ACIDO NUCLEICO HISTORIA

El descubrimiento de los cidos nucleicos se debe a Friedric Miescher quien en el ao 1869 aisl del ncleo de la clulas una sustancia acida a lo que llamo nucleica, nombre que posteriormente se cambi a cido nucleico.

DEFINICION Son molculas tan importantes y complejas como las protenas. Los cidos nucleicos son macromolculas, polmeros formados por la repeticin de monmeros llamados nucletidos, unidos mediante enlaces fosfolidester. Se forman, as, largas cadenas o poli nucletidos lo que hace que algunas de estas molculas lleguen a alcanzar tamaos gigantes.

TIPOS DE ACIDO NUCLEICOS

Existen dos tipos de cidos nucleicos: ADN (cido desoxirribonucleico) y ARN (Acido ribonucleico), que se diferencian: Por el Glcido (Pentosa) que contiene la desoxirribosa en el ADN y la ribosa en el ARN. Por las bases nitrigrogenadas que contienen: adenina, guanina, citosina, y timina, en el ADN; adenina, guanina, citosina y uracilo, en el ARN.

En los organismos eucariotas, la estructura del ADN es de doble cadena, mientras que en la estructura de ARN es monocatenaria, aunque puede presentarse en forma extendida, como el ARNm, o en forma plegada como el ARNt y el ARNr.

En la masa molecular: la del ADN que es generalmente mayor que la del ARN

NUCLEOSIDOS Y NUCLEOTIDOS
Las unidades que forman los acidos nucleicos son los nucletidos. Cada nucletido es un molcula compuesta por la unin de tres unidades: un monosacrido de cinco carbonos (una pentosa, ribosa en el ARN y desoxirribosa en el ADN), una base nitrogenada purinica (adenina, guanina) o pirimidinica (citosina, timina o uracilo) y uno o varios grupos fosfato(cido fosfrico). Tanto la base nitrogenada como los grupos fosfato estn unidos a la pentosa. La unin formada por la pentosa y la base nitrogenada se denominada nucletido. Cuando lleva unido una unidad de fosfato al carbono 5 de la ribosa o desoxirribosa y dicho fosfato sirve de enlace entre nucletidos, unindose al carbono 3 del siguiente nucletido; se denomina nucletido- monofosfato (como el AMP) cuando hay un solo grupo fosfato, nucletido-difosfato(ADP) si lleva dos y nucletido- trifosfato (como el ATP) si lleva tres.

Listado de las bases nitrogenadas Las bases nitrogenadas conocidas son: Adenina, presente en ADN y ARN Guanina, presente en ADN y ARN Citosina, presente en ADN y ARN Timina exclusiva del ADN Uracilo exclusivo del ARN

ADN HISTORIA 1866: Mendel publica sus experiencias sobre la transmisin de los caracteres hereditarios y propone las leyes de la segregacin

independiente que en conjunto conducirn al concepto de gen.(2) 1869: Miescher aisla por primera vez al ADN apartir de nucleos de clulas de pus y le da el nombre de nucleina; describe su composicin qumica global e identifica en particular la presencia de fosforo, lo que distingue de manera radical a esta molecula de la protena.(2) 1900: Se establece la teora cromosmica de la herencia (2)

1910-1930: Se determina la composicin de bases de los acidos nucleicos y se establece la estructura de los nucletidos (LEVENE); se diferencian los acidos timonucleicos(ADN) y zimonucleicos(ARN). (2) 1928: Griffith realiza su celebre experiemento sobre la transfeccion in vivo de neumococus no viruletos mediante la coinyeccion con neumococus virulentos muertos en ratones. (2) 1930-1933: Se realiza la transfeccion bacterianain vitro (DAWSON Y SIA) emplenado un extracto acelular de neumococus virulentos

muertos(ALLOWAY).(2) 1943: SCHRODINGER postula que el material hereditario es un mensaje quimico codificado. (2) 1944: Se identifica el principio de trabsformacionde grifftin en el ADN gracias a un mtodo enzimtico puesto en practica por AVERY, Mac Leod y Mac Carty.(2) 1948:BOIVIN VENDRELY afirma, basndose en datos qumicos precisos, que el ADN contenido en los nucleos de las clulas eucariotes constituyen el soporte de los caracteres hereditarios.(2)

1952: Se identifica la naturaleza qumica del material gentico de una bacterifago(virus de bacteria) en el ADN (Hershey y Chase) (2) 1953: WATSON Y CRICK establecen la estructura molecular de doble hlice del ADN. Basndose en este descubrimiento .

DEFINICION
Se compone de dos cadenas polinucleotidicas hlice. Una informacin clave sobre la estructura del ADN provino de estructura de difraccin de rayos x y cristales de ADN purificado, realizados en 1951 a 1953 por la cientfica Britanica Rosalind Franklin en el laboratorio de Maurice Wilkins en Inglaterra. La difraccin de rayos x, un potente mtodo para determinar la estructura 3- D de una molecula, puede precisar las distancias entre los atomos de molculas dispuestas en una estructura cristalina repetitiva regular. Los rayos x tienen una longitud de onda tan corta que puede ser dispersados por los electrones que rodean a los atomos en una molecula. Los atomos con nubes electrnicas densas (como el fosforo o el oxigeno) tienden a desviar los electrones con mas fuerza que los atomos de menor numero atomico. Cuando un cristal se expresa en un intenso haz de rayos X, la disposicin regular de sus atomos que los rayos X sean difractados, o desviados, en angulos especiales. entrelazadas formando una doble

Los patrones de los rayos X difractados aparecen en una pelcula grafica como manchas oscuras. El anlisis matemtico de los patrones, las distancias entre las manchas permite determinar distancias entre atomos y su orientacin dentro de las molculas.

ESTRUCTURA DEL ADN

La presencia de 2-desoxirribosa se abrevia con una d delante de la notacin de una letra. Obsrvese que algunas fuentes bibliogrficas usan timidina (T) de forma intercambiable con desoxitimidina (dt). Los nucletidos son esteres fosfricos de los nuclesidos. Cualquiera de los grupos hidroxilo de los azucares de los nuclesidos puede ser fosforilado, pero las bases generalmente no lo estn. Los nucletidos con un solo steres fosfrico se domina nuclesido monofosfatos. Por ejemplo, el 5-nucletido de la desixitidina se denomina desoxicitidina 5- monofosfato (5-dCPM). Ms de un fosfato puede estar unido por un enlace anhdrido, dando los correspondientes esteres de-, tritetrafosfato. El 5- trifosfato de guanosina sera la guanosina 5- trifosfato (GTP). Tambin son posibles los diesteres fosfricos; entre ellos se encuentran los importantes segundos mensajeros adenosina-3,5-monofosfato cclico cclico (cAMP) Y guano-3,5- monofosfatociclico (cGMP). ESTRUCTURA DE LOS POLINUCLEOTIDOS: Los cidos nucleicos son cadenas de nuclesidos unos por enlace fosfodiester. La longitud de la cadena vara considerablemente desde dos residuos. Las cadenas de los cidos nucleicos que contienen 50 nucletidos suelen dominarse oligonucletidos, mientras que las ms largas se denominan polincletidos. El enlace fosfodiester une el grupo 5-hidroxilo

De un residuo al 3- hidroxilo del siguiente. Los enlaces entre dos 5-OH o dos 3OH no estn presentes en os ADN ARN naturales. La direccionalidad del enlace fosfodiester implica que los extremos de los oligo- o polinucletidos no son estructuralmente equivalentes. Si un estreno de un pilinucleotido termina en un 5-OH, el otro termina en un 3-OH. Estos extremos se conocen como extremo 5 y extremo 3, respectivamente. Uno o ambos extremos de mucho polinucleotidos estn qumicamente modificados con grupos fosfatos o aminocidos. Los polinuvcleotidos circulares no tiene extremos libres y estn formados por la unin de del extremo 5 de un polinucleotido lineal con su propio extremo 3 mediante un enlace fosfodiester. Tanto en los pilinucleotidos lineales como en los circulares, la cadena azucarfosfodiester es muy uniforme y la diversidad qumica procede solo de las bases. Ms concretamente, La secuencia de base de un polinucleotido confiere a la molcula una identidad qumica propia. Esta disposicin es similar a la de los polipeptidos y protenas, donde las variaciones de las estructuras qumicas proceden bsicamente de las caractersticas de la cadena laterales de los aminocidos. CONFORMACION DE LOS POLINUCLEOTIDOS: Las bases son en gran medida de la conformacin de los polinucleotidos. Los bordes de las bases contienen tomos de nitrgeno y oxigeno (grupo NH2,=N-y =O) que pueden interaccionar con otros grupos polares o con las molculas de agua del medio. Sin embargo, las caras de los anillos no pueden participar en tales interacciones y tienden a evitar el contacto con el agua. En cambio, interaccionan entre si por apilamiento. El apilamiento de bases reduce la superficie hidrofobia en contacto con el agua. La liberacin de molculas de agua al solvente es entrpicamente favorable. El apilamiento de la base tambin est estabilizado por interacciones electrnicas favorables. Como otros sistemas aromticos, las bases poseen orbitales muy deslocalizados por enzima y por debajo de los planos de los anillos. La densidad electrnica de estos orbitales pueden ser polarizadas por dipolos cercanos. Los dipolos inducidos resultantes pueden entonces interaccionar con el grupo polarizante de forma energticamente

