientes cristales con cido actico glacial, reposar por 30 minutos y agregar el agua destilada. Tamponar con cido clorhdrico 1N pH 2,5.
C1.3 C1.3.1
Para helmintos Carmn clorhdrico Carmn ................................................................... 5,00 g Acido clorhdrico ................................................. 5,00 mL Alcohol 95%.................................................... 200,00 mL Agua destilada ................................................ 100,00 mL Triturar el carmn en un mortero y aadir cido, alcohol de 95% y agua, dejar en reposo por una hora y colocar la mezcla en bao mara por una hora. En caso de evaporacin, completar con alcohol 95%, dejar enfriar y filtrar.
C1.3.2 1.
Hematoxilina Delafield Solucin acuosa saturada de alumbre de amonio Solucin de alumbre de amonio ......................... 20,00 g Agua destilada ................................................ 100,00 mL Hematoxilina .......................................................... 1,00 g Alcohol absoluto ............................................... 10,00 mL
2.
MPR-CNSP-015
Preparar ambas soluciones (1 y 2), aadir gota a gota la solucin 1 a la solucin 2, dejar madurar de 15 das a un mes, filtrar y aadir 25 mL de glicerina y 25 mL de alcohol metlico. C1.3.3 Rojo de Congo 1% Rojo de Congo....................................................... 1,00 g Agua destilada ................................................ 100,00 mL C1.3.4 Tionina Tionina .............................................................. 10,00 mg Agua destilada ................................................ 100,00 mL C1.3.5 Azure A Azure A ( Omethylene azure)........................... 10,00 mg Agua destilada .................................................. 80,00 mL C1.3.6 Verde de malaquita con solucin glicerinada (mtodo de Kato Katz) Glicerina comercial ......................................... 100,00 mL Agua destilada ................................................ 100,00 mL Verde de Malaquita 0.3% ................................... 1,00 mL (1 g + alcohol de 95% 100 mL) C1.3.7 1. Eosina 1% Eosina Y ................................................................ 1,00 g Agua destilada .................................................. 20,00 mL Alcohol 95%...................................................... 80,00 mL Disolver la eosina Y en agua destilada y adicionar el alcohol. 2. Solucin colorante stock de eosina Solucin de eosina ........................................... 10,00 mL Alcohol 80%...................................................... 70,00 mL COLORANTES VITALES Para protozoarios Rojo neutro .............................................................. 0,1% Verde brillante.......................................................... 0,1% Azul de cresil brillante.............................................. 0,2% Diluir en solucin salina. C2.2 Para helmintos Azul de cresil brillante............................................ 0,02% Azul de metileno .................................................... 0,02% Rojo neutro ............................................................ 0,02%
C2. C2.1
C3 C3.1
FIJADORES O CONSERVADORES PAF Fenol................................................. 20,00 g 23,00 mL Suero fisiolgico ............................................. 825,00 mL Alcohol 95%.................................................... 125,00 mL Formaldehdo ................................................... 50,00 mL Mezclar los ingredientes y repartir en frascos con tapa de 10 a 20 mL.
C3.2
PVA Alcohol polivinlico ................................................ 5,00 gr Solucin 1: Acido actico glacial ........................................... 5,00 mL Glicerol ............................................................... 1,50 mL Solucin Schaudinn .......................................... 93,50 mL (o hidrxido de sodio 4,00 g) Solucin 2 (Solucin Schaudinn): Bicloruro de mercurio 6% ................................. 20,00 mL Acido actico glacial 5% ..................................... 1,50 mL Alcohol etlico 95% ........................................... 10,00 mL
C3.3
MIF Solucin A : Glicerol ............................................................... 5,00 mL Agua destilada ................................................ 200,00 mL Merthiolate N 99 Lilly 1:100 ........................... 200,00 mL Formaldehido.................................................... 25,00 mL Solucin B: Yodo ...................................................................... 5,00 g Ioduro de potasio ................................................. 10,00 g Agua destilada ................................................ 100,00 mL Agregar a cada gramo de heces 9,40 mLde Solucin A y 0,60 mL de Solucin B
C3.4
AFA Formaldehdo 37 / 40% .................................... 10,00 mL Alcohol 95%...................................................... 50,00 mL Acido actico glacial ........................................... 5,00 mL Agua destilada .................................................. 45,00 mL
C3.5
SAF Acetato de sodio .................................................. 15,00 g Acido actico glacial ......................................... 20,00 mL Formol .............................................................. 40,00 mL Agua destilada ................................................ 925,00 mL
MPR-CNSP-015
70
C3.6 1. 2.