favorable. Estas interacciones dbiles son reforzadas todava ms por las fuerzas de dispersin de London (dipolo inducido-dipolo inducido).Debido a que las fuerzas de estas interacciones electrnicas es muy dependiente de la distancia, no queda espacios vacos entre las bases piladas. Los polinucleotidos adoptan conformaciones que favorecen al mximo las interacciones de apilamiento entre las bases vecinas. Las exigencias de la estructura de la cadena azcar-fosfodiester favorecen las estructuras helicoidales. La estabilidad global de estas estructuras helicoidales depende de diversos factores entre las cuales se encuentran el apilamiento de las bases dependientes de secuencia, el pH, la concentracin de sal y la temperatura. Por ejemplo, algunos polinucleotidos sintticos, como el poli (C) y el poli (A), forman hlices dextrgiras con las bases muy bien apiladas. En cambio, muchos otros polinucleotidos se encuentran desordenados en disolucin, una conformacin denominada ovillo estadstico. Los grandes polinucleotidos son secuencia al azar tiene a la vez zonas helicoidales y desordenadas segn la secuencia local. La adopcin de estructura aplicada por parte de los polinucleotidos tambin dependen de las caractersticas de la disolucin. Poe ejemplo, las concentraciones altas de cationes, especialmente algunos cationes divalentes como el Mg2+, estabilizan la conformacin helicoidal de los polinucleotidos al apantallar la carga de los grupos fosfodiester de la cadena. Sin apantallamiento, la repulcion electroxtatica entre las cargas negativas de los fosfatos desestabilizara la hlice. ESTABILIDAD DE LOS PLINUCLEOTIDOS: Los polinucleotidos son relativamente estables en disolucin acuosa a pH neutro. Se a estimado que la vida media de los enlaces fosfodiester frente a la hidrolisis es de unos 200 millones de ao. Esta gran estabilidad hace que el ADN sea adecuado para el almacenamiento a largo plazo de la informacin gentica. En cambio el ARN se hidroliza mucho ms difcilmente. La presencia del grupo 2-OH suministra un nucleofilo interno para transesterificacion del enlace 3, 5- fosfodiester. El resultado es la rotura de la cadena polinucleotida, que deja un fosfato 2,3 cclico en junto de los fragmentos y un grupo5-OH libre en el otro. La mayor labilidad

del ARN frente a la hidrolisis lo hace menos adecuado como material gentico que el ADN. LA DOBLE HELICE DEL ADN: Con la acaptacion a mediados del siglo xx de que el ADN era el trasportador de la informacin gentica, los esfuerzos para conocer las bases estructurales de almacenamiento de la informacin se intensificaron. Sin embargo, varias creencias errneas dificultaron el progreso. La primera fue la observacin experimental (equivocada) de que el ADN contena cantidades iguales de cada uno de los cuatro nucletidos (desoxiadenosina, desoxiguanosina, desoxicitidina y desoxitimidina). La propuesta de que el ADN consista en un tetranucleotido cclico que contena un nucleosido de cada tipo se basaba en esta suposicin. Esta estructura choco frontalmente con el hallazgo de que ADN tena una masa molecular millares de veces superiores que la de un tetranucleotido. Era difcil imaginar como una estructura montona de tetranucleotidos repetidos poda poseer suficiente complejidad para almacenar la enorme variedad de caracteres hereditarios. Experimentos de sntesis y de difraccin de rayos X permitieron concluir que el ADN tenia una estructura lineal. Sin embargo, la estructura tridimensional del ADN era todava un misterio. Tres datos claves fueron necesarios para deducir la estructura del ADN. El primero fue la aceptacin de que el ADN no posea cantidades iguales de los cuatro nucletidos, y que las cantidades variaban segn el organismo. Sin embargo una relacin que resulto ser verdadera fue que la abundancia de desoxiadenocina era siempre igual a la de desoxitidina. Estos resultados llevaron a proponer estructuras con apariamiento especficos entre las bases(dAcon dT y Dg con dC). El segundo fue la posibilidad, apoyada por los datos de difraccin de rayos X, de que el ADN contuviera estructuras en doble hlice, y que las dos cadenas, por consideraciones de simetria, fuese antiparalelas. La ultima piesa del trompecabezas fue la sugerencia de que las bases se encontrasen en las formas tautomericas ceto y amino, en lugar de las formas enol e imino. Los tautomeros son ismeros de una molecula que difieren solo en la posicin de un atomo de hidrogeno. Cada una de las bases presenta dos a mas posible forma

tautomericas que se encuentran en equilibrio. La asignacin incorrecta de lkas estructuras tautomericas predenominantes significo que los investigadores trataran de formar. ADN DE TRIPLE HEBRA En las dcadas de 1950 y 1960 se mostro que algunas combinaciones de sector en polinucleotidos formaban complejos de triple hebra en lugar de las esperacibles hlices. Por ejemplo el, poli(dA) y el poli(dT) forman complejos en estometria 1:2. Un punto clave para resolver estas estructuras fue que almenos las ghebras consiste en una secuencia de omopurina. Incluso cuando participaron aparemiento de Watson y Crick, las puribnas poseen dos lugares para la formacin de enlaces de hidrogeno en el surco mayor; en N-7 y el O-6 en la guanina y el 6-NH2 en la adenina. Las bases en el surco mayor con disposiciones aproximado de dadores y aceptores de puentes de hidrogeno pueden formar tripletes de bases de HOOGSTEEN o de HOOGSTEEN inverso. Por ejemplo, una timina puede formar celectivamente dos puentes de hidrogeno de HOOGSTEEN con la adenina de un par A-T. de la misma forma, una citosina protonada puede formar dos puentes de hidrogeno de HOOGSTEEN con la guanina de un par G-C, dado un triplete de bases isomorfo del T-A-T. El pKa de la citidina es aproximadamente de 4,5, y las triple helises que contienen tripletes de C-G-C manifientan una fuerte dependencia del pH.Sin envartgo, el efecto estabilizador del triplete eleva el pKA aparente de la citosina, hacindola mas fcilmente protonable, incluso en disoluciones solo ligeramente acidas(pH6). Al unirse a una secuencia de omopurina- homopirimidina (pu.py) de ADN, la tercera hebra se orienta paralelamente a la hebra ricas en purinas y se une con elevada selectividad. Los pratones de puentes de hidrogeno de HOOOGSTEEN de la guanina y de la citosina suministra una especificidad similar a la de los pares de Watson y Crick. El patrn de puentes de hidrogeno HOOGSTEEN invertido tambin es posible si se vierte la orientacin de la tercera hebra (es decir la hebra anti paralela de la hebra de purina). Se pueden formar tripletes especficos entre una adenina y un par A-T, asi como entre una guanina y un par G-C. Tambien pueden formarce un triplete de

HOOGSTEEN inverso entre timina y A-T, pero el triplete resultante no es isomorfo con los tripletes de pu.pu.py. Estos tripletes de bases no son isomorfos; es decir, el carbono los azucares de los reciduos de la tercera hebra no se encuentra en la misma posicin en relacin con la doble helise. No obstante, el esqueleto es capas de acomodar las distorciones que resultan de la incorporacin de estos tripletes de bases. En anbos motivos de la triple helise el apilamiento de las bases juega un importante papel en la estabilizacin de la estructura. Sin envargo, la aproximacin de las 3 hebras de la triple helise cargadas negativamente da lugar aun aumento considerable de la repulcion electrosttica. La triple hlice es pues, menos estable que la hlice doble de Watson y Crick. Ademas, la formacin de la triple helise es altamente dependiente de la concentracin salina. En particular, la presencia de Mg2+ y de otros cationes multivalentes estabiliza la triple hlice al apantallar la carga de los fosfatos. Las hlices triples intramoleculares se pueden formar por la disosacion de la estructura en dodle hlice por secuencias especulares de polipurina. Una repeticin especular es una secuencia como AGGGGA, que tiene la misma secuencia de bases cuando se lee en embas direcciones desde un punto central. La renaturalizacion forma una regin de cadena triple y un lazo de cadena sencilla, culla estructura se conoce como ADN H. Aunque la formacin de ADN H es termodinmicamente desfavorable, sobre todo por la perdida de interacciones de apilamiento en el lazo de cadena sencilla, se an observado hlices triples intra moleculares en ADN celular bajo tensin super helicoloidal. Parece ser que el superenrrollamiento suministra la energa para la desnaturalizacin del ADN, necesaria para la formacin de la triple hlice. La formacin de hlices triples relaja el super enrrollamiento negativo. La unin de protenas al ADN de cadena sencilla puede estabilizar tambin la estructura del ADN H, impidiendo la degradacin del lazo por las nucleasas. ADN DE HEBRA CUADRUPLE Los nucletidos de guanina y los polinucleotidos muy ricos en G forman estructuras tetramericas denominadas cuartetos de G. Estas estructuras consisten en guarinas dispuestas en un plano y conectadas por enlaces de hidrogeno de

HOOGSTEEN. Los cuartetos pueden apilarce uno sobre otros ra forma una estructuras con muchas capas. Son posibles diversas estructuras de cuatro hebras segn la orientacin relativa d las hebras. Cuando interaccionan cuatro polinucleotidos independientes es posible que Las cuatro hebras estn dispuestas paralelamente. Hay tambin 3 posibles ismeros con las hebras antiparaletas; estas formas predminan cuando uno de los polinucleotidos suministra dos o mas hebras del tetraflex mediante plegamiento intra molecular. Todas estas estructuras estn estabilizadas por cationes metlicos especialmente sodio y potasio estos cationes interaccionan con los oxgenos de las guaninas (o-6), en el agujero que se forma en el centro del cuarteto.Los hiones metlicos pueden encontrarse en el plano del cuarteto o entre dos planos adyacentes. En esta ultima disposicin hay 8 O2 para coordinar el hion. L a estabilizacin preferencial por Na+ -K+ en comparacin con Li+ o Cs+ se debe al mejor encaje de aquellos en la cantida formada por el cuarteto: los hiones de Li son demasiado pequeos y los de casio demasiado grandes para una unin suficientemente estable. Los hiones se encuentran completamente aisladoen el interior de las estructura y solo aquellos que se encuentran en los estremos del tetraplex puedenmantener la coordinacin con las molculas de H2O. Adems con la liberacin entropicamente favorable de molculas de H2O por los hiones metlicos, estos reducen la carga negativa global acumulada en la estructura de cudruple hebra. Las estructuras de cudruple cadena de G se an observado por difraccin de rayos X y espectroscopia de RMN, pero su esistencia in vivo no a sido demostrado. Sin embargo, hay procesos biolgicos donde los polinucleotidos ricos en G juegan un papel importante, y para los cuales se a propuesto un papel para el tetraplex de G. Los extremos de los cromosomas eucariotidos (telomeros) contiene secuencias repetitivas ricas en G. Los telomeros humanos contienen de 800- 2400 copias de la secuencia examerica repetida (TTdAdGdGdG)n y terminan en un extremo de cadena sencilla de unos 150 nucleotidos. Estudios invitro indican que los oligonucletidos con esta secuencia pueden formar tetraplex

REPLICACION DEL ADN Dos caracterisitcas distintivas e inmediatamente aparentes del modelo de Watson y Crick hicieron mas evidente el hecho de que el ADN puede contener informacin codiicada en su secuencia de bases. El modelo sugiere una forma en que la secuencia de nucletidos del ADN pueda copiarse de forma precisa, un proceso conocido como la replicacin del ADN. La conexin entre la replicacin de ADN y el conocimiento de los cromosomas en la mitosis era obvia para Watson y Crick. Un cromosoma se duplica de manera que consiste en dos cromatinas hermanas idnticas que mas tarde se separan en la anafase el gentico debe duplicarse y distribuirse a las clulas hijas de forma precisa. Watson y Crick observaron, en un clsico y ahora famoso libro de exposicin escueta al final de su breve primer articulo, No hasta nuestra atencin el hecho de que el emparejamiento de bases que hemos postulado sugiere de inmediato un posiblede copiado para el material gentico. El modelo sugeria que, como los nucletidos se emparejan en modo complementario, cada cadena de la molecula del ADN puede servir como molde para sintetizar la cadena opuesta. Solo seria necesario que los enlaces de hidrogeno entre las dos cadenas se rompieran en que los puentes de hidrogeno son relativamente ..las dos cadenas se separan. Cada cadena de doble hlice puede entonces emparejarse con nuevos nucletidos complementarios a remplazar la pareja faltante. El resultado seria

dos dobles hlices del ADN, cada una idntica a la original y formada por una cadena de la molecula progenitora y una cadena complementaria recinte. Esta manera de copiar la informacin se conoce como replicacin semiconservativa. Meselson y Stahl confirmaron el mecanismo de replicacin semiconservativa Si bien el mecanismo de duplicacin semiconservativa propuesta Watson y Crick era (y sigue siendo) un modelo sencillo y . requeran pruebas experimentales para establecer que en efecto se duplica de esa manera. Los investigadores necesitaban..otras posibilidades. En la replicacin conservativa progenitoras (o antiguas) permaneceran juntas, y las dos recin sintetizadas formaran una segunda doble hlice. Como tercera hiptesis, las cadenas progenitoras y de nueva formula podran mezclarse al azar durante el proceso de replicacin; En que se denomino replicacin dispersiva. Para ..entre la replicacin semiconservativa y los otros modelos del ADN, hacindose Mediante centrifugacin en gradiente de densidad, los cientficos pueden separar grandes molculas como el ADN con base en diferencias en su densidad. Cuando el ADN se mezcla con una solucin que contiene cloruro de cesio y se centrifugs a alta velocidad, la solucin forma una gradiente de densidad en el tubo de centrifuga, que oscila desde la regin de menor densidad en la parte superior a la de mayor densidad en el fondo. Durante la centrifuga, las molculas del ADN migramn a la regin del gradiente con una densidad idntica a la suya. En 1958, Matthew Meselson y Franklin Stahl en el California Institute of Technology crecieron la bacteria Eschrichia coli en un medio que contenia 15 N en forma de cloruro

de amonio (NH4Cl). Las clulas usaban el 15N para sintetizar bases, que a su vez se incorporaban en el ADN. Las molculas del ADN resultantes, que contenan nitrgeno pesado, se extrajeron de algunas de las clulas. Cuando los investigadores las sometieron a centrifugacin en gradiente de densidad, se acumularon en la regin de alta densidad del gradiente. El equipo transfiri el resto de las bacterias (que tambin contenia ADN Con 15N) a un medio de culticvo diferente en el que el NH4Cl con el isotopo ligero 14N, mas abundante en la naturaleza y las ... Durante varias divisiones adicionales. Meselson y Stahl esperaban que las cadenas recin sintetizadas fueran menos

densas, ya que haban incorporado bases codon el ligero 14N. en efecto el ADN de doble cadena de las clulas, una generacin tenia una densidad intermedia, lo que indicaba contenan la mitad de atomos 15N que el ADN progenitor. Este hecho apoyaba el modelo de replicacin semiconservativa , que predeca y cada doble hlice contendra una cadena previamente y una cadena recin sintetizada. Tambin era consecuente con el modelo dispersivo que tambin habia dado una clase de molculas con una densidad intermedia. No esta de acuerdo con el modelo consevativo, que predeca dos clases de molculas de doble cadena, unas con dos cadenas pesadas y otras con cadenas ligeras. Tras otro ciclo de divisin celular en el medio con el isotopo ligero 14N, aparecieron dos tipos de ADN en el gradiente de densidad exactamente como predeca el modelo de replicacin semiconservativa . un tipo consista en ADN con una densidad intermedia entre el marcado 15N y ADN marcado con 14 N, mientras que el otro tenia solamnente

ADN con una densidad del ADN marcado con 14 N hecho refutaba el modelo dispersivo, que predeca que todas las cadenas tendran una densidad intermedia.(1) LA REPLICACION SEMICONSERVATIVA EXPLICA LA PERPETUACION DE LAS MUTACIONES El reconocimiento de que el ADN poda copiarse por un mecanismo semicorservativo sugeria como el ADN, poda explicar una tercera caracterstica esencial del material gentico, la capacidad de mutar a tiempo que se sabia que las mutaciones, o cambios genticos, pueden surgir en los genes y ser entonces transmitidas fielmente a las siguiente generaciones. Por ejemplo, una mutacion en la mosca de la fruta produce alas vestigiales. Cuando se propuso el modelo de la doble hlice pareca plasmar que las mutaciones podan representar un cambio en la secuencia de bases en el ADN. Se puede predecir que si el ADN se copia por mecanismo que implica un emparejamiento de bases complementando cuamquier cambio en la secuencia de bases en una cadena produce una nueva secuencia de bases complememtarias durante el siguiente ciclo de replicacin. La nueva secuencia de bases se transferira.. a las molculas hijas por el mismo mecanismo utilizado para el material gentico original, como si no se hubiese producido ningn cambio.(1) LA REPLICACION DE ADN REQUIERE UNA MAQUINARIA PROTEICA Aunque la replicacin semiconservativa mediante el emparejamiento de bases para fcil y sencilla, el proceso real esta altamente regulado y requiere una maquina de replicacin que contiene muchos tipos de protenas y enzimas. Muchas caractersticas

esenciales de la replicacin del ADN son comunes en todos los organismo, aunque difiere un tanto en los procariontes y los eucariontes porque su ADN esta organizado de forma diferente. En muchas clulas bacterianas, como el E. Coli , la mayor parte o todo el ADN esta en la forma de nica molecula de ADN de cadena doble y circular. En cambio cada cromosoma eucarionte no replicado contiene una nica molecula de cadena doble lineal asociada con al menos tanta proteina ( en cuanto a la masa) como ADN.(1) LAS CADENAS DE ADN DEBEN DESARROLARSE DURANTE LA REPLICACION La repliacion de ADN empieza en lugares especficos de la molecula de ADN,

denominados orgenes de replicacin, donde se desarrollan pequeos tramos de doble hlice. Las ADN helicasas son enzimas estabilizadoras de la hlice (se han identificados varias) que se unen en el origen de replicacin y rompen los puentes de hidrogeno separado por tanto por las dos cadenas . las dos cadenas de ADN replican a la vez en el punto de unin entre las cadenas separadas por una estrcutura en forma de Y denominada Horquilla de replicacin helicasa que se mueve a lo largo de la hlice, abriendo la doble hlice con una cremallera durante el movimiento de la horquilla de replicacin. Una vez que las ADN hlicasas separan las cadenas, las de unin a cada cadena sencilla(SSB) se unen a las cadenas de una cadena sencilla y las estabilizan esto evita que la doble hlice se va formar hasta que haya replicado las cadenas. Las protenas tambin evitan la hidrolisis de las regiones de cadena sencilla por las enzimas (las nucleasas).