Formol al 10% Formaldehdo (40%) ....................................... 100,00 mL Agua destilada ................................................ 900,00 mL Formalina 10% Formol .............................................................. 10,00 mL Solucin salina 0.85% ...................................... 90,00 mL PBS 0,01 M pH 7,2 Solucin Schaudinn Bicloruro de mercurio (6%) ............................... 20,00 mL Alcohol 95%...................................................... 10,00 mL Acido actico glacial ......................................... 1,50 mL
C3.7
C3.8
American modified service (AMS III) para muestras de secreciones o fluidos Solucin A (cido clorhdrico) ............................. 4,50 mL Agua destilada ................................................ 100,00 mL Solucin B (Sulfato de sodio) ............................. 9,60 g Agua destilada ................................................ 100,00 mL Mezclar la solucin A y B v/v y agregar 2 mL de ter.
C3.9 C3.9.1
Otros fijadores para larvas de Strongyloides, Ancylostoma o Necator Solucin de picromato. Bouin Solucin acuosa saturada de cido pcrico ...... 30,00 mL Formaldehdo (37%) ......................................... 10,00 mL cido actico glacial ........................................... 2,00 mL
C3.9.2
Formol comercial ............................................... 5,00 mL cido actico glacial ........................................... 2,00 mL Solucin salina 0,85% ...................................... 93,00 mL
C4 C4.1
SOLUCIONES Suero fisiolgico Cloruro de sodio .................................................... 8,50 g Agua destilada .............................................. 1000,00 mL
C4.2
Solucin de sulfato de zinc Sulfato de zinc ..................................................... 33,30 g Agua destilada .............................................. 1000,00 mL Mezclar hasta la completa dilucin del sulfato de zinc y medir la densidad de la solucin, la que debe ser 1,180.
MPR-CNSP-015
71
C4.3
Solucin de lugol Yodo metlico ........................................................ 1,00 g Yoduro de potasio .................................................. 2,00 g Agua destilada ................................................ 100,00 mL Triturar juntos el yodo y yoduro en un mortero, aadir agua poco a poco y mover lentamente hasta su disolucin, aadir el resto de agua y conservar en un frasco mbar.
C4.4
Solucin de Sheather Sugar Sacarosa o azcar blanca ................................. 500,00 g Agua destilada ................................................ 320,00 mL Formol (o fenol) ................................ 10,00 mL (6,00 mL)
C4.5
Solucin saturada de azcar Sacarosa (azcar rubia) .................................... 500,00 g Agua destilada ................................................ 500,00 mL Formol 40% ...................................................... 10,00 mL
C4.6
Solucin mordiente Sulfato de fierro y amonio...................................... 4,00 g Agua destilada ................................................ 100,00 mL
C4.7 C4.8
Solucin de salicilato de metilo Solucin de alcohol-cido 3% cido clorhdrico concentrado ............................ 3,00 mL Etanol al 95% ................................................... 97,00 mL
C4.9
Solucin de hidrxido de sodio Hidrxido de sodio ................................................. 4,00 g Agua destilada ................................................ 100,00 mL
C4.10
Tintura de yodo (solucin madre) Yodo ...................................................................... 5,00 g Yoduro de potasio ................................ 3,00 g 7,00 mL Alcohol 95%...................................................... 20,00 mL Agua destilada .................................................... 7,00 mL Diluir el yoduro de potasio en 10mL de alcohol, aadiendo agua a los cristales restantes.
MPR-CNSP-015
72
C4.11
Buffer fosfato (PBS) 0.01 M pH 7.2 Na2HP0412 H20 ...................................................... 2,60 g Na Na2P04 H20 ....................................................... 0,38 g NaCl....................................................................... 8,38 g Completar el agua a ..................................... 1000,00 mL
C4.12 C4.12.1
Solucin para aclarar helmintos Lactofenol de Aman Acido fnico (qp).................................................... 1,00 g Acido lctico ....................................................... 1,00 mL Glicerina ............................................................. 2,00 mL Agua destilada .................................................... 1,00 mL
C4.13
Solucin de colorante (coloracin tricrmica) Acido Actico glacial al 1% ................................. 1,00 mL Alcohol 90%...................................................... 99,00 mL
C4.14 C4.14.1
Soluciones desinfectantes Solucin sulfocrmica Bicromato de potasio ......................................... 100,00 g Acido sulfrico ................................................ 100,00 mL Agua destilada .............................................. 1000,00 mL Disolver el bicromato de potasio en agua destilada sobre un recipiente conteniendo agua de cao para enfriar, aadir el cido poco a poco y agitar continuamente. Nunca aadir agua al cido.
C4.14.2
Hipoclorito de sodio Cojn de leja................................................. 1,00 unidad Agua ............................................................. 1000,00 mL
C4.14.3
Fenol 3-5% (diludo en agua) Fenol........................................................... 3,00 4,00 g Agua .................................................................... 100 mL
C5. C5.1 C5.2 C5.3 C5.4 C5.5 C5.6