Watson y Crick reconocieron que en su modelo de doble hlice en dos cadenas de AND estan enrrolladas de una a la otra como de una cuerda. Si tratamos de separa los hilos, la cuerda debe o bien enrrollarse en una espiral mas apretada. Podramos esperar. Osurriera algo similar cuando las cadenas de ADN se separan para la replicacin. A medida que las cadenas de ADN. Desarrolan para abrirse para la replicacin, en otros lugares de las moleculas de ADN se produce una tensin de torsin derivada de el enrrollamiento(un enrrollamiento exsesivo ) . las enzimas .topoisomerasas producen roturas en la molecula de ADN y .vuelven a unir las cadenas, liberando la tensin e impidiendo de.eficas el supere nrrollamiento y la formacin de nudos durante . . Las topoisomerasas pueden reducir el

superenrrollamintos de dos modos.algunas topoisomerasas producen una rotura el esqueleto de polinucleotidos de una cadena sencilla de ADN.. dicha cadena por la parte exesivamente enrrollada, y despus rotura. Otras topoisomerasas rompen ambas cadenas de ADN parte de la hlice entre los extremos del corte y despus cierran la rotura. Independienteme te de un modo de accin, las topoisomerasas otrogan al ADN en replicacin una configuracin mas relajadas. LA REPLICACION DE ADN ES DESCONTINUA EN UNA CADENA Y CONTINUA EN LA OTRA Anteriormente se ha mecionado que las cadenas de ADN complementarias son antiparalelas. La sntesis de ADN solo procede en sentido 5 3 lo que significa que la cadena que se esta copiando se esta leyendo en sentido 3 5 por lo tanto,podra parecer necesario copiar una de las cadenas empezando en un extremo de la doble hlice y otra cadena empezando en el extremo opuesto. Algunos virus replican su ADN

de esta manera, pero este mtodo de replicacin no es factible en las extremadamente largas molculas de ADN de los cromosomas eucarionta. En cambio como se menciono previamente, la replicacin delADN empieza en los orgenes de replicacin, y ambas cadenas se replican a la vez en la horquilla de replicacin. La posicin de la horquilla de replicacin se mueve constantemente a medida que avanza la replicacin, dos molculas de ADN plimerasa idnticas cataliza la replicacin, una de ella aade nucletidos al extremo 3 de nueva cadena que crece siempre hacia la horquilla de replicacin. Dado que esta cadena se sintetiza de forma continua y uniforme, se denomina cadena libre. Una segunda molecula de ADN polimerasa anade nucletidos al extremo 3 de la o tra cadena nueva denominada cadena retrasada, crece siempre en el sentido opuesto a la horquilla de replicacin. Estos fragmentos de 100 a 2000 nucleotidos se denomida fragmentos de Okazaki en honor a su descubridor, el bilogo molecular Japones Reiji Okazaki. La ADN primasa cataliza peridicamente la sntesis de un ARN .en la cadena retrasada. De modo que cada fragmento de otros es iniciado por un ARN sebador diferente, que acontinuacion es debido por el ADN polimerasa hacia el extremo 5 del fragmento utilizado previamente. Cuando se alcanza el ARN sebador de fragmento sintetizado anteriormente, la ADN polimerasa degrada y reemplaza el sebador con ADN. La ADN ligasa une entonces los fragmentos de Okazaki fosfato 5 de ADN adiasente, formando un enlace fosfodiester. DESNATURALIZACION Y RENATURALIZACION:

Las hebras de la doble hlice se separan durante casi todos los procesos biolgicos importantes en que participa el ADN, como son la replicacin, la transcripcin y la recombinacin. Las fuerzas que mantienen juntas las dos cadenas son suficientes para mantener la estabilidad, pero duficientemente dbiles permitir la fcil separacin de la hebras. La doble hlice esta estabilizada en relacin con las cadenas sensillas por aproximadamente 1 kcal por par de bases, de forma que una perturbasion relativamente pequa puede producir la desorganizacin local de doble hlice, siempre que se trate de un fracmento corto de ADN. Cuando estos pares de bases se vuelebn a formar liberan energa libre que puede producir desenrrollamiento de los pares de bases adyacentes. De esta manera, pequeas interrupciones de la doble helicepuede migrar por toda su longitud. As pues, en un instante dado, la mayor parte de las bases permanecen unidas por puentes de hidrogeno, si bien todas las bases pueden pasar a travs del estado conocatenario durante un corto periodo de tiempo. La capacidad de respirar de la doble hlice del ADN es jun requisito esencial de sus funciones biolgicas. La separacin de las cadenas de ADN en disolucin puede ser estudiada aumentando la temperatura. A temperaturas relativamentes bajas, se desaparean unos cuantos pares de bases, formando una o varias burbujas . Estas burbujas se forman inicialmente en regiones que contienen proporciones relativamente elevadas de pares adenina- timina, debido a las menores energas de apilamiento de estos pares de bases. A medida que sube la temperatura, el tamao de las burbujas aumenta hasta que, finalmente, el movimiento trmico del polinucleotido supera las fuerzar que estabilizan las doble helice. A temperatura aun mas elevadas , las hebras se separan

fsicamente y adquieren una conformacin el ovillo estadstico. Este proceso se designa con mayor presicion como transcicion hlice-ovillo, pero comnmente se denomina desnaturalizacin o fusin. La Desnaturalizacion viene acompaada por varios cambios fsicos, entre cuale se encuentra un aumento de la densidad de flotacin, una reduccin de viscosidad, un cmbiop en la capacidad de girar una la luz polarizada y cambios en la absorfcion de la luz UV. HIBRIDACION La autoasociacion de hebras polinucleotidas complementarias a proporcionado la base para el desarrollo de la tcnica de hibridacin. Esta tcnica consiste en la asociacin entre dos cadenas polinucleotidicas, que puede tener el mismo o diferente origen y longitud, siempre que exista complementaridad entre las cadenas . La hibridacin puede tener lugar no solo entre cadenas de ARN complementariads y combinaciones de ADN- ARN. Se an desarrollado tcnicas para detectar y medir la cantidad de polinucleotidos hibridado y para medir las velocidades de hibridacin. Esta tcnica forma parte de los mtodos bsicos de la biologa molecular contempornea y se utilizan para determinar si una sierta secuencia de ADN esta representada mas de una vez en un organismo particular; demostrar la existencia de relacin gentica o evolutiva en organismos diferentes; determinas el numero de genes transcritos en un mARN particular; determinar la localizacin de una secuencia de ADN determinada por hibridacion con un polinucleotido complementario, denominado sonda, marcado convenientemente para la fcil deteccin del hibrido. En el experimento tpico, el ADN

se desnaturaliza y se inmoviliza mediante fijacin de una matriz insoluble adecuada. Luego de permite que las sondas de ADN marcada hibriden con lasecuencia complementaria unidas ala matriz. EXPRESION GENETICA Los cientficos saben ahora que las caractersticas bsicas de la doble hlice de ADN, descritas originalmente por Watson y Crick son las mismas en todas las clulas estudiadas hasta el momento, desde las clulas bacterianas mas simples hasta la complejas clulas humanas a mediados de la dcada de 1950, los investigadores haban determinado que la secuencia de bases en ADN contien la informacin que especifica todas la protenas que la celula necesita. Sin embargo la comprensin fundamental del como las clulas conviernten la informacin delADN en la secuencia de aminoaciodos de protenas requierio mas de una dcada de intensa investigacin por parte de muchos cientficos. Gran parte de esta compresin se obtuvo estudiando las funciones de genes bacterianos. Despus de que Watson y Crick descubrieran la estructura del ADN, los investigadores escogieron las clulas bacterianas como organismos para estos estudios porque las bacterias crecen rpida y fcilmente y porque contiene la cantidad minima de ADN necesaria para el crecimiento y la reproduccin. A medida que los investigadores aprendan que todos los organismo presentaban similitudes genticas fundamentales, la validez, asi como la utilidad de esta aproximacin se confirmaba respectivamente. La expresin gnica implica uan serie de pasos mediante los cuales la informacin contenida en las bases de ADN detalla la produccin de las prteinas de la celula. Las

protenas afectan al fenotipo de algn modo; estos oscilan desde rasgos fsicos fcilmente hasta cambios sutiles solo detectables a nivel bioqumico. SECUENCIA Y FUNCION DE ADN El tamao y la composicin en bases promedio del ADN varian mucho segn la especie. La propiedad que confiere carcter nico al ADN de una especie es su secuencia nucleotida. Hasta hace poco la determinacin directe de la secuencias nucletidos de un ADN genmico era una empresa intimidante. La tecnologa desarrollada para el proyecto genoma humano a acelerado la velocidad de obtension de la secuencias de ADN. Muy pronto las secuencias completas de varias especies estarn disponibles para ser analisadas.

Endonucleasas de restriccin y palndromos

El descubrimiento de las endonucleasas de restriccin fue clave para el desarrollo de los mtodos de secuenciacin del DNA genmico. Estos enzimas cortan el DNA de doble cadena en una secuencia especfica, mediante dos cortes uno en cada cadena (figura 2.51). las bacterias desarrollaron las enzimas de restriccin como una defensa frente a la infeccin por fagos. El corte expone el DNA vrico a la degradacin por exonucleasas bacterianas inespecficas. El DNA bacteriano puede protegerse del corte por metilacin especfica de secuencia. Los sitios de reconocimiento de las metilasas de restriccin corresponden a los de las endonucleasas. La metilacin de bases especificas dentro del sitio de reconocimiento impide el corte por la correspondiente nucleasa. Los sitios mas comunes para la metilacin son la posicin 5 de la sitosina y el grupo 6-NH2 de la adenina. Es de destacar que la metilacin de bases tienen un papel fundamental en la regulacin gnica en los organismos superiores. Se han purificado varios centenares de endonucleasas de restriccin, y la lisu sigue incrementndose. Con pocas excepciones, estos encimas reconocen secuencias de cuatro a seis nucletidos de longitud. Las pocas endonucleasas con lugares de reconocimiento ms largo son tiles porque su frecuencia de corte de grades DNA, como el de los cromo somas eucarioticos, es relativamente baja. Por ejemplo Not I tienen una secuencia de reconocimiento de ocho nucletidos. Las secuencias de reconocimiento son repeticiones invertidas perfectamente simtricas conocidas como palndromos. El orden de las bases es el mismo cuando las dos hebras complementarias del palndromo se leen ambas en direccin 5 3. Por ejemplo en el caso del

enzima de restriccin EcoRI, aislado de E. coli, la secuencia de bases a 5 GAATTC-3. Las endonucleasas de restriccin se clasifican en tres categoras los enzimas de tipo I y III cortan en sitios alejados de sitio de reconocimiento. Los enzimas de tipo II, cortan especficamente el DNA dentro de la secuencia de reconocimiento. Las endonucleasas de restriccin reconocen secuencias especficas que estn presentes a lo largo de los grandes segmentos de DNA con frecuencias relativamente bajas, y fragmentan el DNA de manera muy selectiva. Por ejemplo, un DNA bacteriano tpico, que contenga aproximadamente 3 x 106 pb, ser cortado en unos pocos centenares de fragmentos. Un pequeo virus o un plasmido pueden tener unos pocos o incluso ningn sitio de corte para una determinada endonucleasas de restriccin (figura 2.52). el significado practico es que un enzima de restriccin particular genera una nica familia de fragmentos para una molcula de DNA dado conocida como patrn de restriccin. La disponibilidad de enzimas de restriccin para cortar grandes secuencias de DNA y el desarrollo de tcnicas electroforticas para separar fragmentos de DNA ha hecho de la secuenciacin una operacin sencilla. Estas tcnicas de secuenciacin se describen en el captulo 7. La mayor parte del DNA procaritico codifica protenas especificas En los procariotas, un elevado porcentaje de DNA cromosomatico total codifica protenas especificas. El genoma de E. coli, que se ha secuenciado completamente, consiste en unos 4,6 x 106 pb de DNA y contiene 4200 genes. No todos los genes codifican protenas expresables o funcionales. Por ejemplo, ochenta genes codifican molculas de tRNA y algunos posiblemente no codifican molculas funcionales. En general, la informacin gentica esta densamente empaquetada en el DNA de E. coli y hay muy pocas repeticiones en la informacin que contiene el genoma. Tan solo el 1% del genoma de E. coli contiene multiples copias de cortas secuencias repetitivas conocidas como elemento palindromicos extregenicos repeetidos (REP). Los elemtos REP con la secuencia GCTGGTGG (sitios chi) interaccionarian con el enzima RecBCD, que inicia la recombinacin del DNA. Los sitios chi se encuentran espacios regularmente a intervalos separados por unos 4000 pb. La informacin gentica se halla todava mas densamente organizada en organismos mas pequeos tales como los bacteriolagos, en los que la secuencia primaria de DNA pone de manifiesto que los genes estruccturales secuencias de nucletidos que codifican protenas - no siempre tienen localizaciones fsicas definidas. A veces pueden solaparse unos con otros, como muestra la secuencia parcial del bacterifago X174 (figura 2.53). el solapamiento contribuye al uso suficiente y econmico de la limitada cantidad del DNA disponible y tambin podra controlar el orden de expresin de los genes. Los genes funcionales solamente representan una pequea parte del DNA eucariotico. los eucariotas tienen genomas mucho mas grande que los procariotas; osilan entre 1.5 x 107 pb en las levaduras hasta los aproximadamente 1,15 x 1011 pb de genoma haploide del lirio fritillaria assyrinca. este ultimo contiene suficiente DNA para codificar cerca de 3000000 de genes. Antes

de febrero de 2001 se crea que el genoma hunamo contenia entre 70000 y 120000 genes sin embargo, los resultados iniciales del proyecto genoma humano sugieren que el genoma humano no tiene ms de 30000 genes. En consecuencia, la informacin gentica no necesita estar tan densamente empaquetada como en las bacterias. Un DNA tpico de mamfero, con solo siete veces ms de genes que el de E. coli, contiene 500 veces ms DNA que la bacteria. Asi pues, es evidente que los genes que codifican protenas especficas y las secuencias que controlan la expresin gnica no representa la totalidad del DNA en las clulas eucariotas. De hecho, solo el 2 4 % del DNA de una celula de mamfero puede ser suficiente para contener todos sus genes. Parte del DNA restante, como el que se encuentra en centrmeros y telomeros, tienen adsentas funciones definidas; pero la mayor parte del DNA no codificador carece de funcin conocida y se ha calificado como DNA basura. No obstante, se estn acumulando resultados en favor de que este DNA pudiera tener un papel vital en regulacin de la expresin gnica durante el desarrollo. Las secuencias del nucletidos indican que los genes eucariotos no se solapar y que, como promedio, estn separados por 40 000 pb. Sin embargo, algunos genes eucarioticos, pueden estar ms cerca unos de otros en regiones que contienen genes cuya expresin est estrechamente coordinada (familia gentica). La mayora de los genes eucarioticos estn interrumpidos por la secuencia nucleotidicas no codificadoras llamadas intrones (figura 2.54). las secuencias nucleotidicas del gen. DNA de copia nica Aproximadamente la mitad del genoma esta constituido por secuencias nucletidos nicas, aunque, como se ha inidicado arteriormente, solo una pequea fraccion codifica protenas especificas. Una parte del DNA contiene pseudogene secuencias del DNA que presentan una homologa de nuecleotidos significativa a un gen funcional, pero que contiene mutaciones que evitan su expresion. Estos genes, que pueden estar presentes en una frecuencia tan elevada como un pseudogen por cada cuatro genes funcionales, incrementa significativamente el tamao los genomas eucarioticos sin contribuir a su contenido gentico expresable. Otra secuencia de DNA de copia nica forman intrones y las regiones flanqueantes reguladoras de los genes. DNA moderadamente reiterado Esta clase de DNA consiste en copias de secuencias idnticas o estrechamente relacionadas que estn reiteradas desde unas pocas veces hasta un millar de veces trata de secuencias relativamente largas, que oscilan entre unos centenares y mucho miles de secuencias y muchos y miles de nucletidos antes que se repita la misma secuencia polinucleotidica. Aproximadamente el 20 % del DNA de raton esta compuesto por secuencia de unos pocos centenares de bases que estn repetidas mas de mil veces. Alrededor de un 15 % del genoma humano consiste en DNA moderadamente reiterado. Normalmente las secuencias de copia nica y las secuencias moderadamente reiteradas estn ordenadas en el cromosomas segn un patrn denominado

patrn entremenclado, que cosiste en la alternanciade bloques de DNA de copia nica y de DNA moderadamente reiterado. Las secuencias de moderadamente reiteradas pueden sub dividirse en repeticiones entremescladas cortas y en repeticiones entremezcladas largas, de laa cuales se encuentran entre 1000 y 100000 copias por genoma. Las repeticiones entremezcladas largas consiste en secuencias de varios miles de nucletidos, de las que existen hasta 1000 copias por genoma. Estas repiticiones tan flaqueadas por repiticiones directas. Un ejemplo de repiticiones entremezcladas cortas es la familia Alu, que constituye una parte susutancial del genoma humano (alrededor del 5%). Las secuencias Alu tienen aproximadamente 300 de longitud y estn repetidas mas de 500000 veces. La estructura de las repeticiones entremezcladas cortas, incluida la familia Alu, recuerda a los transposon. Todava no se ha establecido la funcion de la familia Alu. DNA altamente reiterado En conjunto el DNA de copia nica y el DNA moderadamente repetitivo representan normalmente mas del 80 % de la totalidad del DNA de los genomas eucarioticos. El DNA restante consiste en secuencias, normalmente de menos de 20 nucleotidos, reiterada millares o millones de veces. Aproximadamente el 10% del DNA de raton consiste en repeticiones de 10 pb reiteradas millones de veces. Debida la manera en que estn construidos, los DNA altamente reiterados tambin se denominan DNA simple. Las secuencias simples se encuentran en DNA de la mayora o de la totalidad de los eucariotas. En algunas especias hay tipo principal de secuencia simple, mientas que en otras varias secuencias simples estn repetidas hasta un milln de veces. Tambin se han identificado algunas unidades repetitivas considerablemente ms largas en el DNA de secuencia simple. un ejemplo, en el genoma del mono verde africano se ha encontrado un segmento. 172 pb altamente reiterado que a su vez contiene unas pocas repeticiones. Da que su composicin es caracterstica, el DNA de secuencia simple puede aislarse menudo como DNA satlite. El DNA satlite que se encuentra en los centrome de los eucariotas superiores consiste en miles de copias en tndem de una o de u n pocas secuencias cortas. Las secuencias satlite tienen tan solo 5-10 pb de largo DNA de secuencia simple (satlite) es uno de los constituyentes de los telomen donde tienen un papel bien definido en la replicacin del DNA. DNA de repeticiones invertida Las repeticiones invertidas son un motivo estructural del DNA. Las repeticiones vertidas cortas de hasta seis nucletidos, como la secuencia palindromica GAAT por ejemplo, se encuentran distribuidas al azar aproximadamente una vez cada 3000 nucleotidos. Estas repeticiones cortas no pueden formar una estructura estable en horquilla, como lo hacen las secuencias palindromicas mas largas. No es probable que las repeticiones invertidas suficientemente largas para formar horquillas sean fruto del azar, y deben de clasificarse como una clase separada de secuencias eucarioticas. En el DNA humano hay aproximadamente dos millones de repeticiones invertidas con una logitud medida de 200 pb, aunque se han detectado secuencias invertidas de