MPR-CNSP-015
MEDICAMENTOS O PRODUCTOS QUE NO DEBEN INGERIRSE PREVIO AL EXAMEN PARASITOLGICO Antibiticos. Sulfas. Sales de bario (sustancias radioactivas). Sal de bismuto. Kaoln, pectina o kaopectate. Laxantes.
ANEXO D
CLAVE DE IDENTIFICACIN DE LOS PROTOZOARIOS (AMEBAS, FLAGELADOS) Y HELMINTOS
D1. CLAVE PARA LA IDENTIFICACIN DE AMEBAS (EXAMEN EN FRESCO O TINCIN)

TROFOZOTO (CON 1 NUCLEO)
MEMBRANA NUCLEAR CON CROMATINA PERIFRICA
MEMBRANA NUCLEAR SIN CROMATINA PERIFRICA
CROMATINA PERIFRICA GRUESA IRREGULAR. GRAN CARIOSOMA, DENSO Y GRANULAR. CITOPLASMA CON BACTERIAS, LEVADURAS INGERIDAS Y NO LOS GLBULOS ROJOS.
CROMATINA NUCLEAR DE DISTRIBUCIN REGULAR Y FINA CARIOSOMA PEQUEO
CITOPLASMA FINAMENTE GRANULAR
NCLEO CON GRAN CARIOSOMA E IRREGULAR
NCLEO CON CARIOSOMA GRANDE; TIENE GRNULOS ACROMTICOS.
X R
= =
15-20 m. 10-25 m.
X R
= =
20-25 m. 15-50 m. X R = = 8-10 m. 6-12 m. X R = = 8-10 m. 8-20 m.
Entamoeba polecki
Entamoeba coli
Endolimax nana
Iodarnoeba btschlii
BACTERIAS Y LEUCOCITOS, PERO NO GLBULOS ROJOS
NO CONTIENE GLBULOS ROJOS
GLBULOS ROJOS PRESENTES O AUSENTES. LA FORMA NO INVASIVA CONTIENE BACTERIAS
X R
= =
10-20 m. 6-40 m.
X R
= =
8-10 m. 5-12 m.
X R
= =
20-25 m. 15-50 m.
Entamoeba gingivalis
Entamoeba hartmanni
Entamoeba histolytica / E. dispar
MPR-CNSP-015
74
MPR-CNSP-015
D2. CLAVE PARA LA IDENTIFICACIN DE QUISTES DE AMEBAS (EXAMEN EN FRESCO Y CON TINCIN)
TROFOZOTOS
Sin Cromatina en la membrana nuclear
Cromatina en la membrana nuclear
NCLEOS 1-4 DIMETRO 1-10 m DIMETRO 10-15 m
NCLEOS 1-2
Cariosoma grande
Gran cariosoma
DIMETRO 15-30 m
glicgeno difuso
Vacuola del
glicgeno grande
NCLEOS 1-4 glucgeno frecuente barras cromidiales frecuente Barras cromidiales de extremos romos = 10-12 m. 5-20 m. R = 5-10 m. R = = X = 6-8 m.
E. histolytica / E. dispar
NCLEOS 1-2 NCLEO 1 muchos cuerpos cromidiales y/o inclusin de masa Masa de glucgeno
NCLEOS 2-4 Masa de glicgeno frecuente Barras cromidiales de extremos afilados
X X =
6-8 m.
11-15 m. 9-18 m.
X R
= =
15-25 m. 10-35 m.
Entamoeba coli
5-10 m.
75
Entamoeba hartmanni
Endolimax nana
Iodamoeba btschlii
Quiste inmaduro 1-2 NCLEOS
Entamoeba polecki
Quiste inmaduro
Quiste maduro NCLEOS 4 Barras cromidiales de extremos romos

E. histolytica / E. dispar
NCLEOS > 5 Barras cromidiales de extremos afilados
X R
= =
10-25 m. 10-35 m.
Entamoeba coli
Quiste maduro
Quiste inmaduro
MPR-CNSP-015
D3. CLAVE PARA LA IDENTIFICACIN DE FLAGELADOS INTESTINALES (EXAMEN EN FRESCO Y CON TINCIN)
TROFOZOTOS
Sin flagelos visibles Con 2 ms flagelos
Con 2 ncleos en ms del 50% de trofozotos 2 flagelos 1 ncleo 4 flagelos 1 ncleo 5 ms flagelos
Sin citostoma Con citostoma 5 ms flagelos 1 ncleo Con membrana ondulante, axostilo, no cuerpo mediano X R = = 10-12 m 8-20 m
Trichomonas hominis
5 ms flagelos 1 o 2 ncleos Sin membrana ondulante o axostilo X R = = 12-15 m 10-20 m