longitud superior a los 1000 pb. La mayora de las repeticiones invertidas se repiten 1000 o mas veces por celula. Visin general del RNA Las molculas del RNA juegan diferentes papeles en la transferencia de informacin en la celula (tabla 2.5). la mayor parte del RNA celular es RNA ribosmico (rRNA). Los ribosomas son grandes complejos de protenas y RNA que llevan a cabo la traduccin. Los RNA mensajeros (mRNA) sirven de molde para la sintesisproteica. Los RNA de transferencia (rRNA) transfieren aminocidos especficos desde las reservas de aminocidos solubles hasta los ribosomas y aseguran su correcto alineamiento antes de la formacin del enlace peptdico. Otros RNA celulares son importantes en la elaboracin del RNA y en la exportacin de protenas fuera de la celula.

MUTACIONES Objetivos de aprendizaje Dar ejemplos de las deferentes clases de mutaciones que afectan a la secuencia d bases del ADN, y explicar los efectos que tienen cada una sobre los polipeptidos producidos. Uno de los primeros descubrimientos importantes sobre las genes fue que sufren mutaciones, Cambios en la secuencia nucleoditica del ADN. Sin embargo, la taza de mutacion global es mucho ms mayor que la frecuencia de daos en el ADN, ya que todo los organismos tienen sistemas de enzimas que reparan ciuertos tipos de lesiones de ADN. Sin una secuencia de ADN ha sufrido cambios y no se ha corregido, la replicacin del ADN copia la secuencia alternada del mismo modo en el que la copia una secuencia

normal, estabilizando la mutacion durante un numero indefinido de generaciones. En la mayora de los casos, el alelo mutante no presenta una mayor tendencia que el alelo original a mutar otra vez. Aunque la mayora de la mutaciones no corregidas son o bien silenciosas (y no tienen un efecto discernible) o bien dainas (como las que causan enfermedades hereditarias y cancer), unas pocas son tiles. Puesto que pueden transmitir a la siguiente generacin ( en las lneas celulares que dan lugar a los gametos ), las mutaciones son de vital importancia en la evolucin. Las mutaciones porporcionan la variacin entre eindividuos sobre las que actan las fuerzas evolutivas. Las mutaciones son trambien tiles en la investigacin (recurdese el trabajo de Beadle y Tatum con mutaciones), ya que proporcionan la divesidad del material gentico que permite a los investigadores estudiar la herencia y la naturaleza molecular de los genes. Las mutaciones alteran los genes de varias maneras. Actualmente los cientficos determinan donde se produce una mutacion particular en un gen usando mtodos de ADN recombinante para aislar el gen y determinar su secuencia de bases.

Las mutaciones de cambio de base resultan de la sustitucin de un par de bases por otro. El tipo mas simple de mutacion, denominada cambio de base, implica un cambio en un nico par de nucleodidos. A menudo estas mutaciones resultan de errores en el emparejamiento de bases durante el proceso de replicacin. Por ejemplo, un par GC, o CG, o TA puede reemplazar un par de bases AT. Semejante mutacin es capas de

causar que el ADN alterado se transcriba como un mRNA alterado. El mRNA alterado puede entonces traducirse en una cadena polipeptidica con tan solo un aminocido diferente de la secuencia normal. Los cambios de bases que resultan en la sustitucin de un aminoacido por otro se denominan a menudo mutaciones de sentido incorrecto (o mutaciones de sentido falso, en ingles missense mutation). Este tipo de mutaciones tiene un amplio rango de efectos. Si la sustitucion de aminocidos ocurre en el sitio activo de una enzima o cerca de l, la actividad de la protena alterada puede disminuir o incluso destruirse. Algunas mutaciones de sentido incorrecto implican un cambio en un aminocido que no forman parte del sitio activo. Otras pueden resultar en la sustitucin de un aminocido estrechamente relacionado (uno con caractersticas qumicas similares). Estas mutaciones silenciosas no tienen efeccto en la funcin de un producto gentico y pueden ser indtectables. puesto que las mutaciones silenciosas se producen con relativa frecuencia, el numero real de mutaciones en un organismo o especie es

mucho mayor del observado en realidad. Las mutaciones sin sentido (en ingles nonsense mutations) son sustituciones de bases que convierten un codon que especifica un aminoacido en uno de parada. Una mutacion sin sentido destruye normalmente la funcin del porducto gentico; en el caso de un gen que especifica una porteina, falta la perte de la cadena polipeptidica que sigue al codn de parada mutante.

Las mutaciones de cambio en la pauta de lectura resultan de la insercin o la delecion de pares de bases En las mutaciones de cambio en la pauta de lectura (o mutaciones de desfase, frameshift ), se insertan o delecionan de la molecula uno o dos pares de mucleotidos, alternados la pauta de lectura. En consecuencia, los codones corrientes abajo del lugar de insercin o delecin especifican una secuencia de aminocidos complemente nueba. dependiendo de donde se porduce la insercin o la delecion en el gen, se producenefectos diferentes. Adems de producir una secuencia polipeptidica totalmente nueva inmediatamente despus del cambio, las mutaciones de cambio en la pauta de lectura pueden dar lugar a un codn de parada cerca de la mutacion. Este codn finaliza la ya alterada cadena polipeptidica. Un cambio en la pauta de lectura de un gen que especifica una enzima resulta normalmente en una perdida completa de la actividad enzimtica. Algunas mutaciones implican grandes segmentos de ADN Algunos tipos de mutaciones se deben a un cambio en la estructura cromosmica. Estos cambios normalmente tienen un amplio rango de muchos genes. Un tipo de mutacion es causada por secuencia de ADN que saltan en medio de un gen. Estas secuencias de ADN mviles se conoce como elementos genticos mviles, o transposones. los elementosgenticos miviles no solo interrumpen la funcin de algunos genes sino que tambin inactivan algunos genes previamente activos los transposones se descubrieron en el maz por la genetista estadounidense. efectos por que implican

a) Las mutaciones de sentido incorrecto y las mutaciones sin sentido son tipos de mutacionses de cambio de la base. Una mutacion de sentido incorrectopero con un aminocido cambiado. Una mutacion sin sentido resulta en la produccin de un polipeptido truncado (mas corto) que normalmente no es funcional .(b) Una mutacion de cambio en la pauta de lectura resulta de la delecion (mostrado) o la incercion de una o de dos bases, lo que causa que la secuencia de bases que sigue a la mutacion cambie a una nueva pauta de lectura. Un cambio en la pauta puede producir un codn de parada corriente debajo de la mutacion (lo que tendra el mismo efecto que una mutacion sin sentido causada por un cambio de bases), o puede producirse una nueva secuencia aminoacidica. Barbara McClintock en al dcada de 1950. Observo que agunos gene parecan activarse e inactivarse espontneamente, dedujo que el mecanismo implicaba un

segmento de ADN que se movia de una regin de un cromosoma a otro, donde inactivara un gen. Sin embargo, los bilogos no entendieron este fenmeno hasta el desarrollo de los mtodos de ADN recombinante y el descubrimiento de transposones en una amplia variedad de organismos. Actualmente se sabe que los transposones son segmentos de ADN que oscilan de unos pocos centenares a miles de bases. En reconocimiento a sus a sus reveladores descubrimientos, McClintock recibi el premio novel de fisiologa o medicina en 1983. Se han identificado varios tipos de elementos genticos mviles. Uno de ellos , denominado tyransposon de ADN , traslada material gentico de un sitio a otro usando un metodo de corte y pegado. Los transpososne s de ADN son comunes en las bacterias y los animales, incluyendo los humanos.

Muchos lementos genticos mviles son retrotransposones,

que se replican

formando un intermediario ARN. La transcriptasa inversa los convierte en su secuencia de ADN original antes de saltar a un gen. Muchos retrotransposones reclutan la maquinaria de expresin gentica de la celula hospedadora para producir la transcriptasa imversa codificada en el retrotransposon. Como otros retrotransposones utilizan la transcriptasa inversa, algunos biologos han planteado que ciertos retrotransposones podran haber evolucionado a partir de retrovirus, o viciversa. Los cientficos piensan que las clulas humanas tienen menos de 100 retrotransposones saltando activamente. No obstante, los retrotransposones son agentes mutadores extremadamente importante y por lo tanto aumentan la capacidad de un organismo de evolucionar . se estima que los retrotransposones son responsables de

aproximadamente el 10% de las mutaciones producidas de froma natural causantes de cambios fenitipicos observables.(1) Las mutaciones tienen varias causas: La mayora de los tipos de mutaciones ocurre de forma infrecuente y espontanea a partir de cambios de la replicacin del ADN o defectos en la separacin mittica o

meiotica de los cromosomas. Algunas regiones del ADN, conocidas como puntos calientes mutacionales, presentan una probabilidad de experimentar mutaciones

mayor que otras. Un ejemplo es un corto segmento de nucletidos repetidos, que puede hacer que la ADN polimerasa resbale mientras lee el molde durante la replicacin.

Las mutaciones en ciertos genes aumentan la taza global de mutacion. Por ejemplo, una mutacion en un gen que codifique la ADN polimerasa puede hacer que la replicacin del ADN sea menos presisa, o una mutacion en un gen que codifique una enzima de reparacin puede causar que surjan mas mutaciones como resultado de leciones del ADN no reparadas. No toda las mutaciones ocurren de forma espontanea. Los mutagenos, que causan mucho de los tipos de mutaciones discutidos previamente, incluyen varios tipos de redaccin, como los rayos x, la radiacin gamma, los rayos csmicos y la radiacin ultravioleta. Algunos mutgenos qumicos reaccionan como bases del ADN modificndolas y dando lugar a errores en el emparejamiento complementario de bases Cuando se replica el ADN. Otros mutagenos provocan que seinserten o delecionen pares de nucletidos de la molecula de ADN, cambiando la pauta de lectura normal durante la replicacin. A pesar la presencia de enzimas que reparan las leciones del ADN, surgen algunas mutaciones nuevas. En realidad, cada uno de nosotros tiene algunos alelos mutantes que no tenian ninguno de nuestros padres. Aunque algunas de estas

mutaciones alteran el fenotipo, la mayoria no son observables, por que son recesivos. Las mutaciones que producen en las celular del cuerpo (celulas somatica) no se transmiten a la descendencia. Sin embargo, estas mutaciones son motivo de

preocupacin, ya que las mutaciones somaticas y el cncer estn estrechamente relacionados. Muchos mutagenos son tambin cancergenos, agentes que causan cncer.(1)

TECNOLOGA DEL ADN Y GENMICA CONCEPTOS CLAVES Las tcnicas del ADN recombinante permiten a los cientficos clonar muchas copias de genes especficos y productos genticos. Los bilogos estudian el ADN utilizando geles de electroforesis, transferencia de ADN, secuenciacin automtica y otros mtodos. La genmica es un campo emergente que comprente la estructura, funcin y evolucin de los genomas. La tecnologa del ADN y la genmica tienen aplicaciones muy amplias, desde medicas y forenses hasta agrcolas. El desarrollo de nuevas formas de ADN, que empezo a mediados de la dcada de 1970, condujo a aproximaciones cientficas radicalmente nuevas que han tenido un importante impacto en reas desde la biologa celular y la evolucin hasta temas ticos y Ciales. Este capitulo comienza considerando la tecnologa del ADN recombinante, mediante la cual los cientficos combinan en el laboratorio del ADN de diferentes organismos. Uno de los objetivos de esta tecnologa es permitir que los cientficos obtengan copias de un segmento DAN especifico para poder estudiarlo. Puesto que continuamente emergen nuevos mtodos para analizar el ADN, no se pretende

explicar cada uno de ellos. En vez de eso, se discutirn algunas de las principales aproximaciones que han proporcionado fundamento de esta tecnologa.

Mas adelante se consideraran como los estudios de las secuencias de ADN han ayudado a los cientficos a entender la organizacin de los genes y de sus productos. De hecho, la mayora del conocimiento actual sobre la estructura y el control de los genes eucariotes, y las funciones de los genes en el desarrollo, se debe a la aplicacin de estos mtodos. Este capitulo tambin explora alguna de las aplicaciones practicas de la tecnologa del ADN. Una de las reas de estudio que esta avanzando rpidamente es la ingeniera gentica; la modificacin del ADN de un organismo para producir nuevos genes con nuevos rasgos. La ingeniera gentica se puede presentar de muchas formas, albergando desde la investigacin bsica hasta la produccin de cepas bacterianas que producen tiles productos protenicos, hasta el desarrollo de plantas y animales que expresan genes forneos y que son utiles para agricultura. Los El desarrollo de la clonacin de ADN, de la ingeniera gentica, y de tecnicas relacionadas ha transformado la visin de la biotecnologa, es decir, la utilizacin de organismos para desarrollar productos tiles. Un ejemplo tradicional de la biotecnologa es el uso dela levadura.(1) ARN HISTORIA Hacia aproximadamente hace 20 aos se propuso una hiptesis segn la cual el ARN precedio al ADN como molecula de memoria casi universal en el curso de la historia de los seres vivos (recordemos que algunos virus tienen genoma de ARN) y quiz desempearon un papel cataltico similar al de las enzimas actuales. Quienes

defienden esta hiptesis consideran que las primeras pocas de la tierra haba un tipo de vida basados exclusivamente en el ARN el cual fue reeplazado de manera progresiva por el que se conoce en la actualidad, donde las protenas desempean un papel vital; este esel mundo del ARN. Adems de que la ribosa se obtiene con mas finalidad que la dexosiribosa en condiciones avioticas, en las clulas actuales se observa lo siguiente: 1) los precursores del ADN siempre se forman a partir de los precursores del ARN, y 2) existe una enzima capaz de fabricar ADN a partir de ARN:la transcriptasa inversa. Adems, el ARN tiene las mismas posibilidades que el ADN de formar hibridos, y autoreproducirse, y por otra parte posse la capacidad de organizarse en estructuras tridimensionales complejas, de las cuales el ARNt es el ejemplo conocido desde hace mas tiempo. A diferencia del ADN, que se presenta en forma de una varilla liquida puede, al igual que las protenas formar superficies especificas capaces de reconocer ligandos, y mediante los grupos de bases nucleicas podra eventualmente catalizar reacciones qumicas. Los experiemntos de qumica aviotica demuestran que una cadena monotoma de ARN (por ejemplo la poliC) colocada en presencia de nucletidos activados sirven como matriz para la sntesis de una cadena complementaria (poliG) . este dato que sugiere que el ARN quizs podra funcionar como molecula autoreplicativa inicial, es incompleto porque es imposible fabricar todos los polmeros posibles por este mtodo , en particular, poli U y poli C. en estas condiciones es imposible asegurar la

reproduccin indefinida de cadenas complemetarias, y por fuerza se excluye la sntesis de largas cadenas no monotomas e infirmativas, lo cual constituyen un problema grave.

Por lo que respcta a la propiedad cataltica del ARN, en 1981 se demostr que la sustancia molecular posea capacidades enzimticas atribuidas exclusivamente a las protenas. Sin entrar en detalles, mencionaremos que in vitro algunos ARN (en particular el ARNr del protista tetrahymena)se autodivide en ausencia de enzimas y de energa, es decir, se cortan y forman piezas con eliminacin de una largo fragmento interno de la molecula. Posterieomente se descubrieron nuevas familias de ARN catalticos en ciertos virus, bacterios y otros eucariotes. Estas molculas tan especiales se denominan ribosimas. Dichas observaciones sugieren que quizs los ARN hallan desempeado un papel equivalente al de las protenas en la historia de la vida esta idea se refuerza por el hecho de que numerosas enzimas modernas, libres o enlazadas con protenas(de ADN +, FAD, Co A), son nucletidos, y algunos autores consideran que representan los restos fosiles de enzimas primitivas y proponen que quizs las etapas del metabolismo eran catalizadas por ribosimas. Conviene sealar que el numero de reacciones y de los blancoa identificados hasta la fecha (de hecho, exclusivamente el ARN) son muy limitados .(2) DEFINICION El ARN difiere del ADN en que la pentosa de los nucletidos constituyentes es ribosa en lugar de desoxirribosa, y en que, en lugar de las cuatro bases A, G, C, T, aparece A, G, C, U (es decir uracilo en lugar de timina). Las cadenas de ARN son ms cortas que las de ADN. Aunque dicha caracterstica es debido a consideraciones de carcter biolgico, ya que no existe limitacin qumica para formar cadenas de ARN tan largas como de ADN, hacer el enlace fosfodiester qumicamente idntico. El ARN esta