Giardia lamblia (G. duodenalis) (G. intestinales)
76
Retortamonas Enteromonas Chilomastix mesnili hominis
X R X R = = 5-7 m X 4-9 m R = = 7-9 m X 4-10 m R = = 10-12 m 0-20 m intestinales
= =
3-12 m 5-15 m
Dientamoeba fragilis
D4. CLAVE PARA LA IDENTIFICACIN DE QUISTES DE FLAGELADOS INTESTINALES (EXAMEN EN FRESCO Y CON TINCIN)
FLAGELADOS (Quistes)
FLAGELADOS CON FIBRILLAS O FLAGELOS DENTRO DEL QUISTE
Apariencia de pera (1 ncleo)
Apariencia de limn (1 ncleo)
Forma ovoide Membrana fina
X R
= =
4-7 m 4-9 m
X R
= =
5-9 m 4-9 m
Retortamonas intestinalis
Chilomastix mesnili
1 - 4 ncleos generalmente 2 2 - 4 ncleos a un extremo
X R
= =
2-8 m 4-10 m
X R
= =
10-12 m 8-19 m
Enteromonas hominis
Giardia lamblia
MPR-CNSP-015
77
D5.
a. b. c. d. e. f. g. h. i. j. k. l. m. n. o. p. q. r.
CLAVE PARA LA IDENTIFICACIN DE HUEVOS DE HELMINTOS Huevo no operculado, esfrico, con 6 ganchos, embrionados ............................................................ b Huevo semejante al de ........................................................................................................................ e Huevos separados ............................................................................................................................... c Huevos en paquetes 12 ms ............................................................................... Dipylidium caninum Huevo de membrana gruesa con radiaciones conteniendo embrin con ganchos .............. Taenia spp Huevo de membrana fina, separado del embriforo por una matrz gelatinosa .................................. d Filamentos ocupa el espacio entre el embriforo y la membrana externa............... Hymenolepis nana Sin filamentos entre el embriforo y la membrana externa.................................................. H. diminuta Huevo operculado ................................................................................................................................. f Huevo no operculado ............................................................................................................................ j Huevo < 35mm Clonorchis, Opistorchis, Heterophyes, Metagonimus ................................................... Huevo > 38mm ..................................................................................................................................... g Huevo 38-45 mm .............................................................................................................. Dicrocoelium Huevo > 60mm ..................................................................................................................................... h Huevo con oprculo sobresaliente .................................................................................... Paragonimus Huevo sin oprculo sobresaliente ......................................................................................................... i Huevo > 85 mm ............................................................................ Fasciola, Fasciolopsis, Echinostoma Huevo < 75 mm ........................................................................................................... Diphyllobothrium Huevo > 75 con espina ........................................................................................................................ k Huevo < 75 sin espina ........................................................................................................................ m Espina terminal ........................................................................................... Schistosoma haematobium Espina posterminal ............................................................................................................................... l Espina lateral inconspicua o ausente ............................................................................... S. japonicum Espina lateral prominente ..................................................................................................... S.mansoni Huevo con gruesa membrana y mamelonada ............................................................... A. lumbricoides Huevo sin la membrana mamelonada ................................................................................................. n Huevo con apariencia de barril con 2 tapones operculares ................................................................. o Huevo sin la apariencia de barril, sin oprculos .................................................................................. p Membrana no estriada ................................................................................................ Trichuris trichiura Membrana frecuentemente estriada .................................................................................. Capillaria sp Huevo plano en un lado .................................................................................... Enterobius vermicularis Huevo simtrico ................................................................................................................................... q Huevo grande c/aire en extremos .................................................................. Heterodera, Meloidogyne Huevo sin glbulos polares (aire).......................................................................................................... r Huevo con blastmeros, de extremos redondeados 56-76 m ........................ Ancylostoma o Necator Huevo con numerosos blastmeros, los 2 extremos ms o menos afilados de 73-95 m ........................................................................................................... Trichostrongylus sp CLAVE PARA LA IDENTIFICACIN DE ESPECIES DE LARVAS INFECTANTES DESARROLLADAS A PARTIR DE MATERIA FECAL HUMANA Esfago casi igual a la longitud total del cuerpo. Cuerpo corto y delgado, mide cerca de 0.5 mm de longitud, cola de extremo romo y a veces bifurcado ....................................... Strongyloides stercoralis Esfago cerca de la longitud total del cuerpo, ms grande o ms extendido. ..................................... 2 El cuerpo ms grande entre las 4 especies, cerca de 0,75 mm, la luz intestinal no es recta, sino en zigzag; extremo de la cola (no de la envoltura) redondeado y como una perillaTrichostrongylus orientalis Cuerpo ms corto y luz intestinal recta, cola con extremos afilados ................................................... 3 Cuerpo corto y extendido, en forma de huso; mide cerca de 0,59 mm y la envoltura cerca de 0,66 mm de longitud, cabeza redondeada, los estiletes de igual grosor y ms apreciable, la porcin anterior del intestino ms o menos tan ancha como el bulbo esofgico, el primordio genital situado por delante de la mitad del intestino, la terminacin de la cola forma un ngulo ms ancho con extremo afilado; envoltura claramente estriada ........................................................................................................ N. americanus Cuerpo largo y delgado, ms o menos de forma cilndrica mide cerca de 660 mm y la envoltura cerca de 720 mm de longitud, cabeza aplanada, estiletes de desigual grosor y poco apreciables, intestino de menor dimetro que el esfago, el primordio genital situado detrs de la porcin media del intestino, extremo terminal de la cola estrecho y alargado, con punta menos redondeada, la envoltura no tan claramente estriada .......................................................................................................... A. duodenale
D6. 1.a 1.b 2.a 2.b 3.a
3.b
MPR-CNSP-015
78
ANEXO E
ELEMENTOS QUE SE PUEDEN CONFUNDIR CON LOS PARSITOS INTESTINALES En el examen microscpico, adems de encontrarse formas parasitarias en los fluidos, secreciones o material fecal, se puede encontrar elementos no parasitarios que pueden confundirse con los parsitos: E1. E1.1 ELEMENTOS O CLULAS HUMANAS Macrfagos Los macrfagos son clulas grandes, mononucleares y fagocticas, que se parecen a trofozotos de E. histolytica. Las siguientes diferencias se deben considerar: Entamoeba histolytica a. b. Tamao: 12 60 m (X = 20 m) Radio del material nuclear en relacin al citoplasma 1:10 1:12 Ncleo redondeado con cariosoma central y cromatina perifrica Puede tener glbulos rojos, no fibras ni polimorfonucleares (PMNS) Ncleo casi siempre presente Con trichrome se colorea el citoplasma y el ncleo (oscuro) 30 60 m 1:4 1:6 Ncleo grande, puede ser irregular Tiene fibras, PMNS y glbulos rojos. Contiene cuerpos redondeados, ncleo no puede observarse Semejante a E. histolytica Macrfago
c. d. e. f.
E1.2.
Neutrfilos polimorfonucleares (PMNS) Generalmente son encontrados en casos de disentera bacteriana o amebiosis. Sus diferencias son: Entamoeba histolytica a. b. Tamao: 20 m (12 50) Radio del material nuclear en relacin al citoplasma 1:10 1:12 (trofozoto) y 1:3 (quiste) Ncleo redondeado con cariosoma central y cromatina perifrica Citoplasma granular uniforme, puede tener glbulos rojos (X = 14 m) 1:1 Ncleos 2-4, conectados por una banda cromtica Citoplasma granular Macrfago
c. d.
MPR-CNSP-015
79
E1.3
Eosinfilos Estas clulas, generalmente redondeadas, tienen un dimetro similar al de los PMNS, y se caracterizan en las tinciones, por la presencia de grandes grnulos rojo prpura, adems que suelen presentar su ncleo segmentado (1-2).
E1.4
Cristales de Charcot-Leyden Son cristales alargados con extremos en punta, que con coloracin tricrmica se tien de rojo prpura. Ellos son producto de los eosinfilos destrudos en la mucosa intestinal, son frecuentes de observarse en lminas que contienen Entamoeba histolytica. Tambin suelen encontrarse en muestras de esputo, como consecuencia de la destruccin de los eosinfilos en la mucosa pulmonar.
E1.5
Glbulos rojos Los glbulos rojos tienen un dimetro de 7,5 m. Su presencia en las heces puede indicar ulceracin a nivel del tacto intestinal u otro problema hemorrgico.
E1.6
Clulas epiteliales Las clulas epiteliales o clulas escamosas pueden estar presente en las heces, ms an si la muestra se obtiene por sigmoidoscopa. El tamao de estas clulas son semejantes al de las amebas, la coloracin es verde plido con apariencia uniforme no granular cuando se les colorea con TrichomeGomori.
E2. E2.1
ELEMENTOS VEGETALES O ANIMALES Levaduras Clulas ovoides de 4 a 6 m y que pueden encontrarse en forma de levaduras o hifas.
E2.2
Pelos o tricomas Los pelos de las hojas o races se encuentran y podran confundirse con larvas de nemtodes (Figura E1).
E2.3
Clula vegetal Puede observarse en forma no digerida (Figuras E2-E4).
E2.4
Fibra muscular no digerida Se reconoce por las estras (Figuras E5 y E6).
E2.5
Clula coloidal o de grasa Se tien con yodo, pudiendo confundirse con huevos (Figura E7 y E8). Existen otras estructuras que pueden parecerse a larvas o huevos de helmintos y que son convenientes tenerlas en cuenta (Figuras E9-E14).
MPR-CNSP-015
80
ESTRUCTURAS SEMEJANTES A LOS PARSITOS
Figura E1. Pelos de vegetales semejantes a larvas. Coloracin lugol
Figura E2. Parnquima de clula vegetal no digerida. Coloracin lugol
Figura E3. Vaso espiralado (solucin salina)
Figura E4. Clula vegetal de vainas, ms o menos homognea. Coloracin lugol
Figura E5. Fibra vegetal no digerida. Coloracin lugol
Figura E6. Fibra muscular estriada con yodo. (lugol)
Figura E7. Grnulo, con yodo, deformado al calor del microscopio. Coloracin lugol Fuente: Spencer FM, Monroe LS. The Color Atlas of Intestinal Parasites; 1961.
Figura E8. Clula coloidal, refrctil y amorfa. Coloracin lugol
MPR-CNSP-015
81
Figura E9. Material semejante a Fasciola hepatica, pero sin oprculos. Coloracin lugol
Figura E10. Material semejante a cstodes y estructuras larvarias. Coloracin lugol
Figura E11. Material vegetal periforme semejante a Metagonimus. Coloracin Lugol
Figura E12. Resto vegetal semejante a grano de polen. Coloracin lugol
Figura E13. Material vegetal semejante a Paragonimus, marrn oscuro. Coloracin lugol
Figura E14. Material semejante a Metagonimus, marrn oscuro. Coloracin lugol
Fuente: Suzuki N. Color Atlas of Human Helminth Eggs; 1986.
MPR-CNSP-015
82
ANEXO F
REGISTRO DE LOS PARSITOS INTESTINALES EN EL LABORATORIO POR MES POR AO FICHA N1 Ttulo: Registro de los parsitos intestinales en el laboratorio por mes por ao. La identificacin del establecimiento y el ao correspondiente se escribe en la parte superior. La ficha consta de dos partes: Primera parte. Contiene: Iniciales de los meses del ao, total anual, nmero de muestras examinadas, nmero de paciente ,nmero de casos positivos y nmero de casos negativos, con sus respectivos porcentajes. Segunda parte. Contiene: Cdigo Internacional, nombre del agente, registro por mes y por ao. FICHA N2 Ttulo: Registro de los parsitos intestinales en el laboratorio por mes por ao. La identificacin del establecimiento y el ao correspondiente se escribe en la parte superior. La ficha consta de tres partes: los grupos de parsitos, la asociacin parasitaria y los grupos etreos. Primera parte. Contiene: grupo de parsitos por mes del ao, nmero de muestras positivas o nmero de casos positivos segn pertenezcan a los siguientes grupos: protozoarios, helmintos y protozoarios-helmintos. Segunda parte. Contiene: monoparasitismo y poliparasitismo o la asociacin parasitaria. Tercera parte. Contiene: distribucin segn grupos etreos de toda la poblacin en estudio. Podra considerarse incluso por sexo.
MPR-CNSP-015
83
INSTITUTO NACIONAL SALUD CENTRO NACIONAL DE SALUD PBLICA LABORATORIO REFERENCIAL DE ENTEROPARSITOS
FICHA N 1
REGISTRO Y CONTROL MENSUAL DE LOS ENTEROPARSITOS AO........ ENE FEB MAR ABR MAY JUN JUL AGO SET OCT NOV DIC
N MUESTRAS N PACIENTES N POSITIVOS (+) % N NEGATIVOS (-) % CI 06,1 07,0 07,1 07,3 07,6 07,8 07,9 121,1 121,2 121,3 123.0 123.0 123,4 123.6 123.8 126 126,0 126.1 127,0 127,2 127,3 127,4 127,5 127.6 AGENTES: E. histolytica B. hominis Balantidium coli Giardia lamblia Trichomonas hominis Cryptosporidium Cyclospora Isospora belli Ch. mesnili Clonorchis sp Paragonimus sp * F. hepatica ** T. solium (intestinal) T. saginata Taenia sp D.pacificum H.nana/H.diminuta D.caninum Ancylostoma/Nec A. duodenale Necator americanus A. lumbricoides S.stercoralis T.trichiura E.vermicularis Capillaria sp Trichostrongylus sp Rhabditis sp Meloidogyne sp ** Se localiza en el hgado.
* Se localiza en el pulmn. CI = Cdigo Internacional .
MPR-CNSP-015
84
INSTITUTO NACIONAL SALUD CENTRO NACIONAL DE SALUD PBLICA LABORATORIO REFERENCIAL DE ENTEROPARSITOS
FICHA N 2
REGISTRO Y CONTROL DE MENSUAL DE LOS ENTEROPARSITOS AO........ Establecimiento Grupo / Parsito / Mes Protozoarios N % Helmintos N % Protozoarios/Helmintos N % TOTAL Monoparasitismo Biparasitismo Triparasitismo Tetraparasitismo Pentaparasitismo Hexaparasitismo Heptaparasitismo Octaparasitismo POR GRUPO ETREO 1,1 - 05 aos 5,1 - 10 aos 10,1 - 5 aos 15,1 - 20 aos 20,1 - 25 aos 25,1 - 30 aos 30,1 - 35 aos 35,1 - 40 aos 40,1 - 45 aos 45,1 - 50 aos 50,1 - 55 aos 55,1 - 60 aos > 60 aos
85
Responsable ENE FEB MAR ABR MAY JUN JUL AGO SET OCT NOV DIC TOTAL
N %
MPR-CNSP-015
ANEXO G
FICHA PARA EL ESTUDIO DEL CULTIVO DE Entamoeba histolytica (cepa) Paciente...............................................................................................Edad...............Sexo ....................... N......... Institucin............................................................Direccin.......................................................Dpto............................ Muestra: Heces ( ) Aspirado................ ( ) Otro................................................ Lugar y fecha................................................................... AGENTES E. histolytica B. hominis E. dispar E. coli E. nana E. moshkowski I. btschlii
FECHA FECHA FECHA
AGENTES D. fragilis G. lamblia Ch. mesnili B. coli E. hominis T. hominis R. intestinalis
FECHA FECHA FECHA
CULTIVO: Aislamiento Primario: Fecha................Medio.................C....Especies................................................... SUBCULTIVO: Fecha................Medio.................C.... Especies.............................................................................. Fecha................Medio.................C.... Especies.............................................................................. Fecha................Medio................ C.... Especies.............................................................................. Fecha................Medio.................C....Especies............................................................................... AISLAMIENTO N ..........................................Medio........................................................................... 25 C Dilucin Fecha Fecha Fecha Fecha Fecha Fecha Fecha 1 2 4 16 64 1 2 4 37 C 16 64
Observaciones............................................................................................................................................................ ..................................................................................................................................................................................... ........................................................................... Responsable......................................................