constituido casi siempre por una nica cadena (es monocatenario), aunque en ciertas situaciones, como en los ARNt y ARNr puede formar estructuras plegadas complejas. Mientras que el ADN contiene la informacin, el ARN expresa dicha informacin pasando de una secuencia lineal de nucletidos, a una secuencia lineal de aminocidos en una protena. Para expresar dicha informacin se necesita varias etapas y, en consecuencia, existen varios tipos de ARN.(6)
ESTRUCTURA EL ARN es un polmero de ribonucleocidos 5- monofosfato El ARN es un pilimero lineal no ramificado de ribonucleosidos monofosfatos. Depurinas del RNA son adenina y guanina; las pirimidinas son citosina y uracilo, eseccion del uracilo, que remplaza a la timina, estas son las mismas bases que encuentran en el DNA. Los nucletidos de A, G, C y U se incorporan al RNA durante la transcripcin. Muchos RNA tambin contienen nucletidos modificados que se producen por transformacin. Estos nucletidos son especialmente caracteristicos de especies de RNA estables (tRNA y rRNA; sin embargo, tambin se encuentran algunos nucletidos metilados en el mRNA eucariotico. En su mayor parte, los nucleotidosmodificados estn implicados en la regulacin fina, mas que en funciones indispensables para las clulas. Los enlaces fosfodiester 3, 5 del RNA forkman una cadena o esqueleto aparte del cual se extiende las bases. La longitud de los RNA eucariotidos varia desde aproximadamente de 65 nucleotidos 200000. La secuencia de RNA son complementarias de las secuencias de bases de porciones especificas de una sola hebra del DNA. Por lo tanto a diferencia de la compocicion de base del DNA, las relaciones molares de (A+U) y (G+C) del RNA no son

iguales del RNA celular es lineal y de hebra sencilla, pero en el genoma de algunos virus se encuentran RNA de doble hebra. La compocicion qumica del RNA es similar a la DNA. Ambos contienen enlases fosfodiester cargados negativamente, y las bases son qumicamente muy similares. Las diferencias qumicas entre el DNA y el RNA se deben principalmente a dos factores. Primero, el RNA contiene ribosa en lugar de 2- desoxirribosa como componente glusidico del nucletido y, segundo, los RNA son generalmentede cadena sencilla en lugar de cadena doble. El grupo 2-hidroxilo hace que los enlaces fosfodiester de una molecula de RNA sean mas susceptibles a la hidrolisis qumica que los del DNA. Los enlaces fosfodiester del RNA se hidrolizan rpidamente en disolucin alcalina, mientras que los enlases del DNA son estables. La inestabilidad qumica del RNA se manifiesta en su inestabilidad metabolica. Algunos RNA, como los mRNA bacterianos, son sintetisados, utilizados y degradados en pocos minutos. Otros, como el rRNA humano son mas estables metablicamente, con una vida media de das. Sin embargo inclusos los RNA mas estables son mucho menos estables que el DNA. ESTRUCTURA SEGUNDARIA DEL RNA INCORPORA APARIAMIENTO DE BASES INTRAMOLECULARES. Las molculas de RNA son de cadenas sencillas y no suelen formar doble hlices estensas. La estructura segundaria del RNA es el resultado de la presencia de regiones relativamente cortas con apareamiento de bases intramolecular es decir pares de bases formados por secuencias complementarias dentro de la misma molecula. Incluso las secuencias no apareadas de los RNA de cadena sencilla contienen una cantidad considerable de estructura elicoidal. Esta estructura helicoidal se debe a las intensas fuerzas de apilamiento entre A, G y C. El RNA de doble helise es generalmente de tipo a y con aproximadamente once nucletidos por vuelta de doble hlice.

Frecuentemente, a las regiones de doble helise del RNA se les llama horguillas. Existen variaciones considerables en los detalles estructurales de las horquillas, entre las que se encuentra la longitud de las regiones apariadas y el tamao y numero de los bucles no apariados. Los RNA de transferencia constituyen ejemplos exelente de apilamiento de bases y formacin de fuentes de nitrgeno de una molecula de RNA de cadena nica. Aproximadamente el 60% de las bases estn apariadas en 4 brasos de doble helise. Ademas, las regiones no apareadas puede formar pares de bases con bases librs del mismo o de otro bucle, contribuyendo asi a la estructura terciaria de la molecula. La regin del anticodon en el tRNA es un bucle de 7 nucleotidos de bases apiladas sin apariadas. La helise parcial producida por el apilamiento de bases en este bucle se une por apariamiento de base a un codn complementario del mRNA, de manera que pueda tener lugar la traduccin. LAS MOLECULAS DE RNA TIENE ESTRUCTURA TERCIARIA Las estructuras de RNA funcionales son mas complejas que las hlices formadas por apilamiento de bases y fuentes de hidrogeno mencionados anteriormente in vivo, los RNA son molculas dinmicas que experimentan cambios conformacionales durante su sntesis, modificacin y funcionamiento. Las protenas asociadas a las molculas de RNA a menudo aumentan su estabilidad. De hecho, el RNA celular realiza sus funciones asociados a protenas y no como RNA libre. La estructura terciaria de las molculas de RNA resulta del apilamiento de bases y de los enlaces de hidrogeno entre diferentes partes de las molculas. El tRNA suministra numerosos ejemplos. El tRNA en disolucin esta plegado en forma de L compacta , estabiliza por apareamiento de Watson y Crick e interacciones de bases entre mas de 2 nucletidos. Estas interacciones tambin se encuentran en otros ARN. Otras caractersticas terciarias se dedujeron de la estructura tridimencionas de ARN en isolucin o en forma cristalina. El termino tetrabucle se refiere a secuencias especificas.Los

tetra bucles confieren estabilidad adicional a las orquilla mediante puestes de hidrogeno interno entre bases y azucares. Los tetrabucles pueden formar fuentes dse hidrogeno con regiones de la doble helise o con bucles internos en otras regiones del ARN, con la consiquiente estabilizacin de la estructura terciaria. (3)

TIPOS DE ARN QUE DESENPEAN UN PAPEL CLAVE EN LA EXPRESION GENETICA: Los cientficos acostumbraban a creer que los ARN ejercan un papel pasivo en la expresin gentica, como meros trasportadores de la informacin, en la forma de ARN mensajero. Sin embargo, investigaciones recientes an demostrado que la ARN ejerce diversar funciones, desde la catlisis hasta la regulacin . Las clulas contienen diversos tipos de ARN.(3) 1.- EL ARN MENSAJERO (mRNA) es el molde para la sntesis de protenas o traduccin. Se puede producir una molecula de (mRNA) por cada gen o grupo de genes que valla a expresarse en E.coli, mientras que se produce un mRNA especifico por cada gen en eucariotas. En consecuencia, el mRNA es una clase eterogenea de molculas. La longitud media de una molecula mRNA E. coli es de alrededor 1,2 kilobases (Kb). En los eucariotas, el mRNA tiene aspectos estructurales tales como estructuras en horquilla que regulan la eficiencia en la traduccin y en el tiempode su vida media.(3) 2.- EL ARN DE TRASFERENCIA (tRNA) trasporta los aminocidos en forma activada al ribosoma para la formacin de enlaces peptdicos, en una secuencia dictada por el mRNA molde. Hay almenos un tipo de tRNA para cada uno de los 20 aminoacidos. El ARN de trasferencia conta de alrededor de 75 nucleotidos (con una masa de unos 25 kd).(3) 3.-EL ARN RIBOSOMICO (rRNA) es el componente principal de los ribosomas y desempea un papel tanto cataltico como estructural en la sntesis de protenas.

En los procariotas existe 3 tipos de rRNA , llamados 23s 16s y 5s ARN debido a su comportamiento en la sedimentacin. Antes se crea que el ARN ribosmico desempeaba solo un papel estructural en los ribosomas. Ahora sabemos que nRNA es el verdadero catalizador en la sistesis de protenas. El ARN ribosmico es el mas abundante de los 3 tipos de ARN. Le siguen el ARN de trasferencia y el ARN mensajero, el cual presenta solamente el 5% del total del ARN. Las clulas eucarioticas continen pequeas molculas de ARN adicionales.(3) 4.- EL ARN NUCLEAR PEQUEO (snRNA small nuclear RNA ) participa el empalme de los exones de ARN.(3) 5.-Una pequea molcula de ARN es un compuesto esencial de la particula que reconoce seales, un complejo de ARN y protena citoplasmticas que coadyuva en dirigir las protenas recin sintetisada hacia los destinos intra e extra celulares.(3) 6.- Los micro RNA (miRNA) son una clase de molculas pequeas de ARN (de alrededor de 21 nucletidos) no codificadoras que se unen a las molculas de mRNA complementarias e inhiben su traduccin.(3) 7.- Los ARN pequeos de interferencia (siRNA) son otra clase de molculas pequeas de RNA que se unen al mRNA y facilita su degradacin. Los micro RNA y los ARN pequeo de interferencia tambin proporcionan a los investigadores unos potentes instrumentos experimentales para inhibir la expresin de determinados genes en las clulas.(3) 8.-El RNA tambin es un componente de la telomerasa, un enzima que mantiene los telomeros (extremos) de los cromosomas, durante la replicacin del ADN.(3) d. CARACTERISTICAS DE ADN Y ARN CARACTERISTICAS Localizacin Pentosa Bases pirimidicas ADN Ncleo, Cromosomas, Mitocondria. Desoxirribosa C-T ARN Nuclolo, Citoplasma, Ribosomas. Ribosa C-U

Bases Pricas Funcin

A-G - Reproduccin celular. - Trasmisin de los caracteres hereditarios.

A-G - Sntesis o fabricacin de protenas.