ANEXO H
PARSITOS NO INTESTINALES: Paragonimus y Fasciola (DISTOMATOSIS PULMONAR Y HEPTICA) H.1 H.1.1 MUESTRA DE ESPUTO O SECRECIN BILIAR Y MUESTRA FECAL Fundamento Se basa en la deteccin de huevos de Paragonimus y Fasciola en las muestras de esputo, secrecin biliar y heces, segn la especie del parsito, mediante la observacin directa al microscopio o por la concentracin de estos por sedimentacin. H.1.2 H.1.2.1 H.1.2.2 H.1.2.3 H.1.2.4 H.1.2.5 H.1.2.6 H.1.2.7 H.1.2.8 H.1.3 H.1.3.1 a. b. Materiales Lminas portaobjetos. Tubos 15 x 150 mm. Pipetas Pasteur. Vaso o copa cnica. Placa Petri. Solucin de hidrxido de sodio 2% al 4%. Agua destilada. Aplicadores o 1/3 de bajalenguas. Obtencin de la muestra Muestra de esputo La muestra se obtiene del paciente con tos persistente. Colectar la muestra en un frasco de boca ancha despus de un esfuerzo de tos (4 a 8 mL, aproximadamente). Se prefiere la expectoracin de 24 horas. Muestra de heces Colectar la muestra en un frasco de boca ancha (3 a 5 g aproximadamente).
H.1.3.2
H.1.3.3
Muestra de secrecin biliar Colectar la muestra en un frasco o tubo limpio.
H.1.4 H.1.4.1
Conservacin de la muestra La muestra se conserva en un lugar con poca iluminacin hasta el momento de efectuar el examen parasitolgico. Si no es posible realizar el examen inmediatamente o va a demorar ms de dos das en llegar al laboratorio, agregar el lquido fijador conservador PAF o formol 10% en proporcin 1:1 1:2. Procedimiento Mtodo directo Tratar las muestras de heces o de esputo segn lo descrito en las secciones 3 y 5. La observacin al microscopio se realizar primero a menor aumento (10X) y luego a 40X.
H.1.4.2
H.1.5 H.1.5.1
H.1.5.2 a.
Mtodo de concentracin: Muestra de esputo o secrecin biliar Agregar una solucin de hidrxido de sodio 2% al frasco que contiene la muestra y homogeneizar. Pasar a travs de una gasa a un tubo de ensayo de 15 x 150 mm o tubo cnico de 50 mL, centrifugar durante 10 minutos a 2 000 r.p.m. o dejar reposar de 1 a 2 horas si no se cuenta con centrfuga. Eliminar el sobrenadante y adicionar hidrxido de sodio 2%, dejar en reposo de 90 a 120 minutos. Obtener el sedimiento con ayuda de una pipeta, colocarlo en una lmina y observar al microscopio.
b.
Muestra de heces Realizar el procedimiento segn al tem 5.3.
H.1.6 H.1.6.1
Observacin Observar huevos operculados, de color marrn oscuro, tanto de Paragonimus peruvianus (= Paragonimus mexicanus) como de Fasciola hepatica, siendo estos ltimos de mayor tamao. En caso que tuviera problemas con el diagnstico, enviar la muestra al Laboratorio de Enteroparsitos del Centro Nacional de Salud Pblica Instituto Nacional de Salud para su confirmacin.
H.1.6.2
MPR-CNSP-015
88
ANEXO I
MICROMETRA El tamao de los parsitos es muy importante como parte de la identificacin de sus formas evolutivas, la micrometra es el mtodo que se usa para la medicin de los parsitos microscpicos y hace uso de un ocular micromtrico y una lmina patrn. El ocular micromtrico, es un luna circular marcada con una lnea con divisiones de 50 a 100 unidades, con que se mide a los parsitos, estas divisiones tendrn valores diferentes dependiendo de los objetivos a utilizar. La lmina patrn, es una lmina de vidrio del tamao de una lmina portaobjetos, que en su parte central tiene grabada una lnea con escala conocida en divisiones de 0,1 a 0,01 mm y servir para dar valor a cada unidad del ocular micromtrico segn el objetivo a utilizar, por lo que es necesario calcular los valores de unidades del ocular micromtrico con cada objetivo. Calibracin del microscopio usando un ocular micromtrico: Procedimiento de calibracin: 1. Colocar el ocular micromtrico en el ocular del microscopio 2. Sobre la superficie de la mesa de platino del microscopio colocar la lmina patrn, hacer coincidir ambas numeraciones (ocular micromtrico y la lmina patrn) primero a menor aumento (10x) y luego a mayor aumento, (40x y 100x). 3. Enfocar el microscopio para poder ver las lneas de la lmina patrn 4. Hacer coincidir la lnea 0 del ocular micromtrico y de la lmina patrn (figura 30) 5. Cuando estas 2 lneas coinciden, determinar cuantas lneas estn coincidiendo entre s, tratando de encontrarlas lo ms alejado hacia la derecha (vara segn el objetivo utilizado). 6. Contar el nmero de divisiones en la lnea del ocular que hay entre 0 y las lneas coincidentes, de la lmina patrn y las divisiones de 0,1 mm que hay entre el 0 y las lneas coincidentes a la derecha. 7. Calcular la porcin del ocular micromtrico, como en la figura N 30 y el nmero de milmetros. Ejemplo: Unidades del ocular micromtrico 33 igual a 0,22 1 unidad del ocular = 0,22 mm lmina patrn = 33 ocular micromtrico
0,066 mm
= 0,0066 mm x 1m/1,000 mm = 6,6 m, del aumento calibrado Resulta una unidad de ocular micromtrico es equivalente a 6,6 m 8. Cuando ya ha sido calibrado cada objetivo no se pueden cambiar ni el ocular ni los objetivos, ni intercambiar con otros oculares u objetivos. Se debe calibrar de nuevo. Puede preparar su tabla de calibracin para cada microscopio:
89
MPR-CNSP-015
Medicin
(unidades)
Objetivos 10X 40X 100X
1 2 3 4
6,6 13,2 19,8 26,4
2,4 4,8 7,2 9,6
1 2 3 4
Ocular micromtrico
0 10 20 30 40 50
0.1
0.2
0.3
Lmina patrn
Figura N 30. Calibracin del microscopio con el ocular micromtrico (en la escala superior) y la lmina patrn en la escala inferior. Coinciden en 33 y 0,22 mm respectivamente.
MPR-CNSP-015
90
MPR-CNSP-015
91
ARTES Y DISEOS LASER S.R.Ltda. Calle Las Turquesas 263-265-269 Balconcillo Lima 13 - Per Telf.: 265-8320 Telefax: 266-0075
Abril 2003 Tiraje: 3,000 ejemplares
MPR-CNSP-015
92
INSTITUTO NACIONAL DE SALUD SEDE CENTRAL Cpac Yupanqui N 1400, Jess Mara Lima 11, Apartado N 451 Telf.: 471 9920 - Fax: 471 0179 E-mail: postmaster@ins.gob.pe Pgina Web: www.ins.gob.pe

INS Parasitos

Uploaded by

Document Information

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

INS Parasitos

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO PARA EL DIAGNSTICO DE LOS PARSITOS INTESTINALES DEL HOMBRE

Serie de Normas Tcnicas N 37 Lima - 2003

Serie de Normas Tcnicas N 37 Lima - 2003

Portada: Frontis del local central del Instituto Nacional de Salud.

Instituto Nacional de Salud

Instituto Nacional de Salud

GENERALIDADES Objetivo Campo de aplicacin Responsabilidades Documentos de referencia Definiciones y abreviaturas

MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD Responsabilidades Campo de aplicacin

OBTENCIN DE LA MUESTRA Condiciones generales Muestra para el examen parasitolgico

Instituto Nacional de Salud

EXAMEN DE BIOPSIAS Biopsias del tubo digestivo Recomendaciones

CLAVES DE IDENTIFICACIN DE LOS PROTOZOARIOS (AMEBAS Y FLAGELADOS) Y HELMINTOS

ELEMENTOS QUE SE PUEDEN CONFUNDIR CON PARSITOS INTESTINALES

REGISTRO DE LOS PARSITOS INTESTINALES EN EL LABORATORIO POR MES Y POR AO

FICHA PARA EL ESTUDIO DEL CULTIVO DE Entamoela histolytica (cepa)

PARSITOS NO INTESTINALES: Paragonimus y Fasciola (Distomatosis pulmonar y heptica)

Instituto Nacional de Salud

Instituto Nacional de Salud

1.4.4 1.5 1.5.1 1.5.2

1.5.6 1.5.7 1.5.8 1.5.9 1.5.10 1.5.11 1.5.12

1.5.15 1.5.16 1.5.17

1.5.18 1.5.19 1.5.20 1.5.21

1.5.22 1.5.23 1.5.24 1.5.25 1.5.26

1.5.31 1.5.32 1.5.33

1.5.34 1.5.35 1.5.36 1.5.37

1.5.40 1.5.41 1.5.42

Instituto Nacional de Salud

2.2.6 2.2.7 2.2.8 2.2.8.1

Instituto Nacional de Salud

Instituto Nacional de Salud

Esputo, secrecin biliar

PAF, Formalina 10%

Frots perianal Secrecin vaginal Tejidos

T ambiente T ambiente 4 C T ambiente 4 C

Figura N 1. Requisitos para la remisin de la muestra de heces

Instituto Nacional de Salud

4.3 4.3.1 4.3.2 4.3.3 4.3.4 4.3.5

Instituto Nacional de Salud

Instituto Nacional de Salud

Figura N 4. Trofozoito de Giardia lamblia con solucin lugol (200X)

Instituto Nacional de Salud

Pipeta Pasteur. Gasa. Agua corriente filtrada. Microscopio.

Instituto Nacional de Salud

Resultado. Informar de la presencia de huevos o larvas de parsitos (Seccin 10).

Lectura. Se observan principalmente quistes y huevos de parsitos.

Instituto Nacional de Salud

Instituto Nacional de Salud

Aplicador de madera (1/3 de baja lengua). Solucin de lugol (Anexo C).

II: III. IV.

Figura N 7. Aplicacin del mtodo de Ritchie

Instituto Nacional de Salud

Figura N 9. Larvas de Ancylostoma/Necator (100x) en movimiento del mtodo de Baermann

Figura N 10. Isospora belli con colorante temporal eosina (400x)

5.4.2 5.4.2.1 5.4.2.2 5.4.2.3 5.4.2.4 5.4.2.5 5.4.2.6

LMINA PERFORADA APLICADOR

MALLA, NYLON U ORGANZA

Instituto Nacional de Salud

5.5 5.5.1 5.5.1.1

Metanol. Hidrxido de sodio al 4%. Alcohol cido (Anexo C).

Instituto Nacional de Salud

Resultado. Informar los parsitos encontrados (Seccin 10).

Instituto Nacional de Salud

Resultado. Informar el nombre del parsito y su estadio evolutivo (Seccin 10).

Coloracin de May Grnwald. Utilidad. Colorea protozoarios, principalmente flagelados